JPH01249800A - 新規ペプチド - Google Patents
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- JPH01249800A JPH01249800A JP63079869A JP7986988A JPH01249800A JP H01249800 A JPH01249800 A JP H01249800A JP 63079869 A JP63079869 A JP 63079869A JP 7986988 A JP7986988 A JP 7986988A JP H01249800 A JPH01249800 A JP H01249800A
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
主果上■剋■分団
本発明は、マクロファージ及び多形核白血球などの富貴
能を活性化する作用を有していて、免疫増強剤として利
用可能性のある新規なペプチドに関する。
能を活性化する作用を有していて、免疫増強剤として利
用可能性のある新規なペプチドに関する。
皿米辺及歪
従来、感染症などで生体内に細菌などの外的異物が侵入
してきた際には、生体防御反応の第一歩として、マクロ
ファージや好中球、多形核白血球などの食胞作用によっ
て、これらの外的異物が細胞内に包み込まれ、その後、
その外的異物を包み込んだ細胞内で殺菌や分解などの生
体反応が行われる。そして、これらの生体反応の結果、
外的異物に関する情叩が抗原として免疫を司る細胞に提
示され、それぞれの免疫が成立することが知られている
。
してきた際には、生体防御反応の第一歩として、マクロ
ファージや好中球、多形核白血球などの食胞作用によっ
て、これらの外的異物が細胞内に包み込まれ、その後、
その外的異物を包み込んだ細胞内で殺菌や分解などの生
体反応が行われる。そして、これらの生体反応の結果、
外的異物に関する情叩が抗原として免疫を司る細胞に提
示され、それぞれの免疫が成立することが知られている
。
このように、外的異物の侵入に対する生体反応としての
富貴作用（Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）は、例えばマク
ロファージや好中球、多形核白血球などの實食細胞が、
外的異物と直接接触して作用することや、或いは抗体に
よるオプソニン作用によるが、これらの反応機構につい
ては十分解明されていないのが現状である。また、多く
の賞食能を促進する物質も報告されているが、相互の関
係については、明らかにされていない。
富貴作用（Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）は、例えばマク
ロファージや好中球、多形核白血球などの實食細胞が、
外的異物と直接接触して作用することや、或いは抗体に
よるオプソニン作用によるが、これらの反応機構につい
ては十分解明されていないのが現状である。また、多く
の賞食能を促進する物質も報告されているが、相互の関
係については、明らかにされていない。
また、免疫不全症の患者においては、この貢食能が極端
に低下するという問題があり、何らかの宜食能調節機構
の異常が推定されている。
に低下するという問題があり、何らかの宜食能調節機構
の異常が推定されている。
一方、マクロファージなどの宜食細胞に作用して、その
細胞の遁走を開始させ得る物質（Ｃｈｅｍａｔａｘｉｓ
ｆａｃｔｏｒ） として、ロイコトリエン類やヒスタミ
ン類が知られている。また、その他、マクロファージ・
アクチベーティング・ファクターやマクロファージ・イ
ミグレーション・ファクターなどのリンホカイン類やレ
ンチナンなどのβグルカンなどが貧食能を増強する作用
を有することが知られている。
細胞の遁走を開始させ得る物質（Ｃｈｅｍａｔａｘｉｓ
ｆａｃｔｏｒ） として、ロイコトリエン類やヒスタミ
ン類が知られている。また、その他、マクロファージ・
アクチベーティング・ファクターやマクロファージ・イ
ミグレーション・ファクターなどのリンホカイン類やレ
ンチナンなどのβグルカンなどが貧食能を増強する作用
を有することが知られている。
しかし、低分子のペプチドで貧食能を増強する作用を有
する物質としては、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の酵素加
水分解物である、タフトシン（Ｘ、Ｎ１５ｈｊｏｋａｅ
ｔ、ａｌ、 ｒバイオケミカルバイオフイジクスアクタ
