JPH01112992A - Ｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
Ｌ−イソロイシンの製造法Info
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- JPH01112992A JPH01112992A JP27118087A JP27118087A JPH01112992A JP H01112992 A JPH01112992 A JP H01112992A JP 27118087 A JP27118087 A JP 27118087A JP 27118087 A JP27118087 A JP 27118087A JP H01112992 A JPH01112992 A JP H01112992A
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- Japan
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- isoleucine
- acid
- ethanol
- brevibacterium
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
韮亘ｉ！
本発明は、酵素法によるＬ−イソロイシンの製造法に関
するものである。
するものである。
本発明によれば高収量で効率よくＬ−イソロイシンを製
造することができる。
造することができる。
Ｌ−イソロイシンは必須アミノ酸として、へ間幹よび動
物の栄養上重畳な役割りをするアミノ酸であり、医薬、
食品、飼料添加剤等としてその需要が近年急激に増加し
ククｂる。
物の栄養上重畳な役割りをするアミノ酸であり、医薬、
食品、飼料添加剤等としてその需要が近年急激に増加し
ククｂる。
ｊ力ｕｕ１
Ｌ−インクイシンの工業的製造法としては、他のアミノ
酸の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成法
ではＬ体のみの製造は困難で６９、主に醗酵法により生
産が行われ１いる。醗酵法としてはＤＬ−α−アミノ酪
酸、スレオニン等のＬ−イソロイシンの前駆物質を使用
する方法（特公昭４３−８７０９号、同４０−２８８０
号公報等）、前駆物質を特に加えない所謂直接醗酵法（
特公昭３８−７０９１号、特開昭４９−９３５８６号公
報等）がめる。
酸の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成法
ではＬ体のみの製造は困難で６９、主に醗酵法により生
産が行われ１いる。醗酵法としてはＤＬ−α−アミノ酪
酸、スレオニン等のＬ−イソロイシンの前駆物質を使用
する方法（特公昭４３−８７０９号、同４０−２８８０
号公報等）、前駆物質を特に加えない所謂直接醗酵法（
特公昭３８−７０９１号、特開昭４９−９３５８６号公
報等）がめる。
一力酵素法としては、アンモニウムイオンまたはイソロ
イシン以外のＬ−若しくはＤＬ−アミノ酸の存在下に、
Ｄ−１Ｌ−１またはＤＬ−α−ケト−β−メチルバレリ
アン酸からＬ−イソロイシンを製造する方法（特公昭４
６−２９７８９号公報）、アン彎二りムイオンまたはイ
ンロイシン以外のＬ−若しくはＤＬ−アミノ酸の存在下
に、Ｄ−イソロイシンるるいはＤ−アロインロイシンの
単独もしくは混合物、又はこれらとその゛光学異性体と
の適宜混合物に作用させてＬ−イソロイシンを製造する
方法（４！公昭４６−２９７８８号公報）、セラデア（
５ｅｒｒａｔｉａ ）属細菌の固定化物を用いてグルコ
ースとＤ−スレオニンからＬ−イソロイシンを製造する
方法（日本醗酵工学会大会講演要旨＊ｐ、４７〜４８昭
和５２年度）等が報告されている。しかしながらこれら
の方法は、原料費が嵩むとか収率が低い課題を抱えてい
る。
イシン以外のＬ−若しくはＤＬ−アミノ酸の存在下に、
Ｄ−１Ｌ−１またはＤＬ−α−ケト−β−メチルバレリ
アン酸からＬ−イソロイシンを製造する方法（特公昭４
６−２９７８９号公報）、アン彎二りムイオンまたはイ
ンロイシン以外のＬ−若しくはＤＬ−アミノ酸の存在下
に、Ｄ−イソロイシンるるいはＤ−アロインロイシンの
単独もしくは混合物、又はこれらとその゛光学異性体と
の適宜混合物に作用させてＬ−イソロイシンを製造する
方法（４！公昭４６−２９７８８号公報）、セラデア（
５ｅｒｒａｔｉａ ）属細菌の固定化物を用いてグルコ
ースとＤ−スレオニンからＬ−イソロイシンを製造する
方法（日本醗酵工学会大会講演要旨＊ｐ、４７〜４８昭
和５２年度）等が報告されている。しかしながらこれら
の方法は、原料費が嵩むとか収率が低い課題を抱えてい
る。
１１ＬすＬＬ
本発明は、ビオチン要求性のプレビバクテリウＡ （Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）属に属する微生物菌体
の存在下、α−ケト酪酸又はその塩及びピルピン酸又は
七の塩を、少なくともエタノールを含有する水溶液中で
酵素反応させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せし
め、これからＬ−イソロイシンを採取することを特徴と
するＬ−イソロイシンの製造法を提供するものでろる。
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）属に属する微生物菌体
