JPH01294698A - フルオロ炭素鎖含有抗原複合体 - Google Patents
フルオロ炭素鎖含有抗原複合体Info
- Publication number
- JPH01294698A JPH01294698A JP1023645A JP2364589A JPH01294698A JP H01294698 A JPH01294698 A JP H01294698A JP 1023645 A JP1023645 A JP 1023645A JP 2364589 A JP2364589 A JP 2364589A JP H01294698 A JPH01294698 A JP H01294698A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- linker
- hapten
- complex
- carrier
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
- A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はフルオロ炭素鎖結合アーム、及びハプテンもし
くは薬物を担体に複合化させる（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）
ことにおけるそれらの使用に関する。
くは薬物を担体に複合化させる（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）
ことにおけるそれらの使用に関する。
抗原は抗体によって認識することができる物質である。
免疫系からの応答を引き出す抗原は免疫原とよばれる。
タンパク質や核酸等の巨大分子は異種宿主中で通常免疫
原性を有するが、５０００より低い分子量を有する分子
は通常有しない、しかしながら、多くの小さな非免疫原
性物質も大きな担体分子に共有的に付着する場合には免
疫応答を刺激するようになり、かかる物質をハプテンと
いう、ハプテンはそれ自身では抗体産生を刺激できない
が、抗体によって認識されそれと結合することができる
。ハプテン物質を担体に結合させると、通常合成抗原と
称される分子になる。本発明はハプテン有する合成抗原
をその担体に結合させる新規なリンカ−に関する。
原性を有するが、５０００より低い分子量を有する分子
は通常有しない、しかしながら、多くの小さな非免疫原
性物質も大きな担体分子に共有的に付着する場合には免
疫応答を刺激するようになり、かかる物質をハプテンと
いう、ハプテンはそれ自身では抗体産生を刺激できない
が、抗体によって認識されそれと結合することができる
。ハプテン物質を担体に結合させると、通常合成抗原と
称される分子になる。本発明はハプテン有する合成抗原
をその担体に結合させる新規なリンカ−に関する。
ハプテンを担体に複合化させるい（つかの結合アーム（
Ｌｉｎｋｉｎｇ ａｒｍｓ）が知られている（Ｋｏｌａ
ｒ＋米国特許４４４２２８４ ； Ｌｅａ＋１ｅｕｘ
、米国特許４１３７４０１ ； Ｆｅ１ｚｉ、米国特許
４５６３４４５：５ｖｅｎｓｋａ ５ｏｃｋｅｒｆａｂ
ｒｉｋｅ、 Ｅ Ｐ出願９８２５２゜Ｂｅｈｒｉｎｇｅ
ｒｗｅｒｋｅ Ａ Ｇ 、 ＥＰ出願６０９９９）
。
Ｌｉｎｋｉｎｇ ａｒｍｓ）が知られている（Ｋｏｌａ
ｒ＋米国特許４４４２２８４ ； Ｌｅａ＋１ｅｕｘ
、米国特許４１３７４０１ ； Ｆｅ１ｚｉ、米国特許
４５６３４４５：５ｖｅｎｓｋａ ５ｏｃｋｅｒｆａｂ
ｒｉｋｅ、 Ｅ Ｐ出願９８２５２゜Ｂｅｈｒｉｎｇｅ
ｒｗｅｒｋｅ Ａ Ｇ 、 ＥＰ出願６０９９９）
。
しかしながら、これらの結合アームはいずれもフルオロ
炭素鎖（ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ｃｈａｉｎｓ）を
含んでいない。
炭素鎖（ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ Ｃｈａｉｎｓ）を
含んでいない。
有機化合物をフッ素化する方法及びフッ素化有機化合物
の使用はＧｅｒｓｔｅｎｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｈａａ
ｓ＋＾ｎｇｅｗ、 Ｃｈｅｗ、 Ｉｎｔ、 Ｅｄ
、 Ｅｎｇｌ、、 ２０． ６４７−６６７（１
８９１）に精力的に総説されており、これを参考として
ここに入れる。しかしながら、この総説のどこにもフッ
素化化合物が免疫複合体においてスペーサとしての有用
性を有することは示唆されていない。
の使用はＧｅｒｓｔｅｎｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｈａａ
ｓ＋＾ｎｇｅｗ、 Ｃｈｅｗ、 Ｉｎｔ、 Ｅｄ
、 Ｅｎｇｌ、、 ２０． ６４７−６６７（１
８９１）に精力的に総説されており、これを参考として
ここに入れる。しかしながら、この総説のどこにもフッ
素化化合物が免疫複合体においてスペーサとしての有用
性を有することは示唆されていない。
Ｋ１ｅｖｅｎｓ＋米国特許３１３３９０Ｂはフッ素化し
た脂肪酸、アルコール及びそれらの誘導体、またはアミ
ンをタンパク様物質に結合して後者の変性を防ぐことを
教示している。しかしながら、彼はフッ素化化合物の架
橋剤（ｂｒｉｄｇｉｎｇ ａｇｅｎｔ）としての使用を
開示していない。
た脂肪酸、アルコール及びそれらの誘導体、またはアミ
ンをタンパク様物質に結合して後者の変性を防ぐことを
教示している。しかしながら、彼はフッ素化化合物の架
橋剤（ｂｒｉｄｇｉｎｇ ａｇｅｎｔ）としての使用を
開示していない。
Ｐｏｎｐｉｐｏｍ＋米国特許４２５９３２４は構造Ｙ−
こ（式中、Ｙは３つのチトグリコシドの１つであり、Ｒ
は３−（（ｐ−テトラフルオロフェネチル）フェニル）
プロピルとなり得る）の免疫アジユバイトを記述してい
る。この側鎖はそのグリコシドを他の分子に結合させる
（ｃｏｕｐｌｅ）ために用いられていない、またＰｏｎ
ｐｉｐｏｍの米国特許４３０１１５２及び４２２８２７
４も参照。
こ（式中、Ｙは３つのチトグリコシドの１つであり、Ｒ
は３−（（ｐ−テトラフルオロフェネチル）フェニル）
プロピルとなり得る）の免疫アジユバイトを記述してい
る。この側鎖はそのグリコシドを他の分子に結合させる
（ｃｏｕｐｌｅ）ために用いられていない、またＰｏｎ
ｐｉｐｏｍの米国特許４３０１１５２及び４２２８２７
４も参照。
Ｂｏｖｉｎ＋ウケミカルアブストラクツ セレクタ、Ｃ
ａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ（Ｃｈｅｎ＋１ｃａｌ Ａｓ
ｐｅｃｔｓ） （炭水化物（化学分野）〕、則鉦、１
０２６１７ ｆは−０（ＣＨｚ）ｓＮＨＣＯＣＦ、を有
するＴ−抗原三糖の合成を教示しているが、この基のリ
ンカ−としての使用は開示していない。さらにまた、唯
一の炭素原子しかフッ素化されていない。
ａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ（Ｃｈｅｎ＋１ｃａｌ Ａｓ
ｐｅｃｔｓ） （炭水化物（化学分野）〕、則鉦、１
０２６１７ ｆは−０（ＣＨｚ）ｓＮＨＣＯＣＦ、を有
するＴ−抗原三糖の合成を教示しているが、この基のリ
ンカ−としての使用は開示していない。さらにまた、唯
一の炭素原子しかフッ素化されていない。
５ｖａｎｓｋａ ５ｏｃｋｅｒｆａｂｒｉｋｅ、 Ｅ
Ｐ出願９８２５２に記述されたグリコシドの１つは （ｔＪり＋−ｔｏ Ｏ−（ＣＨｚ）ｇ−ｔｏ−〇ａｌ
（７頁参照）である、この化合物は種々の０−グルコシ
ド製造の中間体として用いられる。このオメガハロアル
キルグリコシドの結合アームとしての使用については何
の開示もない、また１つの炭素原子のみがフッ素化され
ている。
