JPH0198964A - クロマトグラフィー用吸着担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、アフィニティークロマトグラフィーをはじめ
として各種クロマトグラフィーに利用することのできる
クロマトグラフィー用吸着担体に関する。

従来の技術 クロマトグラフィー技術の１つとして、アフィニティー
クロマトグラフィーは互いに特異的に相互作用を及ぼし
合う物質対の親和性を利用して分離・精製を行なうもの
であり、例えば生体物質をその生物学的特性即ち分子上
のある特定の化学構造を識別して精製する場合に有用で
ある。

アフィニティークロマトグラフィー用吸着担体（アフィ
ニティーゲル）は、例えば不溶性の担体（マトリックス
）に結合基（スペーサー）を結合させて得られる活性支
持体の前記スペーサーにリガンドを結合させたものであ
り、このリガンドと互いに相互作用を及ぼし合う物質の
組合せを選択して吸着操作を行なう。

リガンドの１つとして、ベンズアミジンは、アミジノ基
がベンゼン環に結合した化合物で、アルギニンとの相似
性よりこれをリガンドとしたアフィニティークロマトグ
ラフィーはトリプシン、プラスミン、トロンビン、カリ
クレイン等のトリプシン族の酵素やアミジノトランスフ
ェラーゼ等の酵素の分離・精製や分析、研究に有用とさ
れているものである。

例えばベンズアミジンをリガンドとしトリプシン族酵素
を吸着目的物質とする様なアフィニティークロマトグラ
フィ〜による分離・精製や分析において、前記アフィニ
ティークロマトグラフィー用吸着担体の主構成分である
活性支持体に望まれる性質としては、非特異的吸着が少
ないこと、高い多孔性を有すること、リガンドの結合が
容易であり固定化可能容量が大きいこと、化学的に安定
でｐＨ域、塩濃度、温度の広範な条件下で十分安定であ
り体積変化がないこと、十分な機械的強度と安定性を有
し流動特性が良いこと、生物学的汚染に耐えること、な
どが挙げられる。

従来よりアフィニティークロマトグラフィー用吸着担体
の基材として用いられているセルロース、デキストラン
、ポリアクリルアミド、アガロース等は、必ずしもこれ
ら望まれる性質を具有していない。とりわけ、硬さが不
足した所謂ソフトゲルであるため流動特性が悪く、分離
特性が良くないという重大な欠点を有し、また寿命も短
い。

更に、近年用いられているシリカビーズは、硬さの点で
は満足できるものの、アルカリ性条件下では使用できな
いため、分離条件や溶出・洗浄の条件の選択に大きな制
約が加わるという問題点を有していた。

また、スチレン系重合体やアクリレート系重合体を基材
として用いる吸着担体も最近開発されたが非特異的吸着
の問題で満足は得られていない。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、前記従来のクロマトグラフィー用吸着
担体の欠点を克服して、アフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着担体に望まれる前述した諸性質を十全に具有
するクロマトグラフィー用吸着担体を提供することにあ
る。

問題点を解決するための手段 本発明によって上記目的を達成し得るクロマトグラフィ
ー用吸着担体が提供される。

即ち、本発明は、（Ａ）グリシジルエーテルエステル又
はグリシジルモノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレン
グリコールジビニルエステルを主成分とし、前記（Ａ）
成分が（Ｂ）成分で架橋されたゲル状共重合体（以下、
本発明に係るゲル状共重合体という）の前記（Ａ）成分
に基づくエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合した
水酸基変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変性
ゲル状共重合体に結合基を介して共有結合により結合し
たベンズアミジンを含有する多孔性の共重合体から成る
ことを特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体に関す
る。

以下、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体について
説明する。

本発明に係るゲル状共重合体は、特開昭６０−１０４２
５８号公報等に記載されている様に、例えば、（Ａ）グ
リシジルモノビニルエステル又はグリシジルモノビニル
エーテルと（Ｂ）アルキレングリコールジビニルエステ
ルとを水不溶性の有機希釈剤の存在下で水性懸濁重合せ
しめて多孔性のゲルを得ることにより調製することがで
きるが、水性懸濁重合は簡単な水中油型懸濁方式で行な
うことができる。共重合は有機希釈剤の存在下に行なわ
れ、この有機希釈剤の存在に起因して、（Ｂ）のアルキ
レングリコールジビニルエステル成分が主な架橋成分と
して作用し、（Ａ）のグリシジルモノビニルエステル又
はグリシジルモノビニルエーテル成分中のエポキシ基の
大部分は開環することなくそのまま生成共重合体中に残
留せしめると共に、生成する多孔性ゲルの孔径調整にも
役立つ。

