JPH01110258A - クロマトグラフィー用吸着担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アフィニティークロマトグラフィーをはじめ
として各種クロマトグラフィーに利用することのできる
クロマトグラフィー用吸着担体に関する。

（従来の技術） クロマトグラフィー技術の１つとして、アフィニティー
クロマトグラフィーは互いに特異的に相互作用を及ぼし
合う物質対の親和性を利用して分離・精製を行なうもの
であり、例えば生体物質をその生物学的特性即ち分子上
のある特定の化学構造を識別して精製する場合に有用で
ある。

アフィニティークロマトグラフィー用吸着担体（アフィ
ニティーゲル）は、例えば不溶性の担体（マトリックス
）に結合基（スペーサー）を結合させて得られる活性支
持体の前記スペーサーにリガンドを結合させたものであ
り、このリガントと互いに相互作用を及ぼし合う物質の
組合せを選択して吸着操作を行なう。

リガンドの１つとして、ゼラチンは結合組織を構成する
コラーゲンの変性したものであり、ｐＨ１塩濃度などの
変化に対し極めて安定なタンパク質として知られている
が、一方ゼラチンは細胞の接着、伸展に重要な働きをす
るフィブロネクチンと特異的に結合するためゼラチン吸
着担体はフィブロネクチンの関与する細胞の研究に有用
な手段を提供すものである。

特にフィブロネクチンは、がん細胞の形態変化や転移性
に関係していると考えられ、現在さまざまな分野で研究
が進んており、その分離・精製や分析法の開発は非常に
重要なものと思われる。

例えば、ゼラチンをリガンドとしフィブロネクチンを吸
着目的物質とするようなアフィニティークロマトクラフ
ィーによる分離・精製や分析において、前記アフィニテ
ィークロマトグラフィー用吸着担体の主構成分である活
性支持体に望まれる性質としては、非特異的吸着が少な
いこと、高い多孔性を有すること、リカンドの結合が容
易であり固定化可能容量が大きいこと、化学的に安定で
ｐＨ域、塩濃度、温度の広範な条件下で十分安定であり
体積変化がないこと、十分な機械的強度と安定性を有し
流動特性が良いこと、生物学的汚染に耐えること、など
があげられる。

従来よりアフィニティークロマトグラフィー用吸着担体
の基材として用いられているセルロース、デキストラン
、ポリアクリルアミド、アガロース等は、必ずしもこれ
ら望まれる性質を具有していない。とりわけ、硬さが不
足した所謂ソフトゲルであるため流動特性か悪く、分離
特性か良くないという重大な欠点を有し、また寿命も短
い。

更に、近年用いられているシリカビーズは、硬さの点て
は満足てきるものの、アルカリ性条件下ては使用できな
いため、分離条件や溶出・洗浄の条件の選択に大きな制
約か加わるという問題点を有していた。

また、スチレン系重合体やアクリレート系重合体を基材
として用いる吸着担体も最近開発されたが、非特異的吸
着の問題で満足は得られていない。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は、前記従来のクロマトクラフィー用吸着
担体の欠点を克服して、アフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着担体に望まれる前述した諸性質を千金に具有
するクロマトグラフィー用吸着担体を提供することにあ
る。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明によって上記目的を達成し得るクロマトグラフィ
ー用吸着担体が提供される。

即ち、本発明は、（Ａ）グリシジルモノビニルエステル
又はグリシジルモノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレ
ングリコールジビニルエステルを主成分とし、前記（Ａ
）成分が（Ｂ）成分で架橋されたゲル状共重合体（以下
、本発明に係るゲル状共重合体という）の前記（Ａ）成
分に基づくエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合し
た水酸基変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変
性ゲル状共重合体に結合基を介して共有結合により結合
したゼラチンを含有する多孔性の共重合体から成ること
を特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体に関する。

