JPH0157960B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0157960B2 JPH0157960B2 JP57076752A JP7675282A JPH0157960B2 JP H0157960 B2 JPH0157960 B2 JP H0157960B2 JP 57076752 A JP57076752 A JP 57076752A JP 7675282 A JP7675282 A JP 7675282A JP H0157960 B2 JPH0157960 B2 JP H0157960B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mycobacterium
- steroids
- nutrient medium
- aerobic conditions
- under aerobic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J13/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17
- C07J13/007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17 with double bond in position 17 (20)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/005—Degradation of the lateral chains at position 17
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/06—Hydroxylating
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/863—Mycobacterium
- Y10S435/865—Mycobacterium fortuitum
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は有用なステロイド中間体の新規な一段
醗酵法に関する。
醗酵法に関する。
［従来の技術］
アメリカ合衆国特許第4029549号は９−ヒドロ
キシ−３−オキソ−４−プレグネン−20−カルボ
ン酸〔９−ヒドロキシビスノル酸〕をつくるのに
ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
8119を使用することを開示し特許請求している。
同じ微生物がアメリカ合衆国特許4035236号で９
−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，17−ジ
オン〔９−ヒドロキシアンドロステンジオン〕を
つくるために、またアメリカ合衆国特許4214051
号で９−ヒドロキシ−３−オキソ−４−プレグネ
ン−20−カルボン酸メチルエステル〔９−ヒドロ
キシビスノル酸メチルエステル）をつくるために
使用されている。
キシ−３−オキソ−４−プレグネン−20−カルボ
ン酸〔９−ヒドロキシビスノル酸〕をつくるのに
ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
8119を使用することを開示し特許請求している。
同じ微生物がアメリカ合衆国特許4035236号で９
−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，17−ジ
オン〔９−ヒドロキシアンドロステンジオン〕を
つくるために、またアメリカ合衆国特許4214051
号で９−ヒドロキシ−３−オキソ−４−プレグネ
ン−20−カルボン酸メチルエステル〔９−ヒドロ
キシビスノル酸メチルエステル）をつくるために
使用されている。
ヨーロツパ特許出願79104372.2号は重要なコー
チコイドの合成に於いて中間体として有用な９−
ヒドロキシ−３−オキソ−４，17（20）−プレグナ
ジエン−20−カルボン酸（）をつくるための２
段階醗酵を開示している。この方法は第一にステ
ロイドをミコバクテリウム菌株NRRLB−8054で
の醗酵によつて３−オキソ−４，17（20）−プレク
ナジエン−20−カルボン酸に変換し、次いで9α
位置にヒドロキシル基を導入できる幾つかの微生
物の任意の一つで培養することによつてこの化合
物を上記（）の化合物に変換することを含む。
チコイドの合成に於いて中間体として有用な９−
ヒドロキシ−３−オキソ−４，17（20）−プレグナ
ジエン−20−カルボン酸（）をつくるための２
段階醗酵を開示している。この方法は第一にステ
ロイドをミコバクテリウム菌株NRRLB−8054で
の醗酵によつて３−オキソ−４，17（20）−プレク
ナジエン−20−カルボン酸に変換し、次いで9α
位置にヒドロキシル基を導入できる幾つかの微生
物の任意の一つで培養することによつてこの化合
物を上記（）の化合物に変換することを含む。
［発明が解決しようとする課題］
上記先行技術では２段階法で（醗酵を）行なわ
