JPH0195773A - エイズの診断、予防、又は治療に有用な新規なｈｉｖ蛋白質及びペプチド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 来光ＨＡはエイズの診断、予防、又は治療に有用な新規
なＨＩＶ蛋白質及びペプチド類に間する。

［従来の技術］ ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ）、人Ｔ細胞リンパ趨
向性（ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）ウィルスｍ　（ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ　）、リンパ節障害関連ウィルス（ＬＡＶ
）又はＡＩＤＳ関連レトロウィルス（ＡＲＶ）は、後天
性免疫不全症（ＡＩＤＳ）の原因として確認された［ボ
ボヒック・エム（Ｐｏｐｏｖｉｃ、Ｍ、）、サルンカド
ハラン・エム・ジー（Ｓ　ａ　ｒ　ｎｇ７ｈａ−ｒａｎ
、　Ｍ、Ｇ、）、リード・イー（Ｒｅａｄ、　Ｅ、）、
及びカロ・アール・シー（Ｇａｌｌｏ、　Ｒ，Ｃ，）［
１９８４年］　５ｃｉｅｎｃｅ　２２４巻４９７−５０
０頁］。このウィルスは、０ＫＴ４”リンパ球サブセッ
トに対して向性を示す［クラララマン・デイ−（ｋｌａ
ｔｚｍａｎ、　Ｄ、）、バレ＝シノッシ０エフ（Ｂａｒ
ｒｅ、−５ｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、）、ヌゲイレ・エム
争ティー　（Ｎｕｇｅｙｒｅ、　Ｍ、Ｔ、）、ドウジェ
ット・シー（Ｄａｕｇｕｅｔ、Ｃ，）、ヴイルマー・イ
ー（Ｖｉｌｍｅｒ、　Ｅ、）、グリセリ・シー（Ｇｒｉ
ｓｃｅｌｌｉ、　Ｃ，）、ブルン＝ヴエジネ・エフ（Ｂ
ｒｕｎ−Ｖｅｚｉｎｅｔ、　Ｆ、）、ルシュウ・シー（
Ｒｏｕ２！０ＩＪＸ＋　ｃ、）、グルツクマン・ジエイ
・デイ−（Ｇｌｕｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｄ、）、シェルマ
ンΦジエイ・シー（ｃｈｅｒｍａｎｎ、　Ｊ、Ｃ，）及
びモンタニエール・エル（Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、Ｌ、
）（１９８４年）　５ｃｉｅｎｃｅ　２２５巻５９−６
３頁コ。はとんどのエイズ患者とエイズ関連複合症候群
（ＡＲＣ）患者、及び同ウィルスに感染した無症状の人
々［サルンカドハラン・エム・ジー、ボボヒック・エム
、ブラッチ・エル（Ｂｒｕｃｈ、　Ｌ、）、シャプバッ
チ・シエイ（Ｓｃｈ−ｕｐｂａｃｈ、　、ｌ）及びカロ
・アール・シー（Ｇａｌｌｏ、　Ｒ，Ｃ，）（１９８４
年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４巻５０６−５０８頁コの血
清中のＨＩＶタンパクに対する抗体は、これらの抗原に
対する抗体を検出するための免疫学を基盤とする試験の
開発を可能にした。これらの試験は、ウィルスに感染し
た人々の血液試料を調べることによって、輸血によるＨ
聞の伝播を抑えるために使用される。現在市販されてい
る診断試験は、抗原として不活性化ウィルスのタンパク
を使用する。

診断への新しい手がかりとなるほか、組換えＤＮＡは細
菌とウィルス双方に対するワクチンの開発にとって大き
な有望性をもっている［ウィルソン・ティー（ＬＪｉｌ
ｓｏｎ、　Ｔ、）［１９８４年］　Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ２巻２９−３９頁コ。組換えワクチンを発現
させるのに最も広く使用される生物は、大腸菌（Ｅ、　
ｃｏｌｔ）、Ｓ。

セレビシェ（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及び培養哺
乳類細胞であった。例えば９、手足口病［クライト・デ
イ−・ジー（Ｋｌｅｉｄ、　Ｄ、Ｇ、）、ヤンスラ・デ
イ−（Ｙａｎｓｕｒａ。

Ｄ、）、スモール・ヒー（Ｓｍａｌｌ、　Ｂ、）、ダウ
ベンコφデイ−（Ｄｏｗｂｅｎｋｏ、　Ｄ、）、ムーア
φデイ−・エム（Ｍｏｏｒｅ、　Ｄ、Ｍ、　）、ブラブ
マン・エム・ジェイ（８ｒｕｂ−ｍａｎ、　Ｍ、Ｊ、）
、マ・ンカーチャー・ピー拳デイ−（Ｍｃ−Ｋｅｒｃｈ
ｅｒ、　Ｐ、Ｄ、）、モーカン・デイ−・オー（Ｍｏｒ
−ｇａｎ、Ｄ、Ｏ，）＋ロバートソン壷ビー・工・ソチ
（Ｒｏｂｅｒｔ−ｓｏｎ、　Ｂ、Ｈ，）、及びパックラ
ッチ・エッチ・エル（Ｂｃｈｒａｃｈ、）１．Ｌ、）（
１９８１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２１４巻１１２５−１１
２９頁）コ及びマラリア［ヤング・ジエイ・エフ（Ｙｏ
ｕｎｇ。

Ｊ、Ｆ、）、ホックメイヤー・ダブリユウ・ティー（Ｈ
ｏｃｋｍｅｙｅｒ、　Ｗ、Ｔ、）、グロス・エム（Ｇｒ
ｏｓｓ、　Ｍ、）、リプレイ：バロウ・ダブリユウ（Ｒ
ｉｐｌｅｙ　Ｂａ１ｌｏｕ、Ｗ、）、ワーフ・アール・
エイ（讐１ｒｔｚ、　Ｒ，Ａ、）、トロスバ−・ジエイ
・エッチ（Ｔｒｏｓｐｅｒ、　Ｊ、１１．）、ボードイ
ンφアール・エル（Ｂｅａｕｄｏｉｎ、　Ｒ，Ｌ、）、
ホリンゾール・エム中アール（Ｈｏｌｌｉｎｄａｌｅ、
　Ｍ、Ｒ，）、ミラー・エル・エム（Ｍｉｌｌｅｒ、　
Ｌ、Ｍ、）、デイッグズ・シー・エル（Ｄｉｇｇｓ、　
Ｃ，Ｌ、）、及びローセンバーブ・エム（Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇ＋　Ｍ、）（１９８５年）　５ｃｉｅｎｃｅ　２
２８巻９５８−９６２頁］に対するサブユニットワクチ
ンは、大腸菌て合成された。他の例は、酵母でつくられ
るＢ型肝炎表面抗原［マカリーア・ダブリユウ・ジエイ
（ＭｃＡｌｅｅｒ、Ｗ、Ｊ、）、バイナク・イー・ビー
（Ｂｕｙｎａｋ、　Ｅ。

Ｂ、）、メイゲッター・アール・セット（Ｍａ　ｉ　ｇ
ｅｔｔｅｒ　、Ｒ。

Ｚ、）、ワンブラー・デイ−・イー（Ｗａｍｐｌｅｒ、
　Ｄ、Ｅ、）、ミラー・ダブリユウ・ジエイ（Ｍｉｌｌ
ｅｒ、　ＬＪ、）及びヒルマンφエム・アール（Ｈｉｌ
ｌｅｍａｎ、　Ｍ、Ｒ，Ｘ１９８４年）　Ｎａｔｕｒｅ
　３０７巻１７Ｂ−１８０頁］、及び哺乳類細胞でつく
られるヘルペスワクチン［バーマン・ピー・ダブリユウ
（Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、＆１．）、グレゴリ−争ティー
（Ｇｒｅｇｏｒｙ＋　Ｔ、）、チェース・デイ−（ｃｈ
ａｓｅ、　Ｄ、）及びラスキー−ｘルー１イ（Ｌａｓｋ
ｙ、　Ｌ、Ａ、）（１９８４年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２
７巻１４９０−１４９２頁コである。

［発明が解決しようとする課題］ 全旧ソエンベロープ又はそのタンパク類は、動物を免疫
化するために使用された。天然のｇｐ１２０［ロベイ（
Ｒｏｂｅｙ）ら（１９８６年）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ　
、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

８３巻７０２３−７０２７頁；マンューズ（Ｍａｔｔｈ
ｅｗｓ）ら、（１９８６年）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、　８３巻９７０９−９７１３頁］及び
組換えタンパク類［ラスキー（Ｌａｓｋｅｙ）ら、（１
９８６年）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３３巻２０９−２１２
頁；パトニー（Ｐ　Ｕ　ｔ　ｎ　ｅ　ｙ）ら、（１９８
６年）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４巻＋３９２−１３９５
頁コは、細胞培養基中で旧Ｖを中和できる抗体をもたら
す。

しかし、これらの免疫原はすべて、サブユニットが誘導
される元のウィルス変異型のみを中和するような抗体を
もたらす。従って、複数のウィルス変異型に対して防御
できる新規なワクチンは、複数の変異型からのサブユニ
ットを含むであろう。

ウィルスに感染した細胞から単離されたウィルスタンパ
クや組換えタンパクを使用する診断用キット又は治療剤
は、蛋白質がそこから単離されたウィルス変異型に特異
的なエピトープを含有するであろう。複数の変異型から
のタンパクを含有する試薬は、より多様なエピトープを
含有するため、いっそう広い範囲で反応するという有用
性をもっている。これは患者からの血清の選定や患者の
治療処置に有利であろう。

合成ペプチドは、製造が容易であり、構造とプレセンチ
−ジョン方式を変更できることから、ワクチンや、治療
剤、診断用試薬中の活性成分として有利である。

合成ペプチド類は、手足口病ウィルス［ピットル（Ｂｉ
ｔｔｌｅ）ら、（１９８２年）　Ｎａｔｕｒｅ　２９Ｂ
巻３０−３３頁］；ポリオウィルス［エミニ（Ｅｍｉｎ
ｉ）ら、（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ　３０５巻６９９
頁］；Ｂ型肝炎［ゲリン（Ｇｅｒｉｎ）ら、（１９８３
年）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、８０巻
２３６５−２３６９頁］；及びインフルエンザ［シャピ
ラ（Ｓｈａｐｉｒａ）ら、（１９８４年）　Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　８１巻２４６＋−２４
６５頁］に対するワクチン化に使用され成功している。

現在、エイズ用ワクチンを開発する現実的な必要性があ
る。このようなワクチンが、変異型エイズウィルスに対
してホストを免疫化するのに有効なものであれは有利で
あろう。

［課題を解決する手段］ 本発明は、エイズの診断、予防又は治療に使用できる新
規なＨＩＶタンパク及びペプチド類に関する。更に、本
発明のＨＩＶエンベロープタンパク及びペプチド類は、
旧Ｖに感染したヒトのリンパ球増殖応答を刺激するため
に使用できる。次にこれは免疫系を刺激して、このよう
なヒトのＨＩＶに応答させるものであり、従ってエンベ
ロープタンパク及びペプチド類は保護を提供し、治療価
値がある。本発明のタンパク及びペプチド類はアミノ酸
配列とそれらをコートしたＤＮＡの双方で確認される。

このため、既知の化学的合成手順や絹換えＤＮＡ手段に
よって、これらをつくることができる。

第１表は本発明の合成ペプチドの表示である。これらの
ペプチドは、ＰＢＩＩｒ［８と指定される旧Ｖタンパク
のＮ−末端領域に対して参照される。

更に詳しくは、新規なタンパク及びペプチド類は以下の
とおりである。

１　、　Ｓｕｂ　ｌと指定される１０　Ｋｄの旧Ｖ融合
タンパク。

Ｓｕｂ　ｌのＨＩＶ部分のアミノ酸配列を第２表に、Ｓ
ｕｂ１の旧Ｖ部分のＤＮＡ配列を第２Ａ表に示す。Ｓｕ
ｂ　］のアミノ酸配列を第２Ｂ表に、ＤＮＡ配列を第２
Ｃ表に示す。

２、Ｓｕｂ２と指定される＋８　Ｋｄのｌ−１１Ｖ融合
タンパク。

Ｓｕｂ　２の旧Ｖ部分のアミノ酸配列を第３表に、Ｓｕ
ｂ２のＨＩＶ部分のＤＮＡ配列を第３Ａ表に示す。Ｓｕ
ｂ　２の全アミノ酸配列を第３Ｂ表に、全ＤＮＡ配列を
第３Ｃ表に示す。

３、ＰＢ１ＲＦと指定される２７　Ｋｄの旧Ｖ融合タン
パク。

ＰＲ１ＲＦのＨＩＶ部分のアミノ酸配列を第４表に、Ｐ
Ｒ１ＲＦの旧Ｖ部分のＤＮＡ配列を第４Ａ表に示す。Ｐ
Ｂ１ＲＦの全アミノ酸配列とＤＮＡ配列をそれぞれ第４
Ｂ表と第４Ｃ表に示す。

４、ＰＢＩＭ、と指定される２８　Ｋｄの旧Ｖ融合タン
パク。

ＰＢ１ＭＮの旧Ｖ部分のアミノ酸配列を第５表に、また
ＰＢ１ＭＮの旧Ｖ部分のＤＮＡ配列を第５Ａ表に示す。

１８１Ｍ、の全アミノ酸配列とＤＮＡ配列をそれぞれ第
５Ｂ表と第５Ｃ表に示す。

５、ＰＢ１ＳＣと指定される２６　Ｋｄの旧Ｖ融合タン
パク。

ＰＢ１ＳＣのＨＩＶ部分のアミノ酸配列を第６表に、ま
たＰＢ１ＳＣの旧Ｖ部分のＤＮＡ配列を第６Ａ表に示す
。ＰＢ１６ｃの全アミノ酸配列とＤＮＡ配列をそれぞれ
第６Ｂ表と第６Ｃ表に示す。

６　、　ＰＢＩＩＪＭ、、＋２と指定される２６　Ｋｄ
（７）ＨＩＶ融合タンパク。ＦＢＩい１．ｌＪ２のＨＩ
Ｖ部分のアミノ酸配列を第７表に、Ｐ　ＢＩＷｎ、＋２
（Ｄ　ＨＩ　Ｖ部分（７）　ＤＮＡ配列を第７Ａ表に示
す。ＰＢＩｗｒ＋ｊｐの全アミノ酸配列とＤＮＡ配列を
それぞれ第７Ｂ表と第７Ｃ表に示す。

７、タンパクＣＮＢｒ１゜このタンパクは第８表に列挙
したＨＩＶ　ｅｎｖ遺伝子アミノ酸と第８Ａ表の全ＣＮ
Ｂｒ＋配列を含有している。

８、第９表に列挙されたｔｌｌＶ　ｅｎｖ遺伝子のアミ
ノ酸を含有するペプチドＮｏ、　１３１゜ ９、第１０表に列挙されたｔｌｌＶ　ｅｎｖ遺伝子のア
ミノ酸を含有するペプチドＮｏ、　１３２゜１０、第１
１表に列挙されたＨＩＶｅｎｖの遺伝子アミノ酸を含有
するペプチドＮｏ、　１３４゜１１、第１２表に列挙さ
れたＨＩＶ　ｅｎｖの遺伝子アミノ酸を含有するペプチ
ドＮｏ、　１３５゜１２、第１３表に列挙されたＨＩＶ
　ｅｎｖの遺伝子アミノ酸を含有するペプチドＮｏ、　
１３６゜１３、第１４表に列挙されたＨＩＶ　ｅｎｖの
遺伝子アミノ酸を含有するペプチドＮｏ、　１３８゜本
発明のタンパク及びペプチド類は周知の合成手順によっ
てつくることができる。その代りに、絹換えＤＮＡ手順
を用いて、これらの実在物をつくることができる。この
ような組換えＤＮＡ手順は、事実上、本発明の新規なタ
ンパク及びペプチド類を得るために最初に利用された手
順であるから、本明細書で明らかにされている。しかし
、これらの実在物がひとたび調製され、その分子が配列
決定されたなら、これらをつくる好ましい方法は、化学
合成手段によることが、当業者に明白である。

例えは、本明細書で明らかにされた分子規模のタンパク
とペプチド類を容易につくることのできる自動化された
機械が利用できる。

本発明のタンパク及びペプチド類の幾つかをつくるため
の組換えＤＮＡ手順で、ｐＲＥＶ２．２と指定される発
現ベクタープラスミドを使用した。このプラスミドは、
最初にｐＢＧｌと指定されるプラスミドから構築された
。

プラスミドＩＩＢＧ＋は大腸菌ホス）　ＭＳ３７１中で
、北部研究所（ＮＲＲＬ、合衆国イリノイ州ビオリア、
合衆国農務省）に寄託されている。これは、この寄託所
の永久保存施設内にある。大腸菌ＭＳ３７１（１１ＢＧ
＋）。

ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９０４，は１９８４年１１月１日に
寄託された。大腸菌ＭＳ３７１．ＮＲＲＬ　Ｂ−１５１
２９は、現在一般に入手可能である。（Ａ部時許寥４ｑ
２１乙’Ｉ１１に演Ｗ１ユ代両■−弁灸ＩニＸ手可ｎυ
プラスミドｐＲＥＶ２．２は大腸菌Ｊ旧０３ホスト内で
、１９８６年７月３０日にＮＲＲＬに寄託された。大腸
菌Ｊ　Ｍ　Ｉ　０３（ｐＲＥＶ２．２）は、呼び出し番
号ＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９１を受けた。ＮＲＲＬ　Ｂ−
１５９０４とＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９１は、これらを明
らかにした特許の付与によって一般に無制限に入手可能
となるであろう。

本明細書で明らかにされたその他の大腸菌菌株は以下の
ように寄託された。

大腸菌５Ｇ２０２５＋、　ＮＲＲＬ　Ｂ−１５９１８，
は１９８４年１２月１２日に寄託された。（水口特許軸
’１ＪＯＯ’ｆ＋で１１ざ忙般ト入手りＷと）大腸菌Ｃ
ＡＧ６２９（ｐＫＨ＋）、　ＮＲＲＬ　Ｂ−１８０９５
，は１９８６年７月３０日に寄託された。

この後者の寄託物は、標準技術によってホスト細胞から
プラスミドを分離することができ、このため本明細書で
明らかにされたホスト大腸菌ＣＡＧ６２９を使用する。

本培養基は、３７　ＣＦＲ１，１４及び３５１Ｊｓｃ　
１２２ノ下に権限があると特許庁長官により決定された
者に、対応する米国特許出願の係属中に、培養基が入手
できることを保証するという条件の下に寄託された。ま
た、該米国出願又はその子孫の対応特許出願が提出され
ている国々の米国以外の国の特許法で要求されるならば
、寄託物は人手できる。しかし、寄託物が人手できるか
らといって、行政行為によって付与された特許権を損わ
しめて本発明の実施する権利を構成するものではないこ
とを理解すべきである。

更に、本培養基寄託物は、ブタベスト微生物寄託条約の
規定に従って保存され、一般の人々に入手可能とされる
。すなわち、寄託物の試料提供に対する最も最近の請求
後生なくとも５年間、かつどんな場合も、寄託期日から
少なくとも３０年間か、又は培養基を開示して発行され
る特許の権利行使可能な期間中、これらの寄託物は、生
育可能で汚染されていない状態に保つために必要なあら
ゆる配慮をもって保存さる。要求を受けた寄託施設が、
寄託物の状態のために試料を供給できない場合には、寄
託者は寄託物を補充する義務を認めるものである。本培
養基寄託物の一般への人手可能性に関するすべての制限
は、これらを開示した特許の付与に際して永久に取り除
かれる。