以下、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体について
説明する。

本発明に係るゲル状共重合体は、特開昭６０−１０４２
５６号公報等に記載されているように１例えば、（Ａ）
グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモノビニ
ルエーテルと（Ｂ）アルキレンクリコールジビニルエス
テルとを水不溶性の有機希釈剤の存在下で水性懸濁重合
せしめて多孔性のゲルを得ることにより調製することが
できるが、水性懸濁重合は簡単な水中油型懸濁方式で行
なうことができる。共重合は有機希釈剤の存在下に行な
われ、この有機希釈剤の存在に起因して、（Ｂ）のアル
キレングリコールジビニルエステル成分か主な架橋成分
として作用し、（Ａ）のグリシジルモノビニルエステル
又はグリシジルモノビニルエーテル成分中のエポキシ基
の大部分は開環することなくそのまま生成共重合体中に
残留せしめると共に、生成する多孔性ゲルの孔径調整に
も役立つ。

前記（Ａ）成分としては、炭素数３〜１２のモノビニル
カルボン酸のグリシジルエステルまたは炭素数３〜１２
のモノビニルアルコールのグリシジルエーテルか用いら
れる。これらのうち炭素数の少ないものが特に好ましく
用いられ、その例の中にはメタクリル酸グリシジルエス
テル、アクリル酸クリシシルエステル、アリルグリシジ
ルエーテル等か含まれる。

一方架橋成分として働＜（Ｂ）ｒ＆分としては炭素数２
又は３のアルキレンクリコール、炭素数３のヒドロキシ
ル置換アルキレンクリコールまたはそのポリアルキレン
クリコールとアクリル酸もしくはメタクリル酸とのエス
テルが好ましく用いられる。例としてエチレンクリコー
ルジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレー
ト、プロピレンクリコールジアクリレート、プロピレン
グリコールジメタクリレート、グリセロールジアクリレ
ート、グリセロールジメタクリレートの如きアルキレン
クリコールまたはヒドロキシル置換アルキレングリコー
ルジビニルエステル及びポリエチレンクリコールジメタ
クリレート、ポリプロピレンクリコールジメタクリレー
トの如きポリアルキレンクリコールジビニルエステルが
あげられる。

（Ａ）成分対（Ｂ）成分の割合は、前者１０〜９０モル
％に対し後者９０〜１０モル％とする。好ましくは（Ａ
）成分４０〜８０モル％、（Ｂ）成分６０〜２０モル％
である。（Ａ）成分の半量以下をコモノマー即ちメチル
メタクリレート、メチルアクリレート、酢酸ビニルの如
き低級のビニルエステルで置きかえることができる。

用いられる有機希釈剤は、重合反応に不活性て、水に不
溶乃至難溶性であるが原料子ツマ−を溶解するものであ
ればよい。使用量は千ツマー成分と有機希釈剤との含量
に基づき少くとも３０容量％とし、好ましくは４０〜８
０容量％である。

本発明において好適に用いつる有機希釈剤の例としては
、シクロヘキサノン、クロロベンゼン、ベンゼン、トル
エン、ｎ−プロピルアセテート、ｎ−ブチルアセテート
、ｎ−オクタン等があげられる。

水性懸濁重合は、遊離基発生触媒の存在下にそれ自体は
公知の常法に従って行なうことができる。水相の量は有
機相の量に基づきほぼ同容量またはそれ以上とし、特に
制約はないが約１０倍容量までの量で用いられる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させるについては、本発明に係るゲル状共重合体の
前記（Ａ）成分に基づくエポキシ基の反応性を利用して
行うことができる。

水酸基を有する化合物としては、グリセリン、エリスリ
トール、ペンタエリスリトール、イノシトール、キシリ
トール、マンニトール、ソルビトール等のポリオール類
、クリシドールのようなエポキシ化合物類、グリセルア
ルデヒド、エリスロース、キシロース、アラビノース、
リボース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フ
ルクトース等のようなアルデヒド基を有する化合物類、
トリメチロールアミノメタン、グルカミン、タルコサミ
ン、ガラクトサミン、フコサミン等のようなアミノアル
コール類が例示される。

これらの水酸基を有する化合物を本発明に係るゲル状共
重合体に結合させるに際しては、必要に応じて適宜触媒
や反応試薬などを用いて適当な触媒下て行うことがてき
る。触媒としては、例えば塩酸、硫酸などの酸類、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸
カルシウムなどのアルカリ類が主として用いられる。特
に、アルデヒド基を有する化合物については、本発明に
係るゲル状共重合体のエポキシ基をアンモニアやプロパ
ンジアミンのようなジアミン類を用いて開環させ、次い
で水素化シアノホウ素ナトリウムのような還元剤の存在
下で結合させることがてきる。又エポキシ基を有する化
合物については結合抜水により開環して水酸基とするこ
とができる。

