JPH01126549A - 免疫測定用試薬 - Google Patents
免疫測定用試薬Info
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- JPH01126549A JPH01126549A JP28310987A JP28310987A JPH01126549A JP H01126549 A JPH01126549 A JP H01126549A JP 28310987 A JP28310987 A JP 28310987A JP 28310987 A JP28310987 A JP 28310987A JP H01126549 A JPH01126549 A JP H01126549A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
Ａ産業上の利用分野
本発明は、固相を用いた免疫測定試薬であり、固相にカ
ーボンを使い、ポリリジン層とグルタルアルデヒド層と
抗体または抗原層を順次形成して、固相への抗体結合量
及び抗体結合力を増加させ、測定範囲の拡大、検出限界
の感度の上昇、及び再現性の向上を得た免疫測定試薬に
関するものである。
ーボンを使い、ポリリジン層とグルタルアルデヒド層と
抗体または抗原層を順次形成して、固相への抗体結合量
及び抗体結合力を増加させ、測定範囲の拡大、検出限界
の感度の上昇、及び再現性の向上を得た免疫測定試薬に
関するものである。
Ｂ発明の概要
本発明は、カーボンを固相として、その固相上に、ポリ
リジン層とグルタルアルデヒド層と抗体または抗原層を
順次形成したことからなる免疫測定試薬に関するもので
ある。
リジン層とグルタルアルデヒド層と抗体または抗原層を
順次形成したことからなる免疫測定試薬に関するもので
ある。
Ｃ従来の技術
固相を用いる免疫学的測定法には、大きく分けて、競合
法と非競合法に分類される。前者の代表例は、第１抗体
固相法、後者は、サンドイッチ測定法がある。
法と非競合法に分類される。前者の代表例は、第１抗体
固相法、後者は、サンドイッチ測定法がある。
このサンドイツチ法は、固相に抗体を吸着させ、そこに
抗原をトう゛ツブさせる。次に酵素標識抗体をその抗原
に結合させ、結合した酵素標識抗体量から抗原の量を測
定する方法である。
抗原をトう゛ツブさせる。次に酵素標識抗体をその抗原
に結合させ、結合した酵素標識抗体量から抗原の量を測
定する方法である。
上記の原理のため、サンドイツチ法の検出感度を上昇さ
せるためには、固相への抗体結合量及び抗体結合力が、
大きく影響してくる。
せるためには、固相への抗体結合量及び抗体結合力が、
大きく影響してくる。
従来、固相の材料としてはポリスチレン、ガラス、アク
リルニ１−リルーブタジエンースチレン共重合樹脂（略
してＡＢＳ）などが多く用いられた。
リルニ１−リルーブタジエンースチレン共重合樹脂（略
してＡＢＳ）などが多く用いられた。
これらの固相への抗体結合方法は、多くは物理的に吸着
させる方法であった。しかし、この方法では、固相の抗
体結合量が少ない、固相の抗体結合力が弱い、測定値の
バラツキが大きい、非特異的吸着が大きいなどの問題点
があった。
させる方法であった。しかし、この方法では、固相の抗
体結合量が少ない、固相の抗体結合力が弱い、測定値の
バラツキが大きい、非特異的吸着が大きいなどの問題点
があった。
以前、特願昭６０−４５７４２で本発明者らが出願した
「免疫学的な測定試薬の調整法とこれによって得た試薬
」では、上記の問題点を解決するために、固相をアミノ
酸処理した後、二官能性アルデヒド処理し、抗体結合さ
せたものであり、その効果は上記問題点を解決するに至
った。
「免疫学的な測定試薬の調整法とこれによって得た試薬
」では、上記の問題点を解決するために、固相をアミノ
