JPH01501281A - 微生物によるビシクロオクタジオンカルボン酸エステルの立体特異ケト還元 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 微生物によるビシクロオクタジオンカルざン酸エステルの立体特異ケト還元 本発明は、式（±）−厘のラセミ体の二環式カルバサイクリン中間体を立体特異 モノ−ケト還元して相応する光学活性の式（＋）−１の３α−ヒドロキシ化合物 にする方法に関する： 前記式中の基Ａ、Ｂ及びＲＦ’Ｓ　、以下のものを表す：Ａ　：　ＣＢ、又はＣ Ｈ−ＣＯＯＲ。

Ｂ：酸素原子、 又はその他のケタール基、及び Ｒ：Ｃ１％Ｃ，−アルキル基を表す。

該方法は、一般式：（±）−！（式中、Ａ、Ｂ及びＲは前記のものを表す）で示 さ几るケトンを微生物で処理しかつその際生成する３α−ヒドロキシーゾロスタ サイクリン中間生成物（こ１はその配置において、天然のＰＧＩ２に相当する） を単離することを特徴とする。

本発明による立体特異ケト還元法の第２実施形にかいては、天然のＰＧ４２に相 当して配置されたラセミ体のシンソンのエナンチオマー（±）−１ｉｔ微生物に よって還元するのではなく、アンチボーデン形を還元する。

この場合には、化学的（例えば硼水素化す）　ＩＪウムを用いて）又は微生物学 的に（±）−１に還元することにより、微生物学的形質転換において変化せずに 維持された、天然に配置されたケト−エナンチオマーＣ±）−ｌをプロスタサイ クリンの合成のために採用する。

（±）　−１（＋）　−ＩＩ　（−）　−１本発明は、特に以下に記載するプロ スタサイクリン中間体３〜７の立体特異還元のために適当である二光学活性６ａ −カルバープロスタサイクリン及び特にそれから誘導された若干の化合物は、天 然のプロスタサイクリン（ＰＧＩ２）の安定な同族体として重要な治療学同用途 を有する（　Ｒ，Ｃ，Ｎ１ｃｋｏｌｓｏｎ、　Ｍ、Ｌ　Ｔｏｗｎ。

Ｈ，Ｖｏｒｂｒｉｉｇｇｑｎ著：　Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ−Ａｎａｌｏｇ、 　ＭｅｄｉｃｉｎａｌＲｑｓｅｒｃｈ　Ｒ＠ｖｉｅｗ、　Ｖｏｌ、　５＋　Ａ６ １　＊　８−１〜ｓ　３　（１９８５））。

この最近の概要に記載された合成法は時間がかかりかつ一部分ラセミ体のカルバ サイクリンも九らすにすぎない。特に、天然のＰＧＩ２に相応する絶対的配置の カルバサイクリンを生成する合ＦＸは特に費用がかかる。

この原因は、入手しやす＾適当な出発物質が非掌性でちりかつ光学活性はまず合 成過程においてこのために適当な中間段階に導入危ければならないからである。

若干の合成は、既に光学活性の７α−ヒドロキシ−６β−ヒドロキシメチル−２ −オキサ−ビシクロ〔３゜３．０１−３−オン誘導体から出発する。それにより 確かに光学活性を導入する問題点は鳩決される。しかしながら、カルバサイクリ ン同族体にとってその都度典型的なα−及びω−鎖の構成のために初めて適当で ある、３α−ヒドロキシ−２β−ヒドロキシメチル−ビシクロ（３，５，０１オ クタン−７−オンの誘導体を達成する定めには、２−オキサ官能基をメチレン基 で置換するために同側の他段階式の合成シーケンスを実施しなければならない。

最近の刊行物には、光学活性カルバサイクリンの合成のためにシス−ビシクロ（ ：　３．３．０　）オクタン−３゜７−シオン誘導体を使用することが記載され た。コジマ他は、Ｃｈｅｍ、　ＰｈＰＬｒｍ、　Ｂｕｌｌ、　！＋　３　、２６ ８８　（’１９Ｂ５）に、ラセミ体の７，７−ジエチレンジオオキシ−３α−ヒ ドロキシ−シス−ビシクロＣ３，３，０）オクタン−２−カルボン酸のジアステ レオマーの壇を分離することを包含する方法を記載した。

この方法も、３−オキソグルタルエステルかう出発して、カルバサイクリン同★ 体の出発物質に達するためには、ｆｉ！１ｆｆ７つの反応工程を必要とする。更 に、不安定なβ−ケト酸中間段階を介する。

