JPH01273594A - 殺カビ性抗生物質イソボンクレキン酸およびその製法 - Google Patents
殺カビ性抗生物質イソボンクレキン酸およびその製法Info
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- JPH01273594A JPH01273594A JP1016523A JP1652389A JPH01273594A JP H01273594 A JPH01273594 A JP H01273594A JP 1016523 A JP1016523 A JP 1016523A JP 1652389 A JP1652389 A JP 1652389A JP H01273594 A JPH01273594 A JP H01273594A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C59/40—Unsaturated compounds
- C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はインポンフレキン酸と呼ばれる新規な殺カビ性
抗生物質ならびに細菌培養株Ｙ−８４，０７００（西ド
イツ微生物収集機関に１９８７年１１月１７日寄託、寄
託番号ＤＳ！Ｊ４３０５）およびその突然変異体および
変種からのその製法に関する。
抗生物質ならびに細菌培養株Ｙ−８４，０７００（西ド
イツ微生物収集機関に１９８７年１１月１７日寄託、寄
託番号ＤＳ！Ｊ４３０５）およびその突然変異体および
変種からのその製法に関する。
インボンフレキン酸（Ｉａ）は長鎖脂肪酸の誘導体とし
て記載されうる。インポンフレキン酸は式 で示される３−カルボキシメチル−１７−メドキシー６
．１８．２１−１−リメチルドコサー２Ｅ、４Ｅ、８Ｅ
。
て記載されうる。インポンフレキン酸は式 で示される３−カルボキシメチル−１７−メドキシー６
．１８．２１−１−リメチルドコサー２Ｅ、４Ｅ、８Ｅ
。
１２Ｅ、１４Ｚ、１８Ｚ、２０Ｅ−へブタエン−１，２
２−ジ酸として化学的に記載されうる。文献中に記載さ
れるこの群のもう一つの抗生物質は対応する△２．３−
Ｚ異性体ポンフレキン酸（ＩＩ ａ）である。
２−ジ酸として化学的に記載されうる。文献中に記載さ
れるこの群のもう一つの抗生物質は対応する△２．３−
Ｚ異性体ポンフレキン酸（ＩＩ ａ）である。
ポンフレキン酸はＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２６．５
９９３（１９７０）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２７．
１８３９（１９７１）、Ｔｅｔｒａ−ｈｅｄｒｏｎ ２
９，１５４１（１９７３）およびＣＲＣＨａｎｄｂｏｏ
ｋ ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、
ｖｏｌｕｍｅ Ｖｌ、 ３９３−４０１頁の”ｆａｔ
ｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”の章に記載
されている。ポンフレキン酸を産生する細菌はシュード
モナス・ココベナンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｏ
ｃｏ−ｖｅｎａｎｓ）と記載されている。
９９３（１９７０）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２７．
１８３９（１９７１）、Ｔｅｔｒａ−ｈｅｄｒｏｎ ２
９，１５４１（１９７３）およびＣＲＣＨａｎｄｂｏｏ
ｋ ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、
ｖｏｌｕｍｅ Ｖｌ、 ３９３−４０１頁の”ｆａｔ
ｔｙ ａｃｉｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”の章に記載
されている。ポンフレキン酸を産生する細菌はシュード
モナス・ココベナンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｏ
ｃｏ−ｖｅｎａｎｓ）と記載されている。
しかしながらそこに記載されるデータから、インポンフ
レキン酸はポンフレキン酸およびすべての他の知られた
長鎖脂肪酸抗生物質とは相異することが明らかである。
レキン酸はポンフレキン酸およびすべての他の知られた
長鎖脂肪酸抗生物質とは相異することが明らかである。
インボンフレキン酸の取得に用いられるオイバクテリウ
ム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）培養株ＮＯ，Ｙ−８４，
０７００はインドのマハラシュトラ（Ｍａｈａｒａｓｈ
ｔ−ｒｅ）州、プーナ（Ｐｏｏｎａ）で収集された土壌
試料から単離されそしてオイバクテリウムであることが
判明した。
ム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）培養株ＮＯ，Ｙ−８４，
０７００はインドのマハラシュトラ（Ｍａｈａｒａｓｈ
ｔ−ｒｅ）州、プーナ（Ｐｏｏｎａ）で収集された土壌
試料から単離されそしてオイバクテリウムであることが
判明した。
本発明はさらにこの新規抗生物質であるインボンフレキ
ン酸の製法にも関する。この方法は細菌培養株ＮＯ，Ｙ
−８４，０７００（ＤＳＭ４３０５） 、その突然変異
体または変種を、炭素源および窒素源ならびに無機栄養
塩および痕跡元素を含有する栄養培地上で好気性条件下
に培養しそしてこの抗生物質を培養ブロスから単離し精
製することからなる。
ン酸の製法にも関する。この方法は細菌培養株ＮＯ，Ｙ
−８４，０７００（ＤＳＭ４３０５） 、その突然変異
体または変種を、炭素源および窒素源ならびに無機栄養
塩および痕跡元素を含有する栄養培地上で好気性条件下
に培養しそしてこの抗生物質を培養ブロスから単離し精
製することからなる。
好ましい炭素源の例をあげれば、グルコース、スクロコ
ース、澱粉またはデキストリンである。
ース、澱粉またはデキストリンである。
グルコースが特に好ましい炭素源である。窒素源として
は大豆ひされり、トリプトン、酵母エキス、牛肉エキス
、麦芽エキス、コーンステイープリカーまたはペプトン
、または無機物質例えばアンモニウム塩が用いられるの
が好ましい。
は大豆ひされり、トリプトン、酵母エキス、牛肉エキス
、麦芽エキス、コーンステイープリカーまたはペプトン
、または無機物質例えばアンモニウム塩が用いられるの
が好ましい。
特に好都合に使用される窒素源は麦芽エキスであるかま
たは麦芽エキスと１種またはそれ以上の他の窒素源との
組み合せである。ありうる無機栄養塩の例をあげれば塩
