JPH01287029A

JPH01287029A - 新規抗ウィルス剤

Info

Publication number: JPH01287029A
Application number: JP63116500A
Authority: JP
Inventors: Isao Suda; 須田　功; Hiroshi Orui; 洋大類; Hiromu Meguro; 目黒　煕; Tatsuo Ido; 達雄井戸
Original assignee: Mect Corp
Current assignee: Mect Corp
Priority date: 1988-05-13
Filing date: 1988-05-13
Publication date: 1989-11-17
Also published as: EP0341735B1; DE68903031D1; ATE81009T1; DK232989D0; AU3479889A; DE68903031T2; IL90271A; IL90271A0; NZ229128A; EP0341735A1; AU624138B2; KR890016966A; KR970005326B1; DK232989A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は抗ウィルス剤に関する。

（従来技術及びその解決すべき課題）シアル酸は、生体内において糖蛋白や糖脂質の糖鎖末端
に位置し、糖鎖の生理活性発現に大きく関与しているこ
とが知られているが、その機能を解明する上で、シアル
酸誘導体の合成が重要視されている。

このシアル酸の一種であるノイラミン酸のＮ−アセチル
誘導体は天然から得られるものであるが、そのフッ素化
誘導体については、これまで２位［Ｍ、Ｎ、５ｈａｎａ
　ａｎｄ　Ｒ，Ｅｂｙ、　Ｃａｒｂｐｈｙｄｒ、Ｒｅｓ
、、　１２７巻、２０１頁、１９８４年〕、あるいは９
位置Ｍ、Ｓｈａ−ｒｍａ　ａｎｄ　Ｗ、Ｋｏｒｙｔｎｙ
ｌ、　Ｊ、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｃｈｅｍ、、　１巻、
３１１頁、１９８２−１９８３年〕にフッ素を導入した
ものが合成されているが、３位にフッ素が導入された誘
導体については、その立体構造が明確にされたものは未
だ得られていない。

本件出願人は、Ｎ−アセチルノイラミン酸の３位に立体
選択的にフッ素を導入する研究を重ね、Ｎ−アセチル−
３−フルオロ−ノイラミン酸の有用な合成法を見出し、
特許出願するに至った（特願昭６２−５２３５８号）。

更に、本件出願人はＮ−アセチル−３−フルオロノイラ
ミン酸についてその生理活性等を研究したところ、この
化合物が、ウィルスや細菌などの感染に重要な役割を有
するシアリダーゼの作用を著しく阻害することを見い出
し、本発明に至ったものである。

〔発明の目的〕

本発明はＮ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸及び
その薬学的に許容し得る塩からなる抗ウィルス剤を提供
することを目的とする。

即ち、本発明は、一般式：で表わされるＮ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸
またはその薬学的に許容し得る塩からなる抗ウィルス剤
、に関する。

以下、本発明について詳述する。

一般式（Ｉ）で表わされるＮ−アセチル−３−フルオロ
ノイラミン酸は、例えば以下のようにして調製される。

まず、下記の一般式（■）：（式中、Ｒ４は低級アルキル基、ＡＣはアセチル基をそ
れぞれ表す）で示されるアルキル５−アセトアミド−２
，６−アンヒドロ−４，７，８，９−テトラ−０−アセ
チル２．　３ｔ　　５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−
Ｄ−ガラクト−２−エノネートの酢酸水溶液またはジク
ロロメタン溶液中に、■　フッ素を含有する不活性ガス
、または■　フッ素を含有する不活性ガスを酢酸／酢酸
塩からなる混合物に通じて得たアセチルハイポフルオラ
イド、のいずれかを通じて付加反応を行う。

一般式■で示される上記化合物は、例えば［１９８６年
第９回糖質シンポジウム講演要旨集Ｂｌ１頁〕に開示さ
れた方法により人手可能である。

フッ素を含有する不活性ガスとしては、１〜２％のフッ
素を含有するアルゴンが使用され、これを上記一般式■
で示される化合物の酢酸水溶液、あるいはジクロロメタ
ン溶液などに７℃前後の低温下で１〜２時間通じると、
２位と３位にフッ素原子がシス付加したジフルオロ体と
ともに２位に一０ＣＯＣＨ３，３位にフッ素原子がシス
付加およびトランス付加した二種のモノフルオロ体が生
成する。なお、アセチルハイポフルオライドを使用する
と、モノフルオロ体が主体として生成する。