なければならなかつた。
なければならなかつた。
［課題を解決する手段］
有用な中間体９−ヒドロキシ−３−オキソ−
４，17（20）−プレグナジエン−20−カルボン酸
（）をつくる能率的な一段階醗酵法が開示され
請求される。この方法はミコバクテリウムフオル
ツイツムNRRL Ｂ−8119の新規な突然変異体の
使用によつて行なわれる。本発明方法は又アメリ
カ合衆国特許4029549号中で開示されている微生
物の属、即ちアースロバクター、バシルス、ブレ
ビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルデイア、
プロトアミノバクター、セラチア及びストレプト
ミセスのうち、ミコバクテリウムから得られる新
規二重突然変異体（ダブルミユータント）を使用
することも含んでいる。これらの属の微生物はす
べてよく知られたステロイド減成剤である。これ
らの属の野生型の株はステロールを非選択的に減
成させて小さい分子量の化合物例えばCO2＋H2O
にする。突然変異体はアメリカ合衆国特許
4029549号実施例１中で開示した手順に従つてこ
れらの野生型からつくられる。この実施例はミコ
バクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119を
つくることを開示している。
４，17（20）−プレグナジエン−20−カルボン酸
（）をつくる能率的な一段階醗酵法が開示され
請求される。この方法はミコバクテリウムフオル
ツイツムNRRL Ｂ−8119の新規な突然変異体の
使用によつて行なわれる。本発明方法は又アメリ
カ合衆国特許4029549号中で開示されている微生
物の属、即ちアースロバクター、バシルス、ブレ
ビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミクロバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルデイア、
プロトアミノバクター、セラチア及びストレプト
ミセスのうち、ミコバクテリウムから得られる新
規二重突然変異体（ダブルミユータント）を使用
することも含んでいる。これらの属の微生物はす
べてよく知られたステロイド減成剤である。これ
らの属の野生型の株はステロールを非選択的に減
成させて小さい分子量の化合物例えばCO2＋H2O
にする。突然変異体はアメリカ合衆国特許
4029549号実施例１中で開示した手順に従つてこ
れらの野生型からつくられる。この実施例はミコ
バクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119を
つくることを開示している。
アメリカ合衆国特許4029549号の実施例１の手
順を使つてつくられる上で開示した属の突然変異
体は次いで本明細書中で開示する突然変異化引順
にかけて更に他の突然変異体をつくることができ
る。ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ
−12433によつてこゝで例示されるこれらの後者
の突然変異体は化合物（）をつくるのに本明細
書中で開示された一段階醗酵法に使用できる。
順を使つてつくられる上で開示した属の突然変異
体は次いで本明細書中で開示する突然変異化引順
にかけて更に他の突然変異体をつくることができ
る。ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ
−12433によつてこゝで例示されるこれらの後者
の突然変異体は化合物（）をつくるのに本明細
書中で開示された一段階醗酵法に使用できる。
本発明の一段階醗酵法は上述の化合物（）を
製造するための２段階法に対して多大の改良であ
る。
製造するための２段階法に対して多大の改良であ
る。
微生物
17−アルキル側鎖を有するステロイドを選択的
に減成させ醗酵液中の主生成物として９−ヒドロ
キシ−３−オキソ−４，17（20）−プレクナジエン
−20−カルボン酸（）を蓄積する能力によつて
特徴付けられる突然変異体は次の属の微生物を突
然変異させることによつて得られる。アースロバ
クター、バシルス、ブレビバクテリウム、コリネ
バクテリウム、ミロバクテリウム、ミコバクテリ
ウム、、ノカルデイア、プロトアミノバクター、
セラチア及びストレプトミセス。
に減成させ醗酵液中の主生成物として９−ヒドロ
キシ−３−オキソ−４，17（20）−プレクナジエン
−20−カルボン酸（）を蓄積する能力によつて
特徴付けられる突然変異体は次の属の微生物を突
然変異させることによつて得られる。アースロバ
クター、バシルス、ブレビバクテリウム、コリネ
バクテリウム、ミロバクテリウム、ミコバクテリ
ウム、、ノカルデイア、プロトアミノバクター、
セラチア及びストレプトミセス。
次のものは本発明の一段階醗酵法で使用される
新規の突然変異体の調製例である。この実施例中
でつくられる突然変異体はミコバクテリウムフオ
ルツイツムNRRL Ｂ−12433である。
新規の突然変異体の調製例である。この実施例中
でつくられる突然変異体はミコバクテリウムフオ
ルツイツムNRRL Ｂ−12433である。
