JPH01127039A - 発熱物質吸着体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 九監立且皿上１ 本発明は、発熱物質（パイロジエン）の除去に有効な新
規な不溶性粒子、すなわち、発熱物質吸着体に関する。

発熱物質（パイロジエン）とは、注射等により生体に投
与された場合に発熱を起こす物質の総称であり、生体内
投与される医薬品の製造においてはこれらを除去する技
術が非常に重要となっている。

そのような発熱物質は、ジフテリア苗や黄色ブドウ球菌
などが分泌する外毒素と大腸菌などのダラム陰性菌のＩ
ＩＩ胞壁の成分である内毒素に分類される。このなかで
も通常問題とされるのは、後者のダラム陰性菌の内毒素
であり、その正体は、多糖類と結合した脂質の複合体、
リポポリサッカライド（ＬＰＳ’）中のリン脂質である
リピッドＡであることが知られている。このような物質
が混入した注射剤等が生体内に投与された場合には、こ
れらの物質が視床下部などの温熱中枢に作用し発熱を起
こすと考えられており、その結果重篤な発熱現象や時に
はショック死に至る場合もあることが知られている。し
たがって、注射剤等の医薬品製造においては、安全性確
認の為ウサギを用いた発熱試験が通常行われており、こ
のような発熱物質が混入していないことを確認すること
が義務づけられている。

免釆肢Ｉ このような発熱物質を除（方法としては、炭末やイオン
交換樹脂などを用いて発熱物質を除去する方法や、酸や
アルカリなどを用いて発熱物質を分解する方法、または
ウルトラメンブランフィルタ−を用いてこれらを除去す
る方法が知られている。しかしながら、医薬品製造にお
ける発熱物質の除去は、対象となる製剤が不安定な物質
であったり、精製する目的物質の量に対して除去する発
熱物質が非常に微量である等の理由から、まだ技術的に
も問題が残されており、これらの問題を解決できる効果
的でしかも簡易な方法の開発が望まれている。

このような状況のもとで、本発明者らは、発熱物質の有
効かつ簡易な除去方法について研究を重ねた結果、ポリ
アミノ酸からなる球状粒子を担体とし、これにイミダゾ
ール誘導体を結合させた新規な不溶性粒子が発熱物質に
対して非常に高い親和性を示し、目的の精製物質から発
熱物質を特異的に吸着除去できることを見いだし本発明
を完成するに至った。

Ｈ− 本発明の発熱物質吸着用粒子は、官能基としてイミダゾ
ール誘導体、そしてこれらの担体としてポリアミノ酸球
状粒子を用いたことに特徴がある。

官能基としてイミダゾール誘導体を用いた例は、ヒスタ
ミンを官能基としてデキストラン系のゲルであるセファ
ロースＣＬ−４Ｂに結合させたものを発熱物質との吸着
除去に応用した例が先に報告されている〔　美濃部ら、
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
。

２６２　（１９８３）　ｐ１９３−１９８１．　　Ｉ、
かじながら、医薬品製造における発熱物質の除去操作に
おいては、処理するサンプルにおける目的物質の濃度が
非常に高いのに対して、除去すべき発熱物質の量が非常
に少ないという問題があり、思うように発熱物質のみを
吸着できない場合が多く、発熱物質に対してより特異性
の高い吸着体や、効率よい発熱物質の除去方法の開発が
望まれている。また、医薬品の製造工程としての発熱物
質除去方法には、前記の特異性の点に加えて迅速に処理
ができる方法であることが要求される０本発明の発熱物
質吸着体は、従来の技術で用いられていたアガロースゲ
ルやデキストラン系のセファロースゲルを用いずに、こ
れに代わる担体としてポリアミノ酸の球状粒子分使用す
ることによって発熱物質との反応性が大きく向上し、発
熱物質を目的の最終精製物から効率よく迅速に分離除去
することが可能となる。

本発明の新規な発熱物質吸着体を構成しているポリアミ
ノ酸球状粒子は、従来のセファデックス等と称されるデ
キストラン系の球状粒子とは全く別の素材であるポリア
ミノ酸（合成ポリアミノＩ！！２）を利用したものであ
り、このようなポリアミノ酸の基本的な球状粒子および
その精製法に関しては本発明者らが先に特許出願してい
る（　特願昭６０−１４１６７７号、および特願昭６２
−１２１７２８号）。