Ｐ出願９８２５２に記述されたグリコシドの１つは （ｔＪり＋−ｔｏ Ｏ−（ＣＨｚ）ｇ−ｔｏ−〇ａｌ
（７頁参照）である、この化合物は種々の０−グルコシ
ド製造の中間体として用いられる。このオメガハロアル
キルグリコシドの結合アームとしての使用については何
の開示もない、また１つの炭素原子のみがフッ素化され
ている。
ＤｕｓＣｈｉｎｓｋｙ ａｎｄ Ｐｌｅｖｅｎ、 ｌｌ
ｅｉｄｅｌｂｏｒｇｅｒ、 Ｊ。
ｅｉｄｅｌｂｏｒｇｅｒ、 Ｊ。
＾ｍｅｒ、 Ｃｈｅｗ、 Ｓｏｃ。７９ 、４５５９
（１９５７）は５−フルオロピリミジンの製造を開示し
ている。
（１９５７）は５−フルオロピリミジンの製造を開示し
ている。
Ｇｏｔｔｗａｌｄ、 ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、＋ ２３９ ＋４３５
（１９６４）はα−モノフルオログルタル酸の化学合成
及び酵素阻害活性を論じている。
Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、＋ ２３９ ＋４３５
（１９６４）はα−モノフルオログルタル酸の化学合成
及び酵素阻害活性を論じている。
Ｇ１１ａｄ、米国特許４４３３０５１はα−ジフルオロ
メチルオルニチン誘導体に関する。
メチルオルニチン誘導体に関する。
上記のいずれも審査宮殿にとって単なる興味以上の情報
を構成するとは出願人には思われない。
を構成するとは出願人には思われない。
本発明は生物活性物質をタンパク質担体に結合させる（
（、ｏｕｐｅ）ための、少なくとも１つのフッ素化脂肪
酸炭素鎖を含有する結合アームの使用に関する、該担体
は好ましくはリンカ−に結合するためのアミノ基を有し
、好ましくはタンパク質である。生物活性物質はハプテ
ンであることができ、この場合担体は得られた複合体が
免疫原性を示すように選ばれる。生物活性物質はまた薬
物または毒素であってもよく、この場合担体は細胞表面
抗原に対する抗体等の、細胞を標的とする剤及び／また
はインターナリゼーション剤である。
（、ｏｕｐｅ）ための、少なくとも１つのフッ素化脂肪
酸炭素鎖を含有する結合アームの使用に関する、該担体
は好ましくはリンカ−に結合するためのアミノ基を有し
、好ましくはタンパク質である。生物活性物質はハプテ
ンであることができ、この場合担体は得られた複合体が
免疫原性を示すように選ばれる。生物活性物質はまた薬
物または毒素であってもよく、この場合担体は細胞表面
抗原に対する抗体等の、細胞を標的とする剤及び／また
はインターナリゼーション剤である。
ハプテンの免疫アッセイの開発（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔ）における１つの問題点はハプテンとタンパク質担体
の複合体によって誘導される（ｅｌｉｃｉｔｅｄ）抗体
がハプテンだけのエピトープよりもむしろハプテンと担
体の共同によって形成されるエピトープを認識すること
である。フルオロ炭素類は血液代替物としてのそれらの
成功的使用から推測されるごと（、免疫的に不活性であ
り得る（Ｒｉｅｓｓ ａｎｄＬｅＢｌａｎｃ、 Ａｎｇ
ｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ １７ ＋ ６２１−
６３４（１９７Ｂ）、） 、従って、タンパク質担体へ
のハプテンの結合におけるフルオロ炭素の使用により、
スクリーニング抗体が偶発的な（ａｄｖｅｎｔｉ ｔｉ
ｏｕｓ）エピトープに結合する可能性は少ない。
ｔ）における１つの問題点はハプテンとタンパク質担体
の複合体によって誘導される（ｅｌｉｃｉｔｅｄ）抗体
がハプテンだけのエピトープよりもむしろハプテンと担
体の共同によって形成されるエピトープを認識すること
である。フルオロ炭素類は血液代替物としてのそれらの
成功的使用から推測されるごと（、免疫的に不活性であ
り得る（Ｒｉｅｓｓ ａｎｄＬｅＢｌａｎｃ、 Ａｎｇ
ｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ １７ ＋ ６２１−
６３４（１９７Ｂ）、） 、従って、タンパク質担体へ
のハプテンの結合におけるフルオロ炭素の使用により、
スクリーニング抗体が偶発的な（ａｄｖｅｎｔｉ ｔｉ
ｏｕｓ）エピトープに結合する可能性は少ない。
フッ素化結合アームはまた単一担体タンパク質分子に結
合するハプテン分子の数を求めることができる、ハプテ
ンのための標識として機能することができる。これはフ
ッ素化の特有の核スピン（ｎｕｃｌｅａｒ ５ｐｉｎ）
（Ｔ ＝１／２）により可能となる。
合するハプテン分子の数を求めることができる、ハプテ
ンのための標識として機能することができる。これはフ
ッ素化の特有の核スピン（ｎｕｃｌｅａｒ ５ｐｉｎ）
（Ｔ ＝１／２）により可能となる。
Ｆ原子はＮＭＲ分光分析法または中性子活性化分析（ｎ
ｅｕｔｒｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉ
ｓ）によって検出でき、これらの方法のうち前者は非破
壊的である。
ｅｕｔｒｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉ
ｓ）によって検出でき、これらの方法のうち前者は非破
壊的である。
対照的に、ハプテン置換測定のためのフェノール−硫酸
法は複合体を破壊する（ Ｄｕｂｏｉｓ、 ｅｔ ａｔ
、。
法は複合体を破壊する（ Ｄｕｂｏｉｓ、 ｅｔ ａｔ
、。
＾ｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｎ＋、 ２８．３５０
（１９５６））。
（１９５６））。
フッ素化した結合アームはまた特異抗体やレクチン等の
細胞標的剤に薬物または毒素を結合させるのに有用であ
る。薬物−抗体複合体はＧｏｅｒｓ。
細胞標的剤に薬物または毒素を結合させるのに有用であ
る。薬物−抗体複合体はＧｏｅｒｓ。
ＷＯ８６／ ０１７２０ ； Ｃａ５ｅｌｌａｓ、米
国特許４＋ ６４３＋ ８９５ ： Ｕｒｎｏｖｉｔ
ｚ、 Ｅ Ｐ出願１９３．１６１ ；５ｃａｎｎｏｎ＋
米国特許４５９００７１ ： Ｎｅｖｉｌｌｅ、 Ｊｒ
、。
国特許４＋ ６４３＋ ８９５ ： Ｕｒｎｏｖｉｔ
ｚ、 Ｅ Ｐ出願１９３．１６１ ；５ｃａｎｎｏｎ＋
米国特許４５９００７１ ： Ｎｅｖｉｌｌｅ、 Ｊｒ
、。
米国特許４４４０７４７に開示されている。Ｃ−Ｆ結合
の高エネルギー（１０７Ｋｃａｌ／ｒｍｏ１ｅ）はフル
オロ炭素類を代謝活性に抵抗性にし、実際それらは「抗
代謝物Ｊ （ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ）とみ
なされている。
の高エネルギー（１０７Ｋｃａｌ／ｒｍｏ１ｅ）はフル
オロ炭素類を代謝活性に抵抗性にし、実際それらは「抗
代謝物Ｊ （ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ）とみ
なされている。
フルオロカルボキシエステル（ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏ
ｘｙｌｅｓｔｅｒｓ）は、化学的結合剤（ｃｏｕｐｌｉ
ｎｇ ａｇｅｎｔｓ）の添加なしに、アミド結合を通し
てタンパク質と反応することができるので特に有用であ
る。
ｘｙｌｅｓｔｅｒｓ）は、化学的結合剤（ｃｏｕｐｌｉ
ｎｇ ａｇｅｎｔｓ）の添加なしに、アミド結合を通し
てタンパク質と反応することができるので特に有用であ
る。
Ｈａｒｓｈ複合化（ｃｏｕｊｕｇａｔｉｏｎ）条件（ア
シルアジド、シッフ塩基等）は複合化される物質を望ま
れないように変化させる恐れがある。
シルアジド、シッフ塩基等）は複合化される物質を望ま
れないように変化させる恐れがある。
