JPH0347838B2 - - Google Patents
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- JPH0347838B2 JPH0347838B2 JP58243572A JP24357283A JPH0347838B2 JP H0347838 B2 JPH0347838 B2 JP H0347838B2 JP 58243572 A JP58243572 A JP 58243572A JP 24357283 A JP24357283 A JP 24357283A JP H0347838 B2 JPH0347838 B2 JP H0347838B2
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- Japan
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- tryptophan
- resistance
- sulfaguanidine
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- ferm
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−トリプトフアン（以
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
及びコリネバクテリウム属の微生物を用いて糖類
等の炭素源から直接発酵法によりトリプトフアン
を製造する方法を開発した（特公昭48−18828、
フランス特許公開2059715号、特開昭55−
162771）。またこれらの菌株にフエニルアラニン、
チロシン等の栄養要求性、フエニルアラニン又は
チロシンのアナログに対する耐性を付与すること
により（特公昭48−18828、フランス特許公開
2059715号）又セリンアナログに対する耐性を付
与することにより（特開昭57−174096）トリプト
フアンの蓄積量が増加することも明らかにした。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価にトリプトフアンを製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、コリネバクテリウム属の従
来知られているトリプトフアン生産菌に更にサル
フア剤として知られているサルフアグアニジンに
対する耐性を付与せしめたところ、従来のトリプ
トフアン生産菌より更に大量にトリプトフアンを
生産することを見い出した。この発明はこの知見
に基づいて更に研究の結果完成されたものであ
る。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物はコリネバクテリウム属に属しサルフ
アグアニジンに耐性かつトリプトフアン生産能を
有する変異株である。サルフアグアニジンに対す
る耐性の他に更にトリプトフアンアナログ、フエ
ニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、アザ
セリン、インドールマイシン、デコイニン等に対
する薬剤耐性、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−メチオニン等の栄養
要求性を付与せしめた菌株を用いることによりト
リプトフアン蓄積を増大させることができる。 本発明の変異株の親株はいわゆるＬ−グルタミ
ン酸生産菌として知られているコリネバクテリウ
ム属の微生物である。例えば、コリネバクテリウ
ムグルタミクムATCC13032、コリネバクテリウ
ムアセトアシドフイラムATCC13870、コリネバ
クテリウムリリウムATCC15990等がある。 本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親
株として変異操作を施して、トリプトフアン生成
に必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン
耐性及びサルフアグアニジン耐性を付与すること
によつて得られる。この場合両性質の付与の順序
は任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方
法、例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、コリネバクテ
リウムグルタミクムAJ12118（FERM−P7374、
FERM BP−478）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 コリネバクテリウムグルタミクムFERM−
P1674を親株として用いた。本菌株は特公昭51−
19037（特開昭49−71194）において例示された菌
株で、その性質としてはフエニルアラニン及びチ
ロシン要求性とフエニルアラニン、チロシンのア
ナログであるパラアミノフエニルアラニン、パラ
フロロフエニルアラニン及びチロシンハイドロキ
サメートに対する耐性が記載されているが、更に
トリプトフアンアナログ耐性を有する。例えばフ
ランス特許公開2059715号記載の方法でこの
FERM−P1674株のトリプトフアンアナログの一
つである５−メチルトリプトフアンに対する耐性
の度合をコリネバクテリウムグルタミクムの野生
株ATCC13032と比較した時、５−メチル−DL−
トリプトフアンを各600、900μｇ／ml含む試験培
地におよそ106コ接種し30℃で４日間培養後野生
株ではそれぞれ122コ、０コに対しFERM−
P1674株ではそれぞれ1000コ以上のコロニーを生
成した。次にFERM−P1674株よりサルフアグア
ニジン耐性株を誘導した。400μｇ／mlのNGで30
℃15分間処理した（生残率12％）のち、第一表に
示す最少培地に親株が生育できない濃度の1000μ
ｇ／mlになるようにサルフアグアニジンを添加し
て平板培地を作製し、これに接種した。30℃に10
日間放置後コロニーとして生育する菌株即ちサル
フアグアニジン耐性変異株を採取しこのうちトリ
プトフアン生産能のすぐれた変異株AJ12118
（FERM−P7374 FERM BP−478）（サルフアグ
アニジン耐性、トリプトフアンアナログ耐性、パ
ラアミノフエニルアラニン耐性、パラフロロフエ
ニルアラニン耐性、チロシンハイドロキサメート
耐性、フエニルアラニン要求性、及びチロシン要
求性）を採取した。この変異株は実施例に示すよ
うに親株よりトリプトフアンを2.16倍多く生成し
た。 次にこのAJ12118株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す最少培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して平板培
地を作り各々の培地に完全培地（酵母エキス10
ｇ／、ポリペプトン10ｇ／、塩化ナトリウム
５ｇ／、グルコース５ｇ／、Ｌ−メチオニン
200mg／、Ｌ−チロシン200mg／、を含みPH
7.0）に生育したコリネバクテリウムグルタミク
ムFERM−P1674及びコリネバクテリウムグルタ
ミクムAJ12118（FERM−P7374 FERM BP478）
をおよそ107コ接種したのち30℃で３日間培養を
行ない生成したコロニー数を調べた。その結果を
第二表に示す。 尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは上
記培養条件下においてサルフアグアニジンを
1000μｇ／ml含む上記培地に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃３日間培養後1000コ以上のコロニー
