JPH0120876B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は12α，17α，21−トリヒドロキシ−４
−プレグネン−３，20−ジオン、12α，17α，21
−トリヒドロキシ−16α−メチル−４−プレグネ
ン−３，20−ジオン及び12α，21−ジヒドロキシ
−6α−フルオル−16α−メチル−４−プレグネン
−３，20−ジオンである12α−ヒドロキシステロ
イド並びに12α−ヒドロキシステロイドの製法に
関する。

12α−ヒドロキシステロイドの従来公知の微生
物学的製法の際所望の生成物に関し得られる収率
が非常にわずかであるので、これを工業的に使用
することはできない。ところが意想外にもセレオ
スポラ・カキ（Cereospora Kaki、CBS 12839）
の培養液を使用して一般式のステロイドを比較
的良好な収率で12α位でヒドロキシル化すること
がわかつた。一般式のステロイドが21位に置換
分R₃としてアルカノイル基、例えばホルミル基、
アセチル基、プロピオニル基又はブチリル基を有
するならば、これらは発酵的変換の際に鹸化され
る。

本発明方法はステロイドの微生物学的ヒドロキ
シル化の際に常用の条件下に実施する。

常用の培養条件下に好適な培地中で通気しつつ
深部培養を行なう。次いで一般式の基質（溶剤
中に溶かすか、乳化した形で）を培養液に加え、
最大基質変換が達せられるまで発酵させる。

好適な基質溶剤は例えばメタノール、エタノー
ル、グリコールモノメチルエーテル、ジメチルホ
ルムアミド又はジメチルスルホキシドである。基
質の乳化は例えばこれを微細な形で又は水と混合
可能な溶剤（例えばメタノール、エタノール、ア
セトン、グリコールモノメチルエーテル、ジメチ
ルホルムアミド又はジメチルスルホキシド）中に
溶かして、強力な揺動下に常用の乳化助剤を含有
する（有利に脱灰した）水中にノズルを注入する
ことによつて行なうことがきる。好適な乳化助剤
は非イオン系乳化剤、例えばエチレンオキシ付加
物又はポリグリコールの脂肪酸エステルである。
好適な乳剤としては例えば市販の湿潤剤テギン
、ツウイーン及びスパンが挙げられる。

最適な基質濃度、基質添加時間及び発酵時間は
使用した発酵条件に依り決まる。これらの値は微
生物学的ステロイド変換の際に一般に必要とされ
るように個々の場合において専門家が行なうよう
な予備実験により確かめなければならない。

こうして得られた一般式の12α−ヒドロキシ
ステロイドは薬理学的に作用を有するステロイド
を製造するための重要な中間生成物である。こう
してこれら化合物を例えば相応する11α−又は
11β−ヒドロキシステロイドと同様な条件下に
１，２−位を脱水素しかつ脱水することができ
（米国特許第3232839号明細書）、相応する１，４，
11（12）−プレグナトリエン−３，20−ジオン誘導
体が得られ、これを公知法で抗炎症作用を有する
12−ハロゲン−11β−ヒドロキシステロイドとす
ることができる（フランス特許第1506008号明細
書、米国特許第3053837号明細書及び西ドイツ国
特許公開第2632678号明細書参照）。

次に実施例につき本発明を詳細に説明する。

例 １ 液体デンプン糖（グルコース含量50％）10％、
コーンスチープ液0.5％、硝酸ナトリウム0.2％、
燐酸二水素カリウム0.1％、塩化カリウム0.05％、
硫酸マグネシウム・７水化物0.05％、硫酸鉄
（）・７水化物0.002％からなる滅菌培養液500ml
を２週間目のセレオスポラ・カキ（CBS 12839）
の傾斜寒天培地で接種し、30℃で５日間振蘯す
る。このようにして得られた予備培養液を液体デ
ンプン糖（グルコース含量50％）10％、コーンス
チープ液0.5％、硝酸ナトリウム0.2％、燐酸二水
素カリウム0.1％、塩化カリウム0.05％、硫酸マ
グネシウム・７水化物0.05％及び硝酸鉄（）・
７水化物0.002％を含有する滅菌培地（25％水酸
化ナトリウム溶液でPHを6.5に調節）15を装入
した20−予備発酵器の接種に使用する。

