JPS6030291B2 - 人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤 - Google Patents
人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤Info
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- JPS6030291B2 JPS6030291B2 JP53031999A JP3199978A JPS6030291B2 JP S6030291 B2 JPS6030291 B2 JP S6030291B2 JP 53031999 A JP53031999 A JP 53031999A JP 3199978 A JP3199978 A JP 3199978A JP S6030291 B2 JPS6030291 B2 JP S6030291B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、健康な人の尿から分離された人骨髄中の骨髄
細胞に作用してこの細胞の額粒球への分化増殖を促進す
る糖蛋白質（以下ＨＧＩ糖蛋白質と記載する）、ＨＧＩ
糖蛋白質の製造法及びＨＧＩ糖蛋白質の用途に関するも
のである。
細胞に作用してこの細胞の額粒球への分化増殖を促進す
る糖蛋白質（以下ＨＧＩ糖蛋白質と記載する）、ＨＧＩ
糖蛋白質の製造法及びＨＧＩ糖蛋白質の用途に関するも
のである。
通常、健康な成人の血液には１肌３当り５０００〜９０
００の白血球が存在するが、種々の疾病あるいは制癌剤
の投与等により白血球数が５０００以下に減少すことが
ある。
００の白血球が存在するが、種々の疾病あるいは制癌剤
の投与等により白血球数が５０００以下に減少すことが
ある。
このように白血球数が減少した症状を白血球減少症と呼
んでいる。そしてこれの治療のため従来グリチルリチン
、システィン・グリシンを有効成分とする薬剤、Ｑ−メ
ルカプトプロピオニルーグリシン及びアルカロイドの一
種であるセフアランチン等が使用されている。しかしな
がら、これらの薬剤は、効果が充分でないか又は副作用
がある等のため望ましくない。従って近年より有効なそ
して副作用の少ない白血球減少症治療剤の研究が行なわ
れている。これまで、白血球細胞の分化増殖を促進する
因子（ＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍ山ａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒ
．以下ＣＳＦと略記する）として知られている物質があ
る。ＣＳＦは、動物の骨髄細胞に作用して、この細胞の
顎粒球又はマクロフアージへの分化増殖を促進する物質
であり、骨髄細砲をｉｎｖＭｏで培養する時、これらが
分化と同時に増殖して細胞集塊（以下コロニーと記載す
る）を形成するための必須な因子である（ｌｃｈｉｋａ
ｗａ．Ｙ．；Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎ鱗 ｏｆ ｔｈｅ Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆＳｃｅｎｃｅ、５
６巻、４８８頁、１９６６年。
んでいる。そしてこれの治療のため従来グリチルリチン
、システィン・グリシンを有効成分とする薬剤、Ｑ−メ
ルカプトプロピオニルーグリシン及びアルカロイドの一
種であるセフアランチン等が使用されている。しかしな
がら、これらの薬剤は、効果が充分でないか又は副作用
がある等のため望ましくない。従って近年より有効なそ
して副作用の少ない白血球減少症治療剤の研究が行なわ
れている。これまで、白血球細胞の分化増殖を促進する
因子（ＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍ山ａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒ
．以下ＣＳＦと略記する）として知られている物質があ
る。ＣＳＦは、動物の骨髄細胞に作用して、この細胞の
顎粒球又はマクロフアージへの分化増殖を促進する物質
であり、骨髄細砲をｉｎｖＭｏで培養する時、これらが
分化と同時に増殖して細胞集塊（以下コロニーと記載す
る）を形成するための必須な因子である（ｌｃｈｉｋａ
ｗａ．Ｙ．；Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎ鱗 ｏｆ ｔｈｅ Ｎ
ａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆＳｃｅｎｃｅ、５
６巻、４８８頁、１９６６年。
Ｍｅｔｃａｌｆ、Ｄ．；Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈ
ｅｍａｔｏｌｏｇｙ、１巻、１８５頁、１９７３年）。
そしてこのＣＳＦには、骨髄細胞から二種の細胞、すな
わち額粒球及びマクロファージへの分化増殖促進作用を
有するところから、今日では、２種類の因子、すなわち
顎粒球誘導因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃ〆ｅｌｎｄｕｃｉｎ
ｇＦａｃｔｏｒ）とマクロフアージ誘導因子（Ｍａｃｍ
ｐｈａ鞍 ｌｎｄｕｃｉｎｇＦａｃｔｏｒ）とに区別さ
れることもあるが（Ｓｔａｎｌｅｙ、Ｅ．Ｒ．；Ｊｏｍ
ｎａｌ ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａＩＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ、１４窃萱、６３１頁、１９７母手）、一般には、
マウスの骨髄細胞を用いたｉｎｖｉｔｍの培養試験によ
って、これらの因子をまとめてＣＳＦとして測定されて
いる。マウス骨髄細胞を用いたｉｎｖｉｔｒｏの培養試
験によって従来報告されているＣＳＦ活性を有する物質
は、肺などの臓器、血清、尿などの体液成分、及び白血
球などの細胞、各種組織の細胞培養物から得られている
（Ｓｈｅｒｉｄａｎ、Ｊ．Ｗ；Ｊｏｕｍａｌ ｏｆＣｅ
ｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ鋤、７８巻、４５１頁、１９７１
年）。〆た、人の骨髄細胞こ対して作用を示すＣＳＦも
、同様に人の各種臓器抽出物や細胞組織の培養物及び血
清などの体液成分から分離されている（Ｍｅにａｌｆ、
Ｄ．＆ Ｍｏｏｒｅ、Ｍ．Ａ．Ｓ．；“Ｃｉ戊 Ｆ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｓのｈｐｏｓｊｍｍ１３Ｈａ
ｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ’’１５
７頁、ＥｌＳｅＶｉｅｒＥｘｃｅｒｐｔａＭｅｄｉｃａ
、Ｈｏｌｌａｎｄ、１９７３年）。しかし、これら諸臓
器、諸細胞及びそれらの培養液などから得られたＣＳＦ
は、いずれの源にも共通する単一な物質ではなく、例え
ば、人胎盤細胞培養液から得られたＣＳＦは分子量が３
００００であり（Ｂｕｒｇｅｓｓ、Ａ．Ｗ．；Ｂｌｏｏ
ｄ、４９巻、５７３頁、１９７７年）、人の血清中のも
のは分子量が４５０００であり（Ｃｈａｎ 、 Ｓ．日
．； Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ比ｅｍａＰ
ｌｏｇｙ、２の萱、３２９頁、１９７１年）、人の白血
球培養液では、分子量３５０００のものと分子量１３０
０以下のもの二種が同時に分離され（Ｐｒｉｃｅ、Ｇ．
Ｂ：Ｂｌｏｏｄ、４２巻、３４１頁、１９７３）、更に
それぞれのＣＳＦによって作用が異なり、分化増殖され
る細胞が顎粒球又はマクロフアージにのみ別個に作用す
るか、或いはこの両者に作用する。この様に、ＣＳＦの
起源によって、単離されるＣＳＦはそれぞれに異なった
物質であると考えられている（前記Ｍｅｔｃａｌｆ ＆
Ｍｏｏｒｅ、１９７杵）。人の尿中にも、ネズミの骨
髄細胞に対して作用を示すＣＳＦが存在することが知ら
れているが、（Ｓねｎｌｅｙ、Ｅ．Ｒ．；Ｆｅｄｅｒａ
ｔｉｏｎＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、３４巻、２２７２頁
、１９７５年及びＡｕｓｔｒａｌｉａｎＪｏｕｍａｌｏ
ｆＥｘｐｅｒｌｍｅｎｔａＩ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、４７巻、４６７頁
、１９６ｇ王）、このＣＳＦは、分子量が４５０００で
あり、ネズミの骨髄細胞に作用して、マクロフアージが
優勢なコロニーに分化増殖されるが、他方、人の骨髄細
胞に対しては、その作用が極めて弱く、マクロフアージ
及び顎粒球よりなるコロニーを形成せず、通常クラスタ
ーを形成するに止まると報告されている（人の骨髄細胞