を生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）或いは炭
化水素（ノルマルバラフイン等）が使用できる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無機塩として
はリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄
塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必要に応
じて使用する。有機微量栄養素としては栄養要求
性のある場合には該当するアミノ酸、ビタミン、
脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、必要に
下、トリプトフアンと記す）の製造法に関する。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。これ
に対し、本発明者たちは５−メチルトリプトフア
ン、５−フロロトリプトフアン等のトリプトフア
ンアナログに耐性を有するブレビバクテリウム属
及びコリネバクテリウム属の微生物を用いて糖類
等の炭素源から直接発酵法によりトリプトフアン
を製造する方法を開発した（特公昭48−18828、
フランス特許公開2059715号、特開昭55−
162771）。またこれらの菌株にフエニルアラニン、
チロシン等の栄養要求性、フエニルアラニン又は
チロシンのアナログに対する耐性を付与すること
により（特公昭48−18828、フランス特許公開
2059715号）又セリンアナログに対する耐性を付
与することにより（特開昭57−174096）トリプト
フアンの蓄積量が増加することも明らかにした。 本発明者らはこれらの直接発酵法により更に安
価にトリプトフアンを製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、コリネバクテリウム属の従
来知られているトリプトフアン生産菌に更にサル
フア剤として知られているサルフアグアニジンに
対する耐性を付与せしめたところ、従来のトリプ
トフアン生産菌より更に大量にトリプトフアンを
生産することを見い出した。この発明はこの知見
に基づいて更に研究の結果完成されたものであ
る。 本発明のトリプトフアン製造法において用いら
れる微生物はコリネバクテリウム属に属しサルフ
アグアニジンに耐性かつトリプトフアン生産能を
有する変異株である。サルフアグアニジンに対す
る耐性の他に更にトリプトフアンアナログ、フエ
ニルアラニンアナログ、チロシンアナログ、アザ
セリン、インドールマイシン、デコイニン等に対
する薬剤耐性、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロ
シン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−メチオニン等の栄養
要求性を付与せしめた菌株を用いることによりト
リプトフアン蓄積を増大させることができる。 本発明の変異株の親株はいわゆるＬ−グルタミ
ン酸生産菌として知られているコリネバクテリウ
ム属の微生物である。例えば、コリネバクテリウ
ムグルタミクムATCC13032、コリネバクテリウ
ムアセトアシドフイラムATCC13870、コリネバ
クテリウムリリウムATCC15990等がある。 本発明で用いる変異株はこれら上述の菌株を親
株として変異操作を施して、トリプトフアン生成
に必要な性質、例えば５−メチルトリプトフアン
耐性及びサルフアグアニジン耐性を付与すること
によつて得られる。この場合両性質の付与の順序
は任意に行えば良い。なお変異操作は通常の方
法、例えば紫外線照射或いはＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下NGと略
す）、亜硝酸等の化学薬剤処理によつて行うこと
ができる。 以下に本発明の使用菌株の一例、コリネバクテ
リウムグルタミクムAJ12118（FERM−P7374、
FERM BP−478）の具体的誘導方法とそのサル
フアグアニジンに対する耐性の度合を示す実験例
を示す。 コリネバクテリウムグルタミクムFERM−
P1674を親株として用いた。本菌株は特公昭51−
19037（特開昭49−71194）において例示された菌
株で、その性質としてはフエニルアラニン及びチ
ロシン要求性とフエニルアラニン、チロシンのア
ナログであるパラアミノフエニルアラニン、パラ
フロロフエニルアラニン及びチロシンハイドロキ
サメートに対する耐性が記載されているが、更に
トリプトフアンアナログ耐性を有する。例えばフ
ランス特許公開2059715号記載の方法でこの
FERM−P1674株のトリプトフアンアナログの一
つである５−メチルトリプトフアンに対する耐性
の度合をコリネバクテリウムグルタミクムの野生
株ATCC13032と比較した時、５−メチル−DL−
トリプトフアンを各600、900μｇ／ml含む試験培
地におよそ106コ接種し30℃で４日間培養後野生
株ではそれぞれ122コ、０コに対しFERM−
P1674株ではそれぞれ1000コ以上のコロニーを生
成した。次にFERM−P1674株よりサルフアグア
ニジン耐性株を誘導した。400μｇ／mlのNGで30
℃15分間処理した（生残率12％）のち、第一表に
示す最少培地に親株が生育できない濃度の1000μ
ｇ／mlになるようにサルフアグアニジンを添加し
て平板培地を作製し、これに接種した。30℃に10
日間放置後コロニーとして生育する菌株即ちサル
フアグアニジン耐性変異株を採取しこのうちトリ
プトフアン生産能のすぐれた変異株AJ12118
（FERM−P7374 FERM BP−478）（サルフアグ
アニジン耐性、トリプトフアンアナログ耐性、パ
ラアミノフエニルアラニン耐性、パラフロロフエ
ニルアラニン耐性、チロシンハイドロキサメート
耐性、フエニルアラニン要求性、及びチロシン要
求性）を採取した。この変異株は実施例に示すよ
うに親株よりトリプトフアンを2.16倍多く生成し
た。 次にこのAJ12118株のサルフアグアニジンに対
する耐性の度合を調べた結果を第二表に示す。 第一表に示す最少培地にサルフアグアニジンを
第二表に示した濃度になるように溶解して平板培
地を作り各々の培地に完全培地（酵母エキス10
ｇ／、ポリペプトン10ｇ／、塩化ナトリウム
５ｇ／、グルコース５ｇ／、Ｌ−メチオニン
200mg／、Ｌ−チロシン200mg／、を含みPH
7.0）に生育したコリネバクテリウムグルタミク
ムFERM−P1674及びコリネバクテリウムグルタ
ミクムAJ12118（FERM−P7374 FERM BP478）
をおよそ107コ接種したのち30℃で３日間培養を
行ない生成したコロニー数を調べた。その結果を
第二表に示す。 尚本発明で言うサルフアグアニジン耐性とは上
記培養条件下においてサルフアグアニジンを
1000μｇ／ml含む上記培地に微生物をおよそ107コ
接種し、30℃３日間培養後1000コ以上のコロニー
を生成する場合を言う。 トリプトフアン生産用の培養培地は特に制限す
るところはなく、炭素源、窒素源、無機塩及び必
要ならば有機微量栄養素を含有する通常の培地で
ある。炭素源として炭水化物（グルコース、フラ
クトース或いはデンプン、セルロース等の加水分
解物、糖蜜等）、有機酸（酢酸、クエン酸等）、ア
ルコール（グリセリン、エタノール等）或いは炭
化水素（ノルマルバラフイン等）が使用できる。
窒素源としては硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無機塩として
はリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄
塩、マンガン塩、その他微量金属塩等を必要に応
じて使用する。有機微量栄養素としては栄養要求
性のある場合には該当するアミノ酸、ビタミン、
脂肪酸類、有機塩基物質等を適量添加し、必要に
【表】
【表】
【表】
応じて更に生育促進物質としてアミノ酸、ビタミ
ン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母エ
キス、ペプトン、カザミノ酸、NZアミン、コー
ンスチープリカー等が使用できる。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場合はPHの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
を第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
ン、味液（登録商標、大豆加水分解物）、酵母エ
キス、ペプトン、カザミノ酸、NZアミン、コー
ンスチープリカー等が使用できる。 培養条件は、通常の方法でPH５ないし９、温度
は20ないし40℃で好気的条件下に24ないし72時間
培養すれば良い。培養中にPHが下がる場合には炭
酸カルシウムを別殺菌して加えるか又はアンモニ
ア水、アンモニアガス等のアルカリで中和する。
又、有機酸を炭素源とする場合はPHの上昇を鉱酸
又は有機酸で中和する。 トリプトフアンの単離採取は常法によつて行い
うる。得られたものはペーパークロマトグラム上
のRf値、エーリツヒ試薬によるトリプトフアン
特異反応、或いは微生物定量法による生物活性値
により、トリプトフアン標品のそれらと一致する
ことを確かめトリプトフアンと同定した。 トリプトフアンの定量はロイコノストツク メ
センテロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定
量法に従つて行つた。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第三表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、これ
を第四表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で72時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第四表の如く
であつた。
【表】
【表】
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属しサルフアグアニ
ジンに耐性を有し、かつＬ−トリプトフアン生産
能を有する微生物を液体培地中に好気的に培養し
培養液中にＬ−トリプトフアンを生成蓄積せし
め、これを採取することを特徴とするＬ−トリプ
トフアンの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357283A JPS60137298A (ja) | 1983-12-23 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
| DE8484302185T DE3464934D1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| EP84302185A EP0128637B1 (en) | 1983-04-13 | 1984-03-30 | Process for the production of l-tryptophan by a fermentation process |
| US06/599,922 US4618580A (en) | 1983-04-13 | 1984-04-13 | Process for the production of L-tryptophan using sulfaguanidine-resistant microorganisms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357283A JPS60137298A (ja) | 1983-12-23 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60137298A JPS60137298A (ja) | 1985-07-20 |
| JPH0347838B2 true JPH0347838B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=17105823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24357283A Granted JPS60137298A (ja) | 1983-04-13 | 1983-12-23 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60137298A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (fr) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de fabrication d'un l-amino acide |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BRPI1014661B1 (pt) | 2009-07-29 | 2020-12-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Método para produzir um l-aminoácido |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57132892A (en) * | 1981-02-12 | 1982-08-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-tyrosine by fermentation method |
-
1983
- 1983-12-23 JP JP24357283A patent/JPS60137298A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (fr) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de fabrication d'un l-amino acide |
| WO2008075483A1 (ja) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP2749652A2 (en) | 2008-01-10 | 2014-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing a target substance by fermentation |
| WO2014185430A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-11-20 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60137298A (ja) | 1985-07-20 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |