JPH0566985B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0566985B2 JPH0566985B2 JP60173394A JP17339485A JPH0566985B2 JP H0566985 B2 JPH0566985 B2 JP H0566985B2 JP 60173394 A JP60173394 A JP 60173394A JP 17339485 A JP17339485 A JP 17339485A JP H0566985 B2 JPH0566985 B2 JP H0566985B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- solution
- activity
- solid
- antigen
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
〔発明の目的〕
本発明は固相化試薬を乾燥条件下で長期間、免
疫化学的活性を損うことなく安定に保存するため
の安定化剤に関するものである。 ここに固相化試薬とは免疫化学的測定に用いる
抗原または抗体を固相担体に物理的または化学的
に結合させ不溶化した試薬をいう（以下「固相化
試薬」と称する）近年、ラジオイムノアツセイや
エンザイムイムノアツセイが広く行なわれるよう
になり、すでに多くの測定試薬が実用に供されて
いる。これらの測定試薬の多くは、抗原・抗体結
合物を分離する手段として固相化試薬を用いてい
る。そこでこれらの固相化試薬の免疫活性を乾燥
状態で長期間安定に保つ方法がいくつか知られて
いる（例えば英国特許2124231号、西独特許
2910707号、日本特開昭58−123459号）。しかしイ
ムアツセイは増々高感度化の方向にあり、それに
ともない固相化する抗原や抗体も増々希薄な溶液
を用いるようになつて来ているので、従来法では
満足し得なくなり更に強力な安定化の手法の開発
が望まれていた。 本発明者らは乾燥状態で免疫活性低下の少ない
固相化試薬を開発すべく種々検討の結果、本発明
を完成した。 〔発明の構成〕 本発明は牛血清アルブミンおよびピロリドンカ
ルボン酸塩類からなる固相化試薬の安定化剤であ
る。 本発明による固相化試薬の安定化は前述の安定
化剤を含む水溶液に固相化試薬を浸漬し乾燥する
ことによつて得られる。 本発明に係る固相化担体には免疫化学測定法に
用いる全ての固相担体を包含するが、好ましくは
プラスチツク、ガラス、紙などから作られたチユ
ーブ、ビーズ、ステイツク、マイクロタイタープ
レート状のものが用いられる。固相担体と抗原ま
たは抗体の結合は物理的吸着または、化学的吸着
のいずれでもよい。 前述の牛血清アルブミンおよびピロリドンカル
ボン酸塩類は適当な割合で混合していることが出
来る。混合割合は好適には１：0.5〜５である。
またピロリドンカルボン酸塩類としては例えばナ
トリウム、カリウムのようなアルカリ金属との塩
またはトリエタノールアミンのようなアミンとの
塩が好適であり、特にナトリウム塩が好適であ
る。安定化剤水溶液の濃度は例えば0.1〜10％の
範囲から適当に決めることが出来る。好適には１
〜５％である。 抗原または抗体を不溶化した固相化試薬の安定
化剤を含む水溶液への浸漬処理時間は30分〜50時
間であるが、一般に低温程長時間を要する。好適
には２℃で24時間或いは室温（25℃）で１時間な
どである。固相化試薬の浸漬処理後の乾燥は自然
乾燥、通気乾燥、真空乾燥、凍結乾燥のいずれの
方法でもよい。 〔発明の効果〕 次に本発明を実施例をあげて効果について詳細
に説明する。 実施例 １ 抗ウサギ血清ヤギ抗体溶液を炭酸ナトリウム緩
衝液（0.05M、PH9.5）に5μｇ／mlの濃度に溶解
させた液のうち、0.6mlをポリスチレンチユーブ
（10×70mm）に注入し、冷所で24時間放置し不溶
化した。抗体溶液を吸引除去し、炭酸緩衝液で洗
浄後、所定の安定化剤水溶液を３ml充填し２℃、
24時間放置してコーテイングした。安定化剤水溶
液を吸引除去し、自然乾燥して、抗体不溶化チユ
ーブ（乾燥品）を作つた。なお、対照品として
0.3％牛血清アルブミン（BSA）処理、１％BSA
処理、１％ピロリドンカルボン酸ナトリウム
（PCA）処理したものを列挙した。 室温（30℃）及び低温下（４℃）で経時的に抗
体活性を測定した。ポリスチレンチユーブに不溶
化した抗ウサギ血清ヤギ抗体の活性測定は次の様
に行つた。即ち、抗体不溶化乾燥チユーブに緩衝
液0.3ml、グルコースオキシターゼ標識17−α−
ヒドロキシプロゲステロン抗原液0.1mlおよび抗
17−α−ヒドロキシプロゲステロンウサギ抗血清
（50万倍液）0.1mmを加えよく混和し、４℃・１夜
インキユベートした。反応液を吸引除去したの
ち、緩衝液で３回洗浄した。これにグルコース、
ｐ−ヒドロキシフエニル酢酸、ワサビパーオキシ
ダーゼを加え37℃・２時間インキユベートした。
反応停止液0.1mmを加えたのちよく混和し螢光測
定（Ex325nｍ、Em407nｍ）した。抗体活性
（％）は次式を用いて計算した。 抗体活性（％）＝検体チユーブの螢光強度／
コントロールチユーブの螢光強度×100 ここに、コントロールチユーブは0.3％BSA溶
液で浸漬したままのチユーブである。 測定結果を表１に示す。
疫化学的活性を損うことなく安定に保存するため
の安定化剤に関するものである。 ここに固相化試薬とは免疫化学的測定に用いる
抗原または抗体を固相担体に物理的または化学的
に結合させ不溶化した試薬をいう（以下「固相化
試薬」と称する）近年、ラジオイムノアツセイや
エンザイムイムノアツセイが広く行なわれるよう