化ナトリウム、燐酸水素／二水素カリウムまたは炭酸カ
ルシウムである。痕跡元素としては例えば鉄、マンガン
、銅、亜鉛、コバルトの塩または他の重金属の塩が適当
である。
たは麦芽エキスと１種またはそれ以上の他の窒素源との
組み合せである。ありうる無機栄養塩の例をあげれば塩
化ナトリウム、燐酸水素／二水素カリウムまたは炭酸カ
ルシウムである。痕跡元素としては例えば鉄、マンガン
、銅、亜鉛、コバルトの塩または他の重金属の塩が適当
である。
培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００は約２４°Ｃ〜３０°
ＣおよびｐＨ６〜８で培養されるのが好ましい。温度約
２６°Ｃ（±ｌ’ｃりおよびｐＨ約６．５であるのが特
に好ましい。
ＣおよびｐＨ６〜８で培養されるのが好ましい。温度約
２６°Ｃ（±ｌ’ｃりおよびｐＨ約６．５であるのが特
に好ましい。
発酵を約６６〜９６時間後に停止するのが好都合で、そ
の時間後に本発明による抗生物質が最高収率で得られる
。発酵は好ましくは深部発酵として振盪フラスコ中なら
びに実験室発酵基中で約９０時間にわたり実施される。
の時間後に本発明による抗生物質が最高収率で得られる
。発酵は好ましくは深部発酵として振盪フラスコ中なら
びに実験室発酵基中で約９０時間にわたり実施される。
この発酵器には場合により泡止め剤が添加されうる（例
えばＤｅｓｍｏｐｈｅｎ■、ポリオール、Ｂａｙｅｒ
ＡＧ、 Ｌｅｖｅｒ−ｋｕｓｅｎ）。発酵の進行およ
び本発明によるイソボンフレキン酸の形成は知られた寒
天プレート拡散試験を用い、スタフィロコッカス・オー
レウス（Ｓｔａｐｈ、 ａｕｒｅｕｓ）２０９ Ｐ１ア
スペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉ
ｇｅｒ）およびトリコフィトン０メンタグロフイテス（
Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎ−ｔａｇｒｏｈｙｔ
ｅｓ）に対する培養ブロスの抗菌活性を測定することに
より追跡されうる。
えばＤｅｓｍｏｐｈｅｎ■、ポリオール、Ｂａｙｅｒ
ＡＧ、 Ｌｅｖｅｒ−ｋｕｓｅｎ）。発酵の進行およ
び本発明によるイソボンフレキン酸の形成は知られた寒
天プレート拡散試験を用い、スタフィロコッカス・オー
レウス（Ｓｔａｐｈ、 ａｕｒｅｕｓ）２０９ Ｐ１ア
スペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉ
ｇｅｒ）およびトリコフィトン０メンタグロフイテス（
Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎ−ｔａｇｒｏｈｙｔ
ｅｓ）に対する培養ブロスの抗菌活性を測定することに
より追跡されうる。
かくして形成された培養ブロスにおいてイソポンフレキ
ン酸は培養か液中にのみ存在し、これは例えは遠心分離
により菌糸体から分離される。インポンフレキン酸はポ
リマー性吸着物質例えばダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ）
ＨＰ −２００（三菱化成製品）またはアンバーライ
ト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２＠ （Ｒｏｈｍ
ａｎｄ Ｈａａｓ ｃｏ、、 ＵＳＡ）上でのクロマト
グラフィー、または水非混和性溶媒例えば酢酸エチルま
たはクロロホルムでの抽出、または例えばポリスチレン
ポリアミン官能性を有する交換体（例えばアンバーライ
トＩＲＡ ６８ＣＱ−■）上で好ましくは塩基性ｐＨ
でのアニオン交換クロマトグラフィーによるのような１
種またはそれ以上の知られた方法により培養が液から得
られうる。好都合に用いられるのはダイヤイオンＨＰ−
２０への吸着、続いて例えばメタノール、アセトニトリ
ルのような適当な有機溶媒またはそれら溶媒の水性混合
物を使用しての前記化合物の脱着である。インボンフレ
キン酸を溶離するにの好ましい溶媒はＭｅＯＨ／ Ｈｚ
Ｏ（１： ｌ ）である。活性溶出液から溶媒を除去す
ることにより粗製インポンフレキン酸が得られる。この
ものは例えばシリカゲル、７性シリカゲル、珪酸マグネ
シウムゲル例えば７０リシル（Ｆｌｏｒｉ−ｓｉｌ＠
） （Ｆｌｏｒｉｄｉｎ Ｃｏ、、 Ｖａ、 ＵＳＡ）
、セルロースまたは親脂性ゲルが過物質例えばセファデ
ックス５ｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２００（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉ−ｃａｌｓ ＡＢ、 Ｓ
ｗｅｄｅｎ）のような物質でのクロマトグラフィーによ
りさらに精製されうる。この目的に好都合に用いられる
方法は溶離にＣＨＣｌ２ ｓ ／ １ＪｅＯＨ混合物を
用いるシリカゲルでの粗製インポンフレキン酸のクロマ
トグラフィーであり、その際ＭｅＯＨ濃度は各段階で約
ｌＯ％ずつ段階的に高められる必要がある。インポンフ
レキン酸を含有する溶出液（バイオアッセイにより測定
）を濃縮しそして例えば沸点４０〜６０°Ｃの石油エー
テルで磨砕するとそれにより半純粋化合物が得られる。
ン酸は培養か液中にのみ存在し、これは例えは遠心分離
により菌糸体から分離される。インポンフレキン酸はポ
リマー性吸着物質例えばダイヤイオン（Ｄｉａｉｏｎ）
ＨＰ −２００（三菱化成製品）またはアンバーライ
ト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２＠ （Ｒｏｈｍ
ａｎｄ Ｈａａｓ ｃｏ、、 ＵＳＡ）上でのクロマト
グラフィー、または水非混和性溶媒例えば酢酸エチルま
たはクロロホルムでの抽出、または例えばポリスチレン
ポリアミン官能性を有する交換体（例えばアンバーライ
トＩＲＡ ６８ＣＱ−■）上で好ましくは塩基性ｐＨ
でのアニオン交換クロマトグラフィーによるのような１
種またはそれ以上の知られた方法により培養が液から得
られうる。好都合に用いられるのはダイヤイオンＨＰ−
２０への吸着、続いて例えばメタノール、アセトニトリ
ルのような適当な有機溶媒またはそれら溶媒の水性混合
物を使用しての前記化合物の脱着である。インボンフレ
キン酸を溶離するにの好ましい溶媒はＭｅＯＨ／ Ｈｚ
Ｏ（１： ｌ ）である。活性溶出液から溶媒を除去す
ることにより粗製インポンフレキン酸が得られる。この
ものは例えばシリカゲル、７性シリカゲル、珪酸マグネ
シウムゲル例えば７０リシル（Ｆｌｏｒｉ−ｓｉｌ＠
） （Ｆｌｏｒｉｄｉｎ Ｃｏ、、 Ｖａ、 ＵＳＡ）
、セルロースまたは親脂性ゲルが過物質例えばセファデ
ックス５ｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２００（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉ−ｃａｌｓ ＡＢ、 Ｓ