本発明で意図される新規化合物は最終のハプテン−結合
アーム−担体複合体、及び中間体としてのハプテン−結
合アームまたは結合アーム−担体構築物を包含する。
アーム−担体複合体、及び中間体としてのハプテン−結
合アームまたは結合アーム−担体構築物を包含する。
好ましい態様のさらなる記述として前記特許請求の範囲
をここに参考にいれる。
をここに参考にいれる。
特許請求の範囲について、「フルオロ炭素鎖」は少なく
とも２つの炭素原子の配列であって、その中で少なくと
も２つの脂肪族炭素原子が少なくとも部分的にフッ素化
されている配列を意味するものとする。
とも２つの炭素原子の配列であって、その中で少なくと
も２つの脂肪族炭素原子が少なくとも部分的にフッ素化
されている配列を意味するものとする。
本発明のフッ素化結合アームは１以上の、フッ素化脂肪
族炭素原子鎖を有する。各鎖は部分的にもしくはすべて
フッ素化されることができ、鎖中の個々の炭素原子に付
いても同様である。結合アームはまた１以上の非フツ素
化脂肪炭素原子鎖、及び１以上の一〇−１−ＣＯ−１−
８−及び／または−ＮＨ−結合を有する。以下の非制限
例は意図された結合アームのいくつかを示す。そこにお
いて、ｍ、ｎ、ｐ及びｑは各々少なくとも１であり、Ｒ
はＨまたはそれによって結合アームがタンパク質に付着
できる活性基である。
族炭素原子鎖を有する。各鎖は部分的にもしくはすべて
フッ素化されることができ、鎖中の個々の炭素原子に付
いても同様である。結合アームはまた１以上の非フツ素
化脂肪炭素原子鎖、及び１以上の一〇−１−ＣＯ−１−
８−及び／または−ＮＨ−結合を有する。以下の非制限
例は意図された結合アームのいくつかを示す。そこにお
いて、ｍ、ｎ、ｐ及びｑは各々少なくとも１であり、Ｒ
はＨまたはそれによって結合アームがタンパク質に付着
できる活性基である。
（ａ） −（ＣＨり、−（ＣＦ２）、−Ｒ’ 。
（ｂ＋ −（ｃＨｔ）、−（ｃＦｚ）ｎ−（ｃＦｚ）
ｐ−Ｒ’ 。
ｐ−Ｒ’ 。
（Ｃ） Ｏ−（ＣＨｔ）−−（ＣＦ ｔ）−Ｒ’
１（ｄ） −０（ＣＨｘ）−ＮＨＣＯ（ＣＦｚ）−Ｒ
’ ；（ｅｌ （ＣＨｚ）−（ＣＦｚ）−−（ＣＦ
ｚ）ｐ （ＣＦｚ）ｑ−Ｒ′； （ｒ） −（ＣＨｚ）、−〇−（ＣＦｚ）、−Ｒ’
；及び（ｇ） Ｏ（ＣＨｇ−ＣＦｚ）−−Ｒ’Ｒ
′は−ＣＯＮ ３、− Ｎ ｓ 、−ＣＯＮ ＨＮ Ｈ
ｚ、−Ｎ ＨＮ Ｈｚ 、 Ｎ Ｈｚ 、−０Ｈ
ｓ −ＯＭｅ １０１！ｔ、−０−Ｂｅｎｚｙｌ、−
ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、−ＣＯ０−Ｂｅｎｚｙｌま
たは一〇Ｆｓとなり得る。
１（ｄ） −０（ＣＨｘ）−ＮＨＣＯ（ＣＦｚ）−Ｒ
’ ；（ｅｌ （ＣＨｚ）−（ＣＦｚ）−−（ＣＦ
ｚ）ｐ （ＣＦｚ）ｑ−Ｒ′； （ｒ） −（ＣＨｚ）、−〇−（ＣＦｚ）、−Ｒ’
；及び（ｇ） Ｏ（ＣＨｇ−ＣＦｚ）−−Ｒ’Ｒ
′は−ＣＯＮ ３、− Ｎ ｓ 、−ＣＯＮ ＨＮ Ｈ
ｚ、−Ｎ ＨＮ Ｈｚ 、 Ｎ Ｈｚ 、−０Ｈ
ｓ −ＯＭｅ １０１！ｔ、−０−Ｂｅｎｚｙｌ、−
ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、−ＣＯ０−Ｂｅｎｚｙｌま
たは一〇Ｆｓとなり得る。
通常、ｍ、ｎ、ｐ及びｑは２−２０の範囲である。
本発明で意図されたものとして、フッ素化結合アームに
複合化したハプテンの調製例を下記に示す。
複合化したハプテンの調製例を下記に示す。
１、ヘキサフルオログルタル モノメチルエステルへキ
サフルオログルタル酸１２．０ｇ （０，０５Ｍ）及び
乾燥メタノール２．４ ｇ （０，０７５Ｍ）を６０℃
に２時間加熱した。過剰のメタノールを常圧で留去し、
残渣を減圧で分留した。２．５ｍ／Ｈｇ下、５５℃でジ
メチルエステル３．５ｇを得、ついで９０−９２℃でモ
ノメチルエステル７．５ｇ（６０％）を得た。乾燥メタ
ノールの大過剰下での加熱によればジメチルエステルを
８０％の収率で得ることができる。ＣＤＣｌ！、中での
ＮＭＲはモノメチルエステルについては３．６５でシャ
ープなシンブレラ・トを示し、ジメチルエステルについ
ては３．７１でシャープなシングレットを示す。
サフルオログルタル酸１２．０ｇ （０，０５Ｍ）及び
乾燥メタノール２．４ ｇ （０，０７５Ｍ）を６０℃
に２時間加熱した。過剰のメタノールを常圧で留去し、
残渣を減圧で分留した。２．５ｍ／Ｈｇ下、５５℃でジ
メチルエステル３．５ｇを得、ついで９０−９２℃でモ
ノメチルエステル７．５ｇ（６０％）を得た。乾燥メタ
ノールの大過剰下での加熱によればジメチルエステルを
８０％の収率で得ることができる。ＣＤＣｌ！、中での
ＮＭＲはモノメチルエステルについては３．６５でシャ
ープなシンブレラ・トを示し、ジメチルエステルについ
ては３．７１でシャープなシングレットを示す。
−１５℃に冷却した、乾燥ＴＨＦ５０＋ｗｌ中ヘキサフ
ルオログルタル酸モノメチルエステル１．０ｇ （４ｍ
ｍｏｌ）及びトリエチルアミン０．２ｇの溶液に、攪拌
下、Ｂ Ｈ３ＴＨＦ （Ｉ Ｍ） ５ ｔｓｌを徐々に
加えた。攪拌を一１５℃で２時間、室温で４時間続けた
。エタノール５１ｍ１及び酢酸ｌ １１を加え、１５分
攪拌した。溶媒を真空除去し、残渣を水２５＋１１に懸
濁し、ＮａｔＣＯｓ固体でｐＨ７，５〜８、０に中和し
、エーテル（３Ｘ５０＋ｌｌ）で抽出した０合した抽出
液を乾燥し、蒸発乾固した。粗残渣Ｑ、５５ｇ（約５０
％）を冷蔵貯蔵し、さらなる精製なしに用いた。ＮＭＲ
（ＣＤＣ１ｓ）６３．９８（ｓ、 ３Ｈ） 、３．３
−３．６ （ｍ、 ２）１） 。
ルオログルタル酸モノメチルエステル１．０ｇ （４ｍ
ｍｏｌ）及びトリエチルアミン０．２ｇの溶液に、攪拌
下、Ｂ Ｈ３ＴＨＦ （Ｉ Ｍ） ５ ｔｓｌを徐々に
加えた。攪拌を一１５℃で２時間、室温で４時間続けた
。エタノール５１ｍ１及び酢酸ｌ １１を加え、１５分
攪拌した。溶媒を真空除去し、残渣を水２５＋１１に懸
濁し、ＮａｔＣＯｓ固体でｐＨ７，５〜８、０に中和し
、エーテル（３Ｘ５０＋ｌｌ）で抽出した０合した抽出
液を乾燥し、蒸発乾固した。粗残渣Ｑ、５５ｇ（約５０
％）を冷蔵貯蔵し、さらなる精製なしに用いた。ＮＭＲ
（ＣＤＣ１ｓ）６３．９８（ｓ、 ３Ｈ） 、３．３
−３．６ （ｍ、 ２）１） 。
３．５−０−一一アセチルガークトシル２２５−ヒドロ
キシ、２，２．３．３．４．４−へキサフルオロベンク
ン酸メチルエステル０．２ｇ（０，８ｍ＋ｍｏｌｅ）、
粉末分子篩１ｇ、粉末乾燥Ｃａ５０゜１ ｇ、ＡｇｔＣ
Ｏｓ １ ｇ及びＡｇ（Ｊ Ｏｓ ５０ｍｇの乾燥塩化
メチレン２５鍋！中へのスラリーに、アセトブロモガラ
クトース０．５ ｇ （１，２ｍｍｏｌｅ）を加えた。
キシ、２，２．３．３．４．４−へキサフルオロベンク
ン酸メチルエステル０．２ｇ（０，８ｍ＋ｍｏｌｅ）、
粉末分子篩１ｇ、粉末乾燥Ｃａ５０゜１ ｇ、ＡｇｔＣ
Ｏｓ １ ｇ及びＡｇ（Ｊ Ｏｓ ５０ｍｇの乾燥塩化
メチレン２５鍋！中へのスラリーに、アセトブロモガラ
クトース０．５ ｇ （１，２ｍｍｏｌｅ）を加えた。
６時間攪拌後、アセトブロモガラクトースをさらに０．
２ ｇ （０，５ａ＋ａｏｌｅ）加え、２時間攪拌した
。
２ ｇ （０，５ａ＋ａｏｌｅ）加え、２時間攪拌した
。
ＴＬＣ（３： ２ヘキサン、酢酸エチル）は反応の完結
を示した。濾過及び溶媒除去後、粗物質をシリカゲルカ
ラム（３：２へキサン、酢酸エチル）で精製した。エス
テル基はカラムクロマトグラフィー中部分的に加水分解
されたが、乾燥メタノール中で２時間攪拌することによ
って再エステル化された。β−グリコシド０．２６ｇ（
５５％）が単離された。
を示した。濾過及び溶媒除去後、粗物質をシリカゲルカ
ラム（３：２へキサン、酢酸エチル）で精製した。エス
テル基はカラムクロマトグラフィー中部分的に加水分解