の場合、コロニーとは細胞数が、４の固以上の集落をい
い・クラスターとは細胞数が３個以上４の固未満の集落
をいう）（Ｍｅｔｃａｌｆ、Ｄ．；Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａＩＨｅｍａ■】ｏｇｙ、２巻、１５刀頁、１９７４
王）。本発明者らは、人尿中のＣＳＦ活性物質について
研究を行なってきたが、前記従来のＣＳＦとは異なり、
分子量が約８５０００であり、マウスばかりでなく人の
骨髄細胞に作用して、顎粒球だけから成るコロニーを形
成させる全く新規なＨＧＩ糖蛋白質を見出し、人尿から
分離精製するに至った。更に、本発明者らは、この人尿
由来の人の骨髄細胞に作用して、顎粒球のみを分化増殖
せしめるＨＧＩ糖蛋白質を純粋に分離精製し、その物質
の特定を行ない、再現性ある製法による製造を可能とし
、その用途を見出し、本発明を完成した。以下本発明に
ついて詳細に説明する。
ｅｍａｔｏｌｏｇｙ、１巻、１８５頁、１９７３年）。
そしてこのＣＳＦには、骨髄細胞から二種の細胞、すな
わち額粒球及びマクロファージへの分化増殖促進作用を
有するところから、今日では、２種類の因子、すなわち
顎粒球誘導因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃ〆ｅｌｎｄｕｃｉｎ
ｇＦａｃｔｏｒ）とマクロフアージ誘導因子（Ｍａｃｍ
ｐｈａ鞍 ｌｎｄｕｃｉｎｇＦａｃｔｏｒ）とに区別さ
れることもあるが（Ｓｔａｎｌｅｙ、Ｅ．Ｒ．；Ｊｏｍ
ｎａｌ ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａＩＭｅｄｉｃｉ
ｎｅ、１４窃萱、６３１頁、１９７母手）、一般には、
マウスの骨髄細胞を用いたｉｎｖｉｔｍの培養試験によ
って、これらの因子をまとめてＣＳＦとして測定されて
いる。マウス骨髄細胞を用いたｉｎｖｉｔｒｏの培養試
験によって従来報告されているＣＳＦ活性を有する物質
は、肺などの臓器、血清、尿などの体液成分、及び白血
球などの細胞、各種組織の細胞培養物から得られている
（Ｓｈｅｒｉｄａｎ、Ｊ．Ｗ；Ｊｏｕｍａｌ ｏｆＣｅ
ｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ鋤、７８巻、４５１頁、１９７１
年）。〆た、人の骨髄細胞こ対して作用を示すＣＳＦも
、同様に人の各種臓器抽出物や細胞組織の培養物及び血
清などの体液成分から分離されている（Ｍｅにａｌｆ、
Ｄ．＆ Ｍｏｏｒｅ、Ｍ．Ａ．Ｓ．；“Ｃｉ戊 Ｆ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｓのｈｐｏｓｊｍｍ１３Ｈａ
ｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ’’１５
７頁、ＥｌＳｅＶｉｅｒＥｘｃｅｒｐｔａＭｅｄｉｃａ
、Ｈｏｌｌａｎｄ、１９７３年）。しかし、これら諸臓
器、諸細胞及びそれらの培養液などから得られたＣＳＦ
は、いずれの源にも共通する単一な物質ではなく、例え
ば、人胎盤細胞培養液から得られたＣＳＦは分子量が３
００００であり（Ｂｕｒｇｅｓｓ、Ａ．Ｗ．；Ｂｌｏｏ
ｄ、４９巻、５７３頁、１９７７年）、人の血清中のも
のは分子量が４５０００であり（Ｃｈａｎ 、 Ｓ．日
．； Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ比ｅｍａＰ
ｌｏｇｙ、２の萱、３２９頁、１９７１年）、人の白血
球培養液では、分子量３５０００のものと分子量１３０
０以下のもの二種が同時に分離され（Ｐｒｉｃｅ、Ｇ．
Ｂ：Ｂｌｏｏｄ、４２巻、３４１頁、１９７３）、更に
それぞれのＣＳＦによって作用が異なり、分化増殖され
る細胞が顎粒球又はマクロフアージにのみ別個に作用す
るか、或いはこの両者に作用する。この様に、ＣＳＦの
起源によって、単離されるＣＳＦはそれぞれに異なった
物質であると考えられている（前記Ｍｅｔｃａｌｆ ＆
Ｍｏｏｒｅ、１９７杵）。人の尿中にも、ネズミの骨
髄細胞に対して作用を示すＣＳＦが存在することが知ら
れているが、（Ｓねｎｌｅｙ、Ｅ．Ｒ．；Ｆｅｄｅｒａ
ｔｉｏｎＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、３４巻、２２７２頁
、１９７５年及びＡｕｓｔｒａｌｉａｎＪｏｕｍａｌｏ
ｆＥｘｐｅｒｌｍｅｎｔａＩ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、４７巻、４６７頁
、１９６ｇ王）、このＣＳＦは、分子量が４５０００で
あり、ネズミの骨髄細胞に作用して、マクロフアージが
優勢なコロニーに分化増殖されるが、他方、人の骨髄細
胞に対しては、その作用が極めて弱く、マクロフアージ
及び顎粒球よりなるコロニーを形成せず、通常クラスタ
ーを形成するに止まると報告されている（人の骨髄細胞
の場合、コロニーとは細胞数が、４の固以上の集落をい
い・クラスターとは細胞数が３個以上４の固未満の集落
をいう）（Ｍｅｔｃａｌｆ、Ｄ．；Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａＩＨｅｍａ■】ｏｇｙ、２巻、１５刀頁、１９７４
王）。本発明者らは、人尿中のＣＳＦ活性物質について
研究を行なってきたが、前記従来のＣＳＦとは異なり、
分子量が約８５０００であり、マウスばかりでなく人の
骨髄細胞に作用して、顎粒球だけから成るコロニーを形
成させる全く新規なＨＧＩ糖蛋白質を見出し、人尿から
分離精製するに至った。更に、本発明者らは、この人尿
由来の人の骨髄細胞に作用して、顎粒球のみを分化増殖
せしめるＨＧＩ糖蛋白質を純粋に分離精製し、その物質
の特定を行ない、再現性ある製法による製造を可能とし
、その用途を見出し、本発明を完成した。以下本発明に
ついて詳細に説明する。
本発明のＨＯＩ糖蛋白質の曲型的な製造法は、次のとお
りである。
りである。
健康な人から集めた新鮮な尿に希薄な酸又はアルカリの
水溶液を加え、ｐＨを６〜９望まし〈は７〜８に調整し
、次いで遠心分離して尿中に含まれている不溶物を除去
する。ここに得られる尿の上清をケイ素を含有する吸着
剤、例えばシリカゲル、シリカゲルーケィ酸マグネシウ
ム、珪藻±、シリカゲルガラスベントナイトなどに接触
させ、吸着成分を熔出させる。溶出は好ましくはＰＨ９
以上のアルカリ水溶液で行なう。溶出に用いるアルカリ
水溶液は、特に限定されるものではないが、好ましくは
水酸化アンモニウム、水溶化ナトリウムなどの０．３〜
１．８Ｍ濃度の水溶液を使用する。この様にして得られ
た溶出液の斑を７一８に調整し中性塩例えば硫酸アンモ
ニウムを７％飽和に加えて有効物質を塩析しＨＧＩ糖蛋
白質を含む粗分画を得る。次にこの粗分画を少量のアル
カリ水溶液に溶解し、分子分別フィルターで分子量１０
０００以下の低分子成分を除去し腸イオン交換体（例え
ば、カルボキシメチル交換基結合デキストラン、カルボ
キシメチルセルロース、ホスフオセルロース）と接触さ
せ、溶液中に含まれている不純物を吸着せしめ除去する
。
水溶液を加え、ｐＨを６〜９望まし〈は７〜８に調整し
、次いで遠心分離して尿中に含まれている不溶物を除去
する。ここに得られる尿の上清をケイ素を含有する吸着
剤、例えばシリカゲル、シリカゲルーケィ酸マグネシウ
ム、珪藻±、シリカゲルガラスベントナイトなどに接触
させ、吸着成分を熔出させる。溶出は好ましくはＰＨ９
以上のアルカリ水溶液で行なう。溶出に用いるアルカリ
水溶液は、特に限定されるものではないが、好ましくは
水酸化アンモニウム、水溶化ナトリウムなどの０．３〜
１．８Ｍ濃度の水溶液を使用する。この様にして得られ
た溶出液の斑を７一８に調整し中性塩例えば硫酸アンモ
ニウムを７％飽和に加えて有効物質を塩析しＨＧＩ糖蛋
白質を含む粗分画を得る。次にこの粗分画を少量のアル
カリ水溶液に溶解し、分子分別フィルターで分子量１０
０００以下の低分子成分を除去し腸イオン交換体（例え
ば、カルボキシメチル交換基結合デキストラン、カルボ
キシメチルセルロース、ホスフオセルロース）と接触さ
せ、溶液中に含まれている不純物を吸着せしめ除去する
。
接触はほぼ中性に於いて行なわれ、ＨＧＩ糖蛋白質粗分
画及びイオン交換体は、ｐＨ６−８に、好ましくは０．
０１−０．１９Ｍの無機塩緩衝液によって調整される。
この際ＨＧＩ糖蛋白質の大部分は通過する。これを濃縮
してからｐＨ６〜８の希薄な緩衝液と平衡させ、平衡化
した陰イオン交換体（例えばＤＥＡＥセルロース）と接
触させ、ＨＧＩ糖蛋白質を吸着させ、０．１〜０．３Ｍ
の無機塩例えば塩化ナトリウム溶液を用いて塩濃度を変
化させ、所謂直線濃度勾配溶出法により熔出させる。こ
の際ＨＧＩ糖蛋白質は０．１Ｍ以上の塩濃度で溶出する
が、完全な分離は困難である。この０．１〜０．３Ｍの
塩濃度による溶出分画を集め、要すれば脱塩及び濃縮す
る。尚、この塩濃度を変化させて溶出させる工程の前に
