JPH0155416B2 - - Google Patents
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- JPH0155416B2 JPH0155416B2 JP57135952A JP13595282A JPH0155416B2 JP H0155416 B2 JPH0155416 B2 JP H0155416B2 JP 57135952 A JP57135952 A JP 57135952A JP 13595282 A JP13595282 A JP 13595282A JP H0155416 B2 JPH0155416 B2 JP H0155416B2
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血清と血餅との分離方法に関し、群し
くはヘパリン投与を受けている被検者の全血試料
から遠心分離により血清と血餅を分離する方法に
関する。 近年、検査技術の目ざましい進歩と相俟つて、
血清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の
血液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大
きく貢献するに至つている。血清検査は、血液検
査の主体をなしており、検査に要する血清は通
常、血液検査用容器に採取した血液を凝固させた
後、遠心分離によつて、比重の異なる血餅（フイ
プリンと血球が混合したゲル様塊状物）から分離
している。 そして血液を遠心分離操作に付して血清と血餅
とに分けた後、血清部分をピペツトで吸上げた
り、デカンテーシヨンにより採取することが行な
われている。血清部分の採取は、血液に凝固を持
つて行なわれるが、凝固迄にかなりの時間を必要
とし、迅速に検査を実施できない点が問題となつ
ている。 正常健康人の血液においても血液凝固に時間が
かゝる点は大きな問題であるが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合は、血栓防止の
為にヘパリン投与を受けており、このような患者
の血液中にはかなりの濃度のヘパリンが混入して
おり、臨床検査に当つて血液凝固が起り難いため
に血清を分離採取することが困難であつた。 本発明はこのような患者血液に対しても血液凝
固に要する時間を大幅に短縮させると共に、血清
成分と血餅成分を良好に分離する方法を提供する
ことを目的とする。 本発明の要旨は、 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホンを、血液量10c.c.
当り0.005mgないし５mgの範囲で添加すること
により、血液中にポリアミンスルホンを存在さ
せることを特徴とする、血清と血餅との分離方
法 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホン(イ)と、ガラス、
シリカ、、カオリン、セライトおよびベントナ
イトからなる群から選ばれ、粒径が50μｍ以下
であつて、平均粒径が10μｍ以下のものであ
り、アマニ油吸油量が20〜40ml／100ｇ、BET
比表面積値が5000〜30000cm2／ｇ、比抵抗値が
１×1010Ω・cm以下である吸着性無機物(ロ)と
を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量部：
１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加
量を血液量10c.c.当り0.005mgないし５mgの範囲
となすことにより、血液中にポリアミンスルホ
ンと吸着性無機物を存在させることを特徴とす
る、血清と血餅との分離方法 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホン(イ)と、エラジン
酸(ロ)とを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至６重
量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)
の添加量を血液量10c.c.当り0.005mgないし５mg
の範囲となすことにより、血液中にポリアミン
スルホンとエラジン酸を存在させることを特徴
とする、血清と血餅との分離方法に存する。 次に本発明血清と血餅との分離方法について更
に詳細に説明する。 被検者の全血試料を遠心分離操作に付して血清
と血餅を分離するために、血液は検査用容器に入
れられて凝固される。 しかし正常健康人においても、そのまゝ枚置し
ただけでは凝固に時間がかゝるが、人工透析を受
