JPH01238542A - 抗血清及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗血清及びその製造法に関し、さらに詳しくは
、がん組織に注入された特定のマスタード化合物と特異
的に反応してがん組織を破壊することができる抗血清及
びその製造法に関する。

〔従来の技術〕

癌に対する特異的な抗体を用いるならば、癌の治療や診
断が可能であるかも知れないと言うアイディアは癌の免
疫学的な研究を発展させた原動力であり、更にこの分野
の研究によって積み上げられた知識は免疫学、生物学、
バイオエンジニアリング等の発展を大きな貢献をもたら
してきた。

今日、実験的動物癌においてはヒト癌とは異なって特異
抗原が存在することが良く証明されており、このため癌
に対する特異抗体を用いて癌を治療しようという動物実
験あるいは臨床試験は、数多く試みられて来ている。し
かし、それらの抗原性はいずれも微弱であるため、癌特
異抗原の決定や精製、更にはその抗原に対する特異抗体
の生産が非常に困難であり、予期した成果が得られてい
ない。過去に行なわれた治療実験を検討してみると、こ
れらの過去の実験に使用された抗体が果たして確実に目
標癌に対する免疫特異性を持っていたか否かについては
多分に疑問が残る。更にまた。

もしこれらの使用された抗体が癌に特異的であったと仮
定しても、その抗体が目標癌と十分な反応を起こし得る
だけの強い免疫親和性を持っていたのであろうかと言う
点も疑問となってくる。これらの抗体側の問題に加えて
、目標癌の抗原性が微弱であると言う事実は、その投与
された抗体を引きつけるだけの十分な強さを癌が持って
いないと言うことでもあり、癌側の問題も加算されるこ
とになる。

上記の説明が示すように、癌の抗原性が微弱であると言
う事実は癌の免疫療法を困難なものにする基本的な問題
であり、過去の試みの不成功の原因に大きな部分を占め
ていると考えて間違いないであろう。

事実、最近のモノクローナル抗体を用いた動物実験の結
果では、癌あるいは癌関連抗原に対して確実な特異性を
持つ抗体を用いるならば目標癌の退行を起こし得ること
が証明されている。そしてこれらのモノクローナル抗体
で得られた結果は特異抗体による癌治療の可能性につい
て再認識をもたらしたばかりでなく、更にモノクローナ
ル抗体を用いるならばヒト癌の受動免疫も可能であるか
も知れないという期待をももたらすことになった。

しかしながら、癌特異性モノクローナル抗体を臨床に応
用する場合を想定してみると、新たな問題に遭遇する。

まず第一に、−偉人間の癌に特異抗原が存在するのであ
ろうかという点である。ヒト癌のうちでも、ある種の癌
、例えばメラノーマやウィルス性癌はそれぞれ特異抗原
を持っていることが知られている。しかし、全てのヒト
癌がそれぞれ特異抗原を持っているか否かについては未
だに明らかではない。更に、ある一定の範ちゅうに属す
る癌（例えば同一の組織像を示す癌、または同一臓器か
ら発生した癌）の間に共通な抗原性があるのか否かもま
た不明である。それゆえに、一つのヒト癌を材料として
癌特異的モノクローナル抗体を誘導したとしても、その
抗体が他の患者の癌に対しても免疫特異性を示す可能性
はほとんど期待し得ないわけである。

この問題を克服するため患者自身の癌（自家癌）を用い
てモノクローナル抗体を誘導するという方法も考えられ
るが、患者自身から得た癌の特異抗原を決定することお
よびその抗原に対するモノクローナル抗体を産生させる
という操作を長期の時間を要する方法であり、加えて個
々の患者の癌に対してそれぞれモノクローナル抗体を産
生ずるという方法は臨床的には極めて実行困鮮なことが
明らかである。さらに、これに変わる方法として、前も
って各種のヒト癌に対してそれぞれ特異的なモノクロー
ナル抗体を作っておき、これらを混合して用いるという
方法も考え得るかも知れないが、その混合抗体のうちの
いずれかが目標癌の抗原と免疫的に合致するか否かは全
く保証がない。

