JPH0116154B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0116154B2 JPH0116154B2 JP59219050A JP21905084A JPH0116154B2 JP H0116154 B2 JPH0116154 B2 JP H0116154B2 JP 59219050 A JP59219050 A JP 59219050A JP 21905084 A JP21905084 A JP 21905084A JP H0116154 B2 JPH0116154 B2 JP H0116154B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- yeast
- torulaspora
- cells
- strain
- belonging
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は染色体が二倍体性を有するトルラスポ
ラ属（Torulaspora）に属する大型冷凍耐性パン
酵母の製法に関する。 トルラスポラ属に属する酵母、例えばトルラス
ポラ・デルブルツキ（Torulaspora
delbrueckii：旧名サツカロミセス・ロゼイ
Saccharomyces roseiは分類学的に消滅し、新名
となつた。「J.A.Barnett等著、Yeasts：
Characteristics and Identification，508頁、
Cambridge University Press，Cambridge，
1983年」及び「N.J.W.Kreger−van Rij編著、
The Yeasts、第３改訂版、453頁、Elsevier
Science Publishers，Amsterdam，1984年」参
照）は糖濃度の高い菓子パン製造に優れ（特公昭
54−13491号）、又、冷凍耐性のある酵母（特開昭
56−144036号）として市販されている。冷凍耐性
とは発酵用酵母菌体を含むパン生地をあらかじめ
混〓し若干時間発酵させるか又はそのまま−20℃
以下に冷凍保存しておき、必要に応じ解凍し再発
酵させパンを焼成しうる性質である。冷凍保存で
きるという特質は早朝からパン製造にとりかから
ねばならぬという過程を省略せしめ、又、需要を
察知してパンを焼成できるという利点をもたら
す。しかし、トルラスポラ・デルブルツキは一般
に菌体細胞が小さいため培養後の集菌、洗浄、脱
水等の作業に時間がかかるという欠点がある。本
発明者らはトルラスポラ属に属する酵母に紫外線
（UV）を照射し染色体の培数化した大型細胞株
を得た結果、パン酵母としての性質は変らず上記
作業時間を大幅に短縮することができることを見
出して本発明を完成した。 従来、糸状菌において、細胞内に核を２ケ有す
るヘテロカリオンは紫外線照射により核が融合し
二倍体化することが知られている（C.Ishitani，
Nature178，706，1956年）。 今回、通常一倍体で増殖する酵母トルラスポ
ラ・デルブルツキ（前記のN.J.W.Kregervan
Rij，The Yeasts，434頁参照）に紫外線を照射
したところ、意外にも二倍体株を造成樹立するこ
とができた。本発明により得られた二倍体酵母株
は倍数性を安定に維持し、冷凍耐性はそのままで
あつた。又、倍数性の増加に伴ないパン生地膨張
力価も若干向上した。 本発明の一般的製法は、トルラスポラ属に属す
る酵母菌体に紫外線を照射後、残存生育したコロ
ニーの中から大型細胞化したものを選択し、二倍
体性酵母株を得ることにあり、更には、大型細胞
化した株の中から生育速度が親株と同等で染色体
上に栄養要求性の人為的突然変異遺伝形質を有し
ない野生型のものを選択し、対象とする酵母の良
い遺伝形質に損傷のないと思われる株を選択・取
得することにより達成される。 以下に、トルラスポラ・デルブルツキを用いた