前記（Ａ）成分としては、炭素数３〜１２のモノビニル
カルボン酸のグリシジルエステルまたは炭素数３〜１２
のモノビニルアルコールのグリシジルエーテルが用いら
れる。これらのうち炭素数の少ないものが特に好ましく
用いられ、その例の中にはメタクリル酸グリシジルエス
テル、アクリル酸グリシジルエステル、アリルグリシジ
ルエーテル等が含まれる。

一方架橋成分として働＜（Ｂ）成分としては炭素数２又
は３のアルキレングリコール、炭素数３のヒドロキシル
置換アルキレングリコールまたはそ−八　　　− のポリアルキレングリコールとアクリル酸もしくはメタ
クリル酸とのエステルが好ましく用いられる。例として
エチレングリコールジアクリレート、エチレングリコー
ルジメタクリレート、プロピレングリコールジアクリレ
ート、プロピレングリコールジメタクリレート、グリセ
ロールジアクリレート、グリセロールジメタクリレート
の如きアルキレングリコールまたはヒドロキシル置換ア
ルキレングリコールジビニルエステル及びポリエチレン
グリコールジメタクリレート、ポリプロピレングリコー
ルジメタクリレートの如きポリアルキレングリコールジ
ビニルエステルが挙げられる。

（Ａ）成分対（Ｂ）成分の割合は、前者１０〜９０モル
％に対し後者９０〜ｌＯモル％とする。好ましくは（Ａ
）成分４０〜８０モル％、（Ｂ）成分６０〜２０モル％
である。

（Ａ）成分の半量以下をコモノマー即ちメチルメタクリ
レート、メチルアクリレート、酢酸ビニルの如き低級の
ビニルエステルで置きかえることができる。

用いられる有機希釈剤は、重合反応に不活性で、水に不
溶乃至難溶性であるが原料モノマーを溶解するものであ
ればよい。使用量はモノマー成分と有機希釈剤との含量
に基づき少くとも８０容量％とし、好ましくは４０〜８
０容量％である。本発明において好適に用いうる有機希
釈剤の例としては、シクロヘキサノン、クロロベンゼン
、ベンゼン、トルエン、ｎ−プロピルアセテート、ｎ−
ブチルアセテート、ｎ−オクタン等が挙げられる。

水性懸濁重合は、遊離基発生触媒の存在下にそれ自体は
公知の常法に従って行なうことができる。

水相の量は有機相の量に基づきほぼ同容量またはそれ以
上とし、特に制約はないが約１０倍容量までの量で用い
られる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させるについては、本発明に係るゲル状共重合体の
前記（Ａ）成分に基くエポキシ基の反応性を利用して行
うことができる。

水酸基を有する化合物としては、グリセリン、エリスリ
トール、ペンタエリスリトール、イノシトール、キシリ
トール、アンニトール、ツルビトール等のポリオール類
、グリシドールのようなエポキシ化合物類、グリセルア
ルデヒド、エリスロース、キシロース、アラビノース、
リボース、グルコース、ガラクトース、アンノース、フ
ルクトース等のようなアルデヒド基を有する化合物類、
トリメチロールアミノメタン、グルカミン、グルコサミ
ン、ガラクトサミン、フコサミン等のようなアミノアル
コール類が例示される。

これらの水酸基を有する化合物を本発明に係るゲル状共
重合体に結合させるに際しては必要に応じて適宜触媒や
反応試薬などを用いて適当な溶媒下で行うことができる
。触媒としては、例えば塩酸、硫酸などの酸類；水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウムなどのアルカリ類が主として用いられる。特に、
アルデヒド基を有する化合物については、本発明に係る
ゲル状共重合体のエポキシ基をアンモニアやプロパンジ
アミンのようなジアミン類を用いて開環させ、次いで水
素化シアノホウ素ナトリウムのような還元剤の存在下で
結合させることができる。又エポキシ基を有する化合物
については結合後水により開環して水酸基とすることが
できる。結合の溶媒としては水やジメチルホルムアミド
、ジオキサン等が通常用いられるが、必要に応じて緩衝
液として用いたり無機塩類を添加することもできる。