ｗｅｄｅｎ）のような物質でのクロマトグラフィーによ
りさらに精製されうる。この目的に好都合に用いられる
方法は溶離にＣＨＣｌ２ ｓ ／ １ＪｅＯＨ混合物を
用いるシリカゲルでの粗製インポンフレキン酸のクロマ
トグラフィーであり、その際ＭｅＯＨ濃度は各段階で約
ｌＯ％ずつ段階的に高められる必要がある。インポンフ
レキン酸を含有する溶出液（バイオアッセイにより測定
）を濃縮しそして例えば沸点４０〜６０°Ｃの石油エー
テルで磨砕するとそれにより半純粋化合物が得られる。
かくして得られた半純粋イソポンクレキン酸は変性シリ
カゲル例えば市販の製品であるＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ＠
ＲＰ−１８（ジメチルオクタデシルシリル化シリカゲ
ル、 ５０μ、 Ｍｅｒｃｋ社、 ｌ）Ｈ−ｍｓｔａｄ
ｔ）上で数回クロマトグラフィーすることによりさらに
精製されうる。Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１８物質
の溶離に適当な例えば１ＪｅＯＨ，アセトニトリル、ア
セトンまたはそれらの水性混合物のような溶媒のうち、
Ｍ ｅ ＯＨ／ Ｈ２０混合物が溶媒として使用される
のが好ましく、その場合ＭｅＯＨ濃度は段階的に約２５
％ずつ高められねばならない。有機溶媒は活性溶出液か
ら好ましくは真空下に除去されそして次に水を除去する
ために凍結乾燥するとそれによりインポンフレキン酸が
白色粉末として得られる。
カゲル例えば市販の製品であるＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂ＠
ＲＰ−１８（ジメチルオクタデシルシリル化シリカゲ
ル、 ５０μ、 Ｍｅｒｃｋ社、 ｌ）Ｈ−ｍｓｔａｄ
ｔ）上で数回クロマトグラフィーすることによりさらに
精製されうる。Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１８物質
の溶離に適当な例えば１ＪｅＯＨ，アセトニトリル、ア
セトンまたはそれらの水性混合物のような溶媒のうち、
Ｍ ｅ ＯＨ／ Ｈ２０混合物が溶媒として使用される
のが好ましく、その場合ＭｅＯＨ濃度は段階的に約２５
％ずつ高められねばならない。有機溶媒は活性溶出液か
ら好ましくは真空下に除去されそして次に水を除去する
ために凍結乾燥するとそれによりインポンフレキン酸が
白色粉末として得られる。
本発明はさらにイソポンフレキン酸を含有スる薬剤にも
関する。薬剤中には前記活性化合物の他に適応症が同じ
かまたは異なる他の活性物質も含有されうる。さらに、
助剤および／または付形剤も薬剤中に含有でき、これら
が活性化合物と共に適当な投与形となされる。投与形態
は薬剤の投与様式例えば外部使用または経口使用、また
は注射により使用の如何による。
関する。薬剤中には前記活性化合物の他に適応症が同じ
かまたは異なる他の活性物質も含有されうる。さらに、
助剤および／または付形剤も薬剤中に含有でき、これら
が活性化合物と共に適当な投与形となされる。投与形態
は薬剤の投与様式例えば外部使用または経口使用、また
は注射により使用の如何による。
本発明による薬剤の使用量はその薬剤の投与形態および
患者の状態ならびに体重のような種々の因子の如何によ
るものであり、そして場合により経験的に計算されるべ
きである。本発明による薬剤は種々の疾患の治療に適し
、特にカビの感染により惹起されるかまたはカビの感染
が関与する疾患の治療に適する。
患者の状態ならびに体重のような種々の因子の如何によ
るものであり、そして場合により経験的に計算されるべ
きである。本発明による薬剤は種々の疾患の治療に適し
、特にカビの感染により惹起されるかまたはカビの感染
が関与する疾患の治療に適する。
イソボンフレキン酸は容易に対応するトリアルキルエス
テルに変換でき、この化合物も本発明に包含される。カ
ルボン酸のカルボン酸エステルへの変換は一般に知られ
ておりそして例えばＯｒｇａｎｉｋｕｍ、 ＶＥＢ Ｄ
ｅｕｔｓｃｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ ｄｅｒ Ｗｉｓ−ｓ
ｅｎｓｃｈａｆ ｔｅｎ、第１５版、 Ｂｅｒｌｉｎ
１９７７、４９６頁以下、に記載されている。エステル
官能基中に１〜４ｆｆｌｌの炭素原子を有するトリアル
キルエステルが好ましく、イソポンフレキン酸のトリメ
チルエステルにか特に好ましい。後者は例えば、インボ
ンフレキン酸をＣＨ２Ｎ２／ ＭｅＯＨ／ ＨｚＯ／ジ
エチルエーテル混合物を用い好ましくは冷却下にエステ
ル化することにより調整されうる。反応生成物は例えば
クロマトグラフィー法により精製されうる。
テルに変換でき、この化合物も本発明に包含される。カ
ルボン酸のカルボン酸エステルへの変換は一般に知られ
ておりそして例えばＯｒｇａｎｉｋｕｍ、 ＶＥＢ Ｄ
ｅｕｔｓｃｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ ｄｅｒ Ｗｉｓ−ｓ
ｅｎｓｃｈａｆ ｔｅｎ、第１５版、 Ｂｅｒｌｉｎ
１９７７、４９６頁以下、に記載されている。エステル
官能基中に１〜４ｆｆｌｌの炭素原子を有するトリアル
キルエステルが好ましく、イソポンフレキン酸のトリメ
チルエステルにか特に好ましい。後者は例えば、インボ
ンフレキン酸をＣＨ２Ｎ２／ ＭｅＯＨ／ ＨｚＯ／ジ
エチルエーテル混合物を用い好ましくは冷却下にエステ
ル化することにより調整されうる。反応生成物は例えば
クロマトグラフィー法により精製されうる。
以下の実施例により本発明を説明する。
実施例 １
土壌からの培養株Ｙ−８４，０７００の単離ａ）単離栄
養培地の組成 ナトリウムプロピオネート ４ｇグリセリン
１０ｍ１ＫＨ２Ｐ０４
１ｇＮａ、ＨＰＯ４ｈ ｌＪｇｓｏ、 ・ＩＨｚＯ１００ｍｇ Ｎ８４ＮＯ！ ２ｇ寒天
１５ｇ脱ミネラル水
ＩＱフクロムフェニコール
５０ｍｇｐＨ６・５ 上記栄養培地の調整終了時にタロラムフェニコールを９
５％エタノール１０ｍ１２中に溶解して加え、栄養培地
と混合する。この栄養培地を１２１°Ｃで１０分間滅菌
する。滅菌に先立ち、ｐＨを６．５に調整する。
養培地の組成 ナトリウムプロピオネート ４ｇグリセリン
１０ｍ１ＫＨ２Ｐ０４
１ｇＮａ、ＨＰＯ４ｈ ｌＪｇｓｏ、 ・ＩＨｚＯ１００ｍｇ Ｎ８４ＮＯ！ ２ｇ寒天
１５ｇ脱ミネラル水
ＩＱフクロムフェニコール
５０ｍｇｐＨ６・５ 上記栄養培地の調整終了時にタロラムフェニコールを９
５％エタノール１０ｍ１２中に溶解して加え、栄養培地
と混合する。この栄養培地を１２１°Ｃで１０分間滅菌
する。滅菌に先立ち、ｐＨを６．５に調整する。
ｂ）土壌の添加および単離
