JPH01101896A - カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法 - Google Patents
カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法Info
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- JPH01101896A JPH01101896A JP62257431A JP25743187A JPH01101896A JP H01101896 A JPH01101896 A JP H01101896A JP 62257431 A JP62257431 A JP 62257431A JP 25743187 A JP25743187 A JP 25743187A JP H01101896 A JPH01101896 A JP H01101896A
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- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K16/14—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ａ、産業上の利用分野
本発明は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）に対するヒト・
モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ
ｂｏｄｌ／ １以下ＭＣＡと略記する）とこれを産生ず
るハイブリドーマ並びにモノクローナル抗体と製造法に
関する。その目的とするところは、カンジダ感染症の診
断や治療のための抗カンジダ・ヒトＭＣＡを提供するこ
とにある。
モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ
ｂｏｄｌ／ １以下ＭＣＡと略記する）とこれを産生ず
るハイブリドーマ並びにモノクローナル抗体と製造法に
関する。その目的とするところは、カンジダ感染症の診
断や治療のための抗カンジダ・ヒトＭＣＡを提供するこ
とにある。
ｂ、従来の技術
カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）は真菌の一種であり、カン
ジダの菌種としては、Ｃａｎｄｉｄａ （以下Ｃと略
す）ａｌｂｉｃａｎｓ Ａ、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ
Ｂ、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、 Ｃ。
ジダの菌種としては、Ｃａｎｄｉｄａ （以下Ｃと略
す）ａｌｂｉｃａｎｓ Ａ、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ
Ｂ、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、 Ｃ。
５ｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、 Ｃ，ｇｕｉｌｌｉｅｒｍ
ｏｎｄｉｉ、 ＣＪｕｒｕｓｅｉ。
ｏｎｄｉｉ、 ＣＪｕｒｕｓｅｉ。
Ｃ，ｐａｒａｐＳｉｌＯ３ｉＳ、 ｃ、ｋｅｒｙｒおよ
びＣ，ｇｌａｂｒａｔａがある。これらの中で特にＣ，
ａｌｂｉｃａｎｓは、免疫不全の患者に重篤な感染症を
起す日和見病原体として重要である。この真菌は、健常
人の１０〜５０％に消化管や腔に生息する常在菌である
が、宿主の抵抗力が低下したり、抗生剤を長期間大量に
投与したり、外科的侵襲を受けたときに異常増殖し、組
織を損傷し、血中にも入りうる。こうした深在性真菌症
のために、カンジダの診断と治療は医療上重要である。
びＣ，ｇｌａｂｒａｔａがある。これらの中で特にＣ，
ａｌｂｉｃａｎｓは、免疫不全の患者に重篤な感染症を
起す日和見病原体として重要である。この真菌は、健常
人の１０〜５０％に消化管や腔に生息する常在菌である
が、宿主の抵抗力が低下したり、抗生剤を長期間大量に
投与したり、外科的侵襲を受けたときに異常増殖し、組
織を損傷し、血中にも入りうる。こうした深在性真菌症
のために、カンジダの診断と治療は医療上重要である。
例えば、免疫不全患者で持続的な発熱があり、通常の治
療に抵抗する場合には、深在性カンジダ症を疑う必要が
ある。診断法としては、眼底検査によりカンジダ特有の
網膜病変があるか否かを調べることが重要である。また
血液、ＩＩ瘍、尿、生検材料などを種々の培地で培養し
、その形体を調べたり、糖醗酵試験や血清学的同定が行
われる。
療に抵抗する場合には、深在性カンジダ症を疑う必要が
ある。診断法としては、眼底検査によりカンジダ特有の
網膜病変があるか否かを調べることが重要である。また
血液、ＩＩ瘍、尿、生検材料などを種々の培地で培養し
、その形体を調べたり、糖醗酵試験や血清学的同定が行
われる。
血清学的にカンジダをより早く、より正確に診断するた
めに、血清抗体よりも抗体価が高く、かつ特異性も高い
ＭＣＡが望ましい。既にいくつかのマウス由来の抗カン
ジダ・ＭＣＡが発表されている。Ｄ、 Ｌ、 ＢｒａＷ
ｎｅｒとＪ、Ｅ、Ｃｕｔｌｅｒ（Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍ
ｍｕｎ。
めに、血清抗体よりも抗体価が高く、かつ特異性も高い
ＭＣＡが望ましい。既にいくつかのマウス由来の抗カン
ジダ・ＭＣＡが発表されている。Ｄ、 Ｌ、 ＢｒａＷ
ｎｅｒとＪ、Ｅ、Ｃｕｔｌｅｒ（Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍ
ｍｕｎ。
４３、９６６．１９８４）はカンジダ属の中でもＣ，ａ
ｌｂｉＣａｎＳ、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓとＣ，ｇ
ｌａｂｒａｔａを凝集するＭＣＡを、Ｎ、＾、５ｔｒｏ
ｃｋｂｉｎｅら（Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、
４３． １０１２゜１９８４） ハ、Ｃ，ａｌｂｉＣａ
ｎＳの蛋白に対するＭＣＡを、Ｙ、Ｍｉｙａｋａｗａら
（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、 Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ２３８８１
゜１９８６）は、カンジダのマンナン抗原に対するＭＣ
Ａをそれぞれ作製している。これらのＭＣＡはすべてマ
ウス由来であり、ヒト由来のものはない。
ｌｂｉＣａｎＳ、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓとＣ，ｇ
ｌａｂｒａｔａを凝集するＭＣＡを、Ｎ、＾、５ｔｒｏ
ｃｋｂｉｎｅら（Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、
４３． １０１２゜１９８４） ハ、Ｃ，ａｌｂｉＣａ
ｎＳの蛋白に対するＭＣＡを、Ｙ、Ｍｉｙａｋａｗａら
（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、 Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ２３８８１
゜１９８６）は、カンジダのマンナン抗原に対するＭＣ
Ａをそれぞれ作製している。これらのＭＣＡはすべてマ
ウス由来であり、ヒト由来のものはない。
ヒト由来のＭＣＡである利点としては、マウスＭＣＡよ
りもＦ （ａｂ’）ｚフラグメントが取り易く、この点
は診断剤を作製する上でも、システィン残基の利用やＦ
Ｃ部分による非特異的吸着を下げる意味でも有利である
。
りもＦ （ａｂ’）ｚフラグメントが取り易く、この点
は診断剤を作製する上でも、システィン残基の利用やＦ
Ｃ部分による非特異的吸着を下げる意味でも有利である
。
また、免疫不全患者に全身カンジダ症が合併した場合に
は、抗真菌剤を全身に投与する。現在用いられている抗
真菌剤としてはアンフォテリシン３ （Ａｍｐｈｏｔｅ
ｒｉｃｉｎ Ｂ） 、フルシトシン（Ｆｌｕｃｙｔｏｓ
ｉｎｅ）があり、現在開発中のものとしてはケトコナゾ
ール（ＫｅｔＯＣＯｎａＺＯ１８）やミコナゾール（）
ｌｉｃｏｎａＺＯＩｅ）等がある。アンフオテリシンＢ
は致命的なカンジダ症に対して第１に選択される薬剤で
あるが、静注時に高熱を来たし、腎障害。
は、抗真菌剤を全身に投与する。現在用いられている抗
真菌剤としてはアンフォテリシン３ （Ａｍｐｈｏｔｅ
ｒｉｃｉｎ Ｂ） 、フルシトシン（Ｆｌｕｃｙｔｏｓ
ｉｎｅ）があり、現在開発中のものとしてはケトコナゾ
ール（ＫｅｔＯＣＯｎａＺＯ１８）やミコナゾール（）
ｌｉｃｏｎａＺＯＩｅ）等がある。アンフオテリシンＢ
は致命的なカンジダ症に対して第１に選択される薬剤で
あるが、静注時に高熱を来たし、腎障害。
