JPH01104077A - サイトロジンｓ誘導体およびそれを含有する抗癌剤 - Google Patents
サイトロジンｓ誘導体およびそれを含有する抗癌剤Info
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- JPH01104077A JPH01104077A JP62074259A JP7425987A JPH01104077A JP H01104077 A JPH01104077 A JP H01104077A JP 62074259 A JP62074259 A JP 62074259A JP 7425987 A JP7425987 A JP 7425987A JP H01104077 A JPH01104077 A JP H01104077A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は新規なサイトロジンＳ誘導体特にサイトロジン
Ｓ−免疫グロブリン複合体に関する。
Ｓ−免疫グロブリン複合体に関する。
本発明のサイトロジンＳ誘導体は、癌細胞に選択的に作
用し、抗癌剤として有用である。
用し、抗癌剤として有用である。
［従来の技術］
サイトロジンＳはストレプトミセスＹ −１１４７２（
寄託番号Ｄ Ｓ Ｍ −２８５８）を培養して得られる
粗サイトロジン混合物を酸処理することにより製造され
、抗癌作用を有することが報告されている（特開昭ｆ３
０−４８９９４号公報）。
寄託番号Ｄ Ｓ Ｍ −２８５８）を培養して得られる
粗サイトロジン混合物を酸処理することにより製造され
、抗癌作用を有することが報告されている（特開昭ｆ３
０−４８９９４号公報）。
サイトロジンＳの抗癌作用はそれ自体非常に優れている
が、生体に投与した場合に癌細胞に特異的に作用し、パ
イオアベラビリティのより高い薬剤の出現が望まれてい
る。
が、生体に投与した場合に癌細胞に特異的に作用し、パ
イオアベラビリティのより高い薬剤の出現が望まれてい
る。
［問題点を解決するための手段］
本発明者等は癌細胞への選択特異性がより優れたサイト
ロジンＳ誘導体を開発すべく鋭意研究した結果、サイト
ロジンＳ自体の抗癌作用を損うことなしにサイトロジン
Ｓ−免疫グロブリン複合体を得ることに成功し、本発明
を完成した。
ロジンＳ誘導体を開発すべく鋭意研究した結果、サイト
ロジンＳ自体の抗癌作用を損うことなしにサイトロジン
Ｓ−免疫グロブリン複合体を得ることに成功し、本発明
を完成した。
本発明によれば次のサイトロジンＳ誘導体、その製造法
およびそれを含有する抗癌剤が提供される。
およびそれを含有する抗癌剤が提供される。
１）−数式（１）
％式％（１）
る基Ｃ式中Ｒ１は任意の置換基で置換されていでも良い
２価の炭化水素基、Ｒ２は２価の炭化水素基、Ｒ３は２
価の有機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは１〜１
５の整数を示す）を示す〕で表わされるサイトロジンＳ
誘導体及びその塩。
２価の炭化水素基、Ｒ２は２価の炭化水素基、Ｒ３は２
価の有機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは１〜１
５の整数を示す）を示す〕で表わされるサイトロジンＳ
誘導体及びその塩。
２）式中Ｒ３がＲ１を示すかまたは式
は２価の炭化水素基を示す）である上記第１項記載のサ
イトロジンＳ誘導体。
イトロジンＳ誘導体。
３）Ｒがプロピレン基であり、Ｒ４がメチレン基である
上記第２項記載のサイトロジンＳ誘導体。
上記第２項記載のサイトロジンＳ誘導体。
４）ｎが５〜１２である上記第１項〜第３項のいずれか
の項に記載のサイトロジンＳ誘導体。
の項に記載のサイトロジンＳ誘導体。
５）ＩｇＧが癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対する抗体の残
基である上記第１項〜第４項のいずれかの項に記載のサ
イトロジンＳ誘導体。
基である上記第１項〜第４項のいずれかの項に記載のサ
イトロジンＳ誘導体。
る基（式中Ｒ１は任意の置換基で置換されていても良い
２価の炭化水素基、Ｒ２は２価の炭化水素基、Ｒ３は２
価のを機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは１〜１
５の整数を示す）を示す〕であるサイトロジンＳ誘導体
を製造するにあたり、式（ｎ） ０ （■） を有するサイトロジンＳをアンモニウム塩またはＮＨ−
Ｒ’−ＮＨ（式中Ｒ１は前述したものと同一である）で
表わされる化合物の存在下でアルカリ金属シアノボロハ
イドライドで還元して前記式（Ｉ）においてＸが−ＮＨ
２または−ＮＨ−Ｒ’ −ＮＨであるサイトロジンＳ誘
導体を製造し、必要により得られた生成物を式（ＩＩＩ
） Ｏ （式中Ｒ２は前述したものと同一である）を有するマレ
イミド化合物と反応させて式（１）において であるサイトロジンＳ誘導体を製造し、さらに必要によ
り得られた生成物を式（ＩＶ）（式中Ｒ４は２価の炭化
水素基、ＩｇＧは前述したものと同一であり、ｎ′は１
〜２０の整数を示す）を有するチオール化免疫グロブリ
ンと反応させて式（Ｉ）においてＸがサイトロジンＳ誘
導体を製造することを特徴とするサイトロジンＳ誘導体
の製造法。
２価の炭化水素基、Ｒ２は２価の炭化水素基、Ｒ３は２
価のを機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは１〜１
５の整数を示す）を示す〕であるサイトロジンＳ誘導体
を製造するにあたり、式（ｎ） ０ （■） を有するサイトロジンＳをアンモニウム塩またはＮＨ−
Ｒ’−ＮＨ（式中Ｒ１は前述したものと同一である）で
表わされる化合物の存在下でアルカリ金属シアノボロハ
イドライドで還元して前記式（Ｉ）においてＸが−ＮＨ
２または−ＮＨ−Ｒ’ −ＮＨであるサイトロジンＳ誘
導体を製造し、必要により得られた生成物を式（ＩＩＩ
） Ｏ （式中Ｒ２は前述したものと同一である）を有するマレ
イミド化合物と反応させて式（１）において であるサイトロジンＳ誘導体を製造し、さらに必要によ
り得られた生成物を式（ＩＶ）（式中Ｒ４は２価の炭化
水素基、ＩｇＧは前述したものと同一であり、ｎ′は１
〜２０の整数を示す）を有するチオール化免疫グロブリ
ンと反応させて式（Ｉ）においてＸがサイトロジンＳ誘
導体を製造することを特徴とするサイトロジンＳ誘導体
の製造法。
７）式中Ｒ３が
である前記第６項に記載のサイトロピンＳ誘導体の製造
法。
法。
８）−数式（１）においてＸが
−ＮＨ−Ｒ’ −ＳＨまたは
る基（式中Ｒ１は任意の置換基で置換されていても良い
２価の炭化水素基、Ｒ３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫
グロブリン残基、ｎは１〜Ｉ５の整数を示す）であるサ
イトロジンＳ誘導体を製造するにあたり、前記式（ｎ）
ををするサイトロジンＳをＳＨ２−Ｒ’ −８Ｈ（式中
Ｒ１は前述したものと同一である）で表わされる化合物
の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライドで還元
して前記式（１）においてＸが−ＮＨ−Ｒ’ −３Ｈで
あるサイトロジンＳ誘導体を製造し必要により得られ生
成物を式（Ｖ）（式中Ｒ２およびＩｇＧは前述したもの
と同一でありｎ′は１〜２０の整数を示す）を存するマ
レイミド化免疫グロブリンと反応させて、式％式％ サイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とするサイ
トロジンＳ誘導体の製造法。
２価の炭化水素基、Ｒ３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫
グロブリン残基、ｎは１〜Ｉ５の整数を示す）であるサ
イトロジンＳ誘導体を製造するにあたり、前記式（ｎ）
ををするサイトロジンＳをＳＨ２−Ｒ’ −８Ｈ（式中
Ｒ１は前述したものと同一である）で表わされる化合物
の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライドで還元
して前記式（１）においてＸが−ＮＨ−Ｒ’ −３Ｈで
あるサイトロジンＳ誘導体を製造し必要により得られ生
成物を式（Ｖ）（式中Ｒ２およびＩｇＧは前述したもの
と同一でありｎ′は１〜２０の整数を示す）を存するマ
レイミド化免疫グロブリンと反応させて、式％式％ サイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とするサイ
トロジンＳ誘導体の製造法。
９）Ｒ３が
である前記第８項に記載のサイトロジンＳ誘導体の製造
法。
法。
１０）−数式（１）においてＸが
−ＮＨ−Ｒ’ −ＣＯＯＨまたは
る基（式中Ｒ１は任意の置換基で置換されていでも良い
２ｍの炭化水素基、Ｒ３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫
グロブリン残基、ｎは１〜１５の整数を示す）であるサ
イトロジンＳ誘導体を製造するにあたり、前記式（ｎ）
を有するサイトロジン５ＧＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ（式中
Ｒ１は前述したものと同一である）で表わされる化合物
の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライドで還元
して前記式（Ｉ）においてＸが−ＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ
であるサイトロジンＳ誘導体を製造し、必要により得ら
れた生成物をカルボジイミド類の存在下で、式（Ｍｌ）
ＮＨ２＋Ｉ ｇＧ） Ｉ／ｎ （Ｖｌ）（
ＩｇＧは前述したものと同一であり、ｎは１〜１５の整
数を示す）を有する免疫グロブリンと反応させて式（１
）においてＸが であるサイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とす
るサイトロジンＳ誘導体の製造法。
２ｍの炭化水素基、Ｒ３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫
グロブリン残基、ｎは１〜１５の整数を示す）であるサ
イトロジンＳ誘導体を製造するにあたり、前記式（ｎ）
を有するサイトロジン５ＧＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ（式中
Ｒ１は前述したものと同一である）で表わされる化合物
の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライドで還元
して前記式（Ｉ）においてＸが−ＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ
であるサイトロジンＳ誘導体を製造し、必要により得ら
れた生成物をカルボジイミド類の存在下で、式（Ｍｌ）
ＮＨ２＋Ｉ ｇＧ） Ｉ／ｎ （Ｖｌ）（
ＩｇＧは前述したものと同一であり、ｎは１〜１５の整
数を示す）を有する免疫グロブリンと反応させて式（１
）においてＸが であるサイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とす
るサイトロジンＳ誘導体の製造法。
１１） Ｒ３がＲ１である前記第１０項に記載のサイト
ロジンＳ誘導体の製造法。
ロジンＳ誘導体の製造法。
１２）前記式（１）を有するサイトロジンＳ誘導体を含
有する抗癌剤。
有する抗癌剤。
上記式（りにおいて、Ｒ」の好ましい例としては既存の
α−アミノ酸、β−１γ−１ε−アミノ酸、β−２γ−
１ε−チオールアミンより導がれる基があげられる。
α−アミノ酸、β−１γ−１ε−アミノ酸、β−２γ−
１ε−チオールアミンより導がれる基があげられる。
Ｒ２の好ましい例としてはメチレン、エチレン、プロピ
レンのような低級アルキレン基、ｐ−フェニレン、ｍ−
フェニレンのようなフェニレン基、シクロヘキシンのよ
うな０４〜Ｃ７シクロアルキレン基、フェニレニルメチ
ルのようなフェニレニル低級アルキル基およびシクロへ
キシレニルメチルのような０４〜Ｃ７シクロアルキレニ
ル低級アルキル基があげられる。Ｒ３の好ましい例とし
ては、式 される基があげられ、Ｒ４の好ましい例としてはメチレ
ン、エチレン、プロピレンのような低級アルキレン基、
ｐ−フェニレン、ｍ−フェニレンのようなフェニレン基
、シクロヘキシレンのような０４〜Ｃ７シクロアルキレ
ン基、フェニレニルメチルのようなフェニレニル低級ア
ルキル基およびシクロへキシレニルメチルのようなＣ４
〜Ｃ７シクロアルキレニル低級アルキル基があげられる
。
レンのような低級アルキレン基、ｐ−フェニレン、ｍ−
フェニレンのようなフェニレン基、シクロヘキシンのよ
うな０４〜Ｃ７シクロアルキレン基、フェニレニルメチ
ルのようなフェニレニル低級アルキル基およびシクロへ
キシレニルメチルのような０４〜Ｃ７シクロアルキレニ
ル低級アルキル基があげられる。Ｒ３の好ましい例とし
ては、式 される基があげられ、Ｒ４の好ましい例としてはメチレ
ン、エチレン、プロピレンのような低級アルキレン基、
ｐ−フェニレン、ｍ−フェニレンのようなフェニレン基
、シクロヘキシレンのような０４〜Ｃ７シクロアルキレ