更に、既に記載したように、光学活性カルバサイクリン同族体を製造するために は、簡単な勾造が行われる合成工種は公知ではない。

前記のプロスタサイクリン中間生成物での本発明による還元は、以下の微生物菌 株又はそれから単離された酵素で実施する： リゾプス・オリデｘ　（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ｏｒｙｚａｑ　（ＣＢＳ′５７９ｄ ７））リゾプス・アルリッス（Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｕｓ　（ＡＴＣ Ｃす、／ｌプスー７／ｌ／リッス［Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｉｕｓ　（ ＡＴＣＣロドトルラ橿（Ｒｈｏｄｔｏｒｕｌａ　５ｐｅｃ、（ＡＴＣＣ１８１０ １））ロドトルラ・ムキラギノサ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌ、ａ　ｍｕｃｉｌａ− ｇｉｎｏｓａ（ＮＣＹＣ６３）　） ロドトルラ・グルチニｘ　（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｉｎｉｇ（ＡＴ ＣＣ２５２７）　） カンシトソラニ［Ｃａｎｄｉｄａ　５ｏｌａｎｉ　（ＩＦ○９６８１））リゾシ ス−ストミニフェル［Ｒｈ１ｚｏｐｕ８ｓｔ、ｏｌｏｎｉｆｅｒ（ＡＴＣＣ６２ ２７ｂ）　〕 微生物の前記綱の撞々の種類のうちでも、勿論本発明のケト還元において作用効 果の差異が生じる。

前記菌株リゾシス・オリヂエ（ＤＳＭ　３８９９　）及びリゾプス−７、Ｉ＋／ リッス（ＤＳＭ　３８９８　）は、１９８６年１１月１１日に、西ドイツ国微生 物寄託所に寄託された。

本発明方法に基づき製造されたー毅式（＋）−１の光学活性の６α−ヒドロキシ 化合物からは、薬理学的に符効なプロスタサイクリンを製造することができる。

例えば（＋）−１から出発して有効物質のイロプロスト（ｌ１ｏｐｒｏｓｔ：　 ：ｌ−ｏツバ特許第１１５９１号明細書に記載されている）ｔ−得ることができ る。

従って、本発明は、式：　（＋）　−Ｉ（＋）　−１ 〔式中、 Ａは基−ＣＨ２−又は）　ＣＨ−ＣＯＯＲを表し、Ｂは酸素原子又Ｈ２価の基− ｏ−ｘ−ｏ−（ｘは１〜７個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れ鎖状アルキル 基を表す）を表し、 Ｒは１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れ鎖状アルキル基又はベンジル 基を表す〕で示される６α−ヒドロキシ−プロスタサイクリン中間体を製造する 方法に関し、該方法は、式：　（＋）　−Ｉｔ　：〔式中、Ａ、Ｂ及びＣは前記 のものを表す〕で示されるラセミ体のビシクロオクタジエンをリゾプス−、ロド トルラ−又はカンクダ菌株で処理しかつ、使用菌株がラセミ体の（±）−１から 成る（−）−形を還元する場合には、式（＋）　−［の変化しなかったビシクロ オクタンエンの化学的又は微生物学的還元を引き続き行うことｔ−特徴とする。

Ｘが１〜７伽の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れ鎖状アルキル基を表す場合に は、以下のもの意図している：　−ＣＨ２）ｎ−（ｎ　−１〜７）（メチレン、 エチレン、トリー、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−及びヘグタメチレン）、−Ｃ （ＣＨ３）２−１−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−−Ｃ（ＣＦ （３）２−ＣＨ２−−−ＣＨ２−ＣＦ！（ＣＨ３）−、ＣＦ！２−Ｃ（ＣＦ！３ ）２−。

−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ５）−ＣＪ−、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−、− ＣＨ（０２Ｈ５）−。

−Ｃ（０２Ｈ３）ｚ−＊　−ＣＨ（０２Ｈ，５）−ＣＦ（２−−−Ｃ（Ｃ２Ｈ５ ）２−ＣＨ２−＊−ＣＨ２−ＣＨ（Ｃ２Ｈ５）−ｓ−ＣＨ２−Ｃ（（’２Ｈｓ） ２−９−ｃＨ２−ｃＨ（ｃ、Ｈ，）−ａｑ２−。