本発明に用いるポリアミノ酸球状粒子の調製には特定の
ポリアミノ酸すなわち疎水性ポリアミノ酸を用い、これ
らが有機溶媒に溶かされた溶液を水性媒体（該溶液が溶
解しないか、または、僅かしか溶解しない媒体）に加え
懸濁させることにより、該疎水性のポリアミノ酸球状粒
子が形成される。このようにして得られたポリアミノ酸
球状粒子にイミダゾール誘導体を結合させることにより
本発明の発熱物質吸着体を得ることができる。イミダゾ
ール誘導体を該粒子に結合させる際して、直接両者を結
合させることも可能であるが、適当なスペーサーを介し
て両者を結合させることで、発熱物質との反応性が強い
良好な発熱物質吸着体を得ることができる。ここで言う
特定のポリアミノ酸には、ポリアラニン、ポリロイシン
、ポリイソロイシン、ポリノルマルロイシン等の本来疎
水性のポリアミノ酸を利用することができるが、これに
加えて、親水性ポリアミノ酸を疎水性（ヒしたもの（疎
水性基を導入した親水性アミノ酸ポリマー）も使用でき
る。そのような親水性ポリアミノ酸としては、ポリグル
タミン酸、アスパラギン酸等め酸性ポリアミノ酸を疎水
性エステル化したもの、例えば、それらのアミノ酸のア
ルキルエステル、ベンジルエステル、ジシクロヘキサン
メチルエステル、テトラヒドロビランメタノールエステ
ル等を挙げることができ、また、リジンにような塩基性
アミノ酸を疎水性カルボキシ化したもの、例えば、その
ようなアミノ酸のカルボベンゾキシ化物、カルボエトキ
シ化物を挙げることができる。

これらの変性ポリアミノ酸を用いる場合、得られる変性
ポリアミノ酸の球状粒子をそのまま使用してもよいが、
疎水性基を脱離し親水性ポリアミノ酸の球状粒子とする
こともできる。すなわち、前述したような分散体の調製
時に疎水性ポリアミノ酸を採用することにより、最終的
に疎水性ポリアミノ酸および親水性ポリアミノ酸（両親
媒性ポリアミノ酸を含む）の球状粒子を得ることができ
る。

このようなポリアミノ酸球状粒子の具体的調製法として
は、疎水性ポリアミノ酸を有機溶媒に溶かしたものを水
性溶媒に加え、撹拌し有機溶媒を蒸発させることにより
疎水性ポリアミノ酸を０含有する液滴を得る。この場合
の有機溶媒としては、疎水性ポリアミノ酸を良好に融解
するとともに水に不溶であり且つ沸点が水性溶媒よりも
低いものが用いられる。好ましい有機溶媒としては、ク
ロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタンおよびそ
れらに類似するハロゲン化炭化水素、ベンゼン、並びに
それらの混合溶媒である。このような反応には、有機溶
媒中でアミノ酸から疎水性ポリアミノ酸を重合すること
によって得られた溶液をそのまま用いることも可能であ
る。ポリアミノ酸球状粒子の粒径は有機溶媒−水性媒体
系の粘度および撹拌速度により容易に制御することがで
きる。

−ｍに、有機溶媒中のポリアミノ酸濃度が高くなるほど
、また、水性媒体系の粘度が低くなるほど得られる球状
粒子の精糸は大きくなり、撹拌速度を大きくすることに
より粒径の小さい球状粒子が得られる１、また部分酢化
ポリビニルアルコール、ゼラチンのような粘度調節剤を
添加することによりさらに制御が容易になる。

さらに多孔性のポリアミノ酸球状粒子も容易に調製する
ことができる。すなわち、疎水性ポリアミノ酸が有機溶
媒に溶かされた溶液に該ポリアミノ酸と非相溶性である
が該ポリアミノ酸を溶かしている有機溶媒には相溶性で
あり、さらに水性媒体に非相溶性であり、且つそれらの
有機溶媒および水性溶媒よりも沸点が高い添加剤を加え
て前記と同様の反応を行う、このような添加剤としては
デカリン、テトラリン、トルエン、キシレン、エチルベ
ンゼン、ジエチルベンゼン、アニソール、ヘキサノール
、オクタツール、ジブチルエーテル等が挙げられる。こ
のような添加剤の種類や量を調節することにより空孔径
１０２（マルトース）〜１０６（デキストラン）、空孔
率１０〜９８％までの任意の多孔性ポリアミノ酸球状粒
子を得ることができる１本発明の特に好ましい粒子とし
ては空孔径が１０’〜１０’のものが用いられる。

このようなポリアミノ酸球状粒子の特徴は、従来より使
用されているセファデックスのような球状粒子に比べて
硬質なことである。このポリアミノ酸球状粒子を赤外吸
収スペクトル等で調べると、少なくとも部分的にβ−構
造の存在が認められ。

ここでβ構造の存在が硬質化に一層寄与しているものと
考えられる。また、本発明の吸着体に用いら、れるポリ
アミノ酸球状粒子は、少なくとも部分的にα−ヘリック
ス構造をも有しており、このことは更にこの後結合させ
るイミダゾール誘導体の固定化に寄与しているものと考
えられる。このような球状粒子は前述したような方法に
従って調製されることによりその球径を任意に制御され
ることができる。一般に、この球状粒子は１μｍから３
００μｍの範囲にある。