、ＨＧＩ糖蛋白質を陰イオン交換体に吸着せしめ、０．
１〜０．３Ｍの塩濃度の水溶液で溶出させ、精製しても
よい。
画及びイオン交換体は、ｐＨ６−８に、好ましくは０．
０１−０．１９Ｍの無機塩緩衝液によって調整される。
この際ＨＧＩ糖蛋白質の大部分は通過する。これを濃縮
してからｐＨ６〜８の希薄な緩衝液と平衡させ、平衡化
した陰イオン交換体（例えばＤＥＡＥセルロース）と接
触させ、ＨＧＩ糖蛋白質を吸着させ、０．１〜０．３Ｍ
の無機塩例えば塩化ナトリウム溶液を用いて塩濃度を変
化させ、所謂直線濃度勾配溶出法により熔出させる。こ
の際ＨＧＩ糖蛋白質は０．１Ｍ以上の塩濃度で溶出する
が、完全な分離は困難である。この０．１〜０．３Ｍの
塩濃度による溶出分画を集め、要すれば脱塩及び濃縮す
る。尚、この塩濃度を変化させて溶出させる工程の前に
、ＨＧＩ糖蛋白質を陰イオン交換体に吸着せしめ、０．
１〜０．３Ｍの塩濃度の水溶液で溶出させ、精製しても
よい。
更に前記分画を分子節クロマトグラフィーの目的で、１
０〜２０泌／夕の水吸収度を有する高架橋度重合ゲル、
例えばセフアデックスＧ−１５０バイオゲルＰ−１００
を充填したカラムに通液して分画中の有効物質を０．０
５〜０．１モルの塩類緩衝液にて展開せしめ、相対溶出
液量が１．１１〜１．６０、望ましくは１．１１〜１．
４５である分画を分別し、脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行
なう。
０〜２０泌／夕の水吸収度を有する高架橋度重合ゲル、
例えばセフアデックスＧ−１５０バイオゲルＰ−１００
を充填したカラムに通液して分画中の有効物質を０．０
５〜０．１モルの塩類緩衝液にて展開せしめ、相対溶出
液量が１．１１〜１．６０、望ましくは１．１１〜１．
４５である分画を分別し、脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行
なう。
このようにして得られたＨＧＩ糖蛋白質を含有する粗製
物を医薬として使用することができる。
物を医薬として使用することができる。
相対溶出液量とはＶｅ／Ｖｏの比で表わされる数値であ
る（Ｖｅはカラム内の物質を溶出するに必要な溶媒の液
量を示し、Ｖｏはカラム内のゲル粒子外部の溶媒の液量
を示す。）上記粗製物を更に精製するには、粗製物を、
１．０〜２．０Ｍ塩を含有する希薄な緩衝液例えばリン
酸塩緩衝液ｐＨ６．０〜８．止好ましくはｐＨ６．０〜
７．０に溶解させ、あらかじめ該緩衝液で平衡化させた
健親和性吸着体例えばコンカナバリンＡ−セフアロース
蟹（ファインケミカルラボラトリ発売）にＨＧＩ糖蛋白
質を吸着せしめ、ついで２０ｍＭから１００ｍＭの糖類
、例えば〇ーメチル−Ｄ−グルコシドなどを含む１．０
〜２．ｍＭ塩添加緩衝液ｐＨ６．０〜８．０、好ましく
はｐＨ６．０〜７．０で溶出させ、ＨＧＩ糖蛋白質分画
を集め、必要により脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行なう。
る（Ｖｅはカラム内の物質を溶出するに必要な溶媒の液
量を示し、Ｖｏはカラム内のゲル粒子外部の溶媒の液量
を示す。）上記粗製物を更に精製するには、粗製物を、
１．０〜２．０Ｍ塩を含有する希薄な緩衝液例えばリン
酸塩緩衝液ｐＨ６．０〜８．止好ましくはｐＨ６．０〜
７．０に溶解させ、あらかじめ該緩衝液で平衡化させた
健親和性吸着体例えばコンカナバリンＡ−セフアロース
蟹（ファインケミカルラボラトリ発売）にＨＧＩ糖蛋白
質を吸着せしめ、ついで２０ｍＭから１００ｍＭの糖類
、例えば〇ーメチル−Ｄ−グルコシドなどを含む１．０
〜２．ｍＭ塩添加緩衝液ｐＨ６．０〜８．０、好ましく
はｐＨ６．０〜７．０で溶出させ、ＨＧＩ糖蛋白質分画
を集め、必要により脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行なう。
更に、ここに得られた分画を亀気泳動的に純化する目的
で、支持体として例えばアクリルアミドゲル、寒天ゲル
ｐＨ７．０〜９．０を用いる調製用ゾーン電気泳動にか
け、冷却下で希薄塩溶液により支持体からＨＧＩ糖蛋白
質を回収し、脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行なう。
で、支持体として例えばアクリルアミドゲル、寒天ゲル
ｐＨ７．０〜９．０を用いる調製用ゾーン電気泳動にか
け、冷却下で希薄塩溶液により支持体からＨＧＩ糖蛋白
質を回収し、脱塩し濃縮又は凍結乾燥を行なう。
本発明の製造方法によれば、人尿からウロキナーゼ、カ
リクレイン、リゾチーム、トリプシン．ィンヒビター等
の物質を製造工程の途中において回収し得るとともにＨ
ＧＩ糖蛋白質をも回収することができる。
リクレイン、リゾチーム、トリプシン．ィンヒビター等
の物質を製造工程の途中において回収し得るとともにＨ
ＧＩ糖蛋白質をも回収することができる。
このようにして得られたＨＧＩ糖蛋白質は、白色乃至は
かすかに褐色を呈し、無味、無臭であり、僅かに吸湿性
を示す粉末であって、次に記載する理学的特徴を有する
。
かすかに褐色を呈し、無味、無臭であり、僅かに吸湿性
を示す粉末であって、次に記載する理学的特徴を有する
。
尚、次の理化学的特徴を決定するための試料には実施例
１のＮｏ．６を用いた。
１のＮｏ．６を用いた。
【１）分子量
本発明のＨＧＩ糖蛋白質をドデシル硫酸ナトリウム・ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動法により、分子量を測定
したところ、約８５０００であった。
リアクリルアミドゲル電気泳動法により、分子量を測定
したところ、約８５０００であった。
又、セフアデックスＧ−１５０によるゲル炉過の結果で
は、ＨＧＩ糖蛋白質の分子量は７５０００から９０００
０であった。従ってＨＧＩ糖蛋白質の分子量を７５００
０〜９００００とすることが最も信頼度の高い範囲と思
われる。■ 溶解性 ＨＧＩ糖蛋白質の各種溶剤に対する溶解性は、第１表の
通りである。
は、ＨＧＩ糖蛋白質の分子量は７５０００から９０００
０であった。従ってＨＧＩ糖蛋白質の分子量を７５００
０〜９００００とすることが最も信頼度の高い範囲と思
われる。■ 溶解性 ＨＧＩ糖蛋白質の各種溶剤に対する溶解性は、第１表の
通りである。
第１表
この他、希薄な塩溶液、例えばリン酸塩溶液、トリスァ
ミノメタン溶液に容易に溶解し、希薄塩類溶液のｐＨＩ
〜１２の範囲で溶解する。
ミノメタン溶液に容易に溶解し、希薄塩類溶液のｐＨＩ
〜１２の範囲で溶解する。
糊 ｐＨＨＧＩ糖蛋白質１％水溶液のｐＨ‘ま５．０〜
６．０であり、酸性を示す。
６．０であり、酸性を示す。
（４｝ 比旋光度
ＨＧＩ糖蛋白質の０．２５％水溶液を用いて２０ｑｏで
旋光度を測定し、比旋光度〔Ｑ〕色ｏを求めた結果、０
±４０の範囲であった。
旋光度を測定し、比旋光度〔Ｑ〕色ｏを求めた結果、０
±４０の範囲であった。
｛５｝ 赤外線吸収スペクトル
ＨＧＩ糖蛋白質のＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペク
トルは、第１図に示す如くである。
トルは、第１図に示す如くである。
ＨＧＩ糖蛋白質は第２表に示すように特徴的な吸収値を
有する。
有する。
第 ２表
｛６ー 等電点
ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動法（ｐｏｌ協ｃ
ｒｙｌａｍｉｄｅ 鞍ｌ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆ
ｏｒｃｕｓｓｉｎｇ）によりＨＧＩ糖蛋白質の等電点を
測定した結果、等雷点はｐＨ４．７±０．２であった。
ｒｙｌａｍｉｄｅ 鞍ｌ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆ
ｏｒｃｕｓｓｉｎｇ）によりＨＧＩ糖蛋白質の等電点を
測定した結果、等雷点はｐＨ４．７±０．２であった。
‘７〕呈色反応
ＨＧＩ糖蛋白質を水に溶解したものについて呈色反応を
試験した結果を第３表に示す。
試験した結果を第３表に示す。
第 ３ 表
｛８｝ 温度安定性
ＨＧＩ糖蛋白質を１％の濃度で水に溶解し、６０℃士０
．５ｑ０３０分間加熱したところ、そのＣＳＦ活性は完
全に失なわれた。
．５ｑ０３０分間加熱したところ、そのＣＳＦ活性は完
全に失なわれた。
【９’ 蛋白質部分の構成アミノ酸
ＨＧＩ糖蛋白質を常法により加水分解し「 その蛋白質
部分のアミノ酸組成をアミノ酸自動分析装置を用いて分
析した。
部分のアミノ酸組成をアミノ酸自動分析装置を用いて分
析した。
その結果を第４表に示す。第 ４ 表
第４表より、ＨＧＩ糖蛋白質の蛋白質部分は１７種のア
ミノ酸から構成され、酸性アミノ酸と中性アミノ酸が多
量に存在し、塩基性アミノ酸は極めて少量である。
ミノ酸から構成され、酸性アミノ酸と中性アミノ酸が多
量に存在し、塩基性アミノ酸は極めて少量である。