になり、すでに多くの測定試薬が実用に供されて
いる。これらの測定試薬の多くは、抗原・抗体結
合物を分離する手段として固相化試薬を用いてい
る。そこでこれらの固相化試薬の免疫活性を乾燥
状態で長期間安定に保つ方法がいくつか知られて
いる（例えば英国特許2124231号、西独特許
2910707号、日本特開昭58−123459号）。しかしイ
ムアツセイは増々高感度化の方向にあり、それに
ともない固相化する抗原や抗体も増々希薄な溶液
を用いるようになつて来ているので、従来法では
満足し得なくなり更に強力な安定化の手法の開発
が望まれていた。 本発明者らは乾燥状態で免疫活性低下の少ない
固相化試薬を開発すべく種々検討の結果、本発明
を完成した。 〔発明の構成〕 本発明は牛血清アルブミンおよびピロリドンカ
ルボン酸塩類からなる固相化試薬の安定化剤であ
る。 本発明による固相化試薬の安定化は前述の安定
化剤を含む水溶液に固相化試薬を浸漬し乾燥する
ことによつて得られる。 本発明に係る固相化担体には免疫化学測定法に
用いる全ての固相担体を包含するが、好ましくは
プラスチツク、ガラス、紙などから作られたチユ
ーブ、ビーズ、ステイツク、マイクロタイタープ
レート状のものが用いられる。固相担体と抗原ま
たは抗体の結合は物理的吸着または、化学的吸着
のいずれでもよい。 前述の牛血清アルブミンおよびピロリドンカル
ボン酸塩類は適当な割合で混合していることが出
来る。混合割合は好適には１：0.5〜５である。
またピロリドンカルボン酸塩類としては例えばナ
トリウム、カリウムのようなアルカリ金属との塩
またはトリエタノールアミンのようなアミンとの
塩が好適であり、特にナトリウム塩が好適であ
る。安定化剤水溶液の濃度は例えば0.1〜10％の
範囲から適当に決めることが出来る。好適には１
〜５％である。 抗原または抗体を不溶化した固相化試薬の安定
化剤を含む水溶液への浸漬処理時間は30分〜50時
間であるが、一般に低温程長時間を要する。好適
には２℃で24時間或いは室温（25℃）で１時間な
どである。固相化試薬の浸漬処理後の乾燥は自然
乾燥、通気乾燥、真空乾燥、凍結乾燥のいずれの
方法でもよい。 〔発明の効果〕 次に本発明を実施例をあげて効果について詳細
に説明する。 実施例 １ 抗ウサギ血清ヤギ抗体溶液を炭酸ナトリウム緩
衝液（0.05M、PH9.5）に5μｇ／mlの濃度に溶解
させた液のうち、0.6mlをポリスチレンチユーブ
（10×70mm）に注入し、冷所で24時間放置し不溶
化した。抗体溶液を吸引除去し、炭酸緩衝液で洗
浄後、所定の安定化剤水溶液を３ml充填し２℃、
24時間放置してコーテイングした。安定化剤水溶
液を吸引除去し、自然乾燥して、抗体不溶化チユ
ーブ（乾燥品）を作つた。なお、対照品として
0.3％牛血清アルブミン（BSA）処理、１％BSA
処理、１％ピロリドンカルボン酸ナトリウム
（PCA）処理したものを列挙した。 室温（30℃）及び低温下（４℃）で経時的に抗
体活性を測定した。ポリスチレンチユーブに不溶
化した抗ウサギ血清ヤギ抗体の活性測定は次の様
に行つた。即ち、抗体不溶化乾燥チユーブに緩衝
液0.3ml、グルコースオキシターゼ標識17−α−
ヒドロキシプロゲステロン抗原液0.1mlおよび抗
17−α−ヒドロキシプロゲステロンウサギ抗血清
（50万倍液）0.1mmを加えよく混和し、４℃・１夜
インキユベートした。反応液を吸引除去したの
ち、緩衝液で３回洗浄した。これにグルコース、
ｐ−ヒドロキシフエニル酢酸、ワサビパーオキシ
ダーゼを加え37℃・２時間インキユベートした。
反応停止液0.1mmを加えたのちよく混和し螢光測
定（Ex325nｍ、Em407nｍ）した。抗体活性
（％）は次式を用いて計算した。 抗体活性（％）＝検体チユーブの螢光強度／
コントロールチユーブの螢光強度×100 ここに、コントロールチユーブは0.3％BSA溶
液で浸漬したままのチユーブである。 測定結果を表１に示す。
【表】
結果として１％BSAのみでの処理では調製直
後は高い活性を示すが経時的に低下が著しい。ま
た、１％PCAによる処理は調製直後70％程度に
低下しており経時的にも安定でない。しかし、特
に両者を併用した場合調製直後高い活性を示し経
時的にも安定なものが得られた。 実施例 ２ 実施例１のポリスチレンチユーブの代りに直径
6.4mmのポリスチレンボールを使用して同様に行
つた。安定化剤の溶液は１％BSA＋１％PCAを
用いた。抗体活性の測定は、実施例１のポリスチ
レンチユーブの代りにガラスの試験管に抗体不溶
化ポリスチレンボールを入れて行つた。 測定結果を表２に示す。
後は高い活性を示すが経時的に低下が著しい。ま
た、１％PCAによる処理は調製直後70％程度に
低下しており経時的にも安定でない。しかし、特
に両者を併用した場合調製直後高い活性を示し経
時的にも安定なものが得られた。 実施例 ２ 実施例１のポリスチレンチユーブの代りに直径
6.4mmのポリスチレンボールを使用して同様に行
つた。安定化剤の溶液は１％BSA＋１％PCAを
用いた。抗体活性の測定は、実施例１のポリスチ
レンチユーブの代りにガラスの試験管に抗体不溶
化ポリスチレンボールを入れて行つた。 測定結果を表２に示す。
【表】
結果は実施例１と同様であつた。
実施例 ３
実施例１と抗ウサギ血清ヤギ抗体液（5μｇ／
ml）を抗サイロキシン・ウサギ抗体液（0.5μｇ／
ml）に変えて行つた。安定化剤の溶液は１％
BSA＋１％PCAを用いた。抗体活性の測定はグ
ルコースオキシダーゼ標識17−α−ヒドロキシプ
ロゲステロン抗原液をグルコースオキシダーゼ標
識サイロキシン抗原液に変え、実施例１に準じて
測定した。この場合抗17−α−ヒドロキシプロゲ
ステロン・ウサギ抗血清は不要である。 測定結果を表３に示す。