の存在下、α−ケト酪酸又はその塩及びピルピン酸又は
七の塩を、少なくともエタノールを含有する水溶液中で
酵素反応させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せし
め、これからＬ−イソロイシンを採取することを特徴と
するＬ−イソロイシンの製造法を提供するものでろる。
発明の効果
本発明によれば、ピルピン酸又はその塩を酵素反応水溶
液に添加することで、α−ケト酪酸又はその塩から、高
収量で効率よくＬ−イソロイシン゛が製造できる。本発
明の方法において、酵素反応時に用いられるエタノール
を含有する水溶液は、発酵法の場合に用いられる培地の
滅菌等煩雑な操作が必要でないので、生産管理は容易で
るる。
液に添加することで、α−ケト酪酸又はその塩から、高
収量で効率よくＬ−イソロイシン゛が製造できる。本発
明の方法において、酵素反応時に用いられるエタノール
を含有する水溶液は、発酵法の場合に用いられる培地の
滅菌等煩雑な操作が必要でないので、生産管理は容易で
るる。
本発明の方法は、従来このような酵素法にょるＬ−イソ
ロイシンの生産は、報告が無く又実施されてもいなく、
本発明は新規な方法である。
ロイシンの生産は、報告が無く又実施されてもいなく、
本発明は新規な方法である。
１１ｖリリ杉迂ｉ哩
本発明に使用される微生物は、ビオチン要求性のプレビ
パクテリクＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）
（４に属するものでめ９、好ましくはエタノール資化性
のものでるる。このなかにはＬ−イノロイシン生産菌が
含まれる。本発明に使用される微生物菌体としては例え
ば、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３（
微工研菌寄 第３０６８号）、ブレビバクテリウム・フ
ラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕ
ｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄゛第
３８１２号）、プレヒハクテリウＡｌ１７ラバ！ （９
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ ）ＭＪ−
２ａ３−ＡＢＴ−１１（微工研菌寄 第８４２３号）及
びブレビバクテリウム・フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−Ａ
ＢＤ−２１（微工研菌寄 第８０５５号）等でるや、こ
れらの菌が本発明に好適に用いられる。
パクテリクＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）
（４に属するものでめ９、好ましくはエタノール資化性
のものでるる。このなかにはＬ−イノロイシン生産菌が
含まれる。本発明に使用される微生物菌体としては例え
ば、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３（
微工研菌寄 第３０６８号）、ブレビバクテリウム・フ
ラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕ
ｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄゛第
３８１２号）、プレヒハクテリウＡｌ１７ラバ！ （９
ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ ）ＭＪ−
２ａ３−ＡＢＴ−１１（微工研菌寄 第８４２３号）及
びブレビバクテリウム・フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−Ａ
ＢＤ−２１（微工研菌寄 第８０５５号）等でるや、こ
れらの菌が本発明に好適に用いられる。
なお、上記の（微工研菌寄 第３８１２号）は、（微工
研菌寄 第３０６８号）を親株としてＤＬ−ａ−アミノ
酪酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微生物
である（％公昭５９−２８３９８号公報３〜４欄参照）
。（微工研菌寄 第８４２３号）は、（微工研菌寄 第
３０６８号）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トランス
アミナーゼ高活性変異株である（特願昭６０−１９０６
０９号明細書３〜５頁参照）。また、（微工研菌寄第８
０５５号）は（微工研菌寄 第３０６８号）を親株とし
たｐ−ａ−アミノ醋酸デアミナーゼ高活性変異株でるる
（％開昭６１−１７７９９３号公報参照）。
研菌寄 第３０６８号）を親株としてＤＬ−ａ−アミノ
酪酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微生物
である（％公昭５９−２８３９８号公報３〜４欄参照）
。（微工研菌寄 第８４２３号）は、（微工研菌寄 第
３０６８号）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トランス
アミナーゼ高活性変異株である（特願昭６０−１９０６
０９号明細書３〜５頁参照）。また、（微工研菌寄第８
０５５号）は（微工研菌寄 第３０６８号）を親株とし
