JPH0159877B2 - - Google Patents
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- JPH0159877B2 JPH0159877B2 JP63045978A JP4597888A JPH0159877B2 JP H0159877 B2 JPH0159877 B2 JP H0159877B2 JP 63045978 A JP63045978 A JP 63045978A JP 4597888 A JP4597888 A JP 4597888A JP H0159877 B2 JPH0159877 B2 JP H0159877B2
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- alkaloids
- culture
- claviceps
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungi isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
- C12P17/183—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing an indolo[4,3-F,G]quinoleine nucleus, e.g. compound containing the lysergic acid nucleus as well as the dimeric ergot nucleus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
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- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
この発明は、次の一般式（）、
（式中、Ｒはヒドロキシメチル基である）
で表わされるクラビンアルカロイドの微生物学的
製造方法に関する。 〔従来の技術〕 製造される上記アルカロイドの内、エリモクラ
ビン（elymoclavine）（Ｒ＝ヒドロキシメチル）
が、興奮効果及び抗パーキンソン効果を有する薬
剤として、並びにプロラクチン分泌を阻害するも
のとして、まず興味深い〔B.Berde 及びO.
Schild：Ergots alkaloids and related
compounds；Handb.Exp.Pharm.、49、スプリ
ンガーフエルラーク、ベルリン（1978）〕。さら
に、エリモクラビンはリゼルゴール（lyser−
gol）合成の可能性ある出発材料であり、そして
ニセルゴリン（nicergoline）の中間体である。
アグロクラビン（Ｒ＝メチル）はエリモクラビン
の前駆体である。 クラビセプス菌株は、宿主−寄生生物相互関係
において、ライ麦上で麦角アルカロイドを生合成
することができることが知られている。クラビン
生産性クラビセプス株について、これらが死物寄
生条件下においても問題のアルカロイドを生産す
ることも知られた〔M.Abe等、J.Agric.Chem.
Soc.（日本）25、458（1952）〕。後者の方法はプラ
ントスケールの製造には使用されなかつたが、骨
格の生合成の研究のために適切な基礎を与えた
〔L.C.Vining、Can.J.Microbiol.12、915（1960）；
及びH.G.Floss、Tetrahedron32、873（1976）〕。 工業的に使用される第一の方法はG.T.Banks
等により解決された〔J.Gen.Microbiol.82、345
（1974）〕。この方法において、クラビセプス・フ
ジフオルミスが、ペンニセツム・テイポイデイウ
ム・スクレロチウム（Pennisetum typhoideum
sclerotium）から分離され、そして、反復選択に
よつて改良され、高収量株が得られた。この新株
はアグロクラビンを生産した。 そして、Rehacek等はクラビセプス・プルプレ
ア（Claviceps purpurea）の新変異株を調製し
た。１つの変異株は主としてアグロクラビンを生
産したが、他の２つの株は主としてエリモクラビ
ンを生産した。しかしながら、エリモクラビン生
産変異株の両者においてアルカロイドレベルは発
酵ブロス中300〜600μｇ／mlに過ぎなかつた〔J.
Nat.Prod.44、225（1981）〕。 ソ連特許明細書No.735010、及びPrikl.Biok.
Microbiol、16、596（1980）は、６種類の異る
アルカロイドを生産するクラビセプス・フジフオ
ルミスの天然株を開示しているが、この合計アル
カロイドレベルは1220μ／mlであり、エリモク
ラビン部分が70〜75％を占める。 S.H.Ambiket等〔Phytochem.９、1953−58
（1970）〕は、クラビセプス・プルプレア型のクラ
ビン生産株がチトクロームＰ−450を含有し、そ
のレベルがフエノバルビトンによつて増加し、同
時にこの菌株によつて生産されるアルカロイドレ
ベルが上昇することを見出した。 〔発明が解決しようとする問題点〕 発明者等は、クラビンアルカロイド類、主とし
てエリモクラビンを、高収量で、場合によつては
エリゴクラビンから容易に分離することができる
アルカロイド類と一緒に、生産することができる
方法を提供することを目的とする。 〔問題点を解決するための手段〕 グリセリン−ペプトン培地上で主たるアルカロ
イドとしてアグロクラビンを生産しそして少いア
ルカロイドとしてエリモクラビンを生産するタイ
プのクラビセプス・フジフオルミスの菌株を用い
てモデル実験が行われた〔A.Tonolo及びE.
Udvardy−Nagy、Acta.Microbiol.Acad.Sci.