結合の溶媒としては、水やジメチルホルムアミド、ジオ
キサン等が通常用いられるが、必要に応じて緩衝液とし
て用いたり無機塩類を添加することもてきる。

本発明に係るゲル状共重合体と水酸基を有する化合物は
、例えば重量比１：０．０３〜１、好ましくは、０．０
５〜０．５、反応温度０６Ｃ〜１５０°Ｃ１好ましくは
室温〜８０℃、反応時間１〜７２時間、好ましくは２〜
１２時間の条件下で結合させることがてきる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させたもの（以下、本発明に係る水酸基変性ゲル状
共重合体という）について更に結合基を導入するについ
ては、結合基がゼラチンと共有結合可能な官能基を有し
ていることが必要であるが、結合基の構造について前記
官能基を有すること以外に特に制限はない。前記ゼラチ
ンと共有結合可能な官能基としては、例えばエポキシ基
、アミノ基、ヒドラジノ基、カルボキシル基、ホルミル
基、チオール基等が例示される。この場合、結合基の導
入は公知の方法を用いて容易に行なうことができ、又、
必ずしも１段階の反応工程で導入する必要はなく、２段
階以上の反応工程に分けて導入することもてきる。以下
に、結合基の導入の具体例について説明する。

（ｉ）官能基としてエポキシ基を有する結合基の導入 例えば、本発明に係る水酸基変性ゲル状共重合体の有す
る水酸基にグリシジル基を有する化合物を結合させて、
グリシジル基に基づくエポキシ基を有する結合基を導入
する。（以下、本発明に係１す るエポキシ変性ゲル状共重合体という。）水酸基に結合
される、グリシジル基を有する化合物としては、エビク
ロロヒドリン、エビクロロヒドリン、などのエビハロヒ
ドリン類、エチレングリコールジグリシジルエーテル、
　１．４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、ポリ
エチレングリコールジグリシジルエーテルなどのジグリ
シジルエーテル類、　１．３−ブタジエンジエポキサイ
ド、　１．７−オクタジニンジエボキサイドなどのアル
キルジエンジエボキサイド類などがあげられる。

グリシジル基を有する化合物を作用させるには、例えば
水酸基変性ゲル状共重合体に水酸化ナトリウムまたは炭
酸カリウム等の無機塩基の水溶液中でエビクロロヒドリ
ンを反応させるか、または水素化ホウ素ナトリウムを含
む水酸化ナトリウムまたは炭酸カリウム等の無機塩基の
水溶液中て、エチレングリコールまたは１，４−ブタン
ジオールジグリシジルエーテル、またはポリエチレング
リコールジグリシジルエーテルと反応させるなどして行
われる。用いられるポリエチレングリコールジグリシジ
ルエーテルの繰返し単位ＣｚＨ４０−の繰返し数が１〜
１０のものを用いるのが好ましい。

（ｉｉ）官能基としてアミノ基、ヒドラジノ基、カルボ
キシル基等を有する結合基の導入 例えば、アミノ基、ヒドラジノ基、カルボキシル基等を
有する結合基の導入方法としては、本発明に係るエポキ
シ変性ゲル状共重合体のグリシジル基に基づくエポキシ
基に、一般式（Ｉ）Ｈ２ＮＲ’ （式中、Ｒ′は水素原子、アミノ基、ω−アミノアルキ
ル基又はω−カルボキシアルキル基を表わす。） で表わされるアミノ化合物を作用させ、又は該アミノ化
合物として前記Ｒ°がω−カルボキシアルキル基以外の
アミノ化合物を作用させた場合に更にアルキレンカルボ
ン酸無水物を作用させて、前記エポキシ基に、一般式（
Ｈ） ＮＨＲ （式中、Ｒは水素原子、アミノ基、ω−アミノアルキル
基、ω−カルボキシアルキル基、ω−カルボキシアルカ
ノイル基、ω−カルボキシアルカノイルアミノ基又はω
−カルボキシアルカノイルアミノアルキル基を表わす。