本発明の新規なＨＩＶタンパク及びペプチドは、サツカ
ロミセス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）からの誘発可能なカラクトース
・プロモータを含有するプラスミドを使用して、この微
生物中で発現させることができる［ブローチ・シエイ・
アール（Ｂｒｏａｃｈ、　Ｊ、Ｒ，）、シー・ワイ（Ｌ
ｉ、　Ｖ、）、シー・エル・シー（Ｗｕ、　Ｌ、Ｃ，）
、及びジャヤラム・エム（ｊａｙａｒａｍ、Ｍ、）ｒ遺
伝子発現の実験操作Ｊ（１９８３年）８３頁、エム・イ
ノウニ編、アカデミツク・プレス社］。これらのプラス
ミドはＶＥｐ５１及びＹＥｐ５２［ブローチ・ジェイ・
アールら（１９８３年）コと呼はれ、大腸菌の複製開始
点、β−ラクタマーゼ遺伝子、酵母ＬＥＵ２遺伝子、２
８ｍ複製開始点、及び２μｍ円形ＲＥＰ３位置を含んで
いる。組換え遺伝子の発現は酵母ＧＡＬＩＯ遺伝子プロ
モータによって駆動される。

酵母プロモータは、カラクトース及びアルコールデヒド
ロケナーセ［ペネッツェン・シェイ・エル（Ｂｅｎｎｅ
ｔｚｅｎ、　Ｊ、１．、）、及びハル・ビー・デイ−（
Ｈａｌｌ、　Ｂ、Ｄ、Ｘｌ９８２年）Ｊ、　Ｂｉｏｌ、
　Ｃｈｅｍ、　２５７巻３０１８頁；アメシー・シー（
Ａｍｍｅｒｅｒ、　Ｇ、）ｒ酵素学の方法」（Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ　　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）（１９８３年
）１０１巻１９２頁コ、ホスホグリセレート・キナーゼ
［プリンク・アール（Ｄｅｒｙｎｃｋ、　Ｒ，）、ヒッ
ツェマンφアール・エイ（Ｈｉｔｚｅｍａｎ、　Ｒ，Ａ
、）、クレイ壷ビーΦダブリユウ（Ｇｒａｙ、　Ｐ、Ｗ
、）、ゲーテル・デイ−・ヴ−？　−（Ｇｏｅｄ−ｄｅ
ｌ、　Ｄ、Ｖ、）、「遺伝子発現の実験操作Ｊ（１９８
３年）２４７頁、エム・イノウニ編、アカデミツク・プ
レス社コ、トリオース・フォスフェート・イソメラーゼ
［アルバー・ティー（Ａｌｂｅｒ、　Ｔ、）、及びカワ
サキ・シー（１９８２年）Ｊ、Ｍｏ１ｅｃ、　ａｎｄ　
Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔ看巻４１９頁］、又はエノ
ラーゼ［イネス・エム・エイ（ｌｎｎｅｓ、Ｍ、Ａ、）
ら（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２６巻２１頁コな
どを使用できる。

本明細書で明らかにされた遺伝子は、シミアン細胞内で
発現できる。これらのタンパクをコードした遺伝子が、
オカヤマ及びハーグ［Ｏｋａｙａｍａ、　Ｈ。

ａｎｄ　Ｂｅｒｇ、　Ｐ、（１９８３年）Ｍｏｌｅｃ、
　ａｎｄ　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　３巻２８０頁コと
その参考文献に記述されたプラスミドの一つか、又はこ
れらのプラスミドで形質転換されたＣＯ５細胞にクロー
ン化されると、ＨＩＶタンパクの合成を免疫的に検出で
きる。

その他の哺乳類細胞遺伝子の発現／タンパク生産系を使
用できる。他のこのような系の例にはワクシニアウィル
ス発現系［モス・ビー（Ｍｏｓｓ、　Ｂ、）（１９８５
年）１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　６巻２４３頁
；チャクラハルティ・ニス（ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ、
　Ｓ、）、ブレッチリング・ケイ（Ｂｒｅｃｈｌｉｎｇ
、　Ｋ、）、及びモス・ビー（１９８５年）Ｍｏｌｅｃ
、　ａｎｄ　Ｃｅ１１．　　Ｂｉｏｌ、　５巻３４０３
頁コ及びねずみレトロウィルスから誘導されるベクター
類［マリガン・アール・シー（Ｍｕｌｌｉｎｇａｎ、　
Ｒ，Ｃ，）ｒ遺伝子発現の実験操作Ｊ（１９８３年）１
５５頁、エム・イノウニ編、アカデミツクブレス社コが
ある。

本発明のＨＩＶタンパク及びペプチドはＢＯＣやＦＭＯ
Ｃ［メリフィールド・アール・ビー（Ｍｅｒｒｉｆｉｅ
ｌｄ。

Ｒ，Ｂ、）（１９６３年）、１．　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅ
ｍ、　Ｓｏｃ、　８５巻２１４９頁；チャン・シー（ｃ
ｈａｎｇ、　Ｃ，）及びマイエンホーファー・シエイ（
Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、　Ｊ−）（１９７８年）Ｉｎｔ
、　、１゜Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、
　１１巻２４６頁］のような固体相ペプチド合成手法に
よって化学的に合成できる。

この技術で周知のように、タンパクのアミノ酸配列は、
ＤＮＡのヌクレオチド配列によって決定される。遺伝暗
号の重剰性のため、すなわちタンパクをつくるのに使用
されるアミノ酸のほとんどに対して一つ以上の暗号化ヌ
クレオチドトリプレット（コドン）を使用できるため、
一つの特定アミノ酸に対して異なるヌクレオチド配列が
コートできる。このため、遺伝暗号を次のように描くこ
とができる。

フェニルアラニン（Ｐｈｅ）　　　ＴＴＫロイシン（Ｌ
ｅｕ）　　　　　　　ＸＴＹイソロイシン（ｌｌｅ）　
　　　　ＡＴＭメチオニン（Ｍｅｔ）　　　　　　ＡＴ
Ｇバリン（Ｖａｌ）　　　　　　　　　ＧＴＬセリン（
Ｓｅｒ）　　　　　　　　　ＱＲＳプロリン（Ｐｒｏ）
　　　　　　　　ＣＣＬスレオニン（Ｔｈｒ）　　　　
　　ＡＣＬアラニン（Ａｌａ）　　　　　　　ＧＣＬチ
ロシン（Ｔｙｒ）　　　　　　　ＴＡＫヒスチジン（Ｈ
ｉｓ）　　　　　　ＣＡＫグルタミン（Ｇｌｎ）　　　
　　　ＣＡＪアスパラギン（Ａｓｎ）　　　　　ＡＡＫ
リシン（Ｌｙｓ）　　　　　　　　　ＡＡＪアスパラキ
ン酸（Ａｓｐ）　　　　ＧＡＫグルタミン酸（Ｇｌｕ）
　　　　　ＣＡＪシスティン（ｃｙｓ）　　　　　　Ｔ
ＧＫトリプトファン（Ｔｒｐ）　　　　ＴＧＧアルキニ
ン（Ａｒｇ）　　　　　　讐ＧＺグリシン（Ｇｌｙ）　
　　　　　　ＧＧＬ終結信号　　　　　　　　　ＴＡＪ 終結信号　　　　　　　　　ＴＧＡ 解読法：各三文字のデオキシヌクレオチドの三つ組は、
左側に５１末端、右側に３′末端をもつ伝令ＲＮＡのト
リヌクレオチドに対応する。本明細書に記載のＤＮＡは
すべて、ウラシルにはチミンを置き換えた、ｍＲＮＡの
配列に対応する配列のＤＮＡ鎖のものである。文字はデ
オキシヌクレオチド配列を形成するプリン又はピリミジ
ン塩基を示す。

Ａ＝アデニン Ｇ＝ニブアニ ン＝シトシン Ｔ二チミン ＹがＡまたはＧの場合は、Ｘ＝Ｔ又はＣ８ｙがＣまたは
Ｔの場合は、×＝Ｃ６ ×がＣの場合は、Ｙ＝Ａ、　Ｇ、　Ｃ又はＴ。

×がＴの場合は、Ｙ＝Ａ又はＧ。

ＺがＡ又はＧの場合は、Ｗ＝Ｃ又はＡ。

ＺがＣ又はＴの場合は、ψ＝Ｃ。

ＷがＣの場合は、Ｚ＝Ａ、　Ｇ、　Ｃ又はＴ。

Ｗがへの場合は、Ｚ＝Ａ又はＧ。

ＳがＡ、　Ｇ、　Ｃ又はＴの場合は、ＱＲ＝ＴＣ，又は
その代わりにＳがＴ又はＣの場合は、ＱＲ＝ＡＧ。

Ｊ＝Ａ又はＧ Ｋ＝Ｔ又はＣ Ｌ＝Ａ、　Ｔ、　Ｃ又はＧ。

Ｍ＝Ａ、　　Ｃ又はＴ。

上記は、本発明のＨＩＶタンパク及びペプチドの新規な
アミノ酸配列が、本明細書で明らかにされたもの以外の
ヌクレオチド配列によって調製できることを示す。これ
らの旧Ｖタンパク及びペプチド、又はＨＩＶの抗原活性
又は免疫原活性又は治療活性をもつその断片、の新規な
アミノ酸配列をコートした機能的に均等なヌクレオチド
配列を、既知合成手順によってつくることができる。従
って、本発明はこのような機能的に均等なヌクレオチド
配列を包含する。

このように、本発明の範囲は本明細書に記述された特定
的なヌクレオチド配列のみならず、実質的に同じＨＩＶ
抗原活性又は免疫原活性又は治療活性をもつ分子をコー
トしたすべての均等なヌクレオチド配列をも包含してい
る。

更に、本発明の範囲は明らかにされた特定的なアミノ酸
配列を含むたけてなく、特異的な旧Ｖ抗体類の形成を誘
発し、及び／又はこれらに結びつく相当な能力をもつタ
ンパク又はタンパク断片をコートした類似の配列をも含
める意図がある。

「均等」という用語は、通常の特許用語としての用法の
とおりであって、本質的に同し種類のホスト中で、実質
的に同し旧Ｖ抗原活性又は免疫原活性又は治療活性をも
った分子をつくることが本明細書で確認されているヌク
レオチド配列として実質的に役目を果たすようなヌクレ
オチド配列を指すのに用いられている。この定義の範囲
には、旧Ｖの抗原活性又は免疫原活性又は治療活性をも
ったサブ断片も含まれる。

上で明らかにされたように、微生物的な方法によって旧
Ｖタンパクをつくるために、本発明の旧Ｖの抗原活性又
は免疫原活性又は治療活性をコートしたヌクレオチド配
列を使用することは、遺伝子工学の当業者に周知である
。発現ベクターへ配列を融合し、真核生物（酵母又は哺
乳類細胞）か原核生物（細菌細胞）のホストへの形質転
換ないしトランスフェクションを行なわせるのは、他の
周知のタンパク類、例えばインスリン、インターフェロ
ン、ヒト成長ホルモン、ＩＬ−１、ＩＬ−２等をつくる
のに使用される標準手順である。本発明に従って、微生
物手段又は組織培養技術によってＨＩＶタンパク又はペ
プチドをつくるために、同様な手順又はその明白な変法
を使用できる。

本明細書で明らかにされたヌクレオチド配列は、この技
術で周知の手順により、“遺伝子機械′”によってつく
ることができる。これは、ヌクレオチド配列の開示のゆ
えに可能である。

開示された制限酵素は、ヘテスダ研究所（メリーランド
州ゲイサーズバーグ）又はニューイングランド・バイオ
ラボ（マサチューセッツ州ヒバリー）から購入できる。

酵素類は、供給者側から提供された指示に従って使用さ
れる。

プラスミドの調製とポスト生物の形質転換に使用される
種々の方法は、この技術において周知である。これらの
手順はすへて、マニアテイス・チー（−（Ｍａｎｉａｔ
ｉｓ、Ｔ、）、フリッチ・イー・エフ（Ｆｒｉ−ｔｓｃ
ｈ、　Ｅ、Ｆ、）及びサムプルツクφシエイ（Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋ。

Ｊ、）（１９８２年）「分子クローニング」（実験マニ
ュアル）コールトスプリングハーハー研究所にューヨー
ク）に記述されている。このように、ＤＮＡを微生物細
胞から抽出し、制限酵素による消化を行ない、ＤＮＡ断
片を電気泳動にかけ、プラスミドをテーリングとアニー
リングにかけ、ＤＮＡを挿入し、ＤＮＡを再結合させ、
細胞、例えは大腸菌細胞を形質転換し、プラスミドＤＮ
Ａを調製し、タンパクを電気泳動にかけ、ＤＮＡの配列
決定をするのは、当業者の技術範囲内にある。

本発明の旧Ｖタンパク又はペプチドを使用する免疫化学
的検定は、種々の形態を取りうる。好ましいタイプは固
体相免疫検定である。このタイプの検定では、ＨＩＶタ
ンパク又はペプチドは固体相に固定されて、抗原−免疫
吸着剤を形成する。免疫吸着剤は、試験しようとする試
料と一緒に培養される。適当な培養期間後、免疫吸着剤
を試料から分離し、標識つき抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体を
使用して、免疫吸着剤に結合されたヒトの抗ＨＩＶ抗体
を検出する。免疫吸着剤と結びついた標識の量を陽性・
陰性の対照群と比較すると、抗旧Ｖ抗体が存在するか存
在しないかについて評価ができる。

免疫吸着剤は、精製旧Ｖタンパク又はペプチドを固体相
に吸着又は結合させることによってつくられる。固体相
は、カラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、デキスト
ラン、又は他の材料のビーズなと、種々のものを使用で
きる。他の適した固体相は、これらの材料からつくられ
るか、これらで被覆された管又はプレートを包含する。

旧Ｖタンパク又はペプチドは、アミドやエステル結合経
由の共有結合や吸着のような技術によって、共有又は非
共有的に固体相へ結合てきる。旧Ｖタンパク又はペプチ
ドが固体相へ固定された後、固体相を動物タンパク、例
えば３χ魚ゼラチンで後被覆できる。これは免疫吸着剤
表面へのタンパクの非特異的吸着を減少させるような封
鎖タンパクを提供している。

次に免疫吸着剤を、抗旧Ｖ抗体について試験しようとす
る試料と一緒に培養する。血液検査では血漿又は血清を
使用する。血漿又は血清を正常な動物の血漿又は血清で
希釈する。希釈剤の血漿又は血清は、抗（ヒト　ＩｇＧ
）抗体源である同じ動物種に由来している。好ましい抗
（ヒトＩｇＧ）抗体はヤギの抗（ヒト１８Ｇ）抗体であ
る。このように、好ましい態様では、希釈剤はヤギの血
清又は血漿である。

培養条件、例えばｐＨと温度、また培養期間は決定的な
ものではない。これらのパラメータは定常的な実験によ
って最適化できる。概して、培養はｐＨ？−８の緩衝液
中で約４５℃、１−２時間行なわれる。

培養後、免疫吸着剤と試料を分離する。分離は、沈降又
は遠心分離のような任意の慣用の分離技術によって実施
できる。次に干渉物質を排除するために、免疫吸着剤を
洗って試料を含まないようにすることができる。

免疫吸着剤に結合されたヒト抗体を検出するには、免疫
吸着剤を標識つき抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体くトレーサー
）と−緒に培養する。一般に、抗（ヒトＩｇＧ）抗体源
として働く動物種の少量（約１χ）の血清又は血漿を含
有する標識つき抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体溶液と一緒に免
疫吸着剤を培養する。抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体は任意の
動物源から得られる。しかし、ヤギの抗（ヒトＩｇＧ）
抗体が好ましい。抗（ヒトＩｇＧ）抗体は、ヒトＩｇＧ
のＦｃ断片に対する抗体、例えはヤギの抗（ヒト１８Ｇ
）Ｆｃ抗体でありうる。

抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体又は抗（ヒ’ｐ　ＩｇＧ）Ｆｃ
を、放射性材料、例えはヨウ素１２５で；蛍光材料のよ
うな光学的標識で；又はワサヒダイコンペルオキシダー
セのような酵素で標識をつけることができる。抗ヒト抗
体をバイオタイニレート化し、標識つきアビジンを用い
て免疫吸着剤へのその結合を検出することもてきる。

標識つき抗体と共に培養後、免疫吸着剤を溶液から分離
し、免疫吸着剤と結びついた標識を評価する。標識の選
択にもよるが、評価は種々の方法で行なうことができる
。標識が放射性カンマ放出体である場合はカンマカウン
ターで、蛍光材料の場合は蛍光計で標識を検出できる。

酵素の場合には、標識検出は酵素用基質を使用して、比
色法で行なうことができる。

抗日Ｖ抗体の存在を決定するためには、免疫吸着剤に結
ひついた標識量を陽性及び陰性対照群と比較する。対照
群は、一般に試験試料と同時に処理される。陽性対照は
抗日ν抗体を含有する血清である。陰性対照は、抗日Ｖ
抗体を含有しない健康な人々からの血清である。

便宜上及び標準化のため、免疫検定実施用の試薬を検定
キラＩ・にまとめることができる。血液検査キットは、
例えは以下を包含する。

（ａ）免疫吸着剤、例えばＨＩＶタンパク又はペプチド
で被覆され　たポリスチレンビーズ；（ｂ）血清又は血
漿試料用の希釈剤、例えは正常なヤギ血清又は血漿； （ｃ）抗（ヒト　１８Ｇ）抗体、例えば約１×のヤギ血
清又は血漿を含有する緩衝水溶液中のヤキ抗（ヒトＩｇ
Ｇ）抗体； （ｄ）陽性対照、例えは新規な旧Ｖタンパク又はペプチ
ドの少なくとも一つに対する抗体を含有する血清；及び （ｅ）陰性対照、例えは新規な旧Ｖタンパク又はペプチ
ドの少なくとも一つに対する抗体を含有しない健康な人
からの保存血清。

標識が酵素の場合は、キットの追加分は酵素用基質であ
りうる。

もう一つのタイプの抗１−１１Ｖ抗体検定は抗原サンド
イッチ検定である。この検定では、抗（ヒトＩｇＧ）抗
体の代わりに標識つきＨＩＶタンパク又はペプチドを使
用して、免疫吸着剤に結合された抗日Ｖ抗体を検出する
。この検定は、原則として抗体分子の二価性に基ついて
いる。抗体の−っの結合位置が、固体相に固定された抗
原と結びつく。第二位置は標識つき抗原を結合させるの
に利用できる。

検定手順は免疫検定で述へたものと本質的に同しである
が、但し試料と一緒に培養後、免疫吸着剤を標識つき］
１１■タンパク又はペプチド溶液と一緒に培養する。こ
のタイプの検定のため、旧Ｖタンパク又はペプチドを放
射性同位元素、酵素等で標識をつけることができる。

＝５８− 第三の形式では、抗原−抗体の相互作用に干渉せずにＩ
ｇＧ分子のＦｃ切片に結合する細菌タンパクのプロティ
ンＡを標識つきトレーサーとして使用し、免疫吸着剤に
吸着された抗日Ｖ抗体を検出てきる。プロティンＡに、
放射性同位元素、酵素又は他の検出可能な種で容易に標
識をつけることができる。

ＨＩＶタンパク又はペプチドを使用する免疫化学的検定
は、丸ことのく又は破砕した）ウィルスを使用するもの
より幾つかの利点をもっている。旧Ｖタンパク又はペプ
チド類に基づく検定は、増殖する多量の感染性ウィルス
や細胞培養とウィルス生産に関連する固有の多様性に対
する懸念を軽減しよう。更に、検定は病院や診療所、血
液銀行で試験を行なう技能者がもつエイズら患の現実的
ないしは感覚的な恐れを緩和する助けになるであろう。