たｐ−ａ−アミノ醋酸デアミナーゼ高活性変異株でるる
（％開昭６１−１７７９９３号公報参照）。
これらの微生物菌体の他にブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ ） ＡＴＣＣ６８７１、同ＡＴＣＣ
１３７４５、同ＡＴＣＣ１３７４６、プレビバクテリク
ムφデバリカタ／４ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｄｉｖａｒｉｃａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１４０２０等を用
いること４できる。
ニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ ） ＡＴＣＣ６８７１、同ＡＴＣＣ
１３７４５、同ＡＴＣＣ１３７４６、プレビバクテリク
ムφデバリカタ／４ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｄｉｖａｒｉｃａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１４０２０等を用
いること４できる。
本発明に見いられるビオチン要求性のブレビバクテリウ
ム属に属する微生物菌体は、微生物１体そのままで用い
ることもできるし、又これらを公知の手法で固定化した
固定化物を使用することもできる。この固定化手法とし
ては、菌体をアクリルアミド等の重合性モノマーを用い
たムアルギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な担体
に不溶化させる等がある。
ム属に属する微生物菌体は、微生物１体そのままで用い
ることもできるし、又これらを公知の手法で固定化した
固定化物を使用することもできる。この固定化手法とし
ては、菌体をアクリルアミド等の重合性モノマーを用い
たムアルギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な担体
に不溶化させる等がある。
本発明の方法に使用される上記のビオチン要求性のブレ
ビバクテリウム属に属する微生物菌体の調製に使用する
培地は、特に限定されるものではなく一般の微生物に使
用されるものでよい。中でも好ましいものは、エタノー
ルを主炭素源とする培地である。
ビバクテリウム属に属する微生物菌体の調製に使用する
培地は、特に限定されるものではなく一般の微生物に使
用されるものでよい。中でも好ましいものは、エタノー
ルを主炭素源とする培地である。
本発明に使用する微生物菌体の調整に使用する培地の窒
素源としてはアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、硝酸アンそニクム、尿素等を単独若しくは混
合して用いることが出来る。
素源としてはアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、硝酸アンそニクム、尿素等を単独若しくは混
合して用いることが出来る。
無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素
カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他に
菌の生育及びＬ−イソロイシン生成に必要であれば、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカ
ー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添加
し用いる。
カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられる。この他に
菌の生育及びＬ−イソロイシン生成に必要であれば、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカ
ー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添加
し用いる。
培養は通気攪拌、振盪等の好気的条件下で行い、培養温
度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行う。培
養途中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜Ｂ付近にて行
い、培養中のｐＨの調整罠は酸、アルカリを添加して行
う。
度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行う。培
養途中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜Ｂ付近にて行
い、培養中のｐＨの調整罠は酸、アルカリを添加して行
う。
培養開始時のエタノール濃度は好ましくは１〜５容量う
、更に好ましくは２〜３容量多が適する。
、更に好ましくは２〜３容量多が適する。
培養期間は２〜９日間、最適期間は４〜７日間でるる。
このようにして得られた培養物から国体を集めて、水又
は適当な緩衝液で洗浄し、本発明の方法の酵素反応に使
用する。
は適当な緩衝液で洗浄し、本発明の方法の酵素反応に使
用する。
本発明の方法においては、上記で調製された微生物菌体
（ここには、その固定化物も含まれる）の存在下、α−
ケト酪酸又はその塩及びピルピン酸又はその塩を、少な