また、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、グルタミ
ン酸、グリシン、アラニン、バリンならびにロィシンの
直鎖状アミノ酸が全アミノ酸の７０％以上を占めること
も特徴である。働 電気泳動 いｅｍ血の方法（Ｎａｔｍｅ、２２７巻、６８０頁、１
９７位王）に従い、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアク
リルアミドゲルを用いた雷気泳動により、相対移動度０
．２５の位置に単一バンドを示す。
ン酸、グリシン、アラニン、バリンならびにロィシンの
直鎖状アミノ酸が全アミノ酸の７０％以上を占めること
も特徴である。働 電気泳動 いｅｍ血の方法（Ｎａｔｍｅ、２２７巻、６８０頁、１
９７位王）に従い、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアク
リルアミドゲルを用いた雷気泳動により、相対移動度０
．２５の位置に単一バンドを示す。
ＨＧＩ糠蛋白質、トリプシンインヒビタ一（分子量２１
５００）、オボアルブミン（分子量４３０００）、人血
清アルブミン拳量体（分子量６５０００）及び人血清ア
ルブミン２量体（分子量１３００００）を同時に泳動さ
せ、これらの分子量既知の物質の相対移動度とＨＧＩ糖
蛋白質のそれとからＨＧＩ糖蛋白質の分子量を求めた結
果約８５０００であった（第２図）。第２図においてａ
，ｂ，ｃ，ｄはそれぞれトリプシソインヒビタ−、オボ
アルブミン、人血清アルブミン単量体及び人血清アルブ
ミン２量体を示し、矢印は、ＨＧＩ糖蛋白質を示す。（
１１）紫外線吸収 ＨＧＩ糖蛋白質の０．１％水溶液を１肌のセルで測定し
た紫外線吸収スペクトルは第３図に示すとおりであり、
２８皿仇に極大吸収を示し、２５仇肌以下の波長で末端
吸収を示した。
５００）、オボアルブミン（分子量４３０００）、人血
清アルブミン拳量体（分子量６５０００）及び人血清ア
ルブミン２量体（分子量１３００００）を同時に泳動さ
せ、これらの分子量既知の物質の相対移動度とＨＧＩ糖
蛋白質のそれとからＨＧＩ糖蛋白質の分子量を求めた結
果約８５０００であった（第２図）。第２図においてａ
，ｂ，ｃ，ｄはそれぞれトリプシソインヒビタ−、オボ
アルブミン、人血清アルブミン単量体及び人血清アルブ
ミン２量体を示し、矢印は、ＨＧＩ糖蛋白質を示す。（
１１）紫外線吸収 ＨＧＩ糖蛋白質の０．１％水溶液を１肌のセルで測定し
た紫外線吸収スペクトルは第３図に示すとおりであり、
２８皿仇に極大吸収を示し、２５仇肌以下の波長で末端
吸収を示した。
又ＨＧＩ糖蛋白質の２胸川もこおける吸光値（Ｅ協）は
３．８であった。（１２）糖質部分の構成糖 中性糖をフェノール硫酸法、シアル酸を Ｗａｎｅｎのチオバルビッール酸法（ＪｏｍＭ１ｏｆＢ
ｉｏｌｏｇｉＣａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２３４巻、
１９７１頁、１９５９年）、アミ ノ糖をＥｌｓｏｎ−
Ｍｏｒｇａｎ法（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａＩ ＪｏｍＭ１
、２７巻、１８２４頁、１９３３年）により定量した。
３．８であった。（１２）糖質部分の構成糖 中性糖をフェノール硫酸法、シアル酸を Ｗａｎｅｎのチオバルビッール酸法（ＪｏｍＭ１ｏｆＢ
ｉｏｌｏｇｉＣａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２３４巻、
１９７１頁、１９５９年）、アミ ノ糖をＥｌｓｏｎ−
Ｍｏｒｇａｎ法（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａＩ ＪｏｍＭ１
、２７巻、１８２４頁、１９３３年）により定量した。
そして中性糖の量は、グルコース換算量として表わした
。その結果、中性糖１０．０〜１３．０％、シアル酸３
．０〜７．０％、アミノ糖１．０％以下であり、合計の
糖質量は、１３．０〜２０．０％であった。（１３）蛋
白質と糖質の構成比率 蛋白質をセミミクロケールダール法により定量した結果
７５〜８５％であり、前記（１２）記載のように糠質の
量は１３．０〜２０．０％である。
。その結果、中性糖１０．０〜１３．０％、シアル酸３
．０〜７．０％、アミノ糖１．０％以下であり、合計の
糖質量は、１３．０〜２０．０％であった。（１３）蛋
白質と糖質の構成比率 蛋白質をセミミクロケールダール法により定量した結果
７５〜８５％であり、前記（１２）記載のように糠質の
量は１３．０〜２０．０％である。
（１心 元素分析元素分析の結果は次のとおりであった
。
。
炭素；４２．３〜４７．３％
水素；５．７〜７．８％
窒素：９．６〜１４．３％
酸素；３４．４〜３９．４％
イオウ；０．２％以下
以上詳記した理化学的特性を有するＨＧＩ糖蛋白質は、
後述する試験１の結果から明らかなように人類粒球の分
化増殖を促進する作用を有し「試験４の結果から明らか
なように急性毒性も認められず、更に試験３の結果から
明らかなように白血球減少症袷療剤として利用し得る。
後述する試験１の結果から明らかなように人類粒球の分
化増殖を促進する作用を有し「試験４の結果から明らか
なように急性毒性も認められず、更に試験３の結果から
明らかなように白血球減少症袷療剤として利用し得る。
前記の製造法により人尿から製造されたＨＧＩ糖蛋白質
は、バイアル連中で無菌的に凍結乾燥され、粉末状で密
封される。凍結乾燥に先きだちＨＧＩ糖蛋白質の安定剤
としての人血清アルブミン及び溶解補助剤としてのアミ
ノ酸又は糠類を含有する水溶液を加え、無菌炉過し、の
ち無菌的に凍結乾燥してもよい。そして使用時、バィア
ル嬢を開封し、滅菌生理食塩水、滅菌水、無菌の注射用
等張液等を加えて溶解し、静脈注射、筋注射、皮下注射
により白血球減少症患者に投与される。有効投与量は後
述する試験１及び２の結果から、１日体重ｌｋ９当りＨ
ＯＩ糖蛋白として０．７５肌９以上、望ましくは０．７
５〜２．２４の９である。尚工業的製剤則ち実施例１の
Ｎｏ．幻皮び５のＨＧＩ糖蛋白質を含む粗製物も医薬と
して使用することができる。次にＨＧＩ糖蛋白質の額粒
球の分化増殖促進効果について記載する。
は、バイアル連中で無菌的に凍結乾燥され、粉末状で密
封される。凍結乾燥に先きだちＨＧＩ糖蛋白質の安定剤
としての人血清アルブミン及び溶解補助剤としてのアミ
ノ酸又は糠類を含有する水溶液を加え、無菌炉過し、の
ち無菌的に凍結乾燥してもよい。そして使用時、バィア
ル嬢を開封し、滅菌生理食塩水、滅菌水、無菌の注射用
等張液等を加えて溶解し、静脈注射、筋注射、皮下注射
により白血球減少症患者に投与される。有効投与量は後
述する試験１及び２の結果から、１日体重ｌｋ９当りＨ
ＯＩ糖蛋白として０．７５肌９以上、望ましくは０．７
５〜２．２４の９である。尚工業的製剤則ち実施例１の
Ｎｏ．幻皮び５のＨＧＩ糖蛋白質を含む粗製物も医薬と
して使用することができる。次にＨＧＩ糖蛋白質の額粒
球の分化増殖促進効果について記載する。
〔試験１〕
ｉｎＶｉｔｒｏにおけるマウス及び人類粒球の分化増殖
促進効果直径３５側のプラスチック培養皿に２０％牛胎
児血清、０．０５ ０．１、０．１ふ ０．２仏夕の割
合のＨＧＩ糖蛋白質（実施例１のＮｏ．６）、０．３％
寒天及び７．５×１び個のマウス骨髄細胞又は２５×１
び個の鉄欠乏性貧血患者の骨髄細胞を含むＭｃＣｏｙｓ
弘培地１の‘を入れ、７日から９日間５％Ｃ０２を含む
湿潤した空気中で培養した。
促進効果直径３５側のプラスチック培養皿に２０％牛胎
児血清、０．０５ ０．１、０．１ふ ０．２仏夕の割
合のＨＧＩ糖蛋白質（実施例１のＮｏ．６）、０．３％
寒天及び７．５×１び個のマウス骨髄細胞又は２５×１
び個の鉄欠乏性貧血患者の骨髄細胞を含むＭｃＣｏｙｓ
弘培地１の‘を入れ、７日から９日間５％Ｃ０２を含む
湿潤した空気中で培養した。
この試験において１培養皿に加える細胞数を人及びマウ
スでそれぞれ７．５×１ぴ、２５×１ぴ個としたのは、
マウスでは幹細胞が多いことによる。培養後、倒立顕微
鏡下で検鏡し、マウスの場合は５の固以上、人の場合は
４０固以上の細胞集塊をコロニー数とした。又、コロニ
ーをへマトクリツト管でとり出し、スライドグラス上で
０．６％酢酸オルセィンで染色して、細胞の種類を細胞
核の形態から同定した。
スでそれぞれ７．５×１ぴ、２５×１ぴ個としたのは、
マウスでは幹細胞が多いことによる。培養後、倒立顕微
鏡下で検鏡し、マウスの場合は５の固以上、人の場合は
４０固以上の細胞集塊をコロニー数とした。又、コロニ
ーをへマトクリツト管でとり出し、スライドグラス上で
０．６％酢酸オルセィンで染色して、細胞の種類を細胞
核の形態から同定した。
その結果を第４図に示す。第４図はＨＧＩ糖蛋白質添加
量と形成されたコロニ−数との関係を示し、０−０はマ
ウス骨髄細胞●−●は人骨髄細胞の培養結果を示す。
量と形成されたコロニ−数との関係を示し、０−０はマ
