JPH01135798A - 抗体の精製法 - Google Patents
抗体の精製法Info
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- JPH01135798A JPH01135798A JP62287203A JP28720387A JPH01135798A JP H01135798 A JPH01135798 A JP H01135798A JP 62287203 A JP62287203 A JP 62287203A JP 28720387 A JP28720387 A JP 28720387A JP H01135798 A JPH01135798 A JP H01135798A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Control Of El Displays (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は抗体に関し、さらに詳しくは抗体の精製に関す
る。またさらに詳しくは、本発明はサブクラスＩ（ｇ）
Ｇ３の抗体の精製および貯蔵に関連する。
る。またさらに詳しくは、本発明はサブクラスＩ（ｇ）
Ｇ３の抗体の精製および貯蔵に関連する。
（従来の技術）
抗体つ精製に対しこれまで様々な方法が使用されてきて
いる。たとえば、抗体は抗原アフィニティクロマトグラ
フィまたはプロティンＡアフィニティクロマトグラフィ
により精製されてきた。サブクラスＩ（ＩＪ）Ｇ３の抗
体精製の試みにおいて、このような方法では１（ｇ）Ｇ
３抗体は溶液からしばしば沈澱しこの沈澱物は一般に不
可逆的に不溶性となり、これにより精製抗体の損失を起
こすという困難に会ってきた。
いる。たとえば、抗体は抗原アフィニティクロマトグラ
フィまたはプロティンＡアフィニティクロマトグラフィ
により精製されてきた。サブクラスＩ（ＩＪ）Ｇ３の抗
体精製の試みにおいて、このような方法では１（ｇ）Ｇ
３抗体は溶液からしばしば沈澱しこの沈澱物は一般に不
可逆的に不溶性となり、これにより精製抗体の損失を起
こすという困難に会ってきた。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は抗体、特にサブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体の精
製および貯蔵の向上を目指すものである。
製および貯蔵の向上を目指すものである。
（問題点を解決するための手段）
本発明の一面によれば、サブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体
はＩ（ｇ）Ｇ３抗体を含む液体をアフィニティマトリッ
クスと接触させることにより精製され、このような接触
を９．０〜９．６のｐＨで行なうとマトリックスに１（
（］）Ｇ３抗体が結合する０次いで、Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体
をマトリックスから脱離し、Ｉ（９）Ｇ３をｐＨ９，０
〜９．６、最も一般にはｐｌ＋はぼ９．３に！ＷＩ化さ
れた液中に集める。脱離剤を使用してアフィニティマト
リックスから抗体を脱離させ、ただちにＩ（ｇ）Ｇ３抗
体を脱離剤から分離し、そしてｐＨ９，０〜９．６の水
性緩衝液中に集める。
はＩ（ｇ）Ｇ３抗体を含む液体をアフィニティマトリッ
クスと接触させることにより精製され、このような接触
を９．０〜９．６のｐＨで行なうとマトリックスに１（
（］）Ｇ３抗体が結合する０次いで、Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体
をマトリックスから脱離し、Ｉ（９）Ｇ３をｐＨ９，０
〜９．６、最も一般にはｐｌ＋はぼ９．３に！ＷＩ化さ
れた液中に集める。脱離剤を使用してアフィニティマト
リックスから抗体を脱離させ、ただちにＩ（ｇ）Ｇ３抗
体を脱離剤から分離し、そしてｐＨ９，０〜９．６の水
性緩衝液中に集める。
特に好ましい実施態様において、アフィニティマトリッ
クスをカラム中で使用し、このカラムはまた脱塩マトリ
ックスも含み、アフィニティマトリックスはカラム内に
おいて脱塩マトリックスまたはゲルの上部の位置に配置
される。この方法において、脱離した抗体は脱塩マトリ
ックスまたはゲルへ移動しここで脱離剤が１（９）Ｇ３
抗体がら分離される。
クスをカラム中で使用し、このカラムはまた脱塩マトリ