酸処理した後、二官能性アルデヒド処理し、抗体結合さ
せたものであり、その効果は上記問題点を解決するに至
った。
Ｄ発明が解決しようとする問題点
しかし、免疫測定試薬としての検出限界、測定範囲及び
再現性のよｔ＋ −、Ｗの向上が望まれていた。
再現性のよｔ＋ −、Ｗの向上が望まれていた。
本発明は、かかる問題点を解決するためになされたもの
で、固相の抗体結合量が多く、固相の抗体結合力も強く
、測定値のバラツキが小さい、非特異的吸着の少ない免
疫測定試薬を得ることはもちろんの事として、免疫測定
試薬としての測定範囲の拡大、検出限界の感度上昇及び
再現性のより一層の向上を成し得た免疫測定試薬を得る
ことを目的とする。
で、固相の抗体結合量が多く、固相の抗体結合力も強く
、測定値のバラツキが小さい、非特異的吸着の少ない免
疫測定試薬を得ることはもちろんの事として、免疫測定
試薬としての測定範囲の拡大、検出限界の感度上昇及び
再現性のより一層の向上を成し得た免疫測定試薬を得る
ことを目的とする。
Ｅ問題点を解決するための手段
この発明に係わる免疫測定試薬では、ポリリジン層とグ
ルタルアルデヒド層と抗体または抗原層を順次形成した
、生体親和性の高いカーボンを使い、そのカーボンを固
相としたものである。
ルタルアルデヒド層と抗体または抗原層を順次形成した
、生体親和性の高いカーボンを使い、そのカーボンを固
相としたものである。
Ｆ作用
生体親和性の高いカーボンを固相に使うことにより、固
相とポリリジンの結合力と結合量が増加する。それによ
り、架橋するグルタルアルデヒド量が増加し、抗体結合
量及び抗体結合力が増加する。
相とポリリジンの結合力と結合量が増加する。それによ
り、架橋するグルタルアルデヒド量が増加し、抗体結合
量及び抗体結合力が増加する。
Ｇ実施例
（ｌｌ ”Ｉ−ＣＥ Ａ （ガン胎児性抗原）を用いた
抗体結合量の評価 実施例１゜ 第１図は本発明の一実施例を示す免疫測定試薬の調整方
法図である。
抗体結合量の評価 実施例１゜ 第１図は本発明の一実施例を示す免疫測定試薬の調整方
法図である。
調整方法は、カーボン（以下、Ｃｒｂ、ボールと略す）
をＡ）夜（０，１ｍｇ／−ポリリジンを含む０．１５ａ
＋ｏｌ／ｌ’ホウ、酸緩衝液（ｐＨ８，５） ）中に室
温で、１晩浸漬してポリリジン処理を行った。蒸留水で
洗浄し、５％グルタルアルデヒド水溶液に、３０℃で２
時間浸漬してグルクルアルデヒド処理を行った。
をＡ）夜（０，１ｍｇ／−ポリリジンを含む０．１５ａ
＋ｏｌ／ｌ’ホウ、酸緩衝液（ｐＨ８，５） ）中に室
温で、１晩浸漬してポリリジン処理を行った。蒸留水で
洗浄し、５％グルタルアルデヒド水溶液に、３０℃で２
時間浸漬してグルクルアルデヒド処理を行った。
蒸留水で洗浄し、Ｂ液（０，１ｍｇ／−免疫グロブリン
Ｇ（ＩｇＧと略す）、０．１ｍｏｌ／ ｌリン酸緩衝液
（ｐｌ（７，５））４℃で１晩浸漬した。さらにＢ液で
洗浄した後、Ｃ液（０，Ｏ１ｍｏｌ／ ｌリン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）、０．１ｍｏｌ／Ｊ ＮａＣ１，０，１
ｘ牛血清７ ルブミン（ＢＳＡと略す）、０．１ＸＮａ
）Ｊｓ混合液）で洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃で保
存した。
Ｇ（ＩｇＧと略す）、０．１ｍｏｌ／ ｌリン酸緩衝液
（ｐｌ（７，５））４℃で１晩浸漬した。さらにＢ液で
洗浄した後、Ｃ液（０，Ｏ１ｍｏｌ／ ｌリン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）、０．１ｍｏｌ／Ｊ ＮａＣ１，０，１
ｘ牛血清７ ルブミン（ＢＳＡと略す）、０．１ＸＮａ
