JPS5859921A

JPS5859921A - アマチヤヅルサポニンを含有する抗癌剤

Info

Publication number: JPS5859921A
Application number: JP56157925A
Authority: JP
Inventors: Tsunematsu Takemoto; 竹本　常松; Shigenobu Arihara; 在原　重信; Toshio Odajima; 小田島　粛夫; Katsuzo Nishikawa; 西川　克三; Shinichi Hayashi; 林　信一; Kiju Nishimoto; 西本　喜重; Noriko Takagi; 典子高木
Original assignee: ROOTO SEIYAKU KK; Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: ROOTO SEIYAKU KK; Rohto Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1981-10-02
Filing date: 1981-10-02
Publication date: 1983-04-09
Also published as: JPS6312445B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は抗癌作用を有する医薬的製剤、更に詳しくはダ
ンマラン骨格の２０位あるいは２１位の炭素原子に遊離
の水酸基を有するギペノサイド類を有効成分とする抗癌
剤組成物に関する。

る。しかし、前者は癌細胞と正常細胞との間における毒
性の差が少なく、副作用が非常に強い欠点がある。後者
においては、副作用の少ない、作用の緩和なものも見出
されてはいるが、未だ適格な効果を示すものは得られて
いない。本発明者等は。

副作用の少ないすぐれた抗癌剤を得る目的で種々検討を
重ねた結果、ダンマラン骨格の２０位あるいは２１位の
炭素原子に遊離の水酸基を有するギペノサイド類（アマ
チャヅルに含まれるサポニンの総称）にすぐれた抗癌作
用のあることを発見し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明はダンマラン骨核の２０位まだは２１位の
炭素原子に遊離の水酸基を有するギペノサイド類を有効
成分とする抗癌剤、特に一般式：〔式中　Ｒ１およびＲ
４はそれぞれ独立してＨまだは糖残基、Ｒ２はＣＨ３、
ＣＨＯまたはＣＨ２０Ｈ，Ｒ３はＨまたはＯＨ，Ｒ５は
ＣＨ３、ＣＨ２０ＨまたはＣＨ２０−糖残基、Ｒ６はＨ
またはＯＨ，波線（〜）はα結合またはβ結合を表わす
。ただし、ＲがＨでない場合はＲ５はＣＨ２０Ｈを表わ
す。〕で示きれるギペノサイド類を有効成分として含有する抗
癌剤を提供するものである。

ダンマラン骨格の２０位または２１位の炭素原子に遊離
の水酸基を有するギペノサイド類（以Ｆ活性ギベノサイ
ド類ともいう）は、主として兵庫県に産するアマチャヅ
ル（Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ　
Ｍａｋｉｎｏ＋ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉ　ｔａｃｅａｅ
　）植物）に多量含まれている。活性ギベノサイド類は
、上記植物の全草を１通常のサポニン抽出法によって抽
出することにより得ることができ、得られた全サポニン
は適当な分離法によって個々のギペノサイドに分離する
ことができる。アマチャヅルは我国をはじめとして、朝
鮮、中国、台湾、インドなどの山野に広く分布する雑草
であるが、我国に関する限り、そして本発明者らの知る
限り。

兵庫県所以外のアマチャヅルには、ダンマラン骨核の２
０位または２１位の炭素原子に遊離の水酸法を有するギ
ペノサイド類は少量しか、あるいはほとんど含まれてい
ない。

タン°マラン骨核の２０位の炭素原子に遊離の水酸基を
持つ活性ギベノサイドの具体例としては。

ギベノサイドＸＸＩＩＩ　（Ｒ１＝　−ｇｌｃ−ｇｌｃ
　、　Ｒ２＝　ＣＨ２０Ｈ，Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝Ｈ，Ｒ５
＝ＣＨ２６ｇ１ｃ、　Ｒ６＝Ｈ）。