−ｃＨ２−ｃ（ｃ２Ｈｓ）ａ−等。

１１ＺＣ１〜Ｃ６−アルキル基を表す場合には、メチル、エチル、ｎ−プロピル 、イングロビル、ｎ−エチル、インエチル、Ｓ−エチル、ｔ−エチル、ｎ−ペン チル、インペンチル、６−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシ ル等が理解されるべきである。Ｂが表す最終的に所望されるものに基づき、保護 基は自体公知方法で分離することができる。

まず、前記の微生物のために一般に使用される培養条件下で適当な培養基内でか つ換気しながら深部培養体を培養する。次いで、該培養体に培養基（適当な溶剤 中に導かすか又に有利には乳化した形で）加えかつ、最大の培養基変換が達成さ れるまで、発醪させる。

適洛な培養基溶剤は、例えばメタノール、エタ／　−ル、ゲルコールモノエーテ ル、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドである。培養基の乳化は、 例えば該培養基を微細分した形で又は水と混和可能な浴剤（例えばメタノール、 エタノール、アセトン、グリコールモノメチルエーテル、ジメチルホルムアミド 、ジメチルスルホキシド）中に容かして激しい乱流下に、常用の乳化助剤を含有 する（有利には石灰を除いｔ）水中にＣ１ＩＬＩＮする。適当な乳化助剤は、非 イオン性乳化助剤、例えばエチレンオキシ「アダクト又ｉ１１ゲルコールの脂肪 酸エステルである。適当な乳化剤とじてに、市鈑の湿潤剤例えばＴｑｇｉｎ　’ 回、Ｔａｇａｔ（８）及び５ｐａｎ（ＰＪが挙げられる。

しばしば、培養基の乳化は培養基流量を高めることができ、ひいては培養基濃度 を上昇させる。しかしまた、本発明方法においては、発酵業者にとっては間知で あるような、培養基の流量を上昇させる別の方法を適用することも可能である。

最適な培養基濃度、培養基供給時間及び発酵時間は、使用される培養基の構造及 び使用される微生物の種類に左右される。これらのｇＭに微生物学的変換におい て一般に必要であるように、個々のケースにおいて当業者にとって慣用であるよ うな前実験によって確かめることができる。

出発化合物の製造 ジエチルエステル（３）は文献から公矧であり（Ｗｅｉｓｓかつ３−オキソグル タルＭＲジメチルエステルから出発してシス−ビシクロ（３，３，０）オクタン −６，７−−ジオン−２，４，６，８−テトラカルボン酸−テトラメチルエステ ルを介して２反石工穆で良好に入手される。

ジエチルエステル（４）はシス−ビシクロ［３，５，０）オクタン−３，７−ジ オン−２，４，６，８−テトラカルざン酸−テトラエチルエステル（ヨーロッパ 特許第３３８６３号）から製造することができる。

高級エステルは前記方法に類似して又はり、Ｆ、　Ｆａｂｅｒｅｔ　ａｌ、著（ Ｊ、　Ｏｒｇ、　ｃｈｅｍ、　５０＊　３６１８　（１９８５））の方法に基づ きツメチルエステルを反応させることにより製造することができる。

７．７−ニチリンシオキシーシスービシクロＣ３，３゜この製法に、種々の著者 によって記載されている（　Ｎ１ｃｋｏｌｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ著の前記文献参照 ）にの製造は、前記文献記載の方法に基づき３，３−（２，２−ジメチルトリメ チレンジオキシ）−シス−ビシクロ（５，３，０）オクタン−７−オンから行う （Ｌ　Ｃａｒｃ＠１ｌａｒ　ａｔ　ａｌ、　Ｔｑｔｒａｈｑｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ ｑｒｓ　’ｌ　５　。

２０１９（１９８４））。

この化合物は、例えば前記（５）もしくは（６）を酸及び水でケタール分離する か又はシス−ビシクロ〔３゜３、０１オクタン−３，７−ジオンをカルボキシル 化しかつ例えばメチル炭酸マグネシウムでエステル化スることにより製造するこ とができる〔試薬製造：Ｍ。

５ｔｉｌ＊ｓ、　Ｉ（、Ｌ　Ｆｉｎｋｂｑｉｎｑｒ著”　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃ ｈｅｗ、　Ｓｏｃ、”８５．６１６（１９６５））。