Hung.15、29（1968）〕。この菌株は、1977年５月
２日に、ナシヨナルコレクシヨン オブ ミクロ
オーガニスムス、ナシヨナル インステイテユー
ト フオアパブリツク ヘルス（National
Collection of Microorganisms、National
Institute for Public Health）〔オルスツアゴス
ケツエゲスツエギユギー インテツエツ、ブタ
ペスト（Orszagos Kozegeszsegugyi Intenzet、
Budapest）に、No.00164として奇託され、その後
同一番号のもとにブタペスト条約に基く国際奇託
に移管された〔国際奇託当局：ナシヨナル・コレ
クシヨン・オブ・アグリカルチユラル・アンド・
インダストリアル・ミクロオーガニスムス
（NATIONAL COLECTION OF
AGRICULTURAL AND INDUSTRIAL
MICROORGANISMS）；宛名：POB 53ブダペ
ストＨ−1502（Ｈ−1502 Budapest POB 53）〕。
この研究により、このモデル菌株が交互酸化酵素
すなわちチトクロームＰ−450を含有し、そして
バルビツレート添加物がチトクロームＰ−450含
量及び全アルカロイド生産の両者を刺激すること
が示された。 No.00164株をバルビツレートの存在下で増殖せ
しめる場合に、コロニーの形態及び色素生成が元
株のそれとは実質上異つてくることが見出され
た。反復選択の後、これらの新しい特徴は安定化
し、そしてバルビツレートの非存在下においても
新しく選択された菌株の特徴となつた。 新変異株の生化学的性質は親株、すなわちNo.
00164株のそれと異る。新変異株の場合、増殖速
度及びポリサツカライド生成能は弱いが、アルカ
ロイド及び色素生成能はより強い。驚くべきこと
に、全アルカロイドレベル中エリモクラビンが支
配的であり、これに対して親株は主としてアグロ
クラビンを生産した。 この新規な菌株は、1981年10月15日に、ナシヨ
ナル コレクシヨン オブ ミクロオーガニスム
ス、ナシヨナル インステイテユート フオア
パブリツク ヘルス（National Collecticn of
Microorganisms、National Institute for
Public Health）〔オルスツアゴス ケツエゲス
ツエギユギーインテツエト、ブタペスト
（Orszagos Kozegeszsegugyi Intezet、
Budapest）に、No.00211として奇託され、その後
同一番号のものにブダペスト条約に基く国際奇託
に移された。 従つて、この発明は、Ｒがヒドロキシメチルで
ある一般式（）のクラビンアルカロイドの新規
な微生物学的製造方法に関し、この方法は、炭素
源、窒素源及び鉱物塩類、並びに場合によつては
他の添加物を含んで成る液体培地に、アルカロイ
ド生産菌株としてカルビセプス・フジフオルミス
変異株（奇託番号No.00211）を好気的条件下で培
養し、そして生成したアルカロイドを採取するこ
とを特徴とする。 この発明の上記の方法は、一般式（）のクラ
ビンアルカロイドを発酵生産することができるク
ラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211の生
物学的に純粋な培養物を用いて行われる。 このクラビセプス・フジフオルミス変異株No.
00211の生物学的に純粋な培養物は、クラビセプ
ス・フジフオルミスNo.00164株を、炭素源、窒素
源、鉱物塩類及び寒天、並びにチトクロームＰ−
450の生成を促進する添加物を含有する固体培地
中に培養し、そして次に新菌株No.00211を選択的
に分離することにより製造される。 新菌株はチトクロームＰ−450の生成を促進す
る添加物の存在下で得られる。この添加物はバル
ビツレート型のものであり、そして１〜10ｍモ
ル／発酵ブロスの濃度で適用される。培養物を
20℃〜28℃にて７〜21日間インキユベートし、そ
して親株コロニーから容易に区別することができ
る新株の紫色の平らな外部に拡がつたコロニーを
選択し、場合によつてはバルビツレートの存在下
又は非存在下で選択を繰り返し、そして85％以上
のエリモクラビンを生産する新変異株を分離す
る。 この発明に従えば、親株No.00164は寒天で固化
した培地に増殖する。 親株の増殖に適する培地は次の組成を有する。
製造方法に関する。 〔従来の技術〕 製造される上記アルカロイドの内、エリモクラ
ビン（elymoclavine）（Ｒ＝ヒドロキシメチル）
が、興奮効果及び抗パーキンソン効果を有する薬
剤として、並びにプロラクチン分泌を阻害するも
のとして、まず興味深い〔B.Berde 及びO.
Schild：Ergots alkaloids and related
compounds；Handb.Exp.Pharm.、49、スプリ
ンガーフエルラーク、ベルリン（1978）〕。さら
に、エリモクラビンはリゼルゴール（lyser−
gol）合成の可能性ある出発材料であり、そして
ニセルゴリン（nicergoline）の中間体である。
アグロクラビン（Ｒ＝メチル）はエリモクラビン
の前駆体である。 クラビセプス菌株は、宿主−寄生生物相互関係
において、ライ麦上で麦角アルカロイドを生合成
することができることが知られている。クラビン
生産性クラビセプス株について、これらが死物寄
生条件下においても問題のアルカロイドを生産す
ることも知られた〔M.Abe等、J.Agric.Chem.