本発明の発熱物質吸着用粒子は、前記のポリアミノ酸球
状粒子にイミダゾール誘導体を結合させることにより調
製することができる。ここで言うイミダゾール誘導体と
は、イミダゾール基を有する化合物を指すが、特にヒス
タミン、ヒスチジン等を使用することが好ましく、これ
らの１種または複数種が本発明の発熱物質吸着体の調製
に用いられる。これらのイミダゾール誘導体を前記ポリ
アミノ酸球状粒子に結合させる場合には、直接らしくは
スペーサー（間隔子）介してイミダゾール誘導体を結合
させることができる。しかしながら、スペーサー（間隔
子）を介して両者を結合させることにより発熱物質との
反応性に優れた吸着体を得ることが可能である。そのよ
うなスペーサーは、担体として用いるポリアミノａ球状
粒子を構成しているアミノ酸に応じて選ばれることが必
要である６例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸
を含むポリアミノ酸球状粒子の場合には、多価アミンお
よび多価カルボン酸からなる酸アミドが好ましいスペー
サーの一例として挙げられる。

本発明の吸着体の好ましい態様として、ポリアミノ酸球
状粒子とイミダゾール誘導体が酸アミド結合により結合
されたものを挙げることができる。

このような吸着体の調製に使用されるポリアミノ酸球状
粒子は、例えばポリグルタミン酸エステルまたはポリア
スパラギン酸エステルからなる粒子、グルタミン酸エス
テルもしくはアスパラギン酸エステルを一部含みその他
の疎水性アミノ酸からなるホモポリマー粒子、疎水化ポ
リリジンまたは疎水化ポリオルニチンからなる粒子、ま
たは疎水化ポリリジンもしくは疎水化ポリオルニチンを
一部含みその他の疎水性アミノ酸からなるホモポリマー
粒子等である９例えば、グルタミン酸もしくはアスパラ
ギン酸からなる球状粒子の調製には、これらのアミノ酸
のエチルエステル、プロピルエステル、ベンジルエステ
ル等を原材料として、前記に示した調製法により目的の
ポリアミノ酸球状粒子を調製することができる。

本発明の好ましい吸着体を１１製するにあたり、グルタ
ミン酸もしくはアスパラギン酸を少なくとも一部含む球
状粒子を用いる場合には、イミダゾール誘導体を直接、
またはカルボン酸並びにアミノ基を有するスペーサーを
介して結合させることにより目的の吸着体を得、一方、
リジンもしくはオルニチンを少なくとも一部含む球状粒
子を用いる場合には、多価カルボン酸をスペーサーとし
て結合させることにより本発明の好ましい吸着体を得る
ことができる。

上記に述べたような本発明の好ましい発熱物質吸着体と
して、グルタミン酸またはアスパラギン酸を少なくとも
一部含むポリアミノ酸球状粒子を用いた場合を例にとり
、その調製方法を以下説明する。

スペーサーを介さずにポリアミノ酸球状粒子とイミダゾ
ール誘導体を結合させる場合には、通常の縮合試薬を用
いてイミダゾール誘導体を粒子に誘導する。ここで言う
通常の縮合試薬とはペプチド合成用、酵素固定化等に使
用される通常の縮合試薬であり、ジクロロへキシルカル
ボジイミドや、水溶性カルボジイミド、シアノリン酸ジ
エチル等である。また、スペーサーを介して、より好ま
しい吸着体を調製するには、まず、ポリアミノ酸球状粒
子をエチレンジアミンやヘキサメチレンジアミンのよう
な多価アミンによって処理することにより、アミノ基を
該球状粒子に結合させる。この場合に、反応を行う多価
アミンの量、温度および反応時間によってアミノ基の導
入量を調節でき、一般的にはその導入量を０，０１ミリ
当量（ｓｅｑ）から４ミリ当量まで調節することが可能
である。さらにこの球状粒子を無水グルタル酸や無水コ
ハク酸のような多価カルボン酸で処理することにより、
酸アミド結合を介したカルボキシル基を球状粒子に導入
することができる。この場合のカルボキシル基の導入率
は、ポリアミノ酸球状粒子に結合しているアミノ基に対
して１００％反応させることができる。カルボキシル化
されたポリアミノ酸球状粒子を通常の縮合試薬を用いて
イミダゾール誘導体を導入する。イミダゾール誘導体の
固定化量も反応に用いるイミダゾールとポリアミノ酸球
状粒子の量によってポリアミノ酸球状粒子１ｇあたり、
０．０１ｍｅｑ　（ミリ当ｉｔ）から３ｍｅｑまで調節
することができる。

