JPH01187094A - 腫瘍細胞増殖抑制因子 - Google Patents
腫瘍細胞増殖抑制因子Info
- Publication number
- JPH01187094A JPH01187094A JP63011487A JP1148788A JPH01187094A JP H01187094 A JPH01187094 A JP H01187094A JP 63011487 A JP63011487 A JP 63011487A JP 1148788 A JP1148788 A JP 1148788A JP H01187094 A JPH01187094 A JP H01187094A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell growth
- growth inhibitory
- inhibitory factor
- cells
- tumorous cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、医薬として有用な腫瘍細胞増殖抑制因子に関
する。
する。
［従来の技術］
腫瘍は、細胞の異常増殖により進行する。腫瘍細胞に作
用し増殖を抑制する物質があれば、腫瘍治療に効果的で
あろうと考える。増殖を抑制する物質のうち、合成化学
医薬品は一般に特異性が低く、副作用が強い。これに対
して、組織培養細胞由来の細胞増殖抑制因子は特異性が
高い可能性があり、副作用の少ない優れた治療剤になる
と考えられる。特に、難治性とされている固形腫瘍の増
殖抑制因子が見出されれば有用と考える。
用し増殖を抑制する物質があれば、腫瘍治療に効果的で
あろうと考える。増殖を抑制する物質のうち、合成化学
医薬品は一般に特異性が低く、副作用が強い。これに対
して、組織培養細胞由来の細胞増殖抑制因子は特異性が
高い可能性があり、副作用の少ない優れた治療剤になる
と考えられる。特に、難治性とされている固形腫瘍の増
殖抑制因子が見出されれば有用と考える。
［発明が解決しようとする問題点］
本発明は、腫瘍治療に有用な組織培養細胞由来のＩｌｉ
ｌＸｇｓ細胞増殖抑制因子を提供することを目的とする
。
ｌＸｇｓ細胞増殖抑制因子を提供することを目的とする
。
［問題点を解決するための手段］
本発明は、分子量が５２，０００±５．０００で、かつ
ｐ）ｌ’７．０〜９．０において安定な腫瘍細胞増殖抑
制因子である。
ｐ）ｌ’７．０〜９．０において安定な腫瘍細胞増殖抑
制因子である。
本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子は、ヒトの腫瘍細胞、特
にヒト肺癌細胞に対して強い増殖抑制活性を示すという
特性を有する。
にヒト肺癌細胞に対して強い増殖抑制活性を示すという
特性を有する。
本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子は、該因子を産生する細
胞を培養し、培養上清から回収分離することにより製造
することができる。
胞を培養し、培養上清から回収分離することにより製造
することができる。
産生細胞としては、本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子産生
能力を有するものであればいかなるものであってよい。
能力を有するものであればいかなるものであってよい。
好ましくは、ヒト由来肺癌細胞のＰＣ−１２（に１ｎｊ
ｏ Ｈ，ｅｔ ａｌ、、 Ｂｒ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ
、 ３９゜１５−２３． （１９７９） ）が挙げられ
る。産生培地とじては特に限定されないが、ＰＣ−１２
細胞の場合はＲＰＭ１１６４０が好ましい。
ｏ Ｈ，ｅｔ ａｌ、、 Ｂｒ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ
、 ３９゜１５−２３． （１９７９） ）が挙げられ
る。産生培地とじては特に限定されないが、ＰＣ−１２
細胞の場合はＲＰＭ１１６４０が好ましい。
血清は、胎児牛血清または仔牛血清を０． １〜１５％
で使用する。また必要に応じて無血清培地を使用しても
よい。
で使用する。また必要に応じて無血清培地を使用しても
よい。
ＰＣ−１２細胞は、通常常圧で３７℃＋０． ５℃で行
なわれ、培養時間は１〜１５日程度であり、好ましくは
３〜７日程度である。培養に使用される気相は、ＰＣ−