されたが、乾燥メタノール中で２時間攪拌することによ
って再エステル化された。β−グリコシド０．２６ｇ（
５５％）が単離された。
’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｊ！ｓ）、５．８６ （ｄ、Ｊ＝
９．５Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ’）；３．６２ （ｓ、３Ｈ，
ＣＨ，）；１．８５ ２．２ （４Ｘｓ、 ４ｘ
ＣＨｓ）： ”Ｃ，δ１４０．１３６及び９７．６．
’雫Ｆ δ４３．７ 。
９．５Ｈｚ、ＩＨ，Ｈ’）；３．６２ （ｓ、３Ｈ，
ＣＨ，）；１．８５ ２．２ （４Ｘｓ、 ４ｘ
ＣＨｓ）： ”Ｃ，δ１４０．１３６及び９７．６．
’雫Ｆ δ４３．７ 。
４３．３及び３７．７（ＣｉＦｉ基準）。
テトラアセチルグリコシド３ ０．１４ ｇ （０，２
５ｍ＋１ｏｌｅ）をメタノール５ ｔａｌｌ及びトリエ
チルアミン０．５ｔａｌ中で６時間脱アセチル化した。
５ｍ＋１ｏｌｅ）をメタノール５ ｔａｌｌ及びトリエ
チルアミン０．５ｔａｌ中で６時間脱アセチル化した。
粗生成物を６５ ： ３５ ： ５ （ＣＨＣｊ’ｓ
：ＭｅＯＨ： ＨｚＯ）の溶媒系を用いる中性アルミナ
カラムを用いて精製した。グリコシドのメチルエステル
は精製中遊離カルボン酸に加水分解された。
：ＭｅＯＨ： ＨｚＯ）の溶媒系を用いる中性アルミナ
カラムを用いて精製した。グリコシドのメチルエステル
は精製中遊離カルボン酸に加水分解された。
ＮＭＲ（Ｄ＊Ｏ）４．３１ （ｄ、９Ｈｉ、Ｈ’）；
４．１−３．５ （ｍ、７Ｈ）；３．６５ （ｓ、３Ｈ
。
４．１−３．５ （ｍ、７Ｈ）；３．６５ （ｓ、３Ｈ
。
ｃＨ＊）。”Ｆ ＮＭＲ４３，３−４３，７（ｍ、
４Ｆ）； ３７．７ （ｍ、２Ｆ）。
４Ｆ）； ３７．７ （ｍ、２Ｆ）。
ＣＦ ｚｃ ＯＯＮａを内部基準として用いた。
５．５−Ｎ−（２’−ヒドロキシエチル）２．２゜３．
３．４．４−ヘキサフルオログルタルアミ′モ ル
エスール 乾燥メタノール２５ｍ１中のへキサフルオログルタル酸
ジメチルエステル４．０ ｇ （０，０１５ｍ）に乾燥
メタノール５醜ｌ中エタノールアミン０．６１ｇ（０，
０１ｍ）の溶液乙滴下し、４５℃で３０分攪拌した。溶
媒を除去し、残渣をシリカゲルカラム（ＣＨＣｌ、中１
０％メタノール）で精製して、無色の重い油として生成
物を得た。
３．４．４−ヘキサフルオログルタルアミ′モ ル
エスール 乾燥メタノール２５ｍ１中のへキサフルオログルタル酸
ジメチルエステル４．０ ｇ （０，０１５ｍ）に乾燥
メタノール５醜ｌ中エタノールアミン０．６１ｇ（０，
０１ｍ）の溶液乙滴下し、４５℃で３０分攪拌した。溶
媒を除去し、残渣をシリカゲルカラム（ＣＨＣｌ、中１
０％メタノール）で精製して、無色の重い油として生成
物を得た。
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）９．２５ （ｔ、ＮＨ，Ｊ’ ＝６
Ｈｚ）； ４．８ （ｔ、 ＯＨ，Ｊ”６．５Ｈｚ）
；３．４５（ｍ、２ Ｈ） ： ３−３５ （ｓ ＊
３ Ｈ２ＣＨｓ）；３．２５ （ｍ、２Ｈ）。
Ｈｚ）； ４．８ （ｔ、 ＯＨ，Ｊ”６．５Ｈｚ）
；３．４５（ｍ、２ Ｈ） ： ３−３５ （ｓ ＊
３ Ｈ２ＣＨｓ）；３．２５ （ｍ、２Ｈ）。
乾燥塩化メチレン２０１１１Ｖ中５−Ｎ−（２’ −ヒ
ドロキシエチル−２，２，３，３，４，４−へキサフル
オログルタルアミドモノメチルエステル０、１５ ｇ
（０，５５ａｉｏｌｅ）の溶液に、ＡｇＣＯ５０，５５
ｇ （２ｍｍｏｌｅ）、ＡｇＣＪ ０４２０ｍｇついで
アセトブロモガラクトース０．６ ｇ （１，５５ｎｏ
ｌｅ）を加えた。
ドロキシエチル−２，２，３，３，４，４−へキサフル
オログルタルアミドモノメチルエステル０、１５ ｇ
（０，５５ａｉｏｌｅ）の溶液に、ＡｇＣＯ５０，５５
ｇ （２ｍｍｏｌｅ）、ＡｇＣＪ ０４２０ｍｇついで
アセトブロモガラクトース０．６ ｇ （１，５５ｎｏ
ｌｅ）を加えた。
粉末分子篩及びＣａＳＯ４各０．５ｇを加え、無水状態
で１５時間攪拌した。ＴＬＣ（３： ２ヘキサン、酢酸
エチル）は反応の完結を示した。粗混合物をシリカゲル
カラムに通し、はぼ純粋な生成物を得た（ＴＬＣ）、脱
ブロッキング（ｄｅｂｌｏｃｋｉｎｇ）は、さらに精製
することなく、メタノール：トリエチルアミン（９：
１）中で行った。０．１１ｇ（５０％）の生成物が精製
された（シリカゲル、６５：３５ ： ５ＣＨＣＩｓ
、Ｉ’１ｅＯＨ，Ｈ意０）、ＮＭＲ（ＤｇＯ） 、４．
３６ （ｄ、ｌｈ、Ｈ’、Ｊ＝９Ｈｚ）；４．１−３．
３ （ｍ、 １１ Ｈ，３，６でシングレット、ＣＨ
ｓ）： ３．１４ （ｍ、 ２）１） 、 ”Ｆ ；
４１．７及び４８．６ （ＣＦｓＣＯＯＮａ基準）、
メチルエステルは脱ブロッキング中部分的に脱ブロック
された。
で１５時間攪拌した。ＴＬＣ（３： ２ヘキサン、酢酸
エチル）は反応の完結を示した。粗混合物をシリカゲル
カラムに通し、はぼ純粋な生成物を得た（ＴＬＣ）、脱
ブロッキング（ｄｅｂｌｏｃｋｉｎｇ）は、さらに精製
することなく、メタノール：トリエチルアミン（９：
１）中で行った。０．１１ｇ（５０％）の生成物が精製
された（シリカゲル、６５：３５ ： ５ＣＨＣＩｓ
、Ｉ’１ｅＯＨ，Ｈ意０）、ＮＭＲ（ＤｇＯ） 、４．
３６ （ｄ、ｌｈ、Ｈ’、Ｊ＝９Ｈｚ）；４．１−３．
３ （ｍ、 １１ Ｈ，３，６でシングレット、ＣＨ
ｓ）： ３．１４ （ｍ、 ２）１） 、 ”Ｆ ；
４１．７及び４８．６ （ＣＦｓＣＯＯＮａ基準）、
メチルエステルは脱ブロッキング中部分的に脱ブロック
された。
す３ ： ム の量 １
上記フッ化ハプテン（化合物４及び６）を水中でＨ３Ａ
と共に２時間攪拌し、スペクトラポア（ＳＰＥＣＴＲＡ
ＰＯＲＨ）膜管中３回取替えの蒸留水に対して７２時間
透析した。以下の実施例４で測定されたごとく、複合体
はｌ５Ａ１モルあたり３０ハプテンまでを含んでいた。
と共に２時間攪拌し、スペクトラポア（ＳＰＥＣＴＲＡ
ＰＯＲＨ）膜管中３回取替えの蒸留水に対して７２時間
透析した。以下の実施例４で測定されたごとく、複合体
はｌ５Ａ１モルあたり３０ハプテンまでを含んでいた。
多くの核（ｎｕｃｌｅｉ）はチャージされた回転体（Ｃ
ｈａｒｇｅｄ ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｂｏｄｉｅｓ）とよ
く僚た行動をし従って、それらの回転軸にそって磁気モ
ーメントを生じる。かかる核を均一の磁界に置く場合、
磁界に沿ってそれ自身を一列に整列しようとする。
ｈａｒｇｅｄ ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｂｏｄｉｅｓ）とよ
く僚た行動をし従って、それらの回転軸にそって磁気モ
ーメントを生じる。かかる核を均一の磁界に置く場合、
磁界に沿ってそれ自身を一列に整列しようとする。
その結果、それはこまのように、特定の量子化された歳
差周波数で歳差運動する。各許容される（ａｌｌｏｗｅ
ｄ）歳差周波数は各ゼーマンレベルと称されるエネルギ
ーレベルと関係を有する。交番磁界を均一磁界に垂直に
置く場合には、核は２つのエネルギーレベルの間で共鳴
するに至ることができる。核の電子環境は共鳴が起こる
磁界強度を変化させる。
差周波数で歳差運動する。各許容される（ａｌｌｏｗｅ
ｄ）歳差周波数は各ゼーマンレベルと称されるエネルギ
ーレベルと関係を有する。交番磁界を均一磁界に垂直に
置く場合には、核は２つのエネルギーレベルの間で共鳴
するに至ることができる。核の電子環境は共鳴が起こる
磁界強度を変化させる。
凍結乾燥複合体５−２０ｍｇを５ ｖａｎ Ｎ Ｍ Ｒ
管中の水０．２ｓｊｔに溶解し、重水素シグナルロック