本発明に係るゲル状共重合体と水酸基を有する化合物は
、例えば重量比１　：　０．０３〜１、好ましくは０．
０５〜０．５、反応温度０９Ｃ〜１５０℃、好ましくは
室温〜８０℃、反応時間１〜７２時間、好ましくは２〜
１２時間の条件下で結合させることができる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させたもの（以下、本発明に係る水酸基変性ゲル状
共重合体という）について更に結合基を導入するについ
ては、結合基がベンズアミジンと共有結合可能な官能基
を有していることが必要であるが、結合基の構造につい
て前記官能基を有すること以外に特に制限はない。前記
ベンズアミジンと共有結合可能な官能基としては、例え
ばエポキシ基、カルボキシル基、ホルミル基等が例示さ
れる。この場合、結合基の導入は公知の方法を用いて容
易に行なうことができ、又、必ずしも一段階の反応工程
で導入する必要はなく、２段階以上の反応工程に別けて
導入することもできる。

以下に、結合基の導入の具体例について説明する。

（１）官能基としてエポキシ基を有する結合基の導入 例えば、本発明に係る水酸基変性ゲル状共重合体の水酸
基にグリシジル基を有する化合物を結合させて、グリシ
ジル基に基づくエポキシ基を有する結合基を導入する（
以下、本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体という
。）。水酸基に結合される、グリシジル基を有する化合
物としては、エピクロロヒドリン、エピブロモヒドリン
などのエピハロヒドリン類、エチレングリコールジグリ
シジルエーテル、１．４−ブタンジオールジグリシジル
エーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテ
ルなどのジグリシジルエーテル類、１．３−ブタジエン
ジエポキサイド、１．７−オクタジエンジエポキサイド
などのアルキルジエンジュポキサイド類などが挙げられ
る。

グリシジル基を有する化合物を作用させるには、例えば
水酸基変性ゲル状共重合体に水酸化ナトリウムまたは炭
酸カリウム等の無機塩基の水溶液中でエピクロロヒドリ
ンを反応させるか、または水素化ホウ素ナトリウムを含
む水酸化ナトリウムまたは炭酸カリウム等の無機塩基の
水溶液中で、エチレングリコールまたは１，４−ブタン
ジオールジグリシジルエーテル、またはポリエチレング
リコールジグリシジルエーテルと反応させるなどして行
われる。用いられるポリエチレングリコールジグリシジ
ルエーテルの繰返し単位−Ｃ２Ｈ４０−の繰返し数が１
〜１０のものを用いるのが好ましい。

（Ｎ）官能基としてカルボキシル基を有する結合基の導
入 例えば、カルボキシル基を有する結合基の導入方法とし
ては、本発明に係るエポキシ変性ゲル状′共重合体のグ
リシジル基に基づくエポキシ基に、一般式（Ｉ） Ｈ２ＮＲ’ 〔式中、Ｒ′は水素原子、アミノ酸、ω−アミノアルキ
ル基又はω−カルボキシアルキル基を表わす。〕 で表わされるアミノ化合物を作用させ、又は該アミノ化
合物として前記Ｒ′がω−カルボキシアルキル基以外の
アミノ化合物を作用させた場合に更にアルキレンカルボ
ン酸無水物を作用させて、前記エポキシ基に、一般式（
ＩＩ） ＮＨＲ Ｃ式中、Ｒはω〜カルボキシアルキル基、ω−カルボキ
シアルカノイル基、ω−カルボキシアルカノイルアミノ
基又はω−カルボキシアルカノイルアミノアルキル基を
表わす。〕 で表わされる結合基を導入する方法がある。

この場合、反応は、下記反応式に従って、行なうことか
できる。

尚、下記反応式中、（基剤）ＣＨ−ＣＨ２は、＼　１ 本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体を表わ一　　
１２　〜 つのエポキシ基を表わすものとする。式中、ｍは１又は
２、ｎ＋　　ｐ＋　　ｑ及びｒはそれぞれ１以上（より
好ましくは１〜１２）の整数である。