ン基、フェニレニルメチルのようなフェニレニル低級ア
ルキル基およびシクロへキシレニルメチルのようなＣ４
〜Ｃ７シクロアルキレニル低級アルキル基があげられる
。
ＩｇＧで示される免疫グロブリン残基は免疫グロブリン
からｎ個のアミノ基を除いたグロブリン残基を意味する
。但し、式（１）におけるＩｇＧは免疫グロブリン の一部が残っているものを含む。これはチオール化免疫
グロブリン（ＫＶ）における全てのチオール基がサイト
ロジンＳ誘導体と反応するのではなく、一部未反応のチ
オール基が残存するためである。
からｎ個のアミノ基を除いたグロブリン残基を意味する
。但し、式（１）におけるＩｇＧは免疫グロブリン の一部が残っているものを含む。これはチオール化免疫
グロブリン（ＫＶ）における全てのチオール基がサイト
ロジンＳ誘導体と反応するのではなく、一部未反応のチ
オール基が残存するためである。
免疫グロタリンとしては癌細胞に特異的に結合する抗体
であることが好ましい。
であることが好ましい。
１／ｎはサイトロジン８１分子に対する免疫グロブリン
分子の数を示し、ｌ／１〜１／１５である。
分子の数を示し、ｌ／１〜１／１５である。
すなわち、免疫グロブリン１分子に対し、サイトロジン
８１〜１５分子が結合することを表わすものである。
８１〜１５分子が結合することを表わすものである。
式−ＮＨ２，−ＮＨ−Ｒ１−ＮＨ２゜
−ＮＨＲ’ −ＣＯＯＨ。
−ＮＨＲ’ −ＳＨ。
で表わされる化合物は免疫グロブリン複合体を製造する
ための中間体であるが、サイトロジンＳの抗癌作用を保
持しているのでそれ自体としても抗癌剤となりうるもの
である。
ための中間体であるが、サイトロジンＳの抗癌作用を保
持しているのでそれ自体としても抗癌剤となりうるもの
である。
一般に抗癌剤と免疫グロブリンとの調合体を作成するに
は、２価架橋試薬、縮合剤もしくはスペーサーを用いて
抗癌剤と免疫グロブリンを結合させる手法が用いられる
。この目的のために抗癌剤はその分子中のアミノ基、カ
ルボキシル基、チオー°ル基のような官能基を介して２
価架橋試薬、縮合剤もしくはスペーサーと結合させられ
るが、サイトロジンＳはこれ等の官能基を有しないため
、化学的に修飾してアミノ基、カルボキシル基もしくは
チオール基を含んだ誘導体を作成する必要がある。
は、２価架橋試薬、縮合剤もしくはスペーサーを用いて
抗癌剤と免疫グロブリンを結合させる手法が用いられる
。この目的のために抗癌剤はその分子中のアミノ基、カ
ルボキシル基、チオー°ル基のような官能基を介して２
価架橋試薬、縮合剤もしくはスペーサーと結合させられ
るが、サイトロジンＳはこれ等の官能基を有しないため
、化学的に修飾してアミノ基、カルボキシル基もしくは
チオール基を含んだ誘導体を作成する必要がある。
サイトロジンＳの抗癌作用を失なわずにこれ等誘導体を
作成する方法として糖鎖にあるオキソ基にアミノ基を導
入する方法がある。−殻内なオキソ基の還元法としては
リチウムアルミニウムハイドライド（Ｌｉ ＡｊＪ Ｈ
４） 、ナトリウムボロハイドライド（Ｎ ａ Ｂ Ｈ
４）等があるがアンスラサイクリン環にあるオキソ基を
還元することなく選択的に糖鎖のオキソ基を還元する試
薬としてナトリウムシアノボロハイドライド（Ｎ ａ
Ｂ ＣＮ Ｈａ ）あるいはリチウムシアノボロハイド
ライド（Ｌ！ ＢＣＮＨ３）を用いることができる。ア
ンモニウム塩およびアミノ基を有する有機化合物存在下
でこれ等還元試薬を用いると選択的に糖鎖のオキソ基が
還元アミノ化されサイトロジンＳの誘導体が生成される
。
作成する方法として糖鎖にあるオキソ基にアミノ基を導
入する方法がある。−殻内なオキソ基の還元法としては
リチウムアルミニウムハイドライド（Ｌｉ ＡｊＪ Ｈ
４） 、ナトリウムボロハイドライド（Ｎ ａ Ｂ Ｈ
４）等があるがアンスラサイクリン環にあるオキソ基を
還元することなく選択的に糖鎖のオキソ基を還元する試
薬としてナトリウムシアノボロハイドライド（Ｎ ａ
Ｂ ＣＮ Ｈａ ）あるいはリチウムシアノボロハイド
ライド（Ｌ！ ＢＣＮＨ３）を用いることができる。ア
ンモニウム塩およびアミノ基を有する有機化合物存在下
でこれ等還元試薬を用いると選択的に糖鎖のオキソ基が
還元アミノ化されサイトロジンＳの誘導体が生成される
。
すなわち式（ｎ）
（以下余白）
を有するサイトロジンＳをアンモニウム塩および、ＮＨ
−Ｒ１−ＮＨＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ。
−Ｒ１−ＮＨＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ。
２ ２′ ２
Ｎｌ（２−Ｒ１−８Ｈで表わされるアミノ基を有する有
機化合物の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライ
ドで還元することにより前記式（１）においてＸが−Ｎ
Ｈ２または −ＮＨ−Ｒ１−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ。
機化合物の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライ
ドで還元することにより前記式（１）においてＸが−Ｎ
Ｈ２または −ＮＨ−Ｒ１−ＮＨ−ＮＨ−Ｒ１−ＣＯＯＨ。
２ ′
−ＮＨＲ１−５ＲであるサイトロジンＳ誘導体が得られ
る。
る。
アンモニウム塩の例としては酢酸アンモニウム、プロピ
オン酸アンモニウム、塩化アンモニウムがあげられ、ア
ミノ基を含む有機化合物例としては、リジン、システィ
ンのような既存のα−アミノ酸、γ−アミノ酪酸のよう
な、β−１γ−１ε−アミノ酸や、グリシンエチルエス
テルのようなアミノ酸エステル、アミノエタンチオール
、アミノチオフェノールのようなチオールアミンがあげ
られる。
オン酸アンモニウム、塩化アンモニウムがあげられ、ア
ミノ基を含む有機化合物例としては、リジン、システィ
ンのような既存のα−アミノ酸、γ−アミノ酪酸のよう
な、β−１γ−１ε−アミノ酸や、グリシンエチルエス
テルのようなアミノ酸エステル、アミノエタンチオール
、アミノチオフェノールのようなチオールアミンがあげ
られる。
アルカリ金属シアノボロハイドライドの例としてはリチ
ウム（またはナトリウム）シアノボロハイドライドがあ
げられる。
ウム（またはナトリウム）シアノボロハイドライドがあ
げられる。
上記反応は、水混和性の有機溶媒（例えばメタノール、
エタノール等）やｐＨを８に調節した一級及び二級アミ
ンを含まない緩衝液（例えば、リン酸塩、ホウ酸塩を用
いた緩衝液や２，４．６− トリメチルピリジン−塩酸
緩衝液等）にサイトロジンＳおよびアンモニウム塩、ア
ミノ基を有する有機化合物を溶解し、この溶液にアルカ
リ金属シアノボロハイドライドを加えて室温または水冷
下で反応させることによって容易に実施される。反応混
合物中の生成物は常法によって例えばｐＨを８に調整し
たのちジクロルメタン等適当な有機溶媒中で抽出し、抽
出液から溶媒を留去することによりて、または、分取Ｈ
ＰＬＣを用いることによって採取される。かくして得ら
れたサイトロジンＳの誘導体のうち、Ｘが−ＮＨ２及び
−ＮＨ−Ｒ’ −Ｎ Ｈ２である誘導体は次いで前記
式（ＩＩ）を何するマレイミド化合物と反応させて前記
式（１）においてＸが・ であるサイトロジンＳ誘導体が得られる。副生成物とし
てＮ−ヒドロキシサクシンイミドが生成する。
エタノール等）やｐＨを８に調節した一級及び二級アミ
ンを含まない緩衝液（例えば、リン酸塩、ホウ酸塩を用
いた緩衝液や２，４．６− トリメチルピリジン−塩酸
緩衝液等）にサイトロジンＳおよびアンモニウム塩、ア
ミノ基を有する有機化合物を溶解し、この溶液にアルカ
リ金属シアノボロハイドライドを加えて室温または水冷
下で反応させることによって容易に実施される。反応混
合物中の生成物は常法によって例えばｐＨを８に調整し
たのちジクロルメタン等適当な有機溶媒中で抽出し、抽
出液から溶媒を留去することによりて、または、分取Ｈ
ＰＬＣを用いることによって採取される。かくして得ら
れたサイトロジンＳの誘導体のうち、Ｘが−ＮＨ２及び
−ＮＨ−Ｒ’ −Ｎ Ｈ２である誘導体は次いで前記
式（ＩＩ）を何するマレイミド化合物と反応させて前記
式（１）においてＸが・ であるサイトロジンＳ誘導体が得られる。副生成物とし
てＮ−ヒドロキシサクシンイミドが生成する。
マレイミド化合物（ＩＩＩ）の例としては、Ｎ−γ−マ
レイミドブチリルオキシサクシンイミド〔ＧＭＢＳ、Ｒ
２：＋ＣＨ２＋３〕、サクシンイミジル４− （Ｎ−マ
レイミドメチル）−シクロヘキサンカルボキシレート ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエスル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート上記反応は適当
な溶媒、例えばジクロルメタン、ジクロルエタン、クロ
ロホルム、ピリジン、トリ。
レイミドブチリルオキシサクシンイミド〔ＧＭＢＳ、Ｒ
２：＋ＣＨ２＋３〕、サクシンイミジル４− （Ｎ−マ
レイミドメチル）−シクロヘキサンカルボキシレート ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエスル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート上記反応は適当
な溶媒、例えばジクロルメタン、ジクロルエタン、クロ
ロホルム、ピリジン、トリ。
エチルアミン等の存在下、室温または水冷下でサイトロ
ジンＳアミノ誘導体をマレイミド化合物と混合すること
によって容易に実施される。
ジンＳアミノ誘導体をマレイミド化合物と混合すること
によって容易に実施される。
このようにして得られたマレイミド基が導入されたサイ
トロジンＳ誘導体は、チオール基を持つ全ての蛋白質あ
るいは化合物と付加反応を起こすことができる。すなわ
ち、マレイミド基にある二重結合がチオール基と親電子
付加反応を起こすのである。したがって、後述するよう
にチオール基が導入された免疫グロブリンのチオール基
がマレイミド基に付加することにより、複合体を形成す
ることができる。
トロジンＳ誘導体は、チオール基を持つ全ての蛋白質あ
るいは化合物と付加反応を起こすことができる。すなわ
ち、マレイミド基にある二重結合がチオール基と親電子
付加反応を起こすのである。したがって、後述するよう
にチオール基が導入された免疫グロブリンのチオール基
がマレイミド基に付加することにより、複合体を形成す
ることができる。
複合体を製造するために用いられる免疫グロブリンは一
般に癌細胞にのみ生じる膜蛋白に対する単クローンもし
くは多クローン抗体であることがのぞましく、また人由
来でない抗体を用いる場合は抗体のＦｃ部分をとり除い
たものが臨床的には望ましい。しかしながらサイトロジ
ンＳの付加効率を考えると抗体全体を用いる方かよい。
般に癌細胞にのみ生じる膜蛋白に対する単クローンもし
くは多クローン抗体であることがのぞましく、また人由
来でない抗体を用いる場合は抗体のＦｃ部分をとり除い
たものが臨床的には望ましい。しかしながらサイトロジ
ンＳの付加効率を考えると抗体全体を用いる方かよい。
特に好適な免疫グロブリンとして癌胎児性抗原（Ｃａｒ
ｃｉｎｏｃｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｃｎ） （ＣＥ
Ａ）あるいはα−フェトプロティン（ＡＦＰ）を抗原
して得られた単クローン抗体が挙げられる。癌胎児性抗
原に対する単クローン抗体は、抗原をマウスに投与し、
そのマウスの肺臓を摘出し、肺細胞をＨＡＴ感受性のミ
エローマ細胞とポリエチレングリコール法により融合さ
せ、ＨＡＴ培地を選択培地として用い、ハイブリドーマ
を選択し、これをマウスに移植する通常の方法によって
製造される。
ｃｉｎｏｃｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｃｎ） （ＣＥ
Ａ）あるいはα−フェトプロティン（ＡＦＰ）を抗原
して得られた単クローン抗体が挙げられる。癌胎児性抗
原に対する単クローン抗体は、抗原をマウスに投与し、
そのマウスの肺臓を摘出し、肺細胞をＨＡＴ感受性のミ
エローマ細胞とポリエチレングリコール法により融合さ
せ、ＨＡＴ培地を選択培地として用い、ハイブリドーマ
を選択し、これをマウスに移植する通常の方法によって
製造される。
免疫グロブリンを、複合体作成のためにマレイミド基が
導入されたサイトロジンＳと反応させるに先立ち、免疫
グロブリンにチオール基が導入される。チオール基を導
入するために免疫グロブリンを式（■） （式中Ｒ４は前述したものと同一であり、Ｒ５はチオー
ル基保護基例えばアセチルのようなアシル基または２−
ピリジルチオ基を示す）を有するＮ−サクシンイミド化
合物と反応させて前記式（ＩＶ）を有するチオール化免
疫グロブリンを得る。
導入されたサイトロジンＳと反応させるに先立ち、免疫
グロブリンにチオール基が導入される。チオール基を導
入するために免疫グロブリンを式（■） （式中Ｒ４は前述したものと同一であり、Ｒ５はチオー
ル基保護基例えばアセチルのようなアシル基または２−
ピリジルチオ基を示す）を有するＮ−サクシンイミド化
合物と反応させて前記式（ＩＶ）を有するチオール化免
疫グロブリンを得る。