他のミコバクテリウム種から類似突然変異体と
本明細書中で述べた他の微生物の属は次の実施例
の手順に従つてつくられうる。
本明細書中で述べた他の微生物の属は次の実施例
の手順に従つてつくられうる。
ステロールの減成の主生成物として９−ヒドロ
キシ−３−オキソ−４，17（20）−プレグナジエ
ン−20−カルボン酸を蓄積する突然変異体の製
造 ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
8119を（リツトル当り）栄養素ブロス、８ｇ；イ
ーストエキストラクト、１ｇ；グリセロール、５
ｇ；トウイン（Tween）80、0.1％（Ｗ／Ｖ）；及
び蒸溜水から成る培地中で31゜で生育させる。こ
の媒地を20分間15ｂ／in2（1.055Kg／cm2）でオ
ートクレーブ処理することによつて滅菌する。細
胞をml当り約５×108の密度に生育させ滅菌した
0.2ミクロンフイルター上に集める。細胞を同じ
容積の、0.1％トウイン（Tween）80を含んでい
るPH5.6の滅菌した0.1Mのくえん酸ナトリウムで
洗滌し、次いで同じ緩衝液の1/2容積中に再び懸
濁させるＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジンを濃度100μｇ／mlに加え菌体懸濁
液を31℃で１時間培養する。菌体を次いで0.1％
トウイン80を含んでいるPH７の滅菌して0.1Mの
燐酸カリウム緩衝液２容で洗滌しそして同じ緩衝
液１容中に再懸濁する。（リツトル当り）ニユト
リエントブロス、８ｇ；NaCl5ｇ；グリセロー
ル、５ｇ；及び蒸溜水を含んでいる培地をつく
る。15ｇ／に寒天を加え、培地を20分間15
ｂ／in2（1.055Kg／cm2）でオートクレーブ処理を
し、滅菌したペトリ皿中に注ぐ。変異誘発（ミユ
タゼナイズ）した菌体をこの培地上で平板培養
し、これらの平板上で生育する集落を次いでそれ
らがステロールを化合物（）に変換する能力に
つき小規模醗酵でふるいわけする。所望の化合物
の検出はシリカゲルと溶媒系塩化メチレン−アセ
トン−酢酸（212−38−１）を使用して試験醗酵
の塩化メチレン抽出液の薄層クロマトグラフイに
よる。この方法でステロールの生物変換の主生成
物として９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，17
（20）−プレグナ−ジエン−20−カルボン酸を貯蓄
する突然変異体NRRL Ｂ−12433を単離する こゝで記載されたものの様な突然変異体を単離
する鍵はそれが9α−ヒドロキシアンドロステン
ジオンを生ずる様にステロイドリング減成に於い
て既にブロツクされているNRRL Ｂ−8119の様
な突然変異体で出発し、ステロイド側鎖減成に影
響を与える第二の突然変異をこの微生物中に導入
することである。
キシ−３−オキソ−４，17（20）−プレグナジエ
ン−20−カルボン酸を蓄積する突然変異体の製
造 ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
8119を（リツトル当り）栄養素ブロス、８ｇ；イ
ーストエキストラクト、１ｇ；グリセロール、５
ｇ；トウイン（Tween）80、0.1％（Ｗ／Ｖ）；及
び蒸溜水から成る培地中で31゜で生育させる。こ
の媒地を20分間15ｂ／in2（1.055Kg／cm2）でオ
ートクレーブ処理することによつて滅菌する。細
胞をml当り約５×108の密度に生育させ滅菌した
0.2ミクロンフイルター上に集める。細胞を同じ
容積の、0.1％トウイン（Tween）80を含んでい
るPH5.6の滅菌した0.1Mのくえん酸ナトリウムで
洗滌し、次いで同じ緩衝液の1/2容積中に再び懸
濁させるＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジンを濃度100μｇ／mlに加え菌体懸濁
液を31℃で１時間培養する。菌体を次いで0.1％
トウイン80を含んでいるPH７の滅菌して0.1Mの
燐酸カリウム緩衝液２容で洗滌しそして同じ緩衝
液１容中に再懸濁する。（リツトル当り）ニユト
リエントブロス、８ｇ；NaCl5ｇ；グリセロー
ル、５ｇ；及び蒸溜水を含んでいる培地をつく
る。15ｇ／に寒天を加え、培地を20分間15
ｂ／in2（1.055Kg／cm2）でオートクレーブ処理を
し、滅菌したペトリ皿中に注ぐ。変異誘発（ミユ
タゼナイズ）した菌体をこの培地上で平板培養
し、これらの平板上で生育する集落を次いでそれ
らがステロールを化合物（）に変換する能力に
つき小規模醗酵でふるいわけする。所望の化合物
の検出はシリカゲルと溶媒系塩化メチレン−アセ
トン−酢酸（212−38−１）を使用して試験醗酵
の塩化メチレン抽出液の薄層クロマトグラフイに
よる。この方法でステロールの生物変換の主生成
物として９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，17
（20）−プレグナ−ジエン−20−カルボン酸を貯蓄
する突然変異体NRRL Ｂ−12433を単離する こゝで記載されたものの様な突然変異体を単離