１２細胞が増殖可能なものであればいかなるものであっ
てもよいが、酸素７％、二酸化炭素５％、窒素８８％よ
りなる組成である場合が特に好ましい。培養に際し、平
面培養以外にビーズを用いて通気撹拌回転してもよい。
なわれ、培養時間は１〜１５日程度であり、好ましくは
３〜７日程度である。培養に使用される気相は、ＰＣ−
１２細胞が増殖可能なものであればいかなるものであっ
てもよいが、酸素７％、二酸化炭素５％、窒素８８％よ
りなる組成である場合が特に好ましい。培養に際し、平
面培養以外にビーズを用いて通気撹拌回転してもよい。
ＰＣ−１２細胞の培養に際しては、最初から該細胞を無
血清培地に植え培養してもよい。しかし、哺乳動物血清
（例、胎児牛血清、仔牛血清、ヒト血清、馬血清）を含
む培地で培養し、サブコンフルエンスとなったら、デカ
ンテーション、遠心分離等の公知の方法を用いて細胞を
集め無血清培地で培養することが望ましい。
血清培地に植え培養してもよい。しかし、哺乳動物血清
（例、胎児牛血清、仔牛血清、ヒト血清、馬血清）を含
む培地で培養し、サブコンフルエンスとなったら、デカ
ンテーション、遠心分離等の公知の方法を用いて細胞を
集め無血清培地で培養することが望ましい。
ＰＣ−１２細胞を培養した後、遠心分離等の公知の手段
を用いて培養上清液を得るたとができる。
を用いて培養上清液を得るたとができる。
培養上清は、限外ろ過によって濃縮できる。濃縮液は、
公゛知の方法、例えば、ゲルろ過法、アフィニティーク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーを用
いて分画精製できる。
公゛知の方法、例えば、ゲルろ過法、アフィニティーク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーを用
いて分画精製できる。
上記の方法で得られる本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子は
、５．２０００±５，０００の分子量で、ｐＨ７，０〜
９．０で安定であり、特にヒト肺癌細胞に対して強い増
殖抑制を示す。
、５．２０００±５，０００の分子量で、ｐＨ７，０〜
９．０で安定であり、特にヒト肺癌細胞に対して強い増
殖抑制を示す。
腫瘍細胞増殖抑制活性は、公知の方法により測定するこ
とができる。例えば、細胞をクリスタルバイオレットで
染色した後、色素を抽出し、その濃度を指標として増殖
を判定する方法などがある。
とができる。例えば、細胞をクリスタルバイオレットで
染色した後、色素を抽出し、その濃度を指標として増殖
を判定する方法などがある。
本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子を医薬品として使用する
場合には、そのまま粉末として、または他の薬理学的に
許容されうる担体、賦形剤、希釈剤とともに、医薬組成
物（例、注射剤、錠剤、カプセル剤、液剤、軟こう）と
して、温血動物（例、ヒト）に対して非経口的、また経
口的に安全に投与することができる。
場合には、そのまま粉末として、または他の薬理学的に
許容されうる担体、賦形剤、希釈剤とともに、医薬組成
物（例、注射剤、錠剤、カプセル剤、液剤、軟こう）と
して、温血動物（例、ヒト）に対して非経口的、また経
口的に安全に投与することができる。
注射剤の製剤化は、例えば生理食塩水、またはブドウ糖
やその他の補助薬を含む水溶液を用い、常法に従って行
なわれる。錠剤、カプセル剤等の医薬組成物も常法に従
って調製しうる。
やその他の補助薬を含む水溶液を用い、常法に従って行
なわれる。錠剤、カプセル剤等の医薬組成物も常法に従
って調製しうる。
［実 施 例］
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれ
らに限定されるべきではない。
らに限定されるべきではない。
実施例Ｉ
ＰＣ−１２細胞の無血清培養上清液の調製および精製：
ＰＣ−１２細胞を１０％新生仔牛血清を含むＲＰＭ１１
６４０で培養し、培養細胞がサブコンフルエンスに達し
た時点でこの培地を除去し、無血清ＲＰＭ１１６４０に
交換し、２４〜９６時間培養した。培養後この無血清培
養上清液を集め、アミコン社の限外ろ過器ＹＭ−５を使
用して約４５０倍濃縮した。この濃縮液を、ＬＫＢ社ｕ
ｔｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ５４ （２，５ｃｍ０Ｘ １