Ｎ−サクシンイミド化合物（■）の好適な例としではＮ
−サクシンイミジル＝Ｓ−アセチルチオアセテート があげられる。５ＡＴＡは免疫グロブリン中のアミノ基
と反応し、チオール基がアセチル基で保護された形、す
なわち を生じ、副生成物としてＮ−ヒドロキシルアミンイミド
を生ずる。チオール基の脱保護は例えばヒドロキシルア
ミンを用いてｐｌ！ ７．５で行なわれ、反このチオー
ル基は条件によっては酸化されやすく結果として免疫グ
ロブリンポリマーを生じる二とがある。このためチオー
ル基の脱保護はマレイミド基の導入されたサイトロジン
Ｓ誘導体との反応の直前に２５℃で１時間位行うのが好
ましい。
−サクシンイミジル＝Ｓ−アセチルチオアセテート があげられる。５ＡＴＡは免疫グロブリン中のアミノ基
と反応し、チオール基がアセチル基で保護された形、す
なわち を生じ、副生成物としてＮ−ヒドロキシルアミンイミド
を生ずる。チオール基の脱保護は例えばヒドロキシルア
ミンを用いてｐｌ！ ７．５で行なわれ、反このチオー
ル基は条件によっては酸化されやすく結果として免疫グ
ロブリンポリマーを生じる二とがある。このためチオー
ル基の脱保護はマレイミド基の導入されたサイトロジン
Ｓ誘導体との反応の直前に２５℃で１時間位行うのが好
ましい。
このチオール基は反応に用いる５ＡＴＡの量により免疫
グロブリン１分子あたり１〜２０好ましくは５〜２０個
が導入されるがこの導入によってもグロブリンの抗体と
しての活性は失なわれない。
グロブリン１分子あたり１〜２０好ましくは５〜２０個
が導入されるがこの導入によってもグロブリンの抗体と
しての活性は失なわれない。
また５ＡＴＡに代えてＮ−サクシンイミジル３− （２
−ピリジルジチオ）プロピオネートをチオール導入試薬
として用い、脱１’；？、護剤としてジチオスレイトー
ルを用いると、免疫グロブリン中のアミノ基との間で
゛ −ＮＨ−Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２−ＳＨ なる基が形成される。
−ピリジルジチオ）プロピオネートをチオール導入試薬
として用い、脱１’；？、護剤としてジチオスレイトー
ルを用いると、免疫グロブリン中のアミノ基との間で
゛ −ＮＨ−Ｃ−ＣＨ２ＣＨ２−ＳＨ なる基が形成される。
このようにしてチオールノλが導入された免疫グロブリ
ン（ＩＶ）はマレイミド基が導入されたサイトロジンＳ
と反応させることにより本発明の免疫グロブリン複合体
が製造される。
ン（ＩＶ）はマレイミド基が導入されたサイトロジンＳ
と反応させることにより本発明の免疫グロブリン複合体
が製造される。
この反応は水混和性有機溶媒（例えはメタノール、エタ
ノール、ジメチルホルムアミド等）にとかしたマレイミ
ド基が導入されたサイトロジンＳをチオール基が導入さ
れた免疫グロブリンの水溶液にｐＨ７，５で混合するこ
とによって容Ｂに実施される。
ノール、ジメチルホルムアミド等）にとかしたマレイミ
ド基が導入されたサイトロジンＳをチオール基が導入さ
れた免疫グロブリンの水溶液にｐＨ７，５で混合するこ
とによって容Ｂに実施される。
Ｘが−ＮＨ−Ｒ１−３Ｈであるチオール基か導入された
サイトロジンＳ誘導体は、マレイミド基を導入された全
ての蛋白質あるいは化合物と付加反応を起こすことがで
きる。すなわち、マレイミド基にある二重結合がチオー
ル基と親電子付加反応を起こすのである。したがって、
後述するようにマレイミド基が導入された免疫グロブリ
ンのマレイミド基にチオール基が付加することにより、
複合体を形成することができる。
サイトロジンＳ誘導体は、マレイミド基を導入された全
ての蛋白質あるいは化合物と付加反応を起こすことがで
きる。すなわち、マレイミド基にある二重結合がチオー
ル基と親電子付加反応を起こすのである。したがって、
後述するようにマレイミド基が導入された免疫グロブリ
ンのマレイミド基にチオール基が付加することにより、
複合体を形成することができる。
複合体を製造するために用いられる免疫グロブリンは先
に説明したとおりである。
に説明したとおりである。
免疫グロブリンを、複合体作成のためにチオール基が導
入されたサイトロジンＳと反応させるに先立ち、免疫グ
ロブリンにマレイミド基が導入される。マレイミド基を
導入するために免疫グロブリンを式（’ＩＩ） 〔式中Ｒ２は前述したものと同一である〕を有するマレ
イミド化合物と反応させて前記式（Ｖ）を有するマレイ
ミド化免疫グロブリンを得る。マレイミド化合物（ＩＩ
Ｉ）の好適な例′は、前述のＮ−γ−マレイミドブチリ
ルオキシサクシンイミド等があげられる。
入されたサイトロジンＳと反応させるに先立ち、免疫グ
ロブリンにマレイミド基が導入される。マレイミド基を
導入するために免疫グロブリンを式（’ＩＩ） 〔式中Ｒ２は前述したものと同一である〕を有するマレ
イミド化合物と反応させて前記式（Ｖ）を有するマレイ
ミド化免疫グロブリンを得る。マレイミド化合物（ＩＩ
Ｉ）の好適な例′は、前述のＮ−γ−マレイミドブチリ
ルオキシサクシンイミド等があげられる。
マレイミド化合物（ＩＩＩ）は、免疫グロブリン中のア
ミノ基のカルボニル基に対する求核置換反応によって免
疫グロブリン中のアミノ基とアミド結合を形成し、式（
Ｖ）の であるマレイミド化免疫グロブリンおよび副生成物とし
てのＮ−ヒドロキシサクシンイミドを生成する。
ミノ基のカルボニル基に対する求核置換反応によって免
疫グロブリン中のアミノ基とアミド結合を形成し、式（
Ｖ）の であるマレイミド化免疫グロブリンおよび副生成物とし
てのＮ−ヒドロキシサクシンイミドを生成する。
このマレイミド基は反応に用いるマレイミド化合物（Ｉ
ＩＩ）の童により免疫グロブリン１分子あたり１〜２０
好ましくは５〜２０個が導入されるがこの導入によって
もグロブリンの抗体としての活性は失なわれない。
ＩＩ）の童により免疫グロブリン１分子あたり１〜２０
好ましくは５〜２０個が導入されるがこの導入によって
もグロブリンの抗体としての活性は失なわれない。
このようにしてマレイミド基が導入された免疫グロブリ
ン（Ｖ）はチオール基が導入されたサイトロジンＳと反
応させることにより本発明の免疫グロブリン複合体が製
造される。
ン（Ｖ）はチオール基が導入されたサイトロジンＳと反
応させることにより本発明の免疫グロブリン複合体が製
造される。
この反応は水混和性有機溶媒（例えばメタノール、エタ
ノール、ジメチルホルムアミド等）またはｐＨ７，５の
緩衝液（免疫グロブリンを溶解するのに使用したものと
同等である）にとがしたチオール基が導入されたサイト
ロジンＳをマレイミド基が導入された免疫グロブリンの
水溶液にｐＨ７，５で混合することによって容品に実施
される。
ノール、ジメチルホルムアミド等）またはｐＨ７，５の
緩衝液（免疫グロブリンを溶解するのに使用したものと
同等である）にとがしたチオール基が導入されたサイト
ロジンＳをマレイミド基が導入された免疫グロブリンの
水溶液にｐＨ７，５で混合することによって容品に実施
される。
Ｘが−ＮＨ−Ｒ’ −ＣＯＯＨである”ｌ−イトロジン
Ｓ誘導体は全ての蛋白質あるいは化合物のアミノ基と適
当な縮合剤を用いることによってペプチド結合によって
結合し得る。すなわち縮合剤によってカルボキシル基が
活性エステル化しこれが蛋白質または化合物中のアミノ
基へ求核反応することによりペプチド結合を形成する。
Ｓ誘導体は全ての蛋白質あるいは化合物のアミノ基と適
当な縮合剤を用いることによってペプチド結合によって
結合し得る。すなわち縮合剤によってカルボキシル基が
活性エステル化しこれが蛋白質または化合物中のアミノ
基へ求核反応することによりペプチド結合を形成する。
したがって、免疫グロブリン本来が持つ、アミノ基（リ
ジン残基等の側鎖）にサイトロジンＳは、 新たに導入
されたカルボキシル基によってペプチド結合を介して導
入され、複合体を形成し得る。
ジン残基等の側鎖）にサイトロジンＳは、 新たに導入
されたカルボキシル基によってペプチド結合を介して導
入され、複合体を形成し得る。
Ｘが−ＮＨ−Ｒ’−ＣＯＯＨであるサイトロジンＳ誘導
体は、複合体作成のために縮合剤によって活性エステル
化される。活性エステル化するために前記式（Ｉ）にお
いてＸが−ＮＨ−Ｒ’ −ＣＯＯＨであるサイトロジン
Ｓ誘導体をカルボジイミド類と反応させる。
体は、複合体作成のために縮合剤によって活性エステル
化される。活性エステル化するために前記式（Ｉ）にお
いてＸが−ＮＨ−Ｒ’ −ＣＯＯＨであるサイトロジン
Ｓ誘導体をカルボジイミド類と反応させる。
カルボジイミドの好適な例としては、ジシクロへキシル
カルボジイミド、■、３−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩、ジエチルカルボジイ
ミド、ジフェニルカルボジイミド、ジベンジルカルボジ
イミド、サイアナミド等があげられる。この反応は、水
混和性有機溶媒（例えばメタノール、エタノール、ジメ
チルホルムアミド等）またはｐＨ７，５の緩衝液（免疫
グロブリンを溶解するのに使用したものと同等である。
カルボジイミド、■、３−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩、ジエチルカルボジイ
ミド、ジフェニルカルボジイミド、ジベンジルカルボジ
イミド、サイアナミド等があげられる。この反応は、水
混和性有機溶媒（例えばメタノール、エタノール、ジメ
チルホルムアミド等）またはｐＨ７，５の緩衝液（免疫
グロブリンを溶解するのに使用したものと同等である。
）に、サイトロジンＳ誘導体及びカルボジイミドを溶解
、室温にて１時間反応させた後に、免疫グロブリン水溶
液にｐＨ７，５でこれを加えることによって行なわれる
。
、室温にて１時間反応させた後に、免疫グロブリン水溶
液にｐＨ７，５でこれを加えることによって行なわれる
。
このサイトロジンＳ誘導体の結合は、反応に用いるサイ
トロジンＳ誘導体の量により、免疫グロブリン１分子あ
たり１〈２０、好ましくは５〜２０個が結合されるが、
この結合によってもグロブリンの抗体としての活性は失
なわれない。
トロジンＳ誘導体の量により、免疫グロブリン１分子あ
たり１〈２０、好ましくは５〜２０個が結合されるが、
この結合によってもグロブリンの抗体としての活性は失
なわれない。
本発明の複合体中においてサイトロジンＳと免疫グロブ
リンの結合比は１〜１５：１であり、免疫グロブリン１
分子に対して１〜１５分子のサイトロジンＳが結合して
いる。このように抗癌剤成分の結合比が高いので本発明
の複合体は強い抗癌作用を奏するという優れた効果を有
している。
リンの結合比は１〜１５：１であり、免疫グロブリン１
分子に対して１〜１５分子のサイトロジンＳが結合して
いる。このように抗癌剤成分の結合比が高いので本発明
の複合体は強い抗癌作用を奏するという優れた効果を有
している。
サイトロジンＳ誘導体（１）の臨床における投与量は、
投与経路にもよるが通常はサイトロジンＳとして成人１
日当り１〜２０ｍｇの範囲である。
投与経路にもよるが通常はサイトロジンＳとして成人１
日当り１〜２０ｍｇの範囲である。
投与方法としては、静脈内、腹腔内、直腸内投与が可能
であり、静脈内投与の場合は通常の静脈内注射の他点滴
静注が可能である。
であり、静脈内投与の場合は通常の静脈内注射の他点滴
静注が可能である。
サイトロジンＳ誘導体（１）を含有する製剤は、通常の
賦形剤、添加剤を用いて通常の方法によって製造される
。
賦形剤、添加剤を用いて通常の方法によって製造される
。
注射用製剤としては、例えば注射用粉末製剤とすること
が出来る。その場合は適当な水溶性賦形剤例えばマンニ
トール、蔗糖、乳糖、マルトース、ブドウ糖、フルクト
ース等の一種または二種以」二を加えて水で溶解し、バ
イアルまたはアンプルに分注した後凍結乾燥し密封して
製剤とすることができる。
が出来る。その場合は適当な水溶性賦形剤例えばマンニ
トール、蔗糖、乳糖、マルトース、ブドウ糖、フルクト
ース等の一種または二種以」二を加えて水で溶解し、バ
イアルまたはアンプルに分注した後凍結乾燥し密封して
製剤とすることができる。
半割用としては、カカオ脂や、脂肪酸トリグリセライド
に脂肪酸モノグリセライド、脂肪酸ジグリセライドを種
々の割合で混合した半合成基剤等の親油性基剤、ポリエ
チレングリコールやグリセロゼラチン等の親水性基剤を
加温溶解したものを加えて均一に混和し型に入れて成形
し串刺とすることができる。
に脂肪酸モノグリセライド、脂肪酸ジグリセライドを種
々の割合で混合した半合成基剤等の親油性基剤、ポリエ
チレングリコールやグリセロゼラチン等の親水性基剤を
加温溶解したものを加えて均一に混和し型に入れて成形
し串刺とすることができる。
以下に本発明の実施例を示す。
［実 施 例］
実施例 １
サイトロジン５１０ｍｇをメタノール２ｍｌに溶解し′
た。この溶液にサイトロジンＳに対し１０モル当量に相
当する５、８ｍｇのアンモニウムアセテートのメタノー
ル溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する
１、４ｍｇのナトリウムシアノボロハイドライドのメタ
ノール溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）を加え２５℃で４時
間反応せしめた。反応で得られた混合液を５℃に冷やし