ウス骨髄細胞●−●は人骨髄細胞の培養結果を示す。
第４図から明らかな如く、ＨＧＩ糖蛋白質はマウス及び
人の骨髄細胞の分化増殖を促進し、コロニーを形成する
ことが認められた。
人の骨髄細胞の分化増殖を促進し、コロニーを形成する
ことが認められた。
そしてコロニーの数は培地に添加するＨＧＩ糖蛋白質の
量に比例して増加することが判明した。又、このコロニ
ー中の細胞を酢酸オルセィン染色で観察したところ、成
熟した額粒球であることが認められた。
量に比例して増加することが判明した。又、このコロニ
ー中の細胞を酢酸オルセィン染色で観察したところ、成
熟した額粒球であることが認められた。
この様にＨＧＩ糖蛋白質は、マウス及び人の骨髄細胞に
作用して額粒球のコロニーを形成させること、コロニー
の数は添加する量に比例すること及びマウスと人との骨
髄細胞のコロニーの形成には相関のあることから、以下
の実験では、すべてマウスの骨髄細胞を用いて行なった
。〔試験２〕 ｌｎｖｌｖｏにおける額粒球の分化増殖促進効果Ｃ５７
ＢＬ系雄マウス（平均体重２０夕）６０匹を無作為に１
０匹ずつ１群とした６群に分けた。
作用して額粒球のコロニーを形成させること、コロニー
の数は添加する量に比例すること及びマウスと人との骨
髄細胞のコロニーの形成には相関のあることから、以下
の実験では、すべてマウスの骨髄細胞を用いて行なった
。〔試験２〕 ｌｎｖｌｖｏにおける額粒球の分化増殖促進効果Ｃ５７
ＢＬ系雄マウス（平均体重２０夕）６０匹を無作為に１
０匹ずつ１群とした６群に分けた。
この中の１群を対照群とし、人血清アルブミン０．０４
雌を滅菌生理食塩水０．２の上に溶解した溶液を１匹に
つき１日１回、連続して３日間皮下注射により投与した
。残り５群を実験群とし、ＨＧＩ糖蛋白質（実施例１の
Ｎｏ．６）０．００５Ｍ、０．０１の９、０．０２の９
、０．０３の９及び０．０４の９をそれぞれ滅菌生理食
塩水０．２の‘に溶解した溶液を、１匹につき１日１回
連続３日間皮下に投与を行ない、各々第１、第２、第３
、第４、第５群とした。投与前および投与後２、４、６
、８及び１０日目に、マウス尾静脈より採血を行ない、
常法により１％ゲンチアナ紫色素溶液で白血球を染色し
、血球計算盤により白血球数を算出した。
雌を滅菌生理食塩水０．２の上に溶解した溶液を１匹に
つき１日１回、連続して３日間皮下注射により投与した
。残り５群を実験群とし、ＨＧＩ糖蛋白質（実施例１の
Ｎｏ．６）０．００５Ｍ、０．０１の９、０．０２の９
、０．０３の９及び０．０４の９をそれぞれ滅菌生理食
塩水０．２の‘に溶解した溶液を、１匹につき１日１回
連続３日間皮下に投与を行ない、各々第１、第２、第３
、第４、第５群とした。投与前および投与後２、４、６
、８及び１０日目に、マウス尾静脈より採血を行ない、
常法により１％ゲンチアナ紫色素溶液で白血球を染色し
、血球計算盤により白血球数を算出した。
更に血液の塗抹標本を作製し、ライト−ギムザ染色法に
て染色した後、顕微鏡下で白血球中の顎粒球の割合を測
定した。
て染色した後、顕微鏡下で白血球中の顎粒球の割合を測
定した。
各群の額粒球数は次の計算式により算出した。
１側３当りの白血球数×白血球中の顎粒球の割合＝１側
３ 中の顎粒球数。
３ 中の顎粒球数。
その結果を第５表に示す。
第５表
（貧者嬉笠均裏途豪慶喜宗事Ｊであ）
第５表から１匹当り０．０１〜０．０４の９のＨＧＩ糖
蛋白質を投与した第２〜５群において「投与２日目から
顎粒球が増加し、投与６日目には、顎粒球数が対照群の
平均３８０に対して約３〜６倍に増加することが認めら
れた。
蛋白質を投与した第２〜５群において「投与２日目から
顎粒球が増加し、投与６日目には、顎粒球数が対照群の
平均３８０に対して約３〜６倍に増加することが認めら
れた。
これらの群において、顎粒球の増加は６日目を最高とし
、１０日目（投与終了後７日目）には、投与前の値とほ
ぼ等しくなることを確認した。又ＨＧＩ糖蛋白質の投与
量が１日、１匹当り０．０４の９の場合は、投与量の増
加による顎粒球の顕著な増加が認められなかった。この
結果から、平均体重２０夕のマウスに対してＨＧＩ糖蛋
白質を１日、１匹当り０．０１の９以上、望ましくは０
．０１の９〜０．０３の９投与すれば、充分に血中の顎
粒球を増加させ得ることが判明した。
、１０日目（投与終了後７日目）には、投与前の値とほ
ぼ等しくなることを確認した。又ＨＧＩ糖蛋白質の投与
量が１日、１匹当り０．０４の９の場合は、投与量の増
加による顎粒球の顕著な増加が認められなかった。この
結果から、平均体重２０夕のマウスに対してＨＧＩ糖蛋
白質を１日、１匹当り０．０１の９以上、望ましくは０
．０１の９〜０．０３の９投与すれば、充分に血中の顎
粒球を増加させ得ることが判明した。
しかしながら試験１のｉｎＶｉｔｍにおけるマウス骨髄
細胞の顎粒球分化増殖促進効果の結果は人骨髄細胞のそ
れよりも平均約１．３音高いので、人に対する有効投与
量は、試験２のマウスにおけるｉｎｖｌｖｏの試験結果
から得られた量の約１．５倍の量と推定され、１日体重
ｌｋ９当り０．７５の９以上、望ましくは、０．７５〜
２．２４の９である。
細胞の顎粒球分化増殖促進効果の結果は人骨髄細胞のそ
れよりも平均約１．３音高いので、人に対する有効投与
量は、試験２のマウスにおけるｉｎｖｌｖｏの試験結果
から得られた量の約１．５倍の量と推定され、１日体重
ｌｋ９当り０．７５の９以上、望ましくは、０．７５〜
２．２４の９である。
〔試験３〕
制癌剤投与による白血球減少に対するＨＧＩ糖蛋白質の
効果４〜５週令のＣ５７ＢＬ系雄マウス３０匹を無作為
に１０匹ずつを１群とした３群に分けた。
効果４〜５週令のＣ５７ＢＬ系雄マウス３０匹を無作為
に１０匹ずつを１群とした３群に分けた。
この中の１群を対照君羊とし、１四り３０の９／体重１
ｋｇ（点ＬＤ５。に相当する）の割合でサイトシンアラ
ビノシドを滅菌生理食塩水０．２の【に溶解した溶液を
１日１回、連続して１４日間腹腔内注射により投与した
。更に１日１回１匹当り０．２泌の滅菌生理食塩水を皮
下注射により連続して１４日間投与した。他の１群（Ｈ
ＧＩ糖蛋白質投与群）には対照群と同様にサィトシンア
ラビノシドを投与し、更に実施例１により製造したＨＧ
Ｉ糖蛋白質（Ｎｏ．６）０．０３の２を０．２の‘の滅
菌生理食塩水に溶解した溶液を、１匹につき１日１回皮
下注射により連続して１４日間投与した。更に他の１群
（セフアランチン投与群）には、対照群と同様にサィト
シンアラビノシドを投与し、更に従来から白血球減少症
に用いられているセフアランチン（科研生薬株式会社製
）０．３の９を０．２の上の滅菌生理食塩水に溶解した
溶液を、１匹につき１日１回皮下注射により連続して１
４日間投与した。そして薬剤投与前と投与後２、４、６
、８、１０、１２及び１４日目１こマウス尾静脈から採
血し、試験２と同様の方法により白血球を算出した。そ
して薬剤投与前の白血球数を１００％とし、投与後の白
血球数減少の程度を百分率（減少率）で示した。その結
果を表６に示す。
ｋｇ（点ＬＤ５。に相当する）の割合でサイトシンアラ
ビノシドを滅菌生理食塩水０．２の【に溶解した溶液を
１日１回、連続して１４日間腹腔内注射により投与した
。更に１日１回１匹当り０．２泌の滅菌生理食塩水を皮
下注射により連続して１４日間投与した。他の１群（Ｈ
ＧＩ糖蛋白質投与群）には対照群と同様にサィトシンア
ラビノシドを投与し、更に実施例１により製造したＨＧ
Ｉ糖蛋白質（Ｎｏ．６）０．０３の２を０．２の‘の滅
菌生理食塩水に溶解した溶液を、１匹につき１日１回皮
下注射により連続して１４日間投与した。更に他の１群
（セフアランチン投与群）には、対照群と同様にサィト
シンアラビノシドを投与し、更に従来から白血球減少症
に用いられているセフアランチン（科研生薬株式会社製
）０．３の９を０．２の上の滅菌生理食塩水に溶解した
溶液を、１匹につき１日１回皮下注射により連続して１
４日間投与した。そして薬剤投与前と投与後２、４、６
、８、１０、１２及び１４日目１こマウス尾静脈から採
血し、試験２と同様の方法により白血球を算出した。そ
して薬剤投与前の白血球数を１００％とし、投与後の白
血球数減少の程度を百分率（減少率）で示した。その結
果を表６に示す。
表 ６
（数値は各群とも１０匹の平均値を示す）ＨＧＩ糖蛋白
質投与群では、対照群と比較して投与後１０日目から顕
著に白血球の減少が抑制され、セフアランチン投与群と
同等又は、それ以上の抑制効果が認められた。
質投与群では、対照群と比較して投与後１０日目から顕
著に白血球の減少が抑制され、セフアランチン投与群と
同等又は、それ以上の抑制効果が認められた。
特に、薬剤投与後１４日目では、対照群の白血球数が４
６．６％に減少したのに対し、ＨＧＩ糖蛋白質投与群で
は、７３．３％であり、セファランチン投与群のそれよ
りも低い減少率を示した。従ってＨＧＩ糖蛋白質は人の
白血球減少症の治療に有効であると推定される。尚、サ
ィトシンアラビノシドと同じ様に白血球の減少を惹起す