する鍵はそれが9α−ヒドロキシアンドロステン
ジオンを生ずる様にステロイドリング減成に於い
て既にブロツクされているNRRL Ｂ−8119の様
な突然変異体で出発し、ステロイド側鎖減成に影
響を与える第二の突然変異をこの微生物中に導入
することである。
微生物の記述
こゝで記載した生変換をもたらす突然変異体は
その静培養物例えばミコバクテリウムフオルトウ
イトウムNRRL Ｂ−8119とは、ステロイド分子
に対するその作用に於いてのみ異なつている。形
態学・薬剤感応性の様なすべての他の点でそれら
は同一ではないにしても類似している。これらの
ミコバクテリウムフオルツイツム培養基は両方と
もアクチノミセタレス目のミコバクテリアセエ科
に属する坑酸性の、非運動性の、非胞子形成性の
バシルスである。ランヨン（Runyon）の分類に
よると（Runyon、E.H.、1959Med.Clin.North
America43：273）によるとこれは非色素生成性
の群ミコバクテリウムである。即ちこれは低温
で迅速に生育して比較的簡単な培地上で非着色性
の集落を生ずる。
その静培養物例えばミコバクテリウムフオルトウ
イトウムNRRL Ｂ−8119とは、ステロイド分子
に対するその作用に於いてのみ異なつている。形
態学・薬剤感応性の様なすべての他の点でそれら
は同一ではないにしても類似している。これらの
ミコバクテリウムフオルツイツム培養基は両方と
もアクチノミセタレス目のミコバクテリアセエ科
に属する坑酸性の、非運動性の、非胞子形成性の
バシルスである。ランヨン（Runyon）の分類に
よると（Runyon、E.H.、1959Med.Clin.North
America43：273）によるとこれは非色素生成性
の群ミコバクテリウムである。即ちこれは低温
で迅速に生育して比較的簡単な培地上で非着色性
の集落を生ずる。
ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
8119とNRRL Ｂ−12433はアメリカ合衆国イリ
ノイ州ペオリア、合衆国農務省、北方地区研究試
験所での永久保存機関に寄託されている。ミコバ
クテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119は少
なくとも微生物を開示している上述の合衆国特許
の発行以後は一般の人は入手できる。ミコバクテ
リウムフオルツイツムNRRL Ｂ−12433は1981
年５月４日に寄託された。これらの微生物のサブ
カルチヤーはNRRL寄託所を要求することによ
つてそこから入手できる。カルチヤーの入手でき
ることは政府の決定によつて本書で与えられる特
許権を損じて本発明を実施する実施権を構成する
ものではないことが理解されるべきである。
8119とNRRL Ｂ−12433はアメリカ合衆国イリ
ノイ州ペオリア、合衆国農務省、北方地区研究試
験所での永久保存機関に寄託されている。ミコバ
クテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119は少
なくとも微生物を開示している上述の合衆国特許
の発行以後は一般の人は入手できる。ミコバクテ
リウムフオルツイツムNRRL Ｂ−12433は1981
年５月４日に寄託された。これらの微生物のサブ
カルチヤーはNRRL寄託所を要求することによ
つてそこから入手できる。カルチヤーの入手でき
ることは政府の決定によつて本書で与えられる特
許権を損じて本発明を実施する実施権を構成する
ものではないことが理解されるべきである。
化合物は貴重なコルチコイド類の合成の中間
体として有用である。それは例えば公開されたヨ
ーロツパ特許出願79104372.2に詳述されている手
続きに従つてハイドロコーチゾン アセテートに
変換できる。
体として有用である。それは例えば公開されたヨ
ーロツパ特許出願79104372.2に詳述されている手
続きに従つてハイドロコーチゾン アセテートに
変換できる。
次のものは課題の発明の一段階醗酵法を例示す
る実施例である。これらの実施例は単に例示的な
もので従つて制限的に解釈されるべきでない。す
べての百分率は重量によるものですべての溶媒混
合物の割合は他の注記をしなければ容積によるも
のである。
る実施例である。これらの実施例は単に例示的な
もので従つて制限的に解釈されるべきでない。す
べての百分率は重量によるものですべての溶媒混
合物の割合は他の注記をしなければ容積によるも
のである。
実施例 １
粗製シトステロールの醗酵
生物変換培地は（リツトル当り）ユーコン
（Ucon）、8.0ｇ；セレローズ（Cerelose）5.0ｇ；
NH4Cl、3.0ｇ；CaCO3、3.0ｇ；Na3〔くえん酸〕
2H2O、3.0ｇ；トウイン80、2.0ｇ；大豆粉1.0
ｇ；KH2PO4、0.5ｇ、尿素、0.5ｇ及び粗製シト
ステロール、30.0ｇを水道水中に含んでいてPHは
7.0に調整されている。この培地100ml部を含んで
いるフラスコに、（リツトル当り）ニユートリエ
ントブロス8.0ｇ；グリセロール、5.0ｇ；イース
トエキストラクト、1.0ｇ及びトウイーン80、1.0
ｇを蒸溜水中で含んでいるPHを7.0に調整した培