けている患者や血栓症の患者の場合はヘパリン投
与を受けているため血液中にヘパリンが存在しそ
の作用によつて血液凝固を起しにくい。 このため、本発明においては検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中のポリアミンスルホン
を添加する。ポリアミンスルホンはジアリルアミ
ン系モノマーと二酸化イオウを共重合させて得ら
れるものであり、次式で表わされるものが使用さ
れる。 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又は
エチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数を示
す。） 本発明において、ポリアミンスルホンの分子量
は、平均分子量が2000乃至35万の範囲のものが使
用される。 ポリアミンスルホンは、例えばジアリルアミ
ン、ジメタアリルアミン又はこれらの誘導体の塩
素化物又は臭素化物等のジアリルアミン系モノマ
ーと、二酸化イオウを、水、メチルアルコール、
エチルアルコール、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルスルホキシド等の溶媒中に溶解させ、ｔ―ブ
チルヒドロパーオキシド、アゾビスイソブチロニ
トリル、過硫酸アンモニウム等を重合触媒とし、
30℃程度に加温してラジカル重合を行なわせるこ
とにより得ることができる。 ポリマーの末端には触媒切片が付くので、例え
ばｔ―ブチルヒドロパーオキシドを触媒とした場
合は、一方の末端にｔ―ブチルオキシ基、他方の
末端に水酸基が付くことになる。 上記のポリアミンスルホンにおいて最適なもの
は、R1、R2が水素原子、R3、R4がメチル基、Ｘ
が塩素原子の場合であつて、平均分子量が2000乃
至35万の範囲内に存するものである。血液検査容
器に入れられた血液中に添加されたポリアミンス
ルホンはヘパリンを含有する血液と接触するさ
い、速やかにヘパリンの作用を消失せしめ、血液
の正常な凝固機能を回復させることによつて、血
液検査容器中の血液を短時間内に凝固させ、凝固
完了後、遠心分離等の手段によつて血餅と血清に
分離させることにより、血清を容易に採取するこ
とができる。 この点を更に詳述すると、通常の血液に於いて
は血液容器の内壁面との接触により、直ちに凝固
因子中の第XII因子の活性化が進み、これが起点と
なつて、連鎖反応的に凝固が進行し、最終的に
は、プロトロンビンの活性化により生成されたト
ロンビンがフイブリノーゲンに働いて不溶性のフ
イブリン網を形成し、凝固は完了する。一方ヘパ
リンが添加されている血液では、ヘパリンが血液
中に存在するアンチトロンビンと協同的に作用し
てトロンビンの働らきを顕著に阻害する。ヘパリ
ンはトロンビンの作用を阻害するのみならず、第
XII因子をはじめ、その他の凝固因子の作用をも阻
害すると言われている。従つて、通常の手段では
ヘパリン含有血液においてはフイブリノーゲンの
フイブリンへの転化は起らず、凝固が行なわれな
いために血清を分離採取することができない。 ヘパリン投与を受けている人工透析患者あるい
は血栓症患者の血液中には血液10c.c.当り１単位な
いし10単位のヘパリンが存在するものと考えられ
る。このようなヘパリン含有血液中にポリアミン
スルホンを存在させると、ヘパリンは吸着され、
血中から除去されるため、トロンビンをはじめ他
の血液凝固因子は正常な作用を取戻すに至る。 ポリアミンスルホンの適正な添加量は血液量10
c.c.当り0.005mgないし５mgの範囲にある。この範
囲より少ない場合には、ヘパリンを吸着する作用
が不足し、充分な血液凝固がもたらされない。ま
たこの範囲を越えると血清生化学検査等の臨床検
査値に異常値が出るおそれがある。ポリアミンス
ルホンと併用されることにより相乗的に血液凝固
促進効果を発揮する物質の一つは吸着性無機物で
ある。 吸着性無機物としては、吸着剤として使用され
ていたような無機物、すなわちガラス、シリカ、
カオリン、セライト、ベントナイト等の水不溶性
の無機質微粉末から選ばれる。 又、吸着性無機物は粒径が50μｍ以下であつ
て、平均粒径が10μｍ以下のものを使用する。そ
して特に血液凝固時間を短縮させるに有効な吸着
性無機物はシリカであり、とり分け無定形成分を
20重量％以上含有する多孔性のシリカがすぐれた
効果を発揮する。かゝる吸着性無機物は、血液と
接触した場合に血液凝固因子の活性化を促進し、
又血小板の凝固を促がす作用を有する。しかしな
がら吸着性無機物が血液凝固促進作用を効果的に
発揮するためには、アマニ油吸油量、BET比表
面積値、比抵抗値が一定の範囲内に存在すること
が好ましい。 アマニ油吸油量及びBET比表面積値は、吸着
