JPH01168284A - 全発酵ブロスから細胞外酵素を回収する方法 - Google Patents
全発酵ブロスから細胞外酵素を回収する方法Info
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- JPH01168284A JPH01168284A JP61206065A JP20606586A JPH01168284A JP H01168284 A JPH01168284 A JP H01168284A JP 61206065 A JP61206065 A JP 61206065A JP 20606586 A JP20606586 A JP 20606586A JP H01168284 A JPH01168284 A JP H01168284A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
バクテリア（ｂａｃｔｅｒｉａ）、カビ（ｆｕｎｇｉ）
及び酵母（ｙｅａｓｔ）の如き微生物を水性栄養培地中
で培養することによる個々の酵素の製造は周知されてい
る。
及び酵母（ｙｅａｓｔ）の如き微生物を水性栄養培地中
で培養することによる個々の酵素の製造は周知されてい
る。
特定の微生物の性質に依存して、製造された酵素は細胞
外（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）酵素、細胞内（ｉｎ
ｔｒａｅｅｌＩｕｌａｒ）酵素又はその混合物であるこ
とが出来る。
外（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）酵素、細胞内（ｉｎ
ｔｒａｅｅｌＩｕｌａｒ）酵素又はその混合物であるこ
とが出来る。
製造された酵素が細胞外酵素である場合には、先ず酵素
含有上澄液を微生物細胞から分離し、次いで沈澱法、限
外ろ過及び蒸発の如き周知の方法により酵素を上澄液か
ら回収することにより一般に得られる。製造される酵素
が細胞内酵素である場合には、それらは先ず細胞から放
出されなければならない。これは化学的に及び／又は機
械的に行うことができる。−度酵素が溶液中に入れられ
ると、それらは前記周知の方法により回収することもで
きる。
含有上澄液を微生物細胞から分離し、次いで沈澱法、限
外ろ過及び蒸発の如き周知の方法により酵素を上澄液か
ら回収することにより一般に得られる。製造される酵素
が細胞内酵素である場合には、それらは先ず細胞から放
出されなければならない。これは化学的に及び／又は機
械的に行うことができる。−度酵素が溶液中に入れられ
ると、それらは前記周知の方法により回収することもで
きる。
細胞外酵素は細胞内酵素とは異なった組成及び性質を有
していることが知られている。細胞外酵素は一般に例え
ば細胞内酵素よりは相当低い分子量を有する。細胞から
放出された細胞内酵素を含有する溶液は細胞外酵素を含
有する全発酵ビール（全発酵液）（ｗｈｏｌｅ ｆｅｒ
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｅｅｒ）中に存在しない相当な
量の他の細胞内物質も含有する。これらの差はそれらが
両方とも水性溶液中にある場合ですらその回収及び精製
方法を異ならしめることがある。故に細胞内酵素に適当
な回収方法は必−ずしも細胞外酵素にとって有用ではな
い。
していることが知られている。細胞外酵素は一般に例え
ば細胞内酵素よりは相当低い分子量を有する。細胞から
放出された細胞内酵素を含有する溶液は細胞外酵素を含
有する全発酵ビール（全発酵液）（ｗｈｏｌｅ ｆｅｒ
ｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｅｅｒ）中に存在しない相当な
量の他の細胞内物質も含有する。これらの差はそれらが
両方とも水性溶液中にある場合ですらその回収及び精製
方法を異ならしめることがある。故に細胞内酵素に適当
な回収方法は必−ずしも細胞外酵素にとって有用ではな
い。
酵素の製造及び回収の効率及び便利さを改善するために
、ポリエチレングリコールとデキストランの混合物を含
有する２相栄養培地中での微生物発酵により酵素を９１
ｍすることが出来ることが知られている。発酵の終了時
には細胞外酵素は上部ポリエチレングリコール相に濃縮
されており、細胞及び他の発酵生成物は下部デキストラ
ン相に濃縮されている。これは工ンザイム アンド マ
イクロバイアルテクノロジー、ｆ５７巻、７，３３３−
３ ３ ８ （１９８５） ［ＥｎｚｙＩｌｌｅ
ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、Ｖｏｌ
、７，３３３−３３８（１９８５）］に記載されている
。そのシステムにおけるアルファーアミラーゼの分配係
数は例えば最大４であった。
、ポリエチレングリコールとデキストランの混合物を含
有する２相栄養培地中での微生物発酵により酵素を９１
ｍすることが出来ることが知られている。発酵の終了時
には細胞外酵素は上部ポリエチレングリコール相に濃縮
されており、細胞及び他の発酵生成物は下部デキストラ
ン相に濃縮されている。これは工ンザイム アンド マ
イクロバイアルテクノロジー、ｆ５７巻、７，３３３−
３ ３ ８ （１９８５） ［ＥｎｚｙＩｌｌｅ
ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、Ｖｏｌ
、７，３３３−３３８（１９８５）］に記載されている
。そのシステムにおけるアルファーアミラーゼの分配係
数は例えば最大４であった。
上記方法の変法が米国特許筒４，５０８，８２５号に記
載されている。それによれば細胞外酵素含有上（ｆｌ液
は細胞から分ａされそして細胞を含まない上澄液はポリ
エチレングリコール及びカチオン性エピハロヒドリン／
ポリアミン共重合体又はデキストラン重合体と混合させ
られて２相を形成する。この方法はプロテアーゼがポリ
エチレングリコール相に濃縮されておりそしてアミラー
ゼがカチオン性共重合体又はデキストラン相に濃縮され
ている細胞外プロテアーゼ及びアミラーゼを分離するの
に使用することが出来る。
載されている。それによれば細胞外酵素含有上（ｆｌ液
は細胞から分ａされそして細胞を含まない上澄液はポリ
エチレングリコール及びカチオン性エピハロヒドリン／
ポリアミン共重合体又はデキストラン重合体と混合させ
られて２相を形成する。この方法はプロテアーゼがポリ