骨髄障害等の副作用が強い。フルシトシンはアンフオテ
リシンＢよりも毒性が低いが、カンジダ症に対して有効
性が低い。ケトコナゾールやミコナゾールも副作用が強
い。こうした現状にあって、副作用が低く、より有効な
抗カンジダ症薬剤の出現が要望されている。
リシンＢよりも毒性が低いが、カンジダ症に対して有効
性が低い。ケトコナゾールやミコナゾールも副作用が強
い。こうした現状にあって、副作用が低く、より有効な
抗カンジダ症薬剤の出現が要望されている。
カンジダが常在菌であり、免疫不全に伴って感染症を起
すことからも判るように、人間の免疫能力はカンジダに
対して有効な防御機能として働いている。免疫系は大別
して、細胞性免疫と体液性免疫に分けられる。Ｎ、 Ｎ
、 ｐｅａｒｓａｔ Ｉらはカンジダを動物に免疫し、
その動物の免疫細胞と免疫血清を取り出し、カンジダ症
動物に対してどうらが防御効果を持つか調べた結果、免
疫血清の方が有効であったと報告している（Ｊ、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、 １２０．１１７６゜１９７８）。免疫血清
中の防御因子の本体は免疫グロブリン（Ｉｍｍｕｎｏｇ
ｌｏｂｕｌｉｎ、 Ｉｇと略す。抗体とも呼ばれる）で
ある。従って、免疫不全患者にカンジダに対する抗体を
投与することによって、カンジダ症の予防と治療が可能
ななずである。現在市販されている正常人血清グロブリ
ン製剤にも、カンジダに対する抗体は含有されているが
、その含有量は極めて微量である。含有ｍが低いだけに
カンジダに対する防御効果も当然の事ながら極めて微弱
である。抗体価の面から考えると、ＭＣＡは純粋な抗体
であり、免疫血清抗体よりもざらに高い力価を持ってい
る。またＭＣＡを産生する細胞を増殖させていくことに
よって大組のＭＣＡを産生ずることができる。カンジダ
に対するＭＣＡは前述の如く既に発表されているが、こ
れらのＭＣＡはマウスのリンパ球に由来するマウス蛋白
であるから、人体に投与したときに異物として認識され
、マウス蛋白に対するヒトの免疫応答が起り、マウスＭ
ＣＡの抗体としての活性が阻害されてしまうばかりでな
く、生じた抗原・抗体複合物による、不都合な副作用が
起る。従って、カンジダ感染症の予防及び治療に用いら
れるヒト由来の抗カンジダ・ＭＣＡの開発が望まれてい
る。
すことからも判るように、人間の免疫能力はカンジダに
対して有効な防御機能として働いている。免疫系は大別
して、細胞性免疫と体液性免疫に分けられる。Ｎ、 Ｎ
、 ｐｅａｒｓａｔ Ｉらはカンジダを動物に免疫し、
その動物の免疫細胞と免疫血清を取り出し、カンジダ症
動物に対してどうらが防御効果を持つか調べた結果、免
疫血清の方が有効であったと報告している（Ｊ、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、 １２０．１１７６゜１９７８）。免疫血清
中の防御因子の本体は免疫グロブリン（Ｉｍｍｕｎｏｇ
ｌｏｂｕｌｉｎ、 Ｉｇと略す。抗体とも呼ばれる）で
ある。従って、免疫不全患者にカンジダに対する抗体を
投与することによって、カンジダ症の予防と治療が可能
ななずである。現在市販されている正常人血清グロブリ
ン製剤にも、カンジダに対する抗体は含有されているが
、その含有量は極めて微量である。含有ｍが低いだけに
カンジダに対する防御効果も当然の事ながら極めて微弱
である。抗体価の面から考えると、ＭＣＡは純粋な抗体
であり、免疫血清抗体よりもざらに高い力価を持ってい
る。またＭＣＡを産生する細胞を増殖させていくことに
よって大組のＭＣＡを産生ずることができる。カンジダ
に対するＭＣＡは前述の如く既に発表されているが、こ
れらのＭＣＡはマウスのリンパ球に由来するマウス蛋白
であるから、人体に投与したときに異物として認識され
、マウス蛋白に対するヒトの免疫応答が起り、マウスＭ
ＣＡの抗体としての活性が阻害されてしまうばかりでな
く、生じた抗原・抗体複合物による、不都合な副作用が
起る。従って、カンジダ感染症の予防及び治療に用いら
れるヒト由来の抗カンジダ・ＭＣＡの開発が望まれてい
る。
Ｃ０本発明が解決しようとする問題点
一般にヒト由来のＭＣＡはマウス・ミエローマ細胞、ヒ
ト・ミエローマ細胞あるいは他のリンパ系樹立細胞とヒ
ト・リンパ球とを細胞融合して得られるハイブリドーマ
から産生される。あるいはヒト・リンパ球をＥＢウィル
スによって形質転換させたリンパ芽球細胞からも産生さ
れる。１９８０年から現在まで、多くのヒトＭＣＡ作製
の試みがなされてきたが、いずれの方法もそれぞれ固有
の問題をかかえている。マウス・ミエローマとヒト・リ
ンパ球との細胞融合で得られたハイブリドーマのＭＣＡ
産生は不安定であるし、ヒト・ミエローマ細胞とヒト・
リンパ球との細胞融合は極めて効率が悪い。またＥＢウ
ィルスによって１ｑられるリンパ芽球細胞のＭＣＡ産生
は量が少なく、かつ不安定である。その上、ＥＢウィル
スは腫瘍を引き起こす能力を有しており、安全性上大き
な問題がある。
ト・ミエローマ細胞あるいは他のリンパ系樹立細胞とヒ
ト・リンパ球とを細胞融合して得られるハイブリドーマ
から産生される。あるいはヒト・リンパ球をＥＢウィル
スによって形質転換させたリンパ芽球細胞からも産生さ
れる。１９８０年から現在まで、多くのヒトＭＣＡ作製
の試みがなされてきたが、いずれの方法もそれぞれ固有
の問題をかかえている。マウス・ミエローマとヒト・リ
ンパ球との細胞融合で得られたハイブリドーマのＭＣＡ
産生は不安定であるし、ヒト・ミエローマ細胞とヒト・
リンパ球との細胞融合は極めて効率が悪い。またＥＢウ
ィルスによって１ｑられるリンパ芽球細胞のＭＣＡ産生
は量が少なく、かつ不安定である。その上、ＥＢウィル
スは腫瘍を引き起こす能力を有しており、安全性上大き
な問題がある。
このように、ＭＣＡ産生細胞を樹立する技術において大
きな障害がある。さらにもう一つ、カンジダに免疫され
たヒト・リンパ球を如何にして得るかという問題がある
。ヒト・リンパ球は末梢血を採血したり、手術により摘
出された牌臓、リンパ節あるいは扁桃を用いたり、時に
は骨髄を取り出すことによって得られる。一般に末梢血
は容易に入手できるが、他の組織の入手は厳しい制限が
ある。しかし末梢血リンパ球にはＢリンパ球が少なく、
抗原で活性化を受けたＢリンパ球は末梢血に少なく、固
型のリンパ組織に集まってしまう。
きな障害がある。さらにもう一つ、カンジダに免疫され
たヒト・リンパ球を如何にして得るかという問題がある
。ヒト・リンパ球は末梢血を採血したり、手術により摘
出された牌臓、リンパ節あるいは扁桃を用いたり、時に
は骨髄を取り出すことによって得られる。一般に末梢血
は容易に入手できるが、他の組織の入手は厳しい制限が
ある。しかし末梢血リンパ球にはＢリンパ球が少なく、
抗原で活性化を受けたＢリンパ球は末梢血に少なく、固
型のリンパ組織に集まってしまう。
従って、末梢血を用いてもカンジダ特異的Ｂ細胞はほと
んど得られない。固型リンパ組織を用いた場合でも、カ
ンジダに免疫が充分かかっているリンパ球提供者は極め
て希である。このような２つの大きな障害があり、今ま
でにカンジダに対するヒトＭＣＡは全く作製されていな
かった。
んど得られない。固型リンパ組織を用いた場合でも、カ
ンジダに免疫が充分かかっているリンパ球提供者は極め
て希である。このような２つの大きな障害があり、今ま
でにカンジダに対するヒトＭＣＡは全く作製されていな
かった。
ｄ９問題点を解決するための手段
本発明者らは、抗カンジダ・ヒトＭＣＡを取得すること
を目的として鋭意研究を行った結果、次のような方法に
よってその目的を達成した。まず扁桃炎に罹った患者か
ら手術で摘出したヒト扁桃を多数個収集し、それらの扁
桃からリンパ球を分離する。カンジダに対する免疫応答
は、それぞれの扁桃提供者毎に大きく異なる。そこで、
１ｎＶｉｔｒｏでのカンジダに対する抗体産生能の高い
リンパ球ソースをスクリーニングする。そして、カンジ
ダに対する抗体産生能が最も高いりンバ球ソースを用い
て、次の２つの方法で抗カンジダ・ヒトＭＣＡ産生細胞
株を樹立する。（１）その扁桃由来のリンパ球を、ｉｎ
ＶｉｔｒＯでＢリンパ球活性化因子によって刺激した
のち、ミエローマ細胞（細胞融合パートナ−）と融合す
る。融合した１変約３ないし５週に生じたハイブリドー
マの培養上清を取り出し、カンジダに対する抗体の有無
を調べる。
を目的として鋭意研究を行った結果、次のような方法に
よってその目的を達成した。まず扁桃炎に罹った患者か
ら手術で摘出したヒト扁桃を多数個収集し、それらの扁
桃からリンパ球を分離する。カンジダに対する免疫応答
は、それぞれの扁桃提供者毎に大きく異なる。そこで、
１ｎＶｉｔｒｏでのカンジダに対する抗体産生能の高い
リンパ球ソースをスクリーニングする。そして、カンジ
ダに対する抗体産生能が最も高いりンバ球ソースを用い
て、次の２つの方法で抗カンジダ・ヒトＭＣＡ産生細胞
株を樹立する。（１）その扁桃由来のリンパ球を、ｉｎ
ＶｉｔｒＯでＢリンパ球活性化因子によって刺激した
のち、ミエローマ細胞（細胞融合パートナ−）と融合す