）Ｊｓ混合液）で洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃で保
存した。
本実施例では、ＩｇＧを抗ガン胎児性抗原（抗ＣＥＡと
略す）−ＩｇＧとして被覆Ｃｒ ｂ、ボールを調整した
。
略す）−ＩｇＧとして被覆Ｃｒ ｂ、ボールを調整した
。
第２図は競合反応による抗体結合量の測定操作図であり
、第１図の方法で調整された抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆被覆
Ｃｒ水−ルを”’Ｉ−ＣＥ Ａ溶液（約２Ｘ１０’Ｃｐ
ｍｌカウント・バー・ｅ：フッ１）１００μ ｌ 、
ＣＥ Ａ溶液 （Ｏ〜１１０００ｎ／ｒｎＩ） １
００ ｐ ｌ 、 Ｃ液１００μｌの混合溶液で１晩反
応させ、洗浄後、γ−ウェルカウンターで計測した。
、第１図の方法で調整された抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆被覆
Ｃｒ水−ルを”’Ｉ−ＣＥ Ａ溶液（約２Ｘ１０’Ｃｐ
ｍｌカウント・バー・ｅ：フッ１）１００μ ｌ 、
ＣＥ Ａ溶液 （Ｏ〜１１０００ｎ／ｒｎＩ） １
００ ｐ ｌ 、 Ｃ液１００μｌの混合溶液で１晩反
応させ、洗浄後、γ−ウェルカウンターで計測した。
第１図で調整した抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆Ｃｒ ｂ。
ボールを第２図の通り、”Ｔ−ＣＥ Ａにより、抗体結
合量を測定した。結果は、第３図に示す。
合量を測定した。結果は、第３図に示す。
比較例１゜
第１図と同様の方法で、抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆ポリスチ
レンボールを調整し、第２図と同様の方法で、抗体結合
量を測定した。
レンボールを調整し、第２図と同様の方法で、抗体結合
量を測定した。
結果は、第３図に示す。
第３図は、実施例１と比較例１の結果であり、Ｃｒｂ、
ボールとポリスチレンボールの抗体結合量変化図である
。図において（ａ）は実施例１、（、ｂ）は比較例１の
結果を示している。
ボールとポリスチレンボールの抗体結合量変化図である
。図において（ａ）は実施例１、（、ｂ）は比較例１の
結果を示している。
図より、抗体績き量はＣｒ ｂ、ボールの方がポリスチ
レンボールより相対的に大であることが判明した。
レンボールより相対的に大であることが判明した。
これは、Ｃｒｂ、がポリスチレンに比べて生体親和性が
強いためである。
強いためである。
（２）酵素標識抗体の固相への非特異的吸着の評価実施
例２゜ 第４図は酵素免疫測定（Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏ人
５ｓａｙＥＴＡと略す）を行う時のＩｇＧ−ＣＯＤ（グ
ルコースオキシダーゼ）標識抗体ＷＪ整方法図であり、
第５図は非特異的吸着の評価方法の操作図である。
例２゜ 第４図は酵素免疫測定（Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏ人
５ｓａｙＥＴＡと略す）を行う時のＩｇＧ−ＣＯＤ（グ
ルコースオキシダーゼ）標識抗体ＷＪ整方法図であり、
第５図は非特異的吸着の評価方法の操作図である。
ＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体調整方法は、まずＣＯＤ約３ｍ
ｇ７０．３−を４倍量の０．１論ｏ１／ｌリン酸緩衝液
（ｐＨ７，ｏ）に溶かし、ＧＯＤ： ＧＭＢＳ（ザクシ
ンイミジル−４−マレイ ミドブチレイ １−）＝１：
５０の比で添加し、それをＯ，１ｍｏｌ／ ｌリン酸ｔ
Ｓ衝液（ｐＨ６，０）で平衡化したセファデックスＧ
２５ （１ｘ３０カラム）を用いて１２ｒｎｌ／ｈｒで