ックスも含み、アフィニティマトリックスはカラム内に
おいて脱塩マトリックスまたはゲルの上部の位置に配置
される。この方法において、脱離した抗体は脱塩マトリ
ックスまたはゲルへ移動しここで脱離剤が１（９）Ｇ３
抗体がら分離される。
カラムをｐＨ９゜０〜９．６に平衡化し、これによりＮ
製の間抗体はこのｐＨに保たれ、抗体と脱離剤の間の接
触が最小化される。
製の間抗体はこのｐＨに保たれ、抗体と脱離剤の間の接
触が最小化される。
すなわち、本発明の別の観点によれば、サブクラスＩ（
り）Ｇ３の抗体精製のためのカラムを提供するものであ
って、該カラムはアフィニティマトリックスと脱塩マト
リックスまたはゲルの両方を有し、該アフィニティマト
リックスは脱塩ゲルの上部のカラム内に位置し、カラム
全体はｐＨ９゜Ｏ〜９．６、最も一般にはｐＨ約９．３
に平衡化されている。
り）Ｇ３の抗体精製のためのカラムを提供するものであ
って、該カラムはアフィニティマトリックスと脱塩マト
リックスまたはゲルの両方を有し、該アフィニティマト
リックスは脱塩ゲルの上部のカラム内に位置し、カラム
全体はｐＨ９゜Ｏ〜９．６、最も一般にはｐＨ約９．３
に平衡化されている。
本発明により精製されるサブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体
はポリクローナル抗体の一部として存在してもよいが、
本発明の好ましい観点によれば精製される抗体はサブク
ラスＩ（ＩＪ）Ｇ３のモノクローナル抗体である。すな
わち、抗体がポリクローナル抗体である場合には、精製
される抗体はＩ （ｇ）Ｇ３抗体以外の抗体を含んでも
よく、および／またはサブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体２
Ｎ以上を含んでもよい。
はポリクローナル抗体の一部として存在してもよいが、
本発明の好ましい観点によれば精製される抗体はサブク
ラスＩ（ＩＪ）Ｇ３のモノクローナル抗体である。すな
わち、抗体がポリクローナル抗体である場合には、精製
される抗体はＩ （ｇ）Ｇ３抗体以外の抗体を含んでも
よく、および／またはサブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体２
Ｎ以上を含んでもよい。
本発明により精製されるサブクラスＩ（ｇ）Ｇ３の抗体
は様々な手段のいずれか１つにより得られ、様々な抗体
のいずれか１つである。上記で示したように、Ｉ（ｇ）
Ｇ３抗体はモノクローナル抗体でな抗体は本発明にした
がって精製されうる。
は様々な手段のいずれか１つにより得られ、様々な抗体
のいずれか１つである。上記で示したように、Ｉ（ｇ）
Ｇ３抗体はモノクローナル抗体でな抗体は本発明にした
がって精製されうる。
使用されるアフィニティマトリックスはＩ（９）Ｇ３抗
体を吸着しうるちのである。すなわち、たとえばアフィ
ニティマトリックスは、プロティンＡ；精製されるべき
Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体の抗原、または精製されるべきＩ（ｇ
）Ｇ３抗体の抗体を固定した形で含みうる（例えば固定
支持体、たとえば架橋したデキストランに支持された形
で含みうる）。
体を吸着しうるちのである。すなわち、たとえばアフィ
ニティマトリックスは、プロティンＡ；精製されるべき
Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体の抗原、または精製されるべきＩ（ｇ
）Ｇ３抗体の抗体を固定した形で含みうる（例えば固定
支持体、たとえば架橋したデキストランに支持された形
で含みうる）。
Ｉ（９）Ｇ３抗体を吸着するための適当なアフィニティ
マトリックスの選択は、本明細書中の教えから当業者の
範囲内であると思われる；したがって、これ以上の詳細
は当業者が本発明を実施するために必要ではないと思わ
れる。
マトリックスの選択は、本明細書中の教えから当業者の
範囲内であると思われる；したがって、これ以上の詳細
は当業者が本発明を実施するために必要ではないと思わ
れる。
本発明において使用される脱塩マトリックスまたはゲル
は、脱塩（大きな分子から小さな塩イオンまたは分子を
分離する）に適する様々なマトリックスのいずれか１つ
である。このようなマトリックスはしばしばゲルと呼ば
れ、このようなマトリックスを使用する方法はゲル濾過
として言及される６本発明によれば、脱塩マトリックス