上記反応液中からモノフルオロ体を分離精製するには、
減圧下で溶媒を留去した後、その残渣をシリゲルを用い
たカラムクロマトグラフィーで展開し、酢酸エチル／エ
ーテル混液などを用いて溶出後、再結晶を行う。

このようにして得られたモノフルオロ体を脱アセチル化
することにより、Ｎ−アセチル−３−フルオロ−ノイラ
ミン酸エステルが得られ、さらにその脱エステル化によ
り、上記のＮ−アセチルー３−フルオロ−ノイラミン酸
が得ちれる。

上記Ｎ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸は数多く
のウィルス感染症に対して有効に作用する。このことは
、シアリダーゼ（別名、ノイラミンダーゼ）の作用阻害
効果から明瞭である（「蛋白質核酸酵素ＪＶＯＩ２５、
Ｎｏ、１　　（１９８０）　、ｐ３０〜４８参照）。

Ｎ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸の有効量は一
般にｌμｇ〜１０ｍｇである。

Ｎ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸は、種々の形
態で１吏用することができ、注射、吸入、経口などによ
る投与形態で使用される。

〔実施例〕

以下、本発明について更に参考例及び実施例により具体
的に説明する。

参考例１下記の式［ａ（ＩＩａ） ■ （式中、Ａｃはアセチル基を表す。以下同様）で示され
るメチル　５−アセトアミド−２，６−アンヒドロ−４
，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−２，３，５−ト
リデオキシ−Ｄ−グリセロ−〇−ガラクトー２−エノネ
ート２．３　ｇ　　（４，８ｍｍｏｌｅ）の酢酸溶液２
５１Ｔ１１（７℃）中に１．７％（６，１ｍｍｏｌｅ）
のＦ２を含むアルゴンガスを２時間通じた後、減圧下で
溶媒を留去し、２．５ｇのシラツブを得た。このシラツ
ブをシリカゲルくメルク社「Ｇ６０」２５０ｇ）のカラ
ムクロマトグラフィーにて展開し、酢酸エチル／エーテ
ル＝３／１　　（Ｖ／Ｖ）のからなる混合溶媒で溶出し
、ジクロルメタン／イソプロピルエーテルの混合溶媒で
再結晶して下記の３種の生成物を得た。

■　メチル　５−アセトアミド−４，７，８，９−テト
ラ−０−アセチル−２，３，５−）リゾオキシ−２，３
−ジフルオロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−グルコー２−ノ
二二口ソネート〔分子構造〕０＾Ｃ（収量：　９０　Ｑｍｇ、収率：３６％）〔物性値〕融点：９２℃ 〔αＥ　、　−４８，１２°　（Ｃ＝０．５５、クロロ
ホルム）元素分析　Ｃ２゜Ｆ２７ＮｌＯ□Ｆ２計算値　Ｃ：４６．９７；　　Ｈ：５．３２；　Ｎ　：
２ニア３゜実測値　Ｃ：４７．ＯＯ；　　Ｈ：５．３７
；　Ｎ　：３．００゜Ｒｆ　＝０．５４　（酢酸エチル
） ’Ｈ−ＮＭＲδ　（ＣＤＣ（２３）５．００（Ｈ−３，Ｊ３，４＝９．８５　Ｆ２）５、３
９　（）Ｉ−４，Ｊ＜、　５＝１０．２６　Ｈｚ）４、
４０　（Ｈ−５，Ｊ５．　ｓ４０．６６　Ｈｚ）４、２
７　（Ｈ−６，Ｊ６．　ｔ＝２．３８　Ｈｚ）５．３９
（）Ｉ−７，Ｊ、、、＝８．０６　）１ｚ）５．１６（
Ｈ−８，Ｊｒ、、＝５．６８　Ｈｚ、　　Ｊａ、ｓ”２
．７１　Ｈｚ）４、旧、４Ｊ２（Ｈ−９，８−９’　、
　Ｊ９，９・＝１２．５５　Ｈｚ）５、４９（Ｑ、　　
Ｊ、、、　５＝１０．２０　）１ｚ）３、９１（ＣＯＯ
ＣＨ３）１、９ＨＮＣＯＣＨ３）２．０５．　２．１０．　２．１１．　２．１３（ＯＡ
ｃ）■　メチル　５−アセトアミド−２，４，７，８゜
９−ペンタ−０−アセチル−３，５−ジデオキシ−３−
フルオロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ　−クルコー２−ノニ
ュロソネート〔分子構造〕（収量：１９０、収率ニア％）〔物性値〕融点：１１９℃ 〔α〕：　−５６，５°　（Ｃ＝０．２１、ＣＨＣｆ　
３）元素分析　Ｃ２２Ｈ５ＯＮＯ１４Ｆ計算値　Ｃ：４７．９１；　　Ｈ：５．４８；　Ｎ　：
２．５３゜実測値　Ｃ：４８．１０；　　Ｈ：５．３５
；　Ｎ　：２．３０゜Ｒｆ＝０．２６ ’　Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒδ（ＣＤＣβ３）４、６２　（Ｆ３．　Ｊｌ、　−＝９．６０　Ｈｚ）５
．４８（Ｈ−４，Ｊ４，５＝１０．０５　Ｈｚ）４．２
４（）ｌ−５，’Ｊｓ、５＝１０．５４１１ｚ）４．１
１（Ｈ−６，Ｊｇ、ｔ：２．２９１（ｚ）５、３５　（
Ｈ７，Ｊ７．−＝４．６６　Ｈｚ）５．０２（Ｈ−８，
Ｊｓ、、＝６．６９　Ｈｚ、　Ｊ６．、’＝２．４４　
Ｈｚ）４．１４．４．５１（Ｈ−９，）Ｉ−９’　、　
Ｊｓ、ｓ・＝１２．４６　Ｈｚ）５．５８（ＮＨ，ＪＨ
，５＝１０．０８　Ｈｚ）３．８５　（ＣＯＯＣＨ３）１、８９　（ＮＣＯＣＨ３）２．０４．２．０６．２．１０．２．１５．２．２４（
ＯＡｃ）。