脱塩し、１−ずつ分取し、マレイミドＧＯＤを得た。次
に、ＩｇＧに２ｍｌの０．１ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝液（
ｐＨ６，Ｏ） ５ｍｍｏｌ／ ｌ ＥＤＴＡを加え、
Ｓ−アセチルメルカプトこはく酸を（Ｓ−アセチルメル
カプトこはく酸： Ｉ ｇＧ ＝ ３００： １の
比で）ジメチルフォルマイトに溶解し添加する。室温で
３０分間魔拌後、０．１ｎｏｌ／Ｊ’ ｌ・リス−塩酸
（ｐＦ［７，０） ０．１−１Ｏ，１ｍｏｌ／ ｌ Ｅ
ＤＴＡ（ｐｌ［７，０） ０．０２ｍｊ、１ｍｏｌ／Ｊ
ｋドロキシジアミン水溶液（ｐＨ７，Ｏ） ０． Ｉｍ
ｊを各々加え、３０℃４分間反応させた。Ｄ液で平衡化
したセファデックスＧ ２５ （１ｘ３０カラＬ）を用
いて、１２ｍ１／ｈｒの速度で脱塩し、１−ずつ分取し
、水冷中コロジオンバッグで濃縮し、Ｓ Ｈ−Ｉ ｇＧ
を得た。得られたマレイミドＣＯＤとＳ Ｈ−Ｉ ｇＧ
を等モル混和し、３０℃１時間静置後、４℃で１晩静置
した。０．１＠ｏｌ／ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）、
５ ｍ１ｏ１／ｌ’ ＥＤＴＡで平衡化したセフ７クリ
ル３００ （１ｘ９０カラム）に、６ｎｄ！／ｈｒで上
記試料を溶出し、１−ずつ分取し、ＩｇＧ−ＧＯＤＩＬ
Ｋａ抗体Ｇ［’Ｊた。これヲ０．１％Ｎａｐ３．０．１
％ＢＳＡとなるように添加し、４℃で保存する。
ｇ７０．３−を４倍量の０．１論ｏ１／ｌリン酸緩衝液
（ｐＨ７，ｏ）に溶かし、ＧＯＤ： ＧＭＢＳ（ザクシ
ンイミジル−４−マレイ ミドブチレイ １−）＝１：
５０の比で添加し、それをＯ，１ｍｏｌ／ ｌリン酸ｔ
Ｓ衝液（ｐＨ６，０）で平衡化したセファデックスＧ
２５ （１ｘ３０カラム）を用いて１２ｒｎｌ／ｈｒで
脱塩し、１−ずつ分取し、マレイミドＧＯＤを得た。次
に、ＩｇＧに２ｍｌの０．１ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝液（
ｐＨ６，Ｏ） ５ｍｍｏｌ／ ｌ ＥＤＴＡを加え、
Ｓ−アセチルメルカプトこはく酸を（Ｓ−アセチルメル
カプトこはく酸： Ｉ ｇＧ ＝ ３００： １の
比で）ジメチルフォルマイトに溶解し添加する。室温で
３０分間魔拌後、０．１ｎｏｌ／Ｊ’ ｌ・リス−塩酸
（ｐＦ［７，０） ０．１−１Ｏ，１ｍｏｌ／ ｌ Ｅ
ＤＴＡ（ｐｌ［７，０） ０．０２ｍｊ、１ｍｏｌ／Ｊ
ｋドロキシジアミン水溶液（ｐＨ７，Ｏ） ０． Ｉｍ
ｊを各々加え、３０℃４分間反応させた。Ｄ液で平衡化
したセファデックスＧ ２５ （１ｘ３０カラＬ）を用
いて、１２ｍ１／ｈｒの速度で脱塩し、１−ずつ分取し
、水冷中コロジオンバッグで濃縮し、Ｓ Ｈ−Ｉ ｇＧ
を得た。得られたマレイミドＣＯＤとＳ Ｈ−Ｉ ｇＧ
を等モル混和し、３０℃１時間静置後、４℃で１晩静置
した。０．１＠ｏｌ／ｌリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）、
５ ｍ１ｏ１／ｌ’ ＥＤＴＡで平衡化したセフ７クリ
ル３００ （１ｘ９０カラム）に、６ｎｄ！／ｈｒで上
記試料を溶出し、１−ずつ分取し、ＩｇＧ−ＧＯＤＩＬ
Ｋａ抗体Ｇ［’Ｊた。これヲ０．１％Ｎａｐ３．０．１
％ＢＳＡとなるように添加し、４℃で保存する。
非特異的吸着は、第５図に示すように、第１図で得られ
た抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆被覆Ｃｒ水−ルを、Ｃ液で希釈
ｔ、り抗ＣＥＡ−ＩｇＧ−ＧＯＤ標識抗体０、１ｒｎｌ
とＣ液０．２−に室温で１晩静置し、蒸留水で洗浄後、
０．５ｍｏｌ／Ｊグルコース、Ｏ，０ＩＩＩＩｏｌ／
ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ５，１） ０．３−を加え、３７℃
２時間静置した。
た抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆被覆Ｃｒ水−ルを、Ｃ液で希釈
ｔ、り抗ＣＥＡ−ＩｇＧ−ＧＯＤ標識抗体０、１ｒｎｌ
とＣ液０．２−に室温で１晩静置し、蒸留水で洗浄後、
０．５ｍｏｌ／Ｊグルコース、Ｏ，０ＩＩＩＩｏｌ／
ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ５，１） ０．３−を加え、３７℃
２時間静置した。
０．１ｄサンプリングし、２Ｘ１０−’ｍｏｌ／ｊ’ル
ミノール、０、２ｍｏｌ／ ｌ炭酸ａ衝液（ｐＨ９，８
） ０．５ｍｔ’、６Ｘ１０−’ｍｏｌ／４フェリシア
ン化カリ水溶液０．５ｍｌを各添加し、１５秒待ち、１
６〜４５秒間の発光量を算出することによって求めた。
ミノール、０、２ｍｏｌ／ ｌ炭酸ａ衝液（ｐＨ９，８
） ０．５ｍｔ’、６Ｘ１０−’ｍｏｌ／４フェリシア
ン化カリ水溶液０．５ｍｌを各添加し、１５秒待ち、１
６〜４５秒間の発光量を算出することによって求めた。
比較例２゜
第１図と同様に調整した抗ＣＥＡ−ＩｇＧ被覆ポリスチ
レンボールを用いて、第５図の様にポリスチレンボール
の非特異的吸着量を求めた。
レンボールを用いて、第５図の様にポリスチレンボール
の非特異的吸着量を求めた。
実施例２と比較例２で、酵素標識抗体の固相への非特異
的吸着を比較した。なお、評価法は、添加ＩｇＧ−ＣＯ
Ｄ標識抗体に対するＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体の固相への
吸着量の割合（％）とした。結果を表１に示す。
的吸着を比較した。なお、評価法は、添加ＩｇＧ−ＣＯ
Ｄ標識抗体に対するＩｇＧ−ＣＯＤ標識抗体の固相への
吸着量の割合（％）とした。結果を表１に示す。
表ＩＣｒｂ、ボールとポリスチレンボールにおける非特
異的吸着の比較 サンドイッチ測定法の感度を左右する主な要因の１つで
ある酵素標識抗体の固相への非特異的吸着は両者に差が
ないという結果を得た。これは抗体を固相へ吸着後、牛
血清アルブミンによるブロックがＣｒｂ、の場合でも、
ポリスチレンと同程度に有効であるためである。
異的吸着の比較 サンドイッチ測定法の感度を左右する主な要因の１つで
ある酵素標識抗体の固相への非特異的吸着は両者に差が
ないという結果を得た。これは抗体を固相へ吸着後、牛
血清アルブミンによるブロックがＣｒｂ、の場合でも、
ポリスチレンと同程度に有効であるためである。
（３）検出限界、測定範囲の評価
第６図は測定範囲および検出限界の比較操作図である。
以下にその操作を示す。第１図の操作で得られた抗ＣＥ
Ａ−ＩｇＧｉ覆Ｃｒｂ、ボールおよび抗ＣＥＡ−ＴｇＧ
被覆ポリスチレンボールをＣＥＡ標準液（Ｃ液で希釈）
０．１−と０１夜０．２−に室温で６時間静置し、蒸留
水で洗浄後、Ｃ液で希釈した抗ＣＥＡ−ＩｇＧ−ＧＯＤ
標識抗体０．１ｍｌとＣ液０．２ｒｎｌに室温で１晩静
置し、蒸留水で洗浄後、０．５ｍｏｌ／ ｌグルコース
、Ｏ，Ｏ１ｍｏｌ／ ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ５，１１０，
３−を加え、３７℃２時間静置した。０．１−サンプリ
ングし、２ｘ１０−マｍｏ１／ｌルミノール、０．２ｍ
ｏｌ／ｌ炭酸緩衝液（ｐ［（９，８） ０．５ｄ、６Ｘ
１Ｇ−”ｍｏｌ／ｊ ７ エリシアン化カリ水溶液０．
５ｄを各添加し、１５秒待ち、１６〜４５秒間の発光量
を算出する。
Ａ−ＩｇＧｉ覆Ｃｒｂ、ボールおよび抗ＣＥＡ−ＴｇＧ
被覆ポリスチレンボールをＣＥＡ標準液（Ｃ液で希釈）
０．１−と０１夜０．２−に室温で６時間静置し、蒸留
水で洗浄後、Ｃ液で希釈した抗ＣＥＡ−ＩｇＧ−ＧＯＤ