Soc.（日本）25、458（1952）〕。後者の方法はプラ
ントスケールの製造には使用されなかつたが、骨
格の生合成の研究のために適切な基礎を与えた
〔L.C.Vining、Can.J.Microbiol.12、915（1960）；
及びH.G.Floss、Tetrahedron32、873（1976）〕。 工業的に使用される第一の方法はG.T.Banks
等により解決された〔J.Gen.Microbiol.82、345
（1974）〕。この方法において、クラビセプス・フ
ジフオルミスが、ペンニセツム・テイポイデイウ
ム・スクレロチウム（Pennisetum typhoideum
sclerotium）から分離され、そして、反復選択に
よつて改良され、高収量株が得られた。この新株
はアグロクラビンを生産した。 そして、Rehacek等はクラビセプス・プルプレ
ア（Claviceps purpurea）の新変異株を調製し
た。１つの変異株は主としてアグロクラビンを生
産したが、他の２つの株は主としてエリモクラビ
ンを生産した。しかしながら、エリモクラビン生
産変異株の両者においてアルカロイドレベルは発
酵ブロス中300〜600μｇ／mlに過ぎなかつた〔J.
Nat.Prod.44、225（1981）〕。 ソ連特許明細書No.735010、及びPrikl.Biok.
Microbiol、16、596（1980）は、６種類の異る
アルカロイドを生産するクラビセプス・フジフオ
ルミスの天然株を開示しているが、この合計アル
カロイドレベルは1220μ／mlであり、エリモク
ラビン部分が70〜75％を占める。 S.H.Ambiket等〔Phytochem.９、1953−58
（1970）〕は、クラビセプス・プルプレア型のクラ
ビン生産株がチトクロームＰ−450を含有し、そ
のレベルがフエノバルビトンによつて増加し、同
時にこの菌株によつて生産されるアルカロイドレ
ベルが上昇することを見出した。 〔発明が解決しようとする問題点〕 発明者等は、クラビンアルカロイド類、主とし
てエリモクラビンを、高収量で、場合によつては
エリゴクラビンから容易に分離することができる
アルカロイド類と一緒に、生産することができる
方法を提供することを目的とする。 〔問題点を解決するための手段〕 グリセリン−ペプトン培地上で主たるアルカロ
イドとしてアグロクラビンを生産しそして少いア
ルカロイドとしてエリモクラビンを生産するタイ
プのクラビセプス・フジフオルミスの菌株を用い
てモデル実験が行われた〔A.Tonolo及びE.
Udvardy−Nagy、Acta.Microbiol.Acad.Sci.
Hung.15、29（1968）〕。この菌株は、1977年５月
２日に、ナシヨナルコレクシヨン オブ ミクロ
オーガニスムス、ナシヨナル インステイテユー
ト フオアパブリツク ヘルス（National
Collection of Microorganisms、National
Institute for Public Health）〔オルスツアゴス
ケツエゲスツエギユギー インテツエツ、ブタ
ペスト（Orszagos Kozegeszsegugyi Intenzet、
Budapest）に、No.00164として奇託され、その後
同一番号のもとにブタペスト条約に基く国際奇託
に移管された〔国際奇託当局：ナシヨナル・コレ
クシヨン・オブ・アグリカルチユラル・アンド・
インダストリアル・ミクロオーガニスムス
（NATIONAL COLECTION OF
AGRICULTURAL AND INDUSTRIAL
MICROORGANISMS）；宛名：POB 53ブダペ
ストＨ−1502（Ｈ−1502 Budapest POB 53）〕。
この研究により、このモデル菌株が交互酸化酵素
すなわちチトクロームＰ−450を含有し、そして
バルビツレート添加物がチトクロームＰ−450含
量及び全アルカロイド生産の両者を刺激すること
が示された。 No.00164株をバルビツレートの存在下で増殖せ
しめる場合に、コロニーの形態及び色素生成が元
株のそれとは実質上異つてくることが見出され
た。反復選択の後、これらの新しい特徴は安定化
し、そしてバルビツレートの非存在下においても
新しく選択された菌株の特徴となつた。 新変異株の生化学的性質は親株、すなわちNo.
00164株のそれと異る。新変異株の場合、増殖速
度及びポリサツカライド生成能は弱いが、アルカ
ロイド及び色素生成能はより強い。驚くべきこと
に、全アルカロイドレベル中エリモクラビンが支
配的であり、これに対して親株は主としてアグロ
クラビンを生産した。 この新規な菌株は、1981年10月15日に、ナシヨ
ナル コレクシヨン オブ ミクロオーガニスム
ス、ナシヨナル インステイテユート フオア
パブリツク ヘルス（National Collecticn of
Microorganisms、National Institute for
Public Health）〔オルスツアゴス ケツエゲス
ツエギユギーインテツエト、ブタペスト
（Orszagos Kozegeszsegugyi Intezet、
Budapest）に、No.00211として奇託され、その後
同一番号のものにブダペスト条約に基く国際奇託
に移された。 従つて、この発明は、Ｒがヒドロキシメチルで
ある一般式（）のクラビンアルカロイドの新規
な微生物学的製造方法に関し、この方法は、炭素
源、窒素源及び鉱物塩類、並びに場合によつては
他の添加物を含んで成る液体培地に、アルカロイ
ド生産菌株としてカルビセプス・フジフオルミス
変異株（奇託番号No.00211）を好気的条件下で培
養し、そして生成したアルカロイドを採取するこ
とを特徴とする。 この発明の上記の方法は、一般式（）のクラ
ビンアルカロイドを発酵生産することができるク
ラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211の生
物学的に純粋な培養物を用いて行われる。 このクラビセプス・フジフオルミス変異株No.