ることが知られている杭癌剤、たとえば５−フルオロウ
ラシル、ダウノマイシンを投与した場合にもＨＧＩ糖蛋
白質は同様の効果のあることが認められた。
６．６％に減少したのに対し、ＨＧＩ糖蛋白質投与群で
は、７３．３％であり、セファランチン投与群のそれよ
りも低い減少率を示した。従ってＨＧＩ糖蛋白質は人の
白血球減少症の治療に有効であると推定される。尚、サ
ィトシンアラビノシドと同じ様に白血球の減少を惹起す
ることが知られている杭癌剤、たとえば５−フルオロウ
ラシル、ダウノマイシンを投与した場合にもＨＧＩ糖蛋
白質は同様の効果のあることが認められた。
又、人血清アルブミンを用いて試験３と同様の試験を行
なったが、白血球減少阻止効果は認められなかった。〔
試験４〕 ＨＧＩ糖蛋白質の急性毒性 実施例１により製造したＨＧＩ糖蛋白質（Ｎｏ．４およ
びＮｏ．６）の急性毒性をＬｉｃｈｉｅｄとＷｉｌｃｏ
ｘｏｎの方法 （ Ｊｏｍ雌ｌ ｏｆ Ｐｈａｎｎ
ａｃｏｌｏ鋤 ａｎｄＥｘｐｅｎｍｅｎｔａＩＴｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ、９畔筈、９９頁、１９４９年）に
より、Ｃ５７ＢＬ系雄マウスを用いて試験した。
なったが、白血球減少阻止効果は認められなかった。〔
試験４〕 ＨＧＩ糖蛋白質の急性毒性 実施例１により製造したＨＧＩ糖蛋白質（Ｎｏ．４およ
びＮｏ．６）の急性毒性をＬｉｃｈｉｅｄとＷｉｌｃｏ
ｘｏｎの方法 （ Ｊｏｍ雌ｌ ｏｆ Ｐｈａｎｎ
ａｃｏｌｏ鋤 ａｎｄＥｘｐｅｎｍｅｎｔａＩＴｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃｓ、９畔筈、９９頁、１９４９年）に
より、Ｃ５７ＢＬ系雄マウスを用いて試験した。
その結果腹腔内に体重ｌｋ９当り４０００雌の割合で投
与しても全く死亡例は認められず、又静脈内に体重ｌｋ
９当り２０００雌の割合で投与しても全く死亡例は認め
られず、ＬＤ５。の数値の算定は事実上不可能であり、
皮下でのＬＤ弧は体重ｌｋ９当り４０００ｍ９以上、又
、静注では体重ｌｋ９当り２０００の９以上であった。
実施例 １ 健康な人から集めた新鮮な尿４００夕に１０％水酸化ナ
トリウムを加えてｐＨを８に調整し０℃に冷却しながら
１５００仇．ｐ．ｍ．で連続遠心分り機で遠心し不落物
を除去し、上清を得た。
与しても全く死亡例は認められず、又静脈内に体重ｌｋ
９当り２０００雌の割合で投与しても全く死亡例は認め
られず、ＬＤ５。の数値の算定は事実上不可能であり、
皮下でのＬＤ弧は体重ｌｋ９当り４０００ｍ９以上、又
、静注では体重ｌｋ９当り２０００の９以上であった。
実施例 １ 健康な人から集めた新鮮な尿４００夕に１０％水酸化ナ
トリウムを加えてｐＨを８に調整し０℃に冷却しながら
１５００仇．ｐ．ｍ．で連続遠心分り機で遠心し不落物
を除去し、上清を得た。
次にこの上情を１０％塩酸でｐＨを７とし、シリカゲル
を充填したカラム（１０×８ルネ）に通液し、シリカゲ
ルに吸着された成分を５％アンモニア水４０そでカラム
から溶出した。
を充填したカラム（１０×８ルネ）に通液し、シリカゲ
ルに吸着された成分を５％アンモニア水４０そでカラム
から溶出した。
このようにして得られた溶出液．を１規定の硫酸でｐＨ
を７．５に調整しこれに粉末硫酸アンモニウムを加えて
７０％飽和となし、０℃で一夜放置し生成した沈殿を炉
別した。
を７．５に調整しこれに粉末硫酸アンモニウムを加えて
７０％飽和となし、０℃で一夜放置し生成した沈殿を炉
別した。
この沈殿物を５％アンモニア水２れこ溶解し、透析チュ
ーブ（Ｖｉｓｋｉｎｇ社製）に入れ、０．０８Ｍリン酸
塩緩衝液（ｐＨ６．５）に対して充分透析し、透析内液
に該緩衝液を加えて全量を１０クーこ調整し、あらかじ
め０．０９Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）で平衡化さ
せたＣＭセファデックスＣ−５０イオン交換カラム（４
０×４０ｃｍ）に通液し、爽雑物を該イオン交凝固脂に
吸着せしめ、通過液を得た。
ーブ（Ｖｉｓｋｉｎｇ社製）に入れ、０．０８Ｍリン酸
塩緩衝液（ｐＨ６．５）に対して充分透析し、透析内液
に該緩衝液を加えて全量を１０クーこ調整し、あらかじ
め０．０９Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ６．５）で平衡化さ
せたＣＭセファデックスＣ−５０イオン交換カラム（４
０×４０ｃｍ）に通液し、爽雑物を該イオン交凝固脂に
吸着せしめ、通過液を得た。
この通過液１０夕をダイアフローホローフアィバー濃縮
装置（アミコン社製、ＤＣ−３値型）で濃縮し、前記と
同様に濃縮液を０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．
０）に対し一晩５℃で透析し、この透析内液に該緩衝液
を加えて１夕に調整した（Ｎｏ．１）。
装置（アミコン社製、ＤＣ−３値型）で濃縮し、前記と
同様に濃縮液を０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．
０）に対し一晩５℃で透析し、この透析内液に該緩衝液
を加えて１夕に調整した（Ｎｏ．１）。
この溶液をあらかじめ該緩衝液で平衡、活性化したＤＥ
ＡＥセルロースカラム（４．０×４０肌）に通液し、０
．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを充
分洗浄した後、０．３Ｍの食塩を含む０．１Ｍトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出を行なった。そして試
験１と同機の方法で測定して顎粒球の分化増殖促進効果
を有する分画を集め、０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）に対して透析し、透析内液を得た（Ｎｏ．２
）。この透析内液を再び該緩衝液で平衡、活性化させた
ＤＥＡＥセルロースカラム（４．０×４０肌）に通液し
、０．１Ｍから０．３ＭのＣＩ‐イオンの直線濃度勾配
熔出法により溶出させ、額粒球の分化増殖促進効果を有
する分画を集め、この分画に粉末硫酸アンモニウムを加
えて７０％飽和となし、沈殿物を集め、この沈殿を少量
の０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し
、該緩衝液に対して透析し、透析内液を得た（Ｎｏ．３
）。
ＡＥセルロースカラム（４．０×４０肌）に通液し、０
．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを充
分洗浄した後、０．３Ｍの食塩を含む０．１Ｍトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出を行なった。そして試
験１と同機の方法で測定して顎粒球の分化増殖促進効果
を有する分画を集め、０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）に対して透析し、透析内液を得た（Ｎｏ．２
）。この透析内液を再び該緩衝液で平衡、活性化させた
ＤＥＡＥセルロースカラム（４．０×４０肌）に通液し
、０．１Ｍから０．３ＭのＣＩ‐イオンの直線濃度勾配
熔出法により溶出させ、額粒球の分化増殖促進効果を有
する分画を集め、この分画に粉末硫酸アンモニウムを加
えて７０％飽和となし、沈殿物を集め、この沈殿を少量
の０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し
、該緩衝液に対して透析し、透析内液を得た（Ｎｏ．３
）。
次にこの透析内液２０のとを、あらかじめ０．１Ｍトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したセフアデッ
クスＧ−１５０カラム（４．０×６０肌）で展開させ、
相対溶出液量１．１１一１．４５の分画を集め、この分
画を蒸留水に対して充分透析し、透析内液を凍結乾燥し
、約５００雌の粉末を得た（Ｎｏ．４）。次に、上記粉
末２００の９を１．０Ｍ食塩を含む０．０２Ｍリン酸塩
緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、あらかじめ該緩衝液で
平衡化したコンカナバリンＡ−セフアロース碑１００の
‘を含むカラムに通液し、１．加Ｍ食塩を含む０．０２
Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを充分洗浄し
、のち５０ｍＭ ＱーメチルーＤーグルコシド及び１．
０Ｍ食塩を含む０．０２ＭＩＪン酸塩緩衝液（ｐＨ７．
０）で綾出させ、後述する方法で測定して顎粒球の分化
増殖効果を有する分画を集め、これを蒸留水に対して透
析し、透析内液を乾結乾燥した（Ｎｏ．５）。更に、こ
こに得られた凍結乾燥粉末約５０の９を、１０％グリセ
リンを含む０．１２９Ｍトリスーグリシン緩衝液（ｐＨ