は、アフィニティマトリックスから脱離しなＩ（（］）
Ｇ３抗体と、アフィニティマトリックスからＩ（ｇ）Ｇ
３抗体を脱離するために使用される物質とを分離するた
めに使用される。このような脱塩マトリックスの代表的
例としては、次のようなものが言及される：架橋したデ
キストラン（たとえば、商標名“セファデックスＧ−２
５”として市販される型のもの）およびポリアクリルア
ミドビーズ（たとえば、商標名“バイオ−ラッドＰ−２
”として市販される型のもの）。
は、脱塩（大きな分子から小さな塩イオンまたは分子を
分離する）に適する様々なマトリックスのいずれか１つ
である。このようなマトリックスはしばしばゲルと呼ば
れ、このようなマトリックスを使用する方法はゲル濾過
として言及される６本発明によれば、脱塩マトリックス
は、アフィニティマトリックスから脱離しなＩ（（］）
Ｇ３抗体と、アフィニティマトリックスからＩ（ｇ）Ｇ
３抗体を脱離するために使用される物質とを分離するた
めに使用される。このような脱塩マトリックスの代表的
例としては、次のようなものが言及される：架橋したデ
キストラン（たとえば、商標名“セファデックスＧ−２
５”として市販される型のもの）およびポリアクリルア
ミドビーズ（たとえば、商標名“バイオ−ラッドＰ−２
”として市販される型のもの）。
カラムは、様々な）［剤の使用により少なくとも９，０
で９．６以下のｐＨに平衡化され、適当な緩衝剤の選択
はここで示す記述から当業者の範囲内であると思われる
。たとえば、緩衝剤は重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリ
ウムまたはトリス緩衝液である。代表的ｗｉ衝剤は、ｐ
Ｈ約９．３をもたらす０．１Ｍホウ酸ナトリウム綬街剤
である。
で９．６以下のｐＨに平衡化され、適当な緩衝剤の選択
はここで示す記述から当業者の範囲内であると思われる
。たとえば、緩衝剤は重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリ
ウムまたはトリス緩衝液である。代表的ｗｉ衝剤は、ｐ
Ｈ約９．３をもたらす０．１Ｍホウ酸ナトリウム綬街剤
である。
アフィニティマトリックスから抗体を脱離するために使
用する脱離剤は、様々なこのような脱離剤のいずれか１
つである。一般に、このような脱離剤は、ｐＨ４，０以
下にｔＪＩＦｒ化された水性１［液である。はとんどの
場合、緩衝剤はｐＨ２，０以上である；しかしながら、
もっと低いｐＨを使用してもよいことは理解されるべき
である。脱離剤はカオトロピック剤（たとえば、チオシ
アン酸ナトリウムまたはカリウム）；変性剤たとえばグ
アニジン塩酸塩またはウレア、等である。適当な脱離剤
の選択は、本明細書の記載事項から当業者の範囲内であ
ると思われる。
用する脱離剤は、様々なこのような脱離剤のいずれか１
つである。一般に、このような脱離剤は、ｐＨ４，０以
下にｔＪＩＦｒ化された水性１［液である。はとんどの
場合、緩衝剤はｐＨ２，０以上である；しかしながら、
もっと低いｐＨを使用してもよいことは理解されるべき
である。脱離剤はカオトロピック剤（たとえば、チオシ
アン酸ナトリウムまたはカリウム）；変性剤たとえばグ
アニジン塩酸塩またはウレア、等である。適当な脱離剤
の選択は、本明細書の記載事項から当業者の範囲内であ
ると思われる。
上記のように、本発明によれば、抗体と脱離剤との間の
接触が最小となり、アフイニテイマトリックスの使用に
よる精製の間、抗体はｐＨ約９．０以上で約９．６
以下にて維持されそして集められる。
接触が最小となり、アフイニテイマトリックスの使用に
よる精製の間、抗体はｐＨ約９．０以上で約９．６
以下にて維持されそして集められる。
本発明はさらに添付の図面を用いて説明される。
図は本発明によるクロマトグラフカラムの概略図である
。
。
図において、１０はクロマトグラフカラムで、これは脱
塩ゲル１１と、脱塩ゲル１１の上部に積層されたアフィ
ニティゲル１２とを含む、上記したように、アフィニテ
ィゲルはプロ、ティンＡが好ましく、脱塩ゲルはセファ
デックスが好ましい。
塩ゲル１１と、脱塩ゲル１１の上部に積層されたアフィ
ニティゲル１２とを含む、上記したように、アフィニテ
ィゲルはプロ、ティンＡが好ましく、脱塩ゲルはセファ
デックスが好ましい。
カラムは、通常、脱塩マトリックス１１の容量がアフィ
ニテイマトリックス１２の容量の少なくとも２倍好まし
くは少なくとも４倍であるように形成される。容量にお
ける差は、脱塩ゲル１１における脱離剤と脱離した抗体