ml）を抗サイロキシン・ウサギ抗体液（0.5μｇ／
ml）に変えて行つた。安定化剤の溶液は１％
BSA＋１％PCAを用いた。抗体活性の測定はグ
ルコースオキシダーゼ標識17−α−ヒドロキシプ
ロゲステロン抗原液をグルコースオキシダーゼ標
識サイロキシン抗原液に変え、実施例１に準じて
測定した。この場合抗17−α−ヒドロキシプロゲ
ステロン・ウサギ抗血清は不要である。 測定結果を表３に示す。
【表】
結果は実施例１と同様であつた。
Claims (1)
- １ 牛血清アルブミンおよびピロリドンカルボン
酸塩類からなる免疫化学的測定に用いる抗原また
は抗体を固相担体に物理的にまたは化学的に結合
させ不溶化した試薬の安定化剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17339485A JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17339485A JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6234059A JPS6234059A (ja) | 1987-02-14 |
| JPH0566985B2 true JPH0566985B2 (ja) | 1993-09-22 |
Family
ID=15959588
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17339485A Granted JPS6234059A (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 固相化試薬の安定化剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6234059A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX172176B (es) * | 1986-11-13 | 1993-12-07 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la preparacion de un medio de incubacion para ensayos inmunometricas en fase solida |
| US4984398A (en) * | 1988-08-27 | 1991-01-15 | Kazuo Fujita | Folding stage unit |
| JP2512627B2 (ja) * | 1990-11-08 | 1996-07-03 | 株式会社トクヤマ | 長期保存安定性を目的とした免疫学的凝集反応試薬の製造方法及びそれに用いる免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
| DE4344868A1 (de) * | 1993-12-29 | 1995-08-03 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung langzeitstabiler klarer Seren |
| JP5171034B2 (ja) * | 2003-03-23 | 2013-03-27 | ユィロス・パテント・アクチボラグ | 充填済みのマイクロスケール装置 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4166844A (en) * | 1977-04-18 | 1979-09-04 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Solid phase separation technique for use in radioimmunoassays |
| GB2016687B (en) * | 1978-03-20 | 1982-09-08 | Abbott Lab | Sugar coated reagents for solid phase immunoassay |
| JPS5622956A (en) * | 1979-07-09 | 1981-03-04 | Corning Glass Works | Manufacture of reagenttbinding agent film |
| JPS58179499A (ja) * | 1982-04-13 | 1983-10-20 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 細菌感受性試験ディスク |
| JPS59206761A (ja) * | 1983-05-11 | 1984-11-22 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 酵素免疫測定法 |
| JPS6035263A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-02-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬 |
-
1985
- 1985-08-07 JP JP17339485A patent/JPS6234059A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6234059A (ja) | 1987-02-14 |
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