複数のウィルス変異型からの糾換えエンベロープタンパ
クを使用する免疫化学的検定法は、単一のＨＩＶ変異型
からのタンパク以上に多くの利点をもっている。複数の
変異型からのタンパク配列を取り入れた検定法は、さま
ざまな旧Ｖ変異型に感染した人間集団で正確に抗体を調
べる見込みが大きい。また、異なるＨＩＶ変異型タンパ
クを利用する同相酵素結合免疫吸着剤検定法（ＥＬＩＺ
Ａ）は、異なる地理的位置での優勢な血清型の決定を可
能とする。一種よりも多いＨＩＶ変異型を利用する市販
の抗体検出キットがなかったため、この決定は現在まで
不可能であった。

ＨＩＶ変異型からの絹換えタンパクのもう一つの利用は
、試験動物で変異型特異的抗血清をもたらすことである
。この抗血清は、とのウィルス変異型が個体に感染した
かを確認するための試薬を提供してくれる。現在、「ウ
ィルス型決定」はウィルス遺伝子クローニング及びシー
フェンシングによってしか行なえない。変異型特異的血
清の患者ウィルス分離体への結合は、現在人手できない
急速な検出の手段を提供している。例えば’ＢＩＴＩＩ
Ｑ、ＰＢ１ＲＦ、　ＰＢ１ＭＮ、ＰＢ１ＳＣ及びＰＢＩ
ＷＭＪ２と指定されるタンパクに対して生しさせた血清
は、臨床的分離体がどのＨＩＶ変異型に最もよく似てい
るかを決定するために、患者からのウィルス分離体を選
定するのに使用できる。この「選定」は、既知のさまざ
まな抗体−抗原結合技術によって行なうことができる。

本明細書に明らかにされた旧Ｖタンパク又はペプチドの
一つ以上、又は抗原性をもつその変異型を含むワクチン
は、この技術で周知の手順によってつくることができる
。例えば、このようなワクチンを注射液、例えは液体溶
液や懸濁液として調製できる。注射に先立って液体中の
溶液又は懸濁液とするための固体型も調製できる。任意
付加的に製剤を乳化することもてきる。活性抗原成分を
、活性成分と適合性のある薬学的に受け入れられる賦形
薬と混合てきる。適当な賦形薬の例は水、食塩水、デキ
ストロース、グリセロール、エタノール等、及びそれら
の組合わせである。更に所望により、ワクチンは少量の
湿潤剤や乳化剤、ｐＨ緩衝剤のような補助的物質や水酸
化アルミニウム又はムラミンジペプチド等の助剤を含有
できる。ペブチドの場合、ＫＬＨ等のより大きな分子へ
の結合は免疫性を強めることがある。ワクチンを注射で
、例えば皮下又は筋肉内に非経口投与するのが好都合で
ある。他の投与方式に適した追加の処方剤は、座薬、ま
たある場合には経口処方剤である。座薬用の伝統的な結
合剤と担体は、例えばポリアルキレングリコール又はト
リグリセリド類を包含する。

座薬は、約０．５ｚないし約ｌＯχ、好ましくは約１ｚ
ないし約２ｚの範囲の活性成分を含有する混合物から形
成できる。経口処方剤は、例えは製薬等級のマニトール
、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウム
サッカリン、セルロース、炭酸マグネシウム等のような
通常使用される助剤な包含できる。これらの組成物は溶
液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル剤、持続放出処方剤
、又は散剤の形を取り、約ｌＯχないし約９５ｚ１好ま
しくは約２５χないし約７０×の活性成分を含有できる
。

タンパクを中性型又は塩型としてワクチンに処方できる
。薬学的に受け入れ゛られる塩類は、（ペプチドの遊離
アミノ基で形成される）酸付加塩類と、例えは塩酸や燐
酸のような無機酸、又は酢酸、修酸、酒石酸、マンデル
酸等のような有機酸によって形成されるものを包含する
。遊離カルボキシル基で生成する塩類は、例えば水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水
酸化カルシウム、又は水酸化第二鉄のような無機塩基か
ら、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−
エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロ力イン等の
ような有機塩基からも誘導できる。

ワクチンは適量処方剤と両立できる形で、また治療上有
効で免疫原性であるような量で投与される。投与量は処
置を受ける被験者、抗体を合成する被験者の免疫系の能
力、及び望んでいる保護程度に左右される。投与される
活性成分の正確な必要量は実施者の判断に依存しており
、各個人に特有である。しかし、適した適量範囲は、−
人当たり活性成分数百マイクログラムのオーダである。

最初の投与に適した投薬量と追加投与量は可変であるが
、典型的には最初の投与に続いて１週間ないし２週間の
間隔て二度目以降の注射その他の投与を行なう。

ＨＩＶは特にエンベロープ遺伝子内において、アミノ酸
配列の変動を受けることが知られている［スダーシッチ
・ビー・アール（Ｓｔａｒｃｉｃｈ、　Ｂ、Ｒ，）（１
９８６年）Ｃｅｌｌ　４５巻６３７−６４８頁：バーン
・ビ一番エッチ（Ｈａｈｎ、　　Ｂ、１１．）（１９８
６年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３２巻１５４８−１５５３頁
］。１００以上の変異型が分子クローン化及び制限酵素
認識分析によって分析され、またこれらの幾つかはヌク
レオチド配列決定によって分析された。

これらの幾つかはＲＦ［ボボビック・エム（Ｐｏ−ｐｏ
ｖｉｃ、Ｍ、）ら、（１９８４年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２
２４巻４９７−５００頁］、ＷＭＪ−１［バーン・ビー
・エッチ（ｆｌａｈｎ、　Ｂ、ｌ（、）ら（１９８６年
）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３２巻＋５４８−１５５３頁］、
ＬＡＶ　［ウニイン＝ホブソン・ニス（Ｗａｉｎ−Ｈｏ
ｂｓｏｎ、Ｓ、）ら、（１９８５年）Ｃｅｌ１４０巻９
−１７頁］及びＡＲＶ−２［サンチェス＝ペス力ドル・
アール（５ａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｃａｄｏｒ、　Ｒ，）
ら、（，１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２７巻４８４
−４９２頁コとして知られるＨＩＶ分離体である。異な
るウィルス分離体からのＨＩＶタンパク又はペプチドを
、上で明らかにされたようにワクチン製剤に使用して、
異なるＨＩＶ分離体による感染を防ぐことができる。更
に、一つ以上のＨＩＶ分離体からの一つの組換え抗原タ
ンパクを用いてワクチン製剤をつくると、エイズに対す
る免疫が提供され、いつそうすくれた予防となる。

有機合成で得られるペプチドを変更できると、固定効率
の改良、タンパク安定性の増加、免疫原性の増加、免疫
原性の変更、毒性低下、又は複数変異の同時実施により
、診断、治療、及び予防に有利となる。例えば、アミノ
基やカルボキシル基の変更（アミノ基のカルバミル化、
トリフルオロアセチル化、又はサクシニル化；カルボキ
シル基のアセチル化）によって、正味仕込み量を増減す
るようにペプチドを変更できる。ペプチド類は、Ｄ−ア
ミノ酸の包含やペプチドの円形化等によっていっそう安
定化しうる。ペプチドの還元状態は、例えばシスチニル
基のスルホン化によって変更できる。変更されたタンパ
ク及び／又はペプチドが親化合物の実質的にすべての抗
原／抗体性状を保持している限り、本発明は本明細書に
明らかにされたタンパクとペプチドのこのようなすへて
の化学的変更を包含している。

ペプチド類はまた、一つ以上のウィルス変異型の抗原性
状を含有するように変更できる。これは、例えば手足口
病ウィルスで行なわれた。

手足口病ウィルスでは、複数の変異型が存在しており、
一つの変異型での免疫化が他の変異型に対する保護をも
たらさない点で、このウィルスは旧■に類似している。

免疫原としてのペプチド類の真の有用性は、両天然変異
型の性状をもつようにペプチドを変更することによって
、一つ以上の変異型への免疫を示すことで実証される。

このような変更ペプチドを使用して試験動物を免疫化す
ると、動物は手足ロ病つィルスＡＩＯ型及びＡ１２型に
対して保護された［ブラウン・エフ（Ｂｒｏｗｎ、　Ｆ
、）「ウィルスワクチン」ジー・ドリースマン、ジエイ
・ブロンソン、アール・ケネディ編、４９−５４頁（１
９８５年）］。

旧■の２変異型からのアミノ酸配列を含有するペプチド
で、ウィルス特異的な二つの中和性抗血清のウィルス中
和活性が阻止できることを、実施例ｌ８は示している。

このことは、二つ以上の旧Ｖ変異型の配列を含有するペ
プチド又はタンパクで、二つ以上のＨＩＶ変異型に対し
て有効な免疫応答が引き出されることを示唆している。

実施例１９は、二つのＨＩＶ分離体からのエンベロープ
タンパクによる共免疫化で、二つの旧Ｖ分離体を中和で
きる免疫応答が引き出されることを示す。このことは、
二つ以上のＨＩＶ変異型からのタンパクによる共免疫化
で、二つ以上の旧Ｖ変異型に対して有効な免疫応答が引
き出されることを示唆している。

［実施例コ 以下は、最善の態様を含めた本発明方法を例示する実施
例である。これらの実施例は限定的に考えられてはなら
ない。他に注意がなければ、溶媒混合物の割合はすべて
容量による。

実施例１　プラスミドｐＲＥＶ２．２の構築ｐＲＥＶ２
．２プラスミド発現ベクターをプラスミドｐＢＧ＋から
構築した。プラスミドｐＢＧ＋は、周知の手順、例えば
透明溶菌物／等密度勾配法等を用いて、大腸菌ホストか
ら単離できる。ｐＢＧＩのように、ｒｌＲＥＶ２．２は
大腸菌プロモーターのうしろの挿入遺伝子を発現させる
。ｐＢＧＩとｐＲＥＶ２．２との差は、次のとおりであ
る。

１、　　ｐＲＥＶ２．２はプラスミド（ｒｏｐ）タンパ
クの機能的複製を欠いている。

２−　　ｐＲＥＶ２．２はＡａｔＨ位置へ挿入されたｔ
ｒｐＡ転写ターミネータ−をもっている。この配列は過
剰発現された遺伝子の転写終結を確実にする。

３、　　ｐＲＥＶ２．２は、アンピシリンとクロラムフ
ェニコールに対する耐性を提供する遺伝子をもつが、ｐ
ＢＧＩはアンピシリンのみの耐性を提供する。

４、　　ｐＲＥＶ２．２は幾つかの制限酵素の位置をコ
ードした配列を含んでいる。

以下の手順を使用して、上に列挙された四つの相違の各
々を生じさせた。

Ｉａ、　　プラスミドｐＢＧ＋（５１１ｇ）をＮｄｅ　
Ｉて制限すると、約２１６０及び３４４０塩基対の２断
片を生した。

ｌｂ、　　Ｎｒｊｅ　Ｉの不活性化後、消化混合物から
のＤＮＡ０．１ａｇを、分子内再結合に好ましい条件下
にＴ４ＤＮＡリカーゼで処理したく標準的Ｔ４リガーセ
反応条件を使用し、反応容量２００７１１冗ニユーイン
グランド・バイオラブ、マサチューセッツ州ビバリーコ
。

３４４０塩基対の断片の分子内再結合はアンピシリン耐
性プラスミドをもたらした。再結合混合物を受容菌株の
大腸菌、１旧０３にューイングラント・バイオラブから
人手）へ形質転換し、アンピシリン耐性クローンを標準
手順によって選択した。

ｌｃ、　　ｐＢＧｌから２１６０塩基対のＮｄｅ　ｌ断
片を削除した場合の生成物プラスミドｐＢＧ１ΔＮは、
アンピシリン耐性クローンからプラスミドをつくり、Ｎ
ｄｅＩと５ａｌＩての制限消化パターンを決定すること
によって選択された（生成物断片は約１７９０と１６５
の。

この削除で、プラスミドの複製を制御するｒｏｐ遺伝子
が不活性化される。

２ａ、　　次にｐＢＧＩΔＮ（５μ、ｇ）をＥｃｏＲＩ
とＢｃｌＩて消化させ、約２４５５塩基対の大きい方の
断片を単離した。

２ｂ０次の構造 Ｉ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　）（続き）ＡＣＣＣＧＧＧＡＧＣＴＣ
Ｇ　３’（続き）ＴＧＧＧＣＣＣＴＣＧＡＧＣＴＴＡＡ
　５’の二本鎖合成断片をイタクラらの手順によってつ
くった［イタクラ・ケイ（ｌｔａｋｕｒａ、　Ｋ、）、
ロッジ・ジェイ・ジェイ（Ｒｏｓｓｉ、　Ｊ、Ｊ、）及
びウォーレス・アール・ビー（Ｗａｌｌａｃｅ、　Ｒ，
Ｂ、）（１９８４年）Ａｎｎ、　Ｒｅｖ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５３巻３２３−３５６頁、及びその
中の参考文献コ。この断片はＢｃｌｌとＥｃｏＲＩの粘
着末端をもち、幾つかの制限酵素に対する認識配列を含
んでいる。

２ｃ、　　２４５５塩基対のＥｃｏＲＩ　−Ｂｃｌ　ｌ
断片０．１ａｇと合成断片０．０１ａｇを７４　ＤＮＡ
リカーセで合体させ、菌株ＪＭＩ０３のコンピテント細
胞を形質転換させた。

合成断片がｐＢＧ１ΔＮのＢｃｌＩとＥｃｏＲ１位置の
間に挿入されている組換えプラスミドを受入れた細胞は
、Ｈｐａｌ及びＥｃｏＲＩてプラスミドを消化させるこ
とによって選択された。診断断片の大きさは約２３５５
及び２００塩基対である。このプラスミドはｐＲＥＶｌ
と呼ばれる。

２ｄ、　　ｐＲＥＶＩ（５／１ｇ）をＡａｔＩＩで消化
させると、特異な開裂をする。

２ｅ、　　次の二本鎖断片 ５’　　　　ＣＧＧＴＡＣＣＡＧＣＣＣＧＣＣＴＡＡＴ
ＧＡＧＣＧＧＧＣＴＴＴＴ（続く）３’　　ＴＧＣＡＧ
ＣＣＡＴＧＧＴＣＧＧＧＣＧＧＡＴＴＡＣＴＣＧＣＣＣ
ＧＡＡＡＡ（続く）（続き）ＴＴＴＴＧＡＣＧＴ　３’ （続き）ＡＡＡＡＣ５’ を合成した。この断片はＡａｔＩＩの粘着末端をもち、
ｔｒｐＡ転写終結配列を含んでいる。

２ｆ、　　ＡａｔＵて消化させたｐＲＥＶＩ（ｏ，１ｇ
ｇ）は、Ｔ４ＤＮＡリカーセを用いて、２０７１１の容
量中で合成断片０．０１７１ｇと再結合させた。

２ｇ、　　コンピテントにされた菌株Ｊ旧０３の細胞を
形質転換し、アンピシリン耐性クローンを選択した。

２ｈ、　　選択されたコロニーから単離されたプラスミ
ドのＫｐｎ　ＩとＥｃｏＲＩによる二重制限消化物を用
いて、正しい構造を含む細胞を単離した。Ｋｐｎ■とＥ
ｃｏＲＩて生した断片の大きさは約２４７５と８０塩基
対である。このプラスミドはｐＲＥＶＩＴＴと呼ばれ、
ｔｒｐＡ転写ターミネータ−を含んでいる。

３ａ、　　上記のとおり（標準的な方法で）調製される
ｐＲＥＶＩＴＴ（５ｕ、　ｇ）をＮｄｅ　Ｉ及びＸｍｎ
１で開裂し、約８５０塩基対の断片を単離した。

３ｂ、　　クロラムフェニコール並びにアンピシリンと
テトラサイクリンに対する耐性を与える遺伝子を含有す
るプラスミドｐＢＲ３２５（ＢＲＬ、メリーラント州ケ
イサースハーグ）５１１ｇをＢｃｌ　Ｉて開裂し、末端
をクレノフボリメラーセ及びデオキシヌクレオチドでプ
ラントにした。酵素を不活性化してから、混合物をＮｄ
ｅ　Ｉて処理し、約３１８５塩基対の断片を単離した。

この断片はクロラムフェニコール及びアンピシリン耐性
の遺伝子と複製の開始点を含んでいる。

３ｃ、　　ｐＲＥＶＩＴＴからのＮｄｅ　Ｉ　−Ｘｍｎ
　Ｔ断片０．ＩμｇとｐＢＲ３２５からのＮｄｅ　Ｉ　
−Ｂｃｌ　Ｉ断片とをＴ４ＤＮＡリカーゼにより２０７
１１中で再結合し、混合物を菌株Ｊ旧０３のコンピテン
ト細胞の形質転換に使用した。アンピシリンとクロラム
フェニコール双方に耐性のある細胞を選択した。

３ｄ、　　選択されたクローンからのプラスミドのＥｃ
ｏＲＩ及びＮｄｅ　Ｉの二重消化物を使用して約２４８
０．１１４５及び４１０塩基対の断片規模を生ずるプラ
スミドを選択した。これはプラスミドｐＲＥＶＩＴＴ／
ｃｈｌと呼ばれ、アンピシリン及びクロラムフェニコー
ル双方に耐性のある遺伝子をもっている。

４ａ、　　次の二本鎖断片を合成した。

Ｍｌｕ　Ｉ　　　ＥｃｏＲＶ　Ｃ１ａｌ　Ｂａｎ）Ｉ　
Ｉ　　Ｓａｌ　Ｉ５’ＣＧＡＡＣＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡ
ＴＡＴＣＡＴＣＧＡＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣ（続　
く）３’ＧＣＴＴＧＣＧＣＡＣＣＧＧＣＴＡＴＡＧＴＡ
ＧＣＴＡＣＣＴＡＧＧＣＡＧＣＴＧ（続　く）１１ｉｎ
ｄｍ　　Ｓｍａｌ （続き）ＡＡＧＣＴＴＣＣＣＧＧＧＡＧＣＴ　３’（続
き）　ＴＴＣＧＡＡＧＧＧＣＣＣ５’この断片はプラン
ト末端と５ｓｔＩ粘着末端をもち、幾つかの制限酵素位
置に対する認識配列を含んでいる。

４ｂ、　　ｐＲＥＶＩＴＴ／ｃｈｉ（５μｇ）をＮｒｕ
　Ｉ　（Ｂｃｌ　Ｉ位置から約２０ヌクレオチドを開裂
する）及び５ｓｔＩ（複数クローン化位置内で開裂する
）によって開裂した。

大きい方の約３９９０塩基対をアカロースゲルから単離
した。

４ｃ、　　ｐＲＥＶＩＴＴ／ｃｈｌからのＮｒｕ　Ｉ　
−５ｓｔ　Ｉ断片０．１ｇｇと合成断片０．０１ｇｇを
２０μｍの容量中てＴ４ＤＮＡリカーゼによって処理し
た。

４ｄ、　　この混合物を菌株ＪＭ１０３に形質転換し、
アンピシリン耐性クローンを選択した。

４ｅ、　　プラスミドを幾つかのクローンから精製し、
Ｍｌｕ　Ｉ又はＣｌａ　Ｉて消化させて選定した。新し
い複数クローン化位置をもつ糾換えクローンは、これら
の酵素のどちらで消化させても、いずれもプラスミドを
１回だけ開裂するため、一つの断片を与える。

