JPH0125724B2

JPH0125724B2 -

Info

Publication number: JPH0125724B2
Application number: JP54015303A
Authority: JP
Inventors: Shigetaka Iida; Tomio Iguchi; Hiroaki Munakata
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1979-02-13
Filing date: 1979-02-13
Publication date: 1989-05-19
Also published as: EP0014471B1; US4518591A; JPS55108403A; DE3062309D1; EP0014471A2; EP0014471A3

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は血糖降下剤に関するものである。詳し
くは、生薬である知母由来の新規な血糖降下剤に
関するものである。知母（Anemarrhenae rhizoma）は、ハナス
ゲ〔Anemarrhena asphodeloides Bunge
（Liliaceae）〕の根茎であり、生薬として周知の
ものである。また、知母の水性エキスは、経口投
与によつて、正常またはアロキサン糖尿ウサギお
よびアロキサンまたはインシユリン抗血清糖尿マ
ウスに対して血糖降下作用を示すことが知られて
いる。（木村正康著、日本臨床、25巻、2841頁、
1967年、参照）一方、従来血糖降下剤としては、いくつかの合
成経口薬およびインシユリンが使用されている
が、合成経口血糖降下剤には異常低血糖や乳酸ア
シドーシスを惹起する等の副作用があつたり、効
果の点で若年型糖尿病には無効であるといつた問
題があることが知られている。また、インシユリ
ンは最も有効とされているが、注射による投与が
必要であること、低血糖やアレルギー等の副作用
を伴うため、医師の厳重な管理下において、食事
および運動療法と共に使用されている。このよう
な現状から、年々増大の一途をたどる近代病の一
つといわれている糖尿病に対し、副作用が少なく
適法が容易で、かつ有効な治療剤の出現が待たれ
ている。これらの事情に鑑み、本発明者等は優れた血糖
降下剤を開発すべく鋭意研究したところ、知母由
来の新規な血糖降下剤を見出し、本発明に到達し
た。すなわち、本発明の要旨は知母の水抽出によつ
て得られる多糖をアセチル化して得られた下記の
理化学的性質を有する化合物およびそれを有効成
分とする血糖降下剤に存する。色および形状：淡黄色乃至白色で粉末状構成糖：マニトールおよびグルコースを主構
成糖とするアセチル基含有量：水抽出物を６単糖の多糖
とした場合の遊離水酸基（１つの単糖あたり３
つ）に対し、８〜100％溶媒に対する溶解性：水に不溶乃至難溶で、
クロロホルム、アルコールに易溶元素分析値：（C₂₆H₄₂O₂₁）ｎとして計算値（％）C45.22，H6.09 実験値（％）C46.54，H6.38，Ｎ＜0.3 （C₁₄H₂₂O₁₁）ｎとして計算値（％）C45.90，H6.01 実験値（％）C47.26，H6.24，Ｎ＜0.3 （C₈H₁₂O₆）ｎとして計算値（％）C47.06，H5.88 実験値（％）C47.37，H5.77，Ｎ＜0.3 （C₁₀H₁₄O₇）ｎとして計算値（％）C48.78，H5.69 実験値（％）C49.20，H5.73，Ｎ＜0.3 または（C₁₂H₁₆O₈）ｎとして計算値（％）C50.00，H5.56 実験値（％）C48.82，H5.56，Ｎ＜0.3 赤外部吸収スペクトル：第２図〜第６図に示
す通りである。水素核核磁気共鳴スペクトル：第７図〜第１
１図に示す通りである。以下に本発明を詳細に説明する。知母の水抽出物の製造は、常法に従つて行うこ
とができる。知母にはサポニン類が多く含まれているので、
水抽出に先立ち、メタノール、エタノール、プロ
パノール、ブタノールなどの低級アルコール類で
抽出操作を行い、これらの成分を除いておくこと
が好ましい。水抽出による抽出物は後述するように多糖類を
主とするものであり、抽出物に実質的な変化がな
い範囲で、抽出剤としての水に、他の溶媒や無機
物、有機物を加えてもよい。水抽出は通常常温で行うが、加温してもよい。得られた水抽出物は、アセチル化に先立ち、有
効成分を濃縮するため、低分子量成分を除去して
おくことが好ましい。低分子量成分を除去する方
法は、常法例えば透析により行うことができる。水抽出物のアセチル化も常法によつて行うこと
ができる。すなわち、例えば水抽出物の凍結乾燥物をピリ
ジン等のアミンまたはアルカリの存在下、無水酢
酸、塩化アセチル等と反応させ、常法により後処
理すれば目的とするアセチル化物が得られる。アセチル化の際のアミン、アルカリの種類や各
種試薬の量、反応条件等は、適宜選択決定すれば
よい。アセチル化の程度は、水抽出物を６単糖の多糖
とした場合の遊離水酸基（１つの単糖あたり３
つ）に対し、８％〜100％、好ましくは17％〜66
％が適当である。本発明に係る知母の水抽出物のアセチル化物
（以下本アセチル化物という）には、試験例にも