との間の迅速な分離を可能とする。
ニテイマトリックス１２の容量の少なくとも２倍好まし
くは少なくとも４倍であるように形成される。容量にお
ける差は、脱塩ゲル１１における脱離剤と脱離した抗体
との間の迅速な分離を可能とする。
カラム１０は、上述したようにｐＨ少なくとも９．０で
９．６ 以下に平衡化される。
９．６ 以下に平衡化される。
ＩＩＩ）Ｇ３抗体を含むサンプルをカラム１０の頭部へ
導入する。サンプルは血清、組織培養基、腹水、等であ
る。サンプルはサブクラスＩ（９）Ｇ３のモノクローナ
ル抗体を含むことが好ましい。
導入する。サンプルは血清、組織培養基、腹水、等であ
る。サンプルはサブクラスＩ（９）Ｇ３のモノクローナ
ル抗体を含むことが好ましい。
サンプルはそのまま若しくは透明な上清にして添加され
る。
る。
抗体をアフィニティマトリックス１２に吸着させ、カラ
ムをｐＨ少なくとも９．０で９．６ 以下である水性
緩衝液で洗う。
ムをｐＨ少なくとも９．０で９．６ 以下である水性
緩衝液で洗う。
洗浄後、脱離剤をカラム１０の頭部へ加える；たとえば
ｐＨ４，０以下の水性Ｍ街液を用いる。Ｄｌｌにおける
変化はアフィニティマトリックス１２から抗体を脱離さ
せ、そして脱離した抗体は脱離剤より先きに脱塩マトリ
ックス１１へ移行し、ここで予めｐ１１少なくとも９．
０で９．６ 以下に平衡化した水性緩衝液中で脱離し
た抗体を脱離剤から分離する。このようにして脱離した
抗体と脱離剤との接触は最小化され、抗体はカラム１０
における精製の間にｐＨ少なくとも９．０で９．６
以下に効果的に保たれる。
ｐＨ４，０以下の水性Ｍ街液を用いる。Ｄｌｌにおける
変化はアフィニティマトリックス１２から抗体を脱離さ
せ、そして脱離した抗体は脱離剤より先きに脱塩マトリ
ックス１１へ移行し、ここで予めｐ１１少なくとも９．
０で９．６ 以下に平衡化した水性緩衝液中で脱離し
た抗体を脱離剤から分離する。このようにして脱離した
抗体と脱離剤との接触は最小化され、抗体はカラム１０
における精製の間にｐＨ少なくとも９．０で９．６
以下に効果的に保たれる。
カラム１０に加える脱離剤の容量は、アフィニティマト
リックスからの抗体の脱離および脱離剤からの脱離抗体
の分離の両方ともを許すように調節され、その間抗体は
ｐＨ少なくとも９．０で９．６以下に保たれる。すなわ
ち、たとえば脱離剤は、アフィニティマトリックス１２
の容量の１〜２倍の容量で加えられる。
リックスからの抗体の脱離および脱離剤からの脱離抗体
の分離の両方ともを許すように調節され、その間抗体は
ｐＨ少なくとも９．０で９．６以下に保たれる。すなわ
ち、たとえば脱離剤は、アフィニティマトリックス１２
の容量の１〜２倍の容量で加えられる。
すなわち、明らかなように、アフィニティマトリックス
１２、脱塩マトリックス１１およびカラムへ加える脱離
剤の相対的容量は、脱離抗体の脱離剤からの分離と、ｐ
１１少なくとも９．０で９．６以下の水性緩衝液中での
脱離抗体の採集ができるように調節される。
１２、脱塩マトリックス１１およびカラムへ加える脱離
剤の相対的容量は、脱離抗体の脱離剤からの分離と、ｐ
１１少なくとも９．０で９．６以下の水性緩衝液中での
脱離抗体の採集ができるように調節される。
カラムは上述したように１（９）Ｇ３抗体、特にサブク
ラスＩ（ｇ）Ｇ３のモノクローナル抗体の精製に用いら
れる。
ラスＩ（ｇ）Ｇ３のモノクローナル抗体の精製に用いら
れる。
本発明の別の観点によれば、ｐＨ少なくとも約９．０で
約９．６以下、最も一般にはｌ）Ｈ約９．３の水性緩衝
液中のＩ（（Ｊ）Ｇ３抗体を含む組成物を提供する。Ｉ
（ｇ）Ｇ３抗体はモノクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体混合物の一部でよい、このような水性Ｍ衝剤の
使用はＩ（ｑ）Ｇ３抗体の貯蔵安定性を向上する。
約９．６以下、最も一般にはｌ）Ｈ約９．３の水性緩衝
液中のＩ（（Ｊ）Ｇ３抗体を含む組成物を提供する。Ｉ
（ｇ）Ｇ３抗体はモノクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体混合物の一部でよい、このような水性Ｍ衝剤の
使用はＩ（ｑ）Ｇ３抗体の貯蔵安定性を向上する。
次の実施例を用いて本発明をさらに説明するが本発明の
範囲はこれに限定されない： 実施例 はぼ直径１３で長さ３０ａｍ（容量２４ｍＪ）のカラム
を、Ｉ（ＪＧ（３）モノクローナル抗体腹水の精製に使