６．８）、１のとに溶解し、８％アクリルァミドゲル（
ｐＨ８．９ ２０肋×２５帆）を用いた調製用電気泳動
装置（富士理研、フジカバラーロ型）により、冷却水通
水下、１００のＡの電流を通電し、泳動させ、相対移動
度０．４６の分画を０．０２８Ｍトリスーグリシン緩衝
液（ｐＨ８．３）で回収し、蒸留水に対して透析し、透
析内液を凍結乾燥し、ＨＧＩ糖蛋白質約１０の９を得た
（Ｎｏ．６）。
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したセフアデッ
クスＧ−１５０カラム（４．０×６０肌）で展開させ、
相対溶出液量１．１１一１．４５の分画を集め、この分
画を蒸留水に対して充分透析し、透析内液を凍結乾燥し
、約５００雌の粉末を得た（Ｎｏ．４）。次に、上記粉
末２００の９を１．０Ｍ食塩を含む０．０２Ｍリン酸塩
緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、あらかじめ該緩衝液で
平衡化したコンカナバリンＡ−セフアロース碑１００の
‘を含むカラムに通液し、１．加Ｍ食塩を含む０．０２
Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）でカラムを充分洗浄し
、のち５０ｍＭ ＱーメチルーＤーグルコシド及び１．
０Ｍ食塩を含む０．０２ＭＩＪン酸塩緩衝液（ｐＨ７．
０）で綾出させ、後述する方法で測定して顎粒球の分化
増殖効果を有する分画を集め、これを蒸留水に対して透
析し、透析内液を乾結乾燥した（Ｎｏ．５）。更に、こ
こに得られた凍結乾燥粉末約５０の９を、１０％グリセ
リンを含む０．１２９Ｍトリスーグリシン緩衝液（ｐＨ
６．８）、１のとに溶解し、８％アクリルァミドゲル（
ｐＨ８．９ ２０肋×２５帆）を用いた調製用電気泳動
装置（富士理研、フジカバラーロ型）により、冷却水通
水下、１００のＡの電流を通電し、泳動させ、相対移動
度０．４６の分画を０．０２８Ｍトリスーグリシン緩衝
液（ｐＨ８．３）で回収し、蒸留水に対して透析し、透
析内液を凍結乾燥し、ＨＧＩ糖蛋白質約１０の９を得た
（Ｎｏ．６）。
前記製法の各段階で得られた試料（Ｎｏ．１〜６）のマ
ウス及び人類粒球の分化増殖促進効果を試験１と同様の
方法で測定して試験した。
ウス及び人類粒球の分化増殖促進効果を試験１と同様の
方法で測定して試験した。
ただし、ＨＧＩ糖蛋白質及びこれを含む分画の培地への
添加量は１倍養皿あたり５０〜２０の固のコロニーを形
成するに必要な量とした。そして形成されたコロニー１
個を１単位とし、比活性を次式により算出した。
添加量は１倍養皿あたり５０〜２０の固のコロニーを形
成するに必要な量とした。そして形成されたコロニー１
個を１単位とし、比活性を次式により算出した。
形成されたコロニー数（単位）
比活性＝黍鞍中のＨＧＩ糖蛋白質又はこれを含む分画の
蛋白質の量 （雌）その結果を第７表に示す。
蛋白質の量 （雌）その結果を第７表に示す。
第 ７ 表
実施例 ２
実施例１と同様の方法で得た粉末のＨＧＩ糖蛋白質（Ｎ
ｏ．６）１００の９に５％の人血清アルブミン（シグマ
社製）及び１％のグリシン（和光純薬社製）を含有する
水溶液１００地を加え、ＨＧＩ糖蛋白質を完全に熔解し
、この溶液を孔径０．４５ムのメンブランフィルタ−を
装着した炉過除菌装置（ミリポア社製）を用いて炉過し
て除菌し、あらかじめ１８０℃で２時間乾熱滅菌したガ
ラス製バイアル塵へ１叫づっ無菌的に分注し、無菌的に
凍結乾燥し、バィアル蝿を密封し、１の９のＨＧＩ糖蛋
白質を含有する白血球減少症治療剤９５本を得た。
ｏ．６）１００の９に５％の人血清アルブミン（シグマ
社製）及び１％のグリシン（和光純薬社製）を含有する
水溶液１００地を加え、ＨＧＩ糖蛋白質を完全に熔解し
、この溶液を孔径０．４５ムのメンブランフィルタ−を
装着した炉過除菌装置（ミリポア社製）を用いて炉過し
て除菌し、あらかじめ１８０℃で２時間乾熱滅菌したガ
ラス製バイアル塵へ１叫づっ無菌的に分注し、無菌的に
凍結乾燥し、バィアル蝿を密封し、１の９のＨＧＩ糖蛋
白質を含有する白血球減少症治療剤９５本を得た。
実施例 ３
健康な人から集めた新鮮な尿１０００夕から実施例１と
同様の方法でＨＧＩ糖蛋白質粗製物を含有する水溶液１
夕を得た（実施例１のＮｏ．１）。
同様の方法でＨＧＩ糖蛋白質粗製物を含有する水溶液１
夕を得た（実施例１のＮｏ．１）。
この水溶液に１０その０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）を加え、充分縄拝し、再びダイアフローホロ
ーフアィバー高速濃縮装置で約１／Ｉ０に濃縮した。次
いでこの濃縮液に０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７
．０）５夕及びあらかじめ０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液
（ＰＨ７．０）で平衡化したＤＥＡＥセルロース液（乾
燥重量としてＤＥＡＥセルロースを３００夕）５そを加
え、３０分間燈拝し、静置した後、吸引炉適して該セル
ロースを炉別した。炉別した該セルロースに１０その０
．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて洗浄
し、再度吸引炉過して該セルロースを炉別し、０．０８
の食塩を含む０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０
）１０そで洗浄し、吸引炉過して該セルロースを炉昇り
した。炉８Ｕした該セルロースに０．３Ｍ食塩を含む０
．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０〆を加え
、燈拝してＨＧＩ糖蛋白質を含有する分画を該ＤＥＡＥ
セルロースより溶出させ、得られた溶出液を、ダイアフ
ローホローフアイバー高速濃縮装置（ＤＣ−３頂型）を
用いて蒸留水による希釈、濃縮を繰り返し、脱塩し、の
ち凍結乾燥し、粉末約１５夕を得た。得られた凍結乾燥
粉末を１５０のとの蒸留水に溶解し、あらかじめ０．１
Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したセフ
アデックスＧ−１５０カラム（６．０×８０肌）に通液
してゲル淀過し、相対渚出液量１．１１一１．６０のＨ
ＧＩ糖蛋白質を含有する分画を集めた。次いで該分画を
蒸留水に対して充分透析し、透析内液をダイアフローホ
ローフアィバー濃縮装置（ＤＣ２型）で濃縮し、ＨＧＩ
糖蛋白質粗製物約３夕を含む濃縮１００泌を得た。この
濃縮液にグリシン（和光純薬社製）１夕、血清アルプミ
ン（シグマ社製）５夕を加えて、溶解し、実施例１と同
機の方法で炉過除菌して無菌的にバィアル建へ２．５の
‘ずつ分注し、無菌的に凍結乾燥し、バィアル鯵を密封
し、約３．８ｍｏのＨＧＩ糖蛋白質を含有する白血球減
少治療剤４０本を得た。
Ｈ７．０）を加え、充分縄拝し、再びダイアフローホロ
ーフアィバー高速濃縮装置で約１／Ｉ０に濃縮した。次
いでこの濃縮液に０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７
．０）５夕及びあらかじめ０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液
（ＰＨ７．０）で平衡化したＤＥＡＥセルロース液（乾
燥重量としてＤＥＡＥセルロースを３００夕）５そを加
え、３０分間燈拝し、静置した後、吸引炉適して該セル
ロースを炉別した。炉別した該セルロースに１０その０
．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて洗浄
し、再度吸引炉過して該セルロースを炉別し、０．０８
の食塩を含む０．１Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０
）１０そで洗浄し、吸引炉過して該セルロースを炉昇り
した。炉８Ｕした該セルロースに０．３Ｍ食塩を含む０
．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０〆を加え
、燈拝してＨＧＩ糖蛋白質を含有する分画を該ＤＥＡＥ
セルロースより溶出させ、得られた溶出液を、ダイアフ
ローホローフアイバー高速濃縮装置（ＤＣ−３頂型）を
用いて蒸留水による希釈、濃縮を繰り返し、脱塩し、の
ち凍結乾燥し、粉末約１５夕を得た。得られた凍結乾燥
粉末を１５０のとの蒸留水に溶解し、あらかじめ０．１
Ｍトリスー塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化したセフ
アデックスＧ−１５０カラム（６．０×８０肌）に通液
してゲル淀過し、相対渚出液量１．１１一１．６０のＨ
ＧＩ糖蛋白質を含有する分画を集めた。次いで該分画を
蒸留水に対して充分透析し、透析内液をダイアフローホ