’ｉへ／　＋イ）”ＸＸＩＶ　（Ｒ１＝−ｇｌｃ−ｇｌ
ｃ、　Ｒ２＝ＣＨ０゜Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝Ｈ，Ｒ５＝Ｒ５
＝ＣＨ２Ｏ，Ｒ６＝Ｈ）、ギベノサイドｘＸｖ（Ｒ１＝
−ａｒａ−ｇｌｃ、Ｒ２＝ｃＨｏ、Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝Ｈ
，Ｒ５＝Ｒ５＝ＣＨ２Ｏ，Ｒ６＝Ｈ）、ギヘノサイドＸ
ＸｖＩＩ（Ｒ１＝−ｇｌＣ−ｇＩＣ１Ｒ２−ＣＨ２０Ｈ
１Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝Ｈ，Ｒ５＝ＣＨ３，Ｒ６＝Ｈ）　、
ギペノサイトＸＸＶＩＩＩ　（Ｒ１＝−ｇｌｃ−ｇｌｃ
、　Ｒ２＝ＣＨ０，Ｒ３＝＝ｌ（、Ｒ４＝Ｈ，Ｒ５＝Ｃ
Ｈ３，Ｒ６＝Ｈ）、キヘノサイトｘＸＩＸ（Ｒ１−ｇｌ
ｃ−ｇＩｃ、Ｒ２＝ｃＨｏ、Ｒ３＝Ｈ１Ｒ４＝Ｈ，Ｒ５
＝ＣＨ３，Ｒ６＝Ｈ）等があり、また２１位の炭素に遊
離の水酸基を持つ具体例としては、ギペノサイドＸＸ　
Ｉ　Ｉ　（Ｒ１＝−ｇ　ｌ　ｃ　−ｇ　ｌ　ｃ　、　Ｒ
２＝ＣＨ２０Ｈ、Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝−ｇｌｃ　−ｘｙｌ
　、　Ｒ５＝ＣＨ２０Ｈ，Ｒ６＝Ｈ）、ギペノサイドＸ
ＸＶＩ　（Ｒ１＝−ａｒａ　−ｇｌｃ、Ｒ２＝ＣＨ０，
Ｒ３＝Ｈ，Ｒ４＝−ｇｌｃ、　Ｒ５＝ＣＨ２０Ｈ，Ｒ６
＝Ｈ）等があげられる（但し、ｇｌｃ＝グルコース。

ａｒａ−アラビノース、　　ｘｙ夏＝キシロース）。

２０位または２１位の炭素原子に遊離の水酸基を有する
ギベノサイド類は、後述する如く、癌細胞、例えば肝癌
、黒色腫瘍、子宮癌、肺癌等の細胞の増殖を顕著に抑制
する（第１図〜第４図参照）が、正常細胞には何等の影
響を与えず（第５図参照）、治療薬としてはすぐれた特
性を有するものである。また動物の腹水癌に対する投与
実験では、対照群、に対して明らかに延命効果を示す（
第６図参照）。

実際の治療に用いるには、前記の個々のギベノサイドを
含む製剤を用いることも可能ではあるが。

それらの混合物、あるいはそれらの混合物を多数含有し
ているアマチャヅルの抽出エキスを用いる方がより経済
的である。後者の場合は、前記した理由で、兵庫県産の
アマチャヅルを用いなければならず、それ以外のアマチ
ャヅルを用いた場合は。

得られるエキスが後述の実施例１に示した２０位または
２１位の炭素原子に遊離の水酸基を持たないキベノサイ
ド類、即ち非活性ギペノサイド類を主成分とするだめ、
その薬効を／／丘とんど期待することができない。兵庫
県量アマチャヅルの乾燥全草には約１〜２％、その水性
乾燥エキスには２〜１０％程度の活性ギベノサイドが含
まれている。

この抽出エキスの高速液体クロマトグラムを第７図に示
した（図中の符号ＸＸＩ　Ｉ　−ＸＸＩＸ　はそれぞれ
前記の活性ギペノサイドＸＸＩＩ　〜ＸＸＩＸ　　を表
わす。第１図〜第５図、第７図および第８図においても
同じ）。

アマチャヅルは、且つて、アマチャの代用として、ある
いは野菜としても用いられたこともあり。

その毒性はきわめて低く、その乾燥エキスの急性毒性を
ラットを用いた実験結果では、１０ｆ／ｋｙを＃＃経口
投与しても、何等の影響を示さず、ＬＤ５ｏの測定の限
界を越えている。また腹腔内投与においてもＬＤ５．１
．８５　ｆ／吟ときわめて低い毒性を示した。また８　
Ｉｔ’　／　ｋｇ　／　ｄａｙを１ケ月間連続経ロ投与
して、一般症状１体重、飼料摂取叶、飲水量、尿、血液
、組織重量、病理学的所見等をしらべたが、何等の異常
も認められなかった。