示した様に血糖降下作用があり、血糖降下剤、糖
尿病治療剤として有用である。本アセチル化物は低血糖の副作用がなく、毒性
もたいへん低い。また、本アセチル化物の血糖降
下作用発現の主原因はインシユリン活性の増強に
よるものではなく、グルコースの消化管からの吸
収を抑制し、グルコースの筋肉および脂肪組織へ
の取込みを促進し、グルコースの代謝を促進する
ものと考えられる。さらに、本アセチル化物は、その投与により血
中の乳酸量が増大することはなく、乳酸アシドー
シスのような副作用は有しない。本アセチル化物は、単独または薬剤として許容
されうる担体と複合して投与される。その組成
は、化合物の溶解度、化学的性質、投与経路、投
与計画等によつて決定される。たとえば、本アセチル化物は、でんぷん、乳
糖、白糖等の適当な賦形剤を含む錠剤、カプセル
剤または顆粒剤の形で経口投与される。また本アセチル化物に糖、コーンシロツプ、香
料、色素等を加えて脱水成型し固型化して、トロ
ーチまたはロゼンジのような口中錠として使用す
る。また溶液として経口投与する場合は、着色剤
および香料を加える。本アセチル化物の投与量は投与法、化合物の種
類、患者の状態により医師によつて決定される。治療量は一般に、経口投与で10〜1250mg／Kg／
日である。以上本発明を一般的に説明したが、以下の実施
例で本発明をさらに詳細に説明する。しかし、本
発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例
に限定されるものではない。実施例製造例 (i) 知母の水抽出物の製造市販生薬「知母」を粉砕し、粉砕品500ｇにメ
タノール800ｇを添加、常温で撹拌７時間行い一
夜放置後、更に７時間撹拌した。抽出混合物を濾
過し、500ｇのメタノールで濾滓を洗浄し、洗液
を濾液に合し第一回目の抽出液とした。濾滓に1000ｇのメタノールを添加し、第一回目
の抽出と同様撹拌抽出を行い、濾過し、500ｇの
メタノールで濾滓を洗浄し、洗液を濾液に合し第
二回目の抽出液とした。第１回、第２回目の抽出液を合しロータリーエ
バポレーターでメタノールを留去し、更に真空ポ
ンプで減圧下に乾固し、知母メタノール抽出物と
して140ｇを得た。上記メタノール抽出残に水２を添加し、６時
間撹拌すると抽出混合物は粥状となり、久保田社
製KR−200A型遠心分離機を用いて固型物を分離
し、抽出水層を得た。遠心分離機により分離され
た抽出残滓に水２を添加撹拌し、３時間後に遠
心分離機により抽出水層を得、先に得た抽出水層
と合し、凍結乾燥により水抽出成分109ｇを得た。 (ii) 知母水抽出成分の透析前記の如く得られた知母水抽出成分凍結乾燥品
を更に有効成分を濃縮する目的で透析を行つた。水抽出成分凍結乾燥品100ｇを400mlの水に溶解
しセルロース製の透析管に充填し、４の外液で
撹拌、８時間透析し、さらに新たな水４と外液
を交換し18時間透析を行つた。透析操作は４〜６
℃で行つた。内液を凍結乾燥し44ｇの透析内液成分の微黄色
の粉末を得た。外液を合し凍結乾燥し50ｇの透析外液成分を得
た。以下、この内液の凍結乾燥品をＡ−10と記す。Ａ−10についてその性状赤外スペクトル図を第
１図に示した。Ａ−10元素分析結果（重量％）ＣＨＮ分析値 42.42 6.22 ＜0.3 （C₆H₁₀O₅）ｎとしての計算値 44.45 6.22 Ａ−10を水に溶解アンスロン硫酸反応を行うと
深青色の呈色反応を示し本物質が糖類であること
を示す。更にＡ−10について加水分解を次の条件で行
い、単糖類をガスクロマトにより、定量を行い次
の結果を得た。Ａ−10を100mg取り、１−規定硫酸−ジオキサ
ン−水（ジオキサン−水（１：３）混合物に対し
硫酸を１規定溶解）10mlを加え、80℃、８時間反
応を行つた。1.5規定水酸化ナトリウム水溶液で
中和蒸発乾固し、残渣をピリジンにより抽出（20
ml×３回）し、抽出液を蒸発乾固し、内部標準物
質としてマニトール10mgをピリジン10mlに溶解し
た液を加え、このピリジン溶液0.1mlを採取し、
TMS（トリメチルシリル）化試薬0.1mlを添加し、
TMS化してガスクロによる同定定量を行つた。その結果、Ｄ−グルコース６％、Ｄ−マンノー
ス42％が上記加水分解条件で生成した事が示され
た。 (iii) Ａ−10のアセチル化誘導体の製造Ａ−10を多糖類（C₆H₁₀O₅）ｎとし、3n個の水
酸基に対し1n／４，1n／２，1n，3n／２及び3n
個のアセチル基が入つた５種類のアセチル化誘導
体Ａ−11〜15を合成した。Ａ−10をそれぞれ1.00ｇずつナス型フラスコに
とり、乾燥ピリジン500mlを加え更に無水酢酸0.5
ml、0.9ml、1.8ml、3.5ml及び30mlを徐々に添加
し、油浴中80℃で撹拌しながら８時間加熱した。
最初けん濁状態にあつた反応混合物は均一に溶解
した。反応終了後、ピリジン−無水酢酸溶液は減
圧で溶媒を除去した後クロロホルムに溶かし、ｎ
−ヘキサンを徐々に加えて微細なけん濁物を得
た。けん濁物を吸引ろ過し、ｎ−ヘキサン数mlで
10回以上洗い、ピリジンを完全に除いた。ろ過し
た微粉末は80℃で12時間減圧乾燥し、アセチル化
物Ａ−11〜15を得た。それぞれの収量、色および
形状については表１に示した。