エチレングリコール相に濃縮されておりそしてアミラー
ゼがカチオン性共重合体又はデキストラン相に濃縮され
ている細胞外プロテアーゼ及びアミラーゼを分離するの
に使用することが出来る。
２相酵索回収方法は細胞内酵素にも使用された。
米国特許筒４，１４４，１３０号は（１）高分子量の未
置換又は置換されたポリアルコール、ポリエーテル、ポ
リエステル、ポリビニルピロリドン又は多糖と無機塩の
混合物又は（２）上記高分子量重合体の少なくとも２種
の混合物を使用して細胞内酵素が細胞から放出された水
性溶液から細胞内酵素を回収することを記載している。
置換又は置換されたポリアルコール、ポリエーテル、ポ
リエステル、ポリビニルピロリドン又は多糖と無機塩の
混合物又は（２）上記高分子量重合体の少なくとも２種
の混合物を使用して細胞内酵素が細胞から放出された水
性溶液から細胞内酵素を回収することを記載している。
例えばポリエチレングリコールと無機塩との混合物が使
用される場合には所望の細胞内酵素は上部ポリエチレン
グリコール層に行き、細胞砕片（ｃｅｌｌ ｄｅｂｒｉ
ｓ）及び他の発酵生成物は下部塩含有層に行く。グリコ
ール層に回収された種々の酵素の分配係数は全発酵ビー
ルを処理した場合には約０．３であった。
用される場合には所望の細胞内酵素は上部ポリエチレン
グリコール層に行き、細胞砕片（ｃｅｌｌ ｄｅｂｒｉ
ｓ）及び他の発酵生成物は下部塩含有層に行く。グリコ
ール層に回収された種々の酵素の分配係数は全発酵ビー
ルを処理した場合には約０．３であった。
分配係数は凍結した細胞を水と混合しそして崩壊させて
それらの酵素を放出させた場合には約３だけ増加した。
それらの酵素を放出させた場合には約３だけ増加した。
細胞を含まない上澄液からの酵素の沈澱においてｓ磯塩
を助長するためのポリエチレングリコールの添加は米国
特許第４，０１６，０３９号に記載されている。
を助長するためのポリエチレングリコールの添加は米国
特許第４，０１６，０３９号に記載されている。
ポリエチレングリコールと無機塩とを２相法に使用して
少なくとも５０の分配係数で全発酵ビールから細胞外酵
素を回収することが出来ることは先行技術には示唆され
たことはない。
少なくとも５０の分配係数で全発酵ビールから細胞外酵
素を回収することが出来ることは先行技術には示唆され
たことはない。
本発明に従えば、全発酵ビールから細胞外酵素を回収す
る方法であって、微生物細胞と細胞外酵素を含有する全
発酵ビールに、（ａ）ポリエチレングリフール、ポリエ
チレングリコールのアミン誘導体、ポリエチレングリコ
ールのカルボキシレート誘導体、ポリプロピレングリコ
ール、ポリプロピレングリコールのアミン誘導体、ポリ
プロピレングリコールのカルボキシレート誘導体、ポリ
（エチレングリコール）エステル、ポリエチレンイミン
、トリノチルアミノーポリエチレングリコール、ポリビ
ニルアルコール、ポリビニルピロリドン及びそれらの混
合物から成る群から選ばれた重合体と（ｂ）無機塩との
混合物を添加することと、この全発酵ビール−重合体−
地温合物を酵素に富んだ重合体相と酵素に乏しい地相と
に分離させそして酵素に富んだ生成物をそれから回収す
ることをｖｆ徴とする方法が提供される。
る方法であって、微生物細胞と細胞外酵素を含有する全
発酵ビールに、（ａ）ポリエチレングリフール、ポリエ
チレングリコールのアミン誘導体、ポリエチレングリコ
ールのカルボキシレート誘導体、ポリプロピレングリコ
ール、ポリプロピレングリコールのアミン誘導体、ポリ
プロピレングリコールのカルボキシレート誘導体、ポリ
（エチレングリコール）エステル、ポリエチレンイミン
、トリノチルアミノーポリエチレングリコール、ポリビ
ニルアルコール、ポリビニルピロリドン及びそれらの混
合物から成る群から選ばれた重合体と（ｂ）無機塩との
混合物を添加することと、この全発酵ビール−重合体−
地温合物を酵素に富んだ重合体相と酵素に乏しい地相と
に分離させそして酵素に富んだ生成物をそれから回収す
ることをｖｆ徴とする方法が提供される。
本発明の方法の原料物質として有用な細胞外酵素を含有
する全発酵ビールは当業界では周知されている。例えば
、バチルス リケニホルミスＢａｃ地中で増殖させると
プロテアーゼ、アミラーゼ及び微生物レンネット（ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｎｎｅｔ）の如き細胞外酵素を生
産することが知られている。得られる細胞砕片、細胞外
可溶性酵素及び他の発酵生成物の混合物は可溶性酵素か
ら細胞砕片を更に分離することなく本発明の方法におい
て使用することが出来る。本明細書において使用した“
細胞砕片“という用語は全細胞（ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ
ｓ）及び細胞断片（ｃｅｌｌ ｆｒａＢ＋ｅｎｔｓ）を
意味する。
する全発酵ビールは当業界では周知されている。例えば
、バチルス リケニホルミスＢａｃ地中で増殖させると
プロテアーゼ、アミラーゼ及び微生物レンネット（ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｎｎｅｔ）の如き細胞外酵素を生
産することが知られている。得られる細胞砕片、細胞外
可溶性酵素及び他の発酵生成物の混合物は可溶性酵素か
ら細胞砕片を更に分離することなく本発明の方法におい
て使用することが出来る。本明細書において使用した“
細胞砕片“という用語は全細胞（ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ
ｓ）及び細胞断片（ｃｅｌｌ ｆｒａＢ＋ｅｎｔｓ）を
意味する。
次いで全発酵ビールを重合体及び無機塩と混合して２相
系を形成する。所望の細胞外酵素は重合体相に集まり、
細胞砕片は地相に集まるであろう。
系を形成する。所望の細胞外酵素は重合体相に集まり、
細胞砕片は地相に集まるであろう。
適当な重合体にはポリエチレングリフール、ポリエチレ
ングリコールのアミン誘導体、ポリエチレングリフール
のカルホキシレー）１導体、ポリプロピレングリフール
、ポリプロピレングリコールのアミン誘導体、ポリプロ
ピレングリコールのカルボキシレート誘導体、ポリ（エ
チレングリコール）エステル、ポリエチレンイミン、ト
リメチルアミ／−ポリエチレングリコール、ポリビニル
アフレフール、ポリビニルピロリドン及びそれらの混合
物が包含される。好ましい重合体はポリエチレングリコ