） て表わされる結合基を導入する方法がある。

この場合、反応は、下記反応式に従って、行なうことが
できる。

本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体を表わエポキ
シ基を表わすものとする。式中、ｍはｌ又は２、ｎ、ｐ
、ｑ及びｒはそれぞれ１以上（より好ましくは１〜１２
）の整数である。

本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキシ基
に、前記反応式中式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式
（Ｆ）の化合物を作用させるのは、溶媒の存在下で行な
うことかできるが、これらの化合物が反応条件下て液体
の場合は特に溶媒を用いないでもよい。溶媒としては、
水が通常用いられるが、その他ｎ−ヘキサン、ベンゼン
、キシレンなどの炭化水素類、テトラヒドロフラン、ジ
オキサンなどのエーテル類、クロロホルム、クロロベン
ゼンなどの塩素化炭化水素類、エタノールやメチルセロ
ソルブなどのアルコール類、アセトンやメチルイソブチ
ルケトンなどのケトン類などの他、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキサイドなども用いられ、又これら
は単一でも混合溶媒系でも良い。又、特に触媒は用いな
いてもよいか、水酸化ナトリウムや炭酸カリウムなどの
アルカリ又はアルカリ土類金属の水酸化物又は炭酸塩な
どを用いることもできる。

一般式（Ｄｏ）の化合物としては、エチレンジアミン、
　１，３−ジアミノプロパン、　１，４−ジアミノブタ
ン、　１．５−ジアミノペンタン、　１，６−ジアミツ
ヘキサン、　１．７−ジアミノへブタン、　１，８−ジ
アミノオクタン、　１．９−ジアミノノナン、１．１０
−ジアミノデカン、１，１２−ジアミノドデカンなどの
ジアミノアルカン類があげられる。

一般式（Ｆ）の化合物としては、“グリシン、β−アラ
ニン、４−アミノ酪酸、　６−アミノカプロン酸、　８
−アミノカプリル酸などのアミノカルボン酸類を例示す
ることができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、一般に次の
ような条件を選択して反応を行なうのか好ましい。

本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体の重量（ａ）
と式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｆ）の化合物
の重量（ｂ）の比： ａ　　：　　ｂ　＝　　１：　０．３　〜１０より好ま
しくは、 ａ：ｂ＝１＝０．３〜３ 反応温度：　０〜１５０°Ｃ１より好ましくは室温〜０
０６Ｃ 反応時間＝　１〜６０時間、より好ましくは１〜３０時
間 反応圧カニ常圧〜１０ａｔｍ　、より好ましくは常圧 反応後の後処理についても特別な要件はなく、炉別、洗
浄等、通常行なわれている方法にて適宜実施される。

以上で得られた本発明に係るクロマトグラフィー用担体
は、式（Ｄ）又は一般式（Ｄｏ）の化合物を用いた場合
につき、次いて必要があれば、既に一般式て示した如く
活性支持基の末端のアミノ基を一般式（Ｅ）の酸無水物
を作用させることによりカルボキシル基を有する活性支
持基に変換することができる。反応の溶媒としては水が
通常用いられるが、その他テトラヒドロフラン、ジオキ
サンなどのエーテル類、酢酸などのカルボン酸類、ピリ
ジンなども用いられる。又、特に触媒は用いないてもよ
いが、塩酸、硫酸などの酸や、水酸化ナトリウムや炭酸
カリウムなどのアルカリの添加により、反応液のｐＨを
調整することもてきる。

反応式中一般式（Ｅ）又は一般式（Ｅｏ）のアルキレン
カルボン酸無水物としては、コハク酸無水物、クルター
ル酸無水物、アジピン酸無水物、ピメリン酸無水物、ス
ペリン酸無水物、アゼライン酸無水物、セパチン酸無水
物などを例示することかてきる。

反応条件については必ずしも制限はないが、例えば前記
の式（Ｄ）、一般式（Ｄ′）又は一般式（Ｆ）の化合物
のときと同様な条件を選択して反応を行なうことかでき
る。

また、官能基としてカルボキシル基を有する結合基を導
入する別の方法として、水酸基を有するアミノカルボン
酸を本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキ
シ基に作用させて結合させる方法がある。