用する。架橋したデキストラン（セファデックスＧ
２５）１９ｍｊｌ （２４ｃｍ）を最初に充てんする
ことによりカラムを作る。架橋したデキストラン（セフ
ァロースＣＬ−４Ｂ、シグマＰ−３３９１）に支持され
たプロティンＡを蒸留水で膨潤させ、はぼ５ｍｊｌ＜６
ｃｍ）をセファデックスＧ−２５の上に積層する。数回
０．１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ９，３＞を通過させる
ことによりカラムを予め平衡化する。腹水混合物をカラ
ム上に重ねて導入し、次いでホウ酸ナトリウム１１１！
を液をカラムの数倍の容量用いて十分に洗浄する。この
洗浄は腹水から出てくるいずれの残留プロティンをも除
去する。この洗浄工程後、０．１Ｍクエン酸ナトリウム
（ｐＨ３，５） １０ｍｊを、すべてのクエン酸ナトリ
ウム１１ｉ液がアフィニティマトリックスを通過するま
でプロティンＡ／セファロースＣＬ−４Ｂマトリックス
上へ重ねる。クエン酸ナトリウムｖｉ衝液をカラムへ通
しプロティ゛ンを溶出した後、０．１ Ｍホウ酸ナトリ
ウムの貯蔵器をカラムに再度結合する。この工程は、す
べての抗体がカラムから溶出するまで続け、カラムをｐ
Ｈ９，３の０．１Ｍホウ酸ナトリクムで再度平衡化する
。この時点で、カラムは抗体精製のために再び使用でき
る。ＩＱＧ（３）はフラクション１１に溶出しクエン酸
ｔｌｉ衝液はフラクション２４に溶出する。
範囲はこれに限定されない： 実施例 はぼ直径１３で長さ３０ａｍ（容量２４ｍＪ）のカラム
を、Ｉ（ＪＧ（３）モノクローナル抗体腹水の精製に使
用する。架橋したデキストラン（セファデックスＧ
２５）１９ｍｊｌ （２４ｃｍ）を最初に充てんする
ことによりカラムを作る。架橋したデキストラン（セフ
ァロースＣＬ−４Ｂ、シグマＰ−３３９１）に支持され
たプロティンＡを蒸留水で膨潤させ、はぼ５ｍｊｌ＜６
ｃｍ）をセファデックスＧ−２５の上に積層する。数回
０．１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ９，３＞を通過させる
ことによりカラムを予め平衡化する。腹水混合物をカラ
ム上に重ねて導入し、次いでホウ酸ナトリウム１１１！
を液をカラムの数倍の容量用いて十分に洗浄する。この
洗浄は腹水から出てくるいずれの残留プロティンをも除
去する。この洗浄工程後、０．１Ｍクエン酸ナトリウム
（ｐＨ３，５） １０ｍｊを、すべてのクエン酸ナトリ
ウム１１ｉ液がアフィニティマトリックスを通過するま
でプロティンＡ／セファロースＣＬ−４Ｂマトリックス
上へ重ねる。クエン酸ナトリウムｖｉ衝液をカラムへ通
しプロティ゛ンを溶出した後、０．１ Ｍホウ酸ナトリ
ウムの貯蔵器をカラムに再度結合する。この工程は、す
べての抗体がカラムから溶出するまで続け、カラムをｐ
Ｈ９，３の０．１Ｍホウ酸ナトリクムで再度平衡化する
。この時点で、カラムは抗体精製のために再び使用でき
る。ＩＱＧ（３）はフラクション１１に溶出しクエン酸
ｔｌｉ衝液はフラクション２４に溶出する。
（発明の効果）
本発明は、高度に精製された抗体を迅速で再現性のある
方法にて得ることができ、しかもこれまで抗体の不可逆
的沈でんについて遭遇してきた問題点を有しないという
点で非常に有利である。さらに、この方法は、コンピュ
ータによるプログラム化され定積製システムでの自動作
業に容易に従ｒ； う。
方法にて得ることができ、しかもこれまで抗体の不可逆
的沈でんについて遭遇してきた問題点を有しないという
点で非常に有利である。さらに、この方法は、コンピュ
ータによるプログラム化され定積製システムでの自動作
業に容易に従ｒ； う。
さらに、ここにおいて、当該技術でこれまで遭遇した問
題点たとえば抗体の不可逆的沈でんを有することなくＩ
（ｇ）Ｇ３抗体を回収し貯蔵することが可能である。
題点たとえば抗体の不可逆的沈でんを有することなくＩ
（ｇ）Ｇ３抗体を回収し貯蔵することが可能である。
その他の利点はここに示した記載事項から当業者にとっ
て明らかである。
て明らかである。
図は本発明カラムの一例を示す模式図である。
図 中。
１０・・・クロマトグラフカラム
１１・・・脱塩ゲル
１２・・・アフィニティゲル
（外４名）
Claims (12)
- （１）Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体を含む液体を、ｐＨが少なくと
も９．０で９．６以下に保たれたアフイニテイマトリッ
クスと接触させてＩ（ｇ）Ｇ３抗体を吸着させ；吸着し