性無機物の表面積の程度を表わし、又表面積は吸
着性無機物の有する表面孔〓の程度と関連するの
で、吸油量及び比表面積によつて表面孔〓の程度
を知ることができる。そして本発明における吸着
性無機物は、アマニ油吸油量が20〜40ml／100ｇ、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇであるもの
が使用される。 アマニ油吸油量は日本工業規格Ｋ―5101に準拠
して測定される値を示す。BET比表面積値は、
吸着性無機物の表面に吸着される気体の吸着量、
その時の平衡圧、吸着ガスの飽和蒸気圧から単分
子層として表面をおゝい切る気体量を求め、これ
に吸着気体分子の平均断面積を乗じて算出された
値を指すものであり、吸着気体としては窒素ガ
ス、酸素ガス、アルゴンガス、メタンガス等が使
用される。そしてこの方法によれば、アマニ油吸
油量の測定によつては測定できない細孔を含めた
表面積値が測定される。血液凝固に際しては、第
XII因子、すなわち接触因子が活性化されるが、こ
のためには異物表面上に第XII因子、プレカリクレ
イン、高分子キニノーゲンの３種の物質が錯体を
形成して吸着されることが必要であり、これらの
一つ又は二つが欠けた状態での吸着は活性化に至
らないとされている。ところで、血液凝固促進作
用を期待して吸着性無機物を使用した場合に、表
面積が非常に大きなものであると、吸着性無機物
の表面上には錯体を形成しない状態での第XII因
子、プレカリクレイン、高分子キニノーゲンの吸
着の割合が高まることにより、言え換えると、第
XII因子の活性化に必要な三者の錯体形成割合は減
少することになり、かえつて血液凝固促進作用は
滅殺されることになる。 また逆に吸着性無機物の表面積が小さすぎる
と、凝固因子の吸着の確率が小さくなり、血液凝
固促進作用を期待することができなくなる。この
ために本発明における吸着性無機物はアマニ油吸
油量が20〜40ml／100ｇ、BET比表面積値が5000
〜30000cm2／ｇの範囲の表面積を有するものが使
用される。 又、本発明における吸着性無機物の比抵抗値は
１×1010Ω・cm以下のものが使用され、最適には
５×104Ω・cm以下であるものが使用される。比
抵抗値は電気伝導度の逆数であり、常温における
値である。 使用割合は吸着性無機物１重量部当りポリアミ
ンスルホンが0.0005乃至10重量部の範囲内とされ
る。 ポリアミンスルホンと併用されることによつて
相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物質は
エラジン酸である。 エラジン酸は次の化学構造式を有する物質であ
る。 エラジン酸は、血液凝固因子の一である第XII因
子を活性化する物質として知られているが、ポリ
アミンスルホンと併用する場合は、これらを単独
で使用する場合に比して一層優れた血液凝固促進
作用を有することが確認された。 使用割合は、エラジン酸１重量部当りポリアミ
ンスルホンが0.0003乃至６重量部の範囲内とされ
る。 ポリアミンスルホン又はこれと吸着性無機物エ
ラジン酸を血液中に存在させるためには、例えば
検査用容器内の血液中に直接添加してもよいし、
水等の分散媒に分散させたものを血液中に滴下し
てもよいし、比重が1.04〜1.06程度の担体に付着
させたものを血液中に添加してもよい。 本発明においてはポリアミンスルホン又はこれ
と吸着性無機物、エラジン酸を、血液検査用容器
内に血液を採取した後、該血液中に添加すること
により、血液中にポリアミンスルホン又はこれと
吸着性無機物、エラジン酸が存在されることによ
つて正常健康人の血清に対する血液凝固促進作用
がすぐれているだけでなく、人工透析を受けてい
る患者や血栓症の患者のように、ヘパリン投与を
受けている為に凝固を起し難い血液の場合におい
ても、すぐれた血液凝固促進作用を有し、遠心分
離にかけた際に血清と血餅との分離が容易に行な
われ、血清が良好な収量で得られる。 又、ポリアミンスルホンは耐熱性がすぐれてい
るので、オートクレーブを用いた滅菌処理にも耐
えることができ、滅菌処理を行つた後も血液検査
値に影響を与えることがない。 実施例 １ 上式で表わされるポリアミンスルホン（分子量
2000乃至5000）について、0.2重量％の水溶液を
調整した。 10ml容量のガラス製スピツツに、ヘパリンが血
液１ml当り1.5単位含有されている人新鮮血５ml
を注入した後、直ちに前記ポリアミンスルホン水
溶液を0.05ml添加し、ゆるやかに混和後23℃で静
置した。この後、全血が完全に流動しなくなる迄
に要した時間を血液凝固時間として測定し、血液
凝固性を評価した。また血液凝固後、直ちに3000