プーナ（Ｐｏｏｎａ）で収集された土壌試料を乾燥しそ
して粉砕し、たもの０．０５ｇを滅菌ペトリ皿（直径７
．６２ｃｍ （６インチ））の中央に入れそして滅菌蒸
留水１滴で湿らせる。前記栄養培地を４５°Ｃに冷却し
、ペトリ皿に注ぎいれ（約８０ｍ（２）そして充分に撹
拌する。土壌と栄養培地の混合物を落ち着かせそして２
６°Ｃ（±１°Ｃ）で２週間インキュベートする。この
ペトリ皿を規則的間隔で検査して増殖する微生物から培
養株Ｙ−８４，０７００を単離する。
して粉砕し、たもの０．０５ｇを滅菌ペトリ皿（直径７
．６２ｃｍ （６インチ））の中央に入れそして滅菌蒸
留水１滴で湿らせる。前記栄養培地を４５°Ｃに冷却し
、ペトリ皿に注ぎいれ（約８０ｍ（２）そして充分に撹
拌する。土壌と栄養培地の混合物を落ち着かせそして２
６°Ｃ（±１°Ｃ）で２週間インキュベートする。この
ペトリ皿を規則的間隔で検査して増殖する微生物から培
養株Ｙ−８４，０７００を単離する。
実施例 ２
培地株Ｙ−８４，０７００の培養
培養用培地の組成
培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００を下記組成のサブロー
（５ａｂｏｕｒａｕｄ）グルコース寒天上で培養する。
（５ａｂｏｕｒａｕｄ）グルコース寒天上で培養する。
グルコース ４ｈペプトン
１０９Ｎａ、ｔ（Ｐｏ、
１ｇ寒天
１５ｇ脱ミネラル水
１１２ｐＨ６，５ 構成分を加温により注意深く溶解させたのち溶流を試験
管に分配しそして次に１２ＦＣで２０分間滅菌する。試
験管を冷却しそして凝固するまで傾斜位置で貯蔵する。
１０９Ｎａ、ｔ（Ｐｏ、
１ｇ寒天
１５ｇ脱ミネラル水
１１２ｐＨ６，５ 構成分を加温により注意深く溶解させたのち溶流を試験
管に分配しそして次に１２ＦＣで２０分間滅菌する。試
験管を冷却しそして凝固するまで傾斜位置で貯蔵する。
増殖した培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００をワイヤール
ープを用い斜面寒天上に画線塗布し、これを良好な増殖
が観察されるまで２６°Ｃ（±１００）でインキニーベ
ートする。この良好に増殖した培養物を冷蔵庫に貯蔵す
る。
ープを用い斜面寒天上に画線塗布し、これを良好な増殖
が観察されるまで２６°Ｃ（±１００）でインキニーベ
ートする。この良好に増殖した培養物を冷蔵庫に貯蔵す
る。
実施例 ３
振盪フラスコ中における培養株Ｙ−８４，０７００の発
酵 接種培地の組成 溶性澱粉 １５ｇ大豆ひさ
れり １５ｇグルコース
５ｇＣａＣＯ３２ｇ ＮａＣＱ ５ｇ
酵母エキス ２ｇコーンス
テイープリカー １ｇＺｎ５Ｏａ 、７
Ｈ２００，２２ｍｇ ＣａＣＱ２０．５５ｍｇ Ｍｎ（４２，４Ｈ２００，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６ｍｇ ＣｏＣ１２２，６ＨｚＯＯ，１６ｍｇ 脱ミネラル水 ＩＱ滅菌前の、
）Ｈ６，５ 上記液種用培地を容ｉｔ ５００ ｍ Ｑの広口三角フ
ラスコ中に１００ｉ（２ずつ分配しそして１２１°Ｃで
２０分間滅菌する。このフラスコを冷却し、次に前記実
施例２の良く増殖した培養物の数ループを接種しそして
２４０ｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１’０）で６０時間振
盪ずろ。それにより下記組成の生産培地を接種するため
の接種用培地が得られる。
酵 接種培地の組成 溶性澱粉 １５ｇ大豆ひさ
れり １５ｇグルコース
５ｇＣａＣＯ３２ｇ ＮａＣＱ ５ｇ
酵母エキス ２ｇコーンス
テイープリカー １ｇＺｎ５Ｏａ 、７
Ｈ２００，２２ｍｇ ＣａＣＱ２０．５５ｍｇ Ｍｎ（４２，４Ｈ２００，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６ｍｇ ＣｏＣ１２２，６ＨｚＯＯ，１６ｍｇ 脱ミネラル水 ＩＱ滅菌前の、
）Ｈ６，５ 上記液種用培地を容ｉｔ ５００ ｍ Ｑの広口三角フ
ラスコ中に１００ｉ（２ずつ分配しそして１２１°Ｃで
２０分間滅菌する。このフラスコを冷却し、次に前記実
施例２の良く増殖した培養物の数ループを接種しそして
２４０ｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１’０）で６０時間振
盪ずろ。それにより下記組成の生産培地を接種するため
の接種用培地が得られる。
生産培地の組成
グルコース ｌｈ麦芽エキ
ス ２０ｇペプトン
１０ｇＮａ２ＨＰＯ＋
Ｉｆ？ＺｎＳＯ４，７Ｈ２００，２
２ｍｇ ＣａＣｆ２２ ０．５５＋
＋＋ｇＭｎＣＱ２．４Ｈ，ＯＯ，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６＋＋＋ｇＣｏＣ４，６Ｈ
２００，１６ｍｇ 脱ミネラル水 ＩＱ滅菌前のｐ
Ｈ６，５ 上記生産培地を容量ＩＱの三角フラスコに２００ｍＱず
つ分配し１２ピＣで２０分間滅菌する。フラスコを冷却
しそして前記接種培地・を接種する（１％ｖ／ｖ）。回
転振盪器上２２Ｏｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１°Ｃ）で
９０時間にわたり発酵をさせる。
ス ２０ｇペプトン
１０ｇＮａ２ＨＰＯ＋
Ｉｆ？ＺｎＳＯ４，７Ｈ２００，２
２ｍｇ ＣａＣｆ２２ ０．５５＋
＋＋ｇＭｎＣＱ２．４Ｈ，ＯＯ，５ｍｇ ＦｅＳＯ，，５Ｈ２００，１６＋＋＋ｇＣｏＣ４，６Ｈ
２００，１６ｍｇ 脱ミネラル水 ＩＱ滅菌前のｐ
Ｈ６，５ 上記生産培地を容量ＩＱの三角フラスコに２００ｍＱず
つ分配し１２ピＣで２０分間滅菌する。フラスコを冷却
しそして前記接種培地・を接種する（１％ｖ／ｖ）。回
転振盪器上２２Ｏｒｐｍおよび２６°Ｃ（±１°Ｃ）で
９０時間にわたり発酵をさせる。
インポンフレキン酸の形成はスタフィロコッカス・オー
レウス２０９ Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。
レウス２０９ Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。
培養ブロスを収穫後遠心分離し、そしてイソポンフレキ
ン酸を培養ｊ液から単離し、そして後記のようにして精
製する。
ン酸を培養ｊ液から単離し、そして後記のようにして精
製する。
実施例 ４
発酵器中における培養株ＮＯ，Ｙ−８４，０７００の培
養工程Ｉ：接種培養物の調整 振盪フラスコ中 実施例３の接種培地（１００ｍ１２）を容量５００ｍＱ
の広口三角フラスコに加え、滅菌に先立ちｐＨ６，５に
調整する。次にこれをオートクレーブ中１２１°０，２
０分滅菌し、冷却し、そして実施例２の良く増殖した培
養物数ループを接種する。フラスコを回転振量器中２６
°Ｃ（土１°Ｃ）および２４Ｏｒｐｍで６０時間インキ
ュベートする。この増殖した培養物を以下に記載される