くともエタノールを含有する水溶液にて酵素反応させる
。ここで該水溶液に添加されるエタノールの濃度は０．
５〜４０ 容量％、好ましくは１〜２０容量５である。
（ここには、その固定化物も含まれる）の存在下、α−
ケト酪酸又はその塩及びピルピン酸又はその塩を、少な
くともエタノールを含有する水溶液にて酵素反応させる
。ここで該水溶液に添加されるエタノールの濃度は０．
５〜４０ 容量％、好ましくは１〜２０容量５である。
該水溶液は、上記の様にエタノールを含有する水るるい
はリン酸又はトリス塩酸等の緩衝液を用いることもでき
るが、好ましくはエタノールを含み頁に窒素源あるいは
無機塩類を含む水溶液が用いられる。
はリン酸又はトリス塩酸等の緩衝液を用いることもでき
るが、好ましくはエタノールを含み頁に窒素源あるいは
無機塩類を含む水溶液が用いられる。
本発明の方法において、酵素反応系に添加できる窒素源
るるいは無機塩類としては、通常の微生物菌体の培養に
使用される培地に添加されるものから選んで使用するこ
とができる。ただし、この場合、ビオチンを含まないも
のを用いる必要がｂる。ビオチンを含有する窒素源等を
使用すると、酵素反応に使用する微生物菌体の増殖が起
や、このために原料エタノールの使用量が増大し、副生
物のため目的物の分離・精製が煩雑になる等の問題が生
ずる。
るるいは無機塩類としては、通常の微生物菌体の培養に
使用される培地に添加されるものから選んで使用するこ
とができる。ただし、この場合、ビオチンを含まないも
のを用いる必要がｂる。ビオチンを含有する窒素源等を
使用すると、酵素反応に使用する微生物菌体の増殖が起
や、このために原料エタノールの使用量が増大し、副生
物のため目的物の分離・精製が煩雑になる等の問題が生
ずる。
本発明に用いられる窒素源の具体例としては、アンモニ
ア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒素源等が例示で
き、また無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン
酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、
硫酸鉄等が例示される。これらの窒素源、無機塩は、単
独でも２種以上混合して用いることもできる。
ア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒素源等が例示で
き、また無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン
酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、
硫酸鉄等が例示される。これらの窒素源、無機塩は、単
独でも２種以上混合して用いることもできる。
これら窒素源及び／又は無機塩の水溶液とじての濃度は
、通常の微生物菌体の培養に使用される培地と同程度の
範囲でよく、特に限定されない。
、通常の微生物菌体の培養に使用される培地と同程度の
範囲でよく、特に限定されない。
この様な反応液の一例を示すと、ＣＮＨａ）ｘ８０ａ２
ｆ／ｌ； Ｋ出ＰＯａ Ｏ−５ｆ／Ｌ ： Ｋ＊Ｈ
ＰＯａ Ｏ−５悴： ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｆ
／Ｌ ： ＦｅＳＯ４＠ ７＆０２０ ｐｐｍ ： Ｍ
ｎ５Ｏａ ・４〜６Ｈｚ０ ２０ ｐｐｍ含有するｐ）
（７，６の水溶液が６る。
ｆ／ｌ； Ｋ出ＰＯａ Ｏ−５ｆ／Ｌ ： Ｋ＊Ｈ
ＰＯａ Ｏ−５悴： ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５ｆ
／Ｌ ： ＦｅＳＯ４＠ ７＆０２０ ｐｐｍ ： Ｍ
ｎ５Ｏａ ・４〜６Ｈｚ０ ２０ ｐｐｍ含有するｐ）
（７，６の水溶液が６る。
上述の様に、本発明に使用される酵素反応の反応液には
、ビオチン又はビオチンを含む天然物は含有されない。
、ビオチン又はビオチンを含む天然物は含有されない。
ビオチンの含有されないことの明らかな化学構造公知の
アミノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはできる。
アミノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはできる。
本発明の方法においては、α−ケト酪酸又はその塩およ
びピルピン酸又はその塩の酵素反応時の濃度には特に制
限はないが、一般にはそれぞれ０．１〜２０％（ｗｔ／
ｖｏＡ ） 、好ましくは０．５〜１０％（ｗｔ／ｖｏ
Ａ ）の濃度範囲で使用するのが適当でるる。又、Ｉｔ
＊菌体の使用量も特に制限されるものではないが、一般
に１〜５０％（ｗｔ／ｖｏＡ ）の濃度で使用すること
が出来る。
びピルピン酸又はその塩の酵素反応時の濃度には特に制
限はないが、一般にはそれぞれ０．１〜２０％（ｗｔ／
ｖｏＡ ） 、好ましくは０．５〜１０％（ｗｔ／ｖｏ
Ａ ）の濃度範囲で使用するのが適当でるる。又、Ｉｔ
＊菌体の使用量も特に制限されるものではないが、一般
に１〜５０％（ｗｔ／ｖｏＡ ）の濃度で使用すること
が出来る。
本発明において、酵素反応は、約２０〜約５０℃、好ま
しくは約３０〜約４０℃の温度で、通常約ｌＯ〜約７２
時間行われる。
しくは約３０〜約４０℃の温度で、通常約ｌＯ〜約７２
時間行われる。