（ｓｉｇｎａｌ １ｏｃｋ）のためＤｚＯ０，１ａｌｌ
を加えた。
管中の水０．２ｓｊｔに溶解し、重水素シグナルロック
（ｓｉｇｎａｌ １ｏｃｋ）のためＤｚＯ０，１ａｌｌ
を加えた。
スペクトルは、狭い口径の過冷却マグネット（ａ ｎａ
ｒｒｏｗ ｂｏｒｅ ５ｕｐｅｒｃｏｏｌｅｄ ｍａｇ
ｎｅｔ）を用し）る。
ｒｒｏｗ ｂｏｒｅ ５ｕｐｅｒｃｏｏｌｅｄ ｍａｇ
ｎｅｔ）を用し）る。
３００ＭＨｚで操作されるブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）
ＡＭ−３００モデルフ一リエ変換ＮＭＲスペクトロメー
タに記録した １９ｐシグナルは、内部基準としても機
能するＣＦｓＣＯＯＮａの既知量（水中１ｍ溶液の５０
μＥ）を加えることによって定量した（ｑｕａｎｔｉｆ
ｉｅｄ） ＠代表的には１９Ｆシグナルは８．０μｓｅ
ｃのパルス幅で５０−２００スキヤン（ｓｃａｎｓ）の
後に観察される。シグナルインチグレーシロン（ｓｉｇ
ｎａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）はまず一定量の基準
物質（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ） （ＣＦ ａ ＣＯＯＮａ
、 ＡｌｄｒｉＣｈから購入）を加え、ついでＣＦ ｓ
ｃ ＯＯＮａ添加の誤差（ｅｒｒｏｒ）を最小にするた
めこのプロセスを繰り返すことによって行った。１９Ｆ
エステイメーシツン（ｅｓｔｉ■ａｔｉｏｎ）は５％の
誤差範囲であった。
ＡＭ−３００モデルフ一リエ変換ＮＭＲスペクトロメー
タに記録した １９ｐシグナルは、内部基準としても機
能するＣＦｓＣＯＯＮａの既知量（水中１ｍ溶液の５０
μＥ）を加えることによって定量した（ｑｕａｎｔｉｆ
ｉｅｄ） ＠代表的には１９Ｆシグナルは８．０μｓｅ
ｃのパルス幅で５０−２００スキヤン（ｓｃａｎｓ）の
後に観察される。シグナルインチグレーシロン（ｓｉｇ
ｎａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）はまず一定量の基準
物質（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ） （ＣＦ ａ ＣＯＯＮａ
、 ＡｌｄｒｉＣｈから購入）を加え、ついでＣＦ ｓ
ｃ ＯＯＮａ添加の誤差（ｅｒｒｏｒ）を最小にするた
めこのプロセスを繰り返すことによって行った。１９Ｆ
エステイメーシツン（ｅｓｔｉ■ａｔｉｏｎ）は５％の
誤差範囲であった。
ＩＳＡのハプテン／ｍｏｌｅのエステイメート（竺旦艶
旦４ニル較 ４ １：１００ ３０Ｍ１ｎｓ １４±０．７ １５
±３ １５−２２４ １：１００ ２Ｈｒｓ、 ３１
±１．５２９．５±２ １９−３６４ １：１００ ２
Ｈｒｓ、 ３４±１．５ Ｎ／Ａ ４０−５に
のように、単一の担体分子上のハプテンの平均数を測定
するためにＮＭＲを用いることは、ハプテンが担体に上
記したフルオロ炭素含有鎖によって結合し、１以上のフ
ッ素が１９同位元素である限り、可能である。
旦４ニル較 ４ １：１００ ３０Ｍ１ｎｓ １４±０．７ １５
±３ １５−２２４ １：１００ ２Ｈｒｓ、 ３１
±１．５２９．５±２ １９−３６４ １：１００ ２
Ｈｒｓ、 ３４±１．５ Ｎ／Ａ ４０−５に
のように、単一の担体分子上のハプテンの平均数を測定
するためにＮＭＲを用いることは、ハプテンが担体に上
記したフルオロ炭素含有鎖によって結合し、１以上のフ
ッ素が１９同位元素である限り、可能である。
二瓜豹１里上
アミノ基含有結合アームを有するいずれかのハプテンを
ヘキサフルオログルタル酸ジエステルを用いてタンパク
質担体に結合することができることを実証するため、実
施例５の合成手順を行う。
ヘキサフルオログルタル酸ジエステルを用いてタンパク
質担体に結合することができることを実証するため、実
施例５の合成手順を行う。
遺ＪＦ例」−
エタノールアミン６．１ｇ（０，１Ｍ）とフタル酸無水
物１４．８ｇ（０，１Ｍ）を撹拌下１４０−１５０℃で
２時間加熱した。溶融物を冷水に注ぎ、ＣＨＣＪ３（３
Ｘ１５０＋ｓｊ）で抽出した。１６ｇ （８４％）の純
粋な白色結晶性固体、ｍ、ｐ、１２８ １３０℃（ｌｉ
ｔ （ｐ、 １２８℃）が得られた。
物１４．８ｇ（０，１Ｍ）を撹拌下１４０−１５０℃で
２時間加熱した。溶融物を冷水に注ぎ、ＣＨＣＪ３（３
Ｘ１５０＋ｓｊ）で抽出した。１６ｇ （８４％）の純
粋な白色結晶性固体、ｍ、ｐ、１２８ １３０℃（ｌｉ
ｔ （ｐ、 １２８℃）が得られた。
８、２−０−テトラアセトガラクトシルエチルフタリミ
ド 乾燥塩化メチレン２Ｓｓｌ中の２−ヒドロキシエチルフ
タリミド０．３ ｇ （１，５５ｌＩｏｌｅ）に、乾燥
分子篩及びＣａ Ｓ Ｏａ 、＾ｇｇｃＯｓ Ｏ，７ｇ
（２，５ｍ５ｏｌｅ）及び５０−ｇを加えた。アセト
ブロモガラクトース０、７ ｇ （１，５ｍ５ｏｌｅ）
を加え、室温で４時間攪拌した。アセトブロモガラクト
ース０．３５ ｇ （０，７５ａｅｍｏｌｅ）を加え、
１５時間攪拌を続けた。ＴＬＣ（３：２ヘキサン：酢酸
エチル）は反応の完結を示した。シリカゲルカラム上で
の精製（３：２ヘキサン：酢酸エチル）により純粋なβ
−アノマー０．４６ｇ（６０％）を得た。
ド 乾燥塩化メチレン２Ｓｓｌ中の２−ヒドロキシエチルフ
タリミド０．３ ｇ （１，５５ｌＩｏｌｅ）に、乾燥
分子篩及びＣａ Ｓ Ｏａ 、＾ｇｇｃＯｓ Ｏ，７ｇ
（２，５ｍ５ｏｌｅ）及び５０−ｇを加えた。アセト
ブロモガラクトース０、７ ｇ （１，５ｍ５ｏｌｅ）
を加え、室温で４時間攪拌した。アセトブロモガラクト
ース０．３５ ｇ （０，７５ａｅｍｏｌｅ）を加え、
１５時間攪拌を続けた。ＴＬＣ（３：２ヘキサン：酢酸
エチル）は反応の完結を示した。シリカゲルカラム上で
の精製（３：２ヘキサン：酢酸エチル）により純粋なβ
−アノマー０．４６ｇ（６０％）を得た。
ＮＭＲ（ＣＤＣＪｓ） ７．９４ （ｍ、２Ｈ）ニア
、８ （ｒｎ、２Ｈ）： ５−４ （ｄ、 １ ｈ
、 Ｈ’、Ｊｓ、ａ’”３．５Ｈ２）：５．２ （ｄｄ
、 ＬＨ，ＨＩＩＪ”１．！ −９，５８ＺＩＪ”−
９，Ｈｚ）： ５．０ （ｄｄ、 ＩＨ，Ｈ’）：
４．５２（ｄ、ＩＨ，Ｈ’）； ３．８−４．２ （
ｍ、 ７Ｂ）；１．９２２．１８ （４Ｘ ｓ、 Ｃ
ＨｓＸ ４．１２ Ｈ） ＊９、２−０−ガラクトシル
エチルアミンエタノール５■！中の２−０−テトラアセ
トガラクトシルエチルフタリミド０．２６ ｇ （０，
５＋ｇｎｏｌｅ）をヒドラジン０．１ｇと共に２時間還
流した。ＴＬＣ（ＣＨＣＩ ｓ ： Ｎｅｏ Ｈ： Ｈ
！Ｏの６５：３５：５）は反応の完結を示した。０．１
６ｇ（６８％）の純粋な脱ブロツク化物質をシリカゲル
カラム（６５： ３５ ： ５ ： ２ ＣＨｓＣｌ
ｓ、Ｍｅ ＯＨｓ Ｈｔ ０１Ｅｔ３Ｎ）上で精製した
− ＮＭＲ（ＤｔＯ）４．５（ｄ。
、８ （ｒｎ、２Ｈ）： ５−４ （ｄ、 １ ｈ
、 Ｈ’、Ｊｓ、ａ’”３．５Ｈ２）：５．２ （ｄｄ
、 ＬＨ，ＨＩＩＪ”１．！ −９，５８ＺＩＪ”−
９，Ｈｚ）： ５．０ （ｄｄ、 ＩＨ，Ｈ’）：
４．５２（ｄ、ＩＨ，Ｈ’）； ３．８−４．２ （
ｍ、 ７Ｂ）；１．９２２．１８ （４Ｘ ｓ、 Ｃ
ＨｓＸ ４．１２ Ｈ） ＊９、２−０−ガラクトシル
エチルアミンエタノール５■！中の２−０−テトラアセ
トガラクトシルエチルフタリミド０．２６ ｇ （０，
５＋ｇｎｏｌｅ）をヒドラジン０．１ｇと共に２時間還
流した。ＴＬＣ（ＣＨＣＩ ｓ ： Ｎｅｏ Ｈ： Ｈ
！Ｏの６５：３５：５）は反応の完結を示した。０．１
６ｇ（６８％）の純粋な脱ブロツク化物質をシリカゲル
カラム（６５： ３５ ： ５ ： ２ ＣＨｓＣｌ
ｓ、Ｍｅ ＯＨｓ Ｈｔ ０１Ｅｔ３Ｎ）上で精製した
− ＮＭＲ（ＤｔＯ）４．５（ｄ。