この予備培養液を撹拌（220r.p.m）及び通気
（空気15／分）下に29℃で48〜72時間培養する。

こうして得られた予備培養液900mlを液体デン
プン糖６％、コーンスチープ液１％、硝酸ナトリ
ウム0.2％、燐酸二水素カリウム0.1％、燐酸水素
カリウム0.2％、硫酸マグネシウム・７水化物
0.05％、硫酸鉄（）0.002％及び塩化カリウム
0.05％から成る滅菌培養液（PHを5.8に調節）14.1
を装入した20主発酵器中に加える。この培養
液を撹拌及び通気下に28℃で培養し、12時間又は
24時間後にジメチルホルムアミド100ml中の17α，
21−ジヒドロキシ−４−プレグネン−３，20−ジ
オン3.75ｇの滅菌過した溶液を加え、その後更
に同じ条件下に培養を続ける。

変換の検査は培養液の経時採取試料のメチルイ
ソブチルケトン抽出物をシリカゲルプレート
60F254メルク上で薄層クロマトグラフイー分析
を行なう。

出発物質の完全な変換（約37時間）後、発酵配
合物を過し、この液及び菌糸体をメチルイソ
ブチルケトンで抽出する。抽出液を合し、真空中
で濃縮する。得られた残分を２回それぞれ100ml
のヘキサンを用いて付着した消泡剤（Silicon
SH）から洗浄取得し、シリカゲルカラム上でク
ロマトグラフイーを行ない、活性炭を使用し酢酸
エステルから再結晶させる。融点209〜210℃の
12α，17α，21−トリヒドロキシ−４−プレグネ
ン−３，20−ジオン1.16ｇが得られる。

例 ２ 例１の条件下に17α，21−ジヒドロキシ−16α
−メチル−４−プレグネン−３，20ジオン1.2ｇ
を接触時間19時間で発酵させる。融点237〜239℃
の12α，17α，21−トリヒドロキシ−16α−メチル
−４−プレグネン−３，20−ジオン370mgが得ら
れる。

例 ３ 例１の条件下に21−ヒドロキシ−6α−フルオ
ル−16α−メチル−４−プレグネン−３，20−ジ
オン3.75ｇを接触時間21時間で発酵させる。粗生
成物をクロマトグラフイーにより精製すると融点
205〜206℃の12α，21−ジヒドロキシ−6α−フル
オル−16α−メチル−４−プレグネン−３，20−
ジオン895mgが得られる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式（） 〔式中、Ｘは水素原子又は弗素原子を表わし、
   R₁は水素原子又はメチル基を表わし、R₂は水素
   原子又はヒドロキシ基を表わすか又はR₁とR₂が
   一緒になつてイソプロピリデンジオキシ基を表わ
   す〕の12α−ヒドロキシステロイドを製造する方
   法において、一般式 〔式中、Ｘ、R₁及びR₂は前記のものを表わし、
   R₃は水素原子又は炭素原子数１〜６を有するア
   ルカノイル基を表わす〕の化合物をセレオスポ
   ラ・カキ（CBS 12839）の培養液と共に発酵さ
   せることを特徴とする12α−ヒドロキシステロイ
   ドの製法。 ２ 12α，17α，21−トリヒドロキシ−４−プレ
   グネン−３，20−ジオンを製造する、特許請求の
   範囲第１項記載の方法。 ３ 12α，17α，21−トリヒドロキシ−16α−メチ
   ル−４−プレグネン−３，20−ジオンを製造す
   る、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４ 12α，21−ジヒドロキシ−6α−フルオル−
   16α−メチル−４−プレグネン−３，20−ジオン
   を製造する、特許請求の範囲第１項記載の方法。