（以下余白） −１＝ 本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキシ基
に、前記反応式中式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式
（Ｆ）の化合物を作用させるのは、溶媒の存在下で行な
うことができるが、これらの化合物が反応条件下で液体
の場合は特に溶媒を用いないでもよい。溶媒としては、
水が通常用いられるが、その他ｎ−ヘキサン、ベンゼン
、キシレンなどの炭化水素類、テトラヒドロフラン、ジ
オキサンなどのエーテル類、クロロホルム、クロロベン
ゼンなどの塩素化炭化水素類、エタノールやメチルセロ
ソルブなどのアルコール類、アセトンやメチルイソブチ
ルケトンなどのケトン類などの他、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキサイドなども用いられ、又これら
は単一でも混合溶媒系でも良い。又、特に触媒は用いな
いでもよいが、水酸化ナトリウムや炭酸カリウムなどの
アルカリ又はアルカリ土類金属の水酸化物又は炭酸塩な
どを用いることもできる。

一般式（Ｄｏ）の化合物としては、エチレンジアミン、
１．３−ジアミノプロパン、１，４−ジアミノブタン、
１．５−ジアミノペンタン、１，６　−ジアミノヘキサ
ン、■、７　−ジアミノへブタン、１，８　−ジアミノ
オクタン、ｌ、９−ジアミノノナン、１．１０−ジアミ
ノデカン、１．１２−ジアミノドデカンなどのジアミノ
アルカン類が挙げられる。

一般式（Ｐ）の化合物としては、グリシン、β−アラニ
ン、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、８−アミ
ノカプリル酸などのアミノカルボン酸類を例示すること
ができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、−般に次の
様な条件を選択して反応を行なうのが好ましい。

本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体の重量（ａ）
と式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物
の重量（ｂ）の比： ａ　：　ｂ＝１　：　０．３〜１０ より好ましくは、 ａ　：　ｂ−１：０．３〜３ 反応温度二〇〜１５０℃、より好ましくは室温〜１００
℃、 反応時間＝１〜６０時間、より好ましくは１〜３０時間
、 反応圧カニ常圧〜１０ａｔｍ　、より好ましくは常圧。

反応後の後処理についても特別な要件はなく、炉別、洗
浄等、通常行なわれている方法にて適宜実施される。

以上で得られた本発明に係るクロマトグラフィー用担体
は、式（Ｄ）又は一般式（Ｄｏ）の化合物を用いた場合
につき、次いで必要があれば、既に一般式で示した如く
活性支持基の末端のアミノ基を一般式（Ｅ）の酸無水物
を作用させることによりカルボキシル基を有する活性支
持基に変換することができる。反応の溶媒としては水が
通常用いられるが、その他テトラヒドロフラン、ジオキ
サンなどのエーテル類、酢酸などのカルボン酸類、ピリ
ジンなども用いられる。又、特に触媒は用いないでもよ
いが、塩酸、硫酸などの酸や、水酸化ナトリウムや炭酸
カリウムなどのアルカリの添加により、反応液のｐＨを
調整することもできる。

反応式中一般式（Ｅ）又は一般式（Ｅ′）のアルキレン
カルボン酸無水物としては、コハク酸無水物、ゲルター
ル酸無水物、アジピン酸無水物、ピメリン酸無水物、ス
ペリン酸無水物、アゼライン酸無水物、セパチン酸無水
物などを例示することができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、例えば前記
の式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物
のときと同様な条件を選択して反応を行なうことができ
る。

また、官能基としてカルボキシル基を有する結合基を導
入する別の方法として、水酸基を有するアミノカルボン
酸を本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキ
シ基に作用させて結合させる方法がある。

水酸基を有するアミノカルボン酸としては、セリン、ホ
モセリン、スレオニン、４−ヒドロキシプロリン、４−
アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、Ｎｕリス（ヒドロキシメ
チル）、メチルグリシン等のアミノ酸誘導体や、グルコ
サミン酸等のアミノ糖誘導体などを例示することができ
る。