４ｆ、　　複数クローン化位置の配列を検証した。

これを行なうには、プラスミドをＨｐａ　ＩとＰｖｕｌ
Ｉで制限し、１３９５塩基対の断片を単離し、これをｍ
ｐ１８のＳｍａ　１位置へクローン化し、標準方法を使
用するジデオキシヌクレオチド・シーフェンシングによ
ってその配列を決定する。

４ｇ、　　このプラスミドはｐＲＥＶ２．２と呼はれる
。

実施例２　細菌発現ベクターＲＥＶ２．１の構築プラス
ミドｐＲＥＶ２．２と合成オリゴヌクレオチドを使用し
て、プラスミドｐＲＥＶ２．１を構築した。生ずるプラ
スミドを使用して、ｐＰＢＩ−Ｓｕｂ　１及びｐＰＢＩ
−Ｓｕｂ　２を構築した。

ｐＲＥＶ２．１の構築のしかたの一例は次のとおりであ
る。

１、プラスミドｐＲＥＶ２．２を制限酵素Ｎｒｕｌ及び
ＢａｍＨＩで開裂し、４　Ｋｂの断片をアガロースゲル
から単離する。

２、次の二本鎖オリゴヌクレオチドを合成する。

５’　ＣＧＡＡＣＧＣＧＴＧＧＴＣＣＧＡＴＡＴＣＡＴ
ＣＧＡＴＧ　３’３’　ＧＣＴＴＧＣＧＣＡＣＣＡＧＧ
ＣＴＡＴＡＧＴＡＧＣＴＡＣＣＴＡＧ　５’３．１と２
からの断片を２０７１１中で、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用
いて再結合させ、コンピテント大腸菌細胞に形質転換し
、クロラムフェニコール耐性集落を単離する。

４、ＮｒｕＴ部位からＢａｍＨＩ部位までの領域にわて
っており、この両制限部位を再びつくっている、２、か
らのオリゴヌクレオチドを含有するプラスミドクローン
を確認する。このプラスミドをｐＲＥＶ２゜１と呼ぶ。

実施例３　プラスミドρＰＢＩ−Ｓｕｂ　ｌの構築と発
現プラスミドｐＰＢ＋−Ｓｕｂ　ＩはＰｖｕ　１１部位
からＤｒａ１部位までの旧Ｖ　ｅｎｖ遺伝子を本質的に
コードしたＤＮＡ約１６５塩基対（ｂｐ）を含有し、こ
のプラスミドから、ｇｐ１２０エンベロープタンパクの
この部分を含有する約＋２　Ｋｄの融合タンパクが合成
される。このプラスミドを次のように構築できる。

１、プラスミドＩ］ＰＢ１［＋ＩＢをＭｌｕ　ｒ及びＤ
ｒａＩで制限し、約１６５１）ｐの断片を単離する。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．１を旧ｕｌ及びＳｍａ　Ｔ
で制限し、約４　Ｋｄの大断片をアカロースゲルから単
離する。

３．２でつくられる断片を２０７１１の容量中で、Ｔ４
ＤＮ＾リカーゼを使用してｐＲＥＶ２゜１断片と再結合
させ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株ＣＡＧ６２
９へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選定
する。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇｐ１２０断片をもつこのような形質転換体を、
適当な制限パターンによって選定する。

この組換えプラスミドを取り込んだ菌株を５０μｇ／ｍ
１アンピシリン含有の２×培地中で生育させ、細胞タン
パクの全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上での電
気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又はプローブ
として旧Ｖ感染した個人から選定された血清を使用する
ウェスタンプロット分析によって、約＋２　Ｋｄのタン
パクを視覚化できる。

実施例４　プラスミドｐＰＢ１−Ｓｕｂ　Ｉカら０）Ｈ
ＩＶＩンペローブ配列を含有する組換えタンパ クの精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置（チェマペック社、
ニューヨーク州つツズベリ）で２％培地（２％酵母エキ
ス、バクトドリブトン、カザミノ酸［デイフコ社、ミシ
ガン州デトロイト］、０．２χ−塩基性カリウム、０．
２χ二塩基性カリウム、及び０．２χ二塩基性ナトリウ
ム）１０リツトルの容量で細胞を生育させた。発酵温度
３０℃、ｐＨ６，８、また空気をｌ　ｖｖｍで提供した
。プラスミド選定に２０７１ｇ／ｍｌクロラムフェニコ
ールを提供した。典型的な細胞収量（湿潤重量）は３０
　ｇ／ｌであった。

２、細胞溶菌。組換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク
を含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍＭ
）リス−ＣＩ　（ｐＨ８，０）、５　ｍＭエチレンジア
ミンテトラ酢酸カリウム（ＫＥＤＴＡ）、５　ｍＭジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）、１５　ｍＭβ−メルカプト
エタノール、０．５χトリトンＸ−１００（ファーマシ
ア社、ニューシャーシー州ビス力タウエー）及び５　ｍ
Ｍフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）からな
る最終容量１００ｍ１中に再懸濁した。懸濁液を室温で
３０分培養した。

同量の０．１−０．１５　ｍｍカラスヒビーズ含有する
ビーズヒーター（ＢＥＡＤ−ＢＥＡＴＥＲ：バイオスペ
ック社、オクラホマ州パードルスピル〉を用いて、この
材料を溶菌化した。溶菌を室温で６分間、１分間隔で行
なった。液体をビーズから分離し、２０．０ＯＯｘＧで
２．５時間遠心分離した。上澄み液を除去し、ペレツト
を８Ｍユリア、２０ｍＭ）リス−Ｃ１（ｐＨ８，０）、
５　ｍＭＤＴＴ、　１５　ｍＭβ−メルカプトエタノー
ル、５　ｍＭ　ＰＭＳＦ及びｌ　ｍＭ　ＫＥＤＴＡから
なるｔｏｏ　ｍｌに再懸濁した。

ポリトロンホモジナイザーを使用してペレットを溶解化
し、２０，０ＯＯｘＧで２時間遠心分離にかけた。

３、ＣＭクロマトグラフィ。ＣＭソファト　フローセフ
ァロース（ファーマシア社）を充填し、８Ｍユリア、１
０　ｍＭ　４−（２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジ
ンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ６，５）、１
５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、及びＩ　ｍＭ　Ｋ
ＥＤＴＡで平衡化された１００　ｍｌカラム（２，５ｃ
ｍ　Ｘ’２０　ｃｍ）に室温で透析物を装填した。カラ
ムを平衡緩衝液２００　ｍｌで洗い、Ｏ−０，４Ｍ　Ｎ
ａＣｌの線状勾配置、０リットルでタンパクを溶離した
。ＨＩＶタンパク（＋２　Ｋｄ）は、５ＤＳ−ポリアク
リルアミドケル電気泳動ての検定のとおり、約０．２Ｍ
　ＮａＣｌで溶離した。

それ以上の精製は、Ｓｕｂ　Ｉ含有フラクションを一緒
にし、前のカラムと同じ緩衝液で平衡化されたＳ−２０
０（ファーマシア社）ゲル濾過カラムに適用することに
よって行なった。

実施例５　ブラスミＦ’　ｐＰＢＩ−Ｓｕｂ　２の構築
と発現プラスミドｐＰＢＩ−Ｓｕｂ　２はＰｖｕ　ＩＩ
部位からＳｃａ　１部位までのＨＩＶ　ｅｎｖ遺伝子を
本質的にコードしたＤＮＡ約３２０塩基対（ｂｐ）を含
有し、このプラスミドから、ｇｐ１２０エンヘロープタ
ンパクのこの部分を含有する約１８　ｋｄの融合タンパ
クが合成される。このプラスミドを次のように構築でき
る。

１、プラスミドｐＰＢ１＋＋＋ｅを旧ｕＩ及びＳｃａ　
Ｔで制限し、約３２０　ｂｐの断片を単離する。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．］をＭｌｕ　Ｉ及びＳｍａ
　Ｉで制限し、約４　Ｋｄの大断片をアカロースゲルか
ら単離する。

３．２でつくられる断片を２０１１１の容量中で、Ｔ４
ＤＮＡリガーセを使用してｐＲＥＶ２．１断片と再結合
させ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株５Ｇ２０２
５１へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選
定する。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇｐ１２０断片をもっこのような形質転換体を、
適当な制限パターンによって選定する。

この組換えプラスミドを取り込んだ菌株を５０１１ｇ／
ｍ１アンピシリン含有の２ｚ培地中で生育させ、細胞タ
ンパクの全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル」二で
の電気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又はプロ
ーブとしてＨＩＶ感染した個人から選定された血清を使
用するウェスタンプロット分析によって、約＋８　Ｋｄ
のタンパクを視覚化できる。

実施例６　プラスミドｐＰＢＩ−Ｓｕｂ　２からの旧Ｖ
エンベロープ配列を含有する組換えタンパ クの精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置で２ｚ培地１０リツ
トルの容量で細胞を生育させた。発酵温度３７℃、ｐＨ
６，８、また空気をＩ　ｖｖｍて提供した。プラスミド
選定に２０μｇ／ｍ　Ｉクロラムフェニコールを提供し
た。典型的な細胞収量（湿潤型ｊＩ）は３０　ｇ／ｌで
あった。

２、細胞溶菌。組換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク
を含有する大腸菌５０　ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍ
Ｍ）リス−ＣＩ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＫＥＤＴＡ
、　５　ｍＭ　ＤＴＴ。

１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、０．５Ｘ＋−リ
ドン×−１００、及び５　ｍＭ　ＰＭＳＦからなる最終
容量１００　ｍｌ中に再懸濁した。懸濁液を室温で３０
分培養した。

同量の０．１−０．１５　ｍｍ力ラうヒビーを含有する
ビーズヒーターを用いて、この材料な溶菌化した。

溶菌を室温で６分間、１分間隔て行なった。液体をビー
ズから分離し、２０，０ＯＯＸＧで２．５時間遠心分離
した。上澄み液を除去し、ペレットを６Ｍグアニジン塩
酸塩、２０ｍＭ）リス−ＣＩ（ｐｌ−１８，０）、５　
ｍＭ　ＤＴＴ、１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、
５　ｍＭ　ＰＭＳＦ及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡからなる１
００　ｍｌに再懸濁した。ポリトロンホモジナイザーを
使用してペレットを溶解化し、２０．０００にＧで２時
間遠心分離にかけた。

８Ｍユリア、２０　ｍＭ蟻酸ナトリウム（ｐＨ４，０）
、１ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５　ｍＭβ−メルカプトエタ
ノールからなる４リツトルに対して、上澄み液９０ｍ１
を透析した。

透析は、緩衝液を３回変えて、各回８時間以上行なった
。分子量３．５　Ｋｄのカットオフをもつスペクトロフ
ォア製透析管（Ｓ／Ｐ、イリノイ州マグローパーク）を
使用した。

３、ＣＭクロマトクラフィ。ＣＭソファト　フローセフ
ァロース（ファルマシア製）を充填し、８Ｍユリア、２
０　ｍＭ蟻酸ナトリウム（ｐ）ｌ　４．０）、１５　ｍ
Ｍβ−メルカプトエタノール、及びＩ　ｍＭ　ＮａＥＤ
ＴＡて平衡化した１００　ｍｌカラム（２，５ｃｍ　ｘ
　２０　ｃｍ）に室温で透析物を装填した。カラムを平
衡緩衝液２００　ｍｌで洗い、０−０．４　Ｍ　ＮａＣ
ｌの線状勾配置、０リットルでタンパクを溶離した。Ｈ
ＩＶタンパク（＋８　Ｋｄ）は、５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動での検定のとおり、約０．２Ｍ　Ｎ
ａＣｌで溶離した。

それ以上の精製は、Ｓｕｂ　２含有フラクシヨンを集め
て、前のカラムと同し緩衝液で平衡化したＳ−２００（
ファーマシア社）ゲル濾過カラムにかけることによって
得られる。

実施例７Ｓｕｂ２の開裂によるＣｎＢｒ１の調製ＨＩＶ
配列の３８アミノ酸を含有するＣＮＢｒ＋タンパクは、
精製されたＳｕｂ　２タンパクの化学的開裂によって得
られた。タンパクのＣＮＢｒ開裂はこの技術で周知の手
順である。この特定的な開裂を以下のように行なった。

内部メチオニン１個を含有する５ｍｇ／ｍ　Ｉ濃度のＳ
ｕｂ　２タンパクを、７０χ蟻酸と混合し、ＣＮＢｒを
メチオニンのモル当たりＣＮＢｒ１５０モルの比で添加
した。反応を、空気の不在下に、室温で一夜進めた。試
料を凍結乾燥し、高圧液体クロマトグラフィ（）ＩＰＬ
Ｃ）によって精製した。０．１χトリフルオロ酢酸を含
有するアセトニトリルの溶離剤と共にＣＩ８カラムを使
用した。Ｓｕｂ　２のＮ−ターミナスに対応するタンパ
クＣＮＢｒ１を標準手順によって単離した。

実施例８　合成ペプチド 第９表から第１４表までに挙げた幾つかの合成ペプチド
を単離した。ペプチド１３８は、ＨＩＶＩＩＩ８と旧Ｖ
ＲＦエンヘローブ配列のハイブリットである。ペプチド
類の合成は、種々の確立された手順、例えば自動化ペプ
チド合成によって行なうことができる。合成生成物を更
に幾つかの確立された分離手法、例えば逆相クロマトグ
ラフィによって精製できる。

実施例９　プラスミｌ”１）ＰＢ１ＲＦの構築と発現プ
ラスミド１）ＰＢ１ＲＦはＰｖｕＩＩ部位からＢｇｌ　
ＩＩ部位まての旧Ｖ　ｅｎｖ遺伝子を本質的にコートし
たＤＮＡ約５６５塩基対（ｂρ）を含有し、このプラス
ミドから、ｇｐ１２０エンベロープタンパクのこの部分
を含有する約２７　Ｋｄの融合タンパクが合成される。

このプラスミドを次のように構築できる。

１、第４Ａ表のＤＮＡ断片を合成する。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．２をＥｃｏＲＶ及びＢａｍ
ＨＩで制限し、約４　Ｋｄの大断片をアカロースゲルか
ら単離する。

３．１でつくられる断片を２０μｍの容量中で、Ｔ４Ｄ
ＮＡリカーセを使用してｐＲＥＶ２．２断片と再結合さ
せ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株ＣＡＧ６２９
へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選定す
る。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇｐ１２０断片をもつこのような形質転換体を、
適当な制限パターンによって選定する。

この糾換えプラスミドを取り込んた菌株を５０μｇ／ｍ
１アンピシリン含有の２χ培地中で３２℃で生育させ、
細胞タンパクの全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドケル
上での電気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又は
プローブとして旧Ｖ感染した個人から選定された血清を
使用するウェスタンプロット分析によって、約２７　Ｋ
ｄのタンパクを視覚化できる。

実施例１０　　ブラスミＦ’１ｌｌＰＢ１ＲＦからのＨ
ＩＶエンベロープ配列を含有する組換えタンパク の精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置で２ｚ培地１０リツ
トルの容量で細胞を生育させた。発酵温度３０℃、ｐＨ
６，８、また空気なＩ　ｖｖｍて提供した。プラスミド
選定は２０μｇ／ｍ　Ｉクロラムフェニコールにより提
供された。典型的な細胞収量（湿潤重量）は３０ｇ／ｌ
であった。

２、細胞溶菌。組換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク
を含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍＭ
）リス−ＣＩ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＫＥＤＴＡ、
　５　ｍＭ　ＤＴＴ。

１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、０．５χトリト
ンＸ−１００、及び５　ｍＭ　ＰＭＳＦからなる最終審
ｆｌｌｏｏｍｌ中に再懸濁した。リソチーム３００　ｍ
ｇを加え、懸濁液を室温で３０分培養した。

同量の（１，１−０，１５ｍｍカラスヒビーを含有する
と−ズビーター（ＢＥＡＤ−ＢＥＡＴＥＲ”）を用いて
、この材料な溶菌化した。溶菌を室温で６分間、１分間
隔て行なった。液体をビーズから分離し、２０，０ＯＯ
ＸＧて２．５時間遠心分離した。上澄み液を除去し、ペ
レットを８Ｍユリア、２０ｍＭ１・リス−Ｃｌ（ｐＨ８
，０）、５ｍＭ　ＤＴＴ、　１５　ｍＭβ−メルカプト
エタノール、５ｍＭＰＭＳＦ及びＩ　ｍＭ　ＫＥＤＴＡ
からなる１００　ｍｌに再懸濁した。

ポリトロンホモジナイザーを使用してペレットを溶解化
し、２０，０ＯＯｘＧて２時間遠心分離にかけた。

８Ｍユリア、２０　ｍＭ　ＨＥＰＥｓ（ｐｌ−１６，５
）、Ｉ　ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５　ｍＭβ−メルカプト
エタノールからなる４リツトルに対して、上澄み液９０
ｍ１を透析した。透析は、緩衝液を３回変えて、各回８
時間以上行なった。

分子ｆｉ３．５　Ｋｄのカットオフをもつスペクトロフ
ォア製透析管を使用した。

３、ＣＭクロマトグラフィ。ＣＭファスト　フローセフ
ァｏ−スを充填し、８ＭＬリア、１０　ｍＭ　ＨＥＰＥ
Ｓ（ｐＨ６，５）、１５　ｍＭβ−メルカプトエタノー
ル、及びＩ　ｍＭ　ＮａＥＤＴＡて平衡化した１００　
ｍｌカラム（２，５ｃｍ　ｘ２０　ｃｍ）に室温で透析
物を装填した。カラムを平衡緩衝液２００　ｍｌで洗い
、Ｏ−０，４Ｍ　ＮａＣｌの線状勾配置、０リットルで
タンパクを溶離した。旧Ｖタンパク（２６Ｋｄ）は、５
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動ての検定のとお
り、約帆２Ｍ　ＮａＣｌで溶離した。

それ以上の精製は、Ｐ８１ＲＦ含有フラクションを集め
て、前のカラムと同し緩衝液で平衡化したＳ−３００ゲ
ル濾過カラムにかけることによって得られた。

実施例１１　ブラスミ）’ｐＰＢＩＭＨの構築と発現プ
ラスミドｐＰＢＩＭ、はＢｇ１１１部位から８８１■部
位まてのｔｌｌＶＨＮｅｎｖ遺伝子を本質的にコードし
たＤＮＡ約６００塩基対（ｂｐ）を含有し、このプラス
ミドから、８ｐ１２０エンヘローブタンパクのこの部分
を含有する約２８’　Ｋｄの融合タンパクが合成される
。このプラスミドを次のように構築できる。

１、第５Ａ表のＤＮＡ断片を合成する。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．２をＢａｍＨＩテ制限スル
。

３．１でつくられる断片を２０μｍの容量中て、Ｔ４Ｄ
ＮＡリカーセを使用してｐＲＥＶ２．２断片と再結合さ
せ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株ＣＡＧ６２９
へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選定す
る。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇｌ）１２０断片をもつこのような形質転換体を
、適当な制限パターンによって選定する。

この糾換えプラスミドを取り込んた菌株を５０μｇ／ｍ
１アンピシリン含有の２×培地中で３２℃で生育させ、
細胞タンパクの全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
上での電気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又は
プローブとして旧Ｖ感染した個人から選定された血清を
使用するウェスタンプロット分析によって、約２８　Ｋ
ｄのタンパクを視覚化できる。