ールである。水性の全発酵ビールに可溶であるいかなる
形態のポリエチレングリコールも適当である。特に有用
なポリエチレングリコールは約３３５０の分子量を有す
る。それは室温で固体でありそして工業生産規模で都合
良く取り扱うことができる。
ングリコールのアミン誘導体、ポリエチレングリフール
のカルホキシレー）１導体、ポリプロピレングリフール
、ポリプロピレングリコールのアミン誘導体、ポリプロ
ピレングリコールのカルボキシレート誘導体、ポリ（エ
チレングリコール）エステル、ポリエチレンイミン、ト
リメチルアミ／−ポリエチレングリコール、ポリビニル
アフレフール、ポリビニルピロリドン及びそれらの混合
物が包含される。好ましい重合体はポリエチレングリコ
ールである。水性の全発酵ビールに可溶であるいかなる
形態のポリエチレングリコールも適当である。特に有用
なポリエチレングリコールは約３３５０の分子量を有す
る。それは室温で固体でありそして工業生産規模で都合
良く取り扱うことができる。
無機塩はそのカチオンがナトリワム、カリウム、マグネ
シウム及びアンモニウムでありそしてそのアニオンが硫
酸イオン（ｓｕｌｆａｔｅｓ）、炭酸イオン（Ｃａｒｂ
ｏｎａｔｅｓ）、クエン酸イオン（ｃｉｔｒａｔｅｓ）
、塩化物イオン（ｃｈｌｏｒｉｄｅｓ）、リン酸イオン
（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ）及びそれらの混合物である化
合物であることができる。好ましい塩は塩化ナトリウム
及び硫酸ナトリウムである。
シウム及びアンモニウムでありそしてそのアニオンが硫
酸イオン（ｓｕｌｆａｔｅｓ）、炭酸イオン（Ｃａｒｂ
ｏｎａｔｅｓ）、クエン酸イオン（ｃｉｔｒａｔｅｓ）
、塩化物イオン（ｃｈｌｏｒｉｄｅｓ）、リン酸イオン
（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ）及びそれらの混合物である化
合物であることができる。好ましい塩は塩化ナトリウム
及び硫酸ナトリウムである。
重合体及び無機塩は全発酵ビール６４−９０％、重合体
１−１５％及び無機塩８−３５％、但し該百分率は混合
物の全重量を基準として電歇によるものである、を含有
する全混合物を形成する量で全発酵ビールに加えられる
。全混合物が全発酵ビール７３−７９％、重合体３−４
％及び無機塩１５−２４％を含有することが好ましい。
１−１５％及び無機塩８−３５％、但し該百分率は混合
物の全重量を基準として電歇によるものである、を含有
する全混合物を形成する量で全発酵ビールに加えられる
。全混合物が全発酵ビール７３−７９％、重合体３−４
％及び無機塩１５−２４％を含有することが好ましい。
＼、
＼
円
ｍ−＼
重合体と塩を添加した後２つの相が形成されるであろう
。重合体相は普通は地相の上にあるであろう。２つの相
は混合物を約５時間静かに放置することによる沈降によ
り形成することが出来る。
。重合体相は普通は地相の上にあるであろう。２つの相
は混合物を約５時間静かに放置することによる沈降によ
り形成することが出来る。
次いで酵素含有重合体相は例えばサイフオンによる吸い
出しく ｓｉｐｈｏｎｉｎｇ ）及びデカンティング（
ｄｅｃａｎｔｉｎｇ ）の如き標準的な液／液分離法に
よって分離されて酵素を回収することが出来る。しかし
ながら、相を分離するには遠心分離を使用するのが好ま
しい。有用な分離装置は連続式固体ボール遠心分離９３
（ｓｏｌｉｄ−ｂｏｗｌ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇ６ ）
である。最終の分離された重合体相の＃ｇ索の望ましい
濃度を達成するためには、酵素に富んだ重合体相対酵素
に乏しい地相の容量比は０．１２乃至０゜１５であるこ
とが好ましい。
出しく ｓｉｐｈｏｎｉｎｇ ）及びデカンティング（
ｄｅｃａｎｔｉｎｇ ）の如き標準的な液／液分離法に
よって分離されて酵素を回収することが出来る。しかし
ながら、相を分離するには遠心分離を使用するのが好ま
しい。有用な分離装置は連続式固体ボール遠心分離９３
（ｓｏｌｉｄ−ｂｏｗｌ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇ６ ）
である。最終の分離された重合体相の＃ｇ索の望ましい
濃度を達成するためには、酵素に富んだ重合体相対酵素
に乏しい地相の容量比は０．１２乃至０゜１５であるこ
とが好ましい。
細胞外酵素を最も有効に回収するためには、重合体相の
何も捨てられるべき地相に同伴されないように遠心力ｍ
ａを操作するべきである。得られる集められた重合体相
はその中に混合した幾らかの同伴された地相を有してい
てもよい。次いで混合物は第２次遠心分離に付される。
何も捨てられるべき地相に同伴されないように遠心力ｍ
ａを操作するべきである。得られる集められた重合体相
はその中に混合した幾らかの同伴された地相を有してい
てもよい。次いで混合物は第２次遠心分離に付される。
第２次遠心分離においては遠心分離機は重合体相の何も
地相に同伴されずしかも少量の地相しか重合体相に同伴
されないように操作される。
地相に同伴されずしかも少量の地相しか重合体相に同伴
されないように操作される。
そのように集められた酵素に富んだ重合体相は酵素源と
して直接に使用することが出来る。ポリエチレングリコ
ール相に回収されたアルカリ性プロテアーゼは例えば酵
素洗剤配合物に適している。
して直接に使用することが出来る。ポリエチレングリコ
ール相に回収されたアルカリ性プロテアーゼは例えば酵
素洗剤配合物に適している。
このグリコールは酵素の安定剤として有用である。
所望により、酵素は例えば沈澱、限外ろ過又は蒸発の如
き周知の方法により重合体から分離させて実質的に重合
体を含まない酵素生成物を生成することができる。
き周知の方法により重合体から分離させて実質的に重合
体を含まない酵素生成物を生成することができる。
本発明の他の好ましい態様においては、全発酵ビールは
塩化カルシウム二水塩１．５−５．０％、第一リン酸ナ
トリウム又は第一リン酸カリウム０．１−１．２％及び
水酸化カルシウム０−０゜６％の混合物、但し該百分率
は発酵ビールの容量に対する添加物の重量で計算した重
量／容量基準による、で予備処理される。この予備処理
工程は細胞破片を凝集させるのを助けそして重合体と無
機塩をその後に加えるとき細胞破片からの酵素の分離を
改良する。好ましくは、プロテアーゼが回収される場合