■　メチル　５−アセトアミド−２，４，７，８゜９−
ペンタ−○−アセチルー３．　５−ジデオキシ−３−フ
ルオロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−マンノー２−ノ二二口
ソネート〔分子構造〕ト（収量＝　３０ｍｇ、収率＝７％）〔物性値〕融点：１９４℃ 〔α）　Ｄ−２４，５°　（Ｃ＝０．１９、クロロホル
ム）元素分析　Ｃ２２Ｈ３ＯＮ　０１４　Ｆ計算値　Ｃ
：４７．９１；　　Ｈ：５．４８；　Ｎ　：２．５３゜
実測値　Ｃ：４７．８５；　　Ｈ：５．５３；　Ｎ　：
２．５５゜Ｒｆ＝０．２３（酢酸エチル） ’Ｈ−ＮＭＲδ　（ＣＤＣβ３）４．９４（Ｈ−３，Ｊ３，４＝２．５７　Ｈ２）５、５
０　（Ｈ−４，Ｊ４．５＝ｌｏ、　６８　Ｈｚ）４．１
４（Ｈ−５，Ｊｓ、５＝ｌｏ、６１　Ｈｚ）４．２５（
Ｉ（−６，、Ｊｓ、７＝１．８４　Ｈｚ）５．３５（）
Ｉ−７，Ｊ、、、＝５．１３　Ｈｚ）５．１３（Ｈ−８
，Ｊａ、、＝６．６０　Ｈ２，Ｊ［、，９’＝２．２０
　Ｈ２）４．５７（Ｈ９，Ｊ９，９・＝１２．４６　Ｈ
ｚ）５．４３（ＮＨＪＪＮ）１．、Ｓ＝８．７９　）１
２）３、８４（ＣＯＯＣＲ，）１、９２　（ＮＣＯＣＨ３）２．０４．　２．０５．　２．１１．　２．１７．　２
．１８（ＯＡｃ）参考例２１．５％（ｌ　Ｑｍｍｏｌｅ）のＦ２を含むアルゴンガ
スを酢酸カリ／酢酸の混合物からなるカートリッジに通
じてアセチルハイポフルオライド　（ＡｃＯＦ）を調製
し、これを前記実施例１で用いたメチル５−アセトアミ
ド−２，６−アンヒドロ−４，７゜８．９−テトラ−０
−アセチル−２，３，５−）リゾオキシ−Ｄ−グリセロ
−Ｄ−ガラクト−２−エノネー）　４８０ｍｇ　（１，
Ｑｍｍｏｌｅ）の酢酸溶液１０ｍβ中に室温で１時間通
じた後、溶媒を減圧下６０℃で留去し、５２０ｍｇのシ
ラツブを得た。