る。融合した１変約３ないし５週に生じたハイブリドー
マの培養上清を取り出し、カンジダに対する抗体の有無
を調べる。
そして、特異抗体を産生じているハイブリドーマをクロ
ーニングし、抗体産生能の優れたクローンを選ぶ。（２
）第２の方法として、上記扁桃由来のリンパ球にＥＢウ
ィルスを感染させ、リンパ球を形質転換する。カンジダ
に対する抗体産生能の高い扁桃リンパ球を用いたとぎに
は、高率にカンジダ特異抗体産生クローンが出現するが
、抗体産生の不安定なりローンが多いので、軟寒天培地
中でフィーダー細胞を加え、タイミングよくクローニン
グする必要がある。このようにして得られた抗カンジダ
・ヒトＭＣＡ産生細胞を培養し、その上清を収集し、カ
ラムクロマトグラフィー等によってヒトＭＣＡを精製す
る。
ーニングし、抗体産生能の優れたクローンを選ぶ。（２
）第２の方法として、上記扁桃由来のリンパ球にＥＢウ
ィルスを感染させ、リンパ球を形質転換する。カンジダ
に対する抗体産生能の高い扁桃リンパ球を用いたとぎに
は、高率にカンジダ特異抗体産生クローンが出現するが
、抗体産生の不安定なりローンが多いので、軟寒天培地
中でフィーダー細胞を加え、タイミングよくクローニン
グする必要がある。このようにして得られた抗カンジダ
・ヒトＭＣＡ産生細胞を培養し、その上清を収集し、カ
ラムクロマトグラフィー等によってヒトＭＣＡを精製す
る。
かくして本発明は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）に対す
るヒト・モノクローナル抗体、特に、カンジダを凝集さ
せる活性をもつヒト・モノクローナル抗体、又は、カン
ジダ表層多糖に対するヒト・モノクローナル抗体にある
。
るヒト・モノクローナル抗体、特に、カンジダを凝集さ
せる活性をもつヒト・モノクローナル抗体、又は、カン
ジダ表層多糖に対するヒト・モノクローナル抗体にある
。
更に、又本発明は、ヒト・１リンパ球とマウス・ミエロ
ーマ細胞等のリンパ系樹立細胞との細胞融合によって形
成される。カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体
を産生ずるハイブリドーマ及び／又はそれに由来する細
胞株、又は、ヒ１〜・リンパ球をＥＢウィルスで形質転
換して得られる、カンジダに対するヒト・モノクローナ
ル抗体を産生ずる形質転換細胞及び／又はそれに由来す
る細胞株である。
ーマ細胞等のリンパ系樹立細胞との細胞融合によって形
成される。カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体
を産生ずるハイブリドーマ及び／又はそれに由来する細
胞株、又は、ヒ１〜・リンパ球をＥＢウィルスで形質転
換して得られる、カンジダに対するヒト・モノクローナ
ル抗体を産生ずる形質転換細胞及び／又はそれに由来す
る細胞株である。
本発明において用いられるリンパ球はヒ１〜の牌臓、リ
ンパ節、扁桃、アデノイド、骨髄、末梢血等の中に含ま
れている。本発明のためには、いかなるソースのリンパ
球でも用いることができるが、望ましくは扁桃、アデノ
イド、牌臓、リンパ節。
ンパ節、扁桃、アデノイド、骨髄、末梢血等の中に含ま
れている。本発明のためには、いかなるソースのリンパ
球でも用いることができるが、望ましくは扁桃、アデノ
イド、牌臓、リンパ節。
骨髄といった固型リンパ組織由来のリンパ球である。特
に望ましくは、リンパ球をｉｎ ＶｉｔｒＯでリンパ球
活性化因子及び／又はカンジダ抗原と共に培養したとき
に、カンジダに対する抗体を多く産生する能力を持つリ
ンパ球ソースである。
に望ましくは、リンパ球をｉｎ ＶｉｔｒＯでリンパ球
活性化因子及び／又はカンジダ抗原と共に培養したとき
に、カンジダに対する抗体を多く産生する能力を持つリ
ンパ球ソースである。
かくして選別されたリンパ球ソースから得たリンパ球を
用いてハイブリドーマを作製する場合には、ざらに細胞
融合前にそのリンパ球をＢリンパ球活性か因子及び／あ
るいはカンジダ抗原で刺激することが望ましい。Ｂリン
パ球活性化因子としては、Ｂリンパ球の増殖を促進させ
るものならば何でもよいが、例えば、ポークライードマ
イトジェン（ＰＷＭ）、Ｂ細胞増殖因子（Ｂ ｃｅｌｌ
ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ、 Ｂ ＣＧ Ｆ ）
、プロティンＡ、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、
コンカナバリンＡがある。好ましいのは２〜２００μＱ
／ｒａｉｌのＰＷＭあるいは１００分の１容から３分
の１容のＢＣＧＦである。カンジダ抗原としては、カン
ジダの菌体そのものあるいはカンジダより抽出した抗原
、例えば、マンナンが用いられる。菌体の場合は１Ｘ１
０５〜１Ｘ１０８個／ｄが適当であり、マンナンの場合
はメチル科ウシ血清アルブミンとのコンプレックスの形
で、１０ｒ１Ｍｄ 〜１ ｎ（Ｊ／ｄの温度で加えるの
が望ましい。刺激の方法条件は特に限定されるものでは
ないが、ＢＣＧＦの濃度１００分の１容から３分の１容
と、リンパ球１×１０５〜１Ｘ１０ｉ′個／ｍｌを混合
し、培養温度は３５〜４０’Ｃで、培養時間は３〜１０
日、好ましくは４〜６日である。培養液は人。
用いてハイブリドーマを作製する場合には、ざらに細胞
融合前にそのリンパ球をＢリンパ球活性か因子及び／あ
るいはカンジダ抗原で刺激することが望ましい。Ｂリン
パ球活性化因子としては、Ｂリンパ球の増殖を促進させ
るものならば何でもよいが、例えば、ポークライードマ
イトジェン（ＰＷＭ）、Ｂ細胞増殖因子（Ｂ ｃｅｌｌ
ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ、 Ｂ ＣＧ Ｆ ）
、プロティンＡ、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、
コンカナバリンＡがある。好ましいのは２〜２００μＱ
／ｒａｉｌのＰＷＭあるいは１００分の１容から３分
の１容のＢＣＧＦである。カンジダ抗原としては、カン
ジダの菌体そのものあるいはカンジダより抽出した抗原
、例えば、マンナンが用いられる。菌体の場合は１Ｘ１
０５〜１Ｘ１０８個／ｄが適当であり、マンナンの場合
はメチル科ウシ血清アルブミンとのコンプレックスの形
で、１０ｒ１Ｍｄ 〜１ ｎ（Ｊ／ｄの温度で加えるの
が望ましい。刺激の方法条件は特に限定されるものでは
ないが、ＢＣＧＦの濃度１００分の１容から３分の１容
と、リンパ球１×１０５〜１Ｘ１０ｉ′個／ｍｌを混合
し、培養温度は３５〜４０’Ｃで、培養時間は３〜１０
日、好ましくは４〜６日である。培養液は人。
牛、馬等の血清を含むものなら何でもよいが、特に胎児
牛血清（Ｆｅ２）を含む培養液（例えばＲＰＭ Ｉ １
６４０）が好ましい。本発明において用いられるミエロ
ーマ細胞は、ヒト・ミエローマ細胞。
牛血清（Ｆｅ２）を含む培養液（例えばＲＰＭ Ｉ １
６４０）が好ましい。本発明において用いられるミエロ
ーマ細胞は、ヒト・ミエローマ細胞。
ヒトＢリンパ芽球細胞、ヒトＢリンフオーマ細胞。
マウス・ミエローマ細胞あるいはヒト・リンパ球とマウ
ス・ミエローマ細胞のハイブリドーマ由来のいわゆるヘ
テロ・ミエローマ細胞である。特に細胞融合効率の高い
マウス・ミエローマとして、Ｐ ３ ｘ ８３Ａｇ８株
、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１株。
ス・ミエローマ細胞のハイブリドーマ由来のいわゆるヘ
テロ・ミエローマ細胞である。特に細胞融合効率の高い
マウス・ミエローマとして、Ｐ ３ ｘ ８３Ａｇ８株
、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１株。
Ｐ３ｘ６３ＡａＵ １株、 Ｓ Ｐ２１０ Ａ（１１４
株、 ＰａＸ６２Ａ（＋８．６，５．３株、 ＭＰＣＩ
Ｉ−４５，６，ＴＧｌ、７株、５Ｐ−１株等が望ましい
。しかし本発明において、ミエローマ細胞の種類は基本
的にいかなる株も使用し得る。
株、 ＰａＸ６２Ａ（＋８．６，５．３株、 ＭＰＣＩ
Ｉ−４５，６，ＴＧｌ、７株、５Ｐ−１株等が望ましい
。しかし本発明において、ミエローマ細胞の種類は基本
的にいかなる株も使用し得る。
ヒト・リンパ球とミエローマ細胞との融合は次のように
行われる。例えば、抗体産生細胞とミエローマ細胞を１
０：１〜”ｌ：１０．好ましくは１：１〜１：３の比率
で混合し、適当な細胞融合溶液、例えば約３５％ポリエ
チレングリコール（分子量１ 、０００〜６，０００程
度）および約７．５％ジメチルスルホキシドを含むＲＰ
Ｍ Ｉ １６４０を加えて、室温〜３７°Ｃで１〜数分
間殴拌し、その後１０％ＦＣ３かＲＰＭ１１６４０で徐
々に希釈し、ＨＡＴ （ヒポキサンチン−アミノプテリ
ン−チミジン）選択培養液にて細胞濃度が１〜５Ｘ１０
５個／ｍｌとなるように調整する。これを０．２７２ず
つ、例えば９６穴プレー１〜に分注し、５％ＣＯｚを含
む空気中で３５〜３８°Ｃで２〜３週間培養する。）−
Ｉ Ａ Ｔ培養液中ではハイブリドーマのみが生存し、