た２０ｍ１の０．５％酢酸水溶液に加え５ｍｌのジクロ
ルメタンで２回抽出し未反応のサイトロジンＳを除去し
た。得られた酢酸水溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液でｐ）１８に合せた。この水溶液を２０ｍ１のジクロ
ルメタンで３回抽出することによりアミノ誘導体を得た
。ジクロルメタン溶液を無水硫酸ナトリウムにより脱水
しジクロルメタンを減圧蒸留することにより４．８ｎｇ
のサイトロジンＳアミノ誘導体（以下アミノサイトロジ
ンＳとする）を得た。純度は高速液体クロマトグラフィ
ー（以下ＨＰＬＣという）により分析した。
た。この溶液にサイトロジンＳに対し１０モル当量に相
当する５、８ｍｇのアンモニウムアセテートのメタノー
ル溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する
１、４ｍｇのナトリウムシアノボロハイドライドのメタ
ノール溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）を加え２５℃で４時
間反応せしめた。反応で得られた混合液を５℃に冷やし
た２０ｍ１の０．５％酢酸水溶液に加え５ｍｌのジクロ
ルメタンで２回抽出し未反応のサイトロジンＳを除去し
た。得られた酢酸水溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液でｐ）１８に合せた。この水溶液を２０ｍ１のジクロ
ルメタンで３回抽出することによりアミノ誘導体を得た
。ジクロルメタン溶液を無水硫酸ナトリウムにより脱水
しジクロルメタンを減圧蒸留することにより４．８ｎｇ
のサイトロジンＳアミノ誘導体（以下アミノサイトロジ
ンＳとする）を得た。純度は高速液体クロマトグラフィ
ー（以下ＨＰＬＣという）により分析した。
その条件は以下のとおりである：カラム、５ＳＣ−Ａｑ
ｕａｓｉｌ ＰＩＥ−２，４，８ｍｍＸ２５０ ｍｍ
（センシュー科学）、溶媒；２．０％トリエチルアンモ
ニウムホスフェイト（ｐＨ３） 、７５％、アセトニト
リル、２５％。保持時間：サイトロジンＳ （２５，０
分）、アミノサイトロジンＳ （１２，９分）。さらに
、ＨＰＬＣによって得た当該サイトロジンＳ誘導体をＦ
ＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（日本電子辻ＪＭＳ−Ｄ
Ｘ３００）によってその質量数を７１１１１定したとこ
ろ９４２ （Ｍ十Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算
により求めた質量数との一致を観た。
ｕａｓｉｌ ＰＩＥ−２，４，８ｍｍＸ２５０ ｍｍ
（センシュー科学）、溶媒；２．０％トリエチルアンモ
ニウムホスフェイト（ｐＨ３） 、７５％、アセトニト
リル、２５％。保持時間：サイトロジンＳ （２５，０
分）、アミノサイトロジンＳ （１２，９分）。さらに
、ＨＰＬＣによって得た当該サイトロジンＳ誘導体をＦ
ＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（日本電子辻ＪＭＳ−Ｄ
Ｘ３００）によってその質量数を７１１１１定したとこ
ろ９４２ （Ｍ十Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算
により求めた質量数との一致を観た。
誘導体の吸収スペクトルは、４９５０ｍにサイトロジン
Ｓのアンスラサイクリン環に由来する特異吸収が観測さ
れた。これは出発物質のサイトロジンＳと同一波形を示
し、誘導体の抗ガン作用が損われていないことを示して
いる。
Ｓのアンスラサイクリン環に由来する特異吸収が観測さ
れた。これは出発物質のサイトロジンＳと同一波形を示
し、誘導体の抗ガン作用が損われていないことを示して
いる。
実施例 ２
実施例１で得られたアミノサイトロジン８４．８ｍｇを
２ｍｇのジクロルメタンに溶解した。この溶液にアミノ
サイトロジン８５モル当量に相当する３、８ｍｇのＮ−
γ−マレイミドブチリルオキシサクシンイミド（ベーリ
ングダイアグノステイクス製、以下ＧＭＢＳという）の
ジクロルメタン溶液（濃度１（ｌＩＩｇ／ｍｌ）を加え
２５℃で２時間反応せしめた。反応混合物は分取用薄層
クロマトグラフィー（以下ＴＬＣという）により精製し
サイトロジンＳのＧＭＢＳ誘導体を得た。薄層クロマト
グラフィーの条件は以下のとおり：薄層プレイド；２ｍ
ｍシリカゲル６０Ｆ−２５４（メルク製）、展開溶媒；
メタノール：ジクロルメタン−１：４、Ｒｒ値：ＧＭＢ
ＳＲ導体（０，８２）、アミノサイトロジンＳ （０，
２９）。得られたＧＭＢＳ誘導体を薄層プレートより抽
出した後、抽出液を無水硫酸ナトリウムにより脱水し溶
媒を減圧蒸留することにより２．７ｍｇのサイトロジン
ＳのＧＭＢＳ誘導体を得た。
２ｍｇのジクロルメタンに溶解した。この溶液にアミノ
サイトロジン８５モル当量に相当する３、８ｍｇのＮ−
γ−マレイミドブチリルオキシサクシンイミド（ベーリ
ングダイアグノステイクス製、以下ＧＭＢＳという）の
ジクロルメタン溶液（濃度１（ｌＩＩｇ／ｍｌ）を加え
２５℃で２時間反応せしめた。反応混合物は分取用薄層
クロマトグラフィー（以下ＴＬＣという）により精製し
サイトロジンＳのＧＭＢＳ誘導体を得た。薄層クロマト
グラフィーの条件は以下のとおり：薄層プレイド；２ｍ
ｍシリカゲル６０Ｆ−２５４（メルク製）、展開溶媒；
メタノール：ジクロルメタン−１：４、Ｒｒ値：ＧＭＢ
ＳＲ導体（０，８２）、アミノサイトロジンＳ （０，
２９）。得られたＧＭＢＳ誘導体を薄層プレートより抽
出した後、抽出液を無水硫酸ナトリウムにより脱水し溶
媒を減圧蒸留することにより２．７ｍｇのサイトロジン
ＳのＧＭＢＳ誘導体を得た。
またさらに、ＧＭＢＳ誘導体の純度をＨＰＬＣにて分析
し、ついで精製を行った。分析に使用したカラム及び条
件は以下のとおりである。；カラム； ＳＳＣ−Ａｑｕ
ａｓｉｌ ＰＥ −２，４，６ｍ＋ｅＸ２５０ ｍ＋ｓ
（センシュウ科学）、溶媒；２．０％トリエチルアンモ
ニウムホスフェイト（ＴＥＡＰ、 ｐＨ３，０）中、ア
セトニトリルを０％−３０％直線グラジェント方式にて
３０分間かけて変化させ、アセトニトリル３０％の状態
をさらに３０分間継続する、流速；１ｍｌ／ｆｆ１ｉｎ
、保持時間；サイトロジン５３６分、ＧＭＢＳ誘導体３
８分および３８．６分。精製に使用したカラム及び条件
は以下のとおりである：カラム； ５ｅｎｓｈｕ Ｐａ
ｋ ＮＰ−３１８−４２５２，１０ｗＸ２５０ ｍ１１
（センシュウ科学）、溶媒；２．０％ＴＥＡＰ（ｐ１１
３．０）中アセトニトリルｌＯ％〜３０％直線グラジェ
ント方式にて２０分間かけて変化させアセトニトリル３
０％の状態をさらに１５分間継続後、同様に３０％〜１
００％５分間で変化させる、流速； ４ｍｌ／ａ＋ｉｎ
ｓ保持時間、ＧＭＢＳ誘導体２８分および２８．５分
。
し、ついで精製を行った。分析に使用したカラム及び条
件は以下のとおりである。；カラム； ＳＳＣ−Ａｑｕ
ａｓｉｌ ＰＥ −２，４，６ｍ＋ｅＸ２５０ ｍ＋ｓ
（センシュウ科学）、溶媒；２．０％トリエチルアンモ
ニウムホスフェイト（ＴＥＡＰ、 ｐＨ３，０）中、ア
セトニトリルを０％−３０％直線グラジェント方式にて
３０分間かけて変化させ、アセトニトリル３０％の状態
をさらに３０分間継続する、流速；１ｍｌ／ｆｆ１ｉｎ
、保持時間；サイトロジン５３６分、ＧＭＢＳ誘導体３
８分および３８．６分。精製に使用したカラム及び条件
は以下のとおりである：カラム； ５ｅｎｓｈｕ Ｐａ
ｋ ＮＰ−３１８−４２５２，１０ｗＸ２５０ ｍ１１
（センシュウ科学）、溶媒；２．０％ＴＥＡＰ（ｐ１１
３．０）中アセトニトリルｌＯ％〜３０％直線グラジェ
ント方式にて２０分間かけて変化させアセトニトリル３
０％の状態をさらに１５分間継続後、同様に３０％〜１
００％５分間で変化させる、流速； ４ｍｌ／ａ＋ｉｎ
ｓ保持時間、ＧＭＢＳ誘導体２８分および２８．５分
。
ＨＰＬＣの溶出液を５ＥＰ−ＰＡＫ （Ｃ，８）カート
リッジ（日本ウォーターズ社製）にかけ、サイトロジン
Ｓ誘導体を吸着せしめ、０．５％酢酸水溶液にて洗浄後
、０．５％酢酸−メタノール溶液にて溶出させる。溶出
液を回収、減圧乾固させＧＭＢＳ誘導体約３．２１１１
ｇを得た。この純度は再度ＨＰＬＣにて検定しその条件
は前述の分析条件に同じである。
リッジ（日本ウォーターズ社製）にかけ、サイトロジン
Ｓ誘導体を吸着せしめ、０．５％酢酸水溶液にて洗浄後
、０．５％酢酸−メタノール溶液にて溶出させる。溶出
液を回収、減圧乾固させＧＭＢＳ誘導体約３．２１１１
ｇを得た。この純度は再度ＨＰＬＣにて検定しその条件
は前述の分析条件に同じである。
さらに、ＨＰＬＣによって得た当該サイトロジンＳ誘導
体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（日本電子社製
ＪＭＳ−ＤＸ３００）によってその質量数を測定したと
ころ１２１５（Ｍ＋Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算
により求めた質量数とＭＳスペクトル測定時に使用する
チオグリセロールとの複合体の質量数であることを確認
した。また、誘導体の吸収スペクトルは４９Ｓｎｉ付近
においてアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保持し
ていた。
体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（日本電子社製
ＪＭＳ−ＤＸ３００）によってその質量数を測定したと
ころ１２１５（Ｍ＋Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算
により求めた質量数とＭＳスペクトル測定時に使用する
チオグリセロールとの複合体の質量数であることを確認
した。また、誘導体の吸収スペクトルは４９Ｓｎｉ付近
においてアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保持し
ていた。
一方、マレイミド基の導入確認は、アミノエタンチオー
ルを反応させ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣのスポット及びピー
クの位置が変化することによっても再度確認した。分析
に使用したＨＰＬＣのカラム及び条件は前述のとおりで
ある。保持時間ニアミノサイトロジンＳ １９．５分及
び２０．５分、ＣＭＢＳ誘導体アミノエタンチオール付
加物２３分及び２３．５分。（対象実験として出発物質
のアミノサイトロジンＳにアミノエタンチオールをＧＭ
ＢＳ誘導体と全く同条件下混合し、反応を試みた。その
結果アミノサイトロジンＳはチオールの混入によってＨ
ＰＬＣのピークに何ら影響はうけなかった。）実施例
３ １８ｍｇのラビット免疫グロブリン（シグマ製）を１ｍ
ｌの１ｍＭ、ＥＤＴＡを含む５０ｍ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）に溶解する。この溶液にｌＯμｇの１００
ｍＭＮ−ザクシンイミジル−８−アセチルチオアセテー
ト（ベーリングダイアグノステイクス製、以下５ＡＴＡ
という）ジメチルホルムアミド溶液を加え２５℃で２０
分間反応せしめた。上記反応混合液に５０μｇのＩＭ）
−リス塩酸溶液（ｐＨ７，８）を加え２５℃で５分間放
置した。しかるのち１ｍＭ。
ルを反応させ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣのスポット及びピー
クの位置が変化することによっても再度確認した。分析
に使用したＨＰＬＣのカラム及び条件は前述のとおりで
ある。保持時間ニアミノサイトロジンＳ １９．５分及
び２０．５分、ＣＭＢＳ誘導体アミノエタンチオール付
加物２３分及び２３．５分。（対象実験として出発物質
のアミノサイトロジンＳにアミノエタンチオールをＧＭ
ＢＳ誘導体と全く同条件下混合し、反応を試みた。その
結果アミノサイトロジンＳはチオールの混入によってＨ
ＰＬＣのピークに何ら影響はうけなかった。）実施例
３ １８ｍｇのラビット免疫グロブリン（シグマ製）を１ｍ
ｌの１ｍＭ、ＥＤＴＡを含む５０ｍ Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）に溶解する。この溶液にｌＯμｇの１００
ｍＭＮ−ザクシンイミジル−８−アセチルチオアセテー
ト（ベーリングダイアグノステイクス製、以下５ＡＴＡ
という）ジメチルホルムアミド溶液を加え２５℃で２０
分間反応せしめた。上記反応混合液に５０μｇのＩＭ）
−リス塩酸溶液（ｐＨ７，８）を加え２５℃で５分間放
置した。しかるのち１ｍＭ。
ＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で
事前に平衡化したＰ Ｄ −１０カラム（ファルマシア
製）で反応混合物を分取することにより免疫グロブリン
の５ＡＴＡ誘導体を得た。この５ＡＴＡ誘導体に５ＡＴ
Ａに対し５０モル当量相当の０．２５ｍＭ。
事前に平衡化したＰ Ｄ −１０カラム（ファルマシア
製）で反応混合物を分取することにより免疫グロブリン
の５ＡＴＡ誘導体を得た。この５ＡＴＡ誘導体に５ＡＴ
Ａに対し５０モル当量相当の０．２５ｍＭ。
ＥＤＴＡを含む０．５ ｍＭヒドロキシルアミン水溶液