00211の生物学的に純粋な培養物は、クラビセプ
ス・フジフオルミスNo.00164株を、炭素源、窒素
源、鉱物塩類及び寒天、並びにチトクロームＰ−
450の生成を促進する添加物を含有する固体培地
中に培養し、そして次に新菌株No.00211を選択的
に分離することにより製造される。 新菌株はチトクロームＰ−450の生成を促進す
る添加物の存在下で得られる。この添加物はバル
ビツレート型のものであり、そして１〜10ｍモ
ル／発酵ブロスの濃度で適用される。培養物を
20℃〜28℃にて７〜21日間インキユベートし、そ
して親株コロニーから容易に区別することができ
る新株の紫色の平らな外部に拡がつたコロニーを
選択し、場合によつてはバルビツレートの存在下
又は非存在下で選択を繰り返し、そして85％以上
のエリモクラビンを生産する新変異株を分離す
る。 この発明に従えば、親株No.00164は寒天で固化
した培地に増殖する。 親株の増殖に適する培地は次の組成を有する。
【表】
上記の成分の溶液のPHを水酸化ナトリウムによ
り5.2に調整し、この液を水で1000mlに稀釈し、
そして次に110℃にて30分間殺菌する。冷却後、
培地は固化する。 培地Ｂ 培地Ａについて記載した方法により、ポテト−
グルコース寒天（デイフコ）39ｇから1000mlの培
地を調製する。
り5.2に調整し、この液を水で1000mlに稀釈し、
そして次に110℃にて30分間殺菌する。冷却後、
培地は固化する。 培地Ｂ 培地Ａについて記載した方法により、ポテト−
グルコース寒天（デイフコ）39ｇから1000mlの培
地を調製する。
【表】
上記の混合物のPHを水酸化アンモニウムにより
5.5〜5.6に調製し、そして次に培地Ａについて記
載したのと同様にして１の培地を調製する。 培地Ｄ グリセリン 100ｇ ペプトン（デイフコ） 20ｇ 寒天（デイフコ） 30ｇ 上記の成分を水で1000mlに稀釈し、溶液のPHを
6.5〜6.8に調整し、次にこの溶液を110℃にて30
分間殺菌する。 培養は、上記の培地のいずれかにおいて、無菌
的好気的条件において20℃〜28℃にて、チトクロ
ームＰ−450の生成を促進する添加物、好ましく
はバルビツレート類の存在下で、実施する。バル
ビツレート型の添加物として、Ｎ−フエニルバル
ビツレート、例えばフエノバルビタール又はメチ
ルフエノバルタールを挙げることができる。培養
を７〜24日間行い、そして新菌株のコロニーを分
離する。新菌株は寒天スラント上に、又は凍結乾
燥物の形で維持することができる。 新菌株を親株から区別する主な形態学的及び生
化学的特徴を次表に示す。
5.5〜5.6に調製し、そして次に培地Ａについて記
載したのと同様にして１の培地を調製する。 培地Ｄ グリセリン 100ｇ ペプトン（デイフコ） 20ｇ 寒天（デイフコ） 30ｇ 上記の成分を水で1000mlに稀釈し、溶液のPHを
6.5〜6.8に調整し、次にこの溶液を110℃にて30
分間殺菌する。 培養は、上記の培地のいずれかにおいて、無菌
的好気的条件において20℃〜28℃にて、チトクロ
ームＰ−450の生成を促進する添加物、好ましく
はバルビツレート類の存在下で、実施する。バル
ビツレート型の添加物として、Ｎ−フエニルバル
ビツレート、例えばフエノバルビタール又はメチ
ルフエノバルタールを挙げることができる。培養
を７〜24日間行い、そして新菌株のコロニーを分
離する。新菌株は寒天スラント上に、又は凍結乾
燥物の形で維持することができる。 新菌株を親株から区別する主な形態学的及び生
化学的特徴を次表に示す。
【表】
【表】
【表】
上記の新菌株No.00211は、次のようにしてクラ
ビンアルカロイドの製造のために使用することが
できる。 発酵法において、炭素源、窒素源、鉱物塩類、
及び場合によつてはその他の添加物を含有する適
当な液体培地を使用する。 アルカロイド生産発酵においては特に次の培地
組成を用いる。 培地Ｅ マンニトール 40.0ｇ／ コハク酸 10.0ｇ／ コーンスチープリカー 2.0ｇ／ 燐酸−カリウム 1.0ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.3ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.2〜5.3に調整する。 培地Ｆ シユークロース 50.0ｇ／ つぶしたポテト 10.0ｇ／ 硝酸アンモニウム 1.0ｇ／ 燐酸−カリウム 0.25ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.25ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.4〜5.5に調整する。 培地Ｇ ソルビトール 60.0ｇ／ コハク酸 36.0ｇ／ 燐酸−カリウム 0.25ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.30ｇ／ 硫酸第一鉄 0.009ｇ／ 硫酸亜鉛 0.003ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.4〜5.5に調整する。 上記の組成物はいずれも50〜60℃において水に
溶解し、そして110℃にて30分間殺菌する。 上記の培地Ｅ、Ｆ、及びＧ、並びに寒天を加え
ないで調製した培地Ｃ、及びＤはアルカロイドの
製造のために適当である。発酵は、無菌的、好気
的条件下で、深部培養により、20℃〜28℃にて10
〜25日間、4.5〜6.0のPH範囲において行う。 次に、例によりこの発明をさらに詳細に説明す
る。但し、これによりこの発明の範囲を限定する
ものではない。 例 １ 培地Ａ上に増殖したクラビセプス・フジフオル