標識抗体０．１ｍｌとＣ液０．２ｒｎｌに室温で１晩静
置し、蒸留水で洗浄後、０．５ｍｏｌ／ ｌグルコース
、Ｏ，Ｏ１ｍｏｌ／ ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ５，１１０，
３−を加え、３７℃２時間静置した。０．１−サンプリ
ングし、２ｘ１０−マｍｏ１／ｌルミノール、０．２ｍ
ｏｌ／ｌ炭酸緩衝液（ｐ［（９，８） ０．５ｄ、６Ｘ
１Ｇ−”ｍｏｌ／ｊ ７ エリシアン化カリ水溶液０．
５ｄを各添加し、１５秒待ち、１６〜４５秒間の発光量
を算出する。
実施例２と比較例２について検出限界および測定範囲を
比較した。第７図は、その結果であり、ＣＥＡ濃度−発
光量変化図である。図において、（ｅ）は実施例２、（
ｄ）は比較例２の結果を示している。
比較した。第７図は、その結果であり、ＣＥＡ濃度−発
光量変化図である。図において、（ｅ）は実施例２、（
ｄ）は比較例２の結果を示している。
図よりＣｒｂ、の方が、ポリスチレンよりＣＥＡの検出
限界、測定範囲いずれも優れていることが判明した。
限界、測定範囲いずれも優れていることが判明した。
これは、Ｃｒ ｂ、の抗体結合量が、大であることと、
固相への抗体結合の際、抗体の免疫活性が失われに（い
ことの２点が挙げられる。また、Ｃｒｂ、とポリスチレ
ンの測定上限が同値なのは、添加した酵素標識抗体量が
制限因子になっているためと考える。
固相への抗体結合の際、抗体の免疫活性が失われに（い
ことの２点が挙げられる。また、Ｃｒｂ、とポリスチレ
ンの測定上限が同値なのは、添加した酵素標識抗体量が
制限因子になっているためと考える。
（４）検出限界における再現性の評価
実施例２と比較例２で検出限界における口内変動と日間
変動を比較した。結果を表２に示す。
変動を比較した。結果を表２に示す。
表２ Ｃｒ ｂ 、ボールとポリスチレンポール日内変
ｒａＪ 測定回数ｎ ＝ ８ 日間変動 測定回数ｎ＝６ 表中（）は、ＣＴ！、１９度を示す。
ｒａＪ 測定回数ｎ ＝ ８ 日間変動 測定回数ｎ＝６ 表中（）は、ＣＴ！、１９度を示す。
検出限界でのＣｒ ｂ、ボールの再現性が、ポリスチレ
ンボールよりも優れている。これは、Ｃｒｂ、ボールの
抗体結合量が多く、比較する固相の個体差が、ポリスチ
レンボールよりも小さいなめである。
ンボールよりも優れている。これは、Ｃｒｂ、ボールの
抗体結合量が多く、比較する固相の個体差が、ポリスチ
レンボールよりも小さいなめである。
（５）固相の抗体結合調整法の評価
比較例３゜
第８図は、比較例３を示す操作方法図である。
調整方法は、Ｂ液に４℃で１晩浸漬し、さらにＢ液で洗
浄した後、Ｃ液で３回洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃
で保存する。
浄した後、Ｃ液で３回洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃
で保存する。
比較例４゜
第９図は、比較例４を示す操作方法図である。
ｙＪ整方法は、Ｃｒｂ、ボールをＡ液中に室温で、１晩
浸漬してポリリジン処理を行った。蒸留水で洗浄し、Ｂ
液で４℃で１晩浸漬した。さらにＢ液で洗浄した後、Ｃ
液で３回洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃で保存する。
浸漬してポリリジン処理を行った。蒸留水で洗浄し、Ｂ
液で４℃で１晩浸漬した。さらにＢ液で洗浄した後、Ｃ
液で３回洗浄した後、Ｃ液に浸漬し、４℃で保存する。
比較例５゜
第１０図は、比較例５を示す操作方法図である。
調整方法は、Ｃｒｂ、ボールを５％グルタルアルデヒド
水溶液に、３０℃で２時間浸漬してグルタルアルデヒド
処理を行った。蒸留水で洗浄し、Ｂ液４℃で１晩浸漬し