結合の状態は、本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合
体のエポキシ基が水酸基を有するアミノカルボン酸のア
ミノ基と結合した結果、該エポキシ基は開環し、水酸基
と水酸基を有するカルボキシル残基が生成することにな
る。

水酸基を有するアミノカルボン酸を作用させる溶媒、触
媒及び反応条件については特に制限はなく、例えば前記
式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物を
作用させる場合と同じ様な条件にすることができる。

この様な水酸基を有するアミノカルボン酸を用いて結合
基を導入すると、前記基材以外、即ち結合基の部分に基
づく疎水性に由来する非特異的吸着をも排除することが
できる。

（Ｈｉ）官能基としてホルミル基を有する結合基の導入 例えば、前記（１）により得られた官能基としてエポキ
シ基を有する結合基は該官能基を容易に加水分解して１
，２−グリコールに変性することができ、この１．２−
グリコールは過ヨウ素酸を作用させることによりホルミ
ル基に変えることができる。

反応条件については特に制限はなく、常法に従って例え
ば溶媒として水、エタノール又は酢酸、もしくはこれら
の混合物などを用い、室温乃至は５０℃で過ヨウ素酸又
はその無機塩を作用させて行なうことができる。

結合基にベンズアミジンを共有結合させるに際しては、
例えばｐ−アミノベンズアミジンを用いるのが便利であ
る。このとき結合基が有する官能基に応じて必要であれ
ば、適宜触媒や反応試薬などを用いて適当な溶媒下で行
なうことが出来る。

例えば触媒としては、塩酸や炭酸ナトリウム又は炭酸水
素ナリトウムなどの酸、アルカリが主として官能基がエ
ポキシ基の場合に用いられ、又、例えば反応試薬として
はＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、ジシクロへキシルカ
ルボジイミド又は１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミドような縮合剤が官能基がカ
ルボキシル基の場合に、又水素化シアノホウ素ナトリウ
ムのような還元剤が官能基がホルミル基の場合に用−つ
１　− いられる等々を例示することが出来る。又溶媒としては
通常水が用いられるが必要に応じてリン酸や酢酸緩衝液
として用いることも出来、又塩化ナトリウムや硫酸ナト
リウムなどの無機塩類を添加して用いることも可能であ
る。

ｐ−アミノベンズアミジンとの反応条件については必ず
しも制限は無いが一般に次のような範囲で行なうことが
適当である。

結合基を結合させた水酸基変性ゲル状共重合体とｐ−ア
ミノベンズアミジンの重量比＝１＝０．０８〜０．３、
好ましくは１　：　０．０５〜０．２；反応温度：０℃
〜１００℃、好ましくは４℃〜８０℃；反応時間＝１〜
７２時間、好ましくは２〜１２時間。

反応後の後処理についても特別な要件は無く、炉別、洗
浄等通常行なわれている方法にて適宜実施される。

発明の効果 本発明により提供されるクロマトグラフィー用吸着担体
は、前述のアフィニティークロマトグラフィー用吸着担
体として望まれる性質を総て具備する基剤を用い、これ
に適当な結合基を介してベンズアミジンを共有結合させ
たものであるため、本発明の吸着担体を用いることによ
り、従来のソフトゲルを用いた吸着担体と同じようなア
フィニティークロマトグラフィー用充填剤として使用で
きるばかりでなく、特に耐圧カラムに充填し、加圧下で
も充分使用することができるということは、作業時間を
大幅に短縮させるため、従って分離・精製の能率を大き
く向上させ得るという最大の利点が得られるものであり
、この利点が例えば高速液体クロマトグラフィーへの応
用や工業用の分離精製・設備への応用を計るには不可欠
であることは言を俟たない。

特に前記の如く多くの利点を有するゲル状共重合体に対
し、やはり前記の如く結合基を介して共有結合によりベ
ンズアミジンを結合させた吸着担体は、例えば、一般に
用いられている臭化シアンを介したアフィニティークロ
マトグラフィー用吸着担体などに比して、使用時のリガ
ンドの脱落が無く、又結合基の長さを任意に調整するこ
とが可能であるため、リガンドの目的物質に対する吸着
能が優れており、更に非特異的吸着も非常に少ないこと
等も併せて本発明により提供されるクロマトグラフィー
用吸着担体の効果は大きい。