ミス変異株No.00211の14日目のコロニーを５mlの
生理的塩水溶液を用いて寒天表面から取り出し
た。得られた懸濁液をホモジナイズし、そして１
mlの種菌を、寒天を含まない100mlの培地Ｃを収
容した500mlのエルレンマイヤーフラスコに移し
た。この培養物を、ロータリーシエーカー
（240rpm、２cm振幅）上で24℃にて７時間インキ
ユベートした。 ４mlの得られた培養物を、100mlの前殺菌した
培地Ｃを収容した500mlのエルレンマイヤーフラ
スコに移した。この培養物を上記の条件で12日間
増殖せしめた。３日目及び５日目に、殺菌した10
％酵母エキストラクト水溶液１mlずつを培地に加
えた。 12日目の培地中乾燥菌体量は18ｇ／であつ
た。ベージユ色〜紫色の菌糸を培地から分離し
た。液中の全アルカロイド含量は、エリモクラ
ビン標準を用いるvan Urk試薬によれば、1300μ
ｇ／mlであつた。培地中のエリモクラビン及びア
グロクラビンを次のようにして測定した。ホモジ
ナイズした20mlの培養物を、PH９において、クロ
ロホルム／イソプロパノール（４：１）混合物40
mlにより抽出した。10mlの有機相を減圧下で蒸発
乾燥した。残渣をクロロホルム／メタノール
（１：１）混合物0.5ml中に溶解した。20μの溶
液を、DC Alufolin Kieselgel60F254（メルク
Art.5554）吸着材、及びクロロホルム／エタノー
ル（４：１）混合展開剤を用いる薄層クロマトグ
ラフイー（TLC）に付した。スポツトをUV光に
より254nｍにて検出した。エリモクラビン（Rf
＝0.20）及びアグロクラビン（Rf＝0.30）を、メ
タノール／酒石酸（１：１）混合物中283nｍに
おける分光光度法により測定した。エリモクラビ
ン含量が1150μｇ／mlであり、そしてアグロクラ
ビンレベルは55μｇ／mlであつた。 例 ２ クラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211
の凍結乾燥コロニーを２mlの生理的塩溶液に懸濁
した。ホモジナイズした懸濁液を、100mlの前殺
菌した培地Ｅを収容した500mlのエルレンマイヤ
ーフラスコに移した。この培養物を例１に記載し
たのと同様の条件下で７日間増殖せしめた。 ２×２mlの得られた培養物を、100mlの培地Ｇ
を収容する500mlのエルレンマイヤーフラスコ２
本に移した。培養物を24℃にて３日間振とうしな
がら増殖せしめた。得られた種菌を、５の殺菌
培地Ｇを収容した10のガラス製フアーメンター
に移した。この培養物を、通気（0.5／／分）
及び撹拌（430r.p.m.）のもとで24℃にて12時間
増殖せしめた。必要に応じて、0.5ml／の殺菌
したStruktol SB 2020消泡剤を加えた。 発酵の終点において、培養液は16ｇ／の乾燥
菌体を含有していた。例１に記載した方法により
測定した全アルカロイド含量は1550μｇ／mlであ
り、この内エリモクラビンが1435μｇ／ml、アグ
ロクラビンが90μｇ／mlであつた。 例 ３ クラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211
の凍結乾燥コロニーを２mlの生理的塩溶液に懸濁
し、そしてホモジナイズした懸濁液を培地Ｂ上に
接種した。培養物を24℃、暗所にて14日間インキ
ユベートした。こうして得られた種母培養物を表
面から取り出し、そして５mlの生理的塩溶液と共
にホモジナイズした。２×２mlのホモジナイズし
た培養物を100mlの培地Ｆを収容した500mlのエル
レンマイヤーフラスコ２本に移した。この培養物
を24℃にて５日間振とうし、そして次に、５の
殺菌した培地Ｃを収容した10のガラス製フアー
メンターに移した。 培養物を、24℃にて、通気（0.5／／／分）
及び撹拌（430r.p.m.）のもとで２日間増殖せし
めた。こうして得られた種母を、20ｇ／の塩化
ナトリウムを補充した殺菌した培地C110を収
容した160のステンレス鋼発酵槽に移した。 この培養物を24℃にて、通気（0.4／／分）
及び撹拌（200r.p.m.）のもとで12日間培養した。
発酵中に、殺菌したStruktol SB2020消泡剤を合
計量200ml加えた。 発酵終了液は、15ｇ／の乾燥菌体を含有して
いた。また1815μｇ／mlの全アルカロイドを含有
し、この内エリモクラビンが1630μｇ／mlであ
り、そしてアグロクラビンが240μｇ／mlであつ
た。培養液を過し、そして液中のエリモクラ
ビン及びアグロクラビンをHPLC（吸着剤：
Nucleosil 10 C18；溶離剤：アセトニトリル／
0.01M炭酸アンモニウム水溶液＝３：２；UV検
出280nｍ）で測定した。エリモクラビンは8.7分
間の保持時間で現われ、アグロクラビンのそれは
32.0分間であつた。
ビンアルカロイドの製造のために使用することが
できる。 発酵法において、炭素源、窒素源、鉱物塩類、
及び場合によつてはその他の添加物を含有する適
当な液体培地を使用する。 アルカロイド生産発酵においては特に次の培地
組成を用いる。 培地Ｅ マンニトール 40.0ｇ／ コハク酸 10.0ｇ／ コーンスチープリカー 2.0ｇ／ 燐酸−カリウム 1.0ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.3ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.2〜5.3に調整する。 培地Ｆ シユークロース 50.0ｇ／ つぶしたポテト 10.0ｇ／ 硝酸アンモニウム 1.0ｇ／ 燐酸−カリウム 0.25ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.25ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.4〜5.5に調整する。 培地Ｇ ソルビトール 60.0ｇ／ コハク酸 36.0ｇ／ 燐酸−カリウム 0.25ｇ／ 硫酸マグネシウム 0.30ｇ／ 硫酸第一鉄 0.009ｇ／ 硫酸亜鉛 0.003ｇ／ 上記成分の溶液のPHを水酸化アンモニウムによ