１０ｃｍ）を用いてゲルろ過を行なった。活性画分を集
め、２０ｍＭリン酸バッフｙ−ｐＨ７，０で平衡化した
Ｄ Ｅ Ａ Ｅ −ｃｅｌｌｕｔｏｓｅ （生化学工
業社） （２，８ｃｍＪ２ｒＸ２０ｃｍ）に通した。
６４０で培養し、培養細胞がサブコンフルエンスに達し
た時点でこの培地を除去し、無血清ＲＰＭ１１６４０に
交換し、２４〜９６時間培養した。培養後この無血清培
養上清液を集め、アミコン社の限外ろ過器ＹＭ−５を使
用して約４５０倍濃縮した。この濃縮液を、ＬＫＢ社ｕ
ｔｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ５４ （２，５ｃｍ０Ｘ １
１０ｃｍ）を用いてゲルろ過を行なった。活性画分を集
め、２０ｍＭリン酸バッフｙ−ｐＨ７，０で平衡化した
Ｄ Ｅ Ａ Ｅ −ｃｅｌｌｕｔｏｓｅ （生化学工
業社） （２，８ｃｍＪ２ｒＸ２０ｃｍ）に通した。
１００ｍＭリン酸バッファーｐＨ７，０で十分洗浄した
後、０〜０．５Ｍ ＮａＣ１の濃度匂配により活性を
溶出した。活性は約０．ＩＭＮａＣ１濃度で溶出された
。得られた試料のタンパク質１ｍｇ当りの■Ｃ３ｏ（希
釈率）は約６０７であった。
後、０〜０．５Ｍ ＮａＣ１の濃度匂配により活性を
溶出した。活性は約０．ＩＭＮａＣ１濃度で溶出された
。得られた試料のタンパク質１ｍｇ当りの■Ｃ３ｏ（希
釈率）は約６０７であった。
実施例２
粗精製腫瘍細胞増殖抑制因子の性状：
実施例１で得られた腫瘍細胞増殖抑制因子の分子量をゲ
ルろ過法、ＬＫＢ社Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ５４（
２，５ｃｍグＸ １１０ｃｍ）で測定した。用いた標準
タンパク質は、アルブミン（６６Ｋ）、オボアルブミン
（４５Ｋ）、ソイビーントリプシンインヒビター（２１
Ｋ）である。１５．６ｍｌ／ｈｒで溶出された各タンパ
ク質の位置で検量線を求めた。腫瘍細胞増殖抑制因子は
、溶出位置を活性で検出し、先の検量線より分子量を求
めた。結果を第１図に示す。分子量は５２，０００±５
，０００であった。
ルろ過法、ＬＫＢ社Ｕｌｔｒｏｇｅｌ ＡｃＡ ５４（
２，５ｃｍグＸ １１０ｃｍ）で測定した。用いた標準
タンパク質は、アルブミン（６６Ｋ）、オボアルブミン
（４５Ｋ）、ソイビーントリプシンインヒビター（２１
Ｋ）である。１５．６ｍｌ／ｈｒで溶出された各タンパ
ク質の位置で検量線を求めた。腫瘍細胞増殖抑制因子は
、溶出位置を活性で検出し、先の検量線より分子量を求
めた。結果を第１図に示す。分子量は５２，０００±５
，０００であった。
１Ｍ酢酸（ｐＨ２，５） 、１００ｍＭ酢酸バッファー
（ｐＨ４，０） 、１００ｍＭリン酸バッフｙ−（ｐＨ
７，０）および１００ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ
９，０）で１６時間透析し、活性の安定性をみた。１Ｍ
酢酸（ｐＨ２，５） 、１００ｍＭ酢酸バッファー（ｐ
Ｈ４，０）では完全に失活した。一方、１００ｍＭリン
酸バッファー、１００ｍＭトリス塩酸バッフｙ−（ｐＨ
９，０）では、活性の低下は認められなかった。
（ｐＨ４，０） 、１００ｍＭリン酸バッフｙ−（ｐＨ
７，０）および１００ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ
９，０）で１６時間透析し、活性の安定性をみた。１Ｍ
酢酸（ｐＨ２，５） 、１００ｍＭ酢酸バッファー（ｐ
Ｈ４，０）では完全に失活した。一方、１００ｍＭリン
酸バッファー、１００ｍＭトリス塩酸バッフｙ−（ｐＨ
９，０）では、活性の低下は認められなかった。
腫瘍細胞増殖抑制因子（タンパク質濃度８２μｇ／ｍｌ
）にＤＮａｓｅ （１ｍｇ／ｍｌ）、ＲＮａｓｅ （１
ｔａｇ／ｍｌ）、Ｔｒｙｐｓｉｎ （２，５＋ｓｇ／ｍ
ｌ）を３７℃１５ｈｒ作用させた。ＤＮａｓｅ、 Ｒ
Ｎａｓｅでは失活は認められなかったが、Ｔｒｙｐｓｉ
ｎにより失活した。
）にＤＮａｓｅ （１ｍｇ／ｍｌ）、ＲＮａｓｅ （１
ｔａｇ／ｍｌ）、Ｔｒｙｐｓｉｎ （２，５＋ｓｇ／ｍ
ｌ）を３７℃１５ｈｒ作用させた。ＤＮａｓｅ、 Ｒ
Ｎａｓｅでは失活は認められなかったが、Ｔｒｙｐｓｉ
ｎにより失活した。
実施例３
腫瘍細胞増殖抑制因子によるヒト肺癌細胞の増殖抑制：
実施例１で得られた腫瘍細胞増殖抑制因子を、ＰＣ−１
２細胞に添加し増殖させた。９６穴マイクロプレートに
一穴当り５Ｘ１０２個の細胞と、１０％新生仔牛血清を