Ｊ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）
、３１０，２１７ （Ｉ９７３））及びリギン（Ｎ、［
、Ｖｅｒｅｔｅｎｎｉｋｏｖａ ｅｔ、ａｌ＋ ｒイン
ターナショナルジャーナルオブペプチドプロテインリサ
ーチＪ （Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｒｅｓ、）＋１７．４３０ （Ｉ９８１） ）のみ
が、存在するに過ぎない。
する物質としては、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の酵素加
水分解物である、タフトシン（Ｘ、Ｎ１５ｈｊｏｋａｅ
ｔ、ａｌ、 ｒバイオケミカルバイオフイジクスアクタ
Ｊ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）
、３１０，２１７ （Ｉ９７３））及びリギン（Ｎ、［
、Ｖｅｒｅｔｅｎｎｉｋｏｖａ ｅｔ、ａｌ＋ ｒイン
ターナショナルジャーナルオブペプチドプロテインリサ
ーチＪ （Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｒｅｓ、）＋１７．４３０ （Ｉ９８１） ）のみ
が、存在するに過ぎない。
■が ゛ しようとする課
本発明者らは、各種食品蛋白質の一次構造中に存在する
タフトシン類似のアミノ酸配列に相当するペプチドを化
学合成し、それらのマクロファージに対する貧食能活性
化作用を検討したところ、前記（Ｉ）式のペプチドがマ
クロファージの貧食能を活性化することを見出し、本発
明をなすに至った したがって、本発明は、マクロファージ及び多形核白血
球の貧食能を活性化する作用を有していて、免疫増強剤
の有効成分として利用可能性のある新規ペプチドを提供
することを課題とする。
タフトシン類似のアミノ酸配列に相当するペプチドを化
学合成し、それらのマクロファージに対する貧食能活性
化作用を検討したところ、前記（Ｉ）式のペプチドがマ
クロファージの貧食能を活性化することを見出し、本発
明をなすに至った したがって、本発明は、マクロファージ及び多形核白血
球の貧食能を活性化する作用を有していて、免疫増強剤
の有効成分として利用可能性のある新規ペプチドを提供
することを課題とする。
以下本発明の詳細な説明する。
衾肌ｑ挟底
本発明の特徴は、マクロファージ及び多形核白血球の貧
食能活性化作用を示す次式（Ｉ）％式％（Ｉ） で表される新規ペプチド又はその塩にある。
食能活性化作用を示す次式（Ｉ）％式％（Ｉ） で表される新規ペプチド又はその塩にある。
本発明に係る新規ペプチドは、大豆蛋白質などの当該ア
ミノ酸配列を含む蛋白質の酵素加水分解物から単離して
得られることができ、また、ペプチド化学合成法によっ
て調製することもできる。
ミノ酸配列を含む蛋白質の酵素加水分解物から単離して
得られることができ、また、ペプチド化学合成法によっ
て調製することもできる。
課 を”′するための
本発明において、化学合成法によるペプチドの調製法を
次に例示する。
次に例示する。
化学合成：
合成装置として、バイオサーチ社製のＳＡＭ２ペプチド
合成装置を用い、ペプチドの担体としての樹脂からの脱
離と保護基の除去は、１０％アニソールを含む無水フン
化水素中で、０℃の温度条件下に１時間攪拌することに
より行う。
合成装置を用い、ペプチドの担体としての樹脂からの脱
離と保護基の除去は、１０％アニソールを含む無水フン
化水素中で、０℃の温度条件下に１時間攪拌することに
より行う。
上記フッ化水素を留去した後、樹脂をエーテルで洗浄し
、３０％酢酸によりペプチドを抽出する。
、３０％酢酸によりペプチドを抽出する。
抽出により得られたペプチドは、３０％酢酸で平衡化し
たバイオゲルＰ−２カラム（２，６Ｘ ８０ｃｍ）を用
いてゲル濾過した後、オクタデシルシリル（ＯＤＳ）カ
ラム（（：ｏｓｍｏＳｉｌ ５Ｃ＋ａ、２ Ｘ ２５ｃ
ｍ＋）による逆相高速液体クロマトグラフィにより精製
する。目的とする本ペプチドは、０．１％トリフルオロ
酢酸を含むアセトニトリルの直線的濃度勾配による展開
の際に、１２％アセトニトリルの濃度でカラムから溶出
する。
たバイオゲルＰ−２カラム（２，６Ｘ ８０ｃｍ）を用
いてゲル濾過した後、オクタデシルシリル（ＯＤＳ）カ
ラム（（：ｏｓｍｏＳｉｌ ５Ｃ＋ａ、２ Ｘ ２５ｃ
ｍ＋）による逆相高速液体クロマトグラフィにより精製
する。目的とする本ペプチドは、０．１％トリフルオロ
酢酸を含むアセトニトリルの直線的濃度勾配による展開
の際に、１２％アセトニトリルの濃度でカラムから溶出