場合の倍数体株造成の実施例と得られた菌体の性
質について述べる。 本発明を用いた親株トルラスポラ・デルブルツ
キＹ−134−５の細胞体積は約18μm3であるが、
下記のようにして造成した菌株は約52μm3であり
約３倍大きい。 実施例 (1) 大型細胞株の取得 トルラスポラ・デルブルツキＹ−134−５（微工
研菌寄第905号）菌体への紫外線照射は常法に従
つた（石川辰夫編、微生物遺伝学実験法、194頁、
共立出版、東京、1982年）。即ち、YPD培地（酵
母エキス１％、ポリペプトン１％、グルコース２
％）に30℃で生育した静止期初期の菌培養液をと
り、滅菌済67mM KH2PO4にて菌濃度105cells／
mlに希釈した。その10mlをマグネチツク・スター
ラーにて撹拌しつつ、紫外線（2000エルグ／秒／
cm2）を照射した。時間の間隔をおいて、菌懸濁液
を分取し、適当に67mM KH2PO4にて希釈し少
量をYDP寒天培地に塗布した。30℃にて２日間
培養し、生存率２〜10％の寒天平板上のコロニー
を釣菌・検鏡した。大型細胞化したコロニーのう
ち、栄養要求性突然変異の認められないものを常
法通り２回単一コロニー分離をくり返し、精製し
た。 (2) 得られた大型細胞株の諸性質 (1)のようにして得られた大型細胞株のうち、パ
ン生地膨張試験、冷凍耐性に優れていた株の１株
をトルラスポラ・デルブルツキSANK52084（微
工研菌寄第7898号）と命名した。細胞体積は親株
Ｙ−134−５に較べ約３倍大きく（表１）、細胞内
DNA含量も約２倍となつている（表２）。大型化
した株は胞子形成が良好であり、胞子形成用寒天
平板培地（１％酢酸カリウム、0.1％酵母エキス、
0.05％グルコース、２％寒天）上、２日間、30℃
にて培養すると多数の細胞が１ないし２ケ、稀に
３ケないし４ケの胞子を保有するようになつた。
これら子嚢を含む菌体を集め、２回高張液Ａ
（0.6MKCl，20mM Tris HClにてPH7.5）にて洗
浄後、５mlの高張液Ａに懸濁した。この際、菌数
は約４×108cells／mlとなるよう調節した。２−
メルカプトエタノールを菌懸濁液１mlあたり15μ
加え、30℃にて30分間インキユベートした。処
理菌体を遠心にて集め、高張液Ａにて２回洗浄
し、２−メルカプトエタノールを完全に除去し
た。菌体を５mlの高張液に懸濁し、
Zymolyase60000（麒麟麦酒(株)製）を３mg加え、１
時間インキユベートすると99％以上プロトプラス
ト化した。プロトプラスト形成率は懸濁液を１滴
ずつスライドグラス上に２個所のせ、片方に10％
Ｎ−ラウロイルザルコシン・ナトリウム溶液を
1μ添加し、双方を検鏡比較することにより目
算した。生成したプロトプラストは500×Ｇ、10
分間の遠心により集めた。高張液Ａにて２回同様
な遠心条件にて洗浄後、プロトプラストを
6.7mMのトリス・塩酸緩衝液（PH7.8）中に入れ、
破裂させた。得られた胞子塊を２回同緩衝液で洗
浄後、超音波処理にて単一胞子に分けた。この胞
子を培養するともはや細胞は親株Ｙ−134−５と
ほぼ同じ大きさになつており、一倍体に戻ること
が確認された。しかし通常の培養を続ける限り、
大型細胞株SANK52084は細胞の大きさを維持す
る安定な菌株であり、大規模培養が可能である。
SANK52084の生育速度（doubling time）は
YPD培地、30℃好気的条件下で84分であり、親
株Ｙ−134−５に較べ遜色なく、最終菌体収量も
劣らない（表３）。炭素化合物資化性は
SANK52084とＹ−134−５は全く同じである
（表４）。細胞の大きさ、細胞内DAN含量から、
得られた大型細胞株SANK52084は二倍体と結論
した。その他の菌学的性質は一倍体酵母のそれと
一致するが（前記のN.J.W.Kregervan Rij編著、
The Yeasts，435頁参照）、胞子形成に際し偽接
合管を形成しないこと、および細胞がそのまま胞