ような小さな発酵器の接種に用いる。
養工程Ｉ：接種培養物の調整 振盪フラスコ中 実施例３の接種培地（１００ｍ１２）を容量５００ｍＱ
の広口三角フラスコに加え、滅菌に先立ちｐＨ６，５に
調整する。次にこれをオートクレーブ中１２１°０，２
０分滅菌し、冷却し、そして実施例２の良く増殖した培
養物数ループを接種する。フラスコを回転振量器中２６
°Ｃ（土１°Ｃ）および２４Ｏｒｐｍで６０時間インキ
ュベートする。この増殖した培養物を以下に記載される
ような小さな発酵器の接種に用いる。
工程■：接種培養物の調整
小さな発酵器中
滅菌前にｐＨ６−５に調整され、泡止め剤として０．０
３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ （
ＢａｙｅｒＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）
１０１２を容量１５Ｑのステンレススチール製発酵器
に入れ、オートクレーブ中１２１ ’Ｃで３６分間滅菌
し、冷却しそして前記工程■で得られた接種培養物１０
％（Ｖ／Ｖ）を無菌条件下に接種する。次にこの培養物
を下記パラメーターの下２４時間培養する。
３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ （
ＢａｙｅｒＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）
１０１２を容量１５Ｑのステンレススチール製発酵器
に入れ、オートクレーブ中１２１ ’Ｃで３６分間滅菌
し、冷却しそして前記工程■で得られた接種培養物１０
％（Ｖ／Ｖ）を無菌条件下に接種する。次にこの培養物
を下記パラメーターの下２４時間培養する。
温度 ２６°Ｃ（±１’Ｃり
振盪 １８０−２０Ｏｒｐｍ
通気 毎分６Ｑ
２４時間後に増殖した培養物を工程■の生産培地の接種
に使用する。
に使用する。
工程■：発酵
（ａ）少量
容１ｔ１５ｃのステンレススチール製発酵器中における
、滅菌前にｐＨ６，５に調整され、泡止め剤として０．
０３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ（
Ｂａｙｅｒ ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載
）ｌｏｇをオートクレーブ中１２１°Ｃで２８分間滅菌
し、冷却しそして前記工程Ｉの振盪フラスコの増殖物か
ら得られた接種培養物ｌＯ％を無菌条件下に接種する。
、滅菌前にｐＨ６，５に調整され、泡止め剤として０．
０３％（ｖ／ｖ）のデスモフエンＤｅｓｍｏｐｈｅｎ（
Ｂａｙｅｒ ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載
）ｌｏｇをオートクレーブ中１２１°Ｃで２８分間滅菌
し、冷却しそして前記工程Ｉの振盪フラスコの増殖物か
ら得られた接種培養物ｌＯ％を無菌条件下に接種する。
次にこの培養物を下記パラメーターの下培養する。
温度 ２６°Ｃ（±１’Ｃ）
振盪 １８０〜２０Ｏｒｐｍ
通気 毎分６Ｑ
収穫 ９０時間後
（ｂ）大量
容量１５０１２の発酵器中の滅菌前にｐＨ６，５に調整
され、０．０３％（Ｖ／Ｖ）のデスモフエン（Ｂａｙｅ
ｒ ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）１００
α、または容１３９０ｆｆの発酵器中の０．０３％デス
モフエン（Ｂａｙｅｒ ＡＧ）を含有する生産培地２５
０Ｑをその場で１２ピＣに２８分間滅菌し、そして工程
■で得られた接種培養物１０％を接種する。
され、０．０３％（Ｖ／Ｖ）のデスモフエン（Ｂａｙｅ
ｒ ＡＧ）を含有する生産培地（実施例３記載）１００
α、または容１３９０ｆｆの発酵器中の０．０３％デス
モフエン（Ｂａｙｅｒ ＡＧ）を含有する生産培地２５
０Ｑをその場で１２ピＣに２８分間滅菌し、そして工程
■で得られた接種培養物１０％を接種する。
培地の最終容量：
１５０α発酵器中１１０１２
３９０α発酵器中２７５Ｑ
下記パラメーターが適用される。
温 度 ２６°Ｃ（± １’Ｃ）振
盪 ９０ｒｐｍ １５０Ｑの通気 毎分５０１２ ３９０Ｑの通気 毎時８ｍ３ 収 穫 ９０時間後 インポンフレキン酸の形成はスタフィロコッカス・オー
レウス２０９ Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。
盪 ９０ｒｐｍ １５０Ｑの通気 毎分５０１２ ３９０Ｑの通気 毎時８ｍ３ 収 穫 ９０時間後 インポンフレキン酸の形成はスタフィロコッカス・オー
レウス２０９ Ｐ、アスペルギルス・ニガーおよびトリ
コフィトンメンタグロフィテスに対する抗菌活性プロフ
ィルに基き判定される。
培養ブロスを収穫後遠心分離し、そしてインポンフレキ
ン酸を培養炉液から単離しそして以下に記載されるよう
にして精製する。
ン酸を培養炉液から単離しそして以下に記載されるよう
にして精製する。
インポンフレキン酸の単離および精製
収穫したブロス約２５０１２を遠心分離することにより
菌糸体から分離する。得られる炉液（ｐＨ７，３）をダ
イヤイオンＨＰ −２００８Ｑのカラムに通す。
菌糸体から分離する。得られる炉液（ｐＨ７，３）をダ
イヤイオンＨＰ −２００８Ｑのカラムに通す。
この方ラムをはじめに脱ミネラル水（４０１２）で洗う
。ＭｅＯＨ／ＨｚＯ１： ｌ （４０（２）で溶離する
。インポンフレキン酸を含有する溶出液を、メタノール
を除去するために減圧下に濃縮する。得られる水性物質
を凍結乾燥すると暗褐色の粗製インポンフレキン酸（６
７０ｇ）が得られる。
。ＭｅＯＨ／ＨｚＯ１： ｌ （４０（２）で溶離する
。インポンフレキン酸を含有する溶出液を、メタノール
を除去するために減圧下に濃縮する。得られる水性物質
を凍結乾燥すると暗褐色の粗製インポンフレキン酸（６
７０ｇ）が得られる。
粗製インポンフレキン酸（６７０９）をシリカゲル（細
孔寸法０．０６２ ０．０３７ｍｍ （２３０−４００
メツシユ、３ ＃９）での中圧液体クロマトグラフィー
にかける。このカラムをＣＨＣｌ２ｘ （１，５Ｑ）
、ＣＨＣＱｓ中の５％ＭｅＯＨ（１０Ｑ）およびＣｌ１
ＣＱｆｉ中の１０％１ｊｅＯＨ（１８ｆｆ）を用い、流
速毎分１５０ｍ（２で順次溶離する。
孔寸法０．０６２ ０．０３７ｍｍ （２３０−４００
メツシユ、３ ＃９）での中圧液体クロマトグラフィー
にかける。このカラムをＣＨＣｌ２ｘ （１，５Ｑ）
、ＣＨＣＱｓ中の５％ＭｅＯＨ（１０Ｑ）およびＣｌ１
ＣＱｆｉ中の１０％１ｊｅＯＨ（１８ｆｆ）を用い、流
速毎分１５０ｍ（２で順次溶離する。
イソポンフレキン酸はＣＨＣＱ 、中５％ＭｅＯＨで溶
出される。酸を含有する活性溶出液を減圧下に濃縮する
と暗褐色油状物（１００ｇ）が得られる。この油状物質