水酸基を有するアミノカルボン酸としては、セリン、ホ
モセリン、スレオニン、４−ヒドロキシプロリン、　４
−アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、Ｎ−トリス（ヒドロキ
シメチル）、メチルグリシン等のアミノ酸誘導体や、グ
ルコサミン酸等のアミノ糖誘導体などを例示することか
てきる。

結合の状態は、本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合
体のエポキシ基か水酸基を有するアミノカルボン酸のア
ミノ基と結合した結果、該エポキシ基は開環し、水酸基
と水酸基を有するカルボキシル残基か生成することにな
る。

水酸基を有するアミノカルボン酸を作用させる溶媒、触
媒及び反応条件については特に制限はなく、例えば前記
式（Ｄ）、一般式（Ｄ゛）又は一般式（Ｆ）の化合物を
作用させる場合と同じような条件にすることができる。

このような水酸基を有するアミノカルボン酸を用いて結
合基を導入すると、前記基材以外、即ち結合基の部分に
基づく疎水性に由来する非特異的吸着をも排除すること
かできる。

（ｉｉｉ）官能基としてホルミル基を有する結合基の導
入 例えば、前記（ｉ）により得られた官能基としてエポキ
シ基を有する結合基は該官能基を容易に加水分解して　
１，２−グリコールに変性することがてき、この１，２
−グリコールは過ヨウ素酸を作用させることによりホル
ミル基に変えることがてきる。反応条件については特に
制限はなく、常法に従って例えば溶媒として水、エタノ
ール又は酢酸、もしくはこれらの混合物などを用い、室
温乃至は５０°Ｃで過ヨウ素酸又はそも無機塩を作用さ
せて行なうことがてきる。

（ｉｖ）官能基としてチオール基を有する結合基の導入 例えば、前記（ｉ）により得られた官能基としてエポキ
シ基を有する結合基は、該官能基にチオ硫酸ナトリウム
を作用させた後、塩酸を作用させるなどによりチオール
基を導入することができる。

反応条件については特に制限はなく、常法に従って例え
ば水溶媒下て室温て容易に行なうことができる。

結合基にゼラチンを共有結合させるに際しては、結合基
が有する官能基に応じて必要であれば、適宜触媒や反応
試薬などを用いて適当な溶媒下で行なうことが出来る。

例えば触媒としては、塩酸や炭酸ナトリウム又は炭酸水
素ナトリウムなどの酸、アルカリが主として官能基がエ
ポキシ基の場合に用いられ、又、例えば反応試薬として
はＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、ジシクロへキシルカ
ルボジイミドが官能基がカルボキシル基の場合に、又、
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドのような縮合剤が官能基がカルボキシル基、
アミノ基、又はヒドラジノ基の場合に、又水素化シアノ
ホウ素ナトリウムのような還元剤が官能基がホルミル基
の場合に用いられる等々を例示することか出来る。又溶
媒としては通常水が用いられるが必要に応じてリン酸や
酢酸緩衝液として用いられることも出来、又塩化ナトリ
ウムや硫酸ナトリウムなどの無機塩類を添加して用いる
ことも可能である。

ゼラチンとの反応条件については必ずしも制限は無いが
一般に次のような範囲で行なうことが適当である。

結合基を結合させた本発明に係る水酸基変性ゲル状共重
合体とゼラチンの重量比：　１　：　０．０３〜０．３
、好ましくは１　：　０．０５〜０，２；反応温度：０
℃〜６０℃、好ましくは４℃〜室温：反応時間＝１〜７
２時間、好ましくは２〜１２時間。

