JPH0126502B2 - - Google Patents
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- JPH0126502B2 JPH0126502B2 JP57079755A JP7975582A JPH0126502B2 JP H0126502 B2 JPH0126502 B2 JP H0126502B2 JP 57079755 A JP57079755 A JP 57079755A JP 7975582 A JP7975582 A JP 7975582A JP H0126502 B2 JPH0126502 B2 JP H0126502B2
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
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- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血清と血餅との分離方法に関し、詳し
くはヘパリン投与を受けている被検者の全血試料
から遠心分離により血清と血餅を分離する方法に
関する。 近年、検査技術の目ざましい進歩と相俟つて、
血清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の
血液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大
きく貢献するに至つている。血清検査は、血液検
査の主体をなしており、検査に要する血清は通
常、血液検査用容器に採取した血液を凝固させた
後、遠心分離によつて、比重の異なる血餅（フイ
ブリンと血球が混合したゲル様塊状物）から分離
している。 そして血液を遠心分離操作に付して血清と血餅
とに分けた後、血清部分をピペツトで吸上げた
り、デカンテーシヨンにより採取することが行な
われている。血清部分の採取は、血液の凝固を待
つて行なわれるが、凝固迄にかなりの時間を必要
とし迅速に検査を実施できない点が問題となつて
いる。 正常健康人の血液においても血液凝固に時間が
かかる点は大きな問題であるが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合は、血栓防止の
為にヘパリン投与を受けており、このような患者
の血液中にはかなりの濃度のヘパリンが混入して
おり、臨床検査に当つて血液凝固が起り難いため
に血清を分離採取することが困難であつた。 本発明はこのような患者血液に対しても血液凝
固に要する時間を大幅に短縮させると共に、血清
成分と血餅成分を良好に分離する方法を提供する
ことを目的とする。 本発明の要旨は、 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライドを、血
液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲で添加す
ることにより、血液中にヘキサジメスリンハラ
イドを存在させておくことを特徴とする、血清
と血餅との分離方法 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
ガラス、シリカ、カオリン、セライトおよびベ
ントナイトからなる群から選ばれ、粒径が
50μm以下であつて、平均粒径が10μm以下のも
のであり、アマニ油吸油量が20〜40ml／100g、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇ、比抵抗
値が１×1010Ω・cm以下である吸着性無機物
を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量部：
１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加
量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲と
なし、血液中にヘキサジメスリンハライドと吸
着性無機物を存在させておくことを特徴とす
る、血清と血餅との分離方法 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量
部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の
添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範
囲となし、血液中にヘキサジメスリンハライド
と２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノンを存在させておくことを特徴とする、血
清と血餅との分離方法 ４ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
エラジン酸を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至
６重量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、
該(イ)の添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５
mgの範囲となし、血液中にヘキサジメスリンハ
ライドとエラジン酸を存在させておくことを特
