JPH01209351A - 塩基配列決定装置 - Google Patents
塩基配列決定装置Info
- Publication number
- JPH01209351A JPH01209351A JP63034805A JP3480588A JPH01209351A JP H01209351 A JPH01209351 A JP H01209351A JP 63034805 A JP63034805 A JP 63034805A JP 3480588 A JP3480588 A JP 3480588A JP H01209351 A JPH01209351 A JP H01209351A
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- Japan
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- fluorescence
- different
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- migration gel
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、サンガーの方法によって核酸の塩基配列を決
定する過程で、特に予めプライマーを螢光物質や燐光物
質などの標識色素でラベルしておき、最終段階のゲル電
気泳動からの配列の読取りをそのＳ識色素からの発光を
利用して分光学的方法により行なう装量に関するもので
ある。
定する過程で、特に予めプライマーを螢光物質や燐光物
質などの標識色素でラベルしておき、最終段階のゲル電
気泳動からの配列の読取りをそのＳ識色素からの発光を
利用して分光学的方法により行なう装量に関するもので
ある。
（従来の技術）
このような泳動パターンの測定装置として９例えば特願
昭６２−８０３９０号がある。このような装置ではＩ）
Ｎ Ａ断片を末端塩基Ａ（アデニンノ、Ｇ（グアニン
フ、Ｔ（チミン）、Ｃ（シトシンフ別に分画し、電気泳
動ゲル上の４本のレーンを用いて、Ｘ気泳動した後それ
ぞれのレーンを走査し分光学的測定を行う必要があった
。
昭６２−８０３９０号がある。このような装置ではＩ）
Ｎ Ａ断片を末端塩基Ａ（アデニンノ、Ｇ（グアニン
フ、Ｔ（チミン）、Ｃ（シトシンフ別に分画し、電気泳
動ゲル上の４本のレーンを用いて、Ｘ気泳動した後それ
ぞれのレーンを走査し分光学的測定を行う必要があった
。
（解決しようとする課題〕
核酸の塩基配列を決定する過程で、末端塩基によｒ）４
ａＶｔＣ分画したＤＮＡ断片を４本のレーンを使用して
電気泳動を行うことは煩雑であるし、また検体処理件数
も制限される。このため本願は末端塩基線にかかわりな
（ＤＮＡ断片を１本あるいは２本のレーンを使用して電
気泳動し、このよつなスラブ状泳動ゲルを読みとること
のできる塩基配列決定装置を提供するＯ （課題を解決するための手段） 本発明にかかる塩基配列決定装置は標識色素として螢光
波長の異なる複数のラベル化剤を用いると共に受光装置
をそれぞれ分光波長の異なる分光手段と複数の光検出器
とで構成したＯ （作 用） 本発明にかかる装置を使用する塩基配列決定法には核酸
断片の標識色素として螢光波長が異なる複数のラベル化
剤が使用される。Ｉ） Ｎ Ａ断片は末端塩基毎に異な
るラベル化剤にてラベルされ同一の電気泳動ゲル上のレ
ーンを使用して泳動憾れる。
ａＶｔＣ分画したＤＮＡ断片を４本のレーンを使用して
電気泳動を行うことは煩雑であるし、また検体処理件数
も制限される。このため本願は末端塩基線にかかわりな
（ＤＮＡ断片を１本あるいは２本のレーンを使用して電
気泳動し、このよつなスラブ状泳動ゲルを読みとること
のできる塩基配列決定装置を提供するＯ （課題を解決するための手段） 本発明にかかる塩基配列決定装置は標識色素として螢光
波長の異なる複数のラベル化剤を用いると共に受光装置
をそれぞれ分光波長の異なる分光手段と複数の光検出器
とで構成したＯ （作 用） 本発明にかかる装置を使用する塩基配列決定法には核酸
断片の標識色素として螢光波長が異なる複数のラベル化
剤が使用される。Ｉ） Ｎ Ａ断片は末端塩基毎に異な
るラベル化剤にてラベルされ同一の電気泳動ゲル上のレ
ーンを使用して泳動憾れる。
スラブゲル上で分離されたＩ） Ｎ Ａ断片はゲル面の
法線方向より入射する元にエリ励起され、末端の塩基に
対応した個有のラベル化剤に由来する螢光を発する。
法線方向より入射する元にエリ励起され、末端の塩基に
対応した個有のラベル化剤に由来する螢光を発する。
この螢−ｙｔは複数のヲペル化剤に対応した光を透過す
るように予めセットされた複数の受光装置により検知さ
れ、末端塩基種の判別とその螢光量が読みとられる。こ
れによｐＤＮＡのシーケンス決定が行われる〇 （実施例う 第１図は不発明をオンワイン方式の塩基配列決定装置に