には予備処理工程には塩化カルシウム二水塩１．５−５
．０％、及び第一リン酸ナトリウム又は第一リン酸カリ
ウム０．２−１．２％を使用するべきである。アミラー
ゼが回収される場合には、予備処理工程には塩化カルシ
ウム二水塩１．５−５．０％、第一リン酸ナトリウム又
は第一リン酸カリウム０．１−１．０％及び水酸化カル
シウム０．１−０．６％を使用するべきである。
塩化カルシウム二水塩１．５−５．０％、第一リン酸ナ
トリウム又は第一リン酸カリウム０．１−１．２％及び
水酸化カルシウム０−０゜６％の混合物、但し該百分率
は発酵ビールの容量に対する添加物の重量で計算した重
量／容量基準による、で予備処理される。この予備処理
工程は細胞破片を凝集させるのを助けそして重合体と無
機塩をその後に加えるとき細胞破片からの酵素の分離を
改良する。好ましくは、プロテアーゼが回収される場合
には予備処理工程には塩化カルシウム二水塩１．５−５
．０％、及び第一リン酸ナトリウム又は第一リン酸カリ
ウム０．２−１．２％を使用するべきである。アミラー
ゼが回収される場合には、予備処理工程には塩化カルシ
ウム二水塩１．５−５．０％、第一リン酸ナトリウム又
は第一リン酸カリウム０．１−１．０％及び水酸化カル
シウム０．１−０．６％を使用するべきである。
分配係数は分離の有効性の目安として当業界では知られ
ている。それは下部又は無機塩相中の酵素活性濃度で削
った上部又は重合体相中の酵素活性濃度として表される
。各相の酵素活性は周知の方法により測定することが出
来る。本発明の方法は公知の先行技術に対して十分な進
歩を示す少なくとも５０の分配係数を達成することが出
来る。
ている。それは下部又は無機塩相中の酵素活性濃度で削
った上部又は重合体相中の酵素活性濃度として表される
。各相の酵素活性は周知の方法により測定することが出
来る。本発明の方法は公知の先行技術に対して十分な進
歩を示す少なくとも５０の分配係数を達成することが出
来る。
本発明を下記の実施例により更に説明する。
実施例 １
６０００ガロン（２２７１２１＞の発酵槽に下記の成分
を加えることによってアルカリ性プロテアーゼの生産に
適した栄養培地を調製した：コムギブルチン
１５００ ｌｂ （６８１ｋ（１）クエン酸ナトリウ
ム １６５ ｌｂ （７４，９ｋ（］）塩化カ
ルシウムニ水塩 １６５ ｌｂ （７４，９ｋｇ
）トウモロコシデンプン ５０００ ｌｂ （２２
７０ｋｇ）大豆粉（Ｓｏｙ Ｍｅａｌ ） ２５０
０１ｂ （１１３５ｋｇ）熱安定性アルファ アミラーゼ ５ ｌｂ （２，２７ｋＱ
）第一リン酸ナトリウム ４００ ｌｂ （第
８１，６ｋｇ）第ニリン酸ナトリウム ４００ ｌ
ｂ （第８１，６ｋ（１）発泡防止剤
１６．５ガロン（６２，５１＞水を加えた合計
６０００ガロン（２２７１２１）次いでこの培地にバ
チルス リケニフォルミスの生きている細胞を接種しそ
して３６℃で３６時間発酵させた。得られる全発酵ビー
ルに７０％（Ｗ／Ｖ）塩化カルシウム二水塩水溶液２１
４ガロン（８１１１）及び第一リン酸ナトリウム３００
１ｂ（１３６ｋｏ）を加えた。これにより各添加剤の重
陽及び発酵ビールの容最を基準として塩化カルシウムニ
水塩２．５％（Ｗ ／ｖ ）及び第一リン酸ナトリウム
０．６％（Ｗ／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添加
物において水酸化ナトリウムの添加により混合しながら
混合物のｌ）Ｈを６．８−７．６に保持した。混合が終
了した後水酸化ナトリウムの添加によりｌ）Ｈを７．４
−７．５調節して凝集を達成した。次いで５０重量％水
性酢酸溶液の添加によりＩ）Ｈを６．４−６．６に調節
した。得られる混合物に２５−２７℃で塩化ナトリウム
１１６００１ｂ（５２６０ｋｌｌｌ）を加えそして混合
物を１時間攪拌して総ての塩化ナトリウムを溶解した。
を加えることによってアルカリ性プロテアーゼの生産に
適した栄養培地を調製した：コムギブルチン
１５００ ｌｂ （６８１ｋ（１）クエン酸ナトリウ
ム １６５ ｌｂ （７４，９ｋ（］）塩化カ
ルシウムニ水塩 １６５ ｌｂ （７４，９ｋｇ
）トウモロコシデンプン ５０００ ｌｂ （２２
７０ｋｇ）大豆粉（Ｓｏｙ Ｍｅａｌ ） ２５０
０１ｂ （１１３５ｋｇ）熱安定性アルファ アミラーゼ ５ ｌｂ （２，２７ｋＱ
）第一リン酸ナトリウム ４００ ｌｂ （第
８１，６ｋｇ）第ニリン酸ナトリウム ４００ ｌ
ｂ （第８１，６ｋ（１）発泡防止剤
１６．５ガロン（６２，５１＞水を加えた合計
６０００ガロン（２２７１２１）次いでこの培地にバ
チルス リケニフォルミスの生きている細胞を接種しそ
して３６℃で３６時間発酵させた。得られる全発酵ビー
ルに７０％（Ｗ／Ｖ）塩化カルシウム二水塩水溶液２１
４ガロン（８１１１）及び第一リン酸ナトリウム３００
１ｂ（１３６ｋｏ）を加えた。これにより各添加剤の重
陽及び発酵ビールの容最を基準として塩化カルシウムニ
水塩２．５％（Ｗ ／ｖ ）及び第一リン酸ナトリウム
０．６％（Ｗ／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添加
物において水酸化ナトリウムの添加により混合しながら
混合物のｌ）Ｈを６．８−７．６に保持した。混合が終
了した後水酸化ナトリウムの添加によりｌ）Ｈを７．４
−７．５調節して凝集を達成した。次いで５０重量％水
性酢酸溶液の添加によりＩ）Ｈを６．４−６．６に調節
した。得られる混合物に２５−２７℃で塩化ナトリウム
１１６００１ｂ（５２６０ｋｌｌｌ）を加えそして混合
物を１時間攪拌して総ての塩化ナトリウムを溶解した。
次いで３３５０の分子量を有するポリエチレングリコー
ル３１００１ｂ（１４００ｋｇ）及び硫酸ナトリウム４
２５０１ｂ（１９３０ｋｌを加えそして全ビール温度を
３０−３０℃に上昇させた。
ル３１００１ｂ（１４００ｋｇ）及び硫酸ナトリウム４
２５０１ｂ（１９３０ｋｌを加えそして全ビール温度を
３０−３０℃に上昇させた。
全ビールのｐＨは酢酸溶液の添加により６．〇−６，２
に調節しそして全混合物を２時間攪拌した。
に調節しそして全混合物を２時間攪拌した。
全混合物は塩化ナトリウム１５％（Ｗ ／Ｖｌ ） 、
ポリエチレングリコール４％（Ｗ ／Ｗ ） 、硫酸ナ
トリウム５，５％（ｗ ／ｗ ）及び全発酵ビール７５
゜５％（Ｗ ／Ｗ ）を含有していた。この百分率は発
酵ビールと添加剤の全混合物重慢に対する添加剤の重量
で計算された。混合の後全混合物を上部ポリエチレング