徴とする、血清と血餅との分離方法。 ５ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
エピカテキンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃
至６重量部：１重量部の範囲内で添加し、且
つ、該(イ)の添加量を血液量１ml当り0.005mg乃
至５mgの範囲となし、血液中にヘキサジメスリ
ンハライドとエピカテキンを存在させておくこ
とを特徴とする、血清と血餅との分離方法に存
する。 次に本発明血清と血餅との分離方法について更
に詳細に説明する。 被検者の全血試料を遠心分離操作に付して血清
と血餅を分離するために、血液は検査用容器に入
れられて凝固される。 しかし正常健康人においても、そのまゝ放置し
ただけでは凝固に時間が掛るが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合はヘパリン投与
を受けているため、血液中にヘパリンが存在し、
その作用によつて血液凝固を起しにくい。このた
め本発明においては検査用容器内に入れられた血
液中にヘキサジメスリンハライド
（Hexadimethrine halide）を存在させている。
ヘキサジメスリンハライドはＮ，Ｎ，N′，N′―
テトラメチルヘキサメチレンジアミンとトリメチ
レンジハライドとトリメチレンハライドとの重合
体であり、次式で表わされる。 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） 上式においてＸは臭素、ヨウ素等が好適である
が、Ｘが臭素であるものについては、市販品とし
てポリプレン（商品名）が存し、ヘパリン中和物
質として使用されている他、ペプチド分解促進物
質としてポリペプチド中のアミノ酸配列の決定に
使用されている。 そしてヘキサジメスリンハライドが容器内に入
れられた血液中に添加されることによつて、ヘパ
リンを含有する血液は、速やかにヘパリンの作用
を消失し、血液の凝固機能を回復する。ヘパリン
投与を受けている人工透析患者や血栓症患者の血
液中には血液10c.c.当り１単位乃至10単位のヘパリ
ンが存在するがヘキサジメスリンハライドが血液
中に存在させられる場合は、このヘキサジメスリ
ンハライドにヘパリンが吸着され、血中から除去
されるため、トロンピンを始めとする他の血液凝
固因子は正常な作用を取戻すに至る。 ヘキサジメスリンハライドの適正な存在量は、
血液１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲が好適であ
り、0.005mgよりも少ない場合はヘパリンを中和
する作用が不足し、充分な血液凝固が得られな
い。また５mgよりも多量になると、血清生化学検
査等の臨床検査値に異常値が出る傾向にある。 上記の場合において、ヘキサジメスリンハライ
ドを単独で血液中に存在させておく場合に、顕著
な血液凝固促進効果が認められる。 しかしながら、ヘキサジメスリンハライドと吸
着性無機物、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシ
ベンゾフエノン、エラジン酸又はエピカテキンを
併用することにより血液凝固促進作用を一層すぐ
れたものとすることができる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する物質の
一つは吸着性無機物である。 吸着性無機物としては、吸着剤として使用され
ていたような無機物、すなわちガラス、シリカ、
カオリン、セライト、ベントナイト等の水不溶性
の無機質微粉末から選ばれる。 又、吸着性無機物は粒径が50μm以下であつて、
平均粒径が10μm以下のものが使用される。そし
て特に血液凝固時間を短縮させるに有効な吸着性
無機物はシリカであり、とり分け無定形成分を20
重量％以上含有する多孔性のシリカがすぐれた効
果を発揮する。かゝる吸着性無機物は、血液と接
触した場合に血液凝固因子の活性化を促進し、又
血小板の凝集を促がす作用を有する。しかしなが
ら吸着性無機物が血液凝固促進作用を効果的に発
揮するためには、アマニ油吸油量、BET比表面
積値、比抵抗値が一定の範囲内に存在することが
好ましい。 アマニ油吸油量及びBET比表面積値は、吸着
性無機物の表面積の程度を表わし、又表面積は吸
着性無機物の有する表面孔隙の程度と関連するの
で、吸油量及び比表面積によつて表面孔隙の程度
を知ることができる。そして本発明における吸着
性無機物は、アマニ油吸油量が20〜40ml／100g、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇであるもの
が使用れる。 アマニ油吸油量は日本工業規格Ｋ―5101に準拠
して測定される値を示す。 BET比表面積値は、吸着性無機物の表面に吸
着される気体の吸着量、その時の平衡圧、吸着ガ
スの飽和蒸気圧から単分子層として表面をおゝい
切る気体量を求め、これに吸着気体分子の平均断
面積を乗じて算出された値を指すものであり、吸
着気体としては窒素ガス、酸素ガス、アルゴンガ
ス、メタンガス等が使用される。そしてこの方法
によれば、アマニ油吸油量の測定によつては測定
できない細孔を含めた表面積値が測定される。 血液凝固に際しては、第因子、すなわち接
触因子が活性化されるが、このためには異物表面
上に第因子、プレカリクレイン、高分子キニ
ノーゲンの３種の物質が錯体を形成して吸着され
ることが必要であり、これらの一つ又は二つが欠
けた状態での吸着は活性化に至らないとされてい
る。ところで、血液凝固促進作用を期待して吸着
性無機物を使用した場合に、表面積が非常に大き
なものであると、吸着性無機物の表面上には錯体
を形成しない状態での第因子、プレカリクレ
イン、高分子キニノーゲンの吸着の割合が高まる
ことになり、言い換えると、第因子の活性化
に必要な三者の錯体形成割合は減少することにな
り、かえつて血液凝固促進作用は滅殺されること
になる。また逆に吸着性無機物の表面積が小さす
ぎると、凝固因子の吸着の確率が小さくなり、血
液凝固促進作用を期待することができなくなる。
このために本発明における吸着性無機物はアマニ
油吸油量が20〜40ml／100g、BET比表面積値が
5000〜30000cm2／ｇの範囲の表面積を有するもの
が使用される。 又、本発明における吸着性無機物の比抵抗値は
１×1010Ω・cm以下のものが使用され、最適には
５×104Ω・cm以下であるものが使用される。比
抵抗値は電気伝導度の逆数であり、常温における
値である。 吸着性無機物とヘキサジメスリンハライドとの
使用割合は、吸着性無機物１重量部当りヘキサジ
メスリンハライドが0.0005乃至10重量部の範囲内
とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物
質は２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノンである。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンは次の化学構造式を有する。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンは融点が195℃、溶媒に対する溶解性は30℃
で水に対し0.1重量％、メタノールに対し50重量
％、エタノールに対し40重量％、水―エタノール
の１：１溶液に対し10重量％である。 又、最大吸収波長位置は345mμであり、カラー
バリユー（ガードナー）は１重量％のメタノール
溶液においてNo.８である。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンとヘキサジメスリンハライドとの使用割合
は、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノン１重量部当りヘキサジメスリンハライドが
0.0005乃至10重量部の範囲とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物
質はエラジン酸である。 エラジン酸は次の化学構造式を有する物質であ
る。 エラジン酸は、血液凝固因子の一である第
因子を活性化する物質として知られているが、ヘ
キサジメスリンハライドと併用する場合は、これ
らを単独で使用する場合に比して一層優れた血液
凝固促進作用を有することが確認された。エラジ
ン酸とヘキサジメスリンハライドとの使用割合
は、エラジン酸１重量部当りヘキサジメスリンハ
ライドが0.0003乃至６重量部の範囲内とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進作用を発揮する更に他
の物質はエピカテキンである。 エピカテキンは次の化学構造式を有する物質で
ある。 エピカテキンは無色柱状晶で、分解温度は237
〜238℃、最大吸収波長位置は282mμ、水に対し
難溶の物質である。 エピカテキンとヘキサジメスリンハライドとの
使用割合は、エピカテキン１重量部当りヘキサジ
メスリンハライドが0.0003乃至６重量部の範囲内
とされる。 ヘキサジメスリンハライド又はこれと吸着性無
機物、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾ
フエノン、エラジン酸、エピカテキンを血液中に
存在させるためには、例えば検査用容器内の血液
中に直接添加してもよいし、水等の分散媒に分散
させたものを血液中に滴下してもよいし、比重が
1.04〜1.06程度の担体に付着させたものを血液中
に添加してもよい。 本発明においてはヘキサジメスリンハライド又
はこれと吸着性無機物、２，2′，４，4′―テトラ
ヒドロキシベンゾフエノン、エラジン酸、エピカ
テキンを、血液検査用容器内の血液中に添加する
ことにより、血液中にヘキサジメスリンハライド
又はこれと吸着性無機物、２，2′，４，4′―テト
ラヒドロキシベンゾフエノン、エラジン酸、エピ
カテキンが存在されることによつて正常健康人の
血清に対する血液凝固促進作用がすぐれているだ
けでなく、人工透析を受けている患者や血栓症の
患者のように、ヘパリン投与を受けている為に凝
固を起し難い血液の場合においても、すぐれた血
液凝固促進作用を有し、遠心分離にかけた際に血
清と血餅との分離が容易に行なわれ、血清が良好
な収量で得られる。 実施例 １ 有底の外径15m／ｍ、内径13m／ｍ、高さ
100m／ｍのガラスチユーブを用意した。 又、ヘキサジメスリンブロマイド100mgを生理
食塩水５mlに溶解させたものを用意した。ヘパリ
ンが血液５ml当り５単位含有されている人新鮮血
５mlをガラスチユーブに注入した後、直ちにヘキ
サジメスリンブロマイドの前記溶液0.25mlを添加
し、20℃で放置して全血が完全に流動しなくなる
迄に要した時間を血液凝固時間として測定し、血
液凝固性を評価した。また血液凝固後、直ちに
3000回転／毎分の回転速度で５分間遠心分離を行
ない、血清分離状態を観察すると共に上澄血清を
ピペツトにて採取し、その量を血清収量とした。
血清分離状態は血清層における容器壁面での残存
血餅付着の有無及びフイブリン網の析出の有無に
より評価した。 第１表の実施例１の欄の結果から明らかなよう
に本発明方法によりヘパリン含有血液から血清を
短時間で容易に採取することができた。 また上記ヘキサジメスリンブロマイドを存在さ
せたことによる血液検査値への影響の有無を調べ
るため、上記により得た血清を用いて血清生化学
検査（28項目）を実施した。 ヘキサジメスリンブロマイドを使用しない場合
と、上記の場合との間の検査値について有意差検
査を行ない（ｎ＝５）、有意水準５％での差の有
無を検定した。その結果、検査値に全く影響を与
えないことが確認された。 実施例 ２ 実施例１において、ヘキサジメスリンブロマイ
ド100mgの他に、吸着性無機物として天然アモル
フアスケイ酸微粉末（平均粒径2μm、アマニ油吸
油量30ml／100g、BET比表面積値1.5×104cm2／
ｇ、比抵抗値2.6×104Ω・cm）500mgを生理食塩
水５mlに溶解、分散させたものを使用し、検査用
容器としてポリエチレン製のものを使用した以外
は実施例１と同様にしてヘパリン含有血液の血液
凝固性、血清分離状態、血清収量を評価した。 その結果は第１表の実施例２の欄に示す通りで
あり、ヘパリン含有血液に対する凝固を著しく促
進させると共に、血清分離状態もきわめて良好で
あつた。 実施例 ３〜５ 実施例２における吸着性無機物にかえ、ヘキサ
ジメスリンブロマイドと組合せてヘパリン含有血
液に添加する物質として、２，2′，４，4′―テト
ラヒドロキシベンゾフエノン（実施例３）、エラ
ジン酸（実施例４）、エピカテキン（実施例５）
を使用した。 これらの場合における使用量は、ヘキサジメス
リンブロマイド100mg当り、２，2′，４，4′―テ
トラヒドロキシベンゾフエノン400mg、エラジン
酸300mg、エピカテキン400mgとし、生理食塩水５
mlに溶解、分散させた。次いで実施例１と同様に
してポリエチレン製検査容器に入れたヘパリン含
有血液に対する血液凝固性、血清分離状態、血清
収量を評価した。その結果を実施例３〜５の欄に
示す。 ヘキサジメスリンブロマイドと組合わせて使用
する物質として２，2′，４，4′―テトラヒドロキ
シベンゾフエノン、エラジン酸、エピカテキンを
用いる場合は、ヘパリン含有血液に対する凝固を
著しく促進させると共に血清分離状態もきわめて
良好であつた。 比較例 １ 実施例１で使用したのと同じガラスチユーブに
実施例１と同様にしてヘパリン含有血液を入れ、
ヘキサジメスリンブロマイドを添加しないで10時
間放置したが、血液凝固は完了せず、血清分離は
不可能であつた。 【表】
くはヘパリン投与を受けている被検者の全血試料
から遠心分離により血清と血餅を分離する方法に
関する。 近年、検査技術の目ざましい進歩と相俟つて、
血清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の
血液検査が広く普及し、病気予防や早期診断に大
きく貢献するに至つている。血清検査は、血液検
査の主体をなしており、検査に要する血清は通
常、血液検査用容器に採取した血液を凝固させた
後、遠心分離によつて、比重の異なる血餅（フイ
ブリンと血球が混合したゲル様塊状物）から分離
している。 そして血液を遠心分離操作に付して血清と血餅
とに分けた後、血清部分をピペツトで吸上げた
り、デカンテーシヨンにより採取することが行な
われている。血清部分の採取は、血液の凝固を待
つて行なわれるが、凝固迄にかなりの時間を必要
とし迅速に検査を実施できない点が問題となつて
いる。 正常健康人の血液においても血液凝固に時間が
かかる点は大きな問題であるが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合は、血栓防止の
為にヘパリン投与を受けており、このような患者
の血液中にはかなりの濃度のヘパリンが混入して
おり、臨床検査に当つて血液凝固が起り難いため
に血清を分離採取することが困難であつた。 本発明はこのような患者血液に対しても血液凝
固に要する時間を大幅に短縮させると共に、血清
成分と血餅成分を良好に分離する方法を提供する
ことを目的とする。 本発明の要旨は、 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライドを、血
液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲で添加す
ることにより、血液中にヘキサジメスリンハラ
イドを存在させておくことを特徴とする、血清
と血餅との分離方法 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
ガラス、シリカ、カオリン、セライトおよびベ
ントナイトからなる群から選ばれ、粒径が
50μm以下であつて、平均粒径が10μm以下のも
のであり、アマニ油吸油量が20〜40ml／100g、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇ、比抵抗
値が１×1010Ω・cm以下である吸着性無機物
を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量部：
１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加
量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲と
なし、血液中にヘキサジメスリンハライドと吸
着性無機物を存在させておくことを特徴とす
る、血清と血餅との分離方法 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量
部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の
添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範
囲となし、血液中にヘキサジメスリンハライド
と２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノンを存在させておくことを特徴とする、血
清と血餅との分離方法 ４ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
エラジン酸を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至
６重量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、
該(イ)の添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５
mgの範囲となし、血液中にヘキサジメスリンハ
ライドとエラジン酸を存在させておくことを特
徴とする、血清と血餅との分離方法。 ５ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血
液中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは
正の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
エピカテキンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃
至６重量部：１重量部の範囲内で添加し、且
つ、該(イ)の添加量を血液量１ml当り0.005mg乃
至５mgの範囲となし、血液中にヘキサジメスリ
ンハライドとエピカテキンを存在させておくこ
とを特徴とする、血清と血餅との分離方法に存
する。 次に本発明血清と血餅との分離方法について更
に詳細に説明する。 被検者の全血試料を遠心分離操作に付して血清
と血餅を分離するために、血液は検査用容器に入
れられて凝固される。 しかし正常健康人においても、そのまゝ放置し
ただけでは凝固に時間が掛るが、人工透析を受け
ている患者や血栓症の患者の場合はヘパリン投与
を受けているため、血液中にヘパリンが存在し、
その作用によつて血液凝固を起しにくい。このた
め本発明においては検査用容器内に入れられた血
液中にヘキサジメスリンハライド
（Hexadimethrine halide）を存在させている。
ヘキサジメスリンハライドはＮ，Ｎ，N′，N′―
テトラメチルヘキサメチレンジアミンとトリメチ
レンジハライドとトリメチレンハライドとの重合
体であり、次式で表わされる。 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） 上式においてＸは臭素、ヨウ素等が好適である
が、Ｘが臭素であるものについては、市販品とし
てポリプレン（商品名）が存し、ヘパリン中和物
質として使用されている他、ペプチド分解促進物
質としてポリペプチド中のアミノ酸配列の決定に
使用されている。 そしてヘキサジメスリンハライドが容器内に入
れられた血液中に添加されることによつて、ヘパ
リンを含有する血液は、速やかにヘパリンの作用
を消失し、血液の凝固機能を回復する。ヘパリン
投与を受けている人工透析患者や血栓症患者の血
液中には血液10c.c.当り１単位乃至10単位のヘパリ
ンが存在するがヘキサジメスリンハライドが血液
中に存在させられる場合は、このヘキサジメスリ
ンハライドにヘパリンが吸着され、血中から除去
されるため、トロンピンを始めとする他の血液凝
固因子は正常な作用を取戻すに至る。 ヘキサジメスリンハライドの適正な存在量は、
血液１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲が好適であ
り、0.005mgよりも少ない場合はヘパリンを中和
する作用が不足し、充分な血液凝固が得られな
い。また５mgよりも多量になると、血清生化学検
査等の臨床検査値に異常値が出る傾向にある。 上記の場合において、ヘキサジメスリンハライ
ドを単独で血液中に存在させておく場合に、顕著
な血液凝固促進効果が認められる。 しかしながら、ヘキサジメスリンハライドと吸
着性無機物、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシ
ベンゾフエノン、エラジン酸又はエピカテキンを
併用することにより血液凝固促進作用を一層すぐ
れたものとすることができる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する物質の
一つは吸着性無機物である。 吸着性無機物としては、吸着剤として使用され
ていたような無機物、すなわちガラス、シリカ、
カオリン、セライト、ベントナイト等の水不溶性
の無機質微粉末から選ばれる。 又、吸着性無機物は粒径が50μm以下であつて、
平均粒径が10μm以下のものが使用される。そし
て特に血液凝固時間を短縮させるに有効な吸着性
無機物はシリカであり、とり分け無定形成分を20
重量％以上含有する多孔性のシリカがすぐれた効
果を発揮する。かゝる吸着性無機物は、血液と接
触した場合に血液凝固因子の活性化を促進し、又
血小板の凝集を促がす作用を有する。しかしなが
ら吸着性無機物が血液凝固促進作用を効果的に発
揮するためには、アマニ油吸油量、BET比表面
積値、比抵抗値が一定の範囲内に存在することが
好ましい。 アマニ油吸油量及びBET比表面積値は、吸着
性無機物の表面積の程度を表わし、又表面積は吸
着性無機物の有する表面孔隙の程度と関連するの
で、吸油量及び比表面積によつて表面孔隙の程度
を知ることができる。そして本発明における吸着
性無機物は、アマニ油吸油量が20〜40ml／100g、
BET比表面積値が5000〜30000cm2／ｇであるもの
が使用れる。 アマニ油吸油量は日本工業規格Ｋ―5101に準拠
して測定される値を示す。 BET比表面積値は、吸着性無機物の表面に吸
着される気体の吸着量、その時の平衡圧、吸着ガ
スの飽和蒸気圧から単分子層として表面をおゝい
切る気体量を求め、これに吸着気体分子の平均断
面積を乗じて算出された値を指すものであり、吸
着気体としては窒素ガス、酸素ガス、アルゴンガ
ス、メタンガス等が使用される。そしてこの方法
によれば、アマニ油吸油量の測定によつては測定
できない細孔を含めた表面積値が測定される。 血液凝固に際しては、第因子、すなわち接
触因子が活性化されるが、このためには異物表面
上に第因子、プレカリクレイン、高分子キニ
ノーゲンの３種の物質が錯体を形成して吸着され
ることが必要であり、これらの一つ又は二つが欠
けた状態での吸着は活性化に至らないとされてい
る。ところで、血液凝固促進作用を期待して吸着
性無機物を使用した場合に、表面積が非常に大き
なものであると、吸着性無機物の表面上には錯体
を形成しない状態での第因子、プレカリクレ
イン、高分子キニノーゲンの吸着の割合が高まる
ことになり、言い換えると、第因子の活性化
に必要な三者の錯体形成割合は減少することにな
り、かえつて血液凝固促進作用は滅殺されること
になる。また逆に吸着性無機物の表面積が小さす
ぎると、凝固因子の吸着の確率が小さくなり、血
液凝固促進作用を期待することができなくなる。
このために本発明における吸着性無機物はアマニ
油吸油量が20〜40ml／100g、BET比表面積値が
5000〜30000cm2／ｇの範囲の表面積を有するもの
が使用される。 又、本発明における吸着性無機物の比抵抗値は
１×1010Ω・cm以下のものが使用され、最適には
５×104Ω・cm以下であるものが使用される。比
抵抗値は電気伝導度の逆数であり、常温における
値である。 吸着性無機物とヘキサジメスリンハライドとの
使用割合は、吸着性無機物１重量部当りヘキサジ
メスリンハライドが0.0005乃至10重量部の範囲内
とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物
質は２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノンである。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンは次の化学構造式を有する。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンは融点が195℃、溶媒に対する溶解性は30℃
で水に対し0.1重量％、メタノールに対し50重量
％、エタノールに対し40重量％、水―エタノール
の１：１溶液に対し10重量％である。 又、最大吸収波長位置は345mμであり、カラー
バリユー（ガードナー）は１重量％のメタノール
溶液においてNo.８である。 ２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエ
ノンとヘキサジメスリンハライドとの使用割合
は、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフ
エノン１重量部当りヘキサジメスリンハライドが
0.0005乃至10重量部の範囲とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進効果を発揮する他の物
質はエラジン酸である。 エラジン酸は次の化学構造式を有する物質であ
る。 エラジン酸は、血液凝固因子の一である第
因子を活性化する物質として知られているが、ヘ
キサジメスリンハライドと併用する場合は、これ
らを単独で使用する場合に比して一層優れた血液
凝固促進作用を有することが確認された。エラジ
ン酸とヘキサジメスリンハライドとの使用割合
は、エラジン酸１重量部当りヘキサジメスリンハ
ライドが0.0003乃至６重量部の範囲内とされる。 ヘキサジメスリンハライドと併用されることに
より相乗的に血液凝固促進作用を発揮する更に他
の物質はエピカテキンである。 エピカテキンは次の化学構造式を有する物質で
ある。 エピカテキンは無色柱状晶で、分解温度は237
〜238℃、最大吸収波長位置は282mμ、水に対し
難溶の物質である。 エピカテキンとヘキサジメスリンハライドとの
使用割合は、エピカテキン１重量部当りヘキサジ
メスリンハライドが0.0003乃至６重量部の範囲内
とされる。 ヘキサジメスリンハライド又はこれと吸着性無
機物、２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾ
フエノン、エラジン酸、エピカテキンを血液中に
存在させるためには、例えば検査用容器内の血液
中に直接添加してもよいし、水等の分散媒に分散
させたものを血液中に滴下してもよいし、比重が
1.04〜1.06程度の担体に付着させたものを血液中
に添加してもよい。 本発明においてはヘキサジメスリンハライド又
はこれと吸着性無機物、２，2′，４，4′―テトラ
ヒドロキシベンゾフエノン、エラジン酸、エピカ
テキンを、血液検査用容器内の血液中に添加する
ことにより、血液中にヘキサジメスリンハライド
又はこれと吸着性無機物、２，2′，４，4′―テト
ラヒドロキシベンゾフエノン、エラジン酸、エピ
カテキンが存在されることによつて正常健康人の
血清に対する血液凝固促進作用がすぐれているだ
けでなく、人工透析を受けている患者や血栓症の
患者のように、ヘパリン投与を受けている為に凝
固を起し難い血液の場合においても、すぐれた血
液凝固促進作用を有し、遠心分離にかけた際に血
清と血餅との分離が容易に行なわれ、血清が良好
な収量で得られる。 実施例 １ 有底の外径15m／ｍ、内径13m／ｍ、高さ
100m／ｍのガラスチユーブを用意した。 又、ヘキサジメスリンブロマイド100mgを生理
食塩水５mlに溶解させたものを用意した。ヘパリ
ンが血液５ml当り５単位含有されている人新鮮血
５mlをガラスチユーブに注入した後、直ちにヘキ
サジメスリンブロマイドの前記溶液0.25mlを添加
し、20℃で放置して全血が完全に流動しなくなる
迄に要した時間を血液凝固時間として測定し、血
液凝固性を評価した。また血液凝固後、直ちに
3000回転／毎分の回転速度で５分間遠心分離を行
ない、血清分離状態を観察すると共に上澄血清を
ピペツトにて採取し、その量を血清収量とした。
血清分離状態は血清層における容器壁面での残存
血餅付着の有無及びフイブリン網の析出の有無に
より評価した。 第１表の実施例１の欄の結果から明らかなよう
に本発明方法によりヘパリン含有血液から血清を
短時間で容易に採取することができた。 また上記ヘキサジメスリンブロマイドを存在さ
せたことによる血液検査値への影響の有無を調べ
るため、上記により得た血清を用いて血清生化学
検査（28項目）を実施した。 ヘキサジメスリンブロマイドを使用しない場合
と、上記の場合との間の検査値について有意差検
査を行ない（ｎ＝５）、有意水準５％での差の有
無を検定した。その結果、検査値に全く影響を与
えないことが確認された。 実施例 ２ 実施例１において、ヘキサジメスリンブロマイ
ド100mgの他に、吸着性無機物として天然アモル
フアスケイ酸微粉末（平均粒径2μm、アマニ油吸
油量30ml／100g、BET比表面積値1.5×104cm2／
ｇ、比抵抗値2.6×104Ω・cm）500mgを生理食塩
水５mlに溶解、分散させたものを使用し、検査用
容器としてポリエチレン製のものを使用した以外
は実施例１と同様にしてヘパリン含有血液の血液
凝固性、血清分離状態、血清収量を評価した。 その結果は第１表の実施例２の欄に示す通りで
あり、ヘパリン含有血液に対する凝固を著しく促
進させると共に、血清分離状態もきわめて良好で
あつた。 実施例 ３〜５ 実施例２における吸着性無機物にかえ、ヘキサ
ジメスリンブロマイドと組合せてヘパリン含有血
液に添加する物質として、２，2′，４，4′―テト
ラヒドロキシベンゾフエノン（実施例３）、エラ
ジン酸（実施例４）、エピカテキン（実施例５）
を使用した。 これらの場合における使用量は、ヘキサジメス
リンブロマイド100mg当り、２，2′，４，4′―テ
トラヒドロキシベンゾフエノン400mg、エラジン
酸300mg、エピカテキン400mgとし、生理食塩水５
mlに溶解、分散させた。次いで実施例１と同様に
してポリエチレン製検査容器に入れたヘパリン含
有血液に対する血液凝固性、血清分離状態、血清
収量を評価した。その結果を実施例３〜５の欄に
示す。 ヘキサジメスリンブロマイドと組合わせて使用
する物質として２，2′，４，4′―テトラヒドロキ
シベンゾフエノン、エラジン酸、エピカテキンを
用いる場合は、ヘパリン含有血液に対する凝固を
著しく促進させると共に血清分離状態もきわめて
良好であつた。 比較例 １ 実施例１で使用したのと同じガラスチユーブに
実施例１と同様にしてヘパリン含有血液を入れ、
ヘキサジメスリンブロマイドを添加しないで10時
間放置したが、血液凝固は完了せず、血清分離は
不可能であつた。 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血液
中に、 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライドを、血液
１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲で添加すること
により、血液中にヘキサジメスリンハライドを存
在させておくことを特徴とする、血清と血餅との
分離方法。 ２ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血液
中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)ガ