ＩＨ，Ｈ’、 Ｊ＝９．５Ｈｚ）、４．１５−３．５
（ｍ、 ８Ｈ）、３．１ （ｍ、２Ｈ）。
（ｍ、 ８Ｈ）、３．１ （ｍ、２Ｈ）。
１０、 ５−Ｎ−（２’−０−ガラクトシルエチルア々
’ ３３４４−ヘキサノ２−０−ガラクト
シルエチルアミン酸ジメチルエステル０．２ｇを乾燥メ
タノール５−１ｌ中室温で２時間攪拌した。過剰のメタ
ノール及びグルタミンジエステルを真空上除去した。残
渣は純粋であった。
’ ３３４４−ヘキサノ２−０−ガラクト
シルエチルアミン酸ジメチルエステル０．２ｇを乾燥メ
タノール５−１ｌ中室温で２時間攪拌した。過剰のメタ
ノール及びグルタミンジエステルを真空上除去した。残
渣は純粋であった。
ＮＭＲ（ＤｔＯ）４．３４ （ｄ、ＩＨ，Ｈ’、Ｊ−９
，５Ｈｚ）：３．６５ （ｓ、 ３ Ｈ，ＣＨ３）：
４．０５−３．１ （ｍ、 １ ０Ｈ）
、 鳳”Ｆ （ＤｔＯ）；−４，１９（４Ｆ）；
−４８，５８（２Ｆ）（内部基準としてＣＦ３ＣＯ０
Ｎａ） このハプテンは前述のごと（ＩＳＡに結合させた（ｃｏ
ｕｐｌｅｄ）＊ 代表的実験において、合成Ｔ−ハプテン（ＧａｌＧａｌ
Ｎａｃ −０（ＣＨｘ）ｓ−Ｎ）（ｇ） （例えばＬ
ｅｍｉｅｕｘ＋ Ｅ Ｐ出１１１４４１８８）１５Ｂを
ヘキサフルオログルタル酸メチルエステル及び乾燥メタ
ノ−ル０．５ｍｊ！と共に室温で２時間攪拌した。過剰
のエチルエステル及びメタノールを真空除去した。
，５Ｈｚ）：３．６５ （ｓ、 ３ Ｈ，ＣＨ３）：
４．０５−３．１ （ｍ、 １ ０Ｈ）
、 鳳”Ｆ （ＤｔＯ）；−４，１９（４Ｆ）；
−４８，５８（２Ｆ）（内部基準としてＣＦ３ＣＯ０
Ｎａ） このハプテンは前述のごと（ＩＳＡに結合させた（ｃｏ
ｕｐｌｅｄ）＊ 代表的実験において、合成Ｔ−ハプテン（ＧａｌＧａｌ
Ｎａｃ −０（ＣＨｘ）ｓ−Ｎ）（ｇ） （例えばＬ
ｅｍｉｅｕｘ＋ Ｅ Ｐ出１１１４４１８８）１５Ｂを
ヘキサフルオログルタル酸メチルエステル及び乾燥メタ
ノ−ル０．５ｍｊ！と共に室温で２時間攪拌した。過剰
のエチルエステル及びメタノールを真空除去した。
残渣を水２Ｉ１１１に溶解し、水中キーホールリンベッ
トへモキニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍ
ｏｋｉｎｉｎ（ＫＬＨ）６ｈｇの溶液に徐々に加えた。
トへモキニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍ
ｏｋｉｎｉｎ（ＫＬＨ）６ｈｇの溶液に徐々に加えた。
タンパク質溶液を室温で２０時間攪拌した。ＫＬＨ−Ｔ
複合体をクロマトグラフィー （Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−
５ＤＣ１水）で精製した０表１はＴ−ハプテン（１１）
を用いて調製した一連の複合体についての分析データを
提供する。
複合体をクロマトグラフィー （Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ−
５ＤＣ１水）で精製した０表１はＴ−ハプテン（１１）
を用いて調製した一連の複合体についての分析データを
提供する。
ＩＳＡ １０ｍｇ ５ｓ＋ｇ
５ｍｇ ５０にＬＨ＊ １
５ ｒａｇ ２０ ｍｇ ２０■、 ８．
０００ＫＬＨ＊ ６０ 閣ｇ ８
ｍｇ ５５ｓ＋ｇ ２．５００＊Ｋ
ＬＨの分子量は８Ｘ１０”とした。
５ｍｇ ５０にＬＨ＊ １
５ ｒａｇ ２０ ｍｇ ２０■、 ８．
０００ＫＬＨ＊ ６０ 閣ｇ ８
ｍｇ ５５ｓ＋ｇ ２．５００＊Ｋ
ＬＨの分子量は８Ｘ１０”とした。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）ハプテンとタンパク質担体とを複合化する方法で
あって、少なくとも１つのフルオロ炭素鎖を有するリン
カーによって共有結合させられた該ハプテンと該担体と
の複合体を生成させることを特徴とする方法。 （２）リンカーがアミド結合によってハプテンに付着し
ている請求項（１）記載の方法。（３）リンカーが Ｈ−Ｃｈ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−（ＣＦ＿２）＿ｎ−Ｒ′
（式中、Ｃｈはカルコゲンを表し、酸素もしくはイオウ
であることができ、ｍは２−２０でｎは２−２０であり
、Ｒ′はＨまたはリンカーのタンパク質への結合に関与
できる反応性基である）である請求項（１）記載の方法
。 （４）Ｒ′が−ＣＯＮ＿３、−Ｎ＿３、−ＣＯＮＨＮＨ
＿２、−ＮＨＮＨ＿２、−ＮＨ＿２、−ＯＨ、−ＯＭｅ
、−ＯＥｔ、−ＣＯＯ−ベンジル及び−ＣＦ＿３よりな
る群から選ばれる請求項（３）記載の方法。 （５）リンカーが Ｈ−Ｃｈ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−ＮＨＣＯ−（ＣＦ＿２）
＿ｎ−Ｒ′（式中、Ｃｈはカルコゲンを表し、酸素もし
くはイオウであることができ、ｍは２−２０でｎは２−
２０であり、Ｒ′は水素またはリンカーのタンパク質へ
の結合に関与することができる反応性基である）である
請求項（１）記載の方法。 （６）Ｒが−ＣＯＮ＿３、−Ｎ＿３、−ＣＯＮＨＮＨ＿
２、−ＮＨＮＨ＿２、−ＮＨ＿２、−ＯＨ、−ＯＭｅ、
−ＯＥｔ、−ＣＯＯ−ベンジル及び−ＣＦ＿３よりなる
群から選ばれる請求項（５）記載の方法。 （７）リンカーがエーテル結合によってハプテンに付着
している請求項（１）記載の方法。 （８）リンカーがその少なくとも１つがフッ素化された
少なくとも２つの脂肪族炭素鎖を有する請求項（１）記
載の方法。 （９）少なくとも一対の鎖をエーテル、チオエーテルま
たはアミド接合によって結合する請求項（８）記載の方
法。 （１０）生物活性物質と担体とを複合化する方法であっ
て、少なくとも１つのフルオロ炭素鎖を有するリンカー
によって共有結合させられた生物活性物質と担体の複合
体を生成させることを特徴とする方法。 （１１）得られる複合体のリンカータンパク質が本質的
に免疫的に不活性である請求項（１）記載の方法。 （１２）ハプテン、及び少なくとも１つのフルオロ炭素
鎖を有する結合アームを有するハプテン化合物。 （１３）ハプテンが炭水化物である請求項（１２）記載
の化合物。 （１４）ハプテンが単糖類である請求項（１２）記載の
化合物。 （１５）リンカーを、Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトー
ス、Ｄ−マンノース、Ｌ−フコース、２−アセタミド−
２−デオキシ−Ｄ−グルコース、２−アセタミド−２−
デオキシガラクトース及びそれらの４−、６−、及び４
，６−保護誘導体よりなる群から選ばれる糖単位に付着
させる請求項（１３）記載の化合物。 （１６）ハプテン、タンパク質担体、及び少なくとも１
つのフルオロ炭素鎖を有する共有結合リンカーよりなる
抗原複合体。 （１７）リンカーが Ｈ−Ｃｈ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−（ＣＦ＿２）＿ｎ−Ｒ′
（式中、Ｃｈはカルコゲンを表し、酸素もしくはイオウ
であることができ、ｍは２−２０でｎは２−２０であり
、Ｒ′はＨＮまたはリンカーのタンパク質への結合に関
与することができる反応性基である）である請求項（１
６）記載の抗原複合体。 （１８）Ｒ′が−ＣＯＮ＿３、−Ｎ＿３、−ＣＯＮＨＮ
Ｈ＿２、−ＮＨＮＨ＿２、−ＮＨ＿２、−ＯＨ、−ＯＭ
ｅ、−ＯＥｔ、−ＣＯＯ−ベンジル及び−ＣＦ＿３より
なる群から選ばれる請求項（１７）記載の抗原複合体。 （１９）リンカーが Ｈ−Ｃｈ−（ＣＨ＿２）＿ｍ−ＮＨＣＯ−（ＣＦ＿２）
＿ｎ−Ｒ′（式中、Ｃｈはカルコゲンを表し、酸素もし
くはイオウとなることができ、ｍは２−２０でｎは２−
２０であり、Ｒ′は水素またはリンカーのタンパク質へ