以上のようにして調製された本発明の発熱物質吸着体は
、発熱物質との反応性に優れており、−これに加えて、
これまで用いられていたセファツデックス等を素材とし
た粒子に比べて、吸着体が非常に硬く安定しているため
、膨潤度も極めて小さく発熱物質の除去操作を短時間の
うちに行うことが可能である１粒子の構造から見ると、
従来のデキストラン系の物質を基本物質とした粒子に比
較して、官能基であるイミダゾール誘導体を一定量の球
状粒子あたり非常に多く（例えば、ポリアミノ酸球状粒
子１ｇあたり約３ミリ当量程度）結合させることが可能
となる。また、スペーサーを結合させる反応においても
、セファデックス等のデキストラン系の粒子に結合させ
る場合と比べて、非常に穏和な条件で反応を進めること
が可能であり、目的の発熱物質吸着体を容易に調製する
ことが可能である。さらに、本発明の好ましい態様では
、担体であるポリアミノ酸からスペーサーを介してイミ
ダゾール誘導体の全ての結合が硬直な酸アミド結合から
なっており、そのためイミダゾール誘導体の立体位置が
固定化されることも本発明の吸着体が示す成果に大きく
寄与しているものと考えられる。また、担体の働きをし
ているポリアミノ酸自体にも、発熱物質（ＬＰＳ）との
親和性がかなり強い為、より効果的に発熱物質を吸着で
きると考えられる。さらに本発明の発熱物質吸着用粒子
は、他の蛋白成分（目的の精製物質）とは親和性を示さ
ず、目的の精製物質の回収率を低下させることなく発熱
物質のみを極めて選択的に除去することが可能である。

上記の発熱物質吸着体を用いて発熱物質を除去する操作
としては、カラムを用いたクロマトグラフィーまたは、
バッチ処理法のいずれの方法でも用いることができる。

カラムを利用したクロマトグラフィーの場合には、本発
明の発熱物質吸着体をカラムに充填し適当な緩衝液等で
洗浄した後、目的の発熱物質含有溶液を流し、素通り画
分を回収することによって発熱物質が除かれた目的精製
物を得ることができる。また、バッチ法においては発熱
物質含有溶液に本発明の発熱物質吸着体を添加し、撹拌
した後、粒子のみを液体から分離除去することにより発
熱物質を含まない精製産物を得ることができる０本発明
の吸着体は従来のデキストラン系の粒子と比較すると、
はとんど膨潤性を示さすカラムクロマトグラフィー等を
極めて短時間のうちに行うことができ、工業的に使用さ
れる場合にも非常に遇している。比較データとして、代
表的な担体として一般によく知られているセファデック
スＧ−１５ｈおよびセファロース４Ｂと本発明の吸着体
における線流速と圧力損失との関係を示した結果を第１
図に示した。

以下、実施例に沿って本発明をさらに詳細に説明する。

ＩＬｌ 大」Ｌ困」２： ポリグルタミン酸メチル１０ｇ、デカリン１０１をジク
ロロエタン４００諏１に溶解し、これを５０°Ｃに保っ
た１、５重量％部分酢化ポリビニルアルコールの水溶液
２０００ｍ１中に滴下した。同温度で２４時間激しく撹
拌するとジクロロエタンが蒸発して、デカリンを含んだ
ポリグルタミン酸メチルエステルの球状粒子が得られた
。これをアセトンを用いソックスレー抽出法により洗浄
してデカリンを除いたのち、水に懸濁させて、ＪＩＳ規
格適合ふるいで６４〜１０５μ観の粒径を持つ球状粒子
を得た。この球状粒子の最大空孔径は、２ｘｌＯ’　（
デキストランの分子量に換算した数値）、空孔率は５５
％であった。

この球状粒子５ｇをメタノール５０１、エチレンジアミ
ン５０１の混合溶液中に懸濁させ、６５℃で１２時間ゆ
っくりとかきまぜた０粒子を一過によって集め、メタノ
ール、水で洗浄してアミノ基を導入した粒子を得た。ア
ミノ基の導入量は、滴定法により１ｇのポリアミノ酸粒
子に対して０．８２ミリ当量（鳳ｅｑ）であった６次に
、このアミノ化粒子４ｇをテトラヒドロフラン１００１
中に懸濁させ、無水グルタル酸０．１４ｇを加えて４０
℃で２４時間ゆっくりとかきまぜた０粒子を濾過によっ
て集め、メタノール、水で洗浄して力・ルボキシル基を
導入した粒子を得た。

滴定法により、粒子中のアミノ基の９８％以上がカルボ
キシル化されたことを確認した６次にこのカルボキシル
化粒子を３．５ｇとヒスタミンニ塩酸塩２ｇを水５０１
に懸濁させ、トリエチルアミン３ｍｌ、水溶性カルボジ
イミド（１−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエ
チル）カルボジイミド−ｐ−トルエンスルホネート）　
０．５６ｇを加え、室温で２日間ゆっくりとかきまぜた
０粒子を濾過によって集め、水、アルコール、エーテル
の順に洗浄した。生成粒子中のヒスタミン含量は、アミ
ノ酸分析により粒子１ｇあなリ０．５ｍｅｑであった。