実施例 以下に、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体の製造
法について代表的な例を示し、更に具体的に説明する。

但し、これらは説明のための単なる例示であって、本発
明はこれらに何ら制限されないのは言うまでもない。

参考例　１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
１２ｇをアンモニア水（２５％）７２ｇ中に加え、６０
℃に加温しつつ、１２時間撹拌した。

次いで、ゲルを枦取し水で洗浄したところ、乾燥ゲル１
ｇ当り１．４ミリモルのアミノ基を担持させていること
が中和滴定により確められた。このゲルを０．２モルの
リン酸水素二カリウム塩水溶液３６ｇ中に加え、グルコ
ース７．９２ｇ及び水素化シアノホウ素ナトリウム７．
２ｇを加えて８０℃で１０時間撹拌した。ゲルを枦取し
水で洗浄し乾燥した後、無水酢酸１８ｇ中に加え酢酸ナ
トリウム１８ｇを加えて室温で２時間撹拌した。次いで
、ゲルを枦取し水で洗浄した。こうして得られたゲル（
水酸基変性ゲル状共重合体）を内径４．６　ｍ１１％長
さ７５ｍｎ＋のステンレス製カラムに充填し、高速液体
クロマトグラフ装置を用いて、ブタノール及びエチレン
グリコールの保持時間比を求めたところ、次のような結
果が得られた。

＊ブタノール／エチレングリコールの 保持時間比 参考例　２ 参考例１におけるブタノール及びエチレングリコールの
代りにα−キモトリプシノーゲンＡ及びオバルブミンを
用いて分析を行ったところ、次のような結果が得られた
。

溶離条件 溶離液■：０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１
７，（１） 溶離液■：溶離液■に１６８モル硫酸アンモニウム添加
、 溶離液■から溶離液■に６０分でリニアグラジェント 溶離速度：　１．Ｏｍｌ／分、 検出器：紫外分光光度計（２８０ｎｍ）参考例　３ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
〆４ｇをジメチルホルムアミド１２ｍ１中に加え、更に
グリセロール１５ｍ１及び粉末水酸化カリウム１．５ｇ
を加えて６０℃で３時間撹拌した。次いてゲルを枦取し
水で洗浄した後、参考例１と同様のカラムに充填した。

参考例２の（カラムＡ）の代りにこれを用い、他は参考
例２と同様の分析を行ったところ、α−キモトリプシノ
ーゲンＡ及びオバルブミンは保持されなかった。

実施例　１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
を参考例１と同様にアンモニア水及びグルコースを用い
て水酸基変性し、更にエビクロロヒドリンでエポキシ基
を導入したゲル（エポキシ基：乾燥ゲル１ｇ当りｏ、ｓ
ｇミリモル）２ｇの０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７，５）　６　ｍｌに於ける懸濁液にｐ−アミノ
ベンズアミジンニ塩酸塩３４０　ｍｇを加え５０℃で８
時間振盪した。ゲルを枦取し、水で洗浄した。こうして
得られた吸着担体は、乾燥ゲル１ｇ当りベンズアミジン
を０．１１５ミリモル担持させていることが、未反応の
ｐ−アミノベンズアミジンニ塩酸塩を高速液体クロマト
グラフィーで分析することにより確められた。

実施例　２ 実施例１において、エピクロロヒドリンの代りに１．４
−ブタンジオールジグリシジルエーテルを用いて得られ
たエポキシ基が導入されたゲル（エポキシ基：乾燥ゲル
１ｇ当り０．２２ミリモル）２．０ｇを過ヨウ素酸ナト
リウム２．０ｇを含む酢酸水（９：１）溶液２０ｍ１に
加え室温で２時間振盪した。ゲルを枦取し水洗後、０．
０３モル酢酸及び０．０６モル酢酸ナトリウムを含む水
溶液６ｍｌに加え、更にｐ−アミノベンズアミジンニ塩
酸塩０．３４ｇを加えて６０℃で８時間振盪した。ゲル
を枦取し１モル塩化ナトリウム水溶液及び水で洗浄した
後、水素化シアノホウ素ナトリウム４０ｍｇの０．２モ
ルリン酸水素二カリウム水溶液６ｍｌにおける溶液に加
えて、室温で１時間振盪した後、再びゲルを枦取して水
及びメタノールで洗った。こうして得られた吸着担体は
乾燥ゲル１ｇ当りベンズアミジンを０．０１２ミリモル
担持させていることが確められた。