ラス、シリカ、カオリン、セライトおよびベント
ナイトからなる群から選ばれ、粒径が50μm以下
であつて、平均粒径が10μm以下のものであり、
アマニ油吸油量が20〜40ml／100g、BET比表面
積値が5000〜30000cm2／ｇ、比抵抗値が１×1010
Ω・cm以下である吸着性無機物を、該(イ)と該(ロ)の
割合が0.0005乃至10重量部：１重量部の範囲内で
添加し、且つ、該(イ)の添加量を血液量１ml当り
0.005mg乃至５mgの範囲となし、血液中にヘキサ
ジメスリンハライドと吸着性無機物を存在させて
おくことを特徴とする、血清と血餅との分離方
法。 ３ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血液
中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)
２，2′，４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエノ
ンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0005乃至10重量部：
１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の添加量
を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲となし、
血液中にヘキサジメスリンハライドと２，2′，
４，4′―テトラヒドロキシベンゾフエノンを存在
させておくことを特徴とする、血清と血餅との分
離方法。 ４ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血液
中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)エ
ラジン酸を、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至６重
量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)の
添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範囲
となし、血液中にヘキサジメスリンハライドとエ
ラジン酸を存在させておくことを特徴とする、血
清と血餅との分離方法。 ５ 血液を遠心分離操作に付して血清と血餅とに
分離する方法において、血液検査用容器内の血液
中に、(イ) 式 （但し、上式においてＸはハロゲン原子、ｘは正
の整数） で表わされるヘキサジメスリンハライド及び(ロ)エ
ピカテキンを、該(イ)と該(ロ)の割合が0.0003乃至６
重量部：１重量部の範囲内で添加し、且つ、該(イ)
の添加量を血液量１ml当り0.005mg乃至５mgの範
囲となし、血液中にヘキサジメスリンハライドと
エピカテキンを存在させておくことを特徴とす
る、血清と血餅との分離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7975582A JPS58196456A (ja) | 1982-05-11 | 1982-05-11 | 血清と血餅との分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7975582A JPS58196456A (ja) | 1982-05-11 | 1982-05-11 | 血清と血餅との分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58196456A JPS58196456A (ja) | 1983-11-15 |
| JPH0126502B2 true JPH0126502B2 (ja) | 1989-05-24 |
Family
ID=13699031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7975582A Granted JPS58196456A (ja) | 1982-05-11 | 1982-05-11 | 血清と血餅との分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58196456A (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4301182A (en) * | 1980-06-18 | 1981-11-17 | Ralston Purina Company | Process for producing a fish product |
| JPS5716867A (en) * | 1980-07-04 | 1982-01-28 | Sankyo Co Ltd | Pyrazole derivative and herabicide containing the same as active principle |
-
1982
- 1982-05-11 JP JP7975582A patent/JPS58196456A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58196456A (ja) | 1983-11-15 |
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