を石油エーテル（２Ｑ）で磨砕しそして石油エーテルを
流し去る。石油エーテルを流し去ったのちに固形残留物
（１６ｇ）が残るまでこの操作を７回反復する。この固
形褐色物質（１６ｇ）を逆相担体物質リクロソルブ（Ｌ
ｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−１８での中圧液体クロマト
グラフィーに２回かける。いずれの場合もカラムをＭｅ
ＯＨ／ Ｈ２Ｏ５０： ５０ （１５Ｑ）、 １ＪｅＯ
Ｈ／ＨｚＯ６０： ４０ （１０（２）およびＭｅＯＨ
／ ＨｚＯ７０： ３０（１５ｆｆ）を用い、流速４０
１／分で順次溶離する。７ラクシヨン１１２ずつを集め
る。中圧液体クロマトグラフィーＲＰ−１８カラムを用
いる第１回の精製においてはインボンフレキン酸がＭｅ
ａ！（／ ｕ、ｏ ７０ ：３０で溶離され、一方ＲＰ
−１８カラムを用いる第２の精製ではカラムの溶離にＭ
ｅＯＨ／ Ｈ２Ｏ６０： ４０が用いられる。活性溶出
液を減圧下に濃縮して凍結乾燥すると淡褐色粉末が得ら
れる（１．８ｇ）。
出される。酸を含有する活性溶出液を減圧下に濃縮する
と暗褐色油状物（１００ｇ）が得られる。この油状物質
を石油エーテル（２Ｑ）で磨砕しそして石油エーテルを
流し去る。石油エーテルを流し去ったのちに固形残留物
（１６ｇ）が残るまでこの操作を７回反復する。この固
形褐色物質（１６ｇ）を逆相担体物質リクロソルブ（Ｌ
ｉｃｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−１８での中圧液体クロマト
グラフィーに２回かける。いずれの場合もカラムをＭｅ
ＯＨ／ Ｈ２Ｏ５０： ５０ （１５Ｑ）、 １ＪｅＯ
Ｈ／ＨｚＯ６０： ４０ （１０（２）およびＭｅＯＨ
／ ＨｚＯ７０： ３０（１５ｆｆ）を用い、流速４０
１／分で順次溶離する。７ラクシヨン１１２ずつを集め
る。中圧液体クロマトグラフィーＲＰ−１８カラムを用
いる第１回の精製においてはインボンフレキン酸がＭｅ
ａ！（／ ｕ、ｏ ７０ ：３０で溶離され、一方ＲＰ
−１８カラムを用いる第２の精製ではカラムの溶離にＭ
ｅＯＨ／ Ｈ２Ｏ６０： ４０が用いられる。活性溶出
液を減圧下に濃縮して凍結乾燥すると淡褐色粉末が得ら
れる（１．８ｇ）。
かくして得られたイソボンフレキン酸を終りに第３のＲ
Ｐ−１８カラムで精製する。
Ｐ−１８カラムで精製する。
酸をＭｅａｌ（／ ）１２０５０ ： ５０を用い流速
毎分２＋Ｊで精製しそして約２０ｍＱずつの７ラクシヨ
ンを集める。活性フラクションを合し、減圧下に濃縮し
そして凍結乾燥すると１ｇの純粋なインポンフレキン酸
が白色粉末として得られる。
毎分２＋Ｊで精製しそして約２０ｍＱずつの７ラクシヨ
ンを集める。活性フラクションを合し、減圧下に濃縮し
そして凍結乾燥すると１ｇの純粋なインポンフレキン酸
が白色粉末として得られる。
インポンフレキン酸の純度はＨＰＬＣで検査するＣ４
Ｘ ２５０＋＋＋ｍ Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１
８カラム、溶離剤： １ＪｅＯＨ／ ＋（、ｏ ７０
： ３０、流速：１ｍＱ／分、２３４ｎｍで検出、チャ
ートスピード： Ｉ、０ｍｍ１分〕。そのＨＰ Ｌ Ｃ
パターンを第１図に示す。
Ｘ ２５０＋＋＋ｍ Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１
８カラム、溶離剤： １ＪｅＯＨ／ ＋（、ｏ ７０
： ３０、流速：１ｍＱ／分、２３４ｎｍで検出、チャ
ートスピード： Ｉ、０ｍｍ１分〕。そのＨＰ Ｌ Ｃ
パターンを第１図に示す。
インポンフレキン酸（１００ｍｇ）をＣＨ２Ｎ２／ Ｍ
ｅＯＨ／Ｈ、Ｏ／ジエチルエーテル混合物を用い０℃で
エステル化する。粗製エステルを調整用薄層クロマトグ
ラフィー〔シリカゲルプレート２０Ｘ２０ｃｍＳ厚さ０
．５ｒｎｍ、展開溶媒； ＣＨＣｌ２３中の１．５％Ｍ
ｅ ＯＨ１溶離溶媒： ＣＨ（：、Ｃ３中の５％Ｍ
ｅ ＯＨ’］により精製する。トリメチルエステル（１
ｂ）が無色油状物として得られる（ ５９ｍｇ）。
ｅＯＨ／Ｈ、Ｏ／ジエチルエーテル混合物を用い０℃で
エステル化する。粗製エステルを調整用薄層クロマトグ
ラフィー〔シリカゲルプレート２０Ｘ２０ｃｍＳ厚さ０
．５ｒｎｍ、展開溶媒； ＣＨＣｌ２３中の１．５％Ｍ
ｅ ＯＨ１溶離溶媒： ＣＨ（：、Ｃ３中の５％Ｍ
ｅ ＯＨ’］により精製する。トリメチルエステル（１
ｂ）が無色油状物として得られる（ ５９ｍｇ）。
インポンフレキン酸およびそのトリメチルエステルの物
理化学的性質を下記に示す。
理化学的性質を下記に示す。
外 観 白色無定形粉末 油状物性 質
酸性 中性融点 １９０
°０（ｄ） − チルおよび石油エーテル 〔α３２０°Ｃ＋９３．７５°（ＣＯ，０１６；
＋２７．７８°（Ｃ１１； ＣＨＣｆ２３）ＭｅＯＨ／
Ｈ２０６０： ４０ 分子量 ｍ／ｚ ５５２（ｍ”３Ｎａ−３Ｈ）
” ｍ／ｚ Ｍ＋５２８（Ｅｌ）（ＦＡＢ） 分子式 ＣｚａＨｘａＯｙ Ｃ
３１Ｈ４４０７ＵＶ：λ、、、、ｎｍ ２３４；
２６８（ＭｅＯＨ／Ｈｚ０ ２３６，２６８（Ｍｅ
ＯＨ中）６：４＋２滴のＩＮ Ｎａ０Ｈ ＩＲ： ｙ 、、、、ｃｍ−’ （ＫＢｒ）３４０
０−３２００ １７４５（狭い、Ｃ００ＣＨ，か
らの６．３８（ｄｄ、 Ｊ＝１６．１ｌＨｚ、 ６．
０９（ｄ、 Ｊ＝１６Ｈｚ、 ＩＨ）、１１（）、６．
０９（ｔ、 Ｊ’１ｌＨｚ、 ６．０１（ｄｄ、 Ｊ
−１６，７，５Ｈｚ。
酸性 中性融点 １９０
°０（ｄ） − チルおよび石油エーテル 〔α３２０°Ｃ＋９３．７５°（ＣＯ，０１６；
＋２７．７８°（Ｃ１１； ＣＨＣｆ２３）ＭｅＯＨ／
Ｈ２０６０： ４０ 分子量 ｍ／ｚ ５５２（ｍ”３Ｎａ−３Ｈ）
” ｍ／ｚ Ｍ＋５２８（Ｅｌ）（ＦＡＢ） 分子式 ＣｚａＨｘａＯｙ Ｃ
３１Ｈ４４０７ＵＶ：λ、、、、ｎｍ ２３４；
２６８（ＭｅＯＨ／Ｈｚ０ ２３６，２６８（Ｍｅ
ＯＨ中）６：４＋２滴のＩＮ Ｎａ０Ｈ ＩＲ： ｙ 、、、、ｃｍ−’ （ＫＢｒ）３４０
０−３２００ １７４５（狭い、Ｃ００ＣＨ，か
らの６．３８（ｄｄ、 Ｊ＝１６．１ｌＨｚ、 ６．
０９（ｄ、 Ｊ＝１６Ｈｚ、 ＩＨ）、１１（）、６．
０９（ｔ、 Ｊ’１ｌＨｚ、 ６．０１（ｄｄ、 Ｊ
−１６，７，５Ｈｚ。
ＬＨ）、ｓ、５９ｃｄｄ、Ｊ＝ ＩＨ）、５．９
９（ｔ、 Ｊ＝ｌＩＨｚ。
９（ｔ、 Ｊ＝ｌＩＨｚ。
１６、７．５Ｈｚ、 ＩＨ）、 ＬＨ）、５．８
８（ｓ、 ＬＨ）、５．８１（ｄｔ、 Ｊ ＝１６．７
）（ｚ）、 ５．６７（ｄｔ、 Ｊ＝１４．８．７Ｈｚ
。
８（ｓ、 ＬＨ）、５．８１（ｄｔ、 Ｊ ＝１６．７
）（ｚ）、 ５．６７（ｄｔ、 Ｊ＝１４．８．７Ｈｚ
。
５．７１（ｓ、 ＬＨ）、５．５１（ｍ、 ＬＨ）、
５．３７（ｄｔ、 Ｊ＝８゜Ｊ＝６．５Ｈｚ、 ３Ｈ）
９Ｈ）、１．９３（ｓ、 ３Ｈ）、］、、