子嚢に変換する点において異なる。 なお、一般に親株は培養の際、条件が悪いと凝
集し、集菌・脱水が不可能となることがある。一
方、大型化した細胞株SANK52084には凝集性は
ほとんどない。 参考例 (1) 大型細胞株SANK52084よりケーキ酵母の調
製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。
ケーキ調製に要する時間を大型細胞株
SANK52084及び親株Ｙ−134−５について比較
試験した。SANK52084とＹ−134−５を同じ条
件下で培養した。即ち、種・生酵母35Kgを10トン
培養槽に入れ、廃糖蜜、尿素、第二リン酸ナトリ
ウムを添加供給しながら温度30℃、PH5.0〜5.5、
通気1v.v.m.にて16時間通気撹拌培養した。酵母
菌体を遠心集菌し、４回洗浄、濃縮して酵母クリ
ーム1000（生酵母520Kg含有）を得た。食塩溶
液にて処理し回転真空脱水機（デハイドレータ
ー、Alfa−Laval社製）にてケーキ酵母にした。
表５に示すように回転真空脱水機の処理面積８m2
あたり、１時間に処理しうるクリーム酵母量はＹ
−134−５が1000であるに対し、SANK52084
は2470であり単位面積・時間あたり得られるケ
ーキ酵母量は約2.5倍となつている。即ち、脱水
に要する作業時間は約１／2.5と大幅に短縮され
た。 (2) 大型細胞株SANK52084の冷凍耐性 上記の如く得られたケーキ酵母を用い、表６に
示す配合と工程でパン生地を作成し、−20℃にて
冷凍後８日目および19日目にとり出して解凍し、
パン焼成を行なつた。SANK52084を用いた場
合、焼成パン体積は冷凍19日後でも2125mlあり、
親株Ｙ−134−５による2064mlに勝つた（表６）。
ラ属（Torulaspora）に属する大型冷凍耐性パン
酵母の製法に関する。 トルラスポラ属に属する酵母、例えばトルラス
ポラ・デルブルツキ（Torulaspora
delbrueckii：旧名サツカロミセス・ロゼイ
Saccharomyces roseiは分類学的に消滅し、新名
となつた。「J.A.Barnett等著、Yeasts：
Characteristics and Identification，508頁、
Cambridge University Press，Cambridge，
1983年」及び「N.J.W.Kreger−van Rij編著、
The Yeasts、第３改訂版、453頁、Elsevier
Science Publishers，Amsterdam，1984年」参
照）は糖濃度の高い菓子パン製造に優れ（特公昭
54−13491号）、又、冷凍耐性のある酵母（特開昭
56−144036号）として市販されている。冷凍耐性
とは発酵用酵母菌体を含むパン生地をあらかじめ
混〓し若干時間発酵させるか又はそのまま−20℃
以下に冷凍保存しておき、必要に応じ解凍し再発
酵させパンを焼成しうる性質である。冷凍保存で
きるという特質は早朝からパン製造にとりかから
ねばならぬという過程を省略せしめ、又、需要を
察知してパンを焼成できるという利点をもたら
す。しかし、トルラスポラ・デルブルツキは一般
に菌体細胞が小さいため培養後の集菌、洗浄、脱
水等の作業に時間がかかるという欠点がある。本
発明者らはトルラスポラ属に属する酵母に紫外線
（UV）を照射し染色体の培数化した大型細胞株
を得た結果、パン酵母としての性質は変らず上記
作業時間を大幅に短縮することができることを見
出して本発明を完成した。 従来、糸状菌において、細胞内に核を２ケ有す
るヘテロカリオンは紫外線照射により核が融合し
二倍体化することが知られている（C.Ishitani，
Nature178，706，1956年）。 今回、通常一倍体で増殖する酵母トルラスポ
ラ・デルブルツキ（前記のN.J.W.Kregervan
Rij，The Yeasts，434頁参照）に紫外線を照射