実施例１２　ブラスミｉ’ｐＰＢ＋□、からのＨＩＶエ
ンベロープ配列を含有する組換えタンパク の精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置で２％培地１０リツ
トルの容量で細胞を生育させた。発酵温度３０℃、ｐ＋
＋　６．８、また空気を１　ｖｖｍで提供した。プラス
ミド選定は２０μｇ／ｍ　Ｉクロラムフェニコールによ
り提供された。典型的な細胞収量（湿潤重量）は３〇ｇ
／ｌてあった。

２、細胞溶菌。組換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク
を含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍＭ
）リス−Ｃｌ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＫＥＤＴＡ、
　５　ｍＭ　ＤＴＴ。

１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、０．５％）リド
ンＸ−１００、及び５　ｍＭ　ＰＭＳＦからなる最終容
量１００　ｍｌ中に再懸濁した。リソチーム３００　ｍ
ｇを加え、懸濁液を室温で３０分培養した。

同量の０．１−０．１５　ｍｍカラスビーズを含有する
ビーズビータ−を用いて、この材料を溶菌化した。

溶菌を室温で６分間、１分間隔で行なった。液体をビー
ズから分離し、２０，０ＯＯＸＧで２．５時間遠心分離
した。上澄み液を除去し、ペレットを８Ｍユリア、２０
ｍＭ）リス−ＣＩ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＤＴＴ、
　　１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、５　ｍＭ　
ＰＭＳＦ及びｌ　ｍＭ　ＫＥＤＴＡからなる１００　ｉ
ｆに再懸濁した。ポリトロンホモジナイザーを使用して
ペレットを溶解化し、２０，０００ｘＧて２時間遠心分
離にかけた。

８Ｍユリア、２０　ｍＭ　ｔｌＥＰＥｓ（ｐＨ６，５）
、］　ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５　ｍＭβ−メルカプトエ
タノールからなる４リットルに対して、上澄み液９０ｍ
１を透析した。透析は、緩衝液を３回変えて、各回８時
間以上行なった。

分子量３．５　Ｋｄのカットオフをもつスペクトロフォ
ア製透析管を使用した。

３、ＣＭクロマトグラフィ。ＣＭファスト　フローセフ
ァロースを充填し、８Ｍユリア、１０　ｍＭ　ｔｌＥＰ
Ｅｓ（ｐＨ６，５）、１５ｍＭβ−メルカプトエタノー
ル、及び１　ｍＭ　ＫＥＤＴＡで平衡化した１００　ｍ
ｌカラム（２，５ｃｍ　ｘ２０　ｃｍ）に室温で透析物
を装填した。カラムを平衡緩衝液２００　ｍｌで洗い、
Ｏ−０，４’Ｍ　ＮａＣｌの線状勾配置。

０リツトルでタンパクを溶離した。ＨＩＶタンパク（２
８Ｋｄ）は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ての検定のとおり、約０．２Ｍ　ＮａＣｌて溶離した。

それ以上の精製は、ＰＢ１ＭＮ含有フラクションを集め
て、前のカラムと同し緩衝液で平衡化したＳ−３００ゲ
ル濾過カラムにかけることによって得られた。

実施例１３　ブラスミｌ”Ｉ］ＰＢ１ＳＣの構築と発現
プラスミドｐＰＢ１ＳＣはＰＶＵＩＩ部位からＢｇｌＩ
Ｉ部位までの旧ｖｓｃ　ｅｎＶ遺伝子を本質的にコード
したＤＮＡ約５７０塩基対（ｂｐ）を含有し、このプラ
スミドから、ｇｐ１２０エンヘローブタンパクのこの部
分を含有する約２６　Ｋｄの融合タンパクが合成される
。このプラスミドを次のように構築できる。

１、第６Ａ表のＤＮＡ断片を合成する。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．２をＥｃｏＲＶ及びＢａｍ
ＨＩて制限し、約４１ｆｄの大断片をアカロースゲルか
ら単離する。

３．１でつくられる断片を２０μｍの容量中で、Ｔ４Ｄ
ＮＡリカーゼを使用してｐＲＥＶ２．２断片と再結合さ
せ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株ＣＡＧ６２９
へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選定す
る。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇρ１２０断片をもつこのような形質転換体を、
適当な制限パターンによって選定する。

この組換えプラスミドを取り込んだ菌株を５０μｇ／ｌ
アンピシリン含有の２χ培地中で３２℃で生育させ、細
胞タンパクの全量を５Ｏ５−ポリアクリルアミドゲル上
での電気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又はプ
ローブとしてＨＩＶ感染した個人から選定された血清を
使用するウェスタンプロット分析によって、約２６　Ｋ
ｄのタンパクを視覚化できる。

実施例１４　プラスミドｐＰＢ１ＳＣからのＨＩＶエン
ベロープ配列を含有する組換えタンパク の精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置で２ｚ培地１０リツ
トルの容量で細胞を生育させた。発酵温度３０℃、ｐｕ
　６．８、また空気を］　ｖｖｍて提供した。プラスミ
ド選定は２０μｇ／ｍ　ｌクロラムフェニコールにより
提供された。典型的な細胞収量（湿潤重量）は３０ｇ／
Ｉであった。

２、細胞溶菌。組換えｌ−１１Ｖ工ンベロープ融合タン
パクを含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０
ｍＭ）リス−ＣＩ（＋）Ｈ８，０）、５　ｍＭ　ＫＥＤ
ＴＡ、　５　ｍＭ　ＤＴＴ。

１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、０．５χトリト
ン（ＴＲＩＴＯＮ）　Ｘ−１００、及び５　ｍＭ　ＰＭ
ＳＦからなる最終容量１００　ｍｌ中に再懸濁した。リ
ゾチーム３００　ｍｇを加え、懸濁液を室温で３０分培
養した。

同量の０．１−０．１５　ｍｍガラスヒビーズ含有する
ヒ−ズビーターを用いて、この材料を溶菌化した。

溶菌を室温で６分間、１分間隔で行なった。液体をビー
ズから分離し、２０，０ＯＯＸＧで２．５時間遠心分離
した。上澄み液を除去し、ペレットを８Ｍユリア、２０
ｍＭ）リス−Ｃｌ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＤＴＴ、
１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、５　ｍＭ　ＰＭ
ＳＦ及び１　ｍＭ　ＫＥＤＴＡからなる１００　ｍｌに
再懸濁した。ポリトロンホモジナイザーを使用してペレ
ットを溶解化し、２０，０００ｘＧで２時間遠心分離に
かけた。

８ＭＬリア、２０　ｍＭ　１ｌＥＰＥｓ（ｐＨ６，５）
、１　ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５　ｍＭβ−メルカプトエ
タノール及び１　ｍＭにＥＤＴＡからなる４リツトルに
対して、上澄み液９０１を透析した。ＣＭファスト　フ
ローセファロースを充填し、８Ｍユリア、１０　ｍＭ　
ＩＩＥＰＥｓ（ｐＨ６，５）、１５　ｍＭβ−メルカブ
トエタノール及びＩ　ｍＭ　ＫＥＤＴＡで平衡化した１
００１カラム（２，５ｃｍ　ｘ　２０ｃｍ）に室温で透
析物を装填した。カラムを平衡緩衝液２００　ｍｌで洗
い、〇−０，４Ｍ　ＮａＣｌの線状勾配置、０リットル
でタンパクを溶離した。ＨＩＶタンパク（２６Ｋｄ）は
、５Ｏ５−ポリアクリルアミドゲル電気泳動での検定の
とおり、約０．２Ｍ　ＮａＣｌて溶離した。

それ以上の精製は、ｐＰＢｌ、Ｃ含有フラクションを集
めて、前のカラムと同し緩衝液で平衡化したＳ−３００
ゲル濾過カラムにかけることによって得られた。

実施例１５　ブラスミＦ’ｐＰ”ＷＭＪ２の構築とそれ
からの発現 プラスミドｐＰＢ１ｗＭ、ｙｐはＨＩＶ、ＪＭＪｐ　ｅ
ｎｖ遺伝子を本質的にコードしたＤＮＡ約５６０塩基対
（ｂｐ）を含有し、このプラスミドから、ｇρ１２０エ
ンベロープタンパクのこの部分を含有する約２６　Ｋｄ
の融合タンパクが合成される。このプラスミドを次のよ
うに構築できる。

１、第７Ａ表のＤＮＡ断片を合成する。

２、プラスミＩｃ’　ｐＲＥＶ２．２をＥｃｏＲＶ及び
Ｂａｍ）ｌ　Ｉて制限し、約４　Ｋｄの大断片をアカロ
ースゲルから単離する。

３．１でつくられる断片を２０μｍの容量中で、Ｔ４Ｄ
ＮＡリカーセを使用してｐＲＥＶ２．２断片と再結合さ
せ、再結合混合物をコンピテント細胞菌株ＣＡＧ６２９
へ形質転換し、アンピシリン耐性の形質転換体を選定す
る。

４、融合タンパクをつくるのに適した方向にクローン化
されたｇｐ１２０断片をもつこのような形質転換体を、
適当な制限パターンによって選定する。

この組換えプラスミドを取り込んだ菌株を５０７１ｇ／
ｌアンピシリン含有の２ｚ培地中で３２℃で生育させ、
細胞タンパクの全量を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
上での電気泳動にかけると、クーマシーブルー染色又は
プローブとしてＨＩＶ感染した個人から選定された血清
を使用するウェスタンプロット分析によって、約２６　
Ｋｄのタンパクを視覚化できる。

実施例１６　プラスミドｐＰＢＩＷ、、ＩＪａから（７
）ＨＩＶエンベロープ配列を含有する組換えタンパ クの精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置で２χ培地中の１０
リツトルの容量で細胞を生育させた。発酵温度３０℃、
ｐＨ６，８、また空気をＩ　ｖｖｍて提供した。

プラスミド選定は２０μｇ／ｍｌクロラムフェニコール
で提供された。典型的な細胞収量（湿潤重量）は３０ｇ
／Ｉであった。

２、細胞溶菌。組換え旧Ｖエンベロープ融合タンパクを
含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍＭ）
リス−Ｃ１（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＫＥＤＴＡ、５
　ｍＭ　ＤＴＴ、１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール
、０．５％）リドンＸ−１００、及び５　ｍＭ　ＰＭＳ
Ｆからなる最終審ＪＩ１００ｍｌ中に再懸濁した。リソ
チーム３００　ｍｇを加え、ｕ、濁液を室温て３０分培
養した。

同量の０．１−０．１５　ｍｍカラスヒビーズ含有する
ビーズヒーターを用いて、この材料を溶菌化した。

溶菌を室温で６分間、１分間隔で行なった。液体をビー
ズから分離し、２０，０００ｘＧで２．５時間遠心分離
した。上澄み液を除去し、ベレットを８Ｍユリア、２０
ｍＭ）リス−ＣＩ（ｐＨ８，０）、５　ｍＭ　ＤＴＴ、
　　１５　ｍＭβ−メルカプトエタノール、５　ｍＭ　
ＰＭＳＦ及びＩ　ｍＭ　ＫＥＤＴＡからなる１００　ｍ
ｌに再懸濁した。ポリトロンホモジナイザーを使用して
ペレットを溶解化し、２０，０００ｘＧて２時間遠心分
離にかけた。

８Ｍユリア、２０　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ６，５）、
ｌ　ｍＭ　ＥＤＴＡ及び１５　ｍＭβ−メルカプトエタ
ノールからなる４リットルに対して、上澄み液９０ｍ１
を透析した。透析は、緩衝液を３回変えて、各回８時間
以上行なった。

分子量３．５　Ｋｄのカットオフをもつスペクトロフォ
ア製透析管を使用した。

３、ＣＭクロマトグラフィ。ＣＭソファト　フローセフ
ァロースを充填し、８Ｍユリア、１０　ｍＭ　）ＩＥＰ
ＥＳ（ｐＨ６，５）、１５　ｍＭβ−メルカプトエタノ
ール及び１ｍＭ　ＮａＥＤＴＡで平衡化した１００　ｍ
ｌカラム（２，５ｃｍ　ｘ　２０ｃｍ）に室温で透析物
を装填した。カラムを平衡緩衝液２００　ｍｌで洗い、
Ｏ−０，４Ｍ　ＮａＣｌの線状勾配置、０リットルでタ
ンパクを溶離した。ＨＩＶタンパク（２６Ｋｄ）は、５
ＤＳ−ポリアクリルアミドケル電気泳動ての検定のとお
り、約０．２Ｍ　ＮａＣｌで溶離した。

それ以上の精製は、ＦＢ１ＷＭＪ２含有フラクションを
集めて、前のカラムと同じ緩衝液で平衡化したＳ−３０
０ゲル濾過カラムにかけることによって得られた。

実施例１７　細胞融合の阻止 ＨＩＶ感染細胞とＴ４陽性Ｔ細胞との生体外融合を、免
疫血清の存在下及び不在下に測定する。これは周知の検
定法である［パットニー（Ｐｕｔｎｅｙ）ら、（１９８
６年）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４巻！３９２−１３９５
頁コ。

慢性感染細胞と未感染細胞（１：１５）を混合し、２４
時間培養した。融合細胞（巨大細胞）の焦点を数える（
通常６０）。細胞を混合する時に、免疫血清、例えば全
ＨＩＶエンベロープ（ｇｐ＋６０）に対する血清又は本
発明のタンパク又はペプチドに対する血清を添加する。

２４時間後における巨大細胞の９０％減少は、免疫血清
が融合を阻止できることを示している。

この検定法は、種々のウィルス菌株、例えはＨＩ　Ｖ８
とＨＩＶＲＦて感染させた細胞で行なうことができる。

実施例１８　競合細胞融合 実施例１７に記述された検定法を使用して、細胞融合の
阻止の原因となる抗体によって認識されるエピトープを
、タンパク又はペプチドが含有しているかどうかを決定
することができる。例えば、ＰＢＩ−ＩＩＩｅタンパク
に対する抗血清によるＨＩＶ、□、８感染細胞の融合阻
止は、５μｇ／…ｌまでのＰＢＩタンパクの添加によっ
て低下する。ＰＢＩに対する抗血清を使用し、タンパク
又はペプチド、例えばＳｕｂ　ｌ、Ｓｕｈ　２、ＣＮＢ
ｒ１、ペプチド１３５ないし＋３６の任意のものを計５
μｇ／ｍ　ｌで添加すると、完全にＰＢＩ抗血清の活性
が阻止される。２０μｇ／ｍｌを越える濃度のペプチド
１３８は、ｔｌｌＶＲｐ感染細胞０）　ＦＢＩ、Ｆに対
する抗血清によって融合が阻止されるのを予防する。同
様に、ペプチド＋３８はＩＯ７ｚｇ／ｍＨＤｆｉ度で、
ＨＩＶ＋ｔ＋ｓ感染細胞のＰＢＩＩＨｅに対する抗血清
によって融合が阻止されるのを完全に予防する。このペ
プチドは■ＢとＲＦ配列とのハイブリッドであるため、
両ウィルス分離体に影響する活性をもっている。

実施例１９　　ｐｅｔ−ｍ８とＰＢ１ＲＦとの共免疫化
ＨＩＶ＋＋ｒａ及び旧ＶＲＦ分離体からの二つのＰＢＩ
タンパクで免疫化された動物からの抗血清は、ＨＩＶ、
□Ｂ及び旧ＶＲＦ感染細胞の両方の細胞融合を阻止でき
た。これは、二つの旧Ｖ分離体のエンベロープ配列を含
有する別個のタンパクでの共免疫化が、両分離体を中和
できる免疫応答をもたらすことを実証している。小さな
タンパク又はペプチドを阻止する免疫血清のこの新規な
性状は、これまで記述されていない。

本発明のタンパク及びペプチドの幾つかは、旧Ｖ感染を
中和し、ＨＩＶ感染細胞の融合を阻止するような体液性
免疫応答を生じさせるための全エピトープを含有してい
る。これは、これらのタンパク又はペプチドが、全日Ｖ
エンヘロープタンパク又は旧ＶエンベロープのＦＢＩタ
ンパク部分で免疫化された動物で得られる血清からのこ
れらの活性と競合することによって示される。もっと特
定的には、抗ｇｐ１６０又は抗ＰＢＩ血清からのこれら
の活性と競合するようなタンパク及びペプチドは、Ｓｕ
ｂ　２、Ｓｕｂ１、ＣＮＢｒ１．ペプチド１３５及びペ
プチド１３６である。

本発明のタンパク及びペプチドは、ＨＩＶ感染したヒト
でリンパ球増殖応答を刺激するために使用できる。これ
が次に、このようなヒトの免疫系に刺激を与えて、ＨＩ
Ｖに応答するようにさせる。

実施例２０　ブラスミｌ”ｐＰＢｌｒ＋＋ｓの構築と発
現プラスミドＩＩＰＢＩは、Ｐｖｕ１１位置からＢｇｌ
ｒＩ位置までのＨＩＶｅｎｖ遺伝子を本質的にコートし
たＤＮＡ約５４０塩基対を含有しており、ｇｐ１２０エ
ンベロープタンパクのこの部分を含有する約２６　Ｋｄ
の融合タンパりがこれから合成される。このプラスミド
を次のように構築できる。

１、第１５表に示す配列のＤＮＡを合成する。このＤＮ
Ａ断片は標準方法で合成でき、ｇｐ＋２０の一部をコー
ドしている。これは５′末端にプラント末端をもち、３
′末端にＢａｍｔｌ　Ｉ張り出し部分と再結合する末端
をもっている。

２、プラスミドｐＲＥＶ２．２（５μｇ）をＥｃｏＲＶ
とＢａｍ１ｌＩて制限し、約４　ｋｄの大きな断片をア
ガロースゲルから単離する。

３　、　Ｔ４ＤＮＡリカーセを用いて、第１５表の断片
０．１μｇを２０μｍノ容量テｐＲＥＶ２．２断片ｏ、
＋８ｇと再結合させ、再結合混合物をコンピテント細胞
菌株５Ｇ２０２５１へ形質転換し、アンピシリン耐性形
質転換体を選択する。

４、精製プラスミドのＡｈａＩＩＩ制限パターンを使用
して、合成断片をもつ組換えプラスミドが受入れられた
細胞を選択するが、この合成断片は断片のプラント末端
がｐＲＥＶ２．２のＥｃｏＲ，Ｖ末端に再結合され、Ｂ
ａｍＨＩ張り出し末端どうしが一緒に再結合さ−＋０２
− れるような方向にある。適当なプラスミドをＡｈａ■て
消化させると約１２１０、ｌ０２０．７５０．６９０．
５００．３４０及び２０塩基対の断片長さが得られる。

この組換えプラスミドを受入れた菌株を、５０μｇ／ｍ
ｌのアンピシリンを含有する２χ培地中で生育させ、細
胞タンパクの全コンブレメントを５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル上で電気体動にかけると、クマシーブルー染
色により、又はエイズ、ＡＲＣ又は旧Ｖに感染した人か
ら選択された血清をプローブとして使用するウェスタン
・プロット分析によって約２６　Ｋｄのタンパクを視覚
化できる。

実施例２１　ブラスミｌ”　ｐｐ３１　Ｉ　Ｉ　Ｉｎか
う０）　ＨＩＶエンベロープ配列を含有する紐換えタン パクの精製 １、細胞生育。チエマツプ発酵装置中で２ｚ培地中の細
胞を１０リツトル容量で生育させた。発酵温度３７℃、
ｐＨ６，８、及び空気をｌ　ｖｖｍで供給した。プラス
ミド選択は、５０７１ｇ／ｉｆアンピシリンと２０μｇ
／ｍ１クロラムフェニコールで提供された。典型的な細
胞収率（湿潤型ｆｆ１）は３０　ｇ／ｌてあった。