回転／毎分の回転速度で５分間遠心分離を行ない
血清分離状態を観察した。また分離状態について
は24時間後再度観察し、フイブリンに析出の有無
を調べた。尚、血清分離状態は血清層における容
器壁面での残存血餅付着の有無及びフイブリン網
の析出の有無により評価した。 又、上記のポリアミンスルホン水溶液を10ml容
量のガラススピツツに0.05ml添加し、これを121
℃で20分間オートクレーブで滅菌処理した。これ
に前記ヘパリン含有血液５mlを注入し、23℃で静
置し、実施例１と同様にして血液凝固性、血清分
離状態、24時間後のフイブリン析出の有無を調べ
たが、オートクレーブ滅菌しない場合と差異は生
じなかつた。 実施例 ２ 実施例１における式で表わされるポリアミンス
ルホンについては分子量が17万乃至23万の範囲に
あるものを使用した以外は実施例１におけると同
様にして血液凝固時間、血清分離状態、24時間後
のフイブリンに析出の有無を調べた。その結果を
表１の実施例２の欄に示す。 実施例 ３ 実施例１において使用したと同じ分子量2000乃
至5000のポリアミンスルホンの0.2重量％水溶液
に吸着性無機物として微粉末シリカ（平均粒径
5μｍ、アマニ油吸油量30ml／100ｇ、BET比表面
積値1.2×104cm2／ｇ、比抵抗値2.6×104Ω・cm）
を2.0重量％量分散させたものを調整した。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記のシリカを分散させた
ポリアミンスルホン水溶液0.05mlを添加し、緩や
かに混和した後23℃で放置し、実施例１と同様に
して血液凝固時間、血清分離状態、24時間後のフ
イブリン析出の有無を調べた。その結果を表１の
実施例３の欄に示す。 実施例 ４ 実施例３において調整した微粉末シリカを分散
させたポリアミンスルホン水溶液をセルロース系
不織布に含浸、乾燥させて１cm2当りポリアミンス
ルホン0.1mg、微粉末シリカ１mgを含む不織布を
得た。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記不織布を１cm2投入し、
ゆるやかに混和して23℃で静置し、実施例１と同
様にして血液凝固性、血清分離状態、24時間後の
フイブリン析出の有無を調べた。その結果を表１
の実施例４の欄に記す。 実施例 ５ 実施例１において使用したと同じ分子量2000乃
至5000のポリアミンスルホンの2.0重量％水溶液
にエラジン酸を2.0重量％分散させたものを調整
した。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記のエラジン酸を分散さ
せたポリアミンスルホン水溶液0.05mlを添加し、
緩やかに混和した後23℃で放置し、実施例１と同
様にして血液凝固時間、血清分離状態、24時間後
のフイブリンの析出の有無を調べた。その結果を
表１の実施例５の欄に示す。 【表】
くはヘパリン投与を受けている被検者の全血試料
から遠心分離により血清と血餅を分離する方法に
関する。 近年、検査技術の目ざましい進歩と相俟つて、
血清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の
血液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大
きく貢献するに至つている。血清検査は、血液検
査の主体をなしており、検査に要する血清は通
常、血液検査用容器に採取した血液を凝固させた
後、遠心分離によつて、比重の異なる血餅（フイ
プリンと血球が混合したゲル様塊状物）から分離
している。 そして血液を遠心分離操作に付して血清と血餅
とに分けた後、血清部分をピペツトで吸上げた
り、デカンテーシヨンにより採取することが行な
われている。血清部分の採取は、血液に凝固を持
つて行なわれるが、凝固迄にかなりの時間を必要
とし、迅速に検査を実施できない点が問題となつ
ている。 正常健康人の血液においても血液凝固に時間が
かゝる点は大きな問題であるが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合は、血栓防止の
為にヘパリン投与を受けており、このような患者
の血液中にはかなりの濃度のヘパリンが混入して
おり、臨床検査に当つて血液凝固が起り難いため
に血清を分離採取することが困難であつた。 本発明はこのような患者血液に対しても血液凝
固に要する時間を大幅に短縮させると共に、血清
成分と血餅成分を良好に分離する方法を提供する
ことを目的とする。 本発明の要旨は、 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホンを、血液量10c.c.