する。
上記のようにして得られた、本発明に係るペプチドにつ
いて、以下のように、マクロファージに対する貧食能活
性化作用を測定した。
いて、以下のように、マクロファージに対する貧食能活
性化作用を測定した。
測定方法：
ヒツジ赤血球を外的異物としたマウス腹腔マクロファー
ジの貧食能を測定した。
ジの貧食能を測定した。
６週令のメスＢａ１ｂ／ｃマウスの腹腔内に２．９％チ
オグリコレートプロス（Ｄｉｆｃｏ社製）を３ｍＪ注射
した。３日後に腹腔中をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）にて洗浄し、細胞を回収した。回収した細胞を１．
００Ｏｒｐｍ、１０分間で遠心分離した後、４ ＸＩＯ
’ ｃｅｌｌ／＋ａ７！となるようにＰＢＳ中に分散さ
せ、０．５ａ＋１ずつ２４穴プラスチ′ンクプレート〈
直径１６ｓ＋＋ｗ）の各ウェルに加え、５％Ｃｏｔ、３
７℃の条件下に３時間インキュベートしてマクロファー
ジをプレートに吸着させた。次に、非吸着細胞をＰＢＳ
で洗浄した後、５％牛脂児血清を含むダルヘソコ改変イ
ーグル培地を加えて３時間インキュベートした。そして
、ＰＢＳで洗浄した後、ＰＢＳに溶解したペプチドを加
え、３７℃、１５分間ブレインキュベートした。更に、
ウサギの抗ヒツジ赤血球血清で処理したヒツジ赤血球（
Ｓ ＲＢ Ｃ） １０’個ずつを各ウェルに加えて、３
７℃、４５分間インキュベートした。そして、１５５ｍ
Ｍ Ｎ！１４ｃｌ 、 ＩＯＩＩＭ Ｋ１１ＣＯ３及び
１＋ｍＭ ＥＤＴＡによって、マクロファージに亥食さ
れなかった５ＲＢＣを溶血、除去し、０．５％グルタル
アルデヒドを含むＰＢＳで細胞を固定化して、顕微鏡に
より５ＲＢＣを亥食しているマクロファージの割合を計
数した。
オグリコレートプロス（Ｄｉｆｃｏ社製）を３ｍＪ注射
した。３日後に腹腔中をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）にて洗浄し、細胞を回収した。回収した細胞を１．
００Ｏｒｐｍ、１０分間で遠心分離した後、４ ＸＩＯ
’ ｃｅｌｌ／＋ａ７！となるようにＰＢＳ中に分散さ
せ、０．５ａ＋１ずつ２４穴プラスチ′ンクプレート〈
直径１６ｓ＋＋ｗ）の各ウェルに加え、５％Ｃｏｔ、３
７℃の条件下に３時間インキュベートしてマクロファー
ジをプレートに吸着させた。次に、非吸着細胞をＰＢＳ
で洗浄した後、５％牛脂児血清を含むダルヘソコ改変イ
ーグル培地を加えて３時間インキュベートした。そして
、ＰＢＳで洗浄した後、ＰＢＳに溶解したペプチドを加
え、３７℃、１５分間ブレインキュベートした。更に、
ウサギの抗ヒツジ赤血球血清で処理したヒツジ赤血球（
Ｓ ＲＢ Ｃ） １０’個ずつを各ウェルに加えて、３
７℃、４５分間インキュベートした。そして、１５５ｍ
Ｍ Ｎ！１４ｃｌ 、 ＩＯＩＩＭ Ｋ１１ＣＯ３及び
１＋ｍＭ ＥＤＴＡによって、マクロファージに亥食さ
れなかった５ＲＢＣを溶血、除去し、０．５％グルタル
アルデヒドを含むＰＢＳで細胞を固定化して、顕微鏡に
より５ＲＢＣを亥食しているマクロファージの割合を計
数した。
ペプチドのマクロファージに対する貧食能の活性化作用
は、ペプチドを添加しなかった場合の貧食能を１００と
して表した。その結果は次表に示す。
は、ペプチドを添加しなかった場合の貧食能を１００と
して表した。その結果は次表に示す。
前記表に見られる通り、タフトシ、ンでは３Ｘ１０−”
Ｍの濃度で最大値１４７を示したが、本発明のペプチド
では１０− ’ Ｍの濃度で最大値１５０を示した。し
たがって、本発明のペプチドはタフトシンより３倍強力
な貧食能活性化作用を有しているといえる。
Ｍの濃度で最大値１４７を示したが、本発明のペプチド
では１０− ’ Ｍの濃度で最大値１５０を示した。し
たがって、本発明のペプチドはタフトシンより３倍強力
な貧食能活性化作用を有しているといえる。
以下に実施例を示して本発明に係るペプチドの具体的な
化学合成法を説明する。
化学合成法を説明する。
実施例
２ｇのＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−樹脂（０，３ｍｅｑ
／ｇ、バイオサーチ社製）をＳＡＭ２（バイオサーチ社
製）ペプチド合成装置の反応槽に入れ、以下、標準プロ
トコルに従って合成を行った。すなわち、４５％トリフ
ルオロ酢酸、２６５％アニソールを含む塩化メチレン中
に２５分間攪拌してＢｏａ基を除去した後−１塩化メチ
レンにより洗浄し、１０％ジイソプロピルエチルアミン
を含む塩化メチレンによって中和し、再び塩化メチレン