活性ギペノサイド類、あるいはそれらの混合物を含有す
るアマチャヅル水性エキスは、水溶性で、かつ安定であ
るので、経口的あるいは非経口的のいかんを問わず、種
々の剤型に製剤化することが可能である。すなわち、錠
剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注
射剤、軟膏剤などの剤型をとることができる。これ等の
製剤を製造するには、有効成分を乳糖、ブドウ糖、デン
プン、蔗糖、水飴、デキストリン、セルロース類、カン
テン、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム
、ケイ酸アルミニウム、タルク、アラビアゴム、ゼラチ
ン、トガラント、水、ベジタブルオイル、ポリアルキレ
ングリコール、流動ハラフィン、ラノリン、ワセリン等
の常用される医薬的担体と混合し、適宜の剤形にすれば
よい。必要に応じて、保存剤、安定化剤、乳化剤などを
使用することも考慮されてよい。本発明の抗癌剤組成物
の用量は、これを用いる患者の年令、疾病の状態、ある
いは体重等によって左右されるが、通常の成人に対して
経口投与する場合、サポニン換算量として、５０〜５０
０ｒｒ９を１日に投与すればよい。

また、腫瘍部位、筋肉内、腹腔内に同様の用量を投与し
てもよい。適応範囲としては、皮膚癌、子宮癌、肝癌、
肺癌、胃癌、口喉癌、膵癌等が挙げられる。

以下に本発明の実殉例を挙げるが、本発明がこれらの’
Ｊ４ＦｃＡ例に限定されるものと解釈してはならない。

実施例１ギペノサイド類の肝癌細胞に対する作用試料（ギペノサ
イド類）の調製：兵庫児童の新鮮なアマチャヅルの全草
１．３トンを大型抽出釜に入れ、熱湯で抽出した。抽出
液を減圧下でａ稲した後スプレードライヤーで乾燥し、
乾燥エキス２６吻を得た。

乾燥エキス５００ｙを水１，５ｔに溶解し、ｎ−ゲタノ
ールで抽出し、抽出液を減圧下でａ　ｉｘ？ｊ　Ｌ　−
ブタノールエキス６ｆＭを得た。このエキスを８０％メ
タノール１５０ｄに溶解し、クロマト用活性炭ｔｏｏｙ
を入れたカラムに吸着させ、８０％メタノール７ｔで洗
浄した後酢酸エチルとエタノールの混液（８：２）１０
ｔで溶出する両分を集め、溶媒を留去して淡黄色の粉末
としてギペノサイト混合物１９．２９を得だ。この混合
物の薄層クロマトグラム（シリカゲルの厚さ：’０．２
５＋ｍ、展開溶剤：クロロホルム／メタノ−／Ｌ／　／
水（６５／Ｂ　５／１０）１発色：１０％硫酸発色、１
００°ＣでツノＤ熱）を第８図に示した。

上で得たギベノサイド混合物を同量のシリカゲルと混合
し、６０倍量のシリカゲルカラムの上部ニ置キ、クロロ
ホルム／メタノール／水（６５：３５：Ｉ・０）混液で
溶出し、薄層クロマトグラフィーで溶出物をモニターし
ながら同一成分を含む両分を集めることにより各成分に
分離した。この操作を慄り返し、ギベノサイド混合物２
ＯｆからギヘノサイドＸＸＩＸ　　（ｍ、　ｐ、＝　１
７０〜１７２°Ｃ１ｒα〕Ｄ　（ＭｅＯＨ）　＝　＋　
８６．’９　）、ＸＸＶＩＩＩ　（ｍ、ｐ、＝１８１〜
１８８℃−［α］　Ｄ（ＭｅＯＨ）　＝　＋　２６．１
）　、　ＸＸＶＩＩ　（ｍ、Ｐ、−１６５〜Ｌ　６７°
Ｃ，［αＩＤ（ＭｅＯＨ）　＝＋　１０．８　）、　Ｘ
ＸＶＩ　　（ｍ、ｐ、〜２１２〜２１３℃、［αＩＤ（
ＭｅＯＨ）＝＋２１．５　）、ＸＸＶ　（ｍ、Ｐ、＝　
１６５〜１６７°Ｃ，［α３１）（Ｍｅ、０Ｈ）＝＋２
８．１）、ＸＸＩＶ　（ｍ、ｐ、−１８０〜１８２ｂＣ
１〔α〕Ｄ（ＭｅＯＨ）＝　＋　２１．６　）、ＸＸＩ
ＩＩ　（ｍ、ｐ−＝　１８２〜１８４°Ｃ１［αＩＤ（
Ｍ　ｅ　ＯＨ）＝　＋　４．、６）およびＸＸＩＩ（ｍ
、ｐ−＝　１９２〜１９４℃、Ｃ（ｔｌＤ（ＭｅＯＨ）
　−＋４．４）をそれぞれ６００ｑ、８４０ｍ９，５０
０〜．３００’Ｐ、１４００Ｉｎ？、８００’９．　８
００＃ｖオ、１：び２４０＃ｖの収量で得た。