たＩ（ｇ）Ｇ３抗体を該アフィニテイマトリックスから
脱離させ；ｐＨが少なくとも９．０で９．６以下である
溶出液中に脱離したＩ（ｇ）Ｇ３抗体を集めることから
なるＩ（ｇ）Ｇ３抗体の精製方法。 - （２）吸着したＩ（ｇ）Ｇ３抗体をｐＨが少なくとも９
．０で９．６以下に保たれた脱塩マトリックスへ脱離さ
せる特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）吸着したＩ（ｇ）Ｇ３抗体を、アフィニティマト
リックスを脱離剤と接触させて脱離させ、脱離剤と脱塩
マトリックス中に脱離したＩ（ｇ）Ｇ３抗体とを分離す
ることからなる特許請求の範囲第２項記載の方法。 - （４）脱離剤がｐＨ４．０以下の水性緩衝液である特許
請求の範囲第３項記載の方法。 - （５）脱塩マトリックスの容量がアフィニティマトリッ
クスの容量の少なくとも２倍である特許請求の範囲第４
項記載の方法。 - （６）Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体がモノクローナル抗体である特
許請求の範囲第１項、第２項、第３項、第４項または第
５項のいずれか１項に記載の方法。 - （７）脱塩マトリックス、アフィニティマトリックスお
よび溶出液のｐＨが約９．３である特許請求の範囲第２
項記載の方法。 - （８）アフィニティマトリックスとアフィニティマトリ
ックスから脱離する物質を受けるための脱塩マトリック
スを含むカラムであって、ｐＨが少なくとも９．０で９
．６以下に平衡化されたカラムからなるＩ（ｇ）Ｇ３抗
体精製用クロマトグラフィカラム。 - （９）脱塩マトリックスの容量がアフィニティマトリッ
クスの容量の少なくとも２倍である特許請求の範囲第８
項記載のカラム。 - （１０）アフィニティマトリックスが固定化プロテイン
Ａである特許請求の範囲第９項記載のカラム。 - （１１）Ｉ（ｇ）Ｇ３抗体を含む水溶液であつて、該水
溶液がｐＨが少なくとも９．０で９．６以下であるもの
からなる組成物。 - （１２）抗体がモノクローナル抗体である特許請求の範
囲第１０項記載の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA000548559A CA1323567C (en) | 1987-10-05 | 1987-10-05 | Method for purification of antibodies |
| EP87308900A EP0310719B1 (en) | 1987-10-05 | 1987-10-07 | Method for purification of antibodies |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01135798A true JPH01135798A (ja) | 1989-05-29 |
| JPH0696598B2 JPH0696598B2 (ja) | 1994-11-30 |
Family
ID=25671537
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62287203A Expired - Lifetime JPH0696598B2 (ja) | 1987-10-05 | 1987-11-13 | 抗体の精製法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0310719B1 (ja) |
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Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| JPS60228421A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-13 | Shionogi & Co Ltd | モノクロ−ナル抗ヒトＩｇＧ抗体およびその製造法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016031932A1 (ja) * | 2014-08-27 | 2016-03-03 | 田辺三菱製薬株式会社 | アルカリ洗浄によるＦｃ領域を有するタンパク質の製造方法 |
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