当り0.005mgないし５mgの範囲で添加すること
により、血液中にポリアミンスルホンを存在さ
せることを特徴とする、血清と血餅との分離方
法 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホン(イ)と、ガラス、
シリカ、、カオリン、セライトおよびベントナ
イトからなる群から選ばれ、粒径が50μｍ以下
であつて、平均粒径が10μｍ以下のものであ
り、アマニ油吸油量が20〜40ml／100ｇ、BET
比表面積値が5000〜30000cm2／ｇ、比抵抗値が
１×1010Ω・cm以下である吸着性無機物(ロ)と
を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量部：
１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加
量を血液量10c.c.当り0.005mgないし５mgの範囲
となすことにより、血液中にポリアミンスルホ
ンと吸着性無機物を存在させることを特徴とす
る、血清と血餅との分離方法 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又
はエチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数
を示す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至
35万であるポリアミンスルホン(イ)と、エラジン
酸(ロ)とを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至６重
量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)
の添加量を血液量10c.c.当り0.005mgないし５mg
の範囲となすことにより、血液中にポリアミン
スルホンとエラジン酸を存在させることを特徴
とする、血清と血餅との分離方法に存する。 次に本発明血清と血餅との分離方法について更
に詳細に説明する。 被検者の全血試料を遠心分離操作に付して血清
と血餅を分離するために、血液は検査用容器に入
れられて凝固される。 しかし正常健康人においても、そのまゝ枚置し
ただけでは凝固に時間がかゝるが、人工透析を受
けている患者や血栓症の患者の場合はヘパリン投
与を受けているため血液中にヘパリンが存在しそ
の作用によつて血液凝固を起しにくい。 このため、本発明においては検査用容器内に血
液を採取した後、該血液中のポリアミンスルホン
を添加する。ポリアミンスルホンはジアリルアミ
ン系モノマーと二酸化イオウを共重合させて得ら
れるものであり、次式で表わされるものが使用さ
れる。 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又は
エチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数を示
す。） 本発明において、ポリアミンスルホンの分子量
は、平均分子量が2000乃至35万の範囲のものが使
用される。 ポリアミンスルホンは、例えばジアリルアミ
ン、ジメタアリルアミン又はこれらの誘導体の塩
素化物又は臭素化物等のジアリルアミン系モノマ
ーと、二酸化イオウを、水、メチルアルコール、
エチルアルコール、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルスルホキシド等の溶媒中に溶解させ、ｔ―ブ
チルヒドロパーオキシド、アゾビスイソブチロニ
トリル、過硫酸アンモニウム等を重合触媒とし、
30℃程度に加温してラジカル重合を行なわせるこ
とにより得ることができる。 ポリマーの末端には触媒切片が付くので、例え
ばｔ―ブチルヒドロパーオキシドを触媒とした場
合は、一方の末端にｔ―ブチルオキシ基、他方の
末端に水酸基が付くことになる。 上記のポリアミンスルホンにおいて最適なもの
は、R1、R2が水素原子、R3、R4がメチル基、Ｘ
が塩素原子の場合であつて、平均分子量が2000乃
至35万の範囲内に存するものである。血液検査容
器に入れられた血液中に添加されたポリアミンス
ルホンはヘパリンを含有する血液と接触するさ
い、速やかにヘパリンの作用を消失せしめ、血液
の正常な凝固機能を回復させることによつて、血
液検査容器中の血液を短時間内に凝固させ、凝固
完了後、遠心分離等の手段によつて血餅と血清に
分離させることにより、血清を容易に採取するこ
とができる。 この点を更に詳述すると、通常の血液に於いて
は血液容器の内壁面との接触により、直ちに凝固
因子中の第XII因子の活性化が進み、これが起点と
なつて、連鎖反応的に凝固が進行し、最終的に
は、プロトロンビンの活性化により生成されたト
ロンビンがフイブリノーゲンに働いて不溶性のフ
イブリン網を形成し、凝固は完了する。一方ヘパ
リンが添加されている血液では、ヘパリンが血液
中に存在するアンチトロンビンと協同的に作用し