上記と同様の操作により、石川県産アマチャヅルから下
記の表１に示すギペノサイド類（対照化合物）を得た。

表１　石川県産アマチャヅルから得られた２０位および
２１位の炭素原子に水酸基を持たないギ表１（つづき）これらの試料は下記の培養液に１０μｆ／−の濃度とな
る様に溶解した。

培蓼液：培養液は、ＨＡＭの合成培地Ｆ−１０およびＬ
−１５の３＝１の混液に牛胎児血清を加えて用いた。血
清濃度は、培養細胞数が最大値の１／２になるように予
め検討し、濃度を設定した。

操作法：試料の培養液溶液４．５４を径６０■の培養皿
に取り、これにモーリス肝癌細胞（ＭＨＩＣｌ）培養液
懸濁液０．５　、ｔ　（細胞数１×１０５個を含む）を
加え、５日間、３７°で、５％ＣＯ２−インキュベータ
ーで培養し、培養液を吸引して除き、生理食塩水で洗浄
後、０．１２５％トリプシンＨａｎｋ’ｓ　　溶液およ
び０．０１％ＥＤＴＡ生理食塩水溶液の１＝１の温容溶
液を剥離溶液として０．５．Ｚを加え、培養皿に付着し
た細胞を剥離し、更に９゜５−の生理食塩水を加えて細
編を懸濁させ、・−ルタールカウンターで細胞数を測定
Ｌ７’ｃ。

結果を第１図に示す。第１図から明らかな様に、対照に
用いた石川児童ギペノサイド類と比べて。

活性ギペノサイド類ＸＸＩＩＮＸＸＩＸ　は、いづれも
癌細胞の増殖を顕著に抑制した。

実施例１で得たギペノサイド類を用いて以下の実験を行
なった。

実施例２黒色腫瘍細胞に対する作用黒色腫瘍細胞（Ｂ１６）を用い、血清はＰＨＭ（１５％
馬血清、２．５％牛新生児血清）を用いた。

細胞剥離液は、０．１２５％トリプシンＨａｎｋ’ｓ　
　溶液を用いた。培養期間は、４日間とした。他は、実
施例１と同様に行なった（第２図）。この場合も実施例
１と同様、顕著な抑制作用がみられた。

なお、図中ＭＩＸは、活性ギペノサイド混合物を表わす
。

実施例３子宮癌細胞に対する作用子宮癌細胞（Ｈｅｌａ　Ｓ　８　）を用いるほかは、実
施例２と同様にして実験した。結果を第３図に示す。

実施例４肺癌細胞に対する作用肺癌細胞（８ＬＬ）を用いた。血清は１０％牛脂児血清
を用いた。他は実施例２と同様に行なった（第４図）。

実施例５正常細胞に対する作用Ｗｉｓｉｅｒ系ラットの肝臓から単離した正常細胞を用
いた。他は実施例４と同様に行なった（第５図）。図か
ら明らかな様に、活性ギペノサイドは正常細胞には作用
しない。

実施例６腹水癌に対する作用２−メチルコランスレンヲ用いて白色マウス（ＢＡＬ’
Ｂ／Ｃ）に誘導した腫瘍の腹水懸濁液０．５４（ｌｘ１
０６個の腫瘍細胞を含む）を白色マウス（ＢＡＬＢ／Ｃ
５ｒＣＬ、６週令、雄）の腹腔内に注入し、翌日より隔
日に試料（ギペノサイドＸＸＶＩＩ）の生理食塩水溶液
（濃度＝４０り／　５０　ｒ、ｔまタハ８０ＩＩｖ１５
０．ｔ　）　０．５．ｇを腹腔内に注入しく投与量ニー
２０ｍ’ｉ／吟および４０ｍｙ／ｋｙ　）　、　−ｒウ
スの生存日数を調べた。対照群には生理食塩水を同様に
注入した。結果を第６図に示す。図中、１は対照群、２
は２０／Ｎｉ／にり投与群、３は４０〜／ｋｇ投与群を
表わす。図から明らかな様に、活性ギペノサイド投与群
には明らかな延命効果が認められた。