ローフアィバー濃縮装置（ＤＣ２型）で濃縮し、ＨＧＩ
糖蛋白質粗製物約３夕を含む濃縮１００泌を得た。この
濃縮液にグリシン（和光純薬社製）１夕、血清アルプミ
ン（シグマ社製）５夕を加えて、溶解し、実施例１と同
機の方法で炉過除菌して無菌的にバィアル建へ２．５の
‘ずつ分注し、無菌的に凍結乾燥し、バィアル鯵を密封
し、約３．８ｍｏのＨＧＩ糖蛋白質を含有する白血球減
少治療剤４０本を得た。
第１図はＨＯＩ糖蛋白質の赤外線吸収スペクトルを、第
２図は霧気泳動による相対移動度と分子量との関係を、
第３図はＨＧＩ糖蛋白質の紫外線吸収スペクトルを、第
４図はＨＯＩ糖蛋白質の添加量とコロニーとの関係をそ
れぞれ表わす。 第１図 第２図 第３図 第４図
２図は霧気泳動による相対移動度と分子量との関係を、
第３図はＨＧＩ糖蛋白質の紫外線吸収スペクトルを、第
４図はＨＯＩ糖蛋白質の添加量とコロニーとの関係をそ
れぞれ表わす。 第１図 第２図 第３図 第４図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性質を有し、人尿から分離された人骨
髄細胞に作用して顆粒球の分化増殖を促進するＨＧＩ糖
蛋白質：（ａ）分子量：ゲル濾過法による測定で７５０
００〜９００００、（ｂ）溶解性：水に溶解し、クロロ
ホルムにやや溶解し、エチルアルコール、アセトンに不
溶。 （ｃ）比旋光度：〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝０±４０（０．
２５％水溶液）、（ｄ）ｐＨ：１％（重量）水溶液で５
．０〜６．０（ｅ）等電点：ｐＨ４．７±０．２、（ｆ
）温度安定性：１％（重量）水溶液を６０℃±０．５℃
で３０分間加熱することにより人顆粒球の分化増殖作用
を失う、（ｇ）電気泳動：ドデシル硫酸ナトリウム・ポ
リアクリルアミドゲルを用いた電気泳動により相対移動
度０．２５を示す、（ｈ）赤外線吸収：次の特徴的吸収
値（ｃｍ＾−＾１）を有する、３６００〜３２００（強
）、１７００〜１６００（強）、１５５０（中）、１４
３０〜１３８０（中）、１１５０〜１０００（ブロード
）（ｉ）呈色反応：α−ナフトール硫酸反応、インドー
ル硫酸反応、アンスロン硫酸反応、フエノール硫酸反応
について糖類の呈色反応を示し、ローリイフオリン反応
法ならびに塩酸加水分解後のニンヒドリン反応について
ペプチド結合ならびにアミノ酸の呈色反応を示す、（ｊ
）蛋白質部分の構成アミノ酸：プロリン、アスパラギン
酸、スレオニン、セリン、グルタミン酸、グリシン、ア
ラニン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイシン
、チロシン、フエニルアラニン、リジン、ヒスチジン、
トリプトフアン、アルギニン、（ｋ）色及び形状：ほぼ
白色、不定形である、（ｌ）糖質部分の構成糖：中性糖
（グルコース換算）１０．０〜１３．０％（重量）、シ
アル酸３．０〜７．０％（重量）、アミノ糖１％（重量
）以下（ｍ）蛋白質と糖質との比率：蛋白質７５〜８５
％（重量）、糖質１３．０〜２０．０％（重量）。 （ｎ）元素分析：炭素；４２．３〜４７．３％ 水素；５．７〜７．８％ 窒素；９．６〜１４．３％ 酸素；３４．４〜３９．４％ イオウ；０．２％以下 ２ 人尿をケイ素含有吸着剤と接触させ、吸着した有効
物質をアルカリ溶液で溶出せしめ、中性塩で濃縮沈澱せ
しめた分画を分別し、該分画の分子量１０＾４未満の物
質を除去し、得られた分子量１０＾４以上の物質を含有
する分画を無機塩類緩衝液に溶解後陽イオン交換体と接
触させ不純物を交換体に吸着せしめて除去し、溶出した
液を陰イオン交換体と接触させ、有効物質をイオン交換
体に吸着せしめ、のち０．１〜０．３モルの無機塩溶液
にて溶出せしめ、得られた溶出液を水吸収度が１０〜２
０ｍｌ／ｇの高架橋度重合ゲルを充填したカラムに通液
して溶出液中の有効物質を０．０５〜０．１モルの塩類
緩衝液にて展開せしめ、相対溶出液量が１．１１〜１．
６０である分画を分別し有効成分を集めることを特徴と
するＨＧＩ糖蛋白質の製造法。 ３ 相対溶出液量が１．１１〜１．４５である特許請求
の範囲第２項記載のＨＧＩ糖蛋白質の製造法。 ４ 人尿をケイ素含有吸着剤と接触させ、吸着した有効
物質をアルカリ水溶液で溶出せしめ、中性塩で濃縮沈澱
せしめた分画を分別し、該分画の分子量１０＾４未満の
物質を除去し、得られた分子量１０＾４以上の物質を含
有する分画を無機塩類緩衝液に溶解後陽イオン交換体と
接触させ不純物を交換体に吸着せしめて除去し、溶出し
た液を陰イオン交換体と接触させ、有効物質をイオン交
換体に吸着せしめ、のち０．１〜０．３モルの無機塩溶
液にて溶出せしめ、得られた溶出液を水吸収度が１０〜
２０ｍｌ／ｇの高架橋度重合ゲルを充填したカラムに通
液して溶出液中の有効物質を０．０５〜０．１モルの塩
類緩衝液にて展開せしめ、相対溶出液量が１．１１〜１
．６０である分画を分別し、ｐＨ６．０−８．０におい
て糖親和性吸着体と分別分画を接触させ、２０−１００
ｍＭの糖類を含む１．０−２．０Ｍ塩添加緩衝液（ｐＨ
６．０−８．０）で溶出し、有効成分を集めることを特
徴とするＨＧＩ糖蛋白質の製造法。 ５ 人尿をケイ素含有吸着剤と接触させ、吸着した有効
物質をアルカリ水溶液で溶出せしめ、中性塩で濃縮沈澱
せしめた分画を分別し、該分画の分子量１０＾４未満の
物質を除去し、得られた分子量１０＾４以上の物質を含
有する分画を無機質塩類緩衝液に溶解後陽イオン交換体
と接触させ不純物を交換体に吸着せしめて除去し、溶出
した液を陰イオン交換体と接触させ、有効物質をイオン
交換体に吸着せしめ、のち０．１〜０．３モルの無機塩
溶液にて溶出せしめ、得られた溶出液を水吸収度が１０
〜２０ｍｌ／ｇの高架橋度重合ゲルを充填したカラムに
通液して溶出液中の有効物質を０．０５〜０．１モルの
塩類緩衝液にて展開せしめ、相対溶出液量が１．１１〜
１．６０である分画を分別し、ｐＨ６．０−８．０にお
いて糖親和性吸着体と分別分画を接触させ、２０−１０
０ｍＭの糖類を含む１．０−２．０Ｍ塩添加緩衝液（ｐ
Ｈ６．０−８．０）で溶出し、次いで溶出液をｐＨ７．
０−９．０において調製用電気泳動にかけ、希薄塩溶液
により溶出し、有効成分を回収することを特徴とするＨ
ＧＩ糖蛋白質の製造法。 ６ ＨＧＩ糖蛋白質を有効成分として含有する白血球減
少症治療剤。
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53031999A JPS6030291B2 (ja) | 1978-03-20 | 1978-03-20 | 人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤 |
| AU45197/79A AU523077B2 (en) | 1978-03-20 | 1979-03-16 | Hgi glycoprotein |
| SE7902372A SE451844B (sv) | 1978-03-20 | 1979-03-16 | Glykoprotein, forfarande for framstellning derav samt terapeutiskt medel innehallande nemnda glykoprotein |
| CA000323547A CA1120468A (en) | 1978-03-20 | 1979-03-16 | Hgi-glycoprotein capable of stimulating proliferation and differentiation of human granulocyte, process for preparing same and leukopenia curative containing same |
| ZA791282A ZA791282B (en) | 1978-03-20 | 1979-03-19 | Ghi-glycoprotein capable of stimulating proliferation and differentiation of human granulocyte,process for preparing same and leukopenia curative containing same |
| BE0/194089A BE874937A (fr) | 1978-03-20 | 1979-03-19 | Glycoproteines-hgi capables de stimuler la proliferation et la differentiation de granulocyte humaine, leur procede de preparation et medicaments contre la leucopenie en contenant |
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