含むＲＰＭ１１６４０ ５０μｇを添加した。さらに、
腫瘍細胞増殖抑制因子を含むサンプル５０μｇを添加し
た。７％０２．５％Ｃ０２，８８％Ｎ２の気相下で３７
℃６０間の培養を行なった。培養終了後、クリスタルバ
イオレットにより細胞を染色し、７０％エタノール／エ
チレングリコール／クエン酸混液を一穴当り１００μｇ
添加し、色素を抽出した。５９０ｎｍの救出を測定し、
増殖抑制因子無添加区と比較した。
２細胞に添加し増殖させた。９６穴マイクロプレートに
一穴当り５Ｘ１０２個の細胞と、１０％新生仔牛血清を
含むＲＰＭ１１６４０ ５０μｇを添加した。さらに、
腫瘍細胞増殖抑制因子を含むサンプル５０μｇを添加し
た。７％０２．５％Ｃ０２，８８％Ｎ２の気相下で３７
℃６０間の培養を行なった。培養終了後、クリスタルバ
イオレットにより細胞を染色し、７０％エタノール／エ
チレングリコール／クエン酸混液を一穴当り１００μｇ
添加し、色素を抽出した。５９０ｎｍの救出を測定し、
増殖抑制因子無添加区と比較した。
結果を第２図に示す。サンプルの希釈の影響を無添加区
を０％とした場合の増殖抑”利率で示した。
を０％とした場合の増殖抑”利率で示した。
実施例４
腫瘍細胞増殖抑制因子の各種細胞増殖に対する影響：
実施例１で得られた培養上清濃縮液（タンパク質濃度０
．４５ｍｇ／ｍｌ）を、ＨＭＶ−１［ヒトの黒色腫、坂
元吾偉他；癌の臨床１７．２７８−２８３ （１９７１
）］ 、ＭＫＮ−１（ヒトの胃癌、北条晴人；新潟医学
会雑誌旦、 ７３７ （１９７７）） 、およびＰＣ−
１２細胞に添加し増殖させた。方法は実施例３に従い被
検細胞の種類のみを変えた。結果を表１に示す。
．４５ｍｇ／ｍｌ）を、ＨＭＶ−１［ヒトの黒色腫、坂
元吾偉他；癌の臨床１７．２７８−２８３ （１９７１
）］ 、ＭＫＮ−１（ヒトの胃癌、北条晴人；新潟医学
会雑誌旦、 ７３７ （１９７７）） 、およびＰＣ−
１２細胞に添加し増殖させた。方法は実施例３に従い被
検細胞の種類のみを変えた。結果を表１に示す。
抑制は、希釈率のＩＣ５゜値で示した。
表１
［発明の効果］
本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子は、各種癌細胞の増殖を
抑制する。特にヒト肺癌細胞の増殖抑制作用が強い。従
って腫瘍、特に固形腫瘍の治療に効果が期待される。そ
の他、細胞の異常増殖による疾病、例えば慢性関節リュ
ーマチ、動脈硬化、イボなどの治療剤として有用である
。
抑制する。特にヒト肺癌細胞の増殖抑制作用が強い。従
って腫瘍、特に固形腫瘍の治療に効果が期待される。そ
の他、細胞の異常増殖による疾病、例えば慢性関節リュ
ーマチ、動脈硬化、イボなどの治療剤として有用である
。
第１図は、本発明の腫瘍細胞増殖抑制因子の分子量をゲ
ルろ過により測定した結果を示す。第２図は、本発明の
腫瘍細胞増殖抑制因子の増殖抑制活性を示すものである
。 特許出願人 東 し 株 式 会 社第１図 タンパク量 （μｇ／ｍｌ） 第Ｚ図
ルろ過により測定した結果を示す。第２図は、本発明の
腫瘍細胞増殖抑制因子の増殖抑制活性を示すものである
。 特許出願人 東 し 株 式 会 社第１図 タンパク量 （μｇ／ｍｌ） 第Ｚ図
Claims (1)
- （１）分子量が５２，０００±５，０００で、かつｐＨ
７．０〜９．０において安定な腫瘍細胞増殖抑制因子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63011487A JPH01187094A (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | 腫瘍細胞増殖抑制因子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63011487A JPH01187094A (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | 腫瘍細胞増殖抑制因子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01187094A true JPH01187094A (ja) | 1989-07-26 |
Family
ID=11779401