により洗浄を行った。
／ｇ、バイオサーチ社製）をＳＡＭ２（バイオサーチ社
製）ペプチド合成装置の反応槽に入れ、以下、標準プロ
トコルに従って合成を行った。すなわち、４５％トリフ
ルオロ酢酸、２６５％アニソールを含む塩化メチレン中
に２５分間攪拌してＢｏａ基を除去した後−１塩化メチ
レンにより洗浄し、１０％ジイソプロピルエチルアミン
を含む塩化メチレンによって中和し、再び塩化メチレン
により洗浄を行った。
次に、１０ｍＪの０，４Ｍ Ｂｏｃ−Ｐｒｏのジメチル
７ ｆ ／Ｌ／ムアミド溶液とＬｏｌＩｌｌ、の０．４
Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液と
混合した後、先の反応槽に加え、室温で２時間攪拌して
Ｂｏｃ−Ｐｒ。
７ ｆ ／Ｌ／ムアミド溶液とＬｏｌＩｌｌ、の０．４
Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液と
混合した後、先の反応槽に加え、室温で２時間攪拌して
Ｂｏｃ−Ｐｒ。
をカップリングさせた。このＢｏｃ−Ｐｒｏをカップリ
ングさせた樹脂をジメチルフォルムアミド、塩化メチレ
ン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチ
レン、塩化メチレン、ジメチルフォルムアミドで順次洗
浄した後、２０１１１の０．３Ｍ Ｎ−アセチルイミダ
ゾールのジメチルフォルムアミｉ′溶液を反応槽に添加
して、３０分間反応させ、未反応のアミノ基のキャッピ
ングを行った。更に、この樹脂をジメチルフォルムアミ
ドにて洗浄し、［１ｏｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−
樹脂を得た。同様に、Ｂｏｃ−Ａｒｇ及びＢｏｃ−Ｇｌ
ｎを順次用いてカップリングを繰り返し、Ｂｏｃ−Ｇｉ
ｎ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｐｒｏ−Ａｒｇ−（Ｔｏｓ
）−樹脂を得た。
ングさせた樹脂をジメチルフォルムアミド、塩化メチレ
ン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチ
レン、塩化メチレン、ジメチルフォルムアミドで順次洗
浄した後、２０１１１の０．３Ｍ Ｎ−アセチルイミダ
ゾールのジメチルフォルムアミｉ′溶液を反応槽に添加
して、３０分間反応させ、未反応のアミノ基のキャッピ
ングを行った。更に、この樹脂をジメチルフォルムアミ
ドにて洗浄し、［１ｏｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−
樹脂を得た。同様に、Ｂｏｃ−Ａｒｇ及びＢｏｃ−Ｇｌ
ｎを順次用いてカップリングを繰り返し、Ｂｏｃ−Ｇｉ
ｎ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｐｒｏ−Ａｒｇ−（Ｔｏｓ
）−樹脂を得た。
なお、Ｂｏａ−Ｇｌｎのカップリングに際しては、Ｂｏ
ｃ−Ｇｉｎのジメチルフォルムアミド溶液に０．６Ｍ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加してニトリル
の形成を防いだ。
ｃ−Ｇｉｎのジメチルフォルムアミド溶液に０．６Ｍ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加してニトリル
の形成を防いだ。
以上のようにして得たＢｏｃ−Ｇｌｎ−ＡｒＢ（Ｔｏｓ
）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−（Ｔｏｓ）−樹脂を２０＋ｗ ｊ
！の１０％アニソールを含むフン化水素中で、０℃、１
時間攪拌してペプチドを樹脂から′Ｍｌｉｉ１１させた
。そして、フン化水素を減圧留去し、樹脂をエーテルで
洗浄した後、３０％酢酸にてペプチドを抽出した。この
ペプチドを３０％酢酸にて平衡化したバイオゲルＰ−２
カラム（２，６Ｘ８０ｃｍ）にてゲル濾過し、更にＯＤ
Ｓカラム（Ｃｏｓ＋ｌ１ｏ−ｓｉｌ ５ Ｃ＋ｓ、
２Ｘ２５ｃｍ）による逆相液体クロマトグラフィーによ
り精製して、本発明のペプチド１５０ｍｇの純品を得た
。
）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−（Ｔｏｓ）−樹脂を２０＋ｗ ｊ
！の１０％アニソールを含むフン化水素中で、０℃、１
時間攪拌してペプチドを樹脂から′Ｍｌｉｉ１１させた
。そして、フン化水素を減圧留去し、樹脂をエーテルで