地中で28゜に生育したミコバクテリウム フオル
ツイツムNRRL Ｂ−12433の種培養基10mlを接
種する。この培養基を次いで廻転式シエーカー上
で336時間28℃で培養する。培養に続いて混合物
を抽出し、生成物を以下の実施３で詳述する様に
単離する。
（Ucon）、8.0ｇ；セレローズ（Cerelose）5.0ｇ；
NH4Cl、3.0ｇ；CaCO3、3.0ｇ；Na3〔くえん酸〕
2H2O、3.0ｇ；トウイン80、2.0ｇ；大豆粉1.0
ｇ；KH2PO4、0.5ｇ、尿素、0.5ｇ及び粗製シト
ステロール、30.0ｇを水道水中に含んでいてPHは
7.0に調整されている。この培地100ml部を含んで
いるフラスコに、（リツトル当り）ニユートリエ
ントブロス8.0ｇ；グリセロール、5.0ｇ；イース
トエキストラクト、1.0ｇ及びトウイーン80、1.0
ｇを蒸溜水中で含んでいるPHを7.0に調整した培
地中で28゜に生育したミコバクテリウム フオル
ツイツムNRRL Ｂ−12433の種培養基10mlを接
種する。この培養基を次いで廻転式シエーカー上
で336時間28℃で培養する。培養に続いて混合物
を抽出し、生成物を以下の実施３で詳述する様に
単離する。
実施例 ２
実施例１の通りであるが、しかし単独に又は組
合わせで、そして純粋形又は粗製形で与えられる
種々のステロイド基質を使用して行なつた。その
様な基質はシトステロール、コレステロール、ス
チグマステロール及びカンペステロールを含む。
合わせで、そして純粋形又は粗製形で与えられる
種々のステロイド基質を使用して行なつた。その
様な基質はシトステロール、コレステロール、ス
チグマステロール及びカンペステロールを含む。
実施例 ３
ミコバクテリウム、フオルツイツムNRRL Ｂ
−12433醗酵からの（）の単離 ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
12433を使うシストステロールの生物的変換から
の醗酵液（1200ml）を酸性化し等容量の塩化メチ
レン（Mecl2）で２回抽出し、それぞれ29.2ｇ及
び8.9ｇの粗製抽出液を与える。
−12433醗酵からの（）の単離 ミコバクテリウムフオルツイツムNRRL Ｂ−
12433を使うシストステロールの生物的変換から
の醗酵液（1200ml）を酸性化し等容量の塩化メチ
レン（Mecl2）で２回抽出し、それぞれ29.2ｇ及
び8.9ｇの粗製抽出液を与える。
第一抽出液をMeCl2中に再溶解し飽酸性炭酸ナ
トリウム溶液で洗滌する。水性洗液を一緒にし、
稀HCl（４−Ｎ）で酸性にしMeCl2で逆抽出する。
抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥して過す
る。溶媒を蒸発させると黄色の固体を残すがこれ
をMeCl2と共にすりくだくと淡黄色の粉を与え
る。これをMeCl2とメタノールの混合物から再結
晶し、それから３つの次々連続した収穫物(a)3.8
ｇ；(b)2.1ｇ；(c)2.8ｇを得る。これらはnmrのス
ペクトロメメトリーで酸と△17（20）−デヒドロ化
合物（）とのそれぞれ90％、35％と10％の濃度
の混合物であることが示される。
トリウム溶液で洗滌する。水性洗液を一緒にし、
稀HCl（４−Ｎ）で酸性にしMeCl2で逆抽出する。
抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥して過す
る。溶媒を蒸発させると黄色の固体を残すがこれ
をMeCl2と共にすりくだくと淡黄色の粉を与え
る。これをMeCl2とメタノールの混合物から再結
晶し、それから３つの次々連続した収穫物(a)3.8
ｇ；(b)2.1ｇ；(c)2.8ｇを得る。これらはnmrのス
ペクトロメメトリーで酸と△17（20）−デヒドロ化
合物（）とのそれぞれ90％、35％と10％の濃度
の混合物であることが示される。
MeCl2／MeCHからの第一の収穫物を３回再結
晶すると９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，17
（20）−プレグナジエン−20−カルボン酸（）
1.8ｇを与える。融点240〜242゜〔α〕D40.7゜（メタノ
ール）。質量スペクトルはｍ／e358に分子イオン
を与える（C22H30O4）。
晶すると９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，17
（20）−プレグナジエン−20−カルボン酸（）
1.8ｇを与える。融点240〜242゜〔α〕D40.7゜（メタノ
ール）。質量スペクトルはｍ／e358に分子イオン
を与える（C22H30O4）。
実施例 ４
アースロバクター、バシルス、ブレビバクテリ
ウム、コリネバクテリウム、ノカルデイア、プロ
トアミノバクター、セラチア及びストレプトミセ
ス属からのステロール減成微生物を、ミコバクテ
リウムフオルツイツムNRRL Ｂ−12433の製造
に対して開示された方法に於いてミコバクテリウ
ムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119の代りに使用