モノクローナル抗体を用いて癌の治療を行なう場合、も
う一つ問題がある。過去においては、一つの癌組織を構
成する癌細胞は全て均一な性質を持つと考えられていた
が、最近、同一癌組織を構成する癌細胞ですらいくつか
の亜集団から成り立っていることが明らかになってきた
ことである。

しかも、一つの癌組織の中で大勢を支配している亜集団
をなんらかの方法で抑制すると、これまで抑圧されてい
た他の亜集団の癌が代わって台頭して来ることも判明し
ている。このため、理論的には、不完全な治療はその治
療に対して感受性のあるいくつかの亜集団の構成を変え
るだけに終わることになるであろう。そして、このよう
な経過を通って生存した亜集団はその用いられた療法に
抵抗性を持ち、しかもその癌組織の大勢を占める亜集団
となる。すなわち、モノクローナル抗体の特質であると
ころの極めて明確な免疫特性は、逆に目標癌組織内の一
つの亜集団をしが攻撃できないという不利をもたらすこ
とになる。もし各種の癌に対する特異モノクローナル抗
体を作り、これらを混合して用いると仮定しても目標癌
の亜集団の構成が明らかでない以上、多くは期待し得な
いであろう。しかも、同−癌組織内の亜集団の構成は変
異あるいは宿主防御反応による選択等によって動的に変
化することも知られており、モノクローナル抗体の特異
性の目的をどこに定めるか、あるいはまた、どのような
特異性をもつ抗体を前もって揃えておけばよいのかを決
定することは極めて固型である。

以上の問題を克服するため、その存在が不確かな癌特異
抗原に代えてハプテンを用い、がん組織に選択的にハプ
テンを人工的に結合させ、次いでこのハプテンに対する
特異抗血清を投与することによりがん組織を破壊してが
んを治療する方法が試みられている。この試みにおいて
、用いられたハプテンは、ｐ−ビス（２−クロロエチル
）アミノ−フェニルアラニン（以下、フェニルアラニン
マスタードという）であり、これに対する特異抗血清は
、フェニルアラニンマスタードと蛋白の結合物を温血動
物に初回免疫し、次いで追加免疫した後、該温血動物の
血液から得られたものであった〔キャンサー・リサーチ
（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）第２６巻１８９３
〜１９０４頁、１９６６年発行。

及びキャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈ）第３９巻６〜１６頁、１９７９年発行）。

〔発明が解決しようとする問題点〕 上記キャンサー・リサーチの二輪文に記載の特異抗血清
は、フェニルアラニンマスタードを用いて得たものであ
り、また該抗血清の製法では蛋白に対する抗体が優位に
生成したり、抗体活性が低かったりして、得られる抗血
清はフェニルアラニンマスタードの抗体が優位に含まれ
るものでなく、従って、フェニルアラニンマスタードを
用いた上記治療法には、実用上用いることができないも
のであった。

これに対して、本発明は、上記治療法に使用し得る新規
な抗血清を提供すると共に、上記の問題点を解決しうる
抗血清の製造法をも提供するものである。

〔問題点を解決するための手段〕

第１の発明は、−最大（１） （ただし、式中、Ｒは、 を示し、ここで、Ｚはホルミル基又はアセチル基、Ｒ□
、Ｒ３、Ｒ４，Ｒ，及びＲ７は各々独立して水素原子又
はアルキル基、Ｒ２はアルキル基、ベンジル基又はアル
コキシカルボニル基、Ｒ６はアルキレン基、ｎ及びｎ′
は０．１又は２並びにｍは１〜３の整数を示す）で表わ
されるマスタード化合物に対する抗体を含有してなる抗
血清に関する。

第１の発明に係る抗血清は、第２の発明によって製造す
ることができる。

第２の発明は、温血動物を一般式（Ｉ）で表わされるマ
スタード化合物と蛋白の結合物（以下、単に「結合物」
という）で少なくとも１回免疫したのち、該温血動物か
ら血清を採取することを特徴とする抗血清の製造法に関
する。