洗浄した後、３０％酢酸にてペプチドを抽出した。この
ペプチドを３０％酢酸にて平衡化したバイオゲルＰ−２
カラム（２，６Ｘ８０ｃｍ）にてゲル濾過し、更にＯＤ
Ｓカラム（Ｃｏｓ＋ｌ１ｏ−ｓｉｌ ５ Ｃ＋ｓ、
２Ｘ２５ｃｍ）による逆相液体クロマトグラフィーによ
り精製して、本発明のペプチド１５０ｍｇの純品を得た
。
なお、本明細書中に用いた略号は、次の通りである。
ＡｒｇはＬ−アルギニン、ＧＩｎはし一グルタミン、Ｌ
ｙｓ はし−リジン、ＰｒｏはＬ−プロリン、Ｔｈｒは
し一スレオニンの各アミノ酸残基を表し、またＢｏｃは
ｔ−ブトキシカルボニル基、Ｔｏｓはトシル基をそれぞ
れ表す。
ｙｓ はし−リジン、ＰｒｏはＬ−プロリン、Ｔｈｒは
し一スレオニンの各アミノ酸残基を表し、またＢｏｃは
ｔ−ブトキシカルボニル基、Ｔｏｓはトシル基をそれぞ
れ表す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 式（ I ） Ｈ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ（ I ）で
示されるペプチド又はその塩。 （ただし、式中ＧｌｎはＬ−グルタミン、ＡｒｇはＬ−
アルギニン、ＰｒｏはＬ−プロリンを表わす）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63079869A JPH0813837B2 (ja) | 1988-03-31 | 1988-03-31 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63079869A JPH0813837B2 (ja) | 1988-03-31 | 1988-03-31 | 新規ペプチド |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01249800A true JPH01249800A (ja) | 1989-10-05 |
| JPH0813837B2 JPH0813837B2 (ja) | 1996-02-14 |
Family
ID=13702217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63079869A Expired - Fee Related JPH0813837B2 (ja) | 1988-03-31 | 1988-03-31 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0813837B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0692867A (ja) * | 1992-03-04 | 1994-04-05 | Honen Corp | 免疫系賦活剤 |
| JPH06312939A (ja) * | 1993-05-01 | 1994-11-08 | Honen Corp | 抗体産生増強作用を有する医薬組成物 |
| JP2010059130A (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Marusan I Kk | ペプチド及び自然細胞性免疫促進剤 |
-
1988
- 1988-03-31 JP JP63079869A patent/JPH0813837B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0692867A (ja) * | 1992-03-04 | 1994-04-05 | Honen Corp | 免疫系賦活剤 |
| JPH06312939A (ja) * | 1993-05-01 | 1994-11-08 | Honen Corp | 抗体産生増強作用を有する医薬組成物 |
| JP2010059130A (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Marusan I Kk | ペプチド及び自然細胞性免疫促進剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0813837B2 (ja) | 1996-02-14 |
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Legal Events
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