８−アザグアニン耐性のミエローマ細胞及びミエローマ
同志の融合細胞は生存し得ない（未融合の抗体産生細胞
は数日で死滅する）。
行われる。例えば、抗体産生細胞とミエローマ細胞を１
０：１〜”ｌ：１０．好ましくは１：１〜１：３の比率
で混合し、適当な細胞融合溶液、例えば約３５％ポリエ
チレングリコール（分子量１ 、０００〜６，０００程
度）および約７．５％ジメチルスルホキシドを含むＲＰ
Ｍ Ｉ １６４０を加えて、室温〜３７°Ｃで１〜数分
間殴拌し、その後１０％ＦＣ３かＲＰＭ１１６４０で徐
々に希釈し、ＨＡＴ （ヒポキサンチン−アミノプテリ
ン−チミジン）選択培養液にて細胞濃度が１〜５Ｘ１０
５個／ｍｌとなるように調整する。これを０．２７２ず
つ、例えば９６穴プレー１〜に分注し、５％ＣＯｚを含
む空気中で３５〜３８°Ｃで２〜３週間培養する。）−
Ｉ Ａ Ｔ培養液中ではハイブリドーマのみが生存し、
８−アザグアニン耐性のミエローマ細胞及びミエローマ
同志の融合細胞は生存し得ない（未融合の抗体産生細胞
は数日で死滅する）。
培養後、培養液中の抗体価をチエツクし、目的とする抗
体を産生じているハイブリドーマのみを選択し単離する
（クローニング〉。培養液中の抗体価のチエツクはラジ
オイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ
＞あるいは国体凝集法等で行うことができる。クローニ
ングによって選択された、本発明の抗カンジダ・ヒトＭ
ＣＡを産生するハイブリドーマは、凍結して保存するこ
とができる。かかるハイブリドーマのセルライン（細胞
株）及び／又はそれに由来する細胞株を適当な方法で大
量に培養すると、培養上清から本発明の目的とづるヒト
ＭＣＡを得ることができる。
体を産生じているハイブリドーマのみを選択し単離する
（クローニング〉。培養液中の抗体価のチエツクはラジ
オイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ
＞あるいは国体凝集法等で行うことができる。クローニ
ングによって選択された、本発明の抗カンジダ・ヒトＭ
ＣＡを産生するハイブリドーマは、凍結して保存するこ
とができる。かかるハイブリドーマのセルライン（細胞
株）及び／又はそれに由来する細胞株を適当な方法で大
量に培養すると、培養上清から本発明の目的とづるヒト
ＭＣＡを得ることができる。
また、このハイブリドーマを動物に移植して腫瘍化し、
その腹水や血清からヒトＭＣＡを得ることもできる。
その腹水や血清からヒトＭＣＡを得ることもできる。
ＥＢウィルスによる形質転換法を用いて形質転換細胞を
得る場合には、前記のようにして抗カンジダ抗体のため
に選別されたソースから得られるリンパ球を、ＥＢウィ
ルスによって形質転換する。
得る場合には、前記のようにして抗カンジダ抗体のため
に選別されたソースから得られるリンパ球を、ＥＢウィ
ルスによって形質転換する。
その方法は基本的に公知である（例えば、Ｓｔｅｉｎｉ
ｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ２６９．４２０．１９７７）。
ｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ２６９．４２０．１９７７）。
ＥＢウィルスとしてはいかなるウィルス株も用いること
ができるが、例えば８９５−８細胞を１０％ＦＥＳ添加
ＲＰＭＩ培地中で培養し、その培養上清をＥＢウィルス
源として複数のバイアルに入れ、−８０℃に保存してお
く。使用時にウィルス液を溶解し、リンパ球１Ｘ１０７
個に対してＥＢウィルスを、望ましくは…、０、ｉがｏ
、 ｏｉから１．０で感染させる。感染は３５〜３８°
Ｃで１時間インキュベートすることによって行う。その
後リンパ球を遠心洗浄し、感染リンパ球を３７℃で培養
する。培地としては、例えば２０％ＦＣ３添加ＲＰＭ
Ｉ １６４０培地を用い、望ましくはマウス腹腔細胞等
のフィーダー細胞を加える。
ができるが、例えば８９５−８細胞を１０％ＦＥＳ添加
ＲＰＭＩ培地中で培養し、その培養上清をＥＢウィルス
源として複数のバイアルに入れ、−８０℃に保存してお
く。使用時にウィルス液を溶解し、リンパ球１Ｘ１０７
個に対してＥＢウィルスを、望ましくは…、０、ｉがｏ
、 ｏｉから１．０で感染させる。感染は３５〜３８°
Ｃで１時間インキュベートすることによって行う。その
後リンパ球を遠心洗浄し、感染リンパ球を３７℃で培養
する。培地としては、例えば２０％ＦＣ３添加ＲＰＭ
Ｉ １６４０培地を用い、望ましくはマウス腹腔細胞等
のフィーダー細胞を加える。
リンパ芽球細胞が十分に増殖してきた時点で、その培養
上清を取り出し、カンジダに対する抗体活性の有無をチ
エツクする。目的とする抗体を産生しているリンパ芽球
細胞を選択し、軟寒天培地中でのクローニングあるいは
限界希釈法によるクローニングを行ない、抗体産生の安
定なサブクローンを得る。こうして得られたリンパ芽球
細胞の抗体産生を改善することを目的として、ミエロー
マ細胞とさらに細胞融合し、抗カンジダ・ＭＣＡ産生ハ
イブリドーマを得ることもできる。
上清を取り出し、カンジダに対する抗体活性の有無をチ
エツクする。目的とする抗体を産生しているリンパ芽球
細胞を選択し、軟寒天培地中でのクローニングあるいは
限界希釈法によるクローニングを行ない、抗体産生の安
定なサブクローンを得る。こうして得られたリンパ芽球
細胞の抗体産生を改善することを目的として、ミエロー
マ細胞とさらに細胞融合し、抗カンジダ・ＭＣＡ産生ハ
イブリドーマを得ることもできる。
ｅ６発明の効果
以上のようにして得られた抗カンジダ・ヒトＭＣＡは、
次のような特性を有する。本発明で得られた抗カンジダ
・ヒトＭＣＡは、クラスがＩＣＩＧ 。
次のような特性を有する。本発明で得られた抗カンジダ
・ヒトＭＣＡは、クラスがＩＣＩＧ 。
Ｉ（ＩＨまたはＩＣＩ八である。
本発明で得られたヒトＭＣＡは、多くの実験用カンジダ
株及び臨床分離株に共通に反応する。カンジダの菌種と
してＣ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ａ、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎ
ｓ Ｂ。
株及び臨床分離株に共通に反応する。カンジダの菌種と
してＣ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ａ、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎ
ｓ Ｂ。
Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、 Ｃ，５ｔｅｌｌａｔｏｉ
ｄｅａ。
ｄｅａ。
Ｃ，ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、 Ｃ，ｋｒｕｓｅ
ｉ、 Ｃ，ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ。
ｉ、 Ｃ，ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ。
Ｃ，ｋｅｆｙｒおよびＣ，ｇｌａｂｒａｔａがある。本
発明で得られたヒトＭＣＡの中には、これらの菌種に広
く反応するものもあるし、またＣ、ａｌｂｉｃａｎｓ
ＢとＣ，ｐａｒａｐＳｉ Ｉｏｓｉｓと主に反応するも
の等反応性にいろいろある。
発明で得られたヒトＭＣＡの中には、これらの菌種に広
く反応するものもあるし、またＣ、ａｌｂｉｃａｎｓ
ＢとＣ，ｐａｒａｐＳｉ Ｉｏｓｉｓと主に反応するも
の等反応性にいろいろある。
本発明で得られたヒトＭＣＡには、カンジダ菌体を凝集
させる活性をもつものとその活性のないものとがある。
させる活性をもつものとその活性のないものとがある。
・一般的には診断上も治療上も凝集活性のあるヒトＭＣ
Ａの方が有利である。というのは菌凝集によって簡単に
５診断が可能であるし、凝集能のあるＭＣＡは菌体との
結合も一般に強く、ひいては防御活性も強いからである
。
Ａの方が有利である。というのは菌凝集によって簡単に
５診断が可能であるし、凝集能のあるＭＣＡは菌体との
結合も一般に強く、ひいては防御活性も強いからである
。
カンジダは多くの抗原物質によって構成されている。特
にその菌体表層にはマンナン、蛋白、グルカンが存在す
る。とりわけ最外層にあるマンナンは、診断上また治療
上大きな意味を持つ。本発明で得られたヒトＭＣＡの中
には、このマンナンに反応するものがあった。
にその菌体表層にはマンナン、蛋白、グルカンが存在す
る。とりわけ最外層にあるマンナンは、診断上また治療
上大きな意味を持つ。本発明で得られたヒトＭＣＡの中
には、このマンナンに反応するものがあった。
本発明においては、抗体のクラス、凝集活性あるいは反
応する抗原物質を特に限定するものでなく、カンジダに
特異的に反応するヒトＭＣＡは、すべて本発明の範囲に
含まれる。しかし、診断および治療という目的から考え
たとき、そのヒトＭＣＡが１００であり、カンジダを凝