反応後の後処理についても特別な要件は無く、炉別洗浄
等通常行なわれている方法にて適宜実施される。

〔発明の効果〕

本発明により提供されるクロマトグラフィー用吸着担体
は、前述のアフィニティークロマトクラフィー用吸着担
体として望まれる性質を全て具備する基剤を用い、これ
に適当な結合基を介してゼラチンを共有結合させたもの
であるため、本発明の吸着担体を用いることにより、従
来のソフトゲルな用いた吸着担体と同じようなアフィニ
ティークロマトクラフィー用充填剤として使用できるば
かりてなく、特に耐圧カラムに充填し、加圧下ても充分
使用することがてきるということは、作業時間を大幅に
短縮させるため、従って分離精製の能率を大きく向上さ
せ得るという最大の利点が得られるものてあり、この利
点か例えば高速液体クロマトグラフィーへの応用や工業
用の分離精製設備への応用を計るには不可欠であること
は言を俟たない。

特に、前記の如く多くの利点を有するゲル状共重合体に
対し、やはり前記の如く結合基を介して共有結合により
ゼラチンを結合させた吸着担体は、例えば、一般に用い
られている臭化シアンを介したアフィニティークロマト
グラフィー用吸着担体などに比して、使用時のりガント
の脱落が無く、又結合基の長さを任意に調整することが
可能であるため、リガンドの目的物質に対する吸着能が
優れており、更に非特異的吸着も非常に少ないこと等も
併せて本発明により提供されるクロマトグラフィー用吸
着担体の効果は大きい。

〔実施例〕

以下に、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体の製造
法について代表的な例を示し、更に具体的に説明する。

但し、これらは説明のための単なる例示てあって、本発
明はこれらに何ら制限されないのは言うまてもない。

参考例　１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
１２ｇをアンモニア水（２５％）７２ｇ中に加え、６０
８Ｃに加温しつつ、１２時間撹拌した。

次いて、ゲルを枦取し水で洗浄したところ、乾燥ゲルＩ
ｇ当り　１．４ミリモルのアミノ基を担持させているこ
とが中和滴定により確められた。このゲルを０．２モル
のリン酸水素二カリウム塩水溶液３６ｇ中に加え、クル
コース７．９２ｇ及び水素化シアノホウ素ナトリウム７
．２ｇを加えて８０°Ｃて１０時間撹拌した。ゲルを枦
取し水で洗浄し乾燥した後、無水酢酸１８ｇ中に加え酢
酸ナトリウム１８ｇを加えて室温で２時間撹拌した。次
いで、ゲルを枦取し水で洗浄した。こうして得られたゲ
ル（水酸基変性ゲル状共重合体）を内径４．６ｍｍ、長
さ７５ｍｍ＋のステンレス製カラムに充填し、高速液体
クロマトグラフ装置を用いて、ブタノール及びエチレン
グリコールの保持時間比を求めたところ、次のような結
果が得られた。

参考例　２ 参考例１におけるブタノール及びエチレングリコールの
代りにα−キモトリプシノーゲンＡ及びオバルブミンを
用いて分析を行ったところ、次のような結果が得られた
。

溶離条件 溶離液■：０．１モルリン酸ナトリタナトリウム緩衝液
７．０） 溶離液■：溶離液■に１．８モル硫酸アンモニウム添加 溶離液■から溶離液■に６０分でリニアグラジェント 溶離速度：１．０ｍ４１７分、検出器：紫外分光光度計
（２８０ｎｍ） 参考例　３ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
４ｇをジメチルホルムアミド１２１１１文中に加え、更
にグリセロール１５　ｔａｎ及び粉末水酸化カリウム１
．５ｇを加えて６０°Ｃて３時間撹拌した。次いで、ゲ
ルを枦取し水て洗浄した後、参考例１と同様のカラムに
充填した。参考例２の（カラムＡ）の代りにこれを用い
、他は参考例２と同様の分析を行ったところ、α−キモ
トリブシノーゲンＡ及びオバルブミンは保持されなかっ
た。

実施例１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
を参考例１と同様にアンモニア水及びグルコースを用い
て水酸基変性し、更にエビクロロヒドリンてエポキシ基
を導入したゲル（エポキシ基：乾燥ゲル１ｇ当り０．３
８ミリモル）２ｇの０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ８）６ｍｌにおける懸濁液にゼラチン６０ｍｇを
加え室温で１日振盪した。ゲルを枦取し１モル塩化ナト
リウム水溶液及び水で洗浄した。こうして得られた吸着
担体は、乾燥ゲルＩｇ当りゼラチンを３℃１ｇ担持させ
ていることが、未反応のゼラチンを高速液体クロマトグ
ラフィーで分析することにより確められた。