適用した実施例を示し、第２図は第１図装置のデーダ処
理回路を示している。
るように予めセットされた複数の受光装置により検知さ
れ、末端塩基種の判別とその螢光量が読みとられる。こ
れによｐＤＮＡのシーケンス決定が行われる〇 （実施例う 第１図は不発明をオンワイン方式の塩基配列決定装置に
適用した実施例を示し、第２図は第１図装置のデーダ処
理回路を示している。
本発明は説明を簡略化するためにＤＮＡ断片の末端塩基
が２種類（ＡとＧとする〕の場合の実施例装置を示して
いる。
が２種類（ＡとＧとする〕の場合の実施例装置を示して
いる。
ｍで螢光スペクトルのビークＶｉ５２０ｒ１ｍ″ｔ’ｓ
る。フでラペμされており、末端塩基がＧ （ｌＪ Ｄ
Ｎ Ａ断片は９ （ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）−
３−ｂｙｄｒｏｘｙ−６−ｏｘｏ−６８−ｘａｎｔｈｅ
ｎｅ（ＳＦ ５ｏ５）でラベルてれている。ＳＦ’−
５０５の励起スペクトルビークは４８６０ｍで、螢光ス
ペクトルビークは５０５ｎｍである。このようにラベル
されたＤＮＡ断片は混合されて第１図中の試料注入用ス
ロット１に注入される。２．３は電極槽であり泳動用電
源４から泳動電圧が印加されている。
る。フでラペμされており、末端塩基がＧ （ｌＪ Ｄ
Ｎ Ａ断片は９ （ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）−
３−ｂｙｄｒｏｘｙ−６−ｏｘｏ−６８−ｘａｎｔｈｅ
ｎｅ（ＳＦ ５ｏ５）でラベルてれている。ＳＦ’−
５０５の励起スペクトルビークは４８６０ｍで、螢光ス
ペクトルビークは５０５ｎｍである。このようにラベル
されたＤＮＡ断片は混合されて第１図中の試料注入用ス
ロット１に注入される。２．３は電極槽であり泳動用電
源４から泳動電圧が印加されている。
試料はポリアクリルアミド泳動ゲ／Ｌ１５の中を矢印６
の方向に泳動し個々のＤＮＡ断片に分離される。
の方向に泳動し個々のＤＮＡ断片に分離される。
７．８．９．１０はこのように展開されたＤＮＡ断片で
ある〇 励起光を発生する励起光源としてのアルゴンレーザ１１
からレーザ光である励起光１２が泳動ゲルに照射される
。アルゴンレーザ１１は４８８ｒ１ｍの光を発振する。
ある〇 励起光を発生する励起光源としてのアルゴンレーザ１１
からレーザ光である励起光１２が泳動ゲルに照射される
。アルゴンレーザ１１は４８８ｒ１ｍの光を発振する。
１３ 、１４は受光装置であり、それぞれ光ファイバー
東１５．１６と螢光選択用フイ／Ｌ’ター１７゜１８と
光電子増倍管１９（＠出器Ｄ１）、２０（ｔｇｔ出器Ｄ
２）工９構成されている０光７アイパ一束１５ 、１６
の一端面は泳動ゲ／Ｉ１５の一端面に対応した形状で薄
い長方形の面を形成するように配列されており、この端
面は泳動ゲル５の一端面と対向して配置されている。
東１５．１６と螢光選択用フイ／Ｌ’ター１７゜１８と
光電子増倍管１９（＠出器Ｄ１）、２０（ｔｇｔ出器Ｄ
２）工９構成されている０光７アイパ一束１５ 、１６
の一端面は泳動ゲ／Ｉ１５の一端面に対応した形状で薄
い長方形の面を形成するように配列されており、この端
面は泳動ゲル５の一端面と対向して配置されている。
元ファイバー束１５ 、１６の他端は小さい束に束ねら
れている。螢光選択用フィルター１７Ｖｉ５２６ｎｍに
透過光の最大波長を有するものであり、ｍ吊器Ｄ１は末
端塩基Ａ？）ＤＮＡ断片検出用に割りあてられている。
れている。螢光選択用フィルター１７Ｖｉ５２６ｎｍに
透過光の最大波長を有するものであり、ｍ吊器Ｄ１は末
端塩基Ａ？）ＤＮＡ断片検出用に割りあてられている。
同様に螢光選択用フィルター１８は５０５ｎｍに透過光
の最大波長を有するものであり、検出器Ｄ２は末端塩基
ＧのＤＮＡ断片検出用に割りあてられている。ＤＮＡ断
片１０に付された螢光誘導体は励起光１２により励起さ
れ個有の波長の螢光を発し、その光は泳動ゲ）′ｖ５の
表面で全反射をくりかえし端面に配置された光フアイバ
ー束１５．１６から螢光選択用フィルター１７．１８を
通Ｖ＠出器Ｄｔ。
の最大波長を有するものであり、検出器Ｄ２は末端塩基
ＧのＤＮＡ断片検出用に割りあてられている。ＤＮＡ断
片１０に付された螢光誘導体は励起光１２により励起さ
れ個有の波長の螢光を発し、その光は泳動ゲ）′ｖ５の
表面で全反射をくりかえし端面に配置された光フアイバ
ー束１５．１６から螢光選択用フィルター１７．１８を
通Ｖ＠出器Ｄｔ。
Ｄ２に至る。
検出器で電気信号に変換された信号はアンプ２１．２２
ｔａ９マルチプレクサ２３により時分割されてＣＰＵに
サンプリングされる。ＣＰＵではどちらの検出器からの
信号が大きいかが判別され、最大の信号を与える検出器
に対応する成分が測定しているＤＮＡ断片の末端塩基で
あると識別される。