８３（ｓ、 ３Ｈ）、１．００ （ｄ、 Ｊ −６，５Ｈｚ、 ３Ｈ） １４３．５７，１３９．１７． １４３．２５，
１３４．８０゜１．３６．１１，１３４．６４．
１３２．２０，１３１．７６゜１２８．４１，１２８
．２６． １２４．９４．１２４．５０゜１２７
．９６，１２７．３８． １１・９．５２，７
８．４５゜２０．２４．１５．７７ １８
．７４．１２．２４上記データおよび、トリメチルイソ
ポンフレケートの’ ＋（−ＮＩＪＲスペクトルにおけ
るＣ２３−Ｎ２およびＣ，−Ｈでの化学的シフトがトリ
メチルポンフレケート（Ｉｌｂ）のそれに比較して異な
っていることから殺カビ性抗生物質インボンクレキン酸
の構造（Ｉ ａ）に関する情報が与えられる。
５．３７（ｄｔ、 Ｊ＝８゜Ｊ＝６．５Ｈｚ、 ３Ｈ）
９Ｈ）、１．９３（ｓ、 ３Ｈ）、］、、
８３（ｓ、 ３Ｈ）、１．００ （ｄ、 Ｊ −６，５Ｈｚ、 ３Ｈ） １４３．５７，１３９．１７． １４３．２５，
１３４．８０゜１．３６．１１，１３４．６４．
１３２．２０，１３１．７６゜１２８．４１，１２８
．２６． １２４．９４．１２４．５０゜１２７
．９６，１２７．３８． １１・９．５２，７
８．４５゜２０．２４．１５．７７ １８
．７４．１２．２４上記データおよび、トリメチルイソ
ポンフレケートの’ ＋（−ＮＩＪＲスペクトルにおけ
るＣ２３−Ｎ２およびＣ，−Ｈでの化学的シフトがトリ
メチルポンフレケート（Ｉｌｂ）のそれに比較して異な
っていることから殺カビ性抗生物質インボンクレキン酸
の構造（Ｉ ａ）に関する情報が与えられる。
種々の微生物に対するＭＩＣとして表わしたインポンフ
レキン酸の生物学的性質を以下に示す。
レキン酸の生物学的性質を以下に示す。
イソポンフレキン酸のＭＩＣ
番号 試験細菌
ＭＩＣ値（μガニＱ１、カンジダ・アルビカンス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ） ＞
１２５２、サイ力ロミセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＞１２５
３、酵母５０６０
＞１２５４、アスペルギルス・ニガー（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）
６２．５５、ペニシリウム・ジギタツム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）１３５ ６２．
５６．７サリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃ
ｕｌｍｏｒｕｍ）１００ ７．８７、トリコ
フィトン・メンタグロフィテス
１２５（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒ
ｏｐｈｙｔｅｓ）８、 タラトスボリウム・レジネ（Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｒｅｓｉｎａｅ）
２５０９、 ポツリチス・シネラ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｎｅｒｅａ）１６ ６２．５１
０、 ポツリテス・シネラ４７
１５．６１１、 ポツリテス・シ
ネう５７ ３１
．２１２、 アルタナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａ
ｒｉａ ５ｏｌａｎｉ）５ ６２．５１３
、 セルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ
ｂｅｔｉｃｏｌａ）７１ １５．６１４、
ピリキュラリア・オリゼ（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ
ｏｒｙｚａｅ）１５４ ３１．２１５、 ス
タフイロコツカズ・オーレウス（Ｓｔａｐｈ、 ａｕｒ
ｅｕｓ）２０９ Ｐ １２５１６、 大腸菌（
Ｅ、 ｃｏｌｉ）９６３２
＞１２５
ＭＩＣ値（μガニＱ１、カンジダ・アルビカンス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ） ＞
１２５２、サイ力ロミセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＞１２５
３、酵母５０６０
＞１２５４、アスペルギルス・ニガー（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）
６２．５５、ペニシリウム・ジギタツム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）１３５ ６２．
５６．７サリウム・クルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃ
ｕｌｍｏｒｕｍ）１００ ７．８７、トリコ
フィトン・メンタグロフィテス
１２５（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒ
ｏｐｈｙｔｅｓ）８、 タラトスボリウム・レジネ（Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｒｅｓｉｎａｅ）
２５０９、 ポツリチス・シネラ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｃｉｎｅｒｅａ）１６ ６２．５１
０、 ポツリテス・シネラ４７
１５．６１１、 ポツリテス・シ
ネう５７ ３１
．２１２、 アルタナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａ
ｒｉａ ５ｏｌａｎｉ）５ ６２．５１３
、 セルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ
ｂｅｔｉｃｏｌａ）７１ １５．６１４、
ピリキュラリア・オリゼ（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ
ｏｒｙｚａｅ）１５４ ３１．２１５、 ス
タフイロコツカズ・オーレウス（Ｓｔａｐｈ、 ａｕｒ
ｅｕｓ）２０９ Ｐ １２５１６、 大腸菌（
Ｅ、 ｃｏｌｉ）９６３２
＞１２５
第１図はインボンフレキン酸のＨＰＬＣ分析パターンを
示す。 第２図はインポンフレキン酸のＶＶスペクトルを示す。 第３図はトリメチルイソポンフレケートのｖｖスペクト
ルを示す。 第４図はインポンフレキン酸のＩＲスペクトルを示す。 第５図はトリメチルイソポンフレケートのＩＲスペクト
ルを示す。 第６図はインポンフレキン酸の’ Ｈ−ｔＪＩＪＲスペ
クトルを示す。 第７図はトリメチルイソボンクレケ−１・の１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。 第８図はインポンフレキン酸の１３０−ＮＭＲスペクト