２、細胞溶菌。組換えＨＩＶエンベロープ融合タンパク
を含有する大腸菌５０ｇ（湿潤細胞重量）を、５０ｍＭ
　）リス−ＣＩ（ｐＨ８，０）、５ｍＭ　ＫＥＤＴＡ、
　５ｍＭ　ＤＴＴ、１５ｍＭβメルカプトエタノール、
０．５χトリトンＸ　−１００、及び５ｍＭ　ＰＭＳＦ
からなる液の最終容量１００　ｍｌ中に再懸濁させた。

リゾチーム３００　ｍｇを加え、懸濁液を室温で３０分
培養した。

同量の０．１−０．１５μｍカラスビーズを含有するビ
ーズビータ−（ＢＥＡＤ−ＢＥＡＴＥＲ”：オクラホマ
州パードルスピルのバイオスペックプロダクツ製）を使
用してこの材料を溶菌化した。室温で６分間、１分間隔
て溶菌な行なった。液体をビーズから分離し、２０．０
０（ｌｘｇで２．５時間遠心分離した。上澄み液を除去
し、ベレットを６Ｍグアニジン塩酸塩、２０ｍＭ　）リ
ス−Ｃ１（ｐＨ８，０）、５ｍＭ　ＤＴＴ、　１５ｍＭ
β−メルカプトエタノール、５ｍＭ　ＰＭＳＦ及びＩｍ
Ｍ　ＫＥＤＴＡからなる１００　ｍｌに再懸濁した。ポ
リトロンホモジナイザーを使用してペレットを溶解化し
、２０．ＯＯＯｘｇで２時間遠心分離した。

上澄み液９０ｍ１を計ユリア、２０ｍＭ）リス−Ｃｌ　
（ｐｔ１８．０）、］　ｍＭ　ＥＤＴＡ、及び１５　ｍ
Ｍβ−メルカプトエタノールからなる４リツトルに対し
て透析した。透析は、緩衝液を３回代えて、１回ことに
８時間以上行なった。分子量３．５　Ｋｄのカットオフ
をもつスペクトラファー透析管（イリノイ州マグローピ
ークのＳ／Ｐ製）を使用した。

３、ＣＭクロマトクラフィ ＣＭソファト　フロー　セファロースを充填し、８Ｍユ
リア、１０　ｍＭ燐酸カリウム（ｐＨ７，０）、１５ｍ
Ｍβ−メルカプトエタノール、及び１ｍＭ　ＫＥＤＴＡ
て平衡化した５５０ｍ１カラム（５ｃｍ　ｘ　２８　ｃ
ｍ）に透析物を室温で装填した。カラムを平衡化緩衝液
２リツトルで洗い、タンパクをＯ−０，４Ｍ　ＮａＣｌ
の線形勾配５．０リツトルで溶離した。ＨＩＶタンパク
（２６Ｋｄ）は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動で検定されると、約０．２Ｍ　ＮａＣｌで溶離され
た。

本研究は部分的に、国立アレルキー感染病研究所（ＮＩ
ＡＩＤ）からレプリジエン・コーポレーションに与えら
れた契約番号Ｎ０ｌ−ＡＩ−６２５５８の下で支援され
たものである。

一　　１０８　− ＜Ｉ：　　　　＜＋’−１−イ「　　　μ−リ　　（ロ
　　ヒ　　（ヒ コ　　　７１’ｎｉ　　　　ｒｙ　　　　ｔ−ｔ　　　
　　１１ｌ−１１ｌ　　− （ヒ　　＜Ｌ　　　Ｌ：Ｉ　　　ｕ　　　＜Ｌ　　　Ｌ
Ｊ　　　ヒＭｅｔＬｅｕＡｒｌＰ，ｒｏリａｌＧ１ｕＴ
ｈｒＰ＋Ｔｒｙ−Ａ１ａＦ’ｈｅＳｅｒＬｅｕＡｓＰＡ
ｒｓｌＧコ工１ｅ白ｓｒ＋ＣｑｓＴｈｒＡｒｌＦ’ｒａ
白ｓｎ白５ＧＩＸ：ｉＡｒＣｉＡ１ａＰｈｅＴｖｒＡ・
１ａＴｈｒＧコＣｙｓＡｓｎ工１ｅＳｅｒＡｒｃｉＡｌ
ａＬソｓＴｒＬｅｕＡｒｓｌＡｓＰＧ１ｎＰｈｅＧ１ｕ
白ｓｒ＋Ｌ％ＡｓｐＦ’ｒｏＧ１ｕＩ１ｅ’ｖｌａｌＭ
ｅｔＨｉｓＳｅ白ｓｎＳｅｒＴｈｒＧ１ｎＬｅｕＰｈｅ
ＳｅｒＳｅＴｈｒＧＩＬ｛Ｇ１ｙＡｓｎＡｓＰＴｈｒＩ
１ｅＴ？ＭｅｔＴｒｐＧ１ｎＧ１ｕリａｌＧ１ソしＩ：
ＩＳ白］Ｌ′−ＩｓＣｖｓＳｅｒＳｅｒ＾ｓｎ工１ｅＴ
ｈｒ口］ＬｑｓＡＳｎＧ１ｙＳｅｒＬｙｓ白ｓｎＴｈｒ
Ｇ］ＰｈｅＬｅｕＬｙＳＴｈｒＬ′−１ｓＧＩＬ｛Ｐｒ
ｏ白Ｔ第６Ｂ表 ＋ｏＴｈｒＡｒｃｌＧ１ｕ工１ｅＬ＋：｛ｓＬ＋−Ｉｓ
ＬｅｕＡｓＰＧ１ｙＬｅｕ．ｕＡｒｅｉνａｌＡ１ａＡ
ｓｐＬｅｕＬｑｅ；Ｇｌｕ＾１ａｕａｌＧ１ｕ；ｒ＋Ａ
ｓｎＴｈｒＴｈｒＡｒｇＳｅｒ工１ｅＨｉｓ工ＬｅＧ１
＋Ｐｒｏ’．ｖＡｓｐ工１ｅＩ１ｅＧ１′−ｉＡｓＰ工
１ｅＡｒｌＧ１ｎ＾ｌａ｝｛ｉｓ・ｐＡｓｎＡｓｎＴｈ
ｒＬｅｕＬ＋ｇｓＧ１ｎｌｌｅりａｌ工１ｅＬｑｓＩｓ
．Ｔｈｒ工１ｅ工１ｅＦ’ｈｅＡｓｎＡｒｅ１Ｓ＝ｒＳ
ｅｒＧ１ｖＧ１ｑＩｒＰｈｅＡｓｎＣＬ｛ＳＧｌｙＧｌ
ｖＧ１ｕＰｈｅＦ’′Ｆ１ｅＴｑｒＣｙｓ１ｒＴｈｒＴ
ｒＰ白ＳｎＧ１ｑＴｈｒＧ１ｕＧ１ｖＳｅｒＡｓｎ＾５
「１＋ｒＬｅｕＰｒｏＣｑｓＡｒｌ工１ｅＬ．Ｌ｛ｓＧ
１ｕ工１ｅ工１ｅＡｓｎ．ａＭｅｔＴｑｒＡ１ａＰｒｏ
ＰｒｏＩ１ｅＬｙＳＧ．１ｖＧ１ｎリａ１．ソしｅｕＬ
ｅｕＬｅｕＴｈｒＡｒｇＡｓｐＧ１″−ＩＧｌｖＡｓｎ
Ｓｅｒｕ工１ｅＡｒｃｌＡｒ！ｌＩＧ１ｎＡ１ａＳｅｒ
八ｒｌＧｌｕＬｅｕＧ１ｕ”ＩＡｓｐＴｈｒＰｒｏ工１
ｅＰｈｅ工１ｅＧ１ｃｖΣ　　ヒ　　−　　ＬＪ％Ｌ　
　　ｒ−ｓ＋　　　−Ａ 手続補正書 １　事件の表示　　　　　　　　　昭和６３年特許願第
−１（ｏｑｉ１号チド類 ３　補正をする者 事件との関係　　　　　　特許出願人 性　　所　　　アメリカ合衆国０２１３９マサチユーセ
ツツ州カンブリツジ　ビルデイングア００　ワン　ケン
ダールスクエアー（番地なし）氏名（名称）　レプリゲ
ン　コーポレーション４代理人 ６　補正により増加する発明の数　　　　　増加せず７
　補正の対象　　　　特許請求の範囲の項９発明の詳細
な説明の項特許請求の範囲を以下の通りに訂正する。

■、以下のものからなる群から選ばれるタンパク又はペ
プチドであって、 （ａ）第２Ｂ表に示すアミノ酸配列をもっＳｕｂ　］と
指定される１０　ＫｄのＨＩＶ融合タンパク；（ｂ）第
２表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ　Ｉの旧Ｖタンパ
ク部分； （ｃ）第３Ｂ表に示すアミノ酸配列をもっＳｕｂ　２と
指定される＋８　Ｋｄの旧Ｖ融合タンパク；（ｄ）第３
表に示すアミノ酸配列をもっＳｕｂ２の旧Ｖタンパク部
分； （ｅ）第４Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＲＦと
指定される２７　ＫｄのＨＩＶ融合タンパク；（ｆ）第
４表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＲＦの旧Ｖタンパ
ク部分： （ｇ）第５Ｂ表に示すアミノ酸配列をもっＰＢｌｌ、Ｉ
Ｎと指定される２８　Ｋｄの旧Ｖ融合タンパク；（ｈ）
第５表に示すアミノ酸配列をもつＦＢＩ、Ｎの旧Ｖタン
パク部分； （１）第６Ｂ表に示すアミノ酸配列をもっＰＢ１８Ｃと
指定される２６　ＫｄのＨＩＶ融合タンパク；（ｊ）第
６表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパ
ク部分： （ｋ）第７Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢＩいＭＪ
２と指定される２６　Ｋｄの旧Ｖ融合タンパク；（１）
第７表に示すアミノ酸配列をもつＰＢＩＷＭＪ２のＨＩ
Ｖタンパク部分； （ｍ）第８Ａ表に示すアミノ酸配列をもつタンパクＣＮ
Ｂｒ１　； （ｎ）第８表に示すアミノ酸配列をもつＣＮＢｒ１の旧
Ｖタンパク部分； （ｏ）第９表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ、
　１３１゜ （ｐ）第１０表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３２゜ （ｑ）第１１表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３４゜ （ｒ）第１２表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３５゜ （Ｓ）第１３表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　　１３６゜ （１）第１４表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３８゜ ２、　　（ａ）タンパク５ｕｈｌ； （ｂ）　Ｓｕｂ　］の旧Ｖタンパク部分；（ｃ）タンパ
クＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　２の旧Ｖタンパク部分；（ｅ）タンパ
クＰＢ１ＲＦ； （ｆ）　ＰＢ１ＲＦ（ＩＩ）ＨＩＶタンパク部分；（ｇ
）タンパクＰＲ１ＭＮ； （ｈ）　ＰＢ１ＭＮ＋７）旧Ｖタンパク部分；（１）タ
ンパクＰＢ１ＳＣ （ｊ）　ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパク部分；（ｋ）タンパ
ク”　’　ＩＪ　Ｍ　Ｊ　２　：（１）　ＰＢｌｗＭ、
、ｒ２のＨＩＶタンパク部分；（ｍ）タンパクＣＮＢｒ
１： （ｎ）　ＣＮＢｒ＋のＨＩＶタンパク部分；（ｏ）ペプ
チドＮｏ、　１３］； （ｐ）ペプチドＮｏ、　＋３２； （ｑ）ペプチドＮｏ、　１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ、　１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ、　１３６：及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８； をコートしたＤＮＡからなる群から選ばれるＤＮＡ配列
物。

３、　　（ａ）タンパクＳｕｂｌ； （ｂ）　Ｓｕｂ　］のＨＩＶタンパク部分；（ｃ）タン
パクＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　２の旧Ｖタンパク部分；（ｅ）タンパ
クＰＢＩρＦ； （ｆ）　ＰＢ１ＲＦ（Ｄ旧Ｖタンパク部分：（ｇ）タン
パクＰＢＩＭ、： （ｈ）　ＰＢ１ＭＮ（Ｄ　ＨＩＶタンパク部分；（１）
タンパクＰＢ１ＳＣ （ｊ）　ｐｅ＋。。の旧Ｖタンパク部分；（ｋ）タンパ
クＰＢＩＷＭ、、ｒ２： （１）　ＰＢＩＷｒ＋、ｙ２のＨＩＶタンパク部分；（
ｎ＋）タンパクＣＮＢｒ１； （ｎ）　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分；（ｏ）ペプ
チドＮｏ、　１３１； （ｐ）ペプチドＮｏ、　＋３２； （ｑ）ペプチドＮｏ、　１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ、　１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ、　１３６；及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８： からなる群かれ選ばれるタンパク又はペプチドをコート
したＤＮＡを含めてなるＤＮＡ！　搬’＼クター。

４、　　（ａ）タンパクＳｕｂｌ： （ｂ）　Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク部分；（ｃ）タンパ
クＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分；（ｅ）タン
パクＰＢＩ＋？。； （ｆ）　ＰＢ１ＲＦ（Ｄ旧Ｖタンパク部分；（ｇ）タン
パクＰＢ１ＭＮ； （ｈ）　ＰＢＩＭ、（７）　ＨＩＶタンパク部分；（ｉ
）タンパクＰＢ１ＳＣ （ｊ）　ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパク部分；（ｋ）タンパ
クｐＢＩＨＭＪｐ’ （１）　ＰＢ１１Ｊｈ、ｚ２（Ｄ　ＨＩＶタンパク部分
；（ｍ）タンパクＣＮＢｒ１： （ｎ）　ＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部分；（ｏ）ペプチ
ドＮｏ、　＋３１； （ｐ）ペプチドＮｏ、　１３２； （ｑ）ペプチドＮｏ、　１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ、　１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ、　１３６：及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８； からなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパ
ク又はペプチドを使用して、流体中の抗ＨＩＶ抗体を検
出又は定量するための免疫化学的検定法。

５、生物体液中の抗日Ｖ抗体を検出する方法であって、
以下の段階、すなわち （ａ）タンパクＳｕｂｌ　；　Ｓｕｂ　ＩのＨＩＶタン
パク部分；タンパクＳｕｂ　２　；　Ｓｕｂ　２０’）
　ＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１ＲＦ；ＰＢ１Ｒ
Ｆの旧Ｖタンパク部分；タンパクＰＢ１ＭＮ　：　ＰＢ
１１、ＩＮのＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１ＳＣ
：ＰＢＩＳｃのＨＩＶタンパク部分：タンパクＰＢＩ、
ＭＪ２；　ＰＢＩＩＪ　Ｍ　Ｊ　２のＨＩＶタンパク部
分；タンパクＣＮＢｒ１　；　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタン
パク部分；ペプチドＮｏ、　１３１　；ペプチドＮｏ、
　１３２；ペプチドＮｏ、　１３４：ペブチドＮｏ、　
＋３５；ペブチトＮｏ、　１３６　：及びペプチドＮｏ
、　１３８からなる群から選ばれる少なくとも一つのＨ
ＩＶタンパク又はペプチドを付着させた固体相を含めて
なる免疫吸着剤を、試料中の抗ＨＩＶ抗体が免疫吸着剤
に結合するような条件下に、試験しようとする生物体液
試料と一緒に培養し； （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し；かつ（ｃ）試料中
の抗ＨＩＶ抗体を示すものとして抗体が免疫吸着剤に結
合されたかどうかを決定する；という段階を含めてなる
方法。

６、　ヒト血清又は血漿試料中の抗ＨＩＶ抗体を検出す
る方法であって、以下の段階、すなわち（ａ）タンパク
Ｓｕｂ　］　：　Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク部分；タン
パクＳｕｂ　２　；　Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分
；タンパクＰＢ１ＲＦ　：　ＰＢ１ＲＦの旧Ｖタンパク
部分；タンパクＰＢＩＭ、：　ＰＢｊｒ＋ｈのＨＩＶタ
ンパク部分；タンパクＰＢＩ５ｏ＋ＰＢ１ＳＣのＨＩＶ
タンパク部分；タンパクＰＢＩｗＭ、７２：　ＰＢＩＷ
ＭＪ２のＨＩＶタンパク部分；タンパクＣＮＢｒ１　：
　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分；ペプチドＮｏ、　
１３＋　：ペプチドＮｏ、　１３２；ペプチドＮｏ．　
＋３４；ペプチドＮｏ．、　＋３５　：ペプチドＮｏ．
　＋３６；及びペプチドＮｏ、　１３８からなる群から
選ばれる少なくとも一つの旧Ｖタンパク又はペプチドで
被覆したヒースからなる免疫吸着剤を用意し、 （ｂ）試料中の抗ＨＩＶ抗体を免疫吸着剤に結合させる
ような条件下に、血清又は血漿試料と一緒に免疫吸着剤
を培養し； （ｃ）免疫吸着剤を試料から分離し； （ｄ）免疫吸着剤に結合されたヒト抗ＨＩＶ抗体にヒト
抗（ヒトＩｇＧ）抗体が結合するような条件下に、免疫
吸着剤を標識付き抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体と共に培養し
、 （ｅ）未結合抗（ヒト　ＩｇＧ）抗体から免疫吸着剤を
分離し、かつ （ｆ）試料中に抗１１聞抗体が存在する指針として抗体
が免疫吸着剤に結合された標識を評価する、という段階
を含めてなる方法。

７、タンパクＳｕｂ　ｌ、Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク部
分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部
分、タンパクＰＢ１ＲＦ、　ＰＲ１ＲＦのＨＩＶタンパ
ク部分、タンパクＰＢ１．．、ＰＢ１１、ＩＮノ旧Ｖタ
ンパク部分、タンパクＰＢ１．、ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタン
パク部分、タンパクＰＢ　１ＷＭＪ２、ＰＢＩｗｒｑ、
ｒ２の旧Ｖタンパク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮ−
Ｂｒ１のＨＩＶタンパク部分、ペプチドＮｏ、　１３１
、ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　１３４、
ペプチドＮｏ．１３５、ペプチドＮｏ、　１３６、及び
ペブチｉ’Ｎｏ、　１３８からなる群から選ばれる少な
くとも一つのＨＩＶタンパク又はペプチドを固定させた
固体相を含めてなる、抗ＨＶ抗体用の固体相免疫化学的
検定法に使用される免疫吸着剤。

８、一つ以上のＨＩＶ分離体からの一つ以上のＨＩＶタ
ンパク又はペプチドを含めてなるワクチン組成物。

９、ハイブリッドタンパク又はペプチドを含めてなるワ
クチン組成物であって、ハイブリッドタンパク又はペプ
チドが異なる旧Ｖ分離体からの旧Ｖタンパク又はペプチ
ドのアミノ酸配列物を含めてなる場合の、ハイブリッド
タンパク又はペプチドを含めてなるワクチン組成物。