微生物的還元によって得られた（　Ｉ　Ｓ　、　５　Ｓ　、　６　Ｒ。

７Ｒ）−７−ヒドクキシービシクロ（３，３，０）オクタン−６−オン−２，６ −ジカルボン酸ジエステルは、従来の化学的方法に基づきカルバサイクリン、例 えば（１８，２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−３−ヒドロキシ−７゜７−ニチリンゾオキシ ービシクロ（３，３，０）−オクタン−２−カルざン酸メチルエステルに転化す ることができ、この化合物の光学活性カルバサイクリンへの転化は最近コゾマ他 によって記載された。もちろん本発明による方法に基づき製造された中間物質か らα−及び／又はω−ケトにおいて変質構造を有する全てのカルバサイクリン同 族体を製造することもできる。

過剰のカーボンエステル基は、β−ケトエステルとして自体公矧方法に基づき脱 カルボキシル化する。このために特に適当であるのは、１．４−シアヂビシクｔ −Ｃ２，２，２）オクタン〔例えばＭｉｌｅｓ　ａｔ　ａｌ著、。

Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　”　３９　、２６４７　（１９７４）に基づく〕 又はジメチルスルホキシド又はジメチルホルムアミド中のハロゲン化物イオン［ Ｋｒａｐｃｈｏ、　５ｙｎｔｈｅｓｉｓて、（Ｉ　Ｓ　、２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）− ３−ヒドロキシ−ビシクロ（５，３，、０）オクタン−７−オン−２−カルざン 酸エステルが得られる。

得られた（ＩＳ、２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−り一ヒドロキシーぎシクロ（５，！１． 　Ｏ”ｌオクタン−７−オン−２−カルボン酸エステルは、常法で１，２−又は １，３−ジオールと酸又は酸性塩と接触させかつ共沸蒸留又は水を吸収する物質 により反応水を除去することによシ反応させることができる。エチレングリコー ルを使用すると、それによりコンマによって記載されたカルバサイクリンのため の出発物質が得られる。

実施例１ シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−６，７−ソシスービシクロＣ３，３， ０）オクタン−３，７−シオンー２．４．６．Ｂ−テトラカルぜン酸−テトラエ チルエステル２５．９をエタノール６８．５−及びジメチルスルホキシド１７５ 紅中の水酸化ナトリウム１４．１ｇの５０℃に加熱した容液に加えかつこの温度 で窒素雰囲気下で１８時間攪拌する。冷却後に、氷水７５０ｄ上に注ぎ、酢酸で −５〜６に散性化し、酢酸エチルで抽出し、該抽出物を炭散水素ナトリウム及び 塩化すトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させかつ真空中で濃縮する 。エタノールから再結晶後に、融点９８〜１００℃の生成物１３．３７　ｇ力； 得られる。

実施例２ ５５〜６０％の水素化ナトリウム３　Ｂ−３４，９をカルざン酸ジメチル６１６ ゴ中に懸濁させ、望素雰囲下で５０℃に加熱しかつ少量を炭酸ジメチル３７ｏｄ 中の５．５−Ｃ２，２−ソメチルトリメチリンゾオキシ）−シスービシクロ（３ ，３，０）オクタン−７−オン４９．３１９の溶液に加える。メタノール２酎を 加えることにより、反応を開始させ、残りの前記溶液を加えかつ５０℃で計７． ５時間攪拌する。水浴中で冷却し、過剰の水素化ナトリウムをメタノールで分解 し、水を加えかつ酢酸で中和させる。生成物をジクロルメタンで抽出し、真空中 で濃縮しかつ生成物をヘキサンで結晶させる。融点７２℃の生成物５３．４４　 ｇが得ら几る。

実施例３ ａ）７．７−（２，２−シメチルトリメチリンゾオキシ）−シス−ビシクロＣ３ ，３，０３オクタン−３−オン−２−カルボン散メチルエステル１５．Ｓ’ｔ− アセトン３５Ｑｍｌ中に弓かし、硫酸水素カリウム７．２３１を加えかつ４０℃ に１時間加熱する。冷＃Ｊ牙に、１Ｎの水酸化カリウム溶液で中和させ、真空中 でアセトンを留去しかっジクロルメタンで抽出する。生成物１０．６ｇが得られ 、これはジイソプロピルエーテルから再結晶させることができる（融点６９°Ｃ ）。

ｂ）窒素雰囲気下でシス−ビシクロ（３，３，０〕オオクタン−３、７−’）オ ン２６．０，５Ｉｔ２．１５％ルのメチルカルボン酸マグネシウム容液３５０＆ １ｊ、！ニー緒にジメチルホルムアミド中で４時間加熱し、冷却しかつ該混合物 を−６５〜−５０℃に冷却した８、８モルのメタノール性塩酸５ＱＯＩＬｔ中に 徐々に加える。１晩に亘って２０℃に加熱し、真空中で濃縮し、水を加えかつジ エチルエーテルで抽出する。ｉ酸ナトリウムで乾燥した後に、真空中で濃縮しか つ得られた残留分を酢酸エチル／メタノール（９５：５）でシリカゲルでクロマ トグラフィー処理する。生成物（融点６７〜６９°Ｇ）２１．３１ｇが得られる 。

