JPH01102365A - 粒子分析装置用シース液 - Google Patents

粒子分析装置用シース液

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JPH01102365A JP26138687A JP26138687A JPH01102365A JP H01102365 A JPH01102365 A JP H01102365A JP 26138687 A JP26138687 A JP 26138687A JP 26138687 A JP26138687 A JP 26138687A JP H01102365 A JPH01102365 A JP H01102365A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、臨床検査分野等において血球等の粒子計数お
よび分類を目的とした粒子分析装置に使用される試薬(
シース液)、さらに詳しくは緩衝剤、浸透圧調整用添加
剤および水溶性界面活性剤を含有する水溶液からなるシ
ース液に関する。
〔従来の技術〕
血液中に存在する血球は白血球、赤血球および血小板か
らなり、特に赤血球の測定においては赤血球の個数のみ
ならず、赤血球の大小を計数することによって、先天的
異常や後天的異常を判定する材料を得ることができる。
近年、この血球計数の分野においてはシースフローシス
テムを用いた機器が出現し、血球計数の自動化・高速化
が進んでいる。シースフローシステムとは細管中を最適
流量・最適流速で粒子懸濁試料を通過させ、細管中の検
出部を粒子が通過するとき発生する電気的あるいは光学
的パルスを検出することによって粒子の計数を行う方法
である。このシースフローシステムでは粒子を一列に並
べて細管中を通過させる必要から、粒子懸濁試料を「さ
や状」に包んで流す。この「さや状」に包む液をシース
液と呼んでいる。
シースフローシステムを利用した装置は厳密に調製・構
成されねばならず、そのため目的に応じて種々の材質か
らなる部品が使用されている。しかしながら種々の部品
のある材質のものはそれ自体が単独で、あるいは種々の
材質の相互作用によって水溶液中に含有される空気を部
品表面に気泡として発生・付着させ、さらに大きな気泡
となるまで保持する。発生した気泡がシース液の流れに
のってフローセル(細管)を通過すると、正常な流れを
乱し、したがって粒子検出における異常の原因となる。
また誤って気泡が粒子として検知されるごともある。
一方、シース液は前述のように粒子懸濁試料を包むもの
であり、粒子を懸濁させる希釈液を介して粒子に接する
。希釈液自体は粒子を保護する機能を有するが、この保
護機能がシース液の組成物によって妨害されると、粒子
の変形・破壊がひき起される。一般に、鉄欠乏性の貧血
の場合には、赤血球粒子の小球化が起ることが観察され
、悪性貧血の場合には、赤血球粒子の大球化が起ること
が観察されている。したがって赤血球粒子の大きさを正
確に測定することは、病気の診断上重要である。ところ
が、一般に赤血球粒子では液の浸透圧等が低下した場合
には、赤血球粒子の膨化(大球化)が起り、浸透圧等が
増大した場合には、赤血球粒子の小球化が起ることが知
られている。したがって浸透圧等が適正に調整されてい
ない場合には、赤血球粒子の正確な大きさを測定できな
いことになる。これらのことはシース液の性能において
粒子自体の性質を正しく保持できることが、極めて重要
な要素として要求されることを意味する。したがって、
粒子に影響せず、かつ、気泡を発生しないシース液が必
要である。
ところで、界面活性剤はその界面活性効果により気泡の
発生を抑えることが知られている。−船に水溶性界面活
性剤は、その特性としてミセル形成臨界濃度(CMC)
以下では、溶液中に「つぶ」を形成し、かつ壜点以上の
温度では、「濁り」を生じることが知られている0粒子
分析装置では「つぶ」および「濁り」は検出異常の原因
となる。特開昭62−87233号公報には気泡の発生
を抑えるため界面活性剤を添加したシース液を調製する
ことが記載されている。
〔発明が解決しようとする問題点〕
界面活性剤をシース液に添加することにより、気泡の発
生を抑制することは有用であるが、シース液は蒸留水に
比べはるかに浸透圧が高いため、一般に明示されている
各種界面活性剤の壜点よりかなり低い温度で濁りを生じ