実施例２ 実施例１において、エビクロロヒドリンの代りにエチレ
ングリコールジグリシジルエーテルを用いて得られたエ
ポキシ基が導入されたゲルを、次いで４−アミノ酪酸と
作用させて得たゲル（カルボキシル基：乾燥ゲル１ｇ当
り　０．２ミリモル）２ｇを０．１モルリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ５）　１０ｍ１に加え、５°Ｃに保ちつ
つ、ゼラチン６０ａ＋ｇ及び１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩６０ｍｇ
を３回に分けて加えて３時間振盪した。次いで５°Ｃで
一夜放置後、ゲルを枦取し０．１規定塩化ナトリウムで
洗った。

こうして得られた吸着担体は乾燥ゲルＩｇ当りゼラチン
を１８ｍｇ担持させていることが確められた。

実施例３ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
を参考例１と同様にアンモニア水及びグルコースを用い
て水酸基変性し、次いで、１．４−ブタンジオールジグ
リシジルエーテルでエポキシ基を導入した後、更に４−
アミノ酪酸でカルボシキル基を導入したゲル２ｇを無水
ジオキサンで充分洗浄した後、無水ジオキサン８　ｍｌ
中に加え、更にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド　１６０
ｍｇ及びジシクロへキシルカルボジイミド３００ｍｇを
加えて室温で１．５時間振盪した後ゲルを枦取し、無水
ジオキサン２０　ｔａｎ、メタノール６　ｍｌ、冷水３
ｒａｎの順で素早く洗浄した。このゲルをゼラチン３０
０ｍｇの０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，
８）の水２　ｍＪＬにおける溶液に加え、３０℃て２時
間振盪し、４℃で一夜放置した。次いで、ゲルを枦取し
、１モル塩化ナトリウム水溶液及び水で洗った。こうし
て得られた吸着担体は乾燥ゲル１ｇ当りゼラチンを３０
ｏ＋ｇ担持させていることが確められた。

実施例４ 実施例３におけるエポキシ基が導入されたゲル２ｇを過
ヨウ素酸ナトリウム２ｇを含む酢酸水（９：１）溶液２
０　ｍｌに加え室温で２時間振盪した。ゲルを枦取し水
洗後、０．２モルリン酸−水素カリウムを含む水溶液６
　ｍｌに加え、更にゼラチン３００ｍｇ及び水素化シア
ノホウ素ナトリウム４０ｍｇを加えて、３０’Ｃで１６
時間振盪した後、再びゲルな枦取して水で洗った。こう
して得られた吸着担体は乾燥ゲル１ｇ当りゼラチンを１
２ｍｇｍ持させていることが確められた。

試験例 実施例３て得られた吸着担体を内径４．６■、長さ７５
ｍ＋＋＋のステンレス製カラムに充填し、高速液体クロ
マトグラフ装置を用いてフィブロネクチン（Ｇｒｅｅｎ
　Ｃｒｏｓｓ）の分析を行ったところ、図のような結果
が得られた。

溶離条件 溶離液■：５０ミリモル　トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７
，４）　＋　０．１モル塩化ナトリウム溶離液■：溶離
液の＋４モル尿素 溶離液■から溶離液■に１６分（図中の矢印）でステッ
プワイズ溶出 流　速：　０．３　ｍｌ　／ｗｉｎ 検出器：紫外分光光度計（２７８ｎｍ）

【図面の簡単な説明】

図は本発明によるクロマトグラフィー用吸着担体を用い
た高速液体クロマトグラフ用カラムによる吸着溶出のパ
ターンを示すグラマトゲラム図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （Ａ）グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモ
   ノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレングリコールジビ
   ニルエステルを主成分とし、前記（Ａ）成分が（Ｂ）成
   分で架橋されたゲル状共重合体の前記（Ａ）成分に基づ
   くエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合した水酸基
   変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変性ゲル状
   共重合体に結合基を介して共有結合により結合したゼラ
   チンを含有する多孔性の共重合体から成ることを特徴と
   するクロマトグラフィー用吸着担体。