したところ、意外にも二倍体株を造成樹立するこ
とができた。本発明により得られた二倍体酵母株
は倍数性を安定に維持し、冷凍耐性はそのままで
あつた。又、倍数性の増加に伴ないパン生地膨張
力価も若干向上した。 本発明の一般的製法は、トルラスポラ属に属す
る酵母菌体に紫外線を照射後、残存生育したコロ
ニーの中から大型細胞化したものを選択し、二倍
体性酵母株を得ることにあり、更には、大型細胞
化した株の中から生育速度が親株と同等で染色体
上に栄養要求性の人為的突然変異遺伝形質を有し
ない野生型のものを選択し、対象とする酵母の良
い遺伝形質に損傷のないと思われる株を選択・取
得することにより達成される。 以下に、トルラスポラ・デルブルツキを用いた
場合の倍数体株造成の実施例と得られた菌体の性
質について述べる。 本発明を用いた親株トルラスポラ・デルブルツ
キＹ−134−５の細胞体積は約18μm3であるが、
下記のようにして造成した菌株は約52μm3であり
約３倍大きい。 実施例 (1) 大型細胞株の取得 トルラスポラ・デルブルツキＹ−134−５（微工
研菌寄第905号）菌体への紫外線照射は常法に従
つた（石川辰夫編、微生物遺伝学実験法、194頁、
共立出版、東京、1982年）。即ち、YPD培地（酵
母エキス１％、ポリペプトン１％、グルコース２
％）に30℃で生育した静止期初期の菌培養液をと
り、滅菌済67mM KH2PO4にて菌濃度105cells／
mlに希釈した。その10mlをマグネチツク・スター
ラーにて撹拌しつつ、紫外線（2000エルグ／秒／
cm2）を照射した。時間の間隔をおいて、菌懸濁液
を分取し、適当に67mM KH2PO4にて希釈し少
量をYDP寒天培地に塗布した。30℃にて２日間
培養し、生存率２〜10％の寒天平板上のコロニー
を釣菌・検鏡した。大型細胞化したコロニーのう
ち、栄養要求性突然変異の認められないものを常
法通り２回単一コロニー分離をくり返し、精製し
た。 (2) 得られた大型細胞株の諸性質 (1)のようにして得られた大型細胞株のうち、パ
ン生地膨張試験、冷凍耐性に優れていた株の１株
をトルラスポラ・デルブルツキSANK52084（微
工研菌寄第7898号）と命名した。細胞体積は親株
Ｙ−134−５に較べ約３倍大きく（表１）、細胞内
DNA含量も約２倍となつている（表２）。大型化
した株は胞子形成が良好であり、胞子形成用寒天
平板培地（１％酢酸カリウム、0.1％酵母エキス、
0.05％グルコース、２％寒天）上、２日間、30℃
にて培養すると多数の細胞が１ないし２ケ、稀に
３ケないし４ケの胞子を保有するようになつた。
これら子嚢を含む菌体を集め、２回高張液Ａ
（0.6MKCl，20mM Tris HClにてPH7.5）にて洗
浄後、５mlの高張液Ａに懸濁した。この際、菌数
は約４×108cells／mlとなるよう調節した。２−
メルカプトエタノールを菌懸濁液１mlあたり15μ
加え、30℃にて30分間インキユベートした。処
理菌体を遠心にて集め、高張液Ａにて２回洗浄
し、２−メルカプトエタノールを完全に除去し
た。菌体を５mlの高張液に懸濁し、
Zymolyase60000（麒麟麦酒(株)製）を３mg加え、１
時間インキユベートすると99％以上プロトプラス
ト化した。プロトプラスト形成率は懸濁液を１滴
ずつスライドグラス上に２個所のせ、片方に10％
Ｎ−ラウロイルザルコシン・ナトリウム溶液を
1μ添加し、双方を検鏡比較することにより目
算した。生成したプロトプラストは500×Ｇ、10
分間の遠心により集めた。高張液Ａにて２回同様
な遠心条件にて洗浄後、プロトプラストを
6.7mMのトリス・塩酸緩衝液（PH7.8）中に入れ、
破裂させた。得られた胞子塊を２回同緩衝液で洗
浄後、超音波処理にて単一胞子に分けた。この胞
子を培養するともはや細胞は親株Ｙ−134−５と
ほぼ同じ大きさになつており、一倍体に戻ること
が確認された。しかし通常の培養を続ける限り、
大型細胞株SANK52084は細胞の大きさを維持す
る安定な菌株であり、大規模培養が可能である。
SANK52084の生育速度（doubling time）は
YPD培地、30℃好気的条件下で84分であり、親
株Ｙ−134−５に較べ遜色なく、最終菌体収量も
劣らない（表３）。炭素化合物資化性は
SANK52084とＹ−134−５は全く同じである
（表４）。細胞の大きさ、細胞内DAN含量から、
得られた大型細胞株SANK52084は二倍体と結論
した。その他の菌学的性質は一倍体酵母のそれと
一致するが（前記のN.J.W.Kregervan Rij編著、
The Yeasts，435頁参照）、胞子形成に際し偽接
合管を形成しないこと、および細胞がそのまま胞
子嚢に変換する点において異なる。 なお、一般に親株は培養の際、条件が悪いと凝
集し、集菌・脱水が不可能となることがある。一
方、大型化した細胞株SANK52084には凝集性は
ほとんどない。 参考例 (1) 大型細胞株SANK52084よりケーキ酵母の調
製 パン用酵母はケーキ状にして市販されている。
ケーキ調製に要する時間を大型細胞株
SANK52084及び親株Ｙ−134−５について比較
試験した。SANK52084とＹ−134−５を同じ条
件下で培養した。即ち、種・生酵母35Kgを10トン
培養槽に入れ、廃糖蜜、尿素、第二リン酸ナトリ
ウムを添加供給しながら温度30℃、PH5.0〜5.5、
通気1v.v.m.にて16時間通気撹拌培養した。酵母
菌体を遠心集菌し、４回洗浄、濃縮して酵母クリ
ーム1000（生酵母520Kg含有）を得た。食塩溶
液にて処理し回転真空脱水機（デハイドレータ
ー、Alfa−Laval社製）にてケーキ酵母にした。
表５に示すように回転真空脱水機の処理面積８m2
あたり、１時間に処理しうるクリーム酵母量はＹ
−134−５が1000であるに対し、SANK52084
は2470であり単位面積・時間あたり得られるケ
ーキ酵母量は約2.5倍となつている。即ち、脱水
に要する作業時間は約１／2.5と大幅に短縮され
た。 (2) 大型細胞株SANK52084の冷凍耐性 上記の如く得られたケーキ酵母を用い、表６に
示す配合と工程でパン生地を作成し、−20℃にて
冷凍後８日目および19日目にとり出して解凍し、
パン焼成を行なつた。SANK52084を用いた場
合、焼成パン体積は冷凍19日後でも2125mlあり、
親株Ｙ−134−５による2064mlに勝つた（表６）。
【表】
細胞の長軸および短軸は長軸を2a、短軸を2b
とし、50ケの細胞について写真より計測し平均値
及び評準偏差を算出した。体積は細胞が完全な楕
円球と仮定し、公式Ｖ＝４／３πab2より計算した。
とし、50ケの細胞について写真より計測し平均値
及び評準偏差を算出した。体積は細胞が完全な楕
円球と仮定し、公式Ｖ＝４／３πab2より計算した。
【表】
仔牛胸腺DNAを標準とし、ジフエニルアミン
を用いる比色定量にて測定した。Ｙ−134−５の
DNA含量は約23fｇ／cell。（ｆｇ＝10-15ｇ）。
を用いる比色定量にて測定した。Ｙ−134−５の
DNA含量は約23fｇ／cell。（ｆｇ＝10-15ｇ）。
【表】
表４ 炭素化合物資化性
試験菌株：Ｙ−134−５およびSANK52084
資化性有：グルコース、イヌリン、乳酸、Ｄ−マ
ンニツト、ラフイノース、Ｄ−ソルビツト、
Ｌ−ソルボース、シユクロース、トレハロー
ス 資化性無：Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノー
ス、セロビオース、クエン酸、エリスリツ
ト、ガラクチツト、ガラクトース、ラクトー
ス、マルトース、メレジトース、メリビオー
ス、α−メチル−Ｄ−グルコシド、ラムノー
ス、アドニツト、Ｄ−リボース、サリシン、
デンプン、コハク酸、Ｄ−キシロース
ンニツト、ラフイノース、Ｄ−ソルビツト、
Ｌ−ソルボース、シユクロース、トレハロー