リコール相と下部の塩化ナトリウム−硫酸ナトリウム−
細胞破片相に分離した。上相容量対下相容量の相比は０
．１５であった。下相のプロテアーゼ活性の濃度で割っ
た上相のプロテアーゼ活性の濃度は６０−８０の分配係
数をもたらした。次いで連続式固体ボール遠心分ｍｍを
使用して２つの相を分離した。遠心分離機はポリエチレ
ングリコール相が捨てられる地相に同伴されないように
第１次分離がなされるように調節された。グリコール相
は発酵ビールの全酵素活性の９０−９２％を含有してい
た。このグリコール相は約５−２０容量％の層相同伴物
も含んでいた。
ポリエチレングリコール４％（Ｗ ／Ｗ ） 、硫酸ナ
トリウム５，５％（ｗ ／ｗ ）及び全発酵ビール７５
゜５％（Ｗ ／Ｗ ）を含有していた。この百分率は発
酵ビールと添加剤の全混合物重慢に対する添加剤の重量
で計算された。混合の後全混合物を上部ポリエチレング
リコール相と下部の塩化ナトリウム−硫酸ナトリウム−
細胞破片相に分離した。上相容量対下相容量の相比は０
．１５であった。下相のプロテアーゼ活性の濃度で割っ
た上相のプロテアーゼ活性の濃度は６０−８０の分配係
数をもたらした。次いで連続式固体ボール遠心分ｍｍを
使用して２つの相を分離した。遠心分離機はポリエチレ
ングリコール相が捨てられる地相に同伴されないように
第１次分離がなされるように調節された。グリコール相
は発酵ビールの全酵素活性の９０−９２％を含有してい
た。このグリコール相は約５−２０容量％の層相同伴物
も含んでいた。
次いで上記の如く集められたグリコール相は、グリコー
ル相に２容量％より少ない地相の同伴を許容するように
設定された同様な装置を使用して第２次分離に付された
。地相を捨てそしてそれはグリコール相の何も含んでい
なかった。次いで上記の如くして集められたグリコール
相を１０″Ｃの冷却したタンクに入れて痕跡ｔの硫酸ナ
トリウムを除去した。少量の硫酸ナトリウム結晶を加え
て硫酸ナトリウム結晶の成長を誘発した。１０℃で２時
間穏やかに撹拌した後硫酸ナトリウムを含まないグリコ
ール相を排出させた。次いでそれを活性炭及びろ過助剤
と混合しそしてフィルタープレスを使用してろ過した。
ル相に２容量％より少ない地相の同伴を許容するように
設定された同様な装置を使用して第２次分離に付された
。地相を捨てそしてそれはグリコール相の何も含んでい
なかった。次いで上記の如くして集められたグリコール
相を１０″Ｃの冷却したタンクに入れて痕跡ｔの硫酸ナ
トリウムを除去した。少量の硫酸ナトリウム結晶を加え
て硫酸ナトリウム結晶の成長を誘発した。１０℃で２時
間穏やかに撹拌した後硫酸ナトリウムを含まないグリコ
ール相を排出させた。次いでそれを活性炭及びろ過助剤
と混合しそしてフィルタープレスを使用してろ過した。
得られるアルカリ性プロテアーゼに富んだグリコール溶
液は液体酵素洗剤配合物に直接使用するとか出来る。
液は液体酵素洗剤配合物に直接使用するとか出来る。
友ｉｔ−一と
実施例１の方法を塩化カルシウムニ水塩及び第一リン酸
ナトリウムを添加する工程を通して繰返した。次いで得
られる全発酵ビール−添加剤混合物を３３５０の分子量
を有するポリエチレングリコール２１３０１ｂ（９７０
ｋｏ）及び５Ａ酸ナトリウム１０６６０１ｂ（４８５０
１Ｃ１）と混合しそして全ビール温度を３０−３２℃に
上昇させた。次いで、ポリエチレングリコール３％（Ｗ
／Ｗ ） 、硫酸ナトリウム１５％（Ｗ／Ｗ）及び全
発酵ビール８２％（Ｗ ／ｗ ）を含有する全混合物を
１時間攪拌した。混合の後全混合物を上部ポリエチレン
グリコール相と下部の硫酸ナトリウム−細胞破片相に分
離した。上相容量対下相容量の相比は０．１２であった
。下相のプロテアーゼ活性の濃度で割った上相のプロテ
アーゼ活性の濃度は６０−８０の分配係数をもたらした
。グリコール相のアルカリ性プロテアーゼは無定形固体
の形態にあった。次いで実施例１に記載の如ぎノ立心分
離機を使用して２つの相を分離して無定形固体プロテア
ーゼと２容量％より少ない層相の同伴物とを含有するグ
リコール相を生成させた。次いで固体を遠心分離により
回収し、そしてそれらは粒状酵素洗剤製品の粒状プロテ
アーゼとして使用することができる。
ナトリウムを添加する工程を通して繰返した。次いで得
られる全発酵ビール−添加剤混合物を３３５０の分子量
を有するポリエチレングリコール２１３０１ｂ（９７０
ｋｏ）及び５Ａ酸ナトリウム１０６６０１ｂ（４８５０
１Ｃ１）と混合しそして全ビール温度を３０−３２℃に
上昇させた。次いで、ポリエチレングリコール３％（Ｗ
／Ｗ ） 、硫酸ナトリウム１５％（Ｗ／Ｗ）及び全
発酵ビール８２％（Ｗ ／ｗ ）を含有する全混合物を
１時間攪拌した。混合の後全混合物を上部ポリエチレン
グリコール相と下部の硫酸ナトリウム−細胞破片相に分
離した。上相容量対下相容量の相比は０．１２であった
。下相のプロテアーゼ活性の濃度で割った上相のプロテ
アーゼ活性の濃度は６０−８０の分配係数をもたらした
。グリコール相のアルカリ性プロテアーゼは無定形固体
の形態にあった。次いで実施例１に記載の如ぎノ立心分
離機を使用して２つの相を分離して無定形固体プロテア
ーゼと２容量％より少ない層相の同伴物とを含有するグ
リコール相を生成させた。次いで固体を遠心分離により
回収し、そしてそれらは粒状酵素洗剤製品の粒状プロテ
アーゼとして使用することができる。
実施例 ３
６０００ガロン（２２７１２＋ ）の発酵槽に下記の成
分を加えることによって熱安定性アルファアミラーゼの
生産に適した栄養培地を調製した：塩化カルシウム二水
場 ２２．５ ｌｂ （１０，２ｋ（１）第一リン
酸カリウム ３００ ｌｂ ＜ １３６．２
ｋｇ）第ニリン酸カリウム ７００ ｌｂ （
３１７，８ｋａ）硫酸アンモニウム ２５０
ｌｂ （１１３，５Ｊｌ）クエン酸ナトリウム
１００ ｌｂ （４５，４ｋ（＋）（トウモロコシ
浸漬液） １０００ ｌｂ （４５４ｋ（１）ラク
トース ７０００ ｌｂ （３１７８ｋ
（＋）（綿実粉） １５００ ｌｂ
（８８１Ｊｌ）亭 大豆粉 ２００ ｌｂ （９０８ｋ
ｇ）発泡防止剤 １６５ガロン（６２５
１）水を加えた全量 ６０００ガロン（２２７
１２１＞次いでこの培地にバチルス リケニフオルミス
の生きている細胞を接種しそして水酸化ナトリウムの周
期的添加によってＤＨを７．０５−７．１５に保持しな
がら４０℃で１０８−１１０時間発酵させた。得られる
全発酵ビールに７０％（Ｗ／■）塩化カルシウムニ水塩
水溶液３４３ガロン（１３００１） 、１０％（ｗ／ｖ
）水酸化カルシウム水溶液２４０ガロン（９８０１）及
び第一リン酸カリウム６０１ｂ（２７ｋｏ）を加えた。
分を加えることによって熱安定性アルファアミラーゼの
生産に適した栄養培地を調製した：塩化カルシウム二水
場 ２２．５ ｌｂ （１０，２ｋ（１）第一リン
酸カリウム ３００ ｌｂ ＜ １３６．２
ｋｇ）第ニリン酸カリウム ７００ ｌｂ （
３１７，８ｋａ）硫酸アンモニウム ２５０
ｌｂ （１１３，５Ｊｌ）クエン酸ナトリウム
１００ ｌｂ （４５，４ｋ（＋）（トウモロコシ
浸漬液） １０００ ｌｂ （４５４ｋ（１）ラク
トース ７０００ ｌｂ （３１７８ｋ
（＋）（綿実粉） １５００ ｌｂ
（８８１Ｊｌ）亭 大豆粉 ２００ ｌｂ （９０８ｋ
ｇ）発泡防止剤 １６５ガロン（６２５
１）水を加えた全量 ６０００ガロン（２２７
１２１＞次いでこの培地にバチルス リケニフオルミス
の生きている細胞を接種しそして水酸化ナトリウムの周
期的添加によってＤＨを７．０５−７．１５に保持しな
がら４０℃で１０８−１１０時間発酵させた。得られる
全発酵ビールに７０％（Ｗ／■）塩化カルシウムニ水塩
水溶液３４３ガロン（１３００１） 、１０％（ｗ／ｖ
）水酸化カルシウム水溶液２４０ガロン（９８０１）及
び第一リン酸カリウム６０１ｂ（２７ｋｏ）を加えた。
これにより各添加剤の重量及び発酵ビールの容量を基準
として塩化カルシウム二水塩４％（ｗ／ｖ’）、水酸化
カルシウム０．４％（Ｗ／Ｖ）及び第一リン酸カリウム
０．１２％（Ｗ／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添
加物において水酸化ナトリウムの添加により混合しなが
ら混合物のｐＨを７．６−８．４に保持した。混合が終
了した後水酸化ナトリウムの添加によりｌ）Ｈを８．４
−８．６に調節した。得られる混合物に３３５０の分子
量を有するポリエチレングリコール２６００１ｂ（１第
８０ｋｇ）及び塩化ナトリウム７４２０１ｂ（３３７０
ｋａ＞を２５−２７℃で加え混合物を少なくとも１時間
攪拌した。次いで５９４０１ｂ（２７００ｋｇ）の量の
硫酸ナトリウムを加え、発酵ビール混合物を３０−３２
℃に加熱した。ｐＨを水酸化ナトリウムの添加により７
．９−８．１に調節しそして全混合物を少なくとも２時
間攪拌した。全混合物は塩化ナトリウム１０％（Ｗ ／
Ｗ ） 、ポリエチレングリコール３．５％（ｗ ７ｗ
） 、＠酸ナトリウム８％（Ｗ ／Ｗ ）及び全発酵
ビール７８．５％（Ｗ／Ｗ）を含有していた。混合の後
全混合物を上部ポリエチレングリコール相と下部の塩化
ナトリウム−硫酸ナトリウム−細胞破片相に分離した。
として塩化カルシウム二水塩４％（ｗ／ｖ’）、水酸化
カルシウム０．４％（Ｗ／Ｖ）及び第一リン酸カリウム
０．１２％（Ｗ／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添
加物において水酸化ナトリウムの添加により混合しなが
ら混合物のｐＨを７．６−８．４に保持した。混合が終
了した後水酸化ナトリウムの添加によりｌ）Ｈを８．４
−８．６に調節した。得られる混合物に３３５０の分子
量を有するポリエチレングリコール２６００１ｂ（１第
８０ｋｇ）及び塩化ナトリウム７４２０１ｂ（３３７０
ｋａ＞を２５−２７℃で加え混合物を少なくとも１時間
攪拌した。次いで５９４０１ｂ（２７００ｋｇ）の量の
硫酸ナトリウムを加え、発酵ビール混合物を３０−３２
℃に加熱した。ｐＨを水酸化ナトリウムの添加により７
．９−８．１に調節しそして全混合物を少なくとも２時
間攪拌した。全混合物は塩化ナトリウム１０％（Ｗ ／
Ｗ ） 、ポリエチレングリコール３．５％（ｗ ７ｗ
） 、＠酸ナトリウム８％（Ｗ ／Ｗ ）及び全発酵
ビール７８．５％（Ｗ／Ｗ）を含有していた。混合の後
全混合物を上部ポリエチレングリコール相と下部の塩化
ナトリウム−硫酸ナトリウム−細胞破片相に分離した。
上相容量対下相容量の相比は０．１２であった。
下相のアミラーゼ活性の′ａ度で割った上相のアミラー
ゼ活性の濃度は５０−７０の分配係数をもたらした。次
いで連続式固体ボール遠心分Ｉｌ！１１１ｉを実施例１
に記載の如く使用してアミラーゼに富んだグリコール相
を回収し、次いでこれを実施例１に記載の如くして精製
してアミラーゼに富んだグリコール生成物を生成した。
ゼ活性の濃度は５０−７０の分配係数をもたらした。次
いで連続式固体ボール遠心分Ｉｌ！１１１ｉを実施例１
に記載の如く使用してアミラーゼに富んだグリコール相
を回収し、次いでこれを実施例１に記載の如くして精製
してアミラーゼに富んだグリコール生成物を生成した。
友１九−Ｌ
６０００ガロン（２２７１２＋ ＞の発酵槽に下記の成
分を加えることによってアルファアミラーゼの生産に適
した栄養培地をＩＩ製した：炭酸カルシウム水ム
５３０ ｌｂ （２４０，６ｋ（１）魚 粉
７５０ ｌｂ （３
４０，５ｋｇ）（粉砕大豆粉） ２８００
ｌｂ （１２７１ｋｇ）トウモロコシ浸漬液 １
５００ ｌｂ （６８１ｋｌラクトース
７０００ ｌｂ （３１７８ｋ（１）第ニリン酸ア
ンモニウム １３０ ｌｂ （５９ｋｇ＞発泡防止剤
４０ガロン（１５１，４１）水を加えた
全量 ６０００ガロン（２２７１２＋）次いで
この培地にバチルス アミロリクエファシェンスの生き
ている細胞を接種しそして水酸化ナトリウムの周期的添
加によりＩ）Ｈを７．０５−７．１５に保持しながら３
４℃で６０時間発酵させた。得られる全発酵ビールに７
０％（Ｗ／Ｖ）塩化カルシウムニ水塩水溶液２５７ガロ
ン（９７３１）、１０％（Ｗ／Ｖ）水酸化カルシウム水
溶液第８０ガロン（６８１１）及び第一リン酸カリウム
３００１ｂ（１３６に！Ｊ）を加えた。これにより各添
加剤の重量及び発酵ビールの容量を基準として塩化カル
シウム水塩３％（Ｗ ／Ｖ ） 、水酸化カルシウム０
．３％（Ｗ／Ｖ）及び第一リン酸カリウム０．６％（Ｗ
／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添加物において水
酸化ナトリウムの添加により混合しながら混合物のｐ＋
−＋を６．８−７゜６に保持した。混合が終了した後水
酸化ナトリウムの添加によりＤＨを７．４−７．６調節
した。
分を加えることによってアルファアミラーゼの生産に適
した栄養培地をＩＩ製した：炭酸カルシウム水ム
５３０ ｌｂ （２４０，６ｋ（１）魚 粉
７５０ ｌｂ （３