実施例４ リゾシス・オリヂエ菌株（ＣＢＳ　３２９４７　）の発生４〜８日後の傾斜寒天 培養基を生理食塩水３１ｔで懸濁させかつそｆ′Ｌｔ−以下の組成の滅菌培養基 ５００ｄを含有ｆる２ｔのエーリンマイヤーフラスコに接種する。

グルコース　６．０チ コーンステイーゾ液　１．０チ ＮａＮＯ３０−２％ ＫＦ！２Ｆ０．　０．１　チ に２ＨＰＯ，Ｏ−２憾 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ｏ、ｏ　５　憾 ＦＱＳσ４−７Ｈ２００，００２％ ｘｃｚ　Ｏ，０５憾 前記培養基を６０℃で回転振盪器で５６時間振盪し、その際こｎらは大抵大きな 塊に成長する。接種性を改良するために、該塊を接種フラスコ内で４＠菌条件下 でウルトラ−ターラックス（Ｕｌｔ、ｒａ−Ｔｕｒｒａｘ　）　Ｔ　４５で細胞 にとって温和に粉砕する。

２つの接種フラスコのターラックス処理した真菌類懸濁液を、前培養基と同じ組 成の滅菌した培養溶液２８ｔを充填した４０ｔのスチール製発酵器に接種する。

同時に、培養基懸濁液をＴｘＪえる（ｄ００η／ｌ）。

培養基懸濁液＝（±）−シス−６，７−ジオキソ−ビシクロ（３，３，０）オク タン−２，６−ジカルボン酸−ゾメチルエステル１２ｇを培養基フラスコ中のオ ートクレープ処理し友２壬のツイーン８０容液（ｖｇ水）１２００１１ｊ中でウ ルトラ−ターラックスＴ４５で均質５２時間の接触時間後に、使用したラセミ体 ケトンの約５０チが転化された。久いで、培養スラリーをセルロースが−ゼを介 して吸引濾過し、濾液をＭｉＢＫ　ｔｌ−用いて培養容量の１４で１回及び引続 き夫々１４で尚２回抽出する。該抽出物を合しかつ真空中で蒸発させる、その際 発酵中に形成されたフマル酸（１〜１．５１１／／、）が晶出する。フマル酸を 濾別した後に、濾液を蒸発乾固しかつその残留分を未反応ケトンの分離及び３α −ＯＨ化合物の精製のためにシリカゾルカラム上で容剤勾配のヘキサン／酢酸エ ステルでクロマトグラフィー処理する。旋光度〔α］”＋５１°（ｃ−１、クロ ロホルム）（こｎは９０４　ｅｅ以上のエナンチオマ一単位に相当する）を有す る融点５４〜５６℃の（＋）−シス−３α−ヒドロキシ−７−オキシービシク０ 　（３゜３、０　）オクタン−２，６−ジカルボン酸−ジメチルエステル４．９ １が得られる。

実施例５ 菌株ロドトルラ橿ＡＴＣＣ１８１０１の傾斜寒天培養体を生理食塩水３ｄで懸濁 させかつそれを以下の組成：デキストロース−水利物　５チ コーンテイーダ液　２優 ｐＨ６，５ の滅菌培養溶液５００ｄを入れた２ｔのエーリンマイヤーフラスコに接種する。

３０℃で回転振盪器で２回間振盪した後、この前培養体２５０ｄを、前培養体と 同じ組成の滅菌した培養溶液６．５６を充填した５ｔの発酵器に接種する。該培 養体を換気（３，７５１１分）及び攪拌（２２０ｒｐｍ　）下にｐＨを６．５に 一定に保った状態で培養しかつ久込で培養基をエタノール５０ｍ中の（±）−７ ，７−（２゜２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３， ０）オクタン−３−オン−２−カルボン酸メチルエステル１．５ｙの滅菌濾過し た容量の形で加える。１２時間の接触時間後に、使用したラセミ体のケトンの５ ０俤が転化された。次いで、培養スラリーを培養容量の半分で１回かつ各々１／ ｓでｆｉ！ｉ１２回メチルイツメチルイソブチルケトン。残留分を還元しｆｃ（ −）−エナンチオマーの分離のためにシリカゾルカラム上でクロマトグラフィー 処理する（弓剤勾配ゾクロルメタン／ジクロルメタン／Ｅｌアセトン）。フラク ション１は天然の配位された未反応（＋）−ケトエナンチオマーを含有する。蒸 発乾固しかつヘキサンから結晶させた後に、融点６４−６５℃の（＋）　−７、 ７−（２、２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０ ）オクタン−３−オン−２−カルボン酸メチルエステル５８０ダが得られる。