この製造法において、結合物で温血動物を免疫する前に
、蛋白で該温血動物を免疫することは、高抗体価の抗マ
スタード化合物抗血清を得る上で特に好ましい。

蛋白での免疫において、該蛋白は、温血動物−匹当り、
０．００１〜０．１ｍｇ用いられるのが好ましい。

蛋白は緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、エチレンジアミ
ン四酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等）に分散させて用いら
れ、必要に応じて免疫賦活剤を添加して、静脈注射、腹
腔内注射、皮下注射等により免疫させる。

蛋白としては、ザルコーマ１８０、ルイス腫がん、ウォ
ーカ２５６．吉日肉腫等の動物がん、胃がん、肺がん、
皮膚がん等のヒトがん等のがん細胞又はがん組織、牛、
馬等の動物の筋肉、肝、腎。

皮膚等の蛋白、牛、馬、ヒト等からの各種血清蛋１白（
例えば、血清アルブミン、血清グロブリン等）。

卵白アルブミン等が用いられる。

上記で用いられる温血動物としては、ラット。

マウス、モルモット、ウサギ、ウマ、ヤギ、ヒツジ等が
ある。

次に、マスタード化合物と蛋白との結合物（以下、単に
「結合物Ｊという）について説明する。

−最大（Ｉ）で表わされるマスタード化合物としては、
Ｎ−［３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ
−フェニル）−Ｎ−ホルミル−ＤＬ−アラニルコバリン
、Ｎ−［３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノ
コ−フェニル）−Ｎ−ホルミル−ＤＬ−アラニルコバリ
ンメチルエステル、Ｎ−［３−（ｐ−［ビス（２−クロ
ロエチル）アミノコ−フェニル）−Ｎ−ホルミル−ＤＬ
−アラニルコバリンエチルエステル、Ｎ−［３−（ｐ−
［ビス（２−クロロエチル）アミノコ−フェニル）−Ｎ
−ホルミル−ＤＬ−アラニルコバリンプロピルエステル
、Ｎ−［３−（ｐ−Ｃビス（２−クロロエチル）アミノ
コ−フェニル）−Ｎ−ホルミル−ＤＬ−アラニルコグリ
シン及びそのメチルエチル又はプロピルエステル、Ｎ− ［３−（ｐ　−Ｃビス（２−クロロエチル）アミノコ−
フェニル）−Ｎ−ホルミル−ＤＬ−アラニル］−３−フ
ェニルーＤＬ−アラニン及びそのメチル。

エチル又はプロピルエステル、Ｎ−［３−（ｐ−［ビス
（２−クロロエチル）アミノコ−フェニル）−Ｎ−アセ
チル−ＤＬ−アラニル］−３−フェニルーＤＬ−アラニ
ン及びそのメチル、エチル又はプロピルエステル、Ｎ−
［３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ−フ
ェニル）−Ｎ−ホルミル−〇Ｌ−アラニル］　−ＤＬ−
グルタミンのジメチル、ジエチル又はジプロピルエステ
ル、Ｎ。

Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−メチル−アミン、
ビス（２−クロロエチル）アミノグリミン、ビス（２−
クロロエチル）アミノアラニン、Ｐ　−〔ジー（２−ク
ロロエチル）アミノコ−シンナミックアシッド、 等がある。

また、結合物の製造に用いられる蛋白としては、前記に
例示したもの、これらを熱変性又はグアニジン変性した
もの等が使用される６熱変性は、緩衝液等の溶媒中で６
０〜９０℃に加熱して行なわれ、グアニジン変性は、蛋
白と適当量のグアニジンを緩衝液等の溶媒中で混合する
ことにより行なうことができる。蛋白としては熱変性物
又はグアニジン変性物を用いるとマスタード化合物に対
する抗体が産生じやすくなり好ましい。