してＣ−17側鎖をもつステロイドを選択的に減成
し、主生成物として化合物（）を蓄積するそれ
らの能力によつて特徴付けられる突然変異体の微
生物が得られる。
ウム、コリネバクテリウム、ノカルデイア、プロ
トアミノバクター、セラチア及びストレプトミセ
ス属からのステロール減成微生物を、ミコバクテ
リウムフオルツイツムNRRL Ｂ−12433の製造
に対して開示された方法に於いてミコバクテリウ
ムフオルツイツムNRRL Ｂ−8119の代りに使用
してＣ−17側鎖をもつステロイドを選択的に減成
し、主生成物として化合物（）を蓄積するそれ
らの能力によつて特徴付けられる突然変異体の微
生物が得られる。
実施例 ５
実施例１中のミコバクテリウムフオルツイツム
NRRL Ｂ−12433の代りに実施例４で得られる
突然変異体を使つて化合物（）が得られる。
NRRL Ｂ−12433の代りに実施例４で得られる
突然変異体を使つて化合物（）が得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 水性栄養媒地中でＣ−17側鎖をもつか又はも
たないステロイドの存在下好気性の条件下でＣ−
17側鎖をもつステロイドを選択的に減成させ醗酵
液中に主生成物として９−ヒドロキシ−３−オキ
ソ−４，17（20）−プレグナジエン−20−カルボン
酸を蓄積させる能力によつて特徴付けられている
ミコバクテリウムの突然変異体微生物を培養する
ことからなる式 の化合物をつくる一段階醗酵法。 ２ Ｃ−17側鎖を有するステロイドの存在下で好
気的条件下で水性栄養媒地中でＣ−17側鎖をもつ
ステロイドを選択的に減成させ醗酵液中に主生成
物として９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，17
（20）−プレグナジエン−20−カルボン酸を蓄積さ
せる能力によつて特徴付けられるミコバクテリウ
ム突然変異体を培養することからなる特許請求の
範囲１中で定義される化合物をつくる一段階醗酵
法。 ３ Ｃ−17側鎖をもつステロイドの存在下好気的
条件下で水性栄養媒地中でミコバクテリウムフオ
ルツイツム（Mycobacterium Fortuitum）
NRRLB−12433を培養し所望生成物を回収する
ことからなる特許請求の範囲１中で定義される化
合物をつくる一段階醗酵法。 ４ ２又はそれ以上のステロイド類の混合物の存
在下好気的条件下水性栄養素媒地中でミコバクテ
リウムフオルツイツムNRRLB−12433を培養す
ることからなる特許請求の範囲１中で定義される
化合物の製法。 ５ 上記突然変異体微生物を２又はそれ以上のス
テロイドの混合物の存在下で好気的条件下で水性
栄養媒地中で培養する場合の特許請求の範囲１又
は２による方法。 ６ 上記ステロイドがシストステロール、コレス
テロール、スチグマステロール、及びカンペステ
ロールからなる群から選ばれる場合の特許請求の
範囲１，２又は３による方法。 ７ 上記ステロイド混合物がシトステロール、コ
レステロール、スチグマステロール及びカンペス
テロールからなる群から選ばれる場合の特許請求
の範囲５による方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/262,018 US4429041A (en) | 1981-05-11 | 1981-05-11 | Process of producing 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadiene-20-carboxylic acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57198099A JPS57198099A (en) | 1982-12-04 |
| JPH0157960B2 true JPH0157960B2 (ja) | 1989-12-08 |
Family
ID=22995838
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57076752A Granted JPS57198099A (en) | 1981-05-11 | 1982-05-10 | Conversion of steroid |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4429041A (ja) |
| JP (1) | JPS57198099A (ja) |
| CH (1) | CH650803A5 (ja) |
| DD (1) | DD202308A5 (ja) |
| DE (1) | DE3215065A1 (ja) |
| FR (1) | FR2505360A1 (ja) |
| GB (1) | GB2098218B (ja) |
| HU (1) | HU189135B (ja) |
| IE (1) | IE53238B1 (ja) |
| IT (1) | IT1189273B (ja) |