【表】それぞれの赤外スペクトル図を第２図〜第６図
に、 ¹H₁−n.m.rスペクトルの図を第７図〜第１
１図に示した。 ¹H₁−n.m.rについてＡ−10のアセチル化物についてＨ元素分析値及
び ¹H₁−n.m.rのプロトン積分値を用い、τ＝
7.87 H₃C−Ｃ−のプロトン及びτ＝4.0〜7.4のプ
ロトンの積分比を出し、下記の（）式からアセ
チル基含有量を算出した。値は表２に示した。尚、Ａ−11〜Ａ−15の分子式の算出は、例えば
Ａ−11の場合、Ａ−10の分子式中の3n個の水酸
基のうち、1n／４個の水酸基のみアセチル化さ
れたものであるから、Ａ−10の分子式の表示を
C_6oH_7oO_2o（OH）_3oと書き改めるとＡ−11はC_6o
H_7oO_2o（OH）_11/4o（OCOCH₃）_o/4となり、整数表
示をして（C₂₆H₄₂O₂₁）ｎなる式が得られる。以下、同様にしてＡ−12〜Ａ−15の分子式を算
出した。Ａ−12（1n／２個の水酸基がアセチル化） C_6oH_7oO_2o（OH）_5/2o（OCOCH₃）_o/2 ＝（C₁₄H₂₂O₁₁）ｎＡ−13（ｎ個の水酸基がアセチル化） C_6oH_7oO_2o（OH）_2o（OCOCH₃）ｎ＝（C₈H₁₂O₆）ｎＡ−14（2n個の水酸基がアセチル化） C_6oH_7oO_2o（OH）_o（OCOCH₃）_2o ＝（C₁₀H₁₄O₇）_o Ａ−15（3n個の水酸基がアセチル化） C_6oH_7oO_2o（OCOCH₃）_3o ＝（C₁₂H₁₆O₈）ｎ（S₁／S₁＋S₂）×（Ｈ元素分析値／1.0079）×1/3
×43.045×100％（） (1) S₁：τ＝7.87で示されるアシル基（アセチル
基）のプロトンの積分値 (2) S₂：τ＝4.0〜7.4で示される水酸基のプロト
ンの積分値 (3) 1.0079はＨ元素の原子量である。 (4) 1/3は６単糖１分子中の遊離水酸基の数が３
個であるので、１個の水酸基当りのアセチル化
率を計算する為にかける必要がある。 (5) 43.045はアセチル基（CH₃CO−）の分子量
である。