実施例　３ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
を参考例１と同様にアンモニア水及びグルコースを用い
て水酸基変性し、次いでエチレングリコールジグリシジ
ルエーテルでエポキシ基を導入した後、更に４−アミノ
酪酸でカルボキシル基を導入したゲル２ｇを無水ジオキ
サンで充分洗浄した後、無水ジオキサン６ｍｌ中に加え
更にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド２３０　ｍｇ及びジ
シクロへキシルカルボジイミド４１２　ｍｇを加えて５
℃で４時間振盪した後ゲルを枦取し、無水ジオキサン２
０ｍ１．メタノール６　ｍｌ　ｓ冷水３ｍｌの順で素早
く洗浄した。このゲルをｐ−アミノベンズアミジンニ塩
酸塩３４０　ｍｇの０．１モルリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ６）６ｍｌにおける溶液に加え室温で一夜振盪し
た。次いでゲルを枦取し、水で洗った。

こうして得られた吸着担体は乾燥ゲル１ｇ当りベンズア
ミジン０．０２５　ミリモル担持させていることが確め
られた。

実施例　４ 実施例２で得られたエポキシ基が導入されたゲルを４−
アミノ酪酸と作用させて得たゲル（カルボキシル基：乾
燥ゲル１ｇ当り０．１４ミリモル）２ｇを０．０１モル
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）２０ｍｌに加え、５
℃に保ちつつ、ｐ−アミノベンズアミジンニ塩酸塩３４
０　ｍｇ及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド塩酸塩５７５　ｍｇを３回に分
けて加えて３時間振盪した。次いで４℃で一夜放置後、
ゲルを枦取し０．１規定塩化ナトリウムで洗った。こう
して得られた吸着担体は乾燥ゲル１ｇ当りベンズアミジ
ンを０゜Ｏ１８ミリモル担持させていることが確められ
た。

実施例　５ 実施例１で得られたエポキシ基が導入されたゲルを１，
３−ジアミノプロパンを作用させ、次いで無水コハク酸
を作用させてカルボキシル基を導入したゲル（カルボキ
シル基：乾燥ゲル１ｇ当り０．２２ミリモル）２ｇをテ
トラヒドロフラン６ｍｌに加え、ｐ−アミノベンズアミ
ジンニ塩酸塩３４０■及びジシクロへキシルカルボジイ
ミド４１２ｍｇを加えて５℃で４時間撹拌した。ゲルを
ン戸取しメタノール及び水で洗浄することにより乾燥ゲ
ル１ｇ当りベンズアミジンを０．０３５　ミリモル担持
させている吸着担体が得られた。

試験例 実施例３で得られた吸着担体を内径４．［ｉ＋ｏｎ＋、
長さ７５龍のステンレス製カラムに充填し高速液体クロ
マトグラフ装置を用いてトリプシン（シグマ社、タイプ
Ｉ）の分析を行ったところ、図のような結果が得られた
。

溶離条件 溶離液■：０．１モル酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，
０）に０．５モル塩化ナトリウム添加 溶離液■：０．１モル酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３，
０）に０．５モル塩化ナトリウム添加 溶離液■から溶離液■に３０分でリニアグラジェント 溶離速度：　　１．０ｍ１７分、 検出器：紫外分光光度計（２８０ｎｍ）図の斜線の分画
は酵素活性が確認された分画を示している。

【図面の簡単な説明】

図は本発明によるクロマトグラフィー用吸着担体を用い
た高速液体クロマトグラフ用カラムによる分離溶出のパ
ターンを示すクロマトグラム図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （Ａ）グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモ
   ノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレングリコールジビ
   ニルエステルを主成分とし、前記（Ａ）成分が（Ｂ）成
   分で架橋されたゲル状共重合体の前記（Ａ）成分に基づ
   くエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合した水酸基
   変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変性ゲル状
   共重合体に結合基を介して共有結合により結合したベン
   ズアミジンを含有する多孔性の共重合体から成ることを
   特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体。