このシラツブをシリカゲル（メルク社「Ｇ６旧６０ｇ）
のカラムクロマトグラフィーにて展開し、酢酸エチル／
エーテル＝３／ｌ　　（Ｖ／Ｖ）のからなる混合溶媒で
溶出し、ジクロルメタン／イソプロピルエーテルの混合
溶媒で再結晶して前記参考例１と同じ生成物 ■　メチル　５−アセトアミド−４，７，８，９−テト
ラ−０−アセチル−２，３，５−トリデオキシ−２，３
−ジフルオロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−Ｉ’ルコー２−
ノニュロソ＊−）　［：収！−４０ｍＬ収率＝７．７％
〕および、 ■　メチル　５−アセトアミド−２，４，７，８゜９−
ペンタ−０−アセチル−３，５−ジデオキシ−３−フル
オロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−グルコー２−ノ二二口ソ
ネート〔収量＝　１９９ｍｇ、収率＝３４％〕を得た。

参考例３前記参考例１または２で得られた■　メチル５−アセト
アミド−２，４−，７，８，９−ペンタ−〇−アセチル
ー３．５−ジデオキシ−３−フルオロ−Ｄ−エリスロー
β−Ｌ−４’ルコノニュロソネーｈ５５ｍｇを含有する
無水メタノール溶液（３ｍｌ）中に、ナトリウムメトキ
シド（ＮａＯＣＨ３）　２ｍｍｏｌｅを含有するメタ／−ル
１ｍＡを加え、室温で３０分撹拌した。反応液にダウエ
ックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　ＣＨ＝　）少過剰を加え
て撹拌し、樹脂を濾過してメタノール５　ｒｎｌで洗浄
した。

この濾液を減圧下で濃縮してメタノール／酢酸エチル／
石油エーテルの混合溶媒で再結晶して下記の化合物■を
得た（収量＝　２４ｍｇ、収率＝７５％）。

■　メチル　５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−
３−フルオロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−グルコー２−ノ
ニュロソネート〔分子構造〕叶〔物性値〕融点：２０９℃（メタノール／酢酸エチル／石油エーテ
ル混合物溶媒より再結晶）〔α）　Ｄ　−４１，１４°　（Ｃ＝０．８６、Ｈ２Ｃ
）元素分析　ＣＩ　２　Ｈ２０Ｎ　Ｏｓ　Ｆ計算値　Ｃ
：４２．２３；　、Ｈ：５．９；　　Ｎ：４．１゜実験
値　Ｃ：４２．３７；　　Ｈ：６．０；　　Ｎ　：４．
３゜’Ｈ−ＮＭＲδ（Ｄ２０）４．７５（Ｈ−３，Ｊ−３，４＝８．９８　Ｈ２）４．
０９−４．１８（３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，８−６）３、
５６　（Ｈ−７，Ｊｓ、　７＝１．１０　Ｈｚ）３．７
ＤＨ−８，Ｊ７，８＝８．７９　Ｈ２゜Ｊａ、　ｓ＝６
．０５　）１ｚ。

Ｊａ、　ｓ　・＝３．４３　Ｈｚ）３．６３，３．８　　（Ｉｆ−９，Ｈ−９’　、　　Ｊ
、、、・＝１１．９　Ｈｚ）参考例４前記参考例１または２で得られた■　メチル５−アセト
アミド−２，４，７，８，９−ペンタ−○−アセチルー
３．５−ジデオキシ−３−フルオロ−Ｄ−エリスローβ
−Ｌ−グルコノニュ口ソネート２０＋ｎｇ　（０，０３
６ｍｍｏｌｅ）を、ｌＮＮａＯＨ水溶液２０％を含有す
るメタノール溶液Ｌｍｌ中に加え、室温で１時間撹拌し
た。

その後、反応液中にナトリウムメトキシド（Ｎａ　ＯＣ
Ｈ３）　２ｍｍｏｌｅを含有するメタノール１ｍｊ２を
加え、室温で３０分撹拌した。反応液にダウエックス（
Ｄｏｗｅｘ）　５０　［：Ｈ”　〕少過剰を加えて撹拌
し、濾過後、樹脂を水１０＋ｎｊ！で洗浄した。この濾
液を減圧下で濃縮し、残渣を水に溶かして活性炭を少量
加えて撹拌した。その後、活性炭を濾別し、濾液を真空
乾燥して下記の化合物■を得た（収量＝９ｍｇ、収率＝
７６％）。

