JPH0160236B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0160236B2 JPH0160236B2 JP21569582A JP21569582A JPH0160236B2 JP H0160236 B2 JPH0160236 B2 JP H0160236B2 JP 21569582 A JP21569582 A JP 21569582A JP 21569582 A JP21569582 A JP 21569582A JP H0160236 B2 JPH0160236 B2 JP H0160236B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- isoleucine
- fluoropyruvate
- fermentation
- resistant
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−イソロイシンの製法
に関する。
に関する。
さらに詳しくコリネバクテリウム属に属し、フ
ロロピルビン酸の生育阻害に対して感受性である
微生物を用いる発酵法によるＬ−イソロイシンの
製法に関する。
ロロピルビン酸の生育阻害に対して感受性である
微生物を用いる発酵法によるＬ−イソロイシンの
製法に関する。
従来、発酵法によるＬ−イソロイシンの製造法
の主たるものとしては、ミクロコツカス・グルタ
ミカムに属するスレオニン、メチオニン、ホモセ
リンまたはロイシン要求株を用いる方法（特公昭
38−7091）、ブレビバクテリウム・フラバムのα
−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐性でかつプリ
ンまたはリジン要求性変異株を用いる方法（特開
昭49−85288）、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草
酸耐性でＯ−メチルスレオニン耐性の変異株を用
いる方法（特開昭49−93586）、ブレビバクテリウ
ム属またはコリネバクテリウム属のα−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸耐性で同時にエチオニン、
２−チアゾールアラニンおよびＳ−（２−アミノ
エチル）−Ｌ−システインのうち少なくとも１つ
の耐性の変異株を用いる方法（特開昭50−
101582）、およびコリネバクテリウム属に属し、
イソロイシンアナログに耐性でかつメチオニンま
たはリジン要求株の変異株を用いる方法特開昭51
−73188号（特願昭49−144552））、コリネバクテ
リウム属またはブレビバクテリウム属のビタミン
−Ｐ耐性の変異株（特開昭57−2687）を用いる方
法等が知られているが、まだ満足すべきものでは
ない。
の主たるものとしては、ミクロコツカス・グルタ
ミカムに属するスレオニン、メチオニン、ホモセ
リンまたはロイシン要求株を用いる方法（特公昭
38−7091）、ブレビバクテリウム・フラバムのα
−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐性でかつプリ
ンまたはリジン要求性変異株を用いる方法（特開
昭49−85288）、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草
酸耐性でＯ−メチルスレオニン耐性の変異株を用
いる方法（特開昭49−93586）、ブレビバクテリウ
ム属またはコリネバクテリウム属のα−アミノ−
β−ヒドロキシ吉草酸耐性で同時にエチオニン、
２−チアゾールアラニンおよびＳ−（２−アミノ
エチル）−Ｌ−システインのうち少なくとも１つ
の耐性の変異株を用いる方法（特開昭50−
101582）、およびコリネバクテリウム属に属し、
イソロイシンアナログに耐性でかつメチオニンま
たはリジン要求株の変異株を用いる方法特開昭51
−73188号（特願昭49−144552））、コリネバクテ
リウム属またはブレビバクテリウム属のビタミン
−Ｐ耐性の変異株（特開昭57−2687）を用いる方
法等が知られているが、まだ満足すべきものでは
ない。
本発明者らは、より優れたＬ−イソロイシン生
産菌を誘導すべく研究した結果、コリネバクテリ
ウム属に属するＬ−イソロイシン生産菌に、フロ
ロピルビン酸感受性を付与した結果、Ｌ−イソロ
イシンの蓄積が著しく増加することを見出し本発
明を完成した。
産菌を誘導すべく研究した結果、コリネバクテリ
ウム属に属するＬ−イソロイシン生産菌に、フロ
ロピルビン酸感受性を付与した結果、Ｌ−イソロ
イシンの蓄積が著しく増加することを見出し本発
明を完成した。
従来、フロロピルビン酸感受性の性質を有する
微生物変異株を用いるＬ−イソロイシンの製法は
全く知られておらず、本発明はかかる新規な知見
にもとづいて完成されたものである。
微生物変異株を用いるＬ−イソロイシンの製法は
全く知られておらず、本発明はかかる新規な知見
にもとづいて完成されたものである。
以下本発明を詳細に説明する。
本発明に使用する微生物変異株の代表例として
は、コリネバクテリウム、グルタミクムAC−Ｈ
−２をあげることができる。この変異株は、コリ
ネバクテリウム・グルタミクムの野生株FERMP
−3295から、UV照射およびNTG処理によつて
常法により誘導されたアルギニン要求性−Ｓ−
（２−アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性株SS
−39−21を親株として誘導したフロロピルビン酸
感受性の変異株であり、フロロピルビン酸感受性
を有する点で親株であるSS−39−21と明らかに