| NL (1) | NL8201874A (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4425429A (en) * | 1981-07-24 | 1984-01-10 | The Upjohn Company | Composition of matter and process |
| US4755463A (en) * | 1982-05-25 | 1988-07-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| US4444884A (en) * | 1982-05-25 | 1984-04-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| IL94272A (en) * | 1989-05-11 | 1994-04-12 | Richter Gedeon Vegyeszet | 9ALPHA-hydroxy-3-oxo-4,24(25)-stigmastadien-26-oicacid derivatives, a process for preparating same and pharmaceutical compositions containing same |
| ATE190622T1 (de) * | 1990-08-18 | 2000-04-15 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von 20-methyl-5,7- pregnadien-3$g(b),21-diol-derivativen |
| USD524604S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-07-11 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
| USD515873S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-02-28 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
| USD517372S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-03-21 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4035236A (en) | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| US4029549A (en) | 1976-03-26 | 1977-06-14 | The Upjohn Company | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum |
| US4214051A (en) * | 1977-10-21 | 1980-07-22 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester |
| US4255344A (en) * | 1978-11-08 | 1981-03-10 | Mitsubishi Chemical Industries, Limited | 9-α-Hydroxy steroids |
-
1981
- 1981-05-11 US US06/262,018 patent/US4429041A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-04-20 GB GB8211334A patent/GB2098218B/en not_active Expired
- 1982-04-22 DE DE19823215065 patent/DE3215065A1/de active Granted
- 1982-04-29 CH CH2628/82A patent/CH650803A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-07 NL NL8201874A patent/NL8201874A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-05-10 HU HU821456A patent/HU189135B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-05-10 IE IE1109/82A patent/IE53238B1/en unknown
- 1982-05-10 JP JP57076752A patent/JPS57198099A/ja active Granted
- 1982-05-10 IT IT48374/82A patent/IT1189273B/it active
- 1982-05-10 FR FR8208077A patent/FR2505360A1/fr active Granted