■　５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−３−フル
オロ−Ｄ−エリスローβ−Ｌ−１’ルコー２−ノ二二ロ
ソン酸〔分子構造〕Ｈ〔物性値〕融点：２０５℃ 〔α〕、　−４０，０２°　（Ｃ＝０．８６、Ｈ２Ｃ）
元素分析　Ｃ，、Ｈ，８ＮＯ，Ｆ計算値　Ｃ：４０．３７；　　Ｈ：５．５４；　　Ｎ：
４．２７゜実験値　Ｃ：４０，０７：　　Ｈ：５．５１
；　Ｎ　：４．２１゜’Ｈ−ＮＭＲδ（Ｄ２０）４、７ＨＬ３．　Ｊｓ、　ｇ＝８．４２　Ｈｚ）　・４
．１０−４．１５（３Ｈ，Ｈ−４，Ｈ−５，Ｈ−６）３
．５４（Ｈ−７，Ｊｓ、ｔ＝ＯＨｚ）３．７３（Ｈ−８
，Ｊｌ、、＝８．７９　Ｈｚ。

Ｊａ、９二６．０５　　Ｈｚ。

Ｊ８９．・＝２．７５　Ｈｚ）３．６３，３．８３（Ｈ−９，）Ｉ−９’　、　　Ｊｓ
、ｓ’＝１１．９１　）１ｚ）２、０６　（ＮＣ［ｌＣ
汁、）。

実施例１試験管中でアースロバフタ−・ウレアファシェンス（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ）か
ら得られたシアリダーゼ（半井化学■製）を含む酵素ａ
　（１０ｍＵ／ｍｆ）に、次式：で表わされる０、５ｍＭ４−メチルウンベリフェリル−
Ｎ−アセチルノイラミン酸（４−ＭＵ　−Ｎｅｗ　Ａｃ
）（半井化学■製）、及び２００ｍＭ酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ４，２）及びＮ−アセチル−３−フルオロノ
イラミン酸（化合物１）４〜４００μＭ各１００μｌを
添加し、３７℃の水槽中で１５分間反応させた。次に、
試験管中に２００ｍＭグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ
１０，４）を３．６ｍｊ！加えて、反応を停止させた。

反応液中に生成した４−メチルウンベリフェロンの濃度
を、分光光度計（日立製作新製）を用い、励起波長３６
００ｍ、螢光波長４４０ｎｍの螢光強度より算定し、こ
の値から遊離したシアル酸量を求めた。

シアリダーゼ阻害率は以下の式により求めた。

結果を表１及び第１図に示す。

表１から、化合物１は著しくシアリダーゼ活性を阻害す
ることが分る。

第１図は、化合物１存在下で、２種類の基質濃度を用い
た時の反応速度をデイクソンプロットしたものであるが
、この図から、化合物１の阻害作用の形式が基質競合型
であることが分る。

表　　１無　　　　　　　　　　２７．３　　　　　　　−０．
１　　　４．９　　８２．００、旧　　　　　　１４．０　　　　４８．９０．００
１　　　２３．０　　１４．３実施例２及び３ビブリオ・コレラｘ　（Ｖｉｂｒｉｏ　ｃｏｌｅｒａｅ
）及びストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｓｐ、）由来のシアリダーゼを使用したことを除い
て、実施例１を繰り返し、化合物ｒの阻害率を測定した
。結果を以下の表２及び３に示す。

表２ビブリオ・コレラエ由来シアリダーゼへの阻害効果無　　　　　　　　　　５．８− 〇、１　　　　　　　　２．８　　　　　　５２．７０
、０１　　　　　　　５．３　　　　　　８．４０．０
０１　　、　　　　　５．９　　　　　　−０．２表３無　　　　　　　　　　１１．３　　　　　　　　−０
．１　　　２．８　　７５．４０．０１　　　８．５　　２４．６０．００１　　　１０．５　　７．４上記表より分るように、種々のシアリダーゼに対して化
合物Ｉの阻害作用を示すことが分る。

（急性毒性）化合物Ｉについての急性毒性試験を雌のマウスを用いて
、その静脈内投与して行なった。

実験条件供試動物・静注　ＩＣＲ系マウス６週令側合物濃度１３〜１５％（ｗ／ｖ）蒸留水に溶解ルベル動物数１０匹観察期間１４日間結果結果を表４に示す。化合物■は極めて低毒性であること
がわかる。

表４

【図面の簡単な説明】第１図はＮ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸の障
害パターンを示すデイクソンプロット図である。

Claims

【特許請求の範囲】一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるＮ−アセチル−３−フルオロノイラミン酸
またはその薬学的に許容し得る塩からなる抗ウィルス剤
。