の結合に関与することができる反応性基である）請求項
（１６）記載の抗原複合体。 （２０）Ｒ′が−ＣＯＮ＿３、−Ｎ＿３、−ＣＯＮＨＮ
Ｈ＿２、−ＮＨＮＨ＿２、−ＮＨ＿２、−ＯＨ、−ＯＭ
ｅ、−ＯＥｔ、−ＣＯＯ−ベンジル及び−ＣＦ＿３より
なる群から選ばれる請求項（１９）記載の抗原複合体。 （２１）担体が細胞標的剤であり、活性物質が細胞の代
謝もしくは再生産活性に影響を与える請求項（１０）記
載の方法。 （２２）担体が抗体である請求項（２１）記載の方法。 （２３）活性物質が毒素である請求項（２１）記載の方
法。 （２４）フルオロ炭素鎖中の少なくとも１つのフッ素原
子が＾１＾９Ｆである請求項（１９）記載の化合物。 （２５）複合体中の単一担体分子上に置換したハプテン
分子の平均数を求める方法であって、 （ａ）担体分子と少なくとも１つのハプテン分子の複合
体であって、そこにおいてハプテン分子は、少なくとも
１つのフルオロ炭素鎖を有し、少なくとも１つの＾１＾
９Ｆ原子を予め定められた数有するエンカーによって担
体分子に複合化されている複合体を含有するサンプルを
用意し、 （ｂ）複合体を核磁気共鳴測定条件に服せしめて各複合
体に結合した＾１＾９Ｆ原子の数の平均数を求める ことを特徴とする方法。 （２６）ハプテンがＴ抗原決定基である請求項（１６）
記載の抗原複合体。 （２７）細胞表面抗原に対する抗体、薬物もしくは毒素
、及び少なくとも１つのフルオロ炭素鎖を有する共有結
合リンカーよりなる生物活性複合体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/151,145 US5055562A (en) | 1988-02-01 | 1988-02-01 | Fluorocarbon chain-containing antigenic conjugates |
| US151145 | 1998-09-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01294698A true JPH01294698A (ja) | 1989-11-28 |
Family
ID=22537502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1023645A Pending JPH01294698A (ja) | 1988-02-01 | 1989-02-01 | フルオロ炭素鎖含有抗原複合体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5055562A (ja) |
| EP (1) | EP0327070B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01294698A (ja) |
| AT (1) | ATE88901T1 (ja) |
| DE (1) | DE68906279T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007532614A (ja) * | 2004-04-13 | 2007-11-15 | イミューン ターゲティング システムズ | 抗原デリバリベクタ及びコンストラクト |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5639624A (en) * | 1989-03-14 | 1997-06-17 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Monoclonal antibodies specific for metallic cations and method therefor |
| US5972656A (en) * | 1989-03-14 | 1999-10-26 | Bionebraska, Inc. | Mercury binding polypeptides and nucleotides coding therefore |
| CA2189356A1 (en) * | 1994-05-02 | 1995-11-09 | Ting Chi Wong | Process for preparation of glycosides of tumor-associated carbohydrate antigens |
| US6111079A (en) * | 1995-06-05 | 2000-08-29 | Bionebraska, Inc. | Lead binding polypeptides and nucleotides coding therefore |
| US5688295A (en) * | 1996-05-08 | 1997-11-18 | H. E. W. D. Enterprises-America, Inc. | Gasoline fuel additive |
| US6217578B1 (en) | 1999-10-19 | 2001-04-17 | Stryker Spine S.A. | Spinal cross connector |
| GB0716992D0 (en) | 2007-08-31 | 2007-10-10 | Immune Targeting Systems Its L | Influenza antigen delivery vectors and constructs |
| EP2391635B1 (en) | 2009-01-28 | 2017-04-26 | Epimmune Inc. | Pan-dr binding polypeptides and uses thereof |
| US20110165037A1 (en) * | 2010-01-07 | 2011-07-07 | Ismagilov Rustem F | Interfaces that eliminate non-specific adsorption, and introduce specific interactions |
| GB201022147D0 (en) | 2010-12-31 | 2011-02-16 | Immune Targeting Systems Its Ltd | Formulation |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3133908A (en) * | 1959-09-01 | 1964-05-19 | Howard B Klevens | Protection of proteins against denaturation by fluorinated aliphatic compounds |
| US4228274A (en) * | 1976-09-28 | 1980-10-14 | Merck & Co., Inc. | 1-Substituted glycopyranosides |
| US4259324A (en) * | 1979-07-31 | 1981-03-31 | Merck & Co., Inc. | Immunologic adjuvant thio glycoside compounds and compositions |
| US4301152A (en) * | 1979-10-26 | 1981-11-17 | Merck & Co., Inc. | Immunologic adjuvant |
| US4433051A (en) * | 1981-10-14 | 1984-02-21 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Derivatives of α-difluoromethylornithine useful in analysis |
