JPH0314436B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0314436B2 JPH0314436B2 JP6501083A JP6501083A JPH0314436B2 JP H0314436 B2 JPH0314436 B2 JP H0314436B2 JP 6501083 A JP6501083 A JP 6501083A JP 6501083 A JP6501083 A JP 6501083A JP H0314436 B2 JPH0314436 B2 JP H0314436B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- resistance
- sulfaguanidine
- producing
- brevibacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−トリプトフアン（以
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
の微生物を用いて糖類等の炭素源から直接発酵法
によりトリプトフアンを製造する方法を開発した
（特公昭48−18828、特開昭55−162771）、またこ
れらの菌株にフエニルアラニン、チロシン等の栄
養要求性、フエニルアラニン又はチロシンのアナ
ログに対する耐性を付与することにより（特公昭
48−18828）、又はセリンアナログに対する耐性を
付与することにより（特開昭57−174096）トリプ
トフアンの蓄積量が増加することも明らかにし
た。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価に製造する方法を開発すべく研究を行つた結果
ブレビバクテリウム属の従来知られているトリプ
トフアン生産菌に更にサルフア剤として知られて
いるサルフアグアニジンに対する耐性を付与せし
めたところ、従来のトリプトフアン生産菌より更
に大量にトリプトフアンを生産することを見い出
した。この発明はこの知見に基づいて更に研究の
結果、完成されたものである。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物は、ブレビバクテリウム属に属し、上
述のトリプトフアン生産に必要な性質、例えば５
−メチルトリプトフアンに耐性を有し、かつサル
フアグアニジンに耐性を有する変異株である。こ
れらの性質の他に更にＬ−フエニルアラニン、Ｌ
−チロシン、Ｌ−ヒスチジン等の栄養要求性、フ
エニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、ア
ザセリン等に対する薬剤耐性を付与した菌株も含
まれる。 本発明の変異株の親株は、いわゆるＬ−グルタ
ミン酸生産菌として知られているブレビバクテリ
ウム属の微生物である。例えばブレビバクテリウ
ム フラバムATCC14067、ブレビバクテリウム
デイバリカタムATCC14020、ブレビバクテリ
ウム ラクトフアーメンタムATCC13869、ブレ
ビバクテリウム ロゼウムATCC13825等がある。
本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親株
として変異操作を施して、トリプトフアン生成に
必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン耐
性及びサルフアグアニジン耐性を付与することに
よつて得られる。この場合両耐性の付与の順序は
任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方法、
例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、ブレビバクテ
リウム フラバムAJ12022（FERM−P7034、
FERM BP−475）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 ブレビバクテリウム フラバムAJ11667
（FERM−P5907、FERM BP−114）（５−フロ
ロトリプトフアン耐性、パラーフロロフエニルア
ラニン耐性、アザセリン耐性、Ｌ−チロシン要求
性、Ｌ−メチオニン要求性）（特開昭57−174096）
を親株とし、これを200μｇ／mlのNGで30℃15分
間処理した（生残率11％）。ついで第一表に示す
合成培地に親株が生育できな
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
の微生物を用いて糖類等の炭素源から直接発酵法
によりトリプトフアンを製造する方法を開発した
（特公昭48−18828、特開昭55−162771）、またこ
れらの菌株にフエニルアラニン、チロシン等の栄
養要求性、フエニルアラニン又はチロシンのアナ
ログに対する耐性を付与することにより（特公昭
48−18828）、又はセリンアナログに対する耐性を
付与することにより（特開昭57−174096）トリプ
トフアンの蓄積量が増加することも明らかにし
た。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価に製造する方法を開発すべく研究を行つた結果
ブレビバクテリウム属の従来知られているトリプ
トフアン生産菌に更にサルフア剤として知られて
いるサルフアグアニジンに対する耐性を付与せし
めたところ、従来のトリプトフアン生産菌より更
に大量にトリプトフアンを生産することを見い出
した。この発明はこの知見に基づいて更に研究の
結果、完成されたものである。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物は、ブレビバクテリウム属に属し、上
述のトリプトフアン生産に必要な性質、例えば５
−メチルトリプトフアンに耐性を有し、かつサル
フアグアニジンに耐性を有する変異株である。こ
れらの性質の他に更にＬ−フエニルアラニン、Ｌ
−チロシン、Ｌ−ヒスチジン等の栄養要求性、フ
エニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、ア
ザセリン等に対する薬剤耐性を付与した菌株も含
まれる。 本発明の変異株の親株は、いわゆるＬ−グルタ
ミン酸生産菌として知られているブレビバクテリ
ウム属の微生物である。例えばブレビバクテリウ
ム フラバムATCC14067、ブレビバクテリウム
デイバリカタムATCC14020、ブレビバクテリ
ウム ラクトフアーメンタムATCC13869、ブレ
ビバクテリウム ロゼウムATCC13825等がある。
本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親株
として変異操作を施して、トリプトフアン生成に
必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン耐
性及びサルフアグアニジン耐性を付与することに
よつて得られる。この場合両耐性の付与の順序は
任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方法、
例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、ブレビバクテ
リウム フラバムAJ12022（FERM−P7034、
FERM BP−475）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 ブレビバクテリウム フラバムAJ11667
（FERM−P5907、FERM BP−114）（５−フロ
ロトリプトフアン耐性、パラーフロロフエニルア
ラニン耐性、アザセリン耐性、Ｌ−チロシン要求
性、Ｌ−メチオニン要求性）（特開昭57−174096）
を親株とし、これを200μｇ／mlのNGで30℃15分
間処理した（生残率11％）。ついで第一表に示す
合成培地に親株が生育できな
【表】
い濃度の1200μｇ／mlになるようにサルフアグア
ニジンを添加して平板培地を作製し、これに変異
処理したAJ 11667を塗布し、30℃９日間放置後、
コロニーとして生育する菌株即ちサルフアグアニ
ジン耐性変異株を採取し、このうちトリプトフア
ン生産能のすぐれた変異株AJ12022（FERM−
P7034、FERM BP−475）（サルフアグアニジン
耐性、５−フロロトリプトフアン耐性、パラーフ
ロロフエニルアラニン耐性、アザセリン耐性、Ｌ
−チロシン要求性、Ｌ−メチオニン要求性）を採
取した。この変異株は実施例に示すように親株よ
りトリプトフアンを68％多く生成した。 次にこのAJ12022株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す合成培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して、平板
培地（直径8.5cm）を作り、各々の培地に、完全
培地（酵母エキス10ｇ／、ポリペプトン10ｇ／
、塩化ナトリウム５ｇ／、グルコース５ｇ／