（ｐＨ７，５）を加え２５℃で１時間反応させることに
より脱アセチル化を行った。ＳＨ基を導入した免疫グロ
ブリンを含む上記水溶液に実施例２で得られたＧＭＢＳ
誘導体をＳＨ基に対して１０モル当量ジメチルホルムア
ミド２０μｇに溶かした溶液を加え５℃で１２時間反応
させた。反応後１ｍＭのＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７，５）で平衡化したセファデックスＧ−
２５（ファルマシア製）の２０ｍｍ Ｘ ４００ ｌｌ
１ｍカラムを用いて球状蛋白質１６万に相当する両分を
分取した。蛋白質及びサイトロジンＳの両分を知るため
に溶出液を２８０ｎｏ＋と４９５ｎｍでモニターした。
（ｐＨ７，５）を加え２５℃で１時間反応させることに
より脱アセチル化を行った。ＳＨ基を導入した免疫グロ
ブリンを含む上記水溶液に実施例２で得られたＧＭＢＳ
誘導体をＳＨ基に対して１０モル当量ジメチルホルムア
ミド２０μｇに溶かした溶液を加え５℃で１２時間反応
させた。反応後１ｍＭのＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７，５）で平衡化したセファデックスＧ−
２５（ファルマシア製）の２０ｍｍ Ｘ ４００ ｌｌ
１ｍカラムを用いて球状蛋白質１６万に相当する両分を
分取した。蛋白質及びサイトロジンＳの両分を知るため
に溶出液を２８０ｎｏ＋と４９５ｎｍでモニターした。
得られたサイトロジンＳと免疫グロブリンの複合体は透
析により脱塩の後凍結乾燥し２０１Ｉ１ｇを得た。
析により脱塩の後凍結乾燥し２０１Ｉ１ｇを得た。
サイトロジンＳの特異的吸収４９５ｎｏ＋と複合体の乾
燥重量から免疫グロブリン１分子あたりの結合サイトロ
ジンＳ量を計算したところ免疫グロブリン１分子あたり
５個のサイトロジンＳが結合していた。さらに５ＡＴＡ
の量を免疫グロブリンに対して増やすことにより１２個
のサイトロジンＳを結合させることができた。
燥重量から免疫グロブリン１分子あたりの結合サイトロ
ジンＳ量を計算したところ免疫グロブリン１分子あたり
５個のサイトロジンＳが結合していた。さらに５ＡＴＡ
の量を免疫グロブリンに対して増やすことにより１２個
のサイトロジンＳを結合させることができた。
第１図に免疫グロブリン１分子あたり約１２個のサイト
ロジンＳが結合した複合体のＵＶスペクトルを示す。複
合体のＵＶスペクトルはサイトロジンＳの結合比が増す
につれて、サイトロジンＳの特異吸収部分が増大してい
く。
ロジンＳが結合した複合体のＵＶスペクトルを示す。複
合体のＵＶスペクトルはサイトロジンＳの結合比が増す
につれて、サイトロジンＳの特異吸収部分が増大してい
く。
実施例 ４
サイトロジン３５ｍｇをメタノール１ｍｌに溶解した。
この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当す
るγ−アミノ酪酸２．６ａ＋ｇのメタノール溶液（濃度
ｌｌ１ｇ／ｍｌ）を加えトリエチルアミンでｐＨを８に
調節した後、３モル当量に相当する１、４ｍｇのナトリ
ウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４ｈｒ反
応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて生成物
の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、精製を
行った。実施例２と同一条件におけるＴＬＣによるＲｆ
値は、サイトロジンＳ Ｏ，５７、γ−アミノ醋酸誘導
体０．２８であった。
るγ−アミノ酪酸２．６ａ＋ｇのメタノール溶液（濃度
ｌｌ１ｇ／ｍｌ）を加えトリエチルアミンでｐＨを８に
調節した後、３モル当量に相当する１、４ｍｇのナトリ
ウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４ｈｒ反
応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて生成物
の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、精製を
行った。実施例２と同一条件におけるＴＬＣによるＲｆ
値は、サイトロジンＳ Ｏ，５７、γ−アミノ醋酸誘導
体０．２８であった。
実施例２と同一条件下でのＨＰＬＣによる分析における
保持時間は、サイトロジンＳ３６分、γ−アミノ酪酸誘
導体２９分であった。実施例２と同様の条件下でＨＰＬ
Ｃによって精製した結果、γ−アミノ酪酸誘導体約１．
５１１１ｇを得た。
保持時間は、サイトロジンＳ３６分、γ−アミノ酪酸誘
導体２９分であった。実施例２と同様の条件下でＨＰＬ
Ｃによって精製した結果、γ−アミノ酪酸誘導体約１．
５１１１ｇを得た。
さらに当該誘導体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（
ＪＭＳ −ＤＸ３００）によってその質；数を測定した
ところ、１０２８ （Ｍ＋Ｈ” ）なる質量スペクトル
を得、計算により求めた質量数との一致を観た。
ＪＭＳ −ＤＸ３００）によってその質；数を測定した
ところ、１０２８ （Ｍ＋Ｈ” ）なる質量スペクトル
を得、計算により求めた質量数との一致を観た。
また、誘導体の吸収スペクトルは４９５止付近にサイト
ロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保存
していた。
ロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保存
していた。
実施例 ５
サイトロジンＳ γ−アミノ酪酸誘導体２．５ｍｇをＤ
ＭＦに溶解しく濃度５ｋｇ／ｍｌ）、これにサイトロジ
ンＳ誘導体の等モル当量に相当するジシクロヘキシジル
カルボジイミド５１５μｇのＤＭＦ溶液（濃度５０＋ｎ
ｇ／ｍｌ）を加える。室温でｌｈｒ反応させた。
ＭＦに溶解しく濃度５ｋｇ／ｍｌ）、これにサイトロジ
ンＳ誘導体の等モル当量に相当するジシクロヘキシジル
カルボジイミド５１５μｇのＤＭＦ溶液（濃度５０＋ｎ
ｇ／ｍｌ）を加える。室温でｌｈｒ反応させた。
ラビット免疫グロブリン（シグマ製） ２０ｍｇを５０
ｍ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） １ ｍｌに溶解し
、これに上記のサイトロジンＳ誘導体ＤＭＦ溶液を加え
室温で３０分間反応させる。ラビット免疫グロブリンに
対しサイトロジンＳ γ−アミノ酪酸誘導体は２０モル
当量に相当する。次いで、素速く１Ｍトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７，８）を加え攪拌して１０分間放置する。これ
を５０ｍＭリン酸緩衝液であらかじめ平衡化しであるＰ
Ｄ−１０カラム（ファルマシア製）にかけ分離精製を行
った。
ｍ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） １ ｍｌに溶解し
、これに上記のサイトロジンＳ誘導体ＤＭＦ溶液を加え
室温で３０分間反応させる。ラビット免疫グロブリンに
対しサイトロジンＳ γ−アミノ酪酸誘導体は２０モル
当量に相当する。次いで、素速く１Ｍトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７，８）を加え攪拌して１０分間放置する。これ
を５０ｍＭリン酸緩衝液であらかじめ平衡化しであるＰ
Ｄ−１０カラム（ファルマシア製）にかけ分離精製を行
った。
実施例 ６
サイトロジンＳ５ａ＋ｇをメタノール１ｍｌに溶解した
。この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当
するリジン３．３ｒ！Ｉｇの１モル酢酸水溶液（濃度１
０ｍｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する１、４＋ｎｇめ
ナトリウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４
ｈｒ反応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて
生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、
精製を行った。実施例２と同一条件におけるＴＬＣによ
るリジン誘導体のＲｆ’値は０．２０であった。実施例
２と同一条件下でのＨＰＬＣによる分析におけるリジン
誘導体の保持時間は２７分および２８分であった。実施
例２と同様の条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、
リジン誘導体的２．６ｍｇを得た。
。この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当
するリジン３．３ｒ！Ｉｇの１モル酢酸水溶液（濃度１
０ｍｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する１、４＋ｎｇめ
ナトリウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４
ｈｒ反応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて
生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、
精製を行った。実施例２と同一条件におけるＴＬＣによ
るリジン誘導体のＲｆ’値は０．２０であった。実施例
２と同一条件下でのＨＰＬＣによる分析におけるリジン
誘導体の保持時間は２７分および２８分であった。実施
例２と同様の条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、
リジン誘導体的２．６ｍｇを得た。
さらに当該誘導体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（
Ｊ ＭＳ −ＤＸ３００）によってその質量数を測定し
たところ、１０７１ （Ｍ＋Ｈ）なる質量スペクトルを
得、計算により求めた質量数との一致を観た。
Ｊ ＭＳ −ＤＸ３００）によってその質量数を測定し
たところ、１０７１ （Ｍ＋Ｈ）なる質量スペクトルを
得、計算により求めた質量数との一致を観た。
また、誘導体の吸収スペクトルは４９５ｎｍ付近にサイ
トロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保
存していた。
トロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく保
存していた。
実施例 ７
サイトロジン５５ｍｇをメタノール１ｍｌに溶解した。
この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当す
るアミノエタンチオール１．７ｍｇのメタノール溶液（
濃度ｌｌｌ１ｇ／ｍりと３モル当量に相当する１、４ｍ
ｇのナトリウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で
２４ｈｒ反応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣ
にて生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析
し、精製を行った。実施例２と同一条件下におけるＴＬ
Ｃによるアミノエタンチオール誘導体のＲｆ値は０．２
５であった。実施例２と同一条件下でのＨＰＬＣによる
分析におけるアミノエタンチオール誘導体の保持時間は
２８分であった。実施例２と同様の条件下でＨＰＬＣに
よって精製した結果、アミノエタンチオール誘導体約１
．８＋ｎｇを得た。
るアミノエタンチオール１．７ｍｇのメタノール溶液（
濃度ｌｌｌ１ｇ／ｍりと３モル当量に相当する１、４ｍ
ｇのナトリウムシアノボロハイドライドを加え２５℃で
２４ｈｒ反応せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣ
にて生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析
し、精製を行った。実施例２と同一条件下におけるＴＬ
Ｃによるアミノエタンチオール誘導体のＲｆ値は０．２
５であった。実施例２と同一条件下でのＨＰＬＣによる
分析におけるアミノエタンチオール誘導体の保持時間は
２８分であった。実施例２と同様の条件下でＨＰＬＣに
よって精製した結果、アミノエタンチオール誘導体約１
．８＋ｎｇを得た。
さらに当該誘導体をＦ Ａ Ｂ ／ＭＳスペクトロメー
ター（ＪＭＳ−ＤＸ３°００）によってその質量数を測
定したところ、１１００２（＋Ｈ）なる質量スペクトル
を得、計算により求めた質量数との一致を観た。
ター（ＪＭＳ−ＤＸ３°００）によってその質量数を測
定したところ、１１００２（＋Ｈ）なる質量スペクトル
を得、計算により求めた質量数との一致を観た。
また、誘導体の吸収スペクトルは４９５ｎｍ付近にアン
スラサイクリン環の特異吸収をよく保存していた。
スラサイクリン環の特異吸収をよく保存していた。
一方、−３Ｈ基の導入確認はＮ−エチルマレイミドを反