り5.4〜5.5に調整する。 上記の組成物はいずれも50〜60℃において水に
溶解し、そして110℃にて30分間殺菌する。 上記の培地Ｅ、Ｆ、及びＧ、並びに寒天を加え
ないで調製した培地Ｃ、及びＤはアルカロイドの
製造のために適当である。発酵は、無菌的、好気
的条件下で、深部培養により、20℃〜28℃にて10
〜25日間、4.5〜6.0のPH範囲において行う。 次に、例によりこの発明をさらに詳細に説明す
る。但し、これによりこの発明の範囲を限定する
ものではない。 例 １ 培地Ａ上に増殖したクラビセプス・フジフオル
ミス変異株No.00211の14日目のコロニーを５mlの
生理的塩水溶液を用いて寒天表面から取り出し
た。得られた懸濁液をホモジナイズし、そして１
mlの種菌を、寒天を含まない100mlの培地Ｃを収
容した500mlのエルレンマイヤーフラスコに移し
た。この培養物を、ロータリーシエーカー
（240rpm、２cm振幅）上で24℃にて７時間インキ
ユベートした。 ４mlの得られた培養物を、100mlの前殺菌した
培地Ｃを収容した500mlのエルレンマイヤーフラ
スコに移した。この培養物を上記の条件で12日間
増殖せしめた。３日目及び５日目に、殺菌した10
％酵母エキストラクト水溶液１mlずつを培地に加
えた。 12日目の培地中乾燥菌体量は18ｇ／であつ
た。ベージユ色〜紫色の菌糸を培地から分離し
た。液中の全アルカロイド含量は、エリモクラ
ビン標準を用いるvan Urk試薬によれば、1300μ
ｇ／mlであつた。培地中のエリモクラビン及びア
グロクラビンを次のようにして測定した。ホモジ
ナイズした20mlの培養物を、PH９において、クロ
ロホルム／イソプロパノール（４：１）混合物40
mlにより抽出した。10mlの有機相を減圧下で蒸発
乾燥した。残渣をクロロホルム／メタノール
（１：１）混合物0.5ml中に溶解した。20μの溶
液を、DC Alufolin Kieselgel60F254（メルク
Art.5554）吸着材、及びクロロホルム／エタノー
ル（４：１）混合展開剤を用いる薄層クロマトグ
ラフイー（TLC）に付した。スポツトをUV光に
より254nｍにて検出した。エリモクラビン（Rf
＝0.20）及びアグロクラビン（Rf＝0.30）を、メ
タノール／酒石酸（１：１）混合物中283nｍに
おける分光光度法により測定した。エリモクラビ
ン含量が1150μｇ／mlであり、そしてアグロクラ
ビンレベルは55μｇ／mlであつた。 例 ２ クラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211
の凍結乾燥コロニーを２mlの生理的塩溶液に懸濁
した。ホモジナイズした懸濁液を、100mlの前殺
菌した培地Ｅを収容した500mlのエルレンマイヤ
ーフラスコに移した。この培養物を例１に記載し
たのと同様の条件下で７日間増殖せしめた。 ２×２mlの得られた培養物を、100mlの培地Ｇ
を収容する500mlのエルレンマイヤーフラスコ２
本に移した。培養物を24℃にて３日間振とうしな
がら増殖せしめた。得られた種菌を、５の殺菌
培地Ｇを収容した10のガラス製フアーメンター
に移した。この培養物を、通気（0.5／／分）
及び撹拌（430r.p.m.）のもとで24℃にて12時間
増殖せしめた。必要に応じて、0.5ml／の殺菌
したStruktol SB 2020消泡剤を加えた。 発酵の終点において、培養液は16ｇ／の乾燥
菌体を含有していた。例１に記載した方法により
測定した全アルカロイド含量は1550μｇ／mlであ
り、この内エリモクラビンが1435μｇ／ml、アグ
ロクラビンが90μｇ／mlであつた。 例 ３ クラビセプス・フジフオルミス変異株No.00211
の凍結乾燥コロニーを２mlの生理的塩溶液に懸濁
し、そしてホモジナイズした懸濁液を培地Ｂ上に
接種した。培養物を24℃、暗所にて14日間インキ
ユベートした。こうして得られた種母培養物を表
面から取り出し、そして５mlの生理的塩溶液と共
にホモジナイズした。２×２mlのホモジナイズし
た培養物を100mlの培地Ｆを収容した500mlのエル
レンマイヤーフラスコ２本に移した。この培養物
を24℃にて５日間振とうし、そして次に、５の
殺菌した培地Ｃを収容した10のガラス製フアー
メンターに移した。 培養物を、24℃にて、通気（0.5／／／分）
及び撹拌（430r.p.m.）のもとで２日間増殖せし
めた。こうして得られた種母を、20ｇ／の塩化
ナトリウムを補充した殺菌した培地C110を収
容した160のステンレス鋼発酵槽に移した。 この培養物を24℃にて、通気（0.4／／分）
及び撹拌（200r.p.m.）のもとで12日間培養した。
発酵中に、殺菌したStruktol SB2020消泡剤を合
計量200ml加えた。 発酵終了液は、15ｇ／の乾燥菌体を含有して
いた。また1815μｇ／mlの全アルカロイドを含有
し、この内エリモクラビンが1630μｇ／mlであ
り、そしてアグロクラビンが240μｇ／mlであつ
た。培養液を過し、そして液中のエリモクラ
ビン及びアグロクラビンをHPLC（吸着剤：
Nucleosil 10 C18；溶離剤：アセトニトリル／
0.01M炭酸アンモニウム水溶液＝３：２；UV検