４０，５ｋｇ）（粉砕大豆粉） ２８００
ｌｂ （１２７１ｋｇ）トウモロコシ浸漬液 １
５００ ｌｂ （６８１ｋｌラクトース
７０００ ｌｂ （３１７８ｋ（１）第ニリン酸ア
ンモニウム １３０ ｌｂ （５９ｋｇ＞発泡防止剤
４０ガロン（１５１，４１）水を加えた
全量 ６０００ガロン（２２７１２＋）次いで
この培地にバチルス アミロリクエファシェンスの生き
ている細胞を接種しそして水酸化ナトリウムの周期的添
加によりＩ）Ｈを７．０５−７．１５に保持しながら３
４℃で６０時間発酵させた。得られる全発酵ビールに７
０％（Ｗ／Ｖ）塩化カルシウムニ水塩水溶液２５７ガロ
ン（９７３１）、１０％（Ｗ／Ｖ）水酸化カルシウム水
溶液第８０ガロン（６８１１）及び第一リン酸カリウム
３００１ｂ（１３６に！Ｊ）を加えた。これにより各添
加剤の重量及び発酵ビールの容量を基準として塩化カル
シウム水塩３％（Ｗ ／Ｖ ） 、水酸化カルシウム０
．３％（Ｗ／Ｖ）及び第一リン酸カリウム０．６％（Ｗ
／Ｖ）を含有する混合物が得られる。添加物において水
酸化ナトリウムの添加により混合しながら混合物のｐ＋
−＋を６．８−７゜６に保持した。混合が終了した後水
酸化ナトリウムの添加によりＤＨを７．４−７．６調節
した。
得られる混合物に３３５０の分子量を有するポリエチレ
ングリコール２５１０１ｂ（１１４０１Ｌ！Ｊ）及び塩
化−１−トＩＪウム７９６０１ｂ（３６００ｋＯ） を
２５−２７℃で加えそして混合物を少なくとも１９１１
１ｆｌ拌シタ。次いｒ１０７００１１）（４８７０ｋｇ
）の量の硫酸ナトリウムを加え、そして発酵ビール混合
物を３０−３２℃に加熱した。ｌ）Ｈを水酸化ナトリウ
ムの添加により７．４−７．６に調節しそして全混合物
を少なくとも２時間攪拌した。全混合物は塩化ナトリウ
ム１０％（Ｗ ／Ｗ ） 、ポリエチレングリコール３
．１５％（ｗ ７ｗ ） 、硫酸ナトリウム１３．５％
（＊／Ｗ）及び全発酵ビール７３．３５％（Ｗ ／Ｗ
）を含有していた。混合の後全混合物を相比０．１２及
び分配係数５０−７０を有する実施例３に記載の如き２
相に分離した。相を実施例３に記載の如く処理してアミ
ラーゼに富んだグリコール生成物を生成した。
ングリコール２５１０１ｂ（１１４０１Ｌ！Ｊ）及び塩
化−１−トＩＪウム７９６０１ｂ（３６００ｋＯ） を
２５−２７℃で加えそして混合物を少なくとも１９１１
１ｆｌ拌シタ。次いｒ１０７００１１）（４８７０ｋｇ
）の量の硫酸ナトリウムを加え、そして発酵ビール混合
物を３０−３２℃に加熱した。ｌ）Ｈを水酸化ナトリウ
ムの添加により７．４−７．６に調節しそして全混合物
を少なくとも２時間攪拌した。全混合物は塩化ナトリウ
ム１０％（Ｗ ／Ｗ ） 、ポリエチレングリコール３
．１５％（ｗ ７ｗ ） 、硫酸ナトリウム１３．５％
（＊／Ｗ）及び全発酵ビール７３．３５％（Ｗ ／Ｗ
）を含有していた。混合の後全混合物を相比０．１２及
び分配係数５０−７０を有する実施例３に記載の如き２
相に分離した。相を実施例３に記載の如く処理してアミ
ラーゼに富んだグリコール生成物を生成した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、全発酵ビールから細胞外酵素を回収する方法であっ
て、微生物細胞と細胞外酵素を含有する全発酵ビールに
、 （ａ）ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコー
ルのアミン誘導体、ポリエチレングリコールのカルボキ
シレート誘導体、ポリプロピレングリコール、ポリプロ
ピレングリコールのアミン誘導体、ポリプロピレングリ
コールのカルボキシレート誘導体、ポリ（エチレングリ
コール）エステル、ポリエチレンイミン、トリメチルア
ミノ−ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール
、ポリビニルピロリドン及びそれらの混合物から成る群
から選ばれた重合体と （ｂ）無機塩との混合物を添加することと、この全発酵
ビール−重合体−塩混合物を酵素に富んだ重合体相と酵
素に乏しい塩相とに分離させそして酵素に富んだ生成物
をそれから回収することを特徴とする方法。 ２、該無機塩はそのカチオンがナトリウム、カリウム、
マグネシウム及びアンモニウムでありそしてそのアニオ
ンが硫酸イオン、炭酸イオン、クエン酸イオン、塩化物
イオン、リン酸イオン及びそれらの混合物である化合物
の群から選ばれたものである特許請求の範囲第１項記載
の方法。 ３、全発酵ビール、重合体及び無機塩の混合物の全混合
物が全発酵ビール６４−９０％、重合体１−１５％及び
無機塩８−３５％を含有し、但し該百分率は混合物の全
重量を基準として重量によるものである特許請求の範囲
第１項記載の方法。 ４、全発酵ビール、重合体及び無機塩の混合物の全混合
物が全発酵ビール７３−７９％、重合体３−４％及び無
機塩１５−２４％を含有し、但し該百分率は混合物の全
重量を基準として重量によるものである特許請求の範囲
第１項記載の方法。 ５、該重合体がポリエチレングリコールであリそして該
無機塩が塩化ナトリウム及び硫酸ナトリウムの混合物で
ある特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、該重合体がポリエチレングリコールでありそして該
塩が硫酸ナトリウムである特許請求の範囲第４項記載の
方法。 ７、該重合体が約３３５０の分子量を有するポリエチレ
ングリコールである特許請求の範囲第４項記載の方法。 ８、重合体と無機塩混合物を加える前に塩化カルシウム
二水塩１．５−５．０％、第一リン酸ナトリウム又は第
一リン酸カリウム０．１−１．２％及び水酸化カルシウ
ム０−０．６％の混合物、但し該百分率は発酵ビールの
容量に対する添加剤の重量に基づいで計算した重量／容
量基準である、と接触させる特許請求の範囲第４項記載
の方法。 ９、全発酵ビールを塩化カルシウム二水塩１．５−５．
０％と第一リン酸ナトリウム又は第一リン酸カリウム０
．２−１．２％の混合物と接触させる特許請求の範囲第
８項記載の方法。 １０、全発酵ビールを塩化カルシウム二水塩１．５−５
．０％、水酸化カルシウム０．１−０．６％及び第一リ
ン酸ナトリウム又は第一リン酸カリウム０．１−１．０
％の混合物と接触させる特許請求の範囲第８項記載の方
法。 １１、酵素に富んだ重合体相対酵素に乏しい塩相の容量
比が０．１２−０．１５である特許請求の範囲第４項記