【表】

【表】薬理作用の試験例１実験方法 (i) アロキサン糖尿マウスを使つた実験 ddY雄性マウス（平均体重、20ｇ）にアロキサ
ンを50mg／Kg静脈内投与し、２週間後に尿糖が陽
性のマウス（以下アロキサン糖尿マウスと呼ぶ）
のみ、使用前16時間絶食して実験に用いた。Ａ−
11〜15の投与直前の血糖（初期血糖）とＡ−11〜
15を200mg／Kg（Ａ−10については50mg／Kg）経
口投与した４時間後の血糖（最終血糖）をマウス
の眼静脈叢より採血し、百瀬法により測定した。 (ii) 正常マウスを使つた実験 ddY雄性マウス（平均体重、20ｇ）を使用前16
時間絶食して実験に用いた。以下の操作はは“ア
ロキサン糖尿マウスを使つた実験”と同様に行な
つた。２血糖降下作用 (i) アロキサン糖尿マウスを使つた実験

【表】

【表】 (ii) 正常マウスを使つた実験

【表】 (iii) 急性毒性雄性マウス（平均体重、20ｇ）を用い化合物は
0.5％トラガント懸濁状態で経口投与した。化合
物Ａ−11〜15は1250mg／Kgを、化合物Ａ−10は
4000mg／Kgを（これらの投与量は溶解性の上で最
大可能な投与量である。）投与した結果、いずれ
も７例中死亡例は無かつた。従つて、化合物Ａ−
11〜15のLD₅₀は1250mg／Kg以上であり、化合物
Ａ−10のLD₅₀は4000mg／Kg以上であると推定し
た。

【表】【図面の簡単な説明】

第１図〜第６図は、それぞれＡ−10〜Ａ−15の
赤外スペクトル図である。第７図〜第１１図は、
それぞれＡ−11〜Ａ−15の ¹H₁−n.m.rスペクト
ル図である。

Claims

【特許請求の範囲】１知母の水抽出によつて得られる多糖をアセチ
ル化して得られた下記の理化学的性質を有する化
合物。色および形状：淡黄色乃至白色で粉末状構成糖：マニトールおよびグルコースを主構
成糖とするアセチル基含有量：水抽出物を６単糖の多糖
とした場合の遊離水酸基（１つの単糖あたり３
つ）に対し、８〜100％溶媒に対する溶解性：水に不溶乃至難溶で、
クロロホルム、アルコールに易溶元素分析値：（C₂₆H₄₂O₂₁）ｎとして計算値（％）C45.22，H6.09 実験値（％）C46.54，H6.38，Ｎ＜0.3 （C₁₄H₂₂O₁₁）ｎとして計算値（％）C45.90，H6.01 実験値（％）C47.26，H6.24，Ｎ＜0.3 （C₈H₁₂O₆）ｎとして計算値（％）C47.06，H5.88 実験値（％）C47.37，H5.77，Ｎ＜0.3 （C₁₀H₁₄O₇）ｎとして計算値（％）C48.78，H5.69 実験値（％）C49.20，H5.73，Ｎ＜0.3 または（C₁₂H₁₆O₈）ｎとして計算値（％）C50.00，H5.56 実験値（％）C48.82，H5.56，Ｎ＜0.3 赤外部吸収スペクトル：第２図〜第６図に示
す通りである。水素核核磁気共鳴スペクトル：第７図〜第１
１図に示す通りである。２知母の水抽出によつて得られる多糖をアセチ
ル化して得られた下記の理化学的性質を有する化
合物を有効成分とする血糖降下剤。色および形状：淡黄色乃至白色で粉末状構成糖：マニトールおよびグルコースを主構
成糖とするアセチル基含有量：水抽出物を６単糖の多糖
とした場合の遊離水酸基（１つの単糖あたり３
つ）に対し、８〜100％溶媒に対する溶解性：水に不溶乃至難溶で、
クロロホルム、アルコールに易溶元素分析値：（C₂₆H₄₂O₂₁）ｎとして計算値（％）C45.22，H6.09 実験値（％）C46.54，H6.38，Ｎ＜0.3 （C₁₄H₂₂O₁₁）ｎとして計算値（％）C45.90，H6.01 実験値（％）C47.26，H6.24，Ｎ＜0.3 （C₈H₁₂O₆）ｎとして計算値（％）C47.06，H5.88 実験値（％）C47.37，H5.77，Ｎ＜0.3 （C₁₀H₁₄O₇）ｎとして計算値（％）C48.78，H5.69 実験値（％）C49.20，H5.73，Ｎ＜0.3 または（C₁₂H₁₆O₈）ｎとして計算値（％）C50.00，H5.56 実験値（％）C48.82，H5.56，Ｎ＜0.3 赤外部吸収スペクトル：第２図〜第６図に示
す通りである。水素核核磁気共鳴スペクトル：第７図〜第１
１図に示す通りである。