結合物は、前記マスタードと蛋白を好ましくはｐＨ６，
４〜７．２、特に好ましくはｐＨ６，６〜６゜８に１！
整された等張化緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、エチレ
ンジアミン四酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等）中、好まし
くは８０℃以下、特に好ましくは１５〜３０℃で混合す
ることにより得ることができる。反応時間は、０．５〜
２４　時間であれば十分である。マスタード化合物は蛋
白に対して０．７〜３０重量％使用するのが好ましく、
特に約１〜１０重量％使用するのが好ましい。マスター
ド化合物が少なすぎるとこれに対する抗体の産生量が少
なくなり、多すぎると不要なマスタードがふえるだけで
、透析等によるこれの除去操作に時間がかかるようにな
る。過剰のマスタードは透析等により除去しておくのが
好ましい。

マスタード化合物は、溶解性が劣るため、予め、酸水溶
液に溶解して使用するのが好ましく、また、熱及び酸に
対する安定性が劣るため取扱いに際し、温度及び酸濃度
を十分管理する必要がある。上記酸水溶液としては、塩
酸、硝酸、硫酸、リン酸等の酸の０．２Ｎ以下、好まし
くは０．０１〜０．２Ｎの酸水溶液が用いられる。溶解
時の温度は６０〜８０℃が好ましい。温度が高すぎると
マスタード化合物が分解しやすくなり、またハプテン活
性が消失しやすくなり、逆に低すぎると溶解しづらくな
り、溶解しても緩衝液と混ぜると結晶が析出することが
ある。酸水溶液１０ｍＱに対してマスタード化合物は１
５０〜２５０ｍｇ用いられるのが好ましい。酸水溶液と
マスタードを混合してからガラス棒、スパーチル等を用
いてマスタードの結晶を砕くようにして早急に、好まし
くは５分以内、特に好ましくは３分以内に溶解させ、こ
の後、直ちに１５〜３０℃に冷却するのが好ましい。マ
スタード化合物は、このようにして得られる酸水溶液の
形で使用されるのが好ましい。マスタードの酸水溶液、
蛋白、 ＰＨ６，４〜７．２の緩衝液及び等強化のための生理食
塩水が任意の順序で混合され、結合物が作製される。

結合物は、上記のようにして得られた混合液の形体のま
ま、温血動物の免疫に使用するのが好ましいが、反応液
から分離して使用することができる。この場合、上記緩
衝液は、必ずしも等強化されている必要はない。分離さ
れた結合物は、上記と同様な等張化緩衝液に分散させて
使用される。

結合物は、温血動物に免疫されるが、この免疫は複数回
行なうのが好ましい。免疫は、上記結合物が分散してい
る等張化緩衝液に、必要に応じて免疫賦活剤を添加し、
これを温血動物に静脈注射。

腹腔的注射、皮下注射等により行なうことができる。

結合物による免疫は、前もって蛋白によって免疫する場
合は、蛋白による免疫から５〜１５日後に行なうのが好
ましく、特に７日前後の後に行なうのが好ましい。また
、結合物による免疫を２回以上行なう場合、その間隔は
２〜４週間とするのが好ましい、　　　　゛ 上記の免疫によって動物の血清内に、上記結合物に対す
る抗体だけでなく、同時に前記フェニルマスタードに対
する抗体及び前記蛋白に対する抗体も産生ずる。

この後、温血動物から血液を採取し、遠心分離等により
上清を採取する方法などの常法によって抗血清を得るこ
とができる。

温血動物からの採取は、結合物による最終の免疫から２
〜４週間後に行なうのが好ましく、結合物による免疫を
複数回行なうときは、最終の免疫から２週間前後が好ま
しい。

なお、蛋白による免疫及び結合物による免疫に際し用い
られる免疫賦活剤としては、フロイン１−の完全アジュ
バント、カリミョウバン、アラム等があり、これらは、
常法に従い使用される。これらは高抗体価の血清を得る
ためには使用した方が好ましい。

上記からも明らかなように、上記抗血清中には、前記結
合物に対する抗体及び前記蛋白に対する抗体が含まれる
が、これらはがん治療には不用であるため、また、場合
によっては副作用の原因になることもあるので該血清か
ら除くのが好ましい。