化学的還元のために、（＋）　−７、７−（２、２−ジメチルトリメチレンジオ キシ）−シス−ビシクロ〔３゜３、　Ｏ）オクタン−３−オン−２−カルボン酸 メチルエステル５００叩をメタノール１０ゴ中に溶カ）しカｉつ１時間還流煮辞 する。引続き、−４０℃に冷却し、ＮａＢＨ４２００ダを添加しかつこの製置で １時間攪拌する。仄いで、アセトン２ｄｔ−加え、同３０分間攪拌踵希酢酸でＰ ）（７に調整し、水で希釈しかつジクロルメタンで抽出する。該抽出物を蒸発乾 固し、その残留分をメタノール１０ｄ中に溶かし、ナトリウムメチラート１００ ■を加えかつ４０℃で４時間撹拌する。次いで、該溶液を２ＮのＨ２ＳＯ４で氷 冷下に−６，５にし、メタノールを留去し、その残留分を留去し、残留分を水中 に回収しかつジクロルメタンで６回抽出する。該抽出物を中性に洗浄し、Ｎａ２ ＳＯ４上で乾燥しかつ蒸発乾固する。ヘキサンカラ結晶ｖｋｉＣ（＋）−７，７ −（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−３α−ヒドロキシ−シス−ビシ クロ［３，３，０）オクタン−２−カルざン酸メチルエステル〔融点５９〜６１ °Ｃ及び旋光度〔αゾ＋２５．１°（Ｃ−１，２、りｏａホルム））４２０ダが 得らする。

実施例６ 実施例４で得られた生成物３．１１　ｇを窒素雰囲気下に塩化ナトリウム０．５ ５ｇ、及び水３壬を含有するジチルホルムアミド４１．２１４と一緒に加熱する 。真空中で十分に留去しかつ粗製生成物５．３２　＃を得られ、該生成物を後続 工程で使用する。

精製した生成物は融点５５℃及び比旋光度（Ｃ−１、クロロホルム中）〔α）’ 　＋　６．０°を示す。

実施例７ （１ｓ、２Ｒ，３Ｒ，５Ｒ）−７，７−ニチリンシオキシー３−ヒドロキシーシ スーピシクＣ’　（３，３，０１オクタン−２−カルボン酸メチルエステル実施 例６からの粗製生成物をベンゼン５Ｑ＋ｊ中でエチレングリコ−Ｊｌ、１３１！ 及び４−）ルエンスルホン酸、０．３５　ｇと一緒に３時間還流加熱しかつ虫取 する水を分離する。冷却後に、炭酸水素ナトリウム０．５９を加え、水で抽出し かつ真空中で濃縮する。シリカゾルでヘキサン／酢酸エチル混合物でクロマトグ ラフィー処理しかつ無色の油状物として生成物２．５０９が得らする。比旋光度 （Ｃ−１、クロロホルム中）〔α〕０＋　２６．５゜ 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式：（＋）−Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼（＋）−Ｉ〔式中、 Ａは基−ＣＨ２−又は＞ＣＨ−ＣＯＯＲを表し、Ｂは酸素原子又に２価の基−Ｘ −Ｏ−（Ｘに１〜７個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れ鎖状アルキル基を表 す）を表し、かつ Ｒは１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は枝分れ鎖状アルキル基又はペンジル 基を表す〕で示される３α−ヒドロキシ−プロスタサイクリン中間生成物を製造 する方法において、式（±）−ＩＩ：▲数式、化学式、表等があります▼（±） −ＩＩ〔式中、Ａ，Ｂ及びＲは前記のものを表す〕で示されるラセミ体のビシク ロオクタンジオンをリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）−、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏ ｔｒｏｌａ）−又はカｙジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）菌株で処理し、かつ使用菌株が ラセミ体の（±）−ＩＩから成る（−）−形を還元する場合には、式（＋）−Ｉ Ｉの変化しをかつたビシクロオクタニジオンの化学的又は微生物学的還元を引続 き実施することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−プロスタサイクリン中間生成 物の製法。