集する活性が必り、菌体表層にあるマンナンに反応する
ことが望ましい、ヒトＭＣＡの用途は、カンジダ症の診
断。
応する抗原物質を特に限定するものでなく、カンジダに
特異的に反応するヒトＭＣＡは、すべて本発明の範囲に
含まれる。しかし、診断および治療という目的から考え
たとき、そのヒトＭＣＡが１００であり、カンジダを凝
集する活性が必り、菌体表層にあるマンナンに反応する
ことが望ましい、ヒトＭＣＡの用途は、カンジダ症の診
断。
予防および／または治療にある。
ｆ、実施例
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例１
（１）カンジダの培養
Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ａ （Ｊ １０１２株）あるい
はＣ，ａｌｂｉＣａｎＳＢ （Ｊ１４４５株〉のスラ
ント（斜面培養物）より一白金耳を取り、１００ｍ１の
培地（０，５％酵母エキス。
はＣ，ａｌｂｉＣａｎＳＢ （Ｊ１４４５株〉のスラ
ント（斜面培養物）より一白金耳を取り、１００ｍ１の
培地（０，５％酵母エキス。
１％ポリペプトン及び２．０％グルコース）に接種し、
３０″Ｃで振盪しつつ、好気的に１晩培養した。
３０″Ｃで振盪しつつ、好気的に１晩培養した。
この培養液に、３５％ホルマリンを最終濃度がホルムア
ルデヒドとして１％になるように加え、室温で１時間反
応ざじた。その後、２０００ｘ ｇで１０分間遠心し、
沈澱したカンジダに１０戒のリン酸緩衝生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）を加えて分散し、遠心することによって国体を洗
浄した。これをもう−度繰返し、１０ｍＩ！Ｐ Ｂ Ｓ
で菌体を分散し、凍結保存した。
ルデヒドとして１％になるように加え、室温で１時間反
応ざじた。その後、２０００ｘ ｇで１０分間遠心し、
沈澱したカンジダに１０戒のリン酸緩衝生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）を加えて分散し、遠心することによって国体を洗
浄した。これをもう−度繰返し、１０ｍＩ！Ｐ Ｂ Ｓ
で菌体を分散し、凍結保存した。
他のカンジダ菌株も同様にして抗原材料を作製した。
（２）酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ＞
上記保存菌体液を融解し、この菌体液２ないし３ｄに純
水５００−を加えて、ＥＬＩＳＡプレート（Ｆａｌｃｏ
ｎ ３９１２ ）１ｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩｆｌｅｘ
ｉｂｌｅ ａｓｓａｙｐｌａｔｅ、 ９６ ｗｅｌｌｓ
）に、０．０３ｒＩｄｌ／穴ずつ入れた。このプレート
を６５℃で５時間加温し液を蒸発させた後、０．１％グ
ルタルアルデヒド０．０５ｄを多穴に入れて、室温で１
０分間反応させ、次いで、上滑液を除去した。次に０．
１％ＮａＮ３ と１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
含むＰＢＳを、０．１５ｗ１ずつ多穴に入れ、３７℃で
１時間放置後、４℃で保存した。
水５００−を加えて、ＥＬＩＳＡプレート（Ｆａｌｃｏ
ｎ ３９１２ ）１ｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩｆｌｅｘ
ｉｂｌｅ ａｓｓａｙｐｌａｔｅ、 ９６ ｗｅｌｌｓ
）に、０．０３ｒＩｄｌ／穴ずつ入れた。このプレート
を６５℃で５時間加温し液を蒸発させた後、０．１％グ
ルタルアルデヒド０．０５ｄを多穴に入れて、室温で１
０分間反応させ、次いで、上滑液を除去した。次に０．
１％ＮａＮ３ と１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を
含むＰＢＳを、０．１５ｗ１ずつ多穴に入れ、３７℃で
１時間放置後、４℃で保存した。
これを抗カンジダ抗体測定用プレートとした。このプレ
ートにハイブリドーマ培養上清６０μｌを加えて、室温
で１時間放置した。０．０５％ＴＷｅｅｎ ２０を含む
ＰＢＳで３回洗浄の後、ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体あるいは
ＩＯＮ抗体−アルカリフォスフ７ターゼ（２０００倍希
釈液）を６０μｌ加えて、室温で１時間反応させた。ざ
らにＰＢＳで３回洗浄したのち、Ｐ−ニトロフェニルフ
ォスフェートを１Ｍジェタノールアミン＋１ ｍ）ｌ
ＨｇｃＩｌｚのｐｔ１９．８溶液に０．６１１１Ｊ／
ｄの割合で溶かした溶液１００μｌを加えた。
ートにハイブリドーマ培養上清６０μｌを加えて、室温
で１時間放置した。０．０５％ＴＷｅｅｎ ２０を含む
ＰＢＳで３回洗浄の後、ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体あるいは
ＩＯＮ抗体−アルカリフォスフ７ターゼ（２０００倍希
釈液）を６０μｌ加えて、室温で１時間反応させた。ざ
らにＰＢＳで３回洗浄したのち、Ｐ−ニトロフェニルフ
ォスフェートを１Ｍジェタノールアミン＋１ ｍ）ｌ
ＨｇｃＩｌｚのｐｔ１９．８溶液に０．６１１１Ｊ／
ｄの割合で溶かした溶液１００μｌを加えた。
３０分から６０分侵に４０５ｍμの吸光度を測定した。
ハイブリドーマ及びＥＢウィルス形質転換リンパ芽球細
胞のスクリーニングには、Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ＾。
胞のスクリーニングには、Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ＾。
Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ｂを用いた。
（３）ヒト扁桃リンパ球
手術によって摘出されたヒト扁桃を、氷冷したＲ ＰＭ
Ｉ １６４０中でピンセットとハサミによってほぐし
、細胞を分散さけた。この細胞を氷冷ＲＰＭ１１６４０
に分散させ、遠心沈澱することによって２回洗浄（へ最
終的に２０％ＦＣ３，１０％ジメチルスルホキシド及び
抗生物質を含むＲＰＭ Ｉ １６４０培地に、約５Ｘ１
０７細胞／ｒＩＩｌになるように分散し、１ｄずつバイ
アルに分注し、液体窒素中に保存した。
Ｉ １６４０中でピンセットとハサミによってほぐし
、細胞を分散さけた。この細胞を氷冷ＲＰＭ１１６４０
に分散させ、遠心沈澱することによって２回洗浄（へ最
終的に２０％ＦＣ３，１０％ジメチルスルホキシド及び
抗生物質を含むＲＰＭ Ｉ １６４０培地に、約５Ｘ１
０７細胞／ｒＩＩｌになるように分散し、１ｄずつバイ
アルに分注し、液体窒素中に保存した。
使用時に融解し、フィコールパック（ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ社製）上にその細胞分散液を乗せて２０００ｐｐｍ
で３０分間遠心し、フィコールパックの上層に集まった
単核細胞をリンパ球として用いた。
ｉａ社製）上にその細胞分散液を乗せて２０００ｐｐｍ
で３０分間遠心し、フィコールパックの上層に集まった
単核細胞をリンパ球として用いた。
（４） ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗カンジダ抗体産生能の
比較１２例の患者から摘出された扁桃のリンパ球を、２
Ｘ１０６個／ｍｉになるように培養液Ａ （’、ＲＰＭ
ｌｌ６４０＋１０％ＦＣ３＋２０ｍ）ｌ ＨＥＰＥ
Ｓ＋２ｍＭグルタミン＋１ｍＨＮａピルビン酸＋０．０
２ｍ（］／ｄセリン＋８０μｇ／威ゲンタマイシン）に
分散させて、ＰＷＭ２０μｇ／ｍｉを加えて６日間培養
した。その培養上清を取り、（２）項に述べたＥＬＩＳ
Ａ法で抗カンジダＩ（ＩＧ 、抗カンジダＴｇＨを測定
した。第１表は各扁桃リンパ球のｉｎ ｖｉｔｒｏでの
、抗カンジダＩｇＧまたはＩｇＮ抗体産生量を示す。値
は４０５ｎｌｌｌの吸光度である。この結果から抗カン
ジダＩ（ＩＧの産生量の多い扁桃は、Ｂ、Ｆ及びＫであ
ることが判った。
比較１２例の患者から摘出された扁桃のリンパ球を、２
Ｘ１０６個／ｍｉになるように培養液Ａ （’、ＲＰＭ
ｌｌ６４０＋１０％ＦＣ３＋２０ｍ）ｌ ＨＥＰＥ
Ｓ＋２ｍＭグルタミン＋１ｍＨＮａピルビン酸＋０．０
２ｍ（］／ｄセリン＋８０μｇ／威ゲンタマイシン）に
分散させて、ＰＷＭ２０μｇ／ｍｉを加えて６日間培養
した。その培養上清を取り、（２）項に述べたＥＬＩＳ
Ａ法で抗カンジダＩ（ＩＧ 、抗カンジダＴｇＨを測定
した。第１表は各扁桃リンパ球のｉｎ ｖｉｔｒｏでの
、抗カンジダＩｇＧまたはＩｇＮ抗体産生量を示す。値
は４０５ｎｌｌｌの吸光度である。この結果から抗カン
ジダＩ（ＩＧの産生量の多い扁桃は、Ｂ、Ｆ及びＫであ
ることが判った。
＠１表
（５）細胞融合
扁桃ＢおよびＫより得たリンパ球を、２Ｘ１０６個／ｒ
Ｉｄｌの細胞密度で培養液へに分散させ、ＰＷＭを１０
μａ ／ｍａｌ添加し、３７℃で５％ＣＯｚで５日間培
養した。このリンパ球とマウス・ミエローマ細胞とを以