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63011487A Pending JPH01187094A (ja) | 1988-01-21 | 1988-01-21 | 腫瘍細胞増殖抑制因子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01187094A (ja) |
-
1988
- 1988-01-21 JP JP63011487A patent/JPH01187094A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5397770A (en) | Yeast-derived epidermal growth factor/urogastrone-like products | |
| JPS6030291B2 (ja) | 人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤 | |
| FI72143C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon. | |
| EP0212501B1 (en) | Therapeutic agent for treating hematopoietic diseases | |
| CA1182061A (en) | Superoxide dismutase, its production and use | |
| CN119751591B (zh) | 一种靶向增稳brd7抑瘤蛋白的多肽及其在制备治疗实体肿瘤药物中的应用 | |
| US20030124110A1 (en) | Use of modified lysozyme c to prepare medicinal compositions for the treatment of some serious diseases | |
| WO2024247651A1 (ja) | 細胞賦活化剤 | |
| Flippin et al. | Sulfapyridine and sulfathiazole therapy in pneumococcic pneumonia | |
| JPH01187094A (ja) | 腫瘍細胞増殖抑制因子 | |
| JPS58141785A (ja) | 抗腫瘍物質の製法 | |
| EP0516845B1 (en) | Novel megakaryocytic colony stimulating factor and process for its preparation | |
| EP0200090A2 (en) | Tissue-derived tumor growth inhibitors, methods of preparation and uses thereof | |
| CN117205188A (zh) | 维生素k4在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用 | |
| CN108949730A (zh) | 一种重组变构胶原酶的制备方法及其应用 | |
| JPH02288899A (ja) | 成熟肝実質細胞増殖因子（ｉ） | |
| JP3778366B2 (ja) | 細胞成長調節因子 | |
| US5563120A (en) | Cytokine preparation for immunotherapy | |
| WO1984002912A1 (fr) | Proteine a effet oncostatique, son procede de preparation et mediament oncostatique la contenant | |
| JPH04295500A (ja) | 新規な巨核球増幅因子とその製法 | |
| RU2799637C1 (ru) | Способ получения биологически активного пептидно-аминокислотного препарата на основе плазмы крови человека | |
| JPH029600B2 (ja) | ||
| JPH01175940A (ja) | 線維芽細胞増殖抑制因子 | |
| JPS63150300A (ja) | ＴＧＦ−β制御糖タンパク質 | |
| Coimbra et al. | Effect of urinary alkalinization on renal changes produced by cationic albumin |