てトロンビンの働らきを顕著に阻害する。ヘパリ
ンはトロンビンの作用を阻害するのみならず、第
XII因子をはじめ、その他の凝固因子の作用をも阻
害すると言われている。従つて、通常の手段では
ヘパリン含有血液においてはフイブリノーゲンの
フイブリンへの転化は起らず、凝固が行なわれな
いために血清を分離採取することができない。 ヘパリン投与を受けている人工透析患者あるい
は血栓症患者の血液中には血液10c.c.当り１単位な
いし10単位のヘパリンが存在するものと考えられ
る。このようなヘパリン含有血液中にポリアミン
スルホンを存在させると、ヘパリンは吸着され、
血中から除去されるため、トロンビンをはじめ他
の血液凝固因子は正常な作用を取戻すに至る。 ポリアミンスルホンの適正な添加量は血液量10
c.c.当り0.005mgないし５mgの範囲にある。この範
囲より少ない場合には、ヘパリンを吸着する作用
が不足し、充分な血液凝固がもたらされない。ま
たこの範囲を越えると血清生化学検査等の臨床検
査値に異常値が出るおそれがある。ポリアミンス
ルホンと併用されることにより相乗的に血液凝固
促進効果を発揮する物質の一つは吸着性無機物で
ある。 吸着性無機物としては、吸着剤として使用され
ていたような無機物、すなわちガラス、シリカ、
カオリン、セライト、ベントナイト等の水不溶性
の無機質微粉末から選ばれる。 又、吸着性無機物は粒径が50μｍ以下であつ
て、平均粒径が10μｍ以下のものを使用する。そ
して特に血液凝固時間を短縮させるに有効な吸着
性無機物はシリカであり、とり分け無定形成分を
20重量％以上含有する多孔性のシリカがすぐれた
効果を発揮する。かゝる吸着性無機物は、血液と
接触した場合に血液凝固因子の活性化を促進し、
又血小板の凝固を促がす作用を有する。しかしな
がら吸着性無機物が血液凝固促進作用を効果的に
発揮するためには、アマニ油吸油量、BET比表
面積値、比抵抗値が一定の範囲内に存在すること
が好ましい。 アマニ油吸油量及びBET比表面積値は、吸着
性無機物の表面積の程度を表わし、又表面積は吸
着性無機物の有する表面孔〓の程度と関連するの
で、吸油量及び比表面積によつて表面孔〓の程度
を知ることができる。そして本発明における吸着
性無機物は、アマニ油吸油量が20〜40ml／100ｇ、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇであるもの
が使用される。 アマニ油吸油量は日本工業規格Ｋ―5101に準拠
して測定される値を示す。BET比表面積値は、
吸着性無機物の表面に吸着される気体の吸着量、
その時の平衡圧、吸着ガスの飽和蒸気圧から単分
子層として表面をおゝい切る気体量を求め、これ
に吸着気体分子の平均断面積を乗じて算出された
値を指すものであり、吸着気体としては窒素ガ
ス、酸素ガス、アルゴンガス、メタンガス等が使
用される。そしてこの方法によれば、アマニ油吸
油量の測定によつては測定できない細孔を含めた
表面積値が測定される。血液凝固に際しては、第
XII因子、すなわち接触因子が活性化されるが、こ
のためには異物表面上に第XII因子、プレカリクレ
イン、高分子キニノーゲンの３種の物質が錯体を
形成して吸着されることが必要であり、これらの
一つ又は二つが欠けた状態での吸着は活性化に至
らないとされている。ところで、血液凝固促進作
用を期待して吸着性無機物を使用した場合に、表
面積が非常に大きなものであると、吸着性無機物
の表面上には錯体を形成しない状態での第XII因
子、プレカリクレイン、高分子キニノーゲンの吸
着の割合が高まることにより、言え換えると、第
XII因子の活性化に必要な三者の錯体形成割合は減
少することになり、かえつて血液凝固促進作用は
滅殺されることになる。 また逆に吸着性無機物の表面積が小さすぎる
と、凝固因子の吸着の確率が小さくなり、血液凝
固促進作用を期待することができなくなる。この
ために本発明における吸着性無機物はアマニ油吸
油量が20〜40ml／100ｇ、BET比表面積値が5000
〜30000cm2／ｇの範囲の表面積を有するものが使
用される。 又、本発明における吸着性無機物の比抵抗値は
１×1010Ω・cm以下のものが使用され、最適には
５×104Ω・cm以下であるものが使用される。比
抵抗値は電気伝導度の逆数であり、常温における
値である。 使用割合は吸着性無機物１重量部当りポリアミ
ンスルホンが0.0005乃至10重量部の範囲内とされ
る。 ポリアミンスルホンと併用されることによつて
相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物質は
エラジン酸である。 エラジン酸は次の化学構造式を有する物質であ
る。 エラジン酸は、血液凝固因子の一である第XII因
子を活性化する物質として知られているが、ポリ
アミンスルホンと併用する場合は、これらを単独
で使用する場合に比して一層優れた血液凝固促進
作用を有することが確認された。 使用割合は、エラジン酸１重量部当りポリアミ
ンスルホンが0.0003乃至６重量部の範囲内とされ
る。 ポリアミンスルホン又はこれと吸着性無機物エ
ラジン酸を血液中に存在させるためには、例えば
検査用容器内の血液中に直接添加してもよいし、
水等の分散媒に分散させたものを血液中に滴下し
てもよいし、比重が1.04〜1.06程度の担体に付着
させたものを血液中に添加してもよい。 本発明においてはポリアミンスルホン又はこれ
と吸着性無機物、エラジン酸を、血液検査用容器
内に血液を採取した後、該血液中に添加すること
により、血液中にポリアミンスルホン又はこれと
吸着性無機物、エラジン酸が存在されることによ
つて正常健康人の血清に対する血液凝固促進作用
がすぐれているだけでなく、人工透析を受けてい
る患者や血栓症の患者のように、ヘパリン投与を
受けている為に凝固を起し難い血液の場合におい
ても、すぐれた血液凝固促進作用を有し、遠心分
離にかけた際に血清と血餅との分離が容易に行な
われ、血清が良好な収量で得られる。 又、ポリアミンスルホンは耐熱性がすぐれてい
るので、オートクレーブを用いた滅菌処理にも耐
えることができ、滅菌処理を行つた後も血液検査
値に影響を与えることがない。 実施例 １ 上式で表わされるポリアミンスルホン（分子量
2000乃至5000）について、0.2重量％の水溶液を
調整した。 10ml容量のガラス製スピツツに、ヘパリンが血
液１ml当り1.5単位含有されている人新鮮血５ml
を注入した後、直ちに前記ポリアミンスルホン水
溶液を0.05ml添加し、ゆるやかに混和後23℃で静
置した。この後、全血が完全に流動しなくなる迄
に要した時間を血液凝固時間として測定し、血液
凝固性を評価した。また血液凝固後、直ちに3000
回転／毎分の回転速度で５分間遠心分離を行ない
血清分離状態を観察した。また分離状態について
は24時間後再度観察し、フイブリンに析出の有無
を調べた。尚、血清分離状態は血清層における容
器壁面での残存血餅付着の有無及びフイブリン網
の析出の有無により評価した。 又、上記のポリアミンスルホン水溶液を10ml容
量のガラススピツツに0.05ml添加し、これを121
℃で20分間オートクレーブで滅菌処理した。これ
に前記ヘパリン含有血液５mlを注入し、23℃で静
置し、実施例１と同様にして血液凝固性、血清分
離状態、24時間後のフイブリン析出の有無を調べ
たが、オートクレーブ滅菌しない場合と差異は生
じなかつた。 実施例 ２ 実施例１における式で表わされるポリアミンス
ルホンについては分子量が17万乃至23万の範囲に
あるものを使用した以外は実施例１におけると同
様にして血液凝固時間、血清分離状態、24時間後
のフイブリンに析出の有無を調べた。その結果を
表１の実施例２の欄に示す。 実施例 ３ 実施例１において使用したと同じ分子量2000乃
至5000のポリアミンスルホンの0.2重量％水溶液
に吸着性無機物として微粉末シリカ（平均粒径
5μｍ、アマニ油吸油量30ml／100ｇ、BET比表面
積値1.2×104cm2／ｇ、比抵抗値2.6×104Ω・cm）
を2.0重量％量分散させたものを調整した。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記のシリカを分散させた
ポリアミンスルホン水溶液0.05mlを添加し、緩や
かに混和した後23℃で放置し、実施例１と同様に
して血液凝固時間、血清分離状態、24時間後のフ
イブリン析出の有無を調べた。その結果を表１の
実施例３の欄に示す。 実施例 ４ 実施例３において調整した微粉末シリカを分散
させたポリアミンスルホン水溶液をセルロース系
不織布に含浸、乾燥させて１cm2当りポリアミンス
ルホン0.1mg、微粉末シリカ１mgを含む不織布を
得た。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記不織布を１cm2投入し、
ゆるやかに混和して23℃で静置し、実施例１と同
様にして血液凝固性、血清分離状態、24時間後の
フイブリン析出の有無を調べた。その結果を表１
の実施例４の欄に記す。 実施例 ５ 実施例１において使用したと同じ分子量2000乃
至5000のポリアミンスルホンの2.0重量％水溶液
にエラジン酸を2.0重量％分散させたものを調整
した。 10ml容量のポリエチレン樹脂製スピツツに、１
ml当り1.5単位の割合でヘパリンを含む人新鮮血
５mlを採血し、直ちに前記のエラジン酸を分散さ
せたポリアミンスルホン水溶液0.05mlを添加し、
緩やかに混和した後23℃で放置し、実施例１と同
様にして血液凝固時間、血清分離状態、24時間後
のフイブリンの析出の有無を調べた。その結果を
表１の実施例５の欄に示す。 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血液
を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又は
エチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数を示
す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至35万で
あるポリアミンスルホンを、血液量10c.c.当り
0.005mgないし５mgの範囲で添加することにより、
血液中にポリアミンスルホンを存在させることを
特徴とする、血清と血餅との分離方法。 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血液
を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又は
エチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数を示
す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至35万で
あるポリアミンスルホン(イ)と、ガラス、シリカ、
カオリン、セライトおよびベントナイトからなる
群から選ばれ、粒径が50μｍ以下であつて、平均
粒径が10μｍ以下のものであり、アマニ油吸油量
が20〜40ml／100ｇ、BET比表面積値が5000〜
30000cm2／ｇ、比抵抗値が１×1010Ω・cm以下で
ある吸着性無機物(ロ)とを、該(イ)と該(ロ)の割合が
0.0005乃至10重量部：１重量部の範囲内で添加
し、且つ、該(イ)の添加量を血液量10c.c.当り0.005
mgないし５mgの範囲となすことにより、血液中に
ポリアミンスルホンと吸着性無機物を存在させる
ことを特徴とする、血清と血餅との分離方法。 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内に血液
を採取した後、該血液中に、 式 （但し式中R1乃至R4は水素原子、メチル基又は
エチル基、Ｘは塩素又は臭素、ｎは正の整数を示
す。）で表わされ、平均分子量が2000乃至35万で
あるポリアミンスルホン(イ)と、エラジン酸(ロ)と
を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至６重量部：１
重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加量を
血液量10c.c.当り0.005mgないし５mgの範囲となす
ことにより、血液中にポリアミンスルホンとエラ
ジン酸を存在させることを特徴とする、血清と血
餅との分離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57135952A JPS5926062A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 血清と血餅との分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57135952A JPS5926062A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 血清と血餅との分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5926062A JPS5926062A (ja) | 1984-02-10 |
| JPH0155416B2 true JPH0155416B2 (ja) | 1989-11-24 |
Family
ID=15163672
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57135952A Granted JPS5926062A (ja) | 1982-08-03 | 1982-08-03 | 血清と血餅との分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5926062A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023048112A1 (ja) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | 日東紡績株式会社 | 分析用血球分離剤及び血球分離方法 |
| EP4407313A4 (en) | 2021-09-21 | 2026-02-11 | Nitto Boseki Co Ltd | BLOOD CELL SEPARATION AGENT AND BLOOD CELL SEPARATION METHOD USING IT |
-
1982
- 1982-08-03 JP JP57135952A patent/JPS5926062A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5926062A (ja) | 1984-02-10 |
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