、粒子分析装置においてノイズとして計数されるという
問題が生じている0例えば前記公報に界面活性剤として
開示されたポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブ
ロックポリマーのうち、あるものは壜点よりはるかに低
い温度においても目に見えない「濁り」が発生し、粒子
分析装置においてノイズとして検出され、正常な粒子計
数を行えないという不具合が生じている。
本発明者は前記問題点を解決するため鋭意検討した結果
、流体系内において気泡の発生を抑制し、かつ粒子に影
響を与えず、さらには、また、粒子分析装置用シース液
の含打物質として使用した場合において「濁り」を発生
させない水溶性界面活性剤が存在することを見い出し、
本発明に到達したものである。
本発明は上記の諸点に鑑みなされたもので、粒子に影響
を与えず、かつ正確に粒子計数を行うのに役立つ粒子分
析装置用シース液の組成物の提供を目的とするものであ
る。
〔問題点を解決するための手段および作用〕本発明の粒
子分析装置用シース液は、つぎの(al〜(dlの4成
分、すなわち、 (al  緩衝剤、 (bl  浸透圧調整用添加剤、 (C1ポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステル
系界面活性剤、 (ただし、アルキル基の炭素原子数は16個以上であり
、オキシエチレンの付加モル数は15〜40である。) (dl  水、 を含有することを特徴としている。
また本発明の粒子分析装置用シース液の各組成の割合は
、 fa+  緩衝剤: 0.01〜3. Owt%、望ま
しく ハ0.017〜1.Owt% 山)浸透圧調整用添加剤: 0.25〜2.5wt%、
望ましくは0.58〜1.12wt% tel  ポリオキシエチレンソルビタンアルキルエス
テル系界面活性剤: 0.001〜1. Owt%、望
ましくは0.01〜0.5 wt% fdl  水: 93.50〜99.73 wt%、望
ましくは97.38〜99.39 i*t% である。
本発明のシース液に有用な緩衝剤はリン酸、炭酸、ホウ
酸、有機酸および/またはそれらの金属塩が含まれ、そ
れらの1つあるいは2つ以上の混合物である。好ましい
緩衝剤濃度は5〜30IIMである。緩衝剤はpHを6
.0〜8.5、より好ましくは7.0〜8.5に維持す
るのに適した組成であることが好ましい。
本発明のシース液の調製に有用な浸透圧調整用添加剤は
アルカリ金属塩であり、好ましくはNaC1および/ま
たはKCIである。浸透圧調整用添加剤は浸透圧を24
5〜330m0s−/―となるよう添加する。このとき
の添加物の濃度は100〜150dである。
本発明に用いることのできる水溶性界面活性剤はオキシ
エチレン、ソルビトールおよび脂肪酸から・なる共重合
体である。
オキシエチレン、ソルビトールおよび脂肪酸からなる共
重合体は、一般に「ポリオキシエチレンソルビタンアル
キルエステル」と称されている。
本発明が有用とするポリオキシエチレンソルビタンアル
キルエステル系界面活性剤は、脂肪酸(アルキル)基の
炭素原子が16個以上からなり、オキシエチレンの付加
モル数(n)が15〜40のものであり、特に脂肪酸炭
素原子が16個または18個からなりオキシエチレンの
付加モル数が17〜23であるポリオキシエチレンソル
ビタンモノパルミテートまたはポリオキシエチレンソル
ビタンモノオレートが好ましい、脂肪酸炭素原子が14
個以下の場合には、界面活性剤が水に溶解しにくくなり
、界面活性作用も落ちる。またnが15未満では、界面
活性剤が水に溶解しにくくなり、nが40を越えると赤
血球等に対して溶血性を示す。
上記界面活性剤は当業者周知の方法によって製造されて
いるが、当業者が示す化学構造式は若干異なるので、−
例として花王株式会社が示すレオドールtw−0120
(登録商標)の化学構造式を下記に示す。
(以下余白) 0  (OIzOIzO) nt  HR:炭素原子1
7個からなる脂肪酸であって不飽和結合1個を含む。
n:17〜23である。
ただし、n=n1+n2+n3 ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテートおよび
ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートは当業者周
知の方法によって製造され、国内においては日本油脂■