上記のような反応方法によって得られる反応液中に生成
したＬ−イソロイシンの分離・精製は、公知のイオン交
換樹脂処理法るるいは、沈殿法等により行うことができ
る。
したＬ−イソロイシンの分離・精製は、公知のイオン交
換樹脂処理法るるいは、沈殿法等により行うことができ
る。
実施例
以下の実験例において、Ｌ−イソロイシンの定性は、ペ
ーパークロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、
微生物定量法による生物活性値により確認した。定量は
ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｅｏｎｏ
ｓｔｏｅ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ） Ａ ＴＣ
Ｏ８Ｇ４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と高速液
体クロマトグラフィー（島津ＬＣ−５人）とを帆用して
行った。また、下記の実験例において％と表したのは重
量％を意味する。
ーパークロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、
微生物定量法による生物活性値により確認した。定量は
ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｅｏｎｏ
ｓｔｏｅ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ） Ａ ＴＣ
Ｏ８Ｇ４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と高速液
体クロマトグラフィー（島津ＬＣ−５人）とを帆用して
行った。また、下記の実験例において％と表したのは重
量％を意味する。
実施例−１
培地（尿素０．４％、硫酸アンモニウム１．４％、ＫＨ
ｚＰＯａ ０．０５％、ＫｓＨＰＯａ Ｑ−０５％、Ｍ
ｇ Ｓ ０４・−７Ｈ４０２ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４”４〜
６Ｈｚ０ ２ｐｐｍ％ＺｎＳＯ４１）ＩｚＯｚｐｐｍｌ
Ｎａｃｔｚｐｐｍ、ビオチン２００μｆ／Ｌ 、 チア
ミン・ＨＣｔｌ ００μｆ／ｌ、 カザミノ酸 ０．１
％、酵母エキス ０．１％）１００ｄを５００ｄ容三角
フラスコに分注、滅菌（滅菌後１）Ｈ７，０） シタ後
ブレビバクテリウム・フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔ
ｓｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３（微
工研菌寄 第３０６８号）を植菌し、無菌的にエタノー
ルを２ｇＪ加え、３′０℃にて２日間振盪培養を行った
。
ｚＰＯａ ０．０５％、ＫｓＨＰＯａ Ｑ−０５％、Ｍ
ｇ Ｓ ０４・−７Ｈ４０２ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４”４〜
６Ｈｚ０ ２ｐｐｍ％ＺｎＳＯ４１）ＩｚＯｚｐｐｍｌ
Ｎａｃｔｚｐｐｍ、ビオチン２００μｆ／Ｌ 、 チア
ミン・ＨＣｔｌ ００μｆ／ｌ、 カザミノ酸 ０．１
％、酵母エキス ０．１％）１００ｄを５００ｄ容三角
フラスコに分注、滅菌（滅菌後１）Ｈ７，０） シタ後
ブレビバクテリウム・フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔ
ｓｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３（微
工研菌寄 第３０６８号）を植菌し、無菌的にエタノー
ルを２ｇＪ加え、３′０℃にて２日間振盪培養を行った
。
次に、本培養培地（［酸アンモニウム２．３％、ＫＨｚ
ＰＯａ ０．０５％、＆ＨＰ０４Ｇ−０５％、ＭｇＳＯ
４・７ＨｚＯＯ，０５％、Ｆｅ５Ｏａ・７Ｈｚ０ ２０
ｐｐｍ。
ＰＯａ ０．０５％、＆ＨＰ０４Ｇ−０５％、ＭｇＳＯ
４・７ＨｚＯＯ，０５％、Ｆｅ５Ｏａ・７Ｈｚ０ ２０
ｐｐｍ。
Ｍ１１ＳＯ４・ｎＨｚｏ ２０ ｐｐｍ、 ビオチ
ン ２００ ｆｉｔ／Ｌ 。
ン ２００ ｆｉｔ／Ｌ 。
チアミン・ＨＣＬ １００ ｐｆ／Ｌ、 ｈｆミ／酸
０．３％、酵母エキス０．３％）１ｏｏｏ＊を２を容通
気攪拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、エ
タノールの２０ｄと前記前培養物の２０ｄを添加して、
回転数１００ Ｏｒｐｍ、通気量１ｗｒｎ、温度３３℃
ｐＨ７，６にて４８時間培養を行った。
０．３％、酵母エキス０．３％）１ｏｏｏ＊を２を容通
気攪拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、エ
タノールの２０ｄと前記前培養物の２０ｄを添加して、
回転数１００ Ｏｒｐｍ、通気量１ｗｒｎ、温度３３℃
ｐＨ７，６にて４８時間培養を行った。
甲
尚、エタノールは、培養中培蔵４濃度が２容量培養終了
後、培養物５００ｄから遠心分離にて集菌した。これを
脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を、反応液（（Ｎ
Ｈ４）ｚ ８０４ ２．３％； ＫＨｚＰＯ４０，０５
％： ＩＣｘＨＦＫ）４ｏ、ｏ ５％： ＭｇＳＯ４・
７Ｈ２０Ｏ，ＯＳ％： Ｆｅ５Ｏａ ・７＆０ ２０