下のように細胞融合した。前もってマウス・ミエローマ
細胞Ｐ３Ｘ６３／ｇ８Ｕ１細胞を、培養液（培養液Ａか
らＨＥ、 Ｐ Ｅ Ｓを除いたもの）中で培養しておい
た。このミエローマ細胞１Ｘ１０７個とＰＷＭ刺激リン
パ球５Ｘ１０６個とを混合し、無血清ＲＰＭ Ｉ １６
４０培地で１回洗浄後、最終的に１５００ｒｐｍで５分
間遠心し、上清を捨てた。この細胞ペレットを、試験管
をたたくことによって、よく分散させた。これに１．０
ｄのポリエチレングリコール液（ＲＰＭ Ｉ １６４
０５．７５ ｄ＋ポリエチレングリコール１０００３．
５ｄ＋ジメチルスルホキサイド０．７５ｄ）（ＰＥＧ液
と略記する）を加えて、細胞をゆるやかに浮遊させた。
Ｉｄｌの細胞密度で培養液へに分散させ、ＰＷＭを１０
μａ ／ｍａｌ添加し、３７℃で５％ＣＯｚで５日間培
養した。このリンパ球とマウス・ミエローマ細胞とを以
下のように細胞融合した。前もってマウス・ミエローマ
細胞Ｐ３Ｘ６３／ｇ８Ｕ１細胞を、培養液（培養液Ａか
らＨＥ、 Ｐ Ｅ Ｓを除いたもの）中で培養しておい
た。このミエローマ細胞１Ｘ１０７個とＰＷＭ刺激リン
パ球５Ｘ１０６個とを混合し、無血清ＲＰＭ Ｉ １６
４０培地で１回洗浄後、最終的に１５００ｒｐｍで５分
間遠心し、上清を捨てた。この細胞ペレットを、試験管
をたたくことによって、よく分散させた。これに１．０
ｄのポリエチレングリコール液（ＲＰＭ Ｉ １６４
０５．７５ ｄ＋ポリエチレングリコール１０００３．
５ｄ＋ジメチルスルホキサイド０．７５ｄ）（ＰＥＧ液
と略記する）を加えて、細胞をゆるやかに浮遊させた。
１分後に１．０ｄＲＰＭ！ １６４０を加え、ざらに１
分後に２．０ ｍｉＲＰＭ Ｉ 。
分後に２．０ ｍｉＲＰＭ Ｉ 。
ざらに２分後に４．０ｄのＨＡＴ培養液（ＲＰＭ１１６
４０＋１０％胎児牛血清＋８０μｇ／ｄゲンタマインシ
ン＋９５μＭヒポキザンチン＋０．４μＭアミノプテリ
ン＋１．６μＭチミジン）、ざらに２分後には８、Ｏｄ
の１（ＡＴ培養液を加えた。最後に、）−ＩＡＴ培養液
で１２５ ｍｌ細胞浮遊液とした。これを培養プレート
（９６穴）５枚に蒔いて、３７℃、５％Ｃｏｚ含有空気
中で培養した。１週間毎に半量の培養液を新しいＨＴ＠
養液（ＨＡＴからＡを除去したもの）で交換していきハ
イブリドーマを得た。
４０＋１０％胎児牛血清＋８０μｇ／ｄゲンタマインシ
ン＋９５μＭヒポキザンチン＋０．４μＭアミノプテリ
ン＋１．６μＭチミジン）、ざらに２分後には８、Ｏｄ
の１（ＡＴ培養液を加えた。最後に、）−ＩＡＴ培養液
で１２５ ｍｌ細胞浮遊液とした。これを培養プレート
（９６穴）５枚に蒔いて、３７℃、５％Ｃｏｚ含有空気
中で培養した。１週間毎に半量の培養液を新しいＨＴ＠
養液（ＨＡＴからＡを除去したもの）で交換していきハ
イブリドーマを得た。
ハイブリドーマの抗カンジダＩ（ＩＧ産生はＥｌＩＳＡ
によってスクリーニングした。第２表にＥＬＩＳＡの結
果の１部を示した。かなり効率よく抗カンジダＩ（ＪＧ
抗体産生ハイプリドーマ（クローン）が生じているのが
判る。
によってスクリーニングした。第２表にＥＬＩＳＡの結
果の１部を示した。かなり効率よく抗カンジダＩ（ＪＧ
抗体産生ハイプリドーマ（クローン）が生じているのが
判る。
第２表
（＊）各プレートは９６穴ずつある。
（６）ハイブリドーマのクローニング
クローニングは限定希釈法を用いた。抗カンジダ抗体陽
性の穴より細胞を、取り出し、細胞数を数え、培養液と
してＲＰ Ｍ Ｉ １６４０＋１０％ＦＣ３＋２ｍＭグ
ルタミン＋１ｍＨＮａピルビンｍ ＋０．０２ｍＭ ｒ
ａｉｌセリン＋８０μ（Ｊ ／ｄゲンタマイシン（培養
液Ｂ）を用い１個／穴あるいは１００個／穴細胞を蒔い
た。
性の穴より細胞を、取り出し、細胞数を数え、培養液と
してＲＰ Ｍ Ｉ １６４０＋１０％ＦＣ３＋２ｍＭグ
ルタミン＋１ｍＨＮａピルビンｍ ＋０．０２ｍＭ ｒ
ａｉｌセリン＋８０μ（Ｊ ／ｄゲンタマイシン（培養
液Ｂ）を用い１個／穴あるいは１００個／穴細胞を蒔い
た。
２週間後に細胞が十分増殖したので、その上清に抗カン
ジダ・ＭＣＡがあるか否かをＥＬＩＳＡによって測定し
、抗カンジダ・ＭＣＡ産生ハイブリドーマを選別した。
ジダ・ＭＣＡがあるか否かをＥＬＩＳＡによって測定し
、抗カンジダ・ＭＣＡ産生ハイブリドーマを選別した。
こうしてハイブリドーマＰＬＴ２−１６．ＰＭＬ２Ｆ７
及びＡＡＥ３旧が樹立された。これらのハイブリドーマ
は安定にヒトＭＣＡを産生じ続けている。
及びＡＡＥ３旧が樹立された。これらのハイブリドーマ
は安定にヒトＭＣＡを産生じ続けている。
（７）抗カンジダ・ヒトＭＣＡの特異性ヒトＭＣＡ
ＰＬＴ２−１６．ＰＭＬ−２Ｆ７はＩｇｌ（抗体であり
、ＡＡＥ３Ｈ４はＩ（ＩＧ抗体であることがＥＬＩＳＡ
によって判った。そこで種々のカンジダ菌種に対する反
応性をＥＬＩＳＡで検討した。その結果を第３表に示し
た。
ＰＬＴ２−１６．ＰＭＬ−２Ｆ７はＩｇｌ（抗体であり
、ＡＡＥ３Ｈ４はＩ（ＩＧ抗体であることがＥＬＩＳＡ
によって判った。そこで種々のカンジダ菌種に対する反
応性をＥＬＩＳＡで検討した。その結果を第３表に示し
た。
第３表
（＊１）表の値はＥＬＩＳＡ値を示す。
（＊２）カンジダ菌種は以下の通りである。
１、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓＡ （Ｊ１０１２株
）２、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓＢ （Ｊ１４４５
株）３、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ （Ｊ１０
１７株）４、 Ｃ，ｃ＋ｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ
（Ｊ１０２３株）５、 Ｃ，ｐａｒａｐｓｉｌｏｓ
ｉｓ （Ｊ１０１５株）８、 Ｃ，ｋｒｕｓｅｉ
（Ｊ １００５株）７、 Ｃ，ｋｅｆｙｒ
（Ｊ １００４株）８、 Ｃ，ｇｌａｂｒ
ａｔａ （Ｊ４００２株）９、 ＾５ｐｅｒ（ｌ
ｉ Ｉ ＩｕＳｆｕｍｉｇａｔｕＳｉｏ、菌無添加 （８）ヒトＭＣＡの認識するカンジダ抗原Ｃ，ａｌｂｉ
ｃａｎｓのマンナンを次のようにして精製した。菌体を
１２０℃でオートクレーブにかけて水抽出し、ざらに７
５％のエタノールを加えて沈澱物を得た。これを再度水
で溶かした後、フェーリング溶液を加えて沈澱物を得た
。これを希塩酸で溶かし、再び７５％のエタノールで沈
澱させた。この沈澱物を３．７Ｎ酢酸で溶かした後、活
性炭を加えてマンナン以外の混入物を吸着除去した。こ
うしてＣ，ａｌｂｉＣａｎＳより精製マンナンを得た。
）２、 Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓＢ （Ｊ１４４５
株）３、 Ｃ，ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ （Ｊ１０
１７株）４、 Ｃ，ｃ＋ｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ
（Ｊ１０２３株）５、 Ｃ，ｐａｒａｐｓｉｌｏｓ
ｉｓ （Ｊ１０１５株）８、 Ｃ，ｋｒｕｓｅｉ
（Ｊ １００５株）７、 Ｃ，ｋｅｆｙｒ
（Ｊ １００４株）８、 Ｃ，ｇｌａｂｒ
ａｔａ （Ｊ４００２株）９、 ＾５ｐｅｒ（ｌ
ｉ Ｉ ＩｕＳｆｕｍｉｇａｔｕＳｉｏ、菌無添加 （８）ヒトＭＣＡの認識するカンジダ抗原Ｃ，ａｌｂｉ
ｃａｎｓのマンナンを次のようにして精製した。菌体を
１２０℃でオートクレーブにかけて水抽出し、ざらに７
５％のエタノールを加えて沈澱物を得た。これを再度水
で溶かした後、フェーリング溶液を加えて沈澱物を得た
。これを希塩酸で溶かし、再び７５％のエタノールで沈
澱させた。この沈澱物を３．７Ｎ酢酸で溶かした後、活
性炭を加えてマンナン以外の混入物を吸着除去した。こ
うしてＣ，ａｌｂｉＣａｎＳより精製マンナンを得た。
このマンナンを用いて、抗原抗体反応の阻害を調べた。
まず、０．１ｍＣｌ ／ｄのマンナン水溶液を２倍ずつ
段階希゛釈し、その希釈液（５０μｌ）中に一定量のヒ
トＭＣＡ（５９μｌ）を加えて、室温で１時間反応さけ
た。その後、この混合液７０μｌを（２）項で記述した
ＥＬＩＳＡプレートの穴に入れて、ＥＬＩＳＡ法により
Ｃ，ａｌｂｉＣａｎＳ Ａと８へのヒトＭＣＡの反応を
測定した。その結果を第１図と第２図に示した。この結
果から、３つのヒ１〜ＭＣＡ、ＡＡＥ３Ｈ４、ＰＬＴ２
−１６．ＰＭ１２Ｆ７ともに、ある濃度以上のマンナン
により抗原抗体反応が阻害されることから、マンナンに
反応する抗体であることが判った。
段階希゛釈し、その希釈液（５０μｌ）中に一定量のヒ
トＭＣＡ（５９μｌ）を加えて、室温で１時間反応さけ
た。その後、この混合液７０μｌを（２）項で記述した
ＥＬＩＳＡプレートの穴に入れて、ＥＬＩＳＡ法により
Ｃ，ａｌｂｉＣａｎＳ Ａと８へのヒトＭＣＡの反応を
測定した。その結果を第１図と第２図に示した。この結
果から、３つのヒ１〜ＭＣＡ、ＡＡＥ３Ｈ４、ＰＬＴ２
−１６．ＰＭ１２Ｆ７ともに、ある濃度以上のマンナン