た。さらにＢ液で洗浄した後、Ｃ液で３回洗浄した後、
Ｃ液に浸漬し、４℃で保存する。
水溶液に、３０℃で２時間浸漬してグルタルアルデヒド
処理を行った。蒸留水で洗浄し、Ｂ液４℃で１晩浸漬し
た。さらにＢ液で洗浄した後、Ｃ液で３回洗浄した後、
Ｃ液に浸漬し、４℃で保存する。
実施例２と比較例３，４，５について測定範囲及び検出
限界を第６図の方法で比較した。第１１図はその結果で
、処理条件の比較図である。
限界を第６図の方法で比較した。第１１図はその結果で
、処理条件の比較図である。
図において、（ｅ）は比較例３、（ｆｌは比較例４、（
ｇ）は比較例５の結果を示している。
ｇ）は比較例５の結果を示している。
図より、第１図の方法で、調整したＣｒｂ、の方がＣＥ
Ａの検出限界及び測定範囲のいずれにおいても１畳れて
いる乙とが判明した。
Ａの検出限界及び測定範囲のいずれにおいても１畳れて
いる乙とが判明した。
第１図の調整法はボールをポリリジンで被覆後、グルタ
ルアルデヒドで架橋されるため、固相が安定する。この
様な安定した固相に結合した抗体により、抗体結合量及
び抗体結合力が増加した。
ルアルデヒドで架橋されるため、固相が安定する。この
様な安定した固相に結合した抗体により、抗体結合量及
び抗体結合力が増加した。
今回は抗体量を検出するための標識物を酵素（ＧＯＤ）
の場合のみ記したが、酵素のみならず蛍光発光物質、放
射性同位元素でも同様な結果を得ている。以下に標識物
の例を示す。酵素（グルコースオキシダーゼ、西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グル
コース６リン酸、脱水素酵素、アルカリホスファターゼ
等）、発光物質（フルオレセインイソチオシアネ−１・
、テトラメチルローダミンイソチオシアネート等）、化
学発光物質（アミノエチルエチルイソルミノール、アミ
ノブチルエチルイソルミノール、アミノペンチルエチル
イソルミノール、アミノヘキシルエチルイソルミノール
等）、放射性同位元素（’Ｈ。
の場合のみ記したが、酵素のみならず蛍光発光物質、放
射性同位元素でも同様な結果を得ている。以下に標識物
の例を示す。酵素（グルコースオキシダーゼ、西洋ワサ
ビペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グル
コース６リン酸、脱水素酵素、アルカリホスファターゼ
等）、発光物質（フルオレセインイソチオシアネ−１・
、テトラメチルローダミンイソチオシアネート等）、化
学発光物質（アミノエチルエチルイソルミノール、アミ
ノブチルエチルイソルミノール、アミノペンチルエチル
イソルミノール、アミノヘキシルエチルイソルミノール
等）、放射性同位元素（’Ｈ。
１４Ｃ，ｓａｐ、 １２＠■、１４１１等）Ｈ発明の効
果 ポリリジン層とグルタルアルデヒド層と抗体または抗原
層を順次形成した、生体親和性の高いカーボンを固相と
したので、ポリリジンの被覆量が上昇し、グルタルアル
デヒド処理によって、ポリリジンの一部のアミノ基が互
いにグルタルアルデヒドで、架橋されるため固相が安定
する。この様な安定した固相に結合した抗体により、抗
体結合量及び抗体結合力が増加する。
果 ポリリジン層とグルタルアルデヒド層と抗体または抗原
層を順次形成した、生体親和性の高いカーボンを固相と
したので、ポリリジンの被覆量が上昇し、グルタルアル
デヒド処理によって、ポリリジンの一部のアミノ基が互
いにグルタルアルデヒドで、架橋されるため固相が安定
する。この様な安定した固相に結合した抗体により、抗
体結合量及び抗体結合力が増加する。
そのため、従来よりも測定範囲が拡大し、検出限界が上
昇し、再現性が向上するという効果がある。
昇し、再現性が向上するという効果がある。
第１図は本発明の一実施例を示す免疫測定試薬の調整方