応させ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣのスポット及びピークの位
置が変化することによっても再度行った。（アミノエタ
ンチオール誘導体では観測される変化がサイトロジンＳ
及びアミノサイトロジンＳでは観測されなかった。） 実施例 ８ サイトロジン３５ｍｇをメタノール１ｍｌに溶解した。
応させ、ＴＬＣ及びＨＰＬＣのスポット及びピークの位
置が変化することによっても再度行った。（アミノエタ
ンチオール誘導体では観測される変化がサイトロジンＳ
及びアミノサイトロジンＳでは観測されなかった。） 実施例 ８ サイトロジン３５ｍｇをメタノール１ｍｌに溶解した。
この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当す
るシスティン２．７ｍｇのメタノール溶液（濃度１ｍｇ
／ｍｌ＞と３モル当量に相当する１、４ｍｇのナトリウ
ムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４ｈｒ反応
せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて生成物の
有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、精製を行
った。実施例２と同一条件下におけるＴＬＣによるシス
ティン誘導体のＲｆ値は０．３５であった。実施例２と
同一条件下でのＨＰＬＣによる分析におけるシスティン
誘導体の保持時間は３２分であった。実施例２と同様の
条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、システィン誘
導体約１．８０ｇを得た。
るシスティン２．７ｍｇのメタノール溶液（濃度１ｍｇ
／ｍｌ＞と３モル当量に相当する１、４ｍｇのナトリウ
ムシアノボロハイドライドを加え２５℃で２４ｈｒ反応
せしめた。反応で得られた混合液をＴＬＣにて生成物の
有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度を分析し、精製を行
った。実施例２と同一条件下におけるＴＬＣによるシス
ティン誘導体のＲｆ値は０．３５であった。実施例２と
同一条件下でのＨＰＬＣによる分析におけるシスティン
誘導体の保持時間は３２分であった。実施例２と同様の
条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、システィン誘
導体約１．８０ｇを得た。
さらに当該誘導体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（
日本電子社製）によってその質量数を測定したところ、
１１０４Ｂ（＋Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算によ
り求めた質量数との一致を観た。
日本電子社製）によってその質量数を測定したところ、
１１０４Ｂ（＋Ｈ）なる質量スペクトルを得、計算によ
り求めた質量数との一致を観た。
また、−ＳＨ基の導入確認は実施例７と同様にＮ−エチ
ルマレイミドを反応させ、スポット及びピーク（ＴＬＣ
及びＨＰＬＣ）の位置が変化することによっても再度確
認した。
ルマレイミドを反応させ、スポット及びピーク（ＴＬＣ
及びＨＰＬＣ）の位置が変化することによっても再度確
認した。
実施例 ９
１１ｎｇのラビット免疫グロブリン（シグマ製）を１ｍ
ｌの１ｍＭ、ＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）に溶解する。この溶液にラビット免疫グロブ
リンに対して１０モル当量に相当するＮ−γ−マレイミ
ドブチリルオキシサクシンイミド（ベーリングダイアグ
ノステイクス製以下ＧＭＢＳ）１９１μｇのＤＭＦ溶液
（濃度５０＋ｎｇ／ｍｌ）を加え、２５℃で２ｈｒ反応
せしめた。上記反応液に５０μｇの１Ｍトリス塩酸緩衝
液（ａｌｌ ７．８）を加え２５℃で５分間放置した。
ｌの１ｍＭ、ＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，５）に溶解する。この溶液にラビット免疫グロブ
リンに対して１０モル当量に相当するＮ−γ−マレイミ
ドブチリルオキシサクシンイミド（ベーリングダイアグ
ノステイクス製以下ＧＭＢＳ）１９１μｇのＤＭＦ溶液
（濃度５０＋ｎｇ／ｍｌ）を加え、２５℃で２ｈｒ反応
せしめた。上記反応液に５０μｇの１Ｍトリス塩酸緩衝
液（ａｌｌ ７．８）を加え２５℃で５分間放置した。
しかる後１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（
ｐＨ７，５）であらかじめ平衡化したＰＤ−１０カラム
（ファルマシア製）で反応混合物を分取することにより
ラビット免疫グロブリンのマレイミド基導入型誘導体を
得た。
ｐＨ７，５）であらかじめ平衡化したＰＤ−１０カラム
（ファルマシア製）で反応混合物を分取することにより
ラビット免疫グロブリンのマレイミド基導入型誘導体を
得た。
先の実施例７で得られたーＳＨＳ環基導入イトロジンＳ
誘導体をこのマレイミド基導入型ラビット免疫グロブリ
ンと反応せしめた。
誘導体をこのマレイミド基導入型ラビット免疫グロブリ
ンと反応せしめた。
ラビット免疫グロブリンに導入されたマレイミド基の２
モル当量にあたるサイトロジンＳアミノエタンチオール
誘導体１．５ｎｇをＤＭＦに溶解（濃度１０１００ＩＩ
１ Ｌ、先のマレイミド基導入型ラビット免疫グロブリ
ン水溶液に加え、５℃で１２ｈｒ反応せしめた。
モル当量にあたるサイトロジンＳアミノエタンチオール
誘導体１．５ｎｇをＤＭＦに溶解（濃度１０１００ＩＩ
１ Ｌ、先のマレイミド基導入型ラビット免疫グロブリ
ン水溶液に加え、５℃で１２ｈｒ反応せしめた。
実施例 ｌ口
サイトロジンＳ５ｎｇをメタノール１ｍｌに溶解した。
この溶液にサイトロジンＳに対して６モル当量に相当す
るグリシンエチルエステル３．２ｍｇのメタノール溶液
（濃度ｌｌｌ１ｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する１、
４ａ＋ｇのナトリウムシアノボロハイドライドを加え２
５℃で２４ｈ「反応せしめた。反応で得られた混合液を
ＴＬＣにて生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度
を分析し、精製を行った。実施例２と同一条件における
ＴＬＣによるグリシンエチルエステル誘導体のＲｆ値は
０．３４であった。実施例２と同一条件下でのＨＰＬＣ
による分析におけるグリシンエチルエステル誘導体の保
持時間は３２分および３３分であった。実施例２と同様
の条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、グリシンエ
チルエステル誘導体約１．４ＩＱｇを得た。
るグリシンエチルエステル３．２ｍｇのメタノール溶液
（濃度ｌｌｌ１ｇ／ｍｌ）と３モル当量に相当する１、
４ａ＋ｇのナトリウムシアノボロハイドライドを加え２
５℃で２４ｈ「反応せしめた。反応で得られた混合液を
ＴＬＣにて生成物の有無を確認した後ＨＰＬＣにて純度
を分析し、精製を行った。実施例２と同一条件における
ＴＬＣによるグリシンエチルエステル誘導体のＲｆ値は
０．３４であった。実施例２と同一条件下でのＨＰＬＣ
による分析におけるグリシンエチルエステル誘導体の保
持時間は３２分および３３分であった。実施例２と同様
の条件下でＨＰＬＣによって精製した結果、グリシンエ
チルエステル誘導体約１．４ＩＱｇを得た。
さらに当該誘導体をＦＡＢ／ＭＳスペクトロメーター（
ＪＭＳ−ＤＸ３００）によってその質量数を測定したと
ころ、１１０２８（十Ｈ）なる質量スペクトルを得、計
算により求めた質量数との一致を観た。
ＪＭＳ−ＤＸ３００）によってその質量数を測定したと
ころ、１１０２８（十Ｈ）なる質量スペクトルを得、計
算により求めた質量数との一致を観た。
また、誘導体の吸収スペクトルは４９５ｎ１１付近にサ
イトロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく
保存していた。
イトロジンＳのアンスラサイクリン環の特異吸収をよく
保存していた。
実施例 １１
７〜ＩＯ週令の雌性Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ ｃマウスに、
２５μｇの精製ヒトＣＥＡを、フロイントの完全アジュ
バントとともに腹腔内に投与した。１０週間後、２５μ
ｇのＣＥＡを生理食塩水に溶かし、静脈内に投与した。
２５μｇの精製ヒトＣＥＡを、フロイントの完全アジュ
バントとともに腹腔内に投与した。１０週間後、２５μ
ｇのＣＥＡを生理食塩水に溶かし、静脈内に投与した。
投与後３日日に肺臓を摘出し、牌細胞と非産生型ミエロ
ーマ細胞Ｘ８３− Ａｇ ８．８５３とを融合した。細
胞融合およびそれにつづく培養・クローニングの方法は
、基本的にＯｌら（０１Ｖ、 Ｔ、＆Ｈｅｒｚｅｎｂｅ
ｒｇ Ｌ、 Ａ、、 ５ｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓｉｎ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｉ■ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｂ
、 Ｂ、 Ｍｌｓｈｅｌｌ ＆Ｓ、 Ｍ、 Ｓｈｉｌｇ
ｉ Ｅｄｓ、 Ｐ２Ｓ５． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ
、。
ーマ細胞Ｘ８３− Ａｇ ８．８５３とを融合した。細
胞融合およびそれにつづく培養・クローニングの方法は
、基本的にＯｌら（０１Ｖ、 Ｔ、＆Ｈｅｒｚｅｎｂｅ
ｒｇ Ｌ、 Ａ、、 ５ｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓｉｎ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｉ■ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｂ
、 Ｂ、 Ｍｌｓｈｅｌｌ ＆Ｓ、 Ｍ、 Ｓｈｉｌｇ
ｉ Ｅｄｓ、 Ｐ２Ｓ５． Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ
、。
５ａｎｌ’ｒａｎｃｉｓｃｏ １９８０）の方法に準じ
た。牌細胞とミエローマ細胞の割合を１０＝１とし軽く
遠心しペレットにした後、４２．５％ポリエチレングリ
コール（Ｍ、 Ｖ、 ２，０００．１５％ジメチルスル
ホキシドを含む）の０．５ｍｌを滴加、３７℃の条件下
で２分間ゆっくり攪拌した。その後ＲＰＭＩ培地にて２
０倍希釈した。
た。牌細胞とミエローマ細胞の割合を１０＝１とし軽く
遠心しペレットにした後、４２．５％ポリエチレングリ
コール（Ｍ、 Ｖ、 ２，０００．１５％ジメチルスル
ホキシドを含む）の０．５ｍｌを滴加、３７℃の条件下
で２分間ゆっくり攪拌した。その後ＲＰＭＩ培地にて２
０倍希釈した。
遠心後１５％牛脂児血清加ＲＰＭＴ−１６４０培地にて
懸濁し、９６穴マイクロタイタープレートに５×１０５
細胞ずつ分配した。３７°Ｃで一夜培養後ＨＡＴ培地（
１００μＭヒポキサンチン、４ Ｘ １０−４μＭアミ
ノプテリン、１．６ ＸＩＯ’チミジン）を−滴ずつ加
えた。このＨＡＴ培地によるハイブリドーマの選択は細
胞融合後２． ３． ５． ７．１０．１３日ｎ−各式
の半量の培地を新鮮なＨＡＴ培地と交換することにより
行った。培養上清の抗ＣＥＡ活性を、ＲＩＡあるいはＥ
ＩＡにより検定し、活性を示した細胞を更に大きな培養
系に移すか、あるいは限界希釈法によりクローン化した
。このようにして得られた融合細胞を前もって０．５ｍ
ｌのテトラメチルペンタデカンで処理された同系マウス
の腹腔内に移植すると、１〜２週間後には数ｍｌの腹水
が得られ、この中には、５〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度の均
一なモノクローナル抗体が含まれていた。
懸濁し、９６穴マイクロタイタープレートに５×１０５
細胞ずつ分配した。３７°Ｃで一夜培養後ＨＡＴ培地（
１００μＭヒポキサンチン、４ Ｘ １０−４μＭアミ
ノプテリン、１．６ ＸＩＯ’チミジン）を−滴ずつ加
えた。このＨＡＴ培地によるハイブリドーマの選択は細
胞融合後２． ３． ５． ７．１０．１３日ｎ−各式
の半量の培地を新鮮なＨＡＴ培地と交換することにより
行った。培養上清の抗ＣＥＡ活性を、ＲＩＡあるいはＥ
ＩＡにより検定し、活性を示した細胞を更に大きな培養
系に移すか、あるいは限界希釈法によりクローン化した
。このようにして得られた融合細胞を前もって０．５ｍ
ｌのテトラメチルペンタデカンで処理された同系マウス
の腹腔内に移植すると、１〜２週間後には数ｍｌの腹水
が得られ、この中には、５〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度の均
一なモノクローナル抗体が含まれていた。
このようにして得られたＣＥＡに対するモノクローナル
抗体（ＭＡ２０４）とサイトロジンＳの複合体を実施例
３と同様の方法で作成した。
抗体（ＭＡ２０４）とサイトロジンＳの複合体を実施例
３と同様の方法で作成した。
サイトロジンＳと免疫グロブリン曵合体の抗癌作用のテ
スト 培地としてＲＰ Ｍ Ｉ ｌＢ４Ｏ−１０％牛脂児血請
中で継代培養した腫瘍細胞株、Ｌ １２１０ （５Ｘ
１０４細胞／ｍｌ） ２００μｇを９６穴ミクロプレ
ート上に分配する（ＩＸ１０４細胞／ウェル）。濃度を
、凋整したｌＯμｇのサイトロジンＳ （ＣＹＴ）およ
びサイトロジンＳ−免疫グロブリン曳合体（ＣＹＴ −
Ｒａｂ ＩｇＧ）をこの細胞培養液に加え３７℃で１８
時間培養した。
スト 培地としてＲＰ Ｍ Ｉ ｌＢ４Ｏ−１０％牛脂児血請
中で継代培養した腫瘍細胞株、Ｌ １２１０ （５Ｘ
１０４細胞／ｍｌ） ２００μｇを９６穴ミクロプレ
ート上に分配する（ＩＸ１０４細胞／ウェル）。濃度を
、凋整したｌＯμｇのサイトロジンＳ （ＣＹＴ）およ
びサイトロジンＳ−免疫グロブリン曳合体（ＣＹＴ −
Ｒａｂ ＩｇＧ）をこの細胞培養液に加え３７℃で１８
時間培養した。
その後２５μｇのトリチウム標識チミジンを０．５μＣ
Ｉ／ウエルずつ加え３７℃で６時間さらに培養した。し
かるのち細胞は細胞採取器によりフィルター上に集めら
れ、乾燥させたのち液体シンチレーションカウンターに
より標識チミジンの細胞へのとりこみ量を測定し細胞の
ＤＮＡ合成能を求め比較した。結果を第２図に示す。第
２図からＣＹＴ−Ｒａｂ ＩｇＧがＣＹＴの抗癌作用を
ほぼ維持していることがわかる。同様の方法てＣＥＡ産
出細胞株であるＣｏ１ｏ ２０５についてサイトロジン
Ｓ−抗ＣＥＡ単クローン抗体複合体の効果を調べた。結
果を第３図に示す。
Ｉ／ウエルずつ加え３７℃で６時間さらに培養した。し
かるのち細胞は細胞採取器によりフィルター上に集めら
れ、乾燥させたのち液体シンチレーションカウンターに
より標識チミジンの細胞へのとりこみ量を測定し細胞の
ＤＮＡ合成能を求め比較した。結果を第２図に示す。第
２図からＣＹＴ−Ｒａｂ ＩｇＧがＣＹＴの抗癌作用を
ほぼ維持していることがわかる。同様の方法てＣＥＡ産
出細胞株であるＣｏ１ｏ ２０５についてサイトロジン
Ｓ−抗ＣＥＡ単クローン抗体複合体の効果を調べた。結
果を第３図に示す。
試験薬剤の使用量は次のとおりである。
試 料 薬 剤 ／抗体：結合モル比ＣＹＴ
Ｏ，２ｕ ｇ／ｍ１ＣＹＴ−ＨＡ ２０４
’ ０．２ｕ ｇ” ／ ６．３μｇ／ｍｌ：２：
ＩＣＹＴ−Ｒａｂ１ｇＧ Ｏ，２μｇ＊／１２．５μ
ｇ／ｍｌ；２：ＩＨＡ ２０４’
０．５ｍｇ／ｍｌ細 胞 Ｃｏ１ｏ ２Ｇ５．
５ Ｘ ｔｏ’ ／ウェル＊ ＨＡ ２０４は抗ＣＥ
Ａ型クローン抗体である。
Ｏ，２ｕ ｇ／ｍ１ＣＹＴ−ＨＡ ２０４
’ ０．２ｕ ｇ” ／ ６．３μｇ／ｍｌ：２：
ＩＣＹＴ−Ｒａｂ１ｇＧ Ｏ，２μｇ＊／１２．５μ
ｇ／ｍｌ；２：ＩＨＡ ２０４’
０．５ｍｇ／ｍｌ細 胞 Ｃｏ１ｏ ２Ｇ５．
５ Ｘ ｔｏ’ ／ウェル＊ ＨＡ ２０４は抗ＣＥ
Ａ型クローン抗体である。
＊ ＣＹＴ活性相当量（ＣＹＴｅｑ）を示す。
ＨＡ ２０４はＲａｂ ＩｇＧに比べて選択特異性が大
きいので、第３図においてＣＹＴ−ＭＡ ２０４がＣＹ
Ｔ−Ｒａｂ ＩｇＧより細胞増殖抑制効果が大きい。こ
のことは本発明のサイトロジンＳ−免疫グロブリン複合
体が癌細胞へ選択特異的に作用しうろことを示唆してい
る。
きいので、第３図においてＣＹＴ−ＭＡ ２０４がＣＹ
Ｔ−Ｒａｂ ＩｇＧより細胞増殖抑制効果が大きい。こ
のことは本発明のサイトロジンＳ−免疫グロブリン複合
体が癌細胞へ選択特異的に作用しうろことを示唆してい
る。
アクラシノマイシン免疫グロブリン複合体との比較
本発明に用いたサイトロジンＳと構造が類似した次式を
有するアクラシノマイシンＡ の免疫グロブリンとの睨合体を、実施例３に示した方法
により、比較のため作成したところ、サイトロジンＳが
抗体１分子あたり５〜１２個付加することができるのに
対しアクラシノマイシンは２分子付加するにとどまった
。両抗体複合体のＬ １２１０に対するＤＮＡ合成抑制
効果をトリチウムで標識チミジンの細胞内へのとりこみ
量で測定した。結果を第４図に示す。第４図からサイト
ロジン８１Ｍ合体の細胞に対する活性がアクラシノマイ
シン複合体のものより高いことがわかった。
有するアクラシノマイシンＡ の免疫グロブリンとの睨合体を、実施例３に示した方法
により、比較のため作成したところ、サイトロジンＳが
抗体１分子あたり５〜１２個付加することができるのに
対しアクラシノマイシンは２分子付加するにとどまった
。両抗体複合体のＬ １２１０に対するＤＮＡ合成抑制
効果をトリチウムで標識チミジンの細胞内へのとりこみ
量で測定した。結果を第４図に示す。第４図からサイト
ロジン８１Ｍ合体の細胞に対する活性がアクラシノマイ
シン複合体のものより高いことがわかった。
第１図はサイトロジンＳ−免疫グロブリン曳合体のＵＶ
スペクトルを示す。 第２図は、サイトロジンＳ （ＣＹＴ）およびサイトロ
ジンＳ−ラビット免疫グロブリン複合体（ＣＹＴ −Ｒ
ａｂ ＩｇＧ）のＬ １２１０細胞に対する細胞増殖抑
制効果を示すグラフである。 第３図はサイトロジンＳ （ＣＹＴ） 、サイトロジン
５−ＭＡ２０４免疫複合体（ＣＹＴ−ＭＡ２０４）、サ
イトロジンＳ−ラビット免疫グロブリン（ＣＹＴ−Ｒａ
ｂ ＩｇＧ） ＨＡ ２０４およびＣＹＴ−ＭＡ ２０
４と過剰のＨＡ ２０４の混合物のＣｏ１ｏ ２０５細
胞株にする細胞増殖抑制効果を示すグラフである。 第４図は、サイトロジンＳ１サイトロジンＳ−免疫グロ
ブリン凌合体、アクラシノマイシンおよびアクラシノマ
イシン免疫グロブリン複合体のＬ １２１０細胞におけ
るトリチウムチミジンの取込率を示すグラフである。
スペクトルを示す。 第２図は、サイトロジンＳ （ＣＹＴ）およびサイトロ
ジンＳ−ラビット免疫グロブリン複合体（ＣＹＴ −Ｒ
ａｂ ＩｇＧ）のＬ １２１０細胞に対する細胞増殖抑
制効果を示すグラフである。 第３図はサイトロジンＳ （ＣＹＴ） 、サイトロジン
５−ＭＡ２０４免疫複合体（ＣＹＴ−ＭＡ２０４）、サ
イトロジンＳ−ラビット免疫グロブリン（ＣＹＴ−Ｒａ
ｂ ＩｇＧ） ＨＡ ２０４およびＣＹＴ−ＭＡ ２０
４と過剰のＨＡ ２０４の混合物のＣｏ１ｏ ２０５細
胞株にする細胞増殖抑制効果を示すグラフである。 第４図は、サイトロジンＳ１サイトロジンＳ−免疫グロ
ブリン凌合体、アクラシノマイシンおよびアクラシノマ
イシン免疫グロブリン複合体のＬ １２１０細胞におけ
るトリチウムチミジンの取込率を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｘは式−ＮＨ＿２、−ＮＨ−Ｒ＾１−ＮＨ＿２、
−ＮＨ−Ｒ＾１−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｒ＾１−ＳＨ、▲
数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼を有す る基（式中Ｒ＾１は任意の置換基で置換されていても良
い２価の炭化水素基、Ｒ＾２は２価の炭化水素基、Ｒ＾
３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは
１〜１５の整数を示す）を示す〕で表わされるサイトロ
ジンＳ誘導体及びその塩。 ２）式中Ｒ＾３がＲ＾１を示すかまたは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼を有する基（式中 Ｒ＾４は２価の炭化水素基を示す）である特許請求の範
囲第１項記載のサイトロジンＳ誘導体。 ３）Ｒ＾２がプロピレン基であり、Ｒ＾４がメチレン基
である特許請求の範囲第２項記載のサイトロジンＳ誘導
体。 ４）ｎが５〜１２である特許請求の範囲第１項〜第３項
のいずれかの項に記載のサイトロジンＳ誘導体。 ５）ＩｇＧが癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対する抗体の残
基である特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれかの項
に記載のサイトロジンＳ誘導体。 ６）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｘは式−ＮＨ＿２、−ＮＨ−Ｒ＾１−ＮＨ＿２、
▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼を有す る基（式中Ｒ＾１は任意の置換基で置換されていても良
い２価の炭化水素基、Ｒ＾２は２価の炭化水素基、Ｒ＾
３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは
１〜１５の整数を示す）を示す〕で表わされるサイトロ
ジンＳ誘導体を製造するにあたり、式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するサイトロジンＳをアンモニウム塩またはＮＨ＿
２−Ｒ＾１−ＮＨ＿２（式中Ｒ＾１は前述したものと同
一である）で表わされる化合物の存在下でアルカリ金属
シアノボロハイドライドで還元して前記式（ I ）にお
いてＸが−ＮＨ＿２または−ＮＨ−Ｒ＾１−ＮＨ＿２で
あるサイトロジンＳ誘導体を製造し、必要により得られ
た生成物を式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中Ｒ＾２は前述したものと同一である）を有するマ
レイミド化合物と反応させて式（ I ）において ▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼ であるサイトロジンＳ誘導体を製造し、さらに必要によ
り得られた生成物を式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中Ｒ＾４は２価の炭化水素基を示し、ＩｇＧは前述
したものと同一であり、ｎ′は１〜２０の整数を示す）
を有するチオール化免疫グロブリンと反応させて式（
I ）においてＸが ▲数式、化学式、表等があります▼である サイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とする前記
式（ I ）を有するサイトロジンＳ誘導体の製造法。 ７）式中Ｒ＾３が ▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第６項に記載のサイトロジンＳ誘
導体の製造法。 ８）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｘは−ＮＨ−Ｒ＾１−ＳＨまたは ▲数式、化学式、表等があります▼を有す る基（式中Ｒ＾１は任意の置換基で置換されていても良
い２価の炭化水素基、Ｒ＾３は２価の有機基、ＩｇＧは
免疫グロブリン残基、ｎは１〜１５の整数を示す）を示
す〕で表わされるサイトロジンＳ誘導体を製造するにあ
たり、式（II）▲数式、化学式、表等があります▼（I
I） を有するサイトロジンＳをＮＨ＿２−Ｒ＾１−ＳＨ（式
中Ｒ＾１は前述したものと同一である）で表わされる化
合物の存在下でアルカリ金属シアノボロハイドライドで
還元して前記式（ I ）においてＸが−ＮＨ−Ｒ＾１−
ＳＨであるサイトロジンＳ誘導体を製造し、必要により
得られた生成物を式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） （式中Ｒ＾２およびＩｇＧは前述したものと同一であり
、ｎ′は１〜２０の整数を示す）を有するマレイミド化
免疫グロブリンと反応させて、式（ I ）においてＸが ▲数式、化学式、表等があります▼ であるサイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とす
る前記式（ I ）を有するサイトロジンＳ誘導体の製造
法。 ９）Ｒ＾３が ▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第８項に記載のサイトロジンＳ誘
導体の製造法。 １０）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｘは−ＮＨ−Ｒ＾１−ＣＯＯＨまたは▲数式、化
学式、表等があります▼を有す る基（式中Ｒ＾１は任意の置換基で置換されていても良
い２価の炭化水素基、Ｒ＾３は２価の有機基、ＩｇＧは
免疫グロブリン残基、ｎは１〜１５の整数を示す）を示
す〕で表わされるサイトロジンＳ誘導体を製造するにあ
たり、式（II）▲数式、化学式、表等があります▼（I
I） を有するサイトロジンＳを ＮＨ＿２−Ｒ＾１−ＣＯＯＨ（式中Ｒ＾１は前述したも
のと同一である）で表わされる化合物の存在下でアルカ
リ金属シアノボロハイドライドで還元して前記式（ I
）においてＸが −ＮＨ−Ｒ＾１−ＣＯＯＨであるサイトロジンＳ誘導体
を製造し、必要により得られた生成物をカルボジイミド
類の存在下で、式（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI） （ＩｇＧは前述したものと同一であり、ｎは１〜１５の
整数を示す）を有する免疫グロブリンと反応させて式（
I ）においてＸが ▲数式、化学式、表等があります▼である サイトロジンＳ誘導体を製造することを特徴とする前記
式（ I ）を有する、サイトロジンＳ誘導体の製造法。 １１）Ｒ＾３がＲ＾１である特許請求の範囲第１０項に
記載のサイトロジンＳ誘導体の製造法。 １２）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｘは式−ＮＨ＿２、−ＮＨ−Ｒ＾１−ＮＨ＿２、
−ＮＨ−Ｒ＾１−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｒ＾１−ＳＨ、▲
数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼を有す る基（式中Ｒ＾１は任意の置換基で置換されていても良
い２価の炭化水素基、Ｒ＾２は２価の炭化水素基、Ｒ＾
３は２価の有機基、ＩｇＧは免疫グロブリン残基、ｎは
１〜１５の整数を示す）を示す〕で表わされるサイトロ
ジンＳ誘導体を含む抗癌剤。
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62074259A JPH0822869B2 (ja) | 1986-06-25 | 1987-03-30 | サイトロジンｓ誘導体およびそれを含有する抗癌剤 |
| EP87108866A EP0251088A3 (en) | 1986-06-25 | 1987-06-20 | Cytorhodin s derivatives, a process for their preparation and their use as medicaments |
| FI872783A FI872783A7 (fi) | 1986-06-25 | 1987-06-23 | Cytorodin s-derivat, foerfarande foer deras framstaellning och deras anvaendning som laekemedel. |
| NZ220805A NZ220805A (en) | 1986-06-25 | 1987-06-23 | Cytorhodin s derivatives,a process for their preparation and their use as medicaments |
| IL82978A IL82978A0 (en) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Cytorhodin s derivatives,a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| DK321387A DK321387A (da) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Cytorhodin s-derivater, fremgangsmaade til deres fremstilling samt deres anvendelse som laegemidler |
| NO872646A NO166715C (no) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive cytorodin s derivater. |
| HU872872A HU198741B (en) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Process for producing cytorodin s derivatives and pharmaceutical compositions comprising same |
| AU74669/87A AU611087B2 (en) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Cytorhodin S derivatives, a process for their preparation and their use as medicaments |
| PT85154A PT85154B (pt) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | Processo para a preparacao de derivados da citorrodina s e de um agente anticancerigeno que os contem |
| CN198787104384A CN87104384A (zh) | 1986-06-25 | 1987-06-24 | 作为药剂的细胞若丁s衍生物的制备及其应用方法 |
| KR1019870006441A KR880000440A (ko) | 1986-06-25 | 1987-06-25 | 사이토르호딘 s유도체, 이의 제조방법 및 약제로서의 이의 용도 |
| AT260487A AT393125B (de) | 1987-03-30 | 1987-10-08 | Cytorhodin s-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende arzneimittel |
| US07/464,695 US5028698A (en) | 1986-06-25 | 1990-01-18 | Cytorhodin S derivatives and a process for their preparation |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61-147119 | 1986-06-25 | ||
| JP14711986 | 1986-06-25 | ||
| JP62074259A JPH0822869B2 (ja) | 1986-06-25 | 1987-03-30 | サイトロジンｓ誘導体およびそれを含有する抗癌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104077A true JPH01104077A (ja) | 1989-04-21 |
| JPH0822869B2 JPH0822869B2 (ja) | 1996-03-06 |
Family
ID=26415387
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62074259A Expired - Lifetime JPH0822869B2 (ja) | 1986-06-25 | 1987-03-30 | サイトロジンｓ誘導体およびそれを含有する抗癌剤 |
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|---|---|
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| EP (1) | EP0251088A3 (ja) |
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| CN (1) | CN87104384A (ja) |
| AU (1) | AU611087B2 (ja) |
| DK (1) | DK321387A (ja) |
| FI (1) | FI872783A7 (ja) |
| HU (1) | HU198741B (ja) |
| IL (1) | IL82978A0 (ja) |
| NO (1) | NO166715C (ja) |
| NZ (1) | NZ220805A (ja) |
| PT (1) | PT85154B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998029451A1 (en) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for elevating the concentration of free insulin-like growth factor |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3722699A1 (de) * | 1987-07-09 | 1989-01-19 | Behringwerke Ag | Zytostatisch wirksame anthacyclin-konjugate |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4263279A (en) * | 1975-08-19 | 1981-04-21 | Yeda Research & Development Co. Ltd | Pharmaceutically active compositions containing adriamycin and daunomycin |
| US4102345A (en) * | 1977-04-21 | 1978-07-25 | American Optical Corporation | Pacer demand-rate test mode control |
| DE3325957A1 (de) * | 1983-07-19 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Anthracyclin-derivate, ein verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als cytostatika |
| DE3641833A1 (de) * | 1986-12-08 | 1988-06-09 | Behringwerke Ag | Zytostatisch wirksame anthracyclinderivate |
-
1987
- 1987-03-30 JP JP62074259A patent/JPH0822869B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-20 EP EP87108866A patent/EP0251088A3/en not_active Withdrawn
- 1987-06-23 FI FI872783A patent/FI872783A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-06-23 NZ NZ220805A patent/NZ220805A/xx unknown
- 1987-06-24 IL IL82978A patent/IL82978A0/xx unknown
- 1987-06-24 CN CN198787104384A patent/CN87104384A/zh active Pending
- 1987-06-24 HU HU872872A patent/HU198741B/hu unknown
- 1987-06-24 NO NO872646A patent/NO166715C/no unknown
- 1987-06-24 DK DK321387A patent/DK321387A/da unknown
- 1987-06-24 PT PT85154A patent/PT85154B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-06-24 AU AU74669/87A patent/AU611087B2/en not_active Ceased
- 1987-06-25 KR KR1019870006441A patent/KR880000440A/ko not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-01-18 US US07/464,695 patent/US5028698A/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998029451A1 (en) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for elevating the concentration of free insulin-like growth factor |
| US6428781B1 (en) | 1996-12-27 | 2002-08-06 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Composition of an endogenous insulin-like growth factor-II derivative |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO872646L (no) | 1987-12-28 |
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| CN87104384A (zh) | 1988-01-13 |
| PT85154B (pt) | 1989-12-29 |
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