また、元素分析値は、Ｃ，４９，９５％、　Ｉｆ、６．
８２％、　Ｎ、１０．８０％であった。このようにして
得られた吸着体を吸着体Ａと称す。

ｍユニ ポリグルタミン酸メチル１０ｇ、デカリン１０ｍ１をジ
クロロエタン４００１に溶解し、これを５０℃に保った
］、　５！ｌ量％部分酢化ポリビニルアルコールの水溶
液２θＱＯｓｉ１中に滴下した。同温度で４８時間激し
く撹拌しジクロロエタンを蒸発させ、デカリンを含んだ
ポリグルタミン酸メチルエステルの球状粒子が得られた
。実施例１の場合と同様にソックスレー抽出法により洗
浄してデカリンを除いたのち、水に懸濁させて、ＪＩＳ
規格適合ふるいで６４〜１０５μ閣の粒径を持つ球状粒
子を得た。この球状粒子の最大空孔径は、２ｘｌＯ’　
（デキストランの分子量に換算した数値）、空孔率は５
５％であった。

この球状粒子５ｇをメタノール５０ｍ１、エチレンジア
ミン５０■ｌの混合溶液中に懸濁させ、６５°Ｃで４８
時間ゆっくりとかきまぜた６粒子を濾過によって集め、
メタノール、水で洗浄してアミノ基を導入した粒子を得
た。この場合のアミン基の導入壁は、３、２Ｉｌｅｑ／
ｇ　（Ｉｇ粒子当り３，２ミリ当ｊｔ）であった０次に
、このアミン化粒子４ｇをテトラヒドロフラン１００■
ｌ中に懸濁させ、無水グルタル酸０．５５ｇを加えて４
０℃で２４時間ゆっくりとかきまぜた４粒子を濾過によ
って集め、メタノール、水で洗浄してカルボキシル基を
導入した粒子を得た６滴定法により、粒子中のアミノ基
の９８％以上がカルボキシル化されたことを確認した０
次にこのカルボキシル化粒子を３．５ｇとヒスタミンニ
塩酸塩３匹を水５（１＋ｓｌに懸濁させ、トリエチルア
ミン４．５ｍｌ、水溶性カルボジイミド（ｌ−シクロへ
キシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド
−ｐ−トルエンスルホネート）０．５６区を加え、室温
で２日間ゆっくりとかきまぜた０粒子を一過によって集
め、水、アルコール、エーテルの順に洗浄した。生成粒
子中のヒスタミン含量は、アミノ酸分析により１．０＠
ｅｑ／ｇであった。この粒子の元素分析値は、　Ｃ，５
０，０４％、ｌ（，６，５０％；Ｎ。

１３、８４％であった。このようにして得られた吸着体
を吸着体Ｂと称す。

叉」Ｕ九ユ ポリグルタミン酸メチル１０ｇ、フタル酸ジオクチル２
０．０＋＊ｌをジクロロエタン４００１に溶解し、これ
を５０℃に保ったｔ、５を量％部分酢化ポリビニルアル
コールの水溶液２０００＋ａｌ中に滴下した。同温度で
４８時間激しく撹拌し、実施例１と同様にしてフタル酸
ジオク、チルを含んだポリグルタミン酸メチルエステル
の球状粒子を得、これをエタノールを用いソックスレー
抽出法により洗浄してフタル酸ジクチルを除いたのち、
水に懸濁させて、ＪＩ３規格適合ふるいで６４〜１０５
μ鵠の粒径を持つ球状粒子を得た。

この球状粒子の最大空孔径は、２ｘｌＯ’　（デキスト
ランの分子量に換算した数値）、空孔率は８０％であっ
た。

この球状粒子５ｇをデカリン９０ｍ１、エタノール１０
１、およびエチレンジアミン５１の混合溶液中に懸濁さ
せ、６５℃で１２時間ゆっくりとかきまぜた０粒子をＦ
Ａによって集め、エタノール、水で洗浄してアミノ基を
導入した粒子を得た。アミノ基の導入壁は、滴定法によ
り２．５ｍｅｑ／ｇであった０次に、このアミン化粒子
４ｇをテトラヒドロフラン１００ａ＋１中に懸濁させ、
無水グルタル酸０．７ｇを加えて４０℃で２４時間ゆっ
くりとかきまぜた２粒子を一過によって集め、メタゾー
ル、水で洗浄してカルボキシル基を導入した粒子を得た
０滴定法により、粒子中のアミン基の９８％以上がカル
ボキシル化されたことをＴＸ１認した０次に、このカル
ボキシル化粒子を３、５ｇとヒスタミンニ塩酸塩３ｇを
水５０ｉ１に懸濁させ、トリエチルアミン４．５ｍｌ、
水溶性カルボジイミド（１−シクロへキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミド−Ｐ−）ルエンス
ルホネーｈ　）　０．５６ｇを加え。

室温で２日問ゆっくりとかきまぜた０粒子を濾過によっ
て集め、水、アルコール、エーテルの順に洗浄した。生
成粒子中のヒスタミン含量は、アミノ酸分析により２．
５ａ＋ｅｑ／ｇであった。この粒子の元素分析値は、Ｃ
，４９，６８％、　Ｈ，６，８１％：　Ｎ、１７．０８
％であった。このようにして得られた吸着体を吸着体Ｃ
と称す。