法図、第２図は競合反応による抗体結合量の測定操作図
、第３図はＣ、ｒ ｂ 、ポールとポリスチレンボール
の抗体結合量変化図、第４図は工ｇＧ−ＧＯＤ標識抗体
１！整方法図、第５図は非特異的吸着の評価方法の操作
図、第６図は測定範囲および検出限界の比較操作図、第
７図はＣＥＡ濃度−発光量変化図、第８図は比較例３を
示す操作方法図、第９図は比較例４を示す操作方法図、
第１０図は比較例５を示す操作方法図、第１１図はその
結果で、処理条件の比較図である。
法図、第２図は競合反応による抗体結合量の測定操作図
、第３図はＣ、ｒ ｂ 、ポールとポリスチレンボール
の抗体結合量変化図、第４図は工ｇＧ−ＧＯＤ標識抗体
１！整方法図、第５図は非特異的吸着の評価方法の操作
図、第６図は測定範囲および検出限界の比較操作図、第
７図はＣＥＡ濃度−発光量変化図、第８図は比較例３を
示す操作方法図、第９図は比較例４を示す操作方法図、
第１０図は比較例５を示す操作方法図、第１１図はその
結果で、処理条件の比較図である。
Claims (2)
- （１）ポリリジン層とグルタルアルデヒド層と抗体また
は抗原層を順次形成したカーボンを固相としたことを特
徴とする免疫測定用試薬。 - （２）前記抗体は、抗ガン胎児性抗原−免疫グロブリン
Ｇとしたことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
免疫測定用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28310987A JPH01126549A (ja) | 1987-11-11 | 1987-11-11 | 免疫測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28310987A JPH01126549A (ja) | 1987-11-11 | 1987-11-11 | 免疫測定用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01126549A true JPH01126549A (ja) | 1989-05-18 |
Family
ID=17661340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28310987A Pending JPH01126549A (ja) | 1987-11-11 | 1987-11-11 | 免疫測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01126549A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2239314B (en) * | 1989-12-18 | 1994-05-18 | Princeton Biomeditech Corp | Carbon black having an immunologically-active compound bound thereto |
-
1987
- 1987-11-11 JP JP28310987A patent/JPH01126549A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2239314B (en) * | 1989-12-18 | 1994-05-18 | Princeton Biomeditech Corp | Carbon black having an immunologically-active compound bound thereto |
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