により抗原抗体反応が阻害されることから、マンナンに
反応する抗体であることが判った。
（９）抗カンジダ・ヒトＭＣＡのカンジダ凝集活性カン
ジダ生菌及び（１）項で記述したようにして作製したホ
ルマリン処理菌体をＰＢＳに懸濁し、懸濁液１０μｌと
ヒトＭＣＡ （約１０μｇ／ｄ） １０μｌとをスライ
ドグラス上でよく混合し、その凝集を肉眼と顕微鏡下で
観察した。結果を第４表に示した。
ジダ生菌及び（１）項で記述したようにして作製したホ
ルマリン処理菌体をＰＢＳに懸濁し、懸濁液１０μｌと
ヒトＭＣＡ （約１０μｇ／ｄ） １０μｌとをスライ
ドグラス上でよく混合し、その凝集を肉眼と顕微鏡下で
観察した。結果を第４表に示した。
第４表
この結果から、これら３つのヒ１〜ＭＯＡはＣ１ａｌｂ
ｉｃａｎｓを凝集させる能力を有することが判った。
ｉｃａｎｓを凝集させる能力を有することが判った。
（１０）ヒトＭＣＡの精製
ハイブリドーマＡ Ａ Ｅ ３１４を培養液Ｂに分散し
、１Ｘ１０５細胞／戒から１０Ｘ１０５細胞／ｍＩｌの
細胞密度に保らつつ培養した。その培養上清４８０ ｍ
ｌをプロティンＡ−セファロース（サイズ１．２Ｃｍ
Ｘ２．１ｃｍ）にかけ、ＰＢＳと純水で洗浄後、希塩酸
（ｐＨ２，５）でヒトＭＣＡを留出させた。ただちに１
０倍濃度ＰＢＳを１／１０容加えてｐＨを中和した。こ
うして約４．６ｍ（ｌの蛋白を得た。この蛋白は電気泳
動によって純粋な抗体（分子量約１６万）であり、ＥＬ
ＩＳＡでＣ，ａｌｂｉＣａｎＳに対する抗体であること
が判った。
、１Ｘ１０５細胞／戒から１０Ｘ１０５細胞／ｍＩｌの
細胞密度に保らつつ培養した。その培養上清４８０ ｍ
ｌをプロティンＡ−セファロース（サイズ１．２Ｃｍ
Ｘ２．１ｃｍ）にかけ、ＰＢＳと純水で洗浄後、希塩酸
（ｐＨ２，５）でヒトＭＣＡを留出させた。ただちに１
０倍濃度ＰＢＳを１／１０容加えてｐＨを中和した。こ
うして約４．６ｍ（ｌの蛋白を得た。この蛋白は電気泳
動によって純粋な抗体（分子量約１６万）であり、ＥＬ
ＩＳＡでＣ，ａｌｂｉＣａｎＳに対する抗体であること
が判った。
実施例２
（１）ＥＢウィルスによる形質転換
ヒト扁桃リンパ球を実施例１の（３）項のようにして取
り、３Ｘ１０６個／ｄになるように実施例１の（６）項
に記述しておる培養液Ｂに分散した。この分散液３．３
７と、８９５−８細胞培養上清、（ＥＢウィルスを含む
）３．３７とを混合し、３７°Ｃで１時間インキュベー
トした。その後、１５００ｐｐｍで５分間遠心し、細胞
ベレットを得、これに２０％ＦＣ８を含む培養液Ｂを１
００ ｄ加えた。このリンパ球分散液を平底９６穴プレ
一ト１０枚に蒔いた。なお、このプレートには前もって
マウス腹腔浸出細胞をフィーダーとして入れておいた。
り、３Ｘ１０６個／ｄになるように実施例１の（６）項
に記述しておる培養液Ｂに分散した。この分散液３．３
７と、８９５−８細胞培養上清、（ＥＢウィルスを含む
）３．３７とを混合し、３７°Ｃで１時間インキュベー
トした。その後、１５００ｐｐｍで５分間遠心し、細胞
ベレットを得、これに２０％ＦＣ８を含む培養液Ｂを１
００ ｄ加えた。このリンパ球分散液を平底９６穴プレ
一ト１０枚に蒔いた。なお、このプレートには前もって
マウス腹腔浸出細胞をフィーダーとして入れておいた。
これらのプレートに蒔かれた細胞は、３７℃で５％ＣＯ
２を含む湿潤な空気中で培養した。培養液は７ないし１
０日間毎に半量だけ新鮮なものと交換した。約４週間後
に、ＥＢウィルス形質転換したリンパ芽球細胞のコロニ
ーが、約９０％の穴に出現した。この培養上清を取り出
し、ＥＬＩＳＡによってＣ，ａ！ｂｉｃａｎｓに対する
ヒト抗体（Ｉ（ＩＧとＩ（］）ｆの両方）をスクリーニ
ングした。その結果を第５表に示した。第５表から明ら
かなようにいくつかの高い値を示すクローンが児い出さ
れた。
２を含む湿潤な空気中で培養した。培養液は７ないし１
０日間毎に半量だけ新鮮なものと交換した。約４週間後
に、ＥＢウィルス形質転換したリンパ芽球細胞のコロニ
ーが、約９０％の穴に出現した。この培養上清を取り出
し、ＥＬＩＳＡによってＣ，ａ！ｂｉｃａｎｓに対する
ヒト抗体（Ｉ（ＩＧとＩ（］）ｆの両方）をスクリーニ
ングした。その結果を第５表に示した。第５表から明ら
かなようにいくつかの高い値を示すクローンが児い出さ
れた。
第５表
した抗体産生クローンの数を示す。
（２）ＥＢウィルス形質転換細胞のクローニング実施例
１の（６）項で記述した限界希釈法を用いた。ただし、
細胞は５個／穴ないし５０個個人穴蒔いた。その上清に
、抗カンジダ抗体が含まれるか否かをＥＩＩＳＡで測定
した。１６種の親細胞をクローニングし、最終的には唯
１つだけ、ＣＢＪ６［）５の細胞クローンのみ持続的に
カンジダに対するＩｇＭ抗体を産生じていた。
１の（６）項で記述した限界希釈法を用いた。ただし、
細胞は５個／穴ないし５０個個人穴蒔いた。その上清に
、抗カンジダ抗体が含まれるか否かをＥＩＩＳＡで測定
した。１６種の親細胞をクローニングし、最終的には唯
１つだけ、ＣＢＪ６［）５の細胞クローンのみ持続的に
カンジダに対するＩｇＭ抗体を産生じていた。
（３）抗カンジダＭ ＣＡ −Ｃ３Ｊ８［＞５の持具性
実施例１の（７）項と同様にして特異性を調べた。
実施例１の（７）項と同様にして特異性を調べた。
この結果を第６表に示したが、ＣＢＪ６Ｄ５はカンジダ
属に広く反応するが、アスペルギルス（Ｎｏ、 ９）に
は反応しないことが判った（Ｎｏ、１０は無菌添加）。
属に広く反応するが、アスペルギルス（Ｎｏ、 ９）に
は反応しないことが判った（Ｎｏ、１０は無菌添加）。
（＊１）値はＥＩＩＳＡ値を示す。
（＊２）菌種は第３表と同じものを用いた。
第１図は、本発明のヒト・モノクローナル抗体のＣ，ａ
ｌｂｉＣａｎＳ Ａに対する反応の、マンナンによる阻
害を示す。第２図は、Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ｂに対す
る同様の図である。
ｌｂｉＣａｎＳ Ａに対する反応の、マンナンによる阻
害を示す。第２図は、Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ Ｂに対す
る同様の図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）に対するヒト・モノク
ローナル抗体。 ２、カンジダを凝集させる活性をもつヒト・モノクロー
ナル抗体。 ３、カンジダ表層多糖に対するヒト・モノクローナル抗
体。 ４、ヒト・リンパ球とリンパ系樹立細胞との細胞融合に
よって形成されるハイブリドーマ及び／又はそれに由来
する細胞株によって産生される、カンジダに対するヒト
・モノクローナル抗体。 ５、リンパ系樹立細胞がマウス・ミエローマ細胞である
特許請求の範囲第４項記載のカンジダに対するヒト・モ
ノクローナル抗体。 ６、ヒト・リンパ球とリンパ系樹立細胞との細胞融合に
よって形成される、カンジダに対するヒト・モノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマ及び／又はそれに由
来する細胞株。 ７、カンジダを凝集させる活性をもつヒト・モノクロー
ナル抗体を産生する特許請求の範囲第６項記載のハイブ
リドーマ及び／又はそれに由来する細胞株。 ８、カンジダ表層多糖に対するヒト・モノクローナル抗
体を産生する特許請求の範囲第６項記載のハイブリドー
マ及び／又はそれに由来する細胞株。 ９、リンパ系樹立細胞がマウス・ミエローマ細胞である
特許請求の範囲第６項記載のハイブリドーマ及び／又は
それに由来する細胞株。 １０、ヒト・リンパ球とリンパ系樹立細胞との細胞融合
によって形成される、カンジダに対するヒト・モノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマ及び／又はそれに
由来する細胞株を培養し、培養物からヒト・モノクロー
ナル抗体を採取することからなる、カンジダに対するヒ
ト・モノクローナル抗体の製造法。 １１、ヒト・リンパ球をＥＢウィルスで形質転換して得
られる形質転換細胞及び／又はそれに由来する細胞株に
よって産生される、カンジダに対するヒト・モノクロー
ナル抗体。 １２、ヒト・リンパ球をＥＢウィルスで形質転換して得
られる、カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体を
産生する形質転換細胞及び／又はそれに由来する細胞株
。 １３、ヒト・リンパ球をＥＢウィルスで形質転換して得
られる、カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体を
産生する形質転換細胞及び／又はそれに由来する細胞株
を培養し、培養物からヒト・モノクローナル抗体を採取
することからなる、カンジダに対するヒト・モノクロー
ナル抗体の製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62257431A JPH01101896A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法 |