区別することができる。
は、コリネバクテリウム、グルタミクムAC−Ｈ
−２をあげることができる。この変異株は、コリ
ネバクテリウム・グルタミクムの野生株FERMP
−3295から、UV照射およびNTG処理によつて
常法により誘導されたアルギニン要求性−Ｓ−
（２−アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性株SS
−39−21を親株として誘導したフロロピルビン酸
感受性の変異株であり、フロロピルビン酸感受性
を有する点で親株であるSS−39−21と明らかに
区別することができる。
以下に上記のフロロピルビン酸感受性の誘導方
法の具体例を示す。
法の具体例を示す。
コリネバクテリウム・グルタミクムSS−39−
21（アルギニン要求性−Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性変異株）（FERM Ｐ−
6830）を常法によりNTG処理（250μｇ／ml、30
℃で30分間）した後、以下に示す最少寒天培地に
20μｇ／mlのフロロピルビン酸を添加した培地で
生育せず、かつ添加しない培地で生育できるコロ
ニーを分離した。えられた、フロロピルビン酸感
受性株30株を、Ｌ−イソロイシンの生産試験（実
施例の方法）にかけ、親株よりＬ−イソロイシン
生産性のすぐれた菌体としてAC−Ｈ−２〔アルギ
ニン要求性、Ｓ−（２−アミノエチル）−Ｌ−シス
テイン耐性、フロロピルビン酸感受性株〕
（FERM Ｐ−6831）を選択した。
21（アルギニン要求性−Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性変異株）（FERM Ｐ−
6830）を常法によりNTG処理（250μｇ／ml、30
℃で30分間）した後、以下に示す最少寒天培地に
20μｇ／mlのフロロピルビン酸を添加した培地で
生育せず、かつ添加しない培地で生育できるコロ
ニーを分離した。えられた、フロロピルビン酸感
受性株30株を、Ｌ−イソロイシンの生産試験（実
施例の方法）にかけ、親株よりＬ−イソロイシン
生産性のすぐれた菌体としてAC−Ｈ−２〔アルギ
ニン要求性、Ｓ−（２−アミノエチル）−Ｌ−シス
テイン耐性、フロロピルビン酸感受性株〕
（FERM Ｐ−6831）を選択した。
培地組成：グルコース0.5％、（NH4）2SO40.15
％、KH2PO40.15％、K2HPO40.05％、NaCl0.01
％、MgSO4・7H2O0.05％、CaCl2・2H2O1μｇ／
ml、MnCl2・4H2O7μｇ／ml、FeSO4・7H2O10μ
ｇ／ml、チアミン塩酸塩0.1μｇ／ml、ビオチン
0.03μｇ／ml、アルギニン塩酸塩0.01％、寒天1.5
％（PH7.2） これらの微生物を用いてＬ−イソロイシンを生
産せしめるには特に困難はなく、炭素源、窒素
源、無機塩類、生育因子等を含有する通常の栄養
培地を用いて常法によつて行なうことができる。
％、KH2PO40.15％、K2HPO40.05％、NaCl0.01
％、MgSO4・7H2O0.05％、CaCl2・2H2O1μｇ／
ml、MnCl2・4H2O7μｇ／ml、FeSO4・7H2O10μ
ｇ／ml、チアミン塩酸塩0.1μｇ／ml、ビオチン
0.03μｇ／ml、アルギニン塩酸塩0.01％、寒天1.5
％（PH7.2） これらの微生物を用いてＬ−イソロイシンを生
産せしめるには特に困難はなく、炭素源、窒素
源、無機塩類、生育因子等を含有する通常の栄養
培地を用いて常法によつて行なうことができる。
使用する炭素源としては、グルコース、シユー
クロース、糖密、デンプン加水分解物などの糖
類、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸、リ
ンゴ酸などの有機酸類、メタノール、エタノー
ル、プロパノール等のアルコール類、その他炭化
水素類等が使用できる。
クロース、糖密、デンプン加水分解物などの糖
類、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸、リ
ンゴ酸などの有機酸類、メタノール、エタノー
ル、プロパノール等のアルコール類、その他炭化
水素類等が使用できる。
窒素源としては、硫酸、硝酸、塩安、リン安、
尿素、アンモニアその他を使用できる。また、栄
養要求性を示す変異株の場合には、栄養物質を純
標品として、もしくはそれらを含有する天然栄養
物の形で添加することができる。
尿素、アンモニアその他を使用できる。また、栄
養要求性を示す変異株の場合には、栄養物質を純
標品として、もしくはそれらを含有する天然栄養
物の形で添加することができる。
Ｌ−イソロイシンの発酵生産のための発酵条件
としては、通気培養がよく、発酵温度は24〜37
℃、発酵日数は２〜７日間である。発酵液のPHは
５〜９の範囲内に維持されるが、PH調整には無機
あるいは有機の酸あるいはアルカリ、さらには尿
素、炭酸カルシウム、アンモニアガス等を使用す
ることができる。
としては、通気培養がよく、発酵温度は24〜37
℃、発酵日数は２〜７日間である。発酵液のPHは
５〜９の範囲内に維持されるが、PH調整には無機
あるいは有機の酸あるいはアルカリ、さらには尿
素、炭酸カルシウム、アンモニアガス等を使用す
ることができる。
発酵液からのＬ−イソロイシンの単離は、通常
イオン交換樹脂法、その他公知の方法を組合わせ
て行なわれる。
イオン交換樹脂法、その他公知の方法を組合わせ
て行なわれる。
以下に実施例を示す。
実施例 １
コリネバクテリウム・グルタミクムAC−Ｈ−