ス 資化性無：Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノー
ス、セロビオース、クエン酸、エリスリツ
ト、ガラクチツト、ガラクトース、ラクトー
ス、マルトース、メレジトース、メリビオー
ス、α−メチル−Ｄ−グルコシド、ラムノー
ス、アドニツト、Ｄ−リボース、サリシン、
デンプン、コハク酸、Ｄ−キシロース
小麦粉 100
砂糖 ４
食塩 ２
生地改良剤 1.2
シヨートニング ４
酵母 ６
水 63
〔工程〕
混〓時間：低速３分、中速３分、シヨートニン
グ低速２分、中速５分、高速３分 〓上温度：28℃ 前発酵 ：30℃、30分→ガス抜き、成型 冷凍 ：−30℃、60分急速冷凍→−20℃貯蔵 解凍 ：26℃、90分 ホイロ ：38℃、湿度90％、90分 焼成 ：220℃、25分
グ低速２分、中速５分、高速３分 〓上温度：28℃ 前発酵 ：30℃、30分→ガス抜き、成型 冷凍 ：−30℃、60分急速冷凍→−20℃貯蔵 解凍 ：26℃、90分 ホイロ ：38℃、湿度90％、90分 焼成 ：220℃、25分
【表】
＊１ ホイロは定容積の金属箱に入れて
行なう。箱上面より突出するパ
ン生地の高さを測り、発酵能の指標
とする。
＊２ 比容積は焼成パン体積を重量にて
除した数値。
行なう。箱上面より突出するパ
ン生地の高さを測り、発酵能の指標
とする。
＊２ 比容積は焼成パン体積を重量にて
除した数値。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ トルラスポラ属に属する酵母菌株の菌体に紫
外線照射し、次いで紫外線照射した菌体懸濁液を
培養し、その培養物より染色体が二倍体化する
が、染色体上に栄養要求性の人為的突然変異遺伝
形質を有せず、生育も親株に劣らないものを分離
してトルラスポラ属に属する大型細胞株を取得す
ることを特徴とする酵母の製法。 ２ トルラスポラ属に属する酵母がトルラスポ
ラ・デルブルツキＹ−134−５（微工研菌寄第905
号）である特許請求の範囲第１項記載の製法。 ３ トルラスポラ属に属する大型細胞酵母がトル
ラスポラ・デルブルツキSANK52084（微工研菌
寄第7898号）である特許請求の範囲第１項または
第２項記載の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59219050A JPS61100188A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59219050A JPS61100188A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61100188A JPS61100188A (ja) | 1986-05-19 |
| JPH0116154B2 true JPH0116154B2 (ja) | 1989-03-23 |
Family
ID=16729474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59219050A Granted JPS61100188A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | トルラスポラ属大型細胞酵母の育種造成法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61100188A (ja) |
-
1984
- 1984-10-18 JP JP59219050A patent/JPS61100188A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61100188A (ja) | 1986-05-19 |
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