ｔａ９マルチプレクサ２３により時分割されてＣＰＵに
サンプリングされる。ＣＰＵではどちらの検出器からの
信号が大きいかが判別され、最大の信号を与える検出器
に対応する成分が測定しているＤＮＡ断片の末端塩基で
あると識別される。
また大きいと判別された検出器の信号を使って螢光強度
が測定され、これにエリＤＮＡ１ｆｆＴ片の量が測定さ
れる□ＤＮＡ断片Ｖｉ泳動ゲ／Ｌ１５上を順次移動し励
起光１２の位置を横切るので氾定は各断片各々に順次行
われる。
が測定され、これにエリＤＮＡ１ｆｆＴ片の量が測定さ
れる□ＤＮＡ断片Ｖｉ泳動ゲ／Ｌ１５上を順次移動し励
起光１２の位置を横切るので氾定は各断片各々に順次行
われる。
以上簡略化した説明をしたが実際にはＤＮＡ’４構成す
る塩基は４種あるので、２種の末端塩基毎のＩ） Ｎ
Ａ断片に区分し、泳動レーンを２本使用し本発明を実施
することができる。この場合には例えばポリゴンミラー
を使用して励起光を２本のレーンに走査する構成とする
ことができる。更に受光装置を４つ持つ装置とすること
がより好ましい。
る塩基は４種あるので、２種の末端塩基毎のＩ） Ｎ
Ａ断片に区分し、泳動レーンを２本使用し本発明を実施
することができる。この場合には例えばポリゴンミラー
を使用して励起光を２本のレーンに走査する構成とする
ことができる。更に受光装置を４つ持つ装置とすること
がより好ましい。
この場合は４棺の螢光標識９例えば前記５Ｆ−５０５の
誘導体が使用される。
誘導体が使用される。
１だ光ファイバー東１５ 、１６の受光端面は他の形状
にすることもできる。第３図は光フアイバー束の受光端
の他の実施態様を示す図である。第３図に示す＝９に各
受光装置の元ファイバー束２６〜２９の受光端面を泳動
ゲルの端面２６にモザイク状に配置することができる。
にすることもできる。第３図は光フアイバー束の受光端
の他の実施態様を示す図である。第３図に示す＝９に各
受光装置の元ファイバー束２６〜２９の受光端面を泳動
ゲルの端面２６にモザイク状に配置することができる。
本発明にかかる装置は螢光物質の代りに燐光物質をラベ
ル化剤とする塩基配列決定法に使用できる０ また本発明はオフラインの測定装置に適用される。
ル化剤とする塩基配列決定法に使用できる０ また本発明はオフラインの測定装置に適用される。
（効 果）
本発明装置によれば泳動ゲ〜の１本のレーンを使用して
ＤＮＡ断片を測定することができ、測定の手間が減少す
る。
ＤＮＡ断片を測定することができ、測定の手間が減少す
る。
４個の受光装置を備えた装置では励起光を各レーンに走
査する機構が省略される。４４半異嬰其
査する機構が省略される。４４半異嬰其
第１図は本発明をオンライン方式の塩基配列決定装置に
適用した実施例を示し、第２図は第１図装置のデータ処
理回路を示し、第３図は元フ１イノベー束の受光端の他
の実施態様を示す図である。 図中 ５ 泳動ゲル １１ アルゴンレーザ １３．１４ 受光装置 １５．１６ 光ファイバー東 １７、１８ 螢光選択用フィルタ ２１．２２ アンプ ２３ マルチプレクサ ２５ 泳動ゲル端面 ２６〜２９ 光フアイバー束 特許出願人 株式会社島津製作所 １１．：。
適用した実施例を示し、第２図は第１図装置のデータ処
理回路を示し、第３図は元フ１イノベー束の受光端の他
の実施態様を示す図である。 図中 ５ 泳動ゲル １１ アルゴンレーザ １３．１４ 受光装置 １５．１６ 光ファイバー東 １７、１８ 螢光選択用フィルタ ２１．２２ アンプ ２３ マルチプレクサ ２５ 泳動ゲル端面 ２６〜２９ 光フアイバー束 特許出願人 株式会社島津製作所 １１．：。
Claims (1)
- （１）標識色素によりラベルされた核酸断片を電気泳動
により展開させた又は展開中のスラブ状泳動ゲルに、こ
のスラブ状泳動ゲルの面の法線方向から励起光ビームを
入射させる機構と、泳動ゲル中に展開した核酸断片の標
識色素の出す螢光を泳動ゲルの端面で受光する受光装置
とを備えた塩基配列決定装置において、前記標識色素と
して螢光波長の異なる複数のラベル化剤を用いると共に
、前記受光装置をそれぞれ分光波長の異なる分光手段と
複数の光検出器とで構成したことを特徴とする塩基配列
決定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63034805A JPH01209351A (ja) | 1988-02-17 | 1988-02-17 | 塩基配列決定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63034805A JPH01209351A (ja) | 1988-02-17 | 1988-02-17 | 塩基配列決定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01209351A true JPH01209351A (ja) | 1989-08-23 |