- 1982-05-10 DD DD82239720A patent/DD202308A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE821109L (en) | 1982-11-11 |
| HU189135B (en) | 1986-06-30 |
| DE3215065C2 (ja) | 1989-11-30 |
| DD202308A5 (de) | 1983-09-07 |
| IT1189273B (it) | 1988-02-04 |
| IT8248374A0 (it) | 1982-05-10 |
| US4429041A (en) | 1984-01-31 |
| FR2505360B1 (ja) | 1984-01-06 |
| FR2505360A1 (fr) | 1982-11-12 |
| GB2098218A (en) | 1982-11-17 |
| IT8248374A1 (it) | 1983-11-10 |
| IE53238B1 (en) | 1988-09-14 |
| GB2098218B (en) | 1985-02-27 |
| JPS57198099A (en) | 1982-12-04 |
| CH650803A5 (de) | 1985-08-15 |
| NL8201874A (nl) | 1982-12-01 |
| DE3215065A1 (de) | 1983-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4035236A (en) | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione | |
| US4029549A (en) | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum | |
| US4328315A (en) | Mycobacterium fortuitum strain | |
| JPH0157960B2 (ja) | ||
| US4293644A (en) | Process for preparing androst-4-ene-3,17-dione | |
| US4062729A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4039381A (en) | Composition of matter and process | |
| US4175006A (en) | Composition of matter and process | |
| JPS6141547B2 (ja) | ||
| US4425429A (en) | Composition of matter and process | |
| US4042459A (en) | Composition of matter and process | |
| US4358538A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4214051A (en) | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester | |
| US4405525A (en) | Composition of matter and process | |
| US4345033A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4062880A (en) | 9α-Hydroxy-bis-nor-cholanic acid | |
| US4345030A (en) | Microorganism mutant conversion of sterols to androsta-4-ene-3,17-dione | |
| US4304860A (en) | Process for the microbial transformation of steroids | |
| US4293646A (en) | Composition of matter and process | |
| US4211841A (en) | Process for microbial transformation of steroids | |
| US4097335A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4431591A (en) | 24-Nor-1,4-choladiene-3,22-dione | |
| US4177106A (en) | Process for preparing 3aα-H-4α-[3'-propanol]-7aβ-methylhexahydro-1,5-indanedione hemiketal | |
| US4423146A (en) | Composition of matter and process | |
| JPS608120B2 (ja) | 微生物による化合物の製法 |