、Ｌ−メチオニン200mg／、Ｌ−チロシン200
mg／を含み、PH7.0）に生育したブレビバクテ
リウム フラバムAJ11667及びブレビバクテリウ
ム フラバムAJ12022をおよそ107コ接種したの
ち30℃で４日間培養を行い、生成したコロニー数
を調べた。その結果を第二表に示す。
ニジンを添加して平板培地を作製し、これに変異
処理したAJ 11667を塗布し、30℃９日間放置後、
コロニーとして生育する菌株即ちサルフアグアニ
ジン耐性変異株を採取し、このうちトリプトフア
ン生産能のすぐれた変異株AJ12022（FERM−
P7034、FERM BP−475）（サルフアグアニジン
耐性、５−フロロトリプトフアン耐性、パラーフ
ロロフエニルアラニン耐性、アザセリン耐性、Ｌ
−チロシン要求性、Ｌ−メチオニン要求性）を採
取した。この変異株は実施例に示すように親株よ
りトリプトフアンを68％多く生成した。 次にこのAJ12022株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す合成培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して、平板
培地（直径8.5cm）を作り、各々の培地に、完全
培地（酵母エキス10ｇ／、ポリペプトン10ｇ／
、塩化ナトリウム５ｇ／、グルコース５ｇ／
、Ｌ−メチオニン200mg／、Ｌ−チロシン200
mg／を含み、PH7.0）に生育したブレビバクテ
リウム フラバムAJ11667及びブレビバクテリウ
ム フラバムAJ12022をおよそ107コ接種したの
ち30℃で４日間培養を行い、生成したコロニー数
を調べた。その結果を第二表に示す。
【表】
合を示す。
尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは、
上記培養条件下において、サルフアグアニジンを
1200μｇ／ml含む上記培養に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃で４日間培養後1000コ以上のコロニ
ーを生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）、或いは
炭化水素（ノルマンパラフイン等）が使用でき
る。窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、アンモニアガス、その他を、無機塩と
してはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム
塩、鉄塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必
要に応じて使用する。有機微量栄養素としては栄
養要求性のある場合には該当するアミノ酸、ビタ
ミン、脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、
必要に応じて更に生育促進物質としてアミノ酸、
ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分解物）酵
母エキス、ペプトン、カザミノ酸等が使用でき
る。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場はPHの上昇を鉱酸又
は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
に第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは、
上記培養条件下において、サルフアグアニジンを
1200μｇ／ml含む上記培養に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃で４日間培養後1000コ以上のコロニ
ーを生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）、或いは
炭化水素（ノルマンパラフイン等）が使用でき
る。窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、アンモニアガス、その他を、無機塩と
してはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム
塩、鉄塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必
要に応じて使用する。有機微量栄養素としては栄
養要求性のある場合には該当するアミノ酸、ビタ
ミン、脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、
必要に応じて更に生育促進物質としてアミノ酸、
ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分解物）酵
母エキス、ペプトン、カザミノ酸等が使用でき
る。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場はPHの上昇を鉱酸又
は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
に第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
【表】
【表】
し、を示す。
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウム属に属し、サルフアグア
ニジンに耐性を有し、かつＬ−トリプトフアン生
産能を有する微生物を液体培地中に好気的に培養
し、培養液中にＬ−トリプトフアンを生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とするＬ−トリ
プトフアンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6501083A JPS59192096A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
| EP84302185A EP0128637B1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| DE8484302185T DE3464934D1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| US06/599,922 US4618580A (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Process for the production of L-tryptophan using sulfaguanidine-resistant microorganisms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6501083A JPS59192096A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59192096A JPS59192096A (ja) | 1984-10-31 |
| JPH0314436B2 true JPH0314436B2 (ja) | 1991-02-26 |
Family
ID=13274581
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6501083A Granted JPS59192096A (ja) | 1983-04-13 | 1983-04-13 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59192096A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6171035A (ja) * | 1984-09-13 | 1986-04-11 | 富士写真フイルム株式会社 | 放射線画像情報再生処理条件指示装置 |
| CN111154815B (zh) * | 2019-12-10 | 2021-06-29 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种提高l-色氨酸生产效率的方法 |
| CN111139273B (zh) * | 2019-12-17 | 2021-12-07 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种制备、分离和提取l-色氨酸的方法 |
-
1983
- 1983-04-13 JP JP6501083A patent/JPS59192096A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59192096A (ja) | 1984-10-31 |
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