Family
ID=12424438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63034805A Pending JPH01209351A (ja) | 1988-02-17 | 1988-02-17 | 塩基配列決定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01209351A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0425759A (ja) * | 1990-05-22 | 1992-01-29 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 蛍光パターン読み取り装置 |
| JPH04204151A (ja) * | 1990-11-30 | 1992-07-24 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 多色泳動パターン読み取り装置 |
| WO2001016586A1 (en) * | 1999-08-30 | 2001-03-08 | Integrated Genetic Devices Ltd. | Electrophoretic system for real time detection of multiple electrophoresed biopolymers |
| CN111272715A (zh) * | 2018-12-04 | 2020-06-12 | 长光华大基因测序设备（长春）有限公司 | 一种基因测序仪的荧光成像系统 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60220860A (ja) * | 1984-01-16 | 1985-11-05 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | オリゴヌクレオチドの分析法 |
| JPS60242368A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-12-02 | Hitachi Ltd | 核酸塩基配列決定方法 |
| JPS61173158A (ja) * | 1985-01-02 | 1986-08-04 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | Ｄｎａ配列決定法 |
-
1988
- 1988-02-17 JP JP63034805A patent/JPH01209351A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60220860A (ja) * | 1984-01-16 | 1985-11-05 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | オリゴヌクレオチドの分析法 |
| JPS60242368A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-12-02 | Hitachi Ltd | 核酸塩基配列決定方法 |
| JPS61173158A (ja) * | 1985-01-02 | 1986-08-04 | カリフオルニア・インステイテユ−ト・オブ・テクノロジ− | Ｄｎａ配列決定法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPH04204151A (ja) * | 1990-11-30 | 1992-07-24 | Hitachi Software Eng Co Ltd | 多色泳動パターン読み取り装置 |
| WO2001016586A1 (en) * | 1999-08-30 | 2001-03-08 | Integrated Genetic Devices Ltd. | Electrophoretic system for real time detection of multiple electrophoresed biopolymers |
| CN111272715A (zh) * | 2018-12-04 | 2020-06-12 | 长光华大基因测序设备（长春）有限公司 | 一种基因测序仪的荧光成像系统 |
| CN111272715B (zh) * | 2018-12-04 | 2023-03-14 | 长春长光华大智造测序设备有限公司 | 一种基因测序仪的荧光成像系统 |
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