ルを示す。 第９図はトリメチルイソボンフレケートの１Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名 ＩＧ−１ インポンフレキン酸のＨＰＬＣ分析曲線４Ｘ２５０ｍｍ
Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１８−カラム；溶離剤
： Ｍ＋９０Ｈ−Ｈ２Ｏ７：３；流速１ｍｆｆ／分；Ｕ
ｖ検出： Ａ） ２６８ｎｍ、 Ｂ） ２３４ｎｍム ＩＧ−２ インボンフレキンａ（ｌａ）のＵＶスペクトル（ＭｅＯ
Ｈ中）２０ロ ２ら０３００３４０
ムＤｏ ｎｍＦＩＧ−３
示す。 第２図はインポンフレキン酸のＶＶスペクトルを示す。 第３図はトリメチルイソポンフレケートのｖｖスペクト
ルを示す。 第４図はインポンフレキン酸のＩＲスペクトルを示す。 第５図はトリメチルイソポンフレケートのＩＲスペクト
ルを示す。 第６図はインポンフレキン酸の’ Ｈ−ｔＪＩＪＲスペ
クトルを示す。 第７図はトリメチルイソボンクレケ−１・の１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。 第８図はインポンフレキン酸の１３０−ＮＭＲスペクト
ルを示す。 第９図はトリメチルイソボンフレケートの１Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。 特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名 ＩＧ−１ インポンフレキン酸のＨＰＬＣ分析曲線４Ｘ２５０ｍｍ
Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ−１８−カラム；溶離剤
： Ｍ＋９０Ｈ−Ｈ２Ｏ７：３；流速１ｍｆｆ／分；Ｕ
ｖ検出： Ａ） ２６８ｎｍ、 Ｂ） ２３４ｎｍム ＩＧ−２ インボンフレキンａ（ｌａ）のＵＶスペクトル（ＭｅＯ
Ｈ中）２０ロ ２ら０３００３４０
ムＤｏ ｎｍＦＩＧ−３
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する化合物。 ２）細菌培養株Ｎｏ．Ｙ−８４，０７００（ＤＳＭ４３
０５）、その突然変異体または変種を、炭素源および窒
素源、ならびに無機栄養塩および痕跡元素を含有する栄
養培地上で好気性条件下に培養しそして請求項１記載の
化合物を常法により培養ブロスから単離し精製すること
からなる請求項１記載の化合物の製法。 ３）培養が２４℃〜３０℃およびｐＨ６〜８で行われる
ことからなる請求項２記載の方法。 ４）培養が約２６℃（±１℃）およびｐＨ約６．５で行
われることからなる請求項２または３記載の方法。 ５）培養が少くとも約６６時間実施されることからなる
請求項２〜４のいずれかに記載の方 法。 ６）培養が深部培養で行われることからなる請求項２〜
５のいずれかに記載の方法。 ７）イソボンクレキン酸をクロマトグラフィ一法により
精製することからなる請求項２〜６のいずれかに記載の
方法。 ８）請求項１記載の化合物を他の活性物質および／また
は助剤および／または付形剤と並に含有する薬剤。 ９）殺カビ性抗生作用を有する薬剤の製造への請求項１
記載の化合物の使用。 １０）オイバクテリウムＹ−８４，０７００（ＤＳＭ４
３０５）。 １１）エステル官能基中に１〜４個の炭素原子を有する
ことからなる請求項１記載の化合物のトリアルキルエス
テル。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3802744.5 | 1988-01-30 | ||
| DE3802744 | 1988-01-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01273594A true JPH01273594A (ja) | 1989-11-01 |
Family
ID=6346289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1016523A Pending JPH01273594A (ja) | 1988-01-30 | 1989-01-27 | 殺カビ性抗生物質イソボンクレキン酸およびその製法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0326922A2 (ja) |
| JP (1) | JPH01273594A (ja) |
| KR (1) | KR890012003A (ja) |
| AU (1) | AU2885889A (ja) |
| DK (1) | DK37389A (ja) |
| IE (1) | IE890267L (ja) |
| PT (1) | PT89558A (ja) |
-
1989
- 1989-01-25 EP EP89101257A patent/EP0326922A2/de not_active Withdrawn
- 1989-01-27 DK DK037389A patent/DK37389A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-01-27 JP JP1016523A patent/JPH01273594A/ja active Pending
- 1989-01-27 PT PT89558A patent/PT89558A/pt not_active Application Discontinuation
- 1989-01-27 IE IE890267A patent/IE890267L/xx unknown
- 1989-01-27 AU AU28858/89A patent/AU2885889A/en not_active Abandoned
- 1989-01-30 KR KR1019890000990A patent/KR890012003A/ko not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2885889A (en) | 1989-08-03 |
| EP0326922A2 (de) | 1989-08-09 |
| PT89558A (pt) | 1989-10-04 |
| DK37389A (da) | 1989-07-31 |
| KR890012003A (ko) | 1989-08-23 |
| DK37389D0 (da) | 1989-01-27 |
| IE890267L (en) | 1989-07-30 |
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