、花王■、松本油脂■、三洋化成工業■、ライオン油脂
■、第−工業−等から市販されているのでこれらを利用
できる0本発明に使用される界面活性剤のうち、特にポ
リオキシエチレンソルビタンモノパルミテートおよびポ
リオキシエチレンソルビタンモノオレートは、オキシエ
チレン重合度が約20と低く、生物分解性の面において
優れ、公害防止上の効果が期待できる。本発明における
最も好ましい界面活性剤は、花王−社製のレオドールT
W−0120(登録商標)である。
本発明においてシース液に含まれる界面活性剤濃度は0
.1〜5.0 g/ Jが好ましく、これらの濃度では
、本発明に使用される界面活性剤は、シース液のpHお
よび浸透圧に影響をおよぼさない。したがって、粒子、
特に赤血球の大球化あるいは小球化等の変形がひき起さ
れることなく、粒子分析装置内の流体系を湿潤させ、気
泡の発生・保持をかなりの程度阻止することができる。
本発明のシース液には、防菌剤を含宵することもできる
。適当な防菌剤には2−ビリデオー1−オキシドナトリ
ウム、8−ヒドロキシキノリンおよびその誘導体、イソ
チアゼノン誘導体が挙げられる。これらの防菌剤の濃度
は0.01〜0.1%容量/容量が好ましく、より好ま
しくは0.02〜0.04%容量/容量である。
また本発明においては、組成物の金属イオンの自動酸化
を防止するため、抗酸化剤としてキレート剤を添加する
こともできる。キレート剤にはo−ベンゼンジスルホン
酸またはそのジナトリウム塩あるいはジカリウム塩、お
よび/またはエチレンジアミン4酢酸またはそのジナト
リウム塩あるいはジカリウム塩がある。最も好ましくは
エチレンジアミン4酢酸ジカリウム(El)T^・2K
)であり、0.2〜0.4 g/ 1の濃度で使用する
ことが好ましい。
既述のように、本発明のシース液は水溶液である。した
がって溶液の残部は水であり、好ましくは脱イオン化し
た水である。
〔実施例〕
以下、実施例を挙げて本発明をさらに説明する。
実施例1 本発明の粒子分析装置用シース液のpn、浸透圧および
電気伝導度を調べるため、下記の組成でシース液を調製
した。
組成 NaC16,38g KCl               1.00 gN
atHPOa                0.7
25gNaHzPOn  −HtOO,18gE[lT
A  ・ 2K                  
        O,20gレオドールTW−0120
(登録商標)※l  O,75gトミサイドーS(登録
商標)耀   0.2−説イオン水         
 残部 計11 ※l:界面活性剤(ポリオキシエチレンソルビタンモノ
オレート)、花王■社製。
、  ※2;防菌剤(2−ビリデオー1−オキシドナト
リウム)、吉富製薬−社製。
調製したシース液はpH7,20、浸透圧26抛Oss
/kg。
電気伝導度13.40m5/amであった。自動血小板
計数装置PL−100(東亜医用電子−社製)により、
上記シース液を測定したときの計数値は0であり、調製
したシース液にノイズの発生はなかった。
実施例2 本発明による粒子分析装置用シース液が、赤血球に影響
するか否かを調べるため、赤血球を本発明シース液中に
浸漬し、赤血球の大きさの変化を副べた。
すなわち、抗凝固剤としてEDTAを添加した正常人血
(1−)に実施例1と同様にして調製したシース液9m
を加え、攪拌し、遠心分離(3000回転、10分間)
した。上澄を除くことによって血漿成分を除去した後、
シース液を加えて再び1−とじた0以上の操作によって
得たシース液に浸漬された血球と、何も処理しない正常
人血(血漿を含む)との平均赤血球容積(MCV)およ
び赤血球分布幅(RDW)を比較するため、全自動血球
計数装置1E−4000(東亜医用電子−社製)を用い
て測定を行った。結果を第1表に示す。
第   1   表 実施例3 粒子分析装置において、ノイズが発生するか否かを判定
するため、実施例1と全く同様にして調製したシース液
を用いて、温度負荷条件下でブランク計数を行った。温
度条件は35℃および40℃で行い、計数には全自動血
球計数装W8−4000 (東亜医用電子側社製)を用
いた。対照として下記に示す化学構造および性状をもつ
界面活性剤(ポリオキシエチレンポリオキシブロピレン
プロフクボリマー)を使用した。
構造式: %式%) nnニオキシエチレン、約22 m:オキシプロピレン鎖、約37 名称:ポリオキシエチレンポリオキシブロビレンブロッ