支■且ユ ポリグルタミン酸メチル１０ｇ、デカリン１５．６ｍｌ
をジクロロエタン４００ｍ１に溶解し、これを５０℃に
保った１、５重量％部分酢化ポリビニルアルコールの水
溶液２０００＋＊１中に滴下した。同温度で４８時間激
しく撹拌するとジクロロエタンが蒸発して、デカリンを
含んだポリグルタミン酸メチルエステルの球状粒子が得
られた。これをアセトンを用いソックスレー抽出法によ
り洗浄してデカリンを除いたのち、水に懸濁させて、Ｊ
ＩＳ規格適合ふるいで６４〜７５μ園の粒径を持つ球状
粒子を得た。この球状粒子の最大空孔径は、ｌｘｌい（
デキストランの分子量に換算した数値）、空孔率は７０
％であった。

この球状粒子５ｇをデカリン９０璽１、エタノール１０
ｍ１、エチレンジアミン５ｍｌの混合溶液中に懸濁させ
、６５℃で１２時間ゆっくりとかきまぜた０粒子を濾過
によって集め、エタノール、水で洗浄してアミノ基を導
入した粒子を得た。アミン基の導入量は、滴定法により
３．０ａｅｑ／ｇであった０次に、このアミノ化粒子４
ｇをテトラヒドロフラン１００ｍ１中に懸濁させ、無水
コハク酸０．６ｇを加えて４０℃で２４時間ゆっくりと
かきまぜた０粒子を濾過によって集め、メタノール、水
で洗浄してカルボキシル基を導入した粒子を得た４滴定
法により、粒子中のアミノ基の９８％以上がカルボキシ
ル化されたことを確認した０次にこのカルボキシル化粒
子を３．５ｇとヒスタミンニ塩酸塩２ｇを水５ｈｌに懸
濁させ、トリエチルアミン３１１１、水溶性カルボジイ
ミド（ｌ−シクロへキシル−３−（２−モルホリノエチ
ル）カルボジイミド−ｐ−トルエンスルホネート）　０
．５６ｇを加え、室温で２日間ゆっくりとかきまぜた０
粒子を濾過によって集め、水、アルコール、エーテルの
順に洗浄した。

生成粒子中のヒスタミン含量は、アミノ酸分析により１
．５ｍｅｑ／ｇであった。また、元素分析値は、Ｃ９４
８、４３％；■、７．１０％；　Ｎ、１６．８６％であ
った。このようにして得られた吸着体を吸着体りと称す
。

１１丞五 ポリグルタミン酸メチｌし１０ｇ、デカリン１５．６ｆ
ｆ１１をジクロロエタン４００ｍ１に溶解し、これを５
０°Ｃに保った１６５重量％部分酢化ポリビニルアルコ
ールの水溶液２００ｈｌ中に滴下した。同温度で４８時
間激しく撹拌し、実施例１と同様にしてポリグルタミン
酸メチルエステルの球状粒子を得、これをアセトンを用
いソックスレー抽出法により洗浄してデカリンを除いた
のち、水に懸濁させて、ＪＩＳ規格適合ふるいで７５〜
１０５μ腫の粒径を持つ球状粒子を得た。この球状粒子
の最大空孔径は、１ｘｌＯ’　（デキストランの分子量
に換算した数値）、空孔率は７０％であった。

この球状粒子５ｇをデカリン９０ｍ１、ヘキサメチレン
ジアミン１Ｇ＋＊１の混合溶液中に懸濁させ、６５℃で
１２時間ゆっくりとかきまぜた０粒子をＰ通によって集
め、エタノール、水で洗浄してアミノ基を導入した粒子
を得た。アミノ基の導入量は、１．５ｍｅｑ／ｇであっ
た０次に、このアミノ化粒子４ｇをテトラヒドロフラン
１００１中に懸濁させ、無水グルタル酸０、５５ｇを加
えて４０℃で２４時間ゆっくりとかきまぜた。

粒子を濾過によって集め、メタノール、水で洗浄してカ
ルボキシル基を導入した粒子を得た０滴定法により、粒
子中のアミノ基の９８％以上がカルボキシル化されたこ
とを確認した０次にこのカルボキシル化粒子を３．５ｇ
とヒスタミンニ塩酸塩３ｇを水５０ｍ１に懸濁させ、ト
リエチルアミン４．５ｍＩ！、水溶性カルボジイミド（
１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カ
ルボジイミド−ｐ−トルエンスルホネート＞　０．５６
ｇを加え、室温で２日間ゆっくりとかきまぜた０粒子を
濾過によって集め、水、アルコール、エーテルの順に洗
浄した。生成粒子中のヒスタミン含量は、アミノ酸分析
により０．８＋＊ｅｑ／ｇであった。　この粒子の元素
分析値は、Ｃ，５３，１２％；ｌ（。