ｐｐｆｎ ： ＭｎＳＯ４＠４〜６Ｈ２０２０ｐｐｍ
：チアミン−塩酸１００μｆ／１１ α−ケト酪酸ンー
グ１．０％；ピルピン酸ソーダ０．４％（ｐＨｙ、ｅ）
）ｘｏｏｏｌＩｊに懸濁後、咳懸濁液を２を容通気攪拌
槽に仕込み、エタノール２０ｄを添加して、回転数３０
Ｏｒｐｍ、溶存酸素濃度Ｏ０ｌ ＰＰｍ５ ａ度３３
℃、ｐＨ７，６にて１５時間反応を行った。
後、培養物５００ｄから遠心分離にて集菌した。これを
脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を、反応液（（Ｎ
Ｈ４）ｚ ８０４ ２．３％； ＫＨｚＰＯ４０，０５
％： ＩＣｘＨＦＫ）４ｏ、ｏ ５％： ＭｇＳＯ４・
７Ｈ２０Ｏ，ＯＳ％： Ｆｅ５Ｏａ ・７＆０ ２０
ｐｐｆｎ ： ＭｎＳＯ４＠４〜６Ｈ２０２０ｐｐｍ
：チアミン−塩酸１００μｆ／１１ α−ケト酪酸ンー
グ１．０％；ピルピン酸ソーダ０．４％（ｐＨｙ、ｅ）
）ｘｏｏｏｌＩｊに懸濁後、咳懸濁液を２を容通気攪拌
槽に仕込み、エタノール２０ｄを添加して、回転数３０
Ｏｒｐｍ、溶存酸素濃度Ｏ０ｌ ＰＰｍ５ ａ度３３
℃、ｐＨ７，６にて１５時間反応を行った。
反応終了後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分間、４
℃）にて除菌した上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。その結果、上清液１ｄ当ｊ） ５．１岬のＬ−イソ
ロイシンの生成が認められた。尚、ピルピン酸ナトリウ
ムのみを除いた反応液を用いた場合には、Ｌ−イソロイ
シンの生成は、３．５ｊ９／ｄでめった。
℃）にて除菌した上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。その結果、上清液１ｄ当ｊ） ５．１岬のＬ−イソ
ロイシンの生成が認められた。尚、ピルピン酸ナトリウ
ムのみを除いた反応液を用いた場合には、Ｌ−イソロイ
シンの生成は、３．５ｊ９／ｄでめった。
また、上記上清液５ＯＯｄを、強酸性陽イオン交換樹脂
（を型）のカラムに通してＬ−イソロイシンを吸着させ
、水洗後、０．５規定アンモニア水で溶出させたのち、
Ｌ−イソロイシン画分を濃縮シ、冷エタノールでＬ−イ
ソロイシンの結晶全析出させ、１５８０１１Ｆの粗結晶
を得た。
（を型）のカラムに通してＬ−イソロイシンを吸着させ
、水洗後、０．５規定アンモニア水で溶出させたのち、
Ｌ−イソロイシン画分を濃縮シ、冷エタノールでＬ−イ
ソロイシンの結晶全析出させ、１５８０１１Ｆの粗結晶
を得た。
実施例−２
実施例−１と同様の条件にて、プレビバクテリクム・フ
ラバＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕ
ｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄 第
３８１２号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に
て反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量した
。その結果、上清液１ｄ当りｓ、ｏＨＩのＬ−イソロイ
シンの生成が認められた。
ラバＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕ
ｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄 第
３８１２号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に
て反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量した
。その結果、上清液１ｄ当りｓ、ｏＨＩのＬ−イソロイ
シンの生成が認められた。
尚、ピルピン酸ナトリウムのみを除いた反応液を用いた
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．５η／−１
であった。
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．５η／−１
であった。
また、実施例−１と同様の操作にて反応終了上清液５０
０４からＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
５７０１１ｑで６つた。
０４からＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
５７０１１ｑで６つた。
実施例−３
実施例−１と同様の条件にて、プレビバクテリウムーフ
ラバＡ （Ｊ３ｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢＴ−ｔ １（微工研菌
寄 第８４２３号）を培養し、また実施例−１と同様の
条件にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定
量した。その結果、上清液１ｗＬｌ当り５．３岬のＬ−
イソロイシンの生成が認められた。
ラバＡ （Ｊ３ｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢＴ−ｔ １（微工研菌
寄 第８４２３号）を培養し、また実施例−１と同様の