| DE3854740T DE3854740T2 (de) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | Menschlicher monoklonaler antikörper gegen candida. |
| PCT/JP1988/001042 WO1989003398A1 (fr) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | Anticorps monoclonal humain contre le candida |
| EP88908988A EP0344320B1 (en) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | Human monoclonal antibody against candida |
| AU25462/88A AU608915B2 (en) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | Human monoclonal antibody against candida |
| KR1019890701071A KR920001381B1 (ko) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | 칸디다에 대한 사람 단일클론성 항체 |
| AT88908988T ATE130856T1 (de) | 1987-10-14 | 1988-10-13 | Menschlicher monoklonaler antikörper gegen candida. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62257431A JPH01101896A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3252791A Division JPH05276984A (ja) | 1991-09-05 | 1991-09-05 | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01101896A true JPH01101896A (ja) | 1989-04-19 |
Family
ID=17306268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62257431A Pending JPH01101896A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | カンジダに対するヒト・モノクローナル抗体とその製造法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0344320B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01101896A (ja) |
| KR (1) | KR920001381B1 (ja) |
| AT (1) | ATE130856T1 (ja) |
| AU (1) | AU608915B2 (ja) |
| DE (1) | DE3854740T2 (ja) |
| WO (1) | WO1989003398A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114933652B (zh) * | 2022-06-24 | 2023-03-28 | 丹娜(天津)生物科技股份有限公司 | 一种抗念珠菌甘露聚糖单克隆抗体及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58128323A (ja) * | 1982-01-22 | 1983-07-30 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | ヒトモノクロ−ン抗体の製造法 |
| JPS59187794A (ja) * | 1983-04-08 | 1984-10-24 | Kureha Chem Ind Co Ltd | 抗カンジダ菌抗体 |
| JPS6262000A (ja) * | 1985-09-13 | 1987-03-18 | Yatoron:Kk | カンジタ菌の同定方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8401943L (sv) * | 1983-04-08 | 1984-11-22 | Kureha Chemical Ind Co Ltd | Antikropp till fungi av candida |
| GB8426459D0 (en) * | 1984-10-19 | 1984-11-28 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
| EP0233289B1 (en) * | 1984-12-26 | 1993-03-10 | Teijin Limited | Hybridomas producing anti-pseudomonas aeruginosa human monoclonal antibody |
| WO1987006620A1 (en) * | 1986-04-29 | 1987-11-05 | Murex Corporation | Diagnostic kit for sexually transmitted diseases |
| DE9300634U1 (de) * | 1993-01-19 | 1993-05-19 | Brisay Maschinen GmbH, 8750 Aschaffenburg | Bügelmaschine |
-
1987
- 1987-10-14 JP JP62257431A patent/JPH01101896A/ja active Pending
-
1988
- 1988-10-13 DE DE3854740T patent/DE3854740T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-13 AT AT88908988T patent/ATE130856T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-13 AU AU25462/88A patent/AU608915B2/en not_active Ceased
- 1988-10-13 EP EP88908988A patent/EP0344320B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-13 WO PCT/JP1988/001042 patent/WO1989003398A1/ja not_active Ceased
- 1988-10-13 KR KR1019890701071A patent/KR920001381B1/ko not_active Expired
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58128323A (ja) * | 1982-01-22 | 1983-07-30 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | ヒトモノクロ−ン抗体の製造法 |
| JPS59187794A (ja) * | 1983-04-08 | 1984-10-24 | Kureha Chem Ind Co Ltd | 抗カンジダ菌抗体 |
| JPS6262000A (ja) * | 1985-09-13 | 1987-03-18 | Yatoron:Kk | カンジタ菌の同定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2546288A (en) | 1989-05-02 |
| KR920001381B1 (ko) | 1992-02-11 |
| EP0344320B1 (en) | 1995-11-29 |
| KR890701635A (ko) | 1989-12-21 |
| AU608915B2 (en) | 1991-04-18 |
| ATE130856T1 (de) | 1995-12-15 |
| EP0344320A1 (en) | 1989-12-06 |
| WO1989003398A1 (fr) | 1989-04-20 |
| DE3854740D1 (de) | 1996-01-11 |
| EP0344320A4 (en) | 1990-02-06 |
| DE3854740T2 (de) | 1996-04-18 |
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