このためには、該血清又はこれを生理食塩水で希釈した
ものに前記結合物及び蛋白を添加し、それぞれの抗体と
結合させた後、遠心分離、ろ過等により除くことができ
る。このように、不用な抗体を除く場合、これに必要な
抗原の最少量は、血清の希釈系列を作製し、一定量の抗
原を添加し、抗原−抗体反応物の生成の有無を確認する
方法等の常法によって決定することができる。

このようにして得られた抗血清は、さらに精製して抗マ
スタード化合物抗体を分離することができる。

精製方法としては、上記抗血清にエチレンジアミン−酢
酸緩衝液等の緩衝液を添加して沈殿を生じさせ、これを
採取することにより行なうことができ、さらに該沈殿を
クォータライズドアミノエチル（ＱＡＥ）−セファデッ
クス、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−セファロー
ス、ヒドロキシアパタイト、プロデインＡ結合セファロ
ース等のカラム剤を用いたカラムクロマトによってさら
に精製を行なうことができる。ＱＡＥ−セファデックス
を用いる場合、溶離液としてカラムクロマトし、抗マス
タード化合物抗体分画を集め、他の吸着型カラム剤の場
合は、例えばｐＨ８，２のトリス緩衝液を溶離液として
吸着させたのち、ＰＨ２〜３のグリシン−塩酸緩衝液を
溶離液として抗マスタード化合物抗体を溶出し、その分
画を集める。集められた抗マスタード化合物抗体は、こ
の後、凍結乾燥して粉末状にすることができる。これは
、水、生理食塩液、緩衝液等に溶解して使用に供される
。このようにして得られる抗マスタード化合物抗体はＩ
ｇＧ抗体である。

本発明により得られる抗血清又はこれの精製物（Ｉ　ｇ
Ｇ抗体である抗マスタード化合物抗体）を用いたかん治
療は、これらに含まれる抗体に対して抗原となるマスタ
ード化合物を、温血動物又はヒトのがん組織又はその近
傍に、注射器等で直接に注入しておき、この後、上記抗
血清又はこれの精製物をがん組織又はその近傍に注射器
等で直接投与する方法、静脈注射する方法等によって行
なうことができる。

この治療によって、がん組織に注入されたフェニルマス
タード化合物とこれに対する抗体が特異的に反応し、が
ん組織が破壊される。

この場合、マスタード化合物の注入量は、がん組織の容
積１２当り、０．０１〜１ｍｇであるのが好ましく、抗
血清又はこれの精製物の注入量は、注入したマスタード
化合物に対応した量であるのが好ましい。

このようながん治療は、皮膚がん、乳がん、胃がん、肝
臓がん等の固形がんの治療に適している。

〔作用〕

本発明によって得られる抗血清又はこれの精製物は、予
め、がん組織にマスタード化合物を注入しておき、この
後、該マスタード化合物の抗体を含む抗血清又はこれの
精製物を投与することにより、がん組織又はその近傍で
抗原−抗体反応が起こり、補体の関与によるアルサス反
応によって血管が破壊されると共に゛、産生される免疫
活性物質の作用によってがん組織が破壊される。このよ
うにマスタード化合物を抗原とすることによって、従来
問題となっていた患者自身のがんの特異抗原を決定する
必要がないこと、がん細胞の亜集団を考慮する必要がな
いこと、流血中のかん抗原の影響を受けることがないこ
と等から、がんの種類に関係なく、がん局所で抗原抗体
反応を起こさせ、がんを治療することができる。