１０、生物体液中の抗旧Ｖ抗体を検出するためのキット
であって、 （ａ）タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク
部分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２の旧シタンパク
部分、タンパ’７　ＰＢ１ＲＦ、　ＰＢ１１？、（７）
　ＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＲ１ＭＮ、ＰＢｌ、
、（７）ＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１ＳＣ１Ｐ
ＢＩＳｃのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１ｗｍ、
＋２、ＰＢＩＩＪＭ、Ｊ２のＨＩＶタンパク部分、タン
パクＣＮＢｒ１、（ＮＢｒｌのＨＩＶタンパク部分、ペ
ブチｉ’Ｎｏ、　１３１、ペプチドＮｏ、　１３２、ペ
プチドＮｏ、　１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペブチ
ｉ’Ｎｏ、　１３６、及びペプチｉ’Ｎｏ、　１３８か
らなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパク
又はペプチドを固定させた固体相を含めてなる免疫吸着
剤であって、試料中の抗旧Ｖ抗体を免疫吸着剤に結合さ
せるような条件下に、試験しようとする生物体液試料と
一緒に培養する免疫吸着剤、（ｂ）標識付きＨＩＶ抗体
、及び （ｃ）免疫吸着剤と結合した標識を検出する手段を含め
てなるキット。

１１、　　リンパ球増殖応答の刺激を必要とするヒトを
、タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂ　］のＨＩＶタンパク部
分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク
部分、タンパクＰＢ１ＲＦ−ＰＲ１ＲＦの旧Ｖタンパク
部分、タンパクＰＢＩＭ、、ＰＢ１ＭＮの旧Ｖタンパク
部分、タンパクＰＢＩ３ｏ、ＰＢＩ３ｃの旧Ｖタンパク
部分、タンパクＰＢＩＷＭＪ２、　ＰＢｌｌ、ｌｔ、１
．ｙ２（Ｄ　Ｎ　Ｉ　Ｖ　タンパク部分、タンパ’７　
ＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部分、ペプチド
Ｎｏ、　１３１、ペプチドＮｏ、１３２、ペプチドＮｏ
．　１３４、ペプチドＮｏ　、　ｌ　３５、ペプチドＮ
ｏ、　１３６、及びベブチｉ’Ｎｏ、　１３８からなる
群から選ばれる少なくとも一つの糾換えＨＩＶエンヘロ
ーブタンパク断片又はペプチドで処置することを含めて
なる、ヒトにおいてリンパ球増殖応答を刺激する方法。

１２、　　タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂｌの■１シタン
パク部分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ２のＨＩＶダン
バク部分、タンパクＰＢ１ＲＦ１ＰＢ１ＲＦの旧Ｖタン
パク部分、タンパクＰＢＩＭ、、ＰＢＩＭ、０）ＨＩＶ
タンパク部分、タンパクＰＢ１ＳＣ１ＰＢ１ＳＣのＨＩ
Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１ｗＭ、ｚｐ、ＰＢＩ。

ＭＪ２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＣＮＢｒ１．　
ＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部分、ペプチドＮｏ、　１３
１、ペプチドＮｏ。

１３２、ペプチドＮｏ、　１３４、ペプチドＮｏ、　１
３５、ペブチドＮｏ、　１３６、及びペプチドＮｏ、　
１３８からなる群から選ばれるタンパク又はペプチドに
対してつくられる抗体を使用して、生物体液中の変異型
特異的ウィルスタンパクを検出する方法であり、（ａ）
試料中の抗原が固定化された抗ＨＩＶエンヘローブ免疫
吸着剤に結合するような条件下に、すへての旧Ｖエンベ
ロープタンパクな結合させうる血清を含有した免疫吸着
固体相を生物体液試料と共に培養し、 （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し、 （ｃ）タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂ　］のＨＩＶタンパ
ク部分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２の旧Ｖタンパ
ク部分、タンパクＰＢ１ＲＦＳＰＢ１ＲＦ（７）ＨＩＶ
タンパク部分、タンパクＰ８１ＭＮ、　ＰＢＩｔｌＮ（
７）　旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１ＳＣ。

ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ］Ｗｍ、
ｈ２、ＰＢＩＷＩ”ｌＪ２の旧Ｖタンパク部分、タンパ
クＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分、ペプ
チドＮｏ、　１３１、ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチ
ドＮｏ、　１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペブチＦ　
Ｎｏ、　１３６、及びペプチド’Ｎｏ、　１３８からな
る群から選ばれるタンパク又はペプチドでの免疫化から
誘導されるＨＩＶ変異型特異的抗体を加え、かつ（ｄ）
　ＨＩＶ変異型特異的抗体が旧Ｖタンパクを含有する免
疫吸着剤に結合したかどうかを測定することを含めてな
る方法。

＋３．　　特許請求の範囲第３項の運搬ベクターによっ
て形質転換されるホスト。

発明の詳細な説明の以下の記載を訂正する。

１０５頁２０行の次行に ｒ　本願発明は、特許請求の範囲に記載のものであるが
以下の態様を包含する。

１、Ｓｕｂｌと指定される１０　ＫｄのＨＩＶ融合タン
パクである、特許請求の範囲第１項のタンパク。

２、ＳｕｂｌのＨＩＶタンパク部分である、特許請求の
範囲第１項のタンパク。

３、Ｓｕｂ２と指定される１８　ＫｄのＨＩＶ融合タン
パクである、特許請求の範囲第１項のタンパク。

４、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の
範囲第１項のタンパク。

５、　　ＰＢ１ＲＦと指定される２７　Ｋｄの旧Ｖ融合
タンパクである、特許請求の範囲第１項のタンパク。

６、　　ＰＢ１ＲＦのＨＩＶタンパク部分である、特許
請求の範囲第１項のタンパク。

？、　　ＦＢ１ＭＮと指定される２８　ＫｄのＨＩＶ融
合タンパクである、特許請求の範囲第１項のタンパク。

８、　　ＰＲ＋＋−、ＮのＨＩＶタンパク部分である、
特許請求の範囲第１項のタンパク。

９、　　ＰＢ］ｓｒ：と指定される２６　Ｋｄの旧Ｖ融
合タンパクである、特許請求の範囲第１項のタンパク。

１０、　　ＰＢＩ９ｃのＨＩＶタンパク部分である、特
許請求の範囲第１項のタンパク。

１１、　　ＰＢＩｗ、、１．、＋ｐと指定される２６　
ＫｄのＨＩＶ融合タンパクである、特許請求の範囲第１
項のタンパク。

＋２．　　ＰＢ１ＷＭＪ２（７）　旧ｖり：／バク部分
である、特許請求の範囲第１項のタンパク。

１３、　　タンパクＣＮＢｒ１である、特許請求の範囲
第１項のタンパク。

＋４．　　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分である、特
許請求の範囲第１項のタンパク。

１５、ベブチｉ’Ｎｏ、　１３１である、特許請求の範
囲第１項のペプチド。

１６、ペプチドＮｏ．　１３２である、特許請求の範囲
第１項のペプチド。

１７、ペプチドＮ０１１３４である、特許請求の範囲第
１項のペプチド。

１８、ペブチｔ”Ｎｏ、　１３５である、特許請求の範
囲第１項のペプチド。

１９、　　ペプチド’Ｎｏ、　１３６である、特許請求
の範囲第１項のペプチド。

２０、ペプチド’Ｎｏ、　１３８である、特許請求の範
囲第１項のペプチド。

２１、　　タンパクＳｏｂ　ｌをコートした、特許請求
の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２２、ＳｕｂｌのＨＩＶタンパク部分をコードした、特
許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２３、　　タンパクＳｕｂ２をコードした、特許請求の
範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２４、　　Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分をコートし
た、特許請求の範囲第２項め［ＤＮＡ配列物。

２５、　　タンパクＰＲ＋□１をコートした、特許請求
の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２６、　　ＰＢ１ＲＦの旧Ｖタンパク部分をコートした
、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２７、　　タンパクＰＢＩＭ、をコートした、特許請求
の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２８、　　ＰＢＩｒ、Ｎ）ＨＩＶタンパク部分部分−コ
ート、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

２９、　　タンパクＰＢ１ＳＣをコートした、特許請求
の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３０、　　ＰＲ１ＳＣのｌ−１１Ｖタンパク部分をコー
トした、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３１、　　タンパクＰＢ１ｗ１．１．＋２をコードした
、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３２、　　ＰＢｈＭ、ｒｐノＨＩＶ’ｉ’　ンハク部分
をコードした、特許請求の範囲第２項のｒｌＮＡＤＮＡ
配列物、　　タンパクＣＮＢｒ１をコードした、特許請
求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３４、　　ＣＮＢｒ１の１（１ｖタンパク部分をコード
した、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３５、　　ベブチｌ＜’Ｎｏ、１３１をコートした、特
許請求の範囲第２項のＤ　Ｎ　Ａ配列物。

３６、ペプチドＮｏ、Ｉ３２をコートした、特許請求の
範囲第２項のＤ　Ｎ　Ａ配列物。

３７、ペプチド’Ｎｏ、Ｉ３４をコートした、特許請求
の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３８、ペプチドＮｏ、１３５をコートした、特許請求の
範囲第２項のＤＮＡ配列物。

３９、ペプチドＮｏ　、　］　３６をコートした、特許
請求の範囲第２項のＤＮＡ配列物。

４０、ペプチドＮｏ、１３Ｂをコートした、特許請求の
範囲第２項のＤＮＡ配列物。

４１、　　タンパクＳｕｂ　］をコートしたＤＮＡを含
めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

４２、ＳｕｂｌのＨＩＶタンパク部分をコードしたＤＮ
Ａを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

４３、　　タンパクＳｕｂ　２をコートしたＤＮＡを含
めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

４４、　　Ｓｕｂ　２のＨ１シタンパク部分をコートし
たＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクタ
ー。

４５、　　タンパクＰＲ１ＲＦをコードしたＤＮＡを含
めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

４６、　　ＰＢ１ＲＦの旧Ｖタンパク部分をコードした
ＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター
。

４７、　　タンパクＰＲＩ□Ｎをコートした［ＩＮＡを
含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

４８、　　ＰＢ１１、ＩＮ（ＩＩ）　ＨＩＶタンパク部
分ヲｊ　−１”　Ｌ／　タＤＮＡを含めてなる、特許請
求の範囲第３項のベクター。

４９、　　タンパクＰＢ１６ｃをコードしたＤＮＡを含
めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

５０、　　ＰＢ１ＳＣ（７）　ｔｌ　ＩＶダンバク部分
をコードしたＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３
項のベクター。

５１、　　タンパクＰＢｌｌＪＭ、、Ｉ２をコートした
ＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター
。

５２、　　ＰＢＩｗｎ、ｒ２のＨＩＶタンパク部分をコ
ートしたＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項の
ベクタ５３、　　タンパクＣＮＢｒ１をコートしたＤＮ
Ａを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

５４、　　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分をコートし
たＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項のＪ＼ク
ター。

５５、ペブチＩ；’Ｎｏ、　１３］をコートしたＩＩ　
Ｎ　Ａを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター
。

５６、ベブチｌ”Ｎｏ、　１３２をコ−１；’　Ｌ／た
ＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター
。

５７、ベブチｌ”Ｎｏ、　１３４をコートしたＤＮＡを
含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

５８、　　ペプチドＮｏ、　１３５をコートしたＤＮＡ
を含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

５９．　　ペプチドＮｏ、　１３６をコートしたＤＮＡ
を含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

６０、　　ペプチドＮｏ、　１３８をコートしたＤＮＡ
を含めてなる、特許請求の範囲第３項のベクター。

６１、上記第４１項のベクターであるｐＰＢｌ−Ｓｕｂ
　］。

６２、上記第４３項のベクターであるｐＰＢＩ−Ｓｕｂ
　２゜６３、上記第４５項のベクターであるｐＰＢＩＲ
ｐａ６４、　　上記第４７項のベクターであるｐｐ［ｌ
］１．ＩＮ。

６５、上記第４９項のＪ＼クターであるＩＩＰＢ１ＳＣ
０６６、上記第５１項のベクターであるｐＰＢＩｗＭ、
＋２゜６７、真核生物又は原核生物に運搬され、そこで
複製される、特許請求の範囲第３項のＤＮＡ運搬ベクタ
ー。

６８、　ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ＋である、特
許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

６９、　　ＨＩＶタンパクがＳｕｂｌの旧Ｖタンパク部
分である、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定
法。

７０、　　ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ２である、
特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

？＋、　　ＨＩＶタンパクがＳｕｂ　２のＨＩＶタンパ
ク部分である、特許請求の範囲第４項による免疫イヒ学
的検定法。

７２、　　旧ＶタンパクがタンパクＰＢ１ＲＦである、
特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

７３、　　旧ＶタンパクがＰＲＩＦ？、の旧Ｖタンパク
部分である、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検
定法。

７４、　ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１ＭＮである、
特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

７５、　　ＨＩＶタンバタがＰＨ１゜、の旧Ｖタンパク
部分である、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検
定法。

７６、　ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１３６である、
特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

７７、　ＨＩＶタンパクがＰＢ１ＳＣ（ＩＤＨＩＶタン
パク部分である、特許請求の範囲第４項による免疫化学
的検定法。

７Ｂ、　　１（ＩＶタンパクが９　ンハ’）　ＰＲｌ、
４ＭＪ２Ｔ：　Ｓ　ル、特許請求の範囲第４項による免
疫化学的検定法。

７９、　　ＨＩＶタンパクカＰ　Ｂ　ＩＩＪＭ　Ｊ２（
Ｄ　ＨＩ　Ｖタンパク部分である、特許請求の範囲第４
項による免疫化学的検定法。

８０、　ＨＩＶタンパクがタンパクＣＮＢｒ１である、
特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

８１、　　ＨＩＶタンパクがＣＮＢｒ＋の旧Ｖタンパク
部分である、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検
定法。

８２、　　ｆｌｌＶヘブチドがペプチドＮｏ、　１３１
テする、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法
。

８３、　　ＨＩＶヘブチドがベブチＦ’　Ｎｏ、　１３
２テ；！；ｒる、特許請求の範囲第４項による免疫化学
的検定法。

８４、　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３４であ
る、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

８５、　　ＨＩＶヘブチトカヘブチドＮｏ、　１３５テ
＆る、特許請求の範囲第４項による免疫化学的検定法。

８６、　　ＨＩＶＡ：ブテトカヘブチＦ’　Ｎｏ、　１
３６テ’＆　ル、特許請求の範囲第４項による免疫化学
的検定法。

８７、　　ＨＩＶヘブチトカペプチトＮｏ、　１３８テ
；Ａる、−２、 特許請求の範囲第り項による免疫（ヒ学的検定法。

８８、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
階が、生物体液の由来する種の抗原に対する標識付き抗
体と共に免疫吸着剤を培養し、培養期間後、標識付き抗
体から免疫吸着剤を分離し、免疫吸着剤に結合された標
識を検出することを含めてなる、特許請求の範囲第５項
の方法。

８９、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
階が、タンパクＳｕｂ　Ｌ　Ｓｕｂ　Ｉの旧Ｖタンパク
部分、タンパク５ｕｈ２、Ｓｕｂ２の１（ＩＶタンパク
部分、タンパクＰＢＩＩ？Ｆ、ＰＢ１ＲＦ〕Ｈ１ｖタン
パク部分、タンパクＰ８１ＭＮ、Ｐ８１ＭＮの旧シタン
パク部分、タンパクＰＢＩＳＯ，ＰＲＩＳＯのＨＩＶタ
ンパク部分、タンパクＰ８１ＷＭ、Ｊ２、ＰＢ］ｗｍ、
＋２（Ｄ　旧ｖタンパク部分、タンパクＣＮＢｒ１、Ｃ
ＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分、ペプチドＮｏ、　１３
１、ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　１３４
、ペプチドＮｏ。

１３５、ペプチドＮｏ、　１３６、及びペプチドＮｏ、
　１３８からなる群から選ばれる少なくとも一つの標識
付きＨＩＶタンパク又はペプチドと共に免疫吸着剤を培
養し、標識付きＨＩＶタンパクから免疫吸着剤を分離し
、免疫吸着剤に結合された標識を検出することを含めて
なる、特許請求の範囲第５項の方法。

９０、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
階が、標識付きプロティンＡと共に免疫吸着剤を培養し
、標識イ」きプロティンＡから免疫吸着剤を分離し、か
つ免疫吸着剤に結合された標識を検出することを含めて
なる、特許請求の範囲第５項の方法。

９１、免疫吸着剤が更に動物タンパクのポストコートを
含めてなる、特許請求の範囲第６項の方法。

９２、標識付き抗（ヒｌ−ＩｇＧ）抗体が動物抗体であ
り、血清又は血漿試料が同し動物種の動物の正常な血清
で希釈される、特許請求の範囲第６項の方法。

９３、抗（ヒトＩｇＧ）抗体がヤギ抗体であり、血清又
は血漿試料が正常なヤギ血清で希釈される、上記第９２
項の方法。

９４、抗（ヒトＩｇＧ）抗体が放射性同位元素、酵素、
又は蛍光化合物で標識される、特許請求の範囲第６項の
方法。

９５、固体相がカラス又はプラスチックビーズ、微量滴
定板のウェル、又は試験管である、特許請求の範囲第７
項の免疫吸着剤。

９６、　　更に動物タンパクのポストコートな含めてな
る、特許請求の範囲第７項の免疫吸着剤。

９７、薬理学的に受け入れられる賦形剤中のタンパクＳ
ｕｂｌ、Ｓｕｂｌの旧Ｖタンパク部分、タンパクＳｕｂ
２、Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１
ＲＦ１ＰＢ１ＲＦノ旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１
ＭＮ、ＰＢＩＭ、の旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１
ＳＣ、　ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパク部分、ダンバクＰＢ
１ＷＭＪ２、ＰＢＩＷＭ、Ｊ２（７）ＨＩＶタンパク部
分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１（Ｄ旧Ｖタンパク
部分、ペプチドＮｏ．　１３１、ペブチｌ”Ｎｏ、１３
２、ペプチドＮｏ、　１３４、ペプチドＮｏ、　１３５
、ペプチドＮｏ、　１３６、及びペプチドＮｏ．　１３
８からなる群から選ばれるタンパク又はペプチドの抗原
性状をもつ一つ以上の旧Ｖタンパク叉はペプチドを含め
てなる、特許請求の範囲第８項によるワクチン組成物。

９８、旧ＶタンパクかタンパクＳｕｂ　ｌの抗原性状を
もつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

９９、　ＨＩＶタンパクがＳｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク部
分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成
物。

１００、旧ＶタンパクがタンパクＳｕｂ２の抗原性状を
もつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

＋０１．　　ＨＩＶタンパクがＳｕｂ２（７）ＨＩＶタ
ンパク部分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワク
チン組成物。

１０２、　ＨＩＶタンパクかタンパクＰＢ１ＲＦの抗原
性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

１０３、　８１νタンパクがＰＢ１ＲＦの旧Ｖタンパク
部分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組
成物。

１０４、　ＨＩＶタンパクがタンパクＰｅ１ｔ１Ｎの抗
原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

＋０５．　　ｉ＋＋ｖタンパクがＰＢ１ＭＮの旧■タン
パク部分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチ
ン組成物。

＋０６．　１（ＩＶタンパクがタンパクＰＢ１ＳＣの抗
原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

＋０７．　　ＨＩＶタンパクがＰＢ１ＳＣ（７）ＨＩＶ
タンパク部分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワ
クチン組成物。

＋０８．　　ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢｌｙＨＪ２
の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物
。

１ｏ９．　　ＨＩＶり、／バクがＰ　ＢＩ　＋、＋＋ｑ
、、ｒ２ノＨＩ　Ｖタンパク部分の抗原性状をもつ、上
記第９７項によるワクチン組成物。

１１０、　ＨＩＶタンパクかタンパクＣＮＢｒ＋の抗原
性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

Ｉ１１、　　ＨＩＶタンパクが（ＮＢｒｌ（７）ＨＩＶ
タンパク部分の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワ
クチン組成物。

１１２、　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３１の
抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

１１３、　　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３２
の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物
。