条件にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定
量した。その結果、上清液１ｗＬｌ当り５．３岬のＬ−
イソロイシンの生成が認められた。
尚、ピルピン酸ナトリウムのみを除いた反応液を用いた
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．４η／ｄで
めった。
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．４η／ｄで
めった。
また、実施例−１と同様の操作にて反応終了上清液５０
０ｄからＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
６８０Ｍｇであった。
０ｄからＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
６８０Ｍｇであった。
実施例−４
実施例−１と同様の条件にて、プレビバクテリクム拳フ
ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｔ
ｎ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄
第８０５５号）を培養し、また実施例−１と同様の条件
にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。その結果、上清液１ｄ当た９５．０１９のＬ−イソ
ロイシンの生成が認められた。
ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｔ
ｎ ） Ｍ Ｊ−２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄
第８０５５号）を培養し、また実施例−１と同様の条件
にて反応させた後上清液中のＬ−イソロイシンを定量し
た。その結果、上清液１ｄ当た９５．０１９のＬ−イソ
ロイシンの生成が認められた。
尚、ピルピン酸ナトリウムのみを除いた反応液を用いた
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．４岬／ｄで
ろった。
場合には、Ｌ−イソロイシンの生成は、３．４岬／ｄで
ろった。
また、実施例−１と同様の操作にて反応終了上清液５０
０ｄからＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
５７０１９であった。
０ｄからＬ−イソロイシンの粗結晶を回収したところ１
５７０１９であった。
特許出願人 三菱油化株式会社
代理人 弁理士 長 谷 正 久
代理人 弁理士 山 本 隆 也
Claims (2)
- （１）ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物菌体の存在下
、α−ケト酪酸又はその塩及びピルピン酸又はその塩を
、少なくともエタノールを含有する水溶液中で酵素反応
させて該溶液中にＬ−イソロイシンを生成せしめ、これ
からＬ−イソロイシンを採取することを特徴とするＬ−
イソロイシンの製造法。 - （２）ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物菌体がエタノ
ール資化性の微生物菌体である特許請求の範囲第１項記
載のＬ−イソロイシンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27118087A JP2582808B2 (ja) | 1987-10-27 | 1987-10-27 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27118087A JP2582808B2 (ja) | 1987-10-27 | 1987-10-27 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01112992A true JPH01112992A (ja) | 1989-05-01 |
| JP2582808B2 JP2582808B2 (ja) | 1997-02-19 |
Family
ID=17496461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27118087A Expired - Lifetime JP2582808B2 (ja) | 1987-10-27 | 1987-10-27 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2582808B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6111132B2 (ja) * | 2013-04-23 | 2017-04-05 | 新日鉄住金エンジニアリング株式会社 | 漏水排出構造 |
-
1987
- 1987-10-27 JP JP27118087A patent/JP2582808B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2582808B2 (ja) | 1997-02-19 |
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