〔実施例〕

実施例１ （１）　Ｎ　−［３−（ｐ　−［ビス（２−クロロエチ
ル）アミノコ−フェニル）−Ｎ−フォルミルーＤＬ−ア
ラニルコバリンエチルエステル（ＰＡＥ）水溶液の調製 ＰＡＥ水溶液は、以下において用時に次のようにして調
製された。ガラスの試験管に精製したＰＡＥ２００ｍｇ
を入れ、７５℃に加温した水槽中に置き、７５℃に保持
した０、１ＮＭＣ１１０ｍｌを加えた。ガラス棒でＰＡ
Ｅを素早くすり潰すようにして３分以内に溶解した。溶
解後直ちに、２５℃の水槽中に移し、２５℃に予め保持
した０、１５Ｍ、ｐＨ８，０のリン酸緩衝液を加えてｐ
Ｈ６，６に調整した。次いで、０．１５Ｍ、ｐＨ６，６
のリン酸緩衝液で４０ｍ１までメスアップして、ＰＡＥ
水溶液（ＰＡＥの濃度５　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌ　）を調
製した。この調製液は直ちに、次のキャリア蛋白との結
合に用いられた。

（２）ＰＡＥとウサギ血清ガンマグロブリンの結合物の
作製 ウサギ血清ガンマグロブリンの乾燥粉末７５０ｍｇを０
．１５Ｍ、ｐＨ６，６のリン酸緩衝液２１０ｍ１で溶解
し、次いで８０℃、３ｏ分間煮沸して蛋白を変性した後
、再び３７℃に戻し、これに前項で調製したＰＡＥ水溶
液４０ｍ１をかきまぜながら滴下した。この混合液をか
きまぜながら、２５℃で１２時間保持した。続いて、さ
らに４０ｍ１のＰＡＥ溶液を滴下して４時間２５℃で保
温した。次いで、このＰＡＥとウサギ血清ガンマグロブ
リンの結合物を含む溶液を透析膜チューブ（分画分子量
　５ｏｏｏ）に入れて、０　、　ＯＩ　Ｍ　、　ｐ　Ｈ
６、６ｆ７）　’Ｊ　’）酸緩衝液ニ対して４℃で一昼
夜透析した。透析後、透斬膜内の液を凍結乾燥して、上
記結合物の粉末１１２０ｍｇを得た。

（３）抗ＰＡＥ抗血清の作製 ヒト血清ガンマグロブリン０．１ｍｇの１ｍｌ生理食塩
液溶解液に１ｍｌのフロイントの完全アヅユバントをよ
く混合し、ウサギの両側足しよう及び頚部両側の皮下に
１／４ずつ注射した。

ついで、１週間後に前項で調整した結合物３０ｍｇを生
理食塩液２ｍＱに溶解して腹腔内に注射したその後、更
に３週間後に同じ結合物１５ｍｇを生理食塩液１ｍＱに
溶解して腹腔内に注射した。１週間後に耳動脈から採血
し、遠心分離で血清を分離し、採取した。得られた血清
を５６℃で３０分間加温して非動化した。

この血清中の抗ヒト血清ガンマグロブリン抗体を除去す
るため、予め一部の血清を取り、その段階希釈液を作っ
て、これとヒト血清ガンマグロブリンとの免疫反応によ
り、抗ヒト血清ガンマグロブリン抗体を完全に吸収する
のに必要なヒト血清ガンマグロブリン量を決定した。こ
の後、上記血清に計算量のヒト血清ガンマグロブリンを
混合して、−晩、４０”Ｃに保存した。

ついで、連心分離して、その上清を取り、ダブルゲルデ
イフュージョン（ｄｏｕｂｌｅ　ｇｅｌ　−ｄｉｆｆｕ
ｓｉｏｎ）法で抗ヒト血清ガンマグロブリン抗体の有無
を調べた。この結果、沈降線は生成せず、該抗体が完全
に除去されていることがわかった。

このようにして得られた抗ＰＡＥ抗血清の抗体価は、ダ
ブルゲルデイフュージョン法による抗体希釈系列で２５
６倍であった（以下、抗体価は、ダブルゲルデイフュー
ジョン法による抗体希釈系列の希釈倍数で示す）。