２（アルギニン要求性、Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性、フロロピルビン酸感受性
株）を、20mlの種培地（グルコース５％、酵母エ
キス１％、ペプトン１％、尿素0.3％、NaCl0.25
％、コーンステイープリカー0.5％、ビオチン
50γ／、PH7.2）を含む300ml容三角フラスコに
接種し、28℃で24時間、210rpmのロータリーシ
エーカー上で振盪培養した。この種培養液２ml
を、20mlの発酵培地を含む300ml容三角フラスコ
に接種して72時間種培養と同様の方法で培養し
た。培養終了液中のＬ−イソロイシンの蓄積量は
19.6mg／mlであつた。対照とした親株のSS−39−
21（アルギニン要求性−Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性株）のＬ−イソロイシンの
蓄積は13.8mg／mlであつた。
２（アルギニン要求性、Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性、フロロピルビン酸感受性
株）を、20mlの種培地（グルコース５％、酵母エ
キス１％、ペプトン１％、尿素0.3％、NaCl0.25
％、コーンステイープリカー0.5％、ビオチン
50γ／、PH7.2）を含む300ml容三角フラスコに
接種し、28℃で24時間、210rpmのロータリーシ
エーカー上で振盪培養した。この種培養液２ml
を、20mlの発酵培地を含む300ml容三角フラスコ
に接種して72時間種培養と同様の方法で培養し
た。培養終了液中のＬ−イソロイシンの蓄積量は
19.6mg／mlであつた。対照とした親株のSS−39−
21（アルギニン要求性−Ｓ−（２−アミノエチル）
−Ｌ−システイン耐性株）のＬ−イソロイシンの
蓄積は13.8mg／mlであつた。
発酵培地の組成は次のとおり。
糖蜜（グルコースとして）10％、コーンステイ
ープリカー0.5％、塩安２％、尿素0.2％、
KH2PO40.2％、MgSO4・7H2O0.05％、FeSO4・
7H2O0.001％、MnCl2・4H2O0.001％、CuSO4・
5H2O0.001％、CaCl2・2H2O0.001％、ZnSO4・
7H2O1mg／、NiCl21mg／、モリブデン酸ア
ンモン・4H2O1mg／、CoCl2・6H2O1mg／、
パントテン酸カルシウム10mg／、ニコチン酸１
mg／、ビオチン50γ／、アルギニン塩酸塩
0.05％（PH7.4）
ープリカー0.5％、塩安２％、尿素0.2％、
KH2PO40.2％、MgSO4・7H2O0.05％、FeSO4・
7H2O0.001％、MnCl2・4H2O0.001％、CuSO4・
5H2O0.001％、CaCl2・2H2O0.001％、ZnSO4・
7H2O1mg／、NiCl21mg／、モリブデン酸ア
ンモン・4H2O1mg／、CoCl2・6H2O1mg／、
パントテン酸カルシウム10mg／、ニコチン酸１
mg／、ビオチン50γ／、アルギニン塩酸塩
0.05％（PH7.4）
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属し、フロロピルビ
ン酸感受性を有し、かつＬ−イソロイシン生産性
を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ−
イソロイシンを生成蓄積せしめ、該培養物よりＬ
−イソロイシンを採取することを特徴とする発酵
法によるＬ−イソロイシンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21569582A JPS59106294A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21569582A JPS59106294A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59106294A JPS59106294A (ja) | 1984-06-19 |
| JPH0160236B2 true JPH0160236B2 (ja) | 1989-12-21 |
Family
ID=16676620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21569582A Granted JPS59106294A (ja) | 1982-12-09 | 1982-12-09 | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59106294A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0351446U (ja) * | 1989-09-26 | 1991-05-20 | ||
| JPH0373958U (ja) * | 1989-11-22 | 1991-07-25 |
-
1982
- 1982-12-09 JP JP21569582A patent/JPS59106294A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0351446U (ja) * | 1989-09-26 | 1991-05-20 | ||
| JPH0373958U (ja) * | 1989-11-22 | 1991-07-25 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59106294A (ja) | 1984-06-19 |
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