| SE8203925D0 (sv) * | 1982-06-23 | 1982-06-23 | Svenska Sockerfabriks Ab | New and novel glycosides, glycoconjugates and processes for their preparation |
| FR2602774B1 (fr) * | 1986-07-29 | 1990-10-19 | Atta | Nouvelles molecules amphiphiles polyhydroxylees et perfluoroalkylees ayant des proprietes tensioactives |
-
1988
- 1988-02-01 US US07/151,145 patent/US5055562A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-02-01 JP JP1023645A patent/JPH01294698A/ja active Pending
- 1989-02-01 DE DE8989101745T patent/DE68906279T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-02-01 AT AT89101745T patent/ATE88901T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-02-01 EP EP89101745A patent/EP0327070B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007532614A (ja) * | 2004-04-13 | 2007-11-15 | イミューン ターゲティング システムズ | 抗原デリバリベクタ及びコンストラクト |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0327070B1 (en) | 1993-05-05 |
| ATE88901T1 (de) | 1993-05-15 |
| US5055562A (en) | 1991-10-08 |
| DE68906279T2 (de) | 1993-08-12 |
| DE68906279D1 (de) | 1993-06-09 |
| EP0327070A1 (en) | 1989-08-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2731739B2 (ja) | 四級アンモニウム免疫原接合体およびイムノアッセイ試薬 | |
| US5488126A (en) | Bifunctional chelating agents | |
| US3975342A (en) | Tyrosyl-class antigenic conjugates, their preparation and antibodies raised thereto | |
| JPH01294698A (ja) | フルオロ炭素鎖含有抗原複合体 | |
| US5482700A (en) | Substituted polyamino, polycarboxy complexing agent dimers for MRI and X-ray contrast | |
| JPS60500767A (ja) | 生特異的親和反応の定量方法 | |
| US5242681A (en) | Lipophilic contrast agents for diagnostic image analysis | |
| US4213893A (en) | Flavin adenine dinucleotide-labeled conjugates for use in specific binding assays | |
| US4036823A (en) | Barbituric acid antigenic conjugates, their preparation, antibodies and use | |
| JPH02184700A (ja) | スフインゴイド部分にカツプリング可能な基を有するグリコスフインゴリピド | |
| DE3710730A1 (de) | Substituierte komplexbildner, komplexe und komplexsalze, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel | |
| US3995021A (en) | Antigens of 5,5'alkylphenyl barbituric acids and related hydantoin compounds | |
| JPH0717672B2 (ja) | コバラミン―酸ヒドラジド，その製造法およびコバラミン接合体 | |
| US5439798A (en) | Maleimide adduct conjugates of procainamide and NAPA | |
| JPS6222065A (ja) | 酵素免疫測定に好適な、標識酵素と免疫作用物質とからの接合体の製法 | |
| KR100199892B1 (ko) | 단백질에 금속 이온을 부착하기 위한 킬레이트제 | |
| EP0113102A2 (en) | Procainamide and napa immunogens, antibodies labeled conjugates, and related derivatives | |
| JP3031636B2 (ja) | ピペリジン類似体とプロカインアミド及びｎａｐａの結合体 | |
| US4673763A (en) | Alpha-functionalized derivatives and labeled conjugates of procainamide and NAPA | |
| US5693309A (en) | Substituted complexing agents, complexes, and complex salts, processes for their production, and pharmaceuticals containing same | |
| US4339390A (en) | Preferential immunoreactivity of syn-isomer of cortisol derivative | |
| KR100762359B1 (ko) | 신생혈관특이적 엠알 조영제 및 이의 제조방법 | |
| JPH06228118A (ja) | アミオダロンおよびその代謝産物の免疫学的測定のための試薬および方法 | |
| JPH06316599A (ja) | ジフェンヒドラミンおよびその代謝産物の免疫学的測定のための組成物および方法 | |
| Pandurangi et al. | Chemistry of Bifunctional Photoprobes: 4. Synthesis of the Chromogenic, Cleavable, Water Soluble, and Heterobifunctional Sulfosuccinimidyl (N-methylamino Perfluoroaryl Azido Benzamido)-ethyl-1, 3′-Dithiopropionate: An Efficient Protein Cross-Linking Agent |