（４）前記（１）〜（３）の方法と全く同様に行って、
Ｎ−［３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ
−フェニル）−Ｎ−フォルミルーＤＬ−アラニルコグリ
シンエチルエステルから抗体価６４倍の抗血清、Ｎ−［
３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ−フェ
ニル）−Ｎ−アセチル−ＤＬ−アラニルコー３−フ、エ
ニルーＤＬ−アラニンエチルエステルから抗体価６４倍
の抗血清、Ｎ−［３−（ｐ−［ビス（２−クロロエチル
）アミノコ−フェニル）−Ｎ−フォルミルーＤＬ−グル
タミン酸］ジエチルエステルから抗体価６４倍の抗血清
を得た。

応用例１ （１）ウォーカ２５６腫ように対する抗ＰＡＥ抗血清に
よる治療 ウォーカ２５６腫ようの細片（約２ｍｍ３）をウィスタ
ー系ラット（体重約２５０ｇ）の大腿部筋肉内に移植し
た。８日後、群間で腫ようの容積を計り、その大きさに
差のないようにラットを群分けした（１０匹／群）にれ
らのラットの腫よう内にＰＡＥ水溶液（濃度５ｍｇ／ｍ
ｌ）を腫よう容積１■３当たり０．０３ｍ１を注入した
。その３時間後に尾静脈から実施例１の（３）で得られ
た抗ＰＡＥ抗血清を体重１ｇ当たり０．００５ｍ１　　
を注射した。この直後の腫よう容積及び９０日後の腫よ
う容積を測定し、容積の減少率をがん消失率として求め
た。また、抗血清の注射後９０日経過時の平均生存日数
（平均値上標準偏差、９０日経過時に存命中のものは生
存日数９０日とした）を調べた。これらの結果を表１に
示す。

なお、腫ようの容積はノギスで縦、横、厚みを計り、そ
の積で表わした（以下も同様にした）。

（２）上記（１）項において、抗ＰＡＥ抗血清の代わり
に生理食塩液を用いたこと以外は同様に行なった。この
結果を表１に示す。

（３）上記（１）項において、ＰＡＥ溶液の代わりに生
理食塩液を用いたこと以外は同様に行なった。

この結果を表１に示す。

〔発明の効果〕

第１の発明に係る又は第２の発明により得られる抗血清
は新規であり、がんの治療に有用である。

パ−　＼

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （ただし、式中、Ｒは、 ▲数式、化学式、表等があります▼、 アルキル基、▲数式、化学式、表等があります▼、 −Ｒ＿５−ＣＯＯＲ＿６、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
   、表等があります▼ を示し、ここで、Ｚはホルミル基又はアセチル基、Ｒ＿
   １、Ｒ＿３　Ｒ＿４、Ｒ＿６及びＲ＿７は各々独立して
   水素原子又はアルキル基、Ｒ＿２はアルキル基、ベンジ
   ル基又はアルコキシカルボニル基、Ｒ＿５はアルキレン
   基、ｎ及びｎ′は０、１又は２並びにｍは１〜３の整数
   を示す）で表わされるマスタード化合物に対する抗体を
   含有してなる抗血清。２、温血動物を一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （ただし、式中、Ｒは、 ▲数式、化学式、表等があります▼、 アルキル基、▲数式、化学式、表等があります▼、 −Ｒ＿５−ＣＯＯＲ＿６、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼又は▲数式、化学式
   、表等があります▼ を示し、ここで、Ｚはホルミル基又はアセチル基、Ｒ＿
   １、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿６及びＲ＿７は各々独立して
   水素原子又はアルキル基、Ｒ＿２はアルキル基、ベンジ
   ル基又はアルコキシカルボニル基、Ｒ＿５はアルキレン
   基、ｎ及びｎ′は０、１又は２並びにｍは１〜３の整数
   を示す）で表わされるマスタード化合物と蛋白の結合物
   で少なくとも１回免疫したのち、該温血動物から血清を
   採取することを特徴とする抗血清の製造法。 ３、一般式（ I ）で表わされるマスタード化合物と蛋
   白の結合物で温血動物を免疫する前に、蛋白で該温血動
   物を免疫する特許請求の範囲第２項記載の抗血清の製造
   法。