６．９８％；　Ｌｉ２．７８％であった。このようにし
て得られた吸着体を吸着体Ｅと称す。

支ｔｆｕ玉 ポリグルタミン酸メチル１０ｇ、フタル酸ジオクチル３
０．　ｈ＋をジクロロエタン４００１に溶解し、これを
５０℃に保った１、５重量％部分酢化ポリビニルアルコ
ールの水溶液２０００＋１中に滴下した。同温度で４８
時間激しく撹拌し、実施例１と同様にしてポリグルタミ
ン酸メチルエステルの球状粒子を得、これをエタノール
を用いソックスレー抽出法により洗浄してフタル酸ジオ
クチルを除いたのち、水に懸濁させて、ＪＩＳｊ３１格
適合ふるいで６４〜１０５μｍの粒径を持つ球状粒子を
得た。この球状粒子の最大空孔径は、１ｘｌＯ’　（デ
キストランの分子量に換算した数値）、空孔率は９５％
であった。

この球状粒子５ｇをデカリン９０■ｌ、エタノール１０
■ｌ、およびエチレンジアミン５１の混合溶液中に懸濁
させ、６５℃で１２時間ゆっくりとかきまぜた０粒子を
濾過によって集め、エタノール、水で洗浄してアミノ基
を導入した粒子を得た。アミノ基の導入量は、２．６■
ｅｑ／ｇであった０次に、このアミノ化粒子４ｇをテト
ラヒドロフラン１００ｍ１中に懸濁させ、無水グルタル
酸０．７ｇを加えて４０℃で２４時間ゆつく　。

つとかきまぜた０粒子を一過によって集め、メタノール
、水で洗浄してカルボキシル基を導入した粒子を得た０
滴定法により、粒子中のアミン基の９８％以上がカルボ
キシル化されたことを確認した。

次にこのカルボキシル化粒子を３．５ｇとヒスタミン二
塩酸塩１ｇを水５０ｍ１に懸濁させ、トリエチルアミン
４．５■ｌ、水溶性カルボジイミド（１−シクロへキシ
ル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−Ｐ
−）ルエンスルホネート＞　０．５６ｇを加え、室温で
２日間ゆっくりとかきまぜた０粒子を一過によって集め
、水、アルコール、エーテルの順に洗浄した。生成粒子
中のヒスタミン含量は、アミノ酸分析により１、２＋ａ
ｅｑ／ｇであった。この粒子の元素分析値は、Ｃ１４６
、８８％、　１１，６．７７％、　Ｎ、１４．９８％で
あった。このようにして得られた吸着体を吸着体Ｆと称
す。

実施例２、実施例３、実施例５および実施例６で調製し
た各種吸着体１．０ｇ（乾燥重量）をパイロジエンを含
まないｌＯ■間リン酸［１液（１，０Ｍ　ＮａＣ１含有
）、１θｍＭリン酸緩衝液（０，０７Ｍ　ＮａＣ１含有
）で順次洗浄した。この吸着体をパイロジエン含有リン
酸！！衝液（大Ｈ菌エンドトキシン　Ｌ　Ｐ　Ｓ。

Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｔ　Ｅｎｄｏｔｏｘｉ
ｎ　ＬＰＳ　７８ｎｇ／ｍｌ含有）１．５ｍｌに懸濁し
、１５分間撹拌後静置した。上清液についてパイロジエ
ン濃度の測定を行った。その結果を第１表に示した。

第１表 実施例７で１度使用した吸着体Ｃおよび吸着体Ｅを０．
２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３１．０．５％コール酸ナ
トリウム水溶液１０１１．０．２Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液２ｈｌ、１０＋ａＭ！Ｊン酸緩衝ｍ　（０，０７Ｍ
　ＮａＣ１含有）２０１．１ｈＭリン酸［１液（１，Ｏ
Ｎ　ＮａＣ１含有）１０論１．１０ｍＭリン酸）１衝液
（０，０７Ｍ　ＮａＣ１含有）２ｏ１で順次洗浄した。

　　この吸着体をパイロジエン含有リン酸緩衝液（Ｌ　
Ｐ　Ｓ　　７８ｎｇ／ｍｌ含有）　１．５＋１に懸濁し
撹拌した。静置後、上澄液についてパイロジエンの濃度
測定を行ったところ、パイロジエン除去率は、吸着体Ｃ
で９９％以上、吸着体Ｅで９４％以上であった。

支１月ユ 実施例３で調製した吸着体Ｃを１．０Ｍ食塩水で洗浄後
、滅菌した内径２５Ｉ、長さ１００■のカラムに充填し
、パイロジエンを含まないｌＯＯＭリン酸１２１ｉ液（
１，ＯＭ　ＮａＣ１含有）、ｌ１０ｌ１１リン酸緩衝液
（０，０７ＭＮａＣ１含有）で順次洗浄した。このカラ
ムにパイロジエン（Ｌ　Ｐ　Ｓ　）　１４０■ｇ／ｍｌ
を含む１０％ヒトアルブミン水溶液１００諷ｌを通液し
処理した。この流出液中には、ヒトアルブミンが９７％
以上回収され、パイロジエン濃度は、９９％以上除去さ
れた。