載の方法。 １２、得られる相を連続式固体ボール遠心分離により分
離する特許請求の範囲第４項記載の方法。 １３、細胞外アルカリ性プロテアーゼの回収方法であっ
て、適当な栄養培地中で￥バチルス￥￥リケニホルミス
￥の適当な菌株を発酵させて￥バチルス￥￥リケニホル
ミス￥細胞と細胞外アルカリ性プロテアーゼを含有する
全発酵ビールを生成させることと、該全発酵ビールに塩
化カルシウム二水塩２．５％及び第一リン酸ナトリウム
又は第一リン酸カリウム０．６％、但し該百分率は発酵
ビールの容量に対する添加剤の重量に基づいて計算した
重量／容量基準に基づいている、を加えることと、上記
混合物にポリエチレングリコール３％及び硫酸ナトリウ
ム１５％、但し該百分率は発酵ビール及び添加剤の全混
合物重量を基準として重量によるものである、を加える
ことと、アルカリ性プロテアーゼに富んだポリエチレン
グリコール相及びアルカリ性プロテアーゼに乏しい硫酸
ナトリウム相を形成しそしてこの２つの相を分離してア
ルカリ性プロテアーゼに富んだ生成物をそれから回収す
ることを特徴とする方法。 １４、塩化カルシウム二水塩及び第一リン酸ナトリウム
又は第一リン酸カリウムを添加した後、混合物を塩化ナ
トリウム１５％、ポリエチレングリコール４％及び硫酸
ナトリウム５．５％、但し該百分率は発酵ビール及び添
加剤の全混合物重量を基準として重量によるものである
、と接触させる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、細胞外熱安定性アルファアミラーゼの回収方法で
あって、適当な栄養培地中で￥バチルス￥￥リケニホル
ミス￥の適当な菌株を発酵させて￥バチルス￥￥リケニ
ホルミス￥細胞と細胞外アルフアアミラーゼを含有する
全発酵ビールを生成させることと、該全発酵ビールに水
酸化カルシウム０．４％及び第一リン酸ナトリウム又は
第一リン酸カリウム０．１２％、但し該百分率は発酵ビ
ールの容量に対する添加剤の重量に基づいて計算した重
量／容量基準に基づいている、を加えることと、上記混
合物にポリエチレングリコール３．５％、塩化ナトリウ
ム１０％及び硫酸ナトリウム８％、但し該百分率は発酵
ビール及び添加剤の全混合物重量を基準として重量によ
るものである、を加えることと、アミラーゼに富んだポ
リエチレングリコール相及びアミラーゼに乏しい塩化ナ
トリウム−硫酸ナトリウム相を形成しそしてこの２つの
相を分離してアミラーゼに富んだ生成物をそれから回収
することを特徴とする方法。 １６、細胞外アルファーアミラーゼの回収方法であって
、適当な栄養培地中で￥バチルス￥ ￥アミロリクエフ
ァシエンス￥の適当な菌株を発酵させて￥バチルス￥￥
アミロリクエファシエンス￥細胞と細胞外アルファアミ
ラーゼを含有する全発酵ビールを生成させることと、該
全発酵ビールに塩化カルシウム二水塩３％、水酸化カル
シウム０．３％及び第一リン酸ナトリウム又は第一リン
酸カリウム０．６％、但し該百分率は発酵ビールの容量
に対する添加剤の重量に基づいて計算した重量／容量基
準に基づいている、を加えることと、上記混合物にポリ
エチレングリコール３．１５％、塩化ナトリウム１０％
及び硫酸ナトリウム１３．５％、但し該百分率は発酵ビ
ール及び添加剤の全混合物重量を基準として重量による
ものである、を加えることと、アミラーゼに富んだポリ
エチレングリコール相及びアミラーゼに乏しい塩化ナト
リウム−硫酸ナトリウム相を形成しそしてこの２つの相
を分離してアミラーゼに富んだ生成物をそれから生成す
ることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US77503185A | 1985-09-04 | 1985-09-04 | |
| US775031 | 1985-09-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01168284A true JPH01168284A (ja) | 1989-07-03 |
| JPH0323152B2 JPH0323152B2 (ja) | 1991-03-28 |
Family
ID=25103114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61206065A Granted JPH01168284A (ja) | 1985-09-04 | 1986-09-03 | 全発酵ブロスから細胞外酵素を回収する方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01168284A (ja) |
| KR (1) | KR890003943B1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05500603A (ja) * | 1989-06-13 | 1993-02-12 | ジュネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | 天然産キモシンの回収工程 |
-
1986
- 1986-09-02 KR KR1019860007310A patent/KR890003943B1/ko not_active Expired
- 1986-09-03 JP JP61206065A patent/JPH01168284A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05500603A (ja) * | 1989-06-13 | 1993-02-12 | ジュネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | 天然産キモシンの回収工程 |
| JPH05500602A (ja) * | 1989-06-13 | 1993-02-12 | ジュネンコア インターナショナル インコーポレーテッド | 微生物学的に生成されたキモシンの回収方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890003943B1 (ko) | 1989-10-13 |
| JPH0323152B2 (ja) | 1991-03-28 |
| KR870003196A (ko) | 1987-04-15 |
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