出280nｍ）で測定した。エリモクラビンは8.7分
間の保持時間で現われ、アグロクラビンのそれは
32.0分間であつた。
第１図はNo.00164株のコロニーの形態を示し、
そして第２図はNo.00211株のコロニーの形態を示
し、いずれも微生物の形態を表わす図面に代る写
真である。
そして第２図はNo.00211株のコロニーの形態を示
し、いずれも微生物の形態を表わす図面に代る写
真である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の一般式（） （式中、Ｒはヒドロキシメチル基である。） で表わされるクラビンアルカロイドの微生物学的
製造方法であつて、炭素源、窒素源、鉱物塩類及
び場合によつては他の添加物を含んで成る液体培
地中で、アルカロイド生産菌としてクラビセプ
ス・フジフオルミス（Claviceps fusiformis）の
変異株〔ナシヨナル・コレクシヨン・オブ・アグ
リカルチユラル・アンド・インダストリアル・ミ
クロオーガニスムス（NATIONAL
COLECTION OF AGRICULTURAL AND
INDUSTRIAL MICROORGANISMS）；寄託
番号No.00211〕を培養し、そしてアルカロイドを
採取することを特徴とする方法。 ２ 発酵を20℃〜28℃の温度、4.2〜6.0のPH範囲
において行う特許請求の範囲第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU2251/2817/83 | 1983-08-10 | ||
| HU832817A HU190141B (en) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | New process for production of clavin-type rye-smut alcaloids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63313593A JPS63313593A (ja) | 1988-12-21 |
| JPH0159877B2 true JPH0159877B2 (ja) | 1989-12-20 |
Family
ID=10961237
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59165757A Granted JPS60120997A (ja) | 1983-08-10 | 1984-08-09 | クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法 |
| JP63045978A Granted JPS63313593A (ja) | 1983-08-10 | 1988-03-01 | クラビンアルカロイドの製造方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59165757A Granted JPS60120997A (ja) | 1983-08-10 | 1984-08-09 | クラビンアルカロイド生産性微生物及びその製造方法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4618581A (ja) |
| JP (2) | JPS60120997A (ja) |
| AT (1) | AT383828B (ja) |
| BE (1) | BE900294A (ja) |
| CH (1) | CH664758A5 (ja) |
| CS (1) | CS248719B2 (ja) |
| DE (1) | DE3429573A1 (ja) |
| ES (1) | ES8604306A1 (ja) |
| FR (1) | FR2550549B1 (ja) |
| GB (1) | GB2148278B (ja) |
| HU (1) | HU190141B (ja) |
| NL (1) | NL8402466A (ja) |
| PT (1) | PT79051B (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02250747A (ja) * | 1989-03-24 | 1990-10-08 | Seiro Japan:Kk | Ｃｎｃタッピング・ドリリング・ミィリングマシン |
| CA2093422C (en) * | 1990-10-05 | 2001-04-03 | Genencor International, Inc. | DETERGENT COMPOSITIONS CONTAINING LOW CBH I CONTENT CELLULASE COMPOSITIONS |
| US20030181425A1 (en) * | 2002-03-25 | 2003-09-25 | Singh Khanuja Suman Preet | Antibiotic pharmaceutical composition with lysergol as bio-enhancer and method of treatment |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE975919C (de) * | 1951-11-02 | 1963-03-21 | Takeda Pharmaceutical Ind | Verfahren zur Gewinnung eines Mutterkornalkaloidgemisches |