以下に本発明の抗癌剤の処方例を挙げる。

実施例７ギペノサイドＸＸＶＩＩ　　　　　　　　　２０．　Ｏ
ｇ乳糖　　　　　　　　　　　　　　　４９．６ｇ微結
晶セルロース　　　　　　　　　　４９６ｇコーンスタ
ーチ　　　　　　　　　　　　０．４ｇステアリン酸マ
クネシウム０．４ｇ上記の薬剤の処方量を■型混合機でよく混合し。

ＪＩＳ８２メツシュ篩にて篩過後、打錠機にてスラッグ
錠ヲｉｌし、オツシレーターで粗砕、選粒して顆粒化す
る。当該顆粒１２０．０ｙを用い、常法に従って打錠し
、裸錠４００錠を製する。１錠（３００〜）当りギペノ
サイドＸＸＶＩＩ５０〜を含有する。

実施例８キヘノサイトｘＸＶ２５．Ｏｙ微結晶セルロース　　　　　　　　　３７．５　ＦＩコ
ーンスターチ　　　　　　　　　　　１８．５ｆ重質ケ
イ酸アルミニウム１８．！ＩＭステアリン酸マグネシウム　　　　　　　０．５ｇ上記
の薬剤の処方量をよく混合し、直接打錠機により裸錠５
００錠を製する。１錠（２００１Ｉ９）当りギペノサイ
ドＸＸＶ　５０　ｔｒｑを含有する。

実施例９実施例１で得だ粉末ギペノサイド混合物２５、Ｏｆ乳糖　　　　　　　　　　　　　　　７５．０９上記の
薬剤の処方量をよく混合し°、カプセル充填機によりカ
プセル５００個を製する。カプセル１個当り、当該ギベ
ノサイド混合物５０／ｎｇを含有する。

実施例１Ｏ主として活性ギペノサイドを含有するアマチャヅル乾燥エキス　　　　　　５０．０ｇ乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　２５．０ｙ上記の薬剤の
処方量をよく混合し、カプセル充填機によりカプセ／ｌ
／２５０個を製する。カプセル１個当り当該エキス２０
０ｆを含有する。

実施例１１主として活性ギペノサイドを含有するアマチャヅル乾燥エキス　　　　　　５０．０ｆ乳糖　
　　　　　　　　　　　　　　９９．０Ｆ／ステアリン
酸マグネシウム　　　　　　１．ＯＦ！上記の薬剤の処
方量をよく混合し、乾式顆粒機により顆粒１５０ｆＩを
製造する。顆粒３ｙ当り当該エキス１ｇを含有する。

実施例１２ギベノサイド后（ＶＩＩ　　　　　　　　　０．２ｆ生
理食塩水　　　　　　　　　　全量１００ｄギペノサイ
ドＸＸＶＩＩを生理食塩水に溶解し、ミリポアフィルタ
−で沖過し、加熱滅菌して注射剤とする。

【図面の簡単な説明】

第１図は活性ギベノサイド類およびその他の非活性ギペ
ノサイド類の肝癌細胞に対する作用を表わすグラフ、第
２図〜第５図は活性ギベノサイド類のそれぞれ皮膚癌細
胞、子宮癌細胞、肺癌細胞および正常細胞に対する作用
を表わすグラフ、第６図はギベノサイドＸＸＩＩの、腹
水癌マウスに対する延命効果を表わすグラフ、第７図は
兵庫児童アマチャヅルの抽出エキスの高速液体クロマト
グラム、第８図は活性ギベノサイド混合物の薄層クロマ
トグラムである。１・・・対照群、２・・・２０η／吻投与群、３・・・
４０＃ｖ／ｋｇ投与群、ＭＩＸ・・・活性ギペノサイド
混合物。小田島粛夫代理人弁理士青山　葆　　外１名

Claims

【特許請求の範囲】１、ダンマラン骨核の２０位または２１位の炭素原子に
遊離の水酸基を有するギベノサイド類を有効成分として
含有する抗癌剤。２、該ギペノサイド類が一般式：［式中、Ｒ１およびＲ４はそれぞれ独立してＨまたは糖
残基　Ｒ２はＣＨ３，ＣＨＯまたはＣＨ２０Ｈ，Ｒ３は
ＨまたはＯＨ，Ｒ５はＣＨ３、ＣＨ２０ＨまたはＣＨ２
０−糖残基　Ｒ６はＨまたはＯＨ１波線（〜）はα結合
またはβ結合を表わす。ただし、ＲがＨでない場合はＲ
５はＣＨ２０Ｈを表わす。］で示される化合物またはそれらの混合物である第１項に
記載の抗癌剤。