クボリマ− (三洋化成−PE−75(登録量1) を使用) 壜点:66〜72℃ 結果を第2表に示す、なおノイズ測定値として、各20
回測定した平均値を示している。
(以下余白) 第    2    表 ※1 : Tll−0120(登録商標)シース液は、
界面活性剤ポリオキシエチレンソルビタン モノオレートを使用、&11成は実施例1に同じ。
※2 : PH−15<登録商標)シース液は、界面活
性剤ポリオキシエチレンポリオキシプ ロピレンブロックポリマーを使用、他 の組成は実施例1に同じ。
実施例4 粒子分析装置に使用される各材質の部品と、本発明によ
るシース液との湿潤性および気泡発生抑制力を調べるた
め、実施例1と全く同じ方法で調製したシース液中にテ
フロン、ボリアスターJし樹脂、ポリカーボネート樹脂
により成型された粒子分析装置部品を浸漬し、60℃で
1時間加熱処理した。対照として界面活性剤を添加しな
いこと以外は実施例1と全く同様にして調製したシース
液を使用した。
その結果、対照として用いた界面活性剤無添加のシース
液では、各材質の粒子分析装置部品の表面に多数の気泡
の付着が観察されるとともに、これらの気泡は振盪処理
しても部品表面よりはがれにくかった。しかしながら、
本発明による界面活性剤添加シース液では、気泡そのも
のの発生がないか、または発生しても極めてわずかであ
り、気泡自体の、大きさも小さいことが観察された。さ
らに粒子分析装置部品表面に発生した気泡は軽度の振盪
処理によっても容易に剥離した。
〔発明の効果〕
以上説明したように、本発明の粒子分析装置用シース液
は、粒子分析装置内の流体系において、気泡の発生・保
持を抑制し、かつ特に粒子が赤血球である場合には、赤
血球粒子を変形させることなく測定することができる。
さらにシース液の温度が40℃以下においては、シース
液組成物による濁りの発生が防止され、粒子分析装置に
おいてノイズが検出されることがないなどの効果を存し
ている。
出 願 人  東亜医用電子株式会社

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 つぎの(a)〜(d)の4成分、すなわち、 (a)緩衝剤、 (b)浸透圧調整用添加剤、 (c)ポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステル
    系界面活性剤、 (ただし、アルキル基の炭素原子数は16個以上であり
    、オキシエチレンの付加モル数は15〜40である。) (d)水、 を含有することを特徴とする粒子分析装置用シース液。 2 ポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステル系
    界面活性剤のアルキル基の炭素原子数が16または18
    であり、オキシエチレンの付加モル数が17〜23であ
    る特許請求の範囲第1項記載の粒子分析装置用シース液
    。 3 緩衝剤がリン酸、炭酸、ホウ酸、有機酸およびそれ
    らの金属塩からなる群から選ばれる1種または2種以上
    の物質である特許請求の範囲第1項または第2項記載の
    粒子分析装置用シース液。 4 浸透圧調整用添加剤がアルカリ金属塩である特許請
    求の範囲第1項〜第3項のいずれかに記載の粒子分析装
    置用シース液。 5 アルカリ金属塩がKClおよび/またはNaClで
    ある特許請求の範囲第4項記載の粒子分析装置用シース
    液。 6 緩衝剤の濃度が5〜30mMであり、浸透圧調整用
    添加剤の濃度が100〜150mMであり、さらに界面
    活性剤の量が0.1〜5.0g/lである特許請求の範
    囲第1項〜第5項のいずれかに記載の粒子分析装置用シ
    ース液。 7 液のpHが6.0〜8.5であり、浸透圧が245
    〜330m0sm/kgである特許請求の範囲第1項〜
    第6項のいずれかに記載の粒子分析装置用シース液。 8 液のpHが7.0〜8.5である特許請求の範囲第
    7項記載の粒子分析装置用シース液。 9 抗酸化剤および/または防菌剤を含有する特許請求
    の範囲第1項〜第8項のいずれかに記載の粒子分析装置
    用シース液。
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