| CH444175A (de) * | 1964-05-27 | 1967-09-30 | Sandoz Ag | Verfahren zur Isolierung von Ergolen-Carbonsäuren |
| HU164957B (ja) * | 1971-02-19 | 1974-05-28 | ||
| US3884762A (en) * | 1972-04-21 | 1975-05-20 | Richger Gedeon Vegyeszeti Gyar | Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids |
| GB1584464A (en) * | 1977-04-19 | 1981-02-11 | Farmaceutici Italia | Ergot alkaloids |
| JPS6234061U (ja) * | 1985-08-15 | 1987-02-28 | ||
| JPS6263775A (ja) * | 1985-09-12 | 1987-03-20 | 清水建設株式会社 | 免震ダンパ− |
-
1983
- 1983-08-10 HU HU832817A patent/HU190141B/hu not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-03 CH CH3745/84A patent/CH664758A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-03 BE BE1/11066A patent/BE900294A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-08-03 US US06/637,524 patent/US4618581A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-08-09 FR FR8412593A patent/FR2550549B1/fr not_active Expired
- 1984-08-09 AT AT0258284A patent/AT383828B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-09 JP JP59165757A patent/JPS60120997A/ja active Granted
- 1984-08-09 NL NL8402466A patent/NL8402466A/nl not_active Application Discontinuation
- 1984-08-09 PT PT79051A patent/PT79051B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-08-10 CS CS846104A patent/CS248719B2/cs unknown
- 1984-08-10 GB GB08420369A patent/GB2148278B/en not_active Expired
- 1984-08-10 DE DE19843429573 patent/DE3429573A1/de not_active Withdrawn
- 1984-08-10 ES ES535102A patent/ES8604306A1/es not_active Expired
-
1988
- 1988-03-01 JP JP63045978A patent/JPS63313593A/ja active Granted
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ACTA MICROBIOL.ACAD.SCI.HUNG=1968 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU190141B (en) | 1986-08-28 |
| GB8420369D0 (en) | 1984-09-12 |
| FR2550549B1 (fr) | 1988-03-18 |
| ES8604306A1 (es) | 1986-01-16 |
| FR2550549A1 (fr) | 1985-02-15 |
| ES535102A0 (es) | 1986-01-16 |
| CS248719B2 (en) | 1987-02-12 |
| DE3429573A1 (de) | 1985-02-28 |
| ATA258284A (de) | 1987-01-15 |
| HUT35011A (en) | 1985-05-28 |
| BE900294A (fr) | 1985-02-04 |
| JPS6357035B2 (ja) | 1988-11-10 |
| PT79051A (en) | 1984-09-01 |
| CH664758A5 (de) | 1988-03-31 |
| GB2148278B (en) | 1986-11-26 |
| PT79051B (en) | 1986-08-12 |
| US4618581A (en) | 1986-10-21 |
| JPS60120997A (ja) | 1985-06-28 |
| GB2148278A (en) | 1985-05-30 |
| JPS63313593A (ja) | 1988-12-21 |
| NL8402466A (nl) | 1985-03-01 |
| AT383828B (de) | 1987-08-25 |
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