支胤■ユ辺 実施例３で調製した吸着体Ｃを実施例９と同様にしてカ
ラムに充填し、Ｌ　Ｐ　Ｓ　９７ｎｇ／ｍｌを含む１０
％ヒト免疫グロブリン（ＩｇＧ）溶液５０■ｌを通液さ
せた。その結果パイロジエンは９７％以上除去でき、Ｉ
ｇＧは９９％以上回収した。

実ＪＬｌＬ上」一 実施例４で調製した吸着体りを実施例９と同様にカラム
に充填し、Ｌ　Ｐ　Ｓ　３００■ｇ／ｍｌを含む組換え
ＨＢｓ抗原液（組換え酵母により産生されたＢ型肝炎ウ
ィルス表面抗原）　１００＋ａｌを通液させた。その結
果、パイロジエンは９９％以上除去され、’　　ＨＩＩ
ｓ抗原は９９％以上回収された。

１１亘ユニ 実施例１で調製した吸着体Ａ１．０ｇをＬＰＳ１６０ｎ
ｇ／−１含有組換えｌ１ｌｌｓ抗原液２１に加え実施例
７と同様に処理した結果、パイロジエンを９１％以上除
去、ＨＢｓ抗原は９９％以上回収できた。

１胤亘ユニ 実施例４で調製した吸着体Ｄ１．ＯｇをＬ　Ｐ　Ｓ　３
００ｎｇ／ｍｌ含有１０％ヒトアルブミン水溶液３１に
加え実施例７と同様に処理した。その結果、パイロジエ
ンを９９％以上除去し１、ヒトアルブミンは７１％以上
回収できた。

支ｊｌｉＪＬユＡ 実施例４で調製した吸着体Ｄ１．０ｇをＬ　Ｐ　Ｓ　９
７ｎｇ／ｍｌ含有１０％ヒト免疫グロブリン溶液３ｍｌ
に加え実施例７と同様に処理した。その結果、パイロジ
エンは９８％以上除去し、ヒト免疫グロブリンは９９％
以上回収できた。

支１五ユｊ 実施例２で！ｌ［ｌＹＡシた吸着体Ｂ１．ＯｇをＬ　Ｐ
　Ｓ　９７ｎｇ／＋１含有１０％ヒト免疫グロブリン溶
液３１に加え実施例７と同様に処理した。その結果、パ
イロジエンは９８％以上除去し、ヒト免疫グロブリンは
９９％以上回収できた。

支１員土工 実施例２で調製した吸着体Ｂ１．ＯｇをＬＰＳ３００ｎ
ｇ／ｍｔ含有組喚えＨＢｓ抗原液３＋ａｌに加え実施例
７と同様に処理した。その結果、パイロジエンを９９％
以上除去、ヒト免疫グロブリンは９９％以上回収できた
。

去」Ｌ例二しヱ 実施例２でｔｉｌｌ製した吸着体Ｂ　Ｌ、０ｃｔ−Ｌ　
Ｐ　Ｓ　１２２８ｎｇ／ｌ含有組換えｇＢ抗原液（ｇＢ
：組換え酵母により産生された単純ヘルペスウィルス糖
蛋白質ｇＢ）３ｍ目こ加え実施例７と同様に処理した。

その結果、パイロジエンを９９％以上除去し、組換えｇ
Ｂ抗原は９９％以上回収できた。

爽ＪｌｕＬＬ上 実施例５で調製した吸着体Ｅ１．ＯｇをＬＰＳ３０θｎ
ｇ／ｍｌ含有１０％ヒトアルブミン水溶液３ｍｌに加え
実施例７と同様に処理した。その結果、パイロジエンを
９８％以上除去し、しトアルブミンは９１％以上回収で
きた。

以上の実施例のように、本発明の発熱物質吸着体は、パ
イロジエンを含んだ各種溶液において、パイロジエンの
みを特異的に吸着し、目的の精製物質を極めて高い回収
率で精製することができた。

これらの実施例から明らかなように、本発明の発熱物質
吸着体は、医薬品の製造において極めて有効な発熱物質
の除去操作として用いることが可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の吸着体、セファデックスＧ−１５０
１およびセファロース４Ｂにおける線流速と圧力損失の
関係を示した図である。 第１図

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ポリアミノ酸球状粒子を担体とし、これにイミダ
   ゾール誘導体を結合させたことを特徴とする発熱物質吸
   着体。
2. （２）ポリアミノ酸球状粒子とイミダゾール誘導体とを
   酸アミド結合を含むスペーサーを介して結合させた前記
   第（１）項記載の発熱物質吸着体。
3. （３）イミダゾール誘導体がヒスタミンおよび／または
   、ヒスチジンである前記第（１）項または第（２）項記
   載の発熱物質吸着体。
4. （４）ポリアミノ酸球状粒子がα−ヘリックス構造を含
   むものである前記第（１）項〜第（３）項のいずれかに
   記載の発熱物質吸着体。