＋１４．　　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３４
の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物
。

１１５、　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３５の
抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

１１６、　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３６の
抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物。

１１７、　　ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３８
の抗原性状をもつ、上記第９７項によるワクチン組成物
。

＋１８．　　ＨＩＶ単離体がＨＩＶＩＩＩＲ及びＨＩ　
ＶＲＦである、特許請求の範囲第９項によるワクチン組
成物。

１１９、抗旧Ｖ抗体が検出可能な標識として、抗（ヒト
ＩｇＧ）抗体で標識されている、特許請求の範囲第１０
項のキット。

＋２０．　　Ｍｉ換えＨＩＶエンベロープタンパク断片
がタンパクＳｕｂ　］である、特許請求の範囲第１１項
による方法。

＋２１．　　組換え旧Ｖエンベロープタンパク断片がＳ
ｕｂ　Ｉの旧Ｖタンパク部分である、特許請求の範囲第
１１項による方法。

１２２、組換えＨＩＶ旧ソエンへプタンパク断片がタン
パクＳｕｂ　２である、特許請求の範囲第１１項による
方法。

１２３、　４ｆｌ換えＨＩＶエンベロープタンパク断片
がＳｕｂ２の旧Ｖタンパク部分である、特許請求の範囲
第１Ｉ項による方法。

＋２４．　　、Ｉ換えＨＩＶ旧ソエンへブタンパク断片
がタンパクＰＢ１ＲＦである、特許請求の範囲第１１項
による方法。

１２５、　８ＪＩ換えＨＩＶ工ンベロープタンパク断片
がＰＢ１ＲＦのＨＩＶタンパク部分である、特許請求の
範囲第１１項による方法。

＋２６．　　組換えＨＩＶ工ンヘローブタンパク断片か
タンパクＰＢＩ□、である、特許請求の範囲第１１項に
よる方法。

＋２７．　　Ｍ換え旧Ｖエンへロープダシバク断片がＰ
ＢＩＭ、のＨＩ　Ｖタンパク部分である、特許請求の範
囲第１１項による方法。

＋２８．　　紐換えＨＩＶエンヘロ−ブタンバク断片が
タンパクＰＢＩｓｒ：である、特許請求の範囲第１１項
による方法。

＋２９．　　Ｍｉ換え旧ソエンへローブタンパク断片か
ｐｅｔ３．、の旧Ｖタンパク部分である、特許請求の範
囲第１１項による方法。

１３０、組換え旧ソエンへロープタンパク断片がタンパ
クＰＢ］ｌＪＭＪ２である、特許請求の範囲第１１項シ
こよる方法。

１３１、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＰＢ
ＩＷｌ’ｌＪ２の旧Ｖタンパク部分である、特許請求の
範囲第１１項による方法。

＋３２．　　組換えＨＩＶ旧ソエンへブタンパク断片が
タンパクＣＮＢｒ１である、特許請求の範囲第１１項に
よる方法。

＋３３．　　Ｍ４換えＨＩＶ旧ソエンへブタンパク断片
がＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部分である、特許請求の範
囲第１１項による方法。

１３４、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３
１である、特許請求の範囲第１１項による方法。

１３５、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３
２である、特許請求の範囲第１１項による方法。

１３６、　　糾換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　
１３４である、特許請求の範囲第１１項による方法。

１３７、　　絹換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　
１３５である、特許請求の範囲第１１項による方法。

１３８、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ、　１３
６である、特許請求の範囲第１１項による方法。

＋３９．　　刊換え旧Ｖペプチドがペプチｉ’Ｎｏ、　
１３８である、特許請求の範囲第１１項による方法。

１４０、　ＨＩＶ変異型特異的抗体の検出が、（１）吸
着された旧ソエンへローブタンパクを、ＨＩＶ変異型特
異的抗血清中に存在する抗原に特異的な標識付き抗体と
共に培養し、 （２）培養後、免疫吸着剤と標識付き抗体を分離し、そ
して （３）免疫吸着剤と結合した標識を検出する、という段
階を含めてなる、特許請求の範囲第１２項による方法。

ｊを挿入する。

手続補正書 １　事件の表示　　　　　　　　　昭和６３年特許願第
２１０９１４号２″′［Ｉｆ１ｃｒ＋ＳＴｈ　、イ、５
．Ｄ工、イ、カ、”ｌ（ｉ？／ｌＪｊＭ（Ｚ’Ｉ’＃ｔ
ｌＱ＊ＲＶｌｌｆｊＨＩ　Ｖ’＠（ＥＪ’ｊｌＥｃＵＲ
”）。

ナト類 ３　補正をする者 事件との関係　　　　　　特許出願人 性　　所　　　アメリカ合衆国０２１３９マザチユーセ
ツツ州カンブリツジ　ヒルテインク７００　ワン　ケン
ダールスクエアー（番地なし）氏名（名称〉　レブリケ
ン　コーポレーション４代理人 住　　所　　東京都新宿区新宿２丁目　８番１号新宿セ
ブンヒル３０３号６　補正により増加する発明の数　　
　　　増加せず特許請求の範囲を以下の通りに訂正する
。

１、以下のものからなる群から選ばれるタンパク又はペ
プチド又はこれらの化学的修飾物。

（ａ）第２Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつ５Ｕｈｌと指
定される１ＯＫｄのＨＩ　Ｖ融合タンパク；（ｂ）第２
表に示すアミノ酸配列をもつＳＵＩ］ｌの旧Ｖタンパク
部分； （ｃ）第３Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ２と指
定される＋８　ｋｄの旧Ｖ融合タンパク；（ｄ）第３表
に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ　２の旧＼Ｉタンパク
部分； （ｅ）第４Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢＩ、Ｆと
指定される２７　ＬｌのＨＩ　Ｖ融合タンパク；（ｆ）
第４表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＲＦの旧Ｖタン
パク部分； （ｇ）第５Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＭＮと
指定される２８１＜ｄのＨＩＶ融合タンパク；（ｈ）第
５表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＭＮの旧Ｖタンパ
ク部分； （１）第６Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１ＳＣと
＝　　１− 指定される２６　Ｋｄの旧Ｖ融合タンパク：（ｊ）第６
表に示すアミノ酸配列をもっＰｕ１ｓｅの旧Ｖタンパク
部分： （ｋ’）第７Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢＩ□Ｍ
Ｊ２と指定される２６　Ｋｄの旧Ｖ融合タンパク；（１
）第７表に示すアミノ酸配列をもつＰＢＩ工Ｊ２の旧〜
タンパク部分： （ｍ）第８Ａ表に示すアミノ酸配列をもつタンパクＣＮ
Ｂｒ１　： （ｎ）第８表に示すアミノ酸配列をもっ＋〕Ｎ　Ｂ　ｒ
　Ｉの旧〜・タンパク部分； （ｏ）第９表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ、
　１３１゜ （ｐ）第１０表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３２゜ （Ｑ）第１１表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３４゜ （ｒ）第１２表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　１３５゜ （３）第１３表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　　１３６゜ （１）第１４表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
、　　１３８゜ ２、　　（ａ）タンパク５ｕｈｌ； （ｂ）　Ｓｕｂ　ｌのＨＩＶタンパク部分；（ｃ）タン
パクＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　、２のＨＩＶタンパク部分：（ｅ）タ
ンパクＰＢｌｐｐ： （ｆ）　ＰＢ１ＲＦ（７）　ＨＩＶ９　’／　ハク部分
；（ｇ）タンパクＰＢ１＋、ｌＮ： （ｈ）　ＰＢ１ＭＮ（７）　ＨＩＶタンパク部分：（１
）ダンバクＰＢ１ＳＣ （ｊ）ＰＢ１ＳＣのＨ１シタンパク部分；（ｋ）タンパ
クＰＢ１１ＷＭＪ２； （１）　ＰＢ１ＷＭＪ２ＣＤ　ＨＩＶ’５’　ンパク部
分；（ｍ）タンパクＣＮＢｒ１： （ｎ　）　ＯＮ　Ｂ　ｒ　１のＨＩＶタンパク部分；（
ｏ）ペプチドＮｏ、　１３１： （ｐ）ペプチドＮｏ、　＋３２； （ｑ）ペプチドＮｏ、　１３４ニ ー　　；３　− （ｒ）ペプチドＮｏ、　１３５： （ｓ）ペプチドＮｏ、　１３６：及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８： をコードしたＤＮＡからなる群から選ばれるＤＮＡ配列
物。

３、　　（ａ）タンパクＳｕｂＭ （ｂ）　Ｓｕｂ　ＩのＨＩＶタンパク部分：（ｃ）タン
パクＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分：（ｅ）ダン
バクＰＢ１ＲＦ’ （ｆ）　ＰＢＩＦＩＦの旧シダンハク部分：（ｇ）タン
パクＰＢ１ＭＮ： （ｈ）　ＰＢ１ＭＮのＨＩＶタンパク部分：（１）タン
パクＰＢ１ＳＣ （ｊ）　ＰＢ１ＳＣの旧■タンパク部分；（ｋ）タンパ
クＰＢ１ＷＭＪ２’ （１）　ＰＢＩＷｒ−＋、ｈ２（７）旧Ｖタンパク部分
；（ｍ）タンパクＣＮＢｒ１： （ｎ）　ＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部分：（ｏ）ペプチ
ドＮｏ、　１３１： （ρ）ペプチドＮｏ、　１３２： （ｑ）ペプチドＮＯ，１３４： （ｒ）ペプチドＮｏ、　１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ、　１３６：及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８： からなる群かれ選ばれるタンパク又はペプチドをコート
したＤＮＡを含めてなるＤＮＡ運搬運搬ｌダクター、　
　（ａ）タンパクＳｕｂｌ： （ｂ）　Ｓｕｂ　Ｉの旧Ｖタシバク部分：（ｃ）タンパ
クＳｕｂ２： （ｄ）　Ｓｕｂ　２の旧Ｖタンパク部分：（ｅ）タンパ
クＰＢ１ＲＦ： （ｆ）　ＰＢ１ＲＦの旧シタンパク部分：（ｇ）タンパ
クＰ８１ＭＮ： （ｈ）　ＰＢＩＭ、（７）　ＨＩＶタンパク部分；（１
）タンパクＰ８１ＳＣ （ｊ）　ＰＢ１ＳＣのＨＩＶタンパク部分；（ｋ）タン
パクＰＢＩいＭＪ２： （ｌ　）　ＰＢＩ＋、ｕ−＋、、ｒｐ（７）　ＨＩ　Ｖ
タンパク部分；（ｍ）タンパクＣＮ８ｒｌ： （ｎ）　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分；（ｏ）ペプ
チドＮｏ、　１３１： （ｐ）ペプチドＮｏ、　１３２； （ｑ）ペプチドＮｏ、　１３４： （ｒ）ペプチドＮｏ、　＋３５； （Ｓ）ペプチドＮｏ、　＋３６：及び （１）ペプチドＮｏ、　１３８： からなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパ
ク又はペプチドを使用して、流体中の抗旧Ｖ抗体を検出
又は定量するための免疫化学的検定法。

５、生物体液中の抗ＨＩＶ抗体を検出する方法であって
、以下の段階、すなわち （ａ）クンハクＳｕｂ　ｌ　；　Ｓｕｂ　ｌのＨＩＶタ
ンパク部分；タンパクＳｕｂ　２　：　Ｓｕｂ　２の旧
■タンパク部分；タンハ’）　ＰＢ１ＲＦ　：　ＰＢＩ
ｐｐノＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１ＭＮ　：　
ＰＢ１ＭＮの旧ソタンパク部分：タンパクＰＢ１ＳＣ：
ＰＢＩ９ｃのＨＩＶタンパク部分：タンパクＰＢ　ＬＭ
、ｈ。：　Ｐ　Ｒ１ＷＭＪ２のＨ１シタンパク部分：ク
ンハク（シＮＢｒ１　：　ＣＮＢｒ１の旧Ｖタンパク部
分：ベブチ）；’Ｎｏ．１３１；ペプチドＮｏ、　１３
２　：ベブチトＮｏ、１３４：ベブチドＮｏ、　１３５
：ペプチド’Ｎｏ、　１３６：及びペプチドＮｏ、　１
３８からなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタ
ンパク又はペプチドを付着させた固体相を含めてなる免
疫吸着剤を、試料中の抗ＨＩＶ抗体が免疫吸着剤に結合
するような条件下に、試験しようとする生物体液試料と
一緒に培養し； （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し：かつ（ｃ）試料中
の抗ＨＩＶ抗体を示すものとして抗体が免疫吸着剤に結
合されたかどうかを決定する；という段階を含めてなる
方法。

６、　ヒト血清又は血漿試料中の抗旧Ｖ抗体を検出する
方法であって、以下の段階、すなわち（ａ）タンパクＳ
ｕｂ　ｌ　：　Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク部分；タンパ
クＳｕｂ　２　：　Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク部分：
タンパクＰＢ１ＲＦ；　ＰＢ１ＲＦ（＋）　ＨＩＶタン
パク部分；タンパクＰＢ１ＭＮ　：　ＰＢ１ＭＮの旧ソ
タンパク部分：タンパクＰＢＩＳｃ＋ＰＢ１ＳＣの旧ソ
タンパク部分：タンパクＰＢ１ＷＭＪ２　：　ＰＢＩＷ
ＭＪ２のＨＩＶタンパク部分：タンパクＣＮＢｒ１　：
　ｆ、：ＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分；ペプチドＮｏ
、　＋３１　；ペプチドＮｏ、　１３２：ペプチドＮｏ
、　＋３４　：ペプチドＮｏ、　１３５；ペプチド’Ｎ
ｏ、　１３６：及びペプチドＮｏ、　１３８からなる群
から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパク又はペプ
チドで被覆したヒースからなる免疫吸着剤を用意し、 （ｂ＞試料中の抗ＨＩＶ抗体を免疫吸着剤に結合させる
ような条件下に、血清又は血漿試料と一緒に免疫吸着剤
を培養し； （ｃ）免疫吸着剤を試料から分離し： （ｄ）免疫吸着剤に結合されたヒト抗旧Ｖ抗体ごこヒト
抗（ヒト１ｇＧ）抗体が結合するような条件下に、免疫
吸着剤を標識１寸き抗（ヒト　１ｇＧ）抗体と共に培養
し、 （ｅ）未結合抗（ヒトＩｇｆ；）抗体から免疫吸着剤を
分離し、かつ （ｆ）試料中に抗Ｈ１〜抗体が存在する指針として抗体
が免疫吸着剤に結合された標識を評価する、という段階
を含めてなる方法。

７、タンパクＳｕｂ　ｌ、ＳｕｂｌのＨＩＶタンパク部
分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２の旧Ｖタンパク部分、
タンパクＰＢｌよ、ＰＢ１ＲＦのＨ１シタンパク部分、
タンパクＰＢ１ＭＮ、ＰＢＩＭ、ノ旧Ｖタンパク部分、
タンパクＰＢｌ、、、ＰＢ１ＳＣのＨＩＶタンパク部分
、タンパクＰ８１ｗｎ、、ｒ２、ＰＢ１ｗｒ＋、、ｒａ
の旧■タンパク部分、タンパクＣＮＢｒ１．　ＣＮ−Ｂ
ｒ１（ｌｌ）ＨＩＶタンパク部分、ペプチドＮｏ、　１
３Ｌ　ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　１３
４、ペプチドＮｏ、１３５、ペプチドＮｏ、　１３６、
及びペプチドＮｏ、　１３８からなる群から選ばれる少
なくとも一つの旧Ｖタンパク又はペプチドを固定させた
固体相を含めてなる、抗ＨＩＶ抗体用の固体相免疫化学
的検定法に使用される免疫吸着剤。

８、一つ以上の旧Ｖ分離体からの一つ以上のＨＩＶタン
パク又はペプチドを含めてなるワクチン組成物。

９、ハイブリットタンパク又はペプチドを含めてなるワ
クチン組成物であって、ハイアリットタンパク又はペプ
チドが異なる旧Ｖ分離体からの旧Ｖタンパク又はペプチ
ドのアミノ酸配列物を含めてなる場合の、ハイブリッド
タンパク又はペプチドを含めてなるワクチン組成物。

１０、生物体液中の抗旧Ｖ抗体を検出するためのキット
であって、 （ａ）タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂ　ｌの旧Ｖタンパク
部分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパ
ク部分、タンパクＰ８１ＲＦ、　Ｐ８１ｐｐノＨ１，Ｖ
タンパク部分、タンパクＰ８１、、、Ｐ８１１．ＩＮの
ＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＲ１ＳＣ、ＰＢ１ＳＣ
の旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１ＷＭＪ２、ＰＢＩ
ＩＪＭＪ２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＣＮＢｒ１
．　ＣＮＢｒ１のＨ！シタンパク部分、ペプチド’Ｎｏ
、　＋３ＬペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　
１３４、ペプチドＮｏ、１３５、ペプチド’Ｎｏ、　１
３６、及びペプチドＮｏ．Ｉ３８からなる群から選ばれ
る少なくとも一つの旧Ｖタンパク又はペプチドを固定さ
せた固体相を含めてなる免疫吸着剤であって、試料中の
抗旧Ｖ抗体を免疫吸着剤に結合させるような条件下に、
試験しようとする生物体液試料と一緒に培養する免疫吸
着剤、（ｂ）標識付きＨＩＶ抗体、及び （ｃ）免疫吸着剤と結合した標識を検出する手段を含め
てなるキット。

１１、　　リンパ球増殖応答の刺激を必要とするヒトを
、タンパクＳｕｂ　ｌ、Ｓｕｂ　ｌのＨＩＶタンパク部
分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２のＨＩＶタンパク
部分、タンパクＰ８１ＲＦ、　ＰＢ１ＲＦノＨＩＶタン
パク部分、タンパクＰＢ１ＭＮ、ＰＢ１ＭＮの旧Ｖタン
パク部分、タンパクＰＢ１ＳＣ、ＰＢ１ＳＣのＨＩＶタ
ンパク部分、タンパクＰＢＩｗＭ、、ｒ２、　ＰＢ１Ｗ
ＭＪ２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＣＮＢｒ＋、Ｃ
ＮＢｒ１のＨＩＶタシパク部分、ベブチ）”Ｎｏ、　１
３１、ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　１３
４、ペプチドＮｏ　、　１３５、ペプチドＮｏ、　１３
６、及びペプチドＮｏ、　１３８からなる群から選ばれ
る少なくとも一つの組換えＨ１ジエンＪ＼ローブタンパ
ク断片又はペプチドで処置することを含めてなる、ヒト
においてリンパ球増殖応答を刺激する方法。

＋２．　　タンパクＳｕｂ　ｌ、ＳｕｂｌのＨＩＶタン
パク部分、タンパクＳｕｂ　２．５ｕｈ２のＨＩＶタン
パク部分、タンパクＰＢＩＰＦ、　ＰＲｌＲＦの旧〜タ
ンパク部分、ダンバクＰＢＩＭＰＩ、ＰＢＩＦＩＮの１
（ＩＶタンパク部分、タンパクＰＢＩＳｃ。

ＰＢ１ＳＣの旧Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１ｗｒ＋
Ｊ２、ＰＢＩＩＪＭＪ２のＨＩＶタンパク部分、タンパ
ク＋：ＮＢｒ１．　ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分、
ペプチドＮｏ、　１３１、ペプチドＮｏ。

１３２、ペプチドＮｏ、　１３４、ペプチドＮｏ．１３
５、ペブチト’Ｎｏ、　１３６、及びペプチドＮｏ、　
１３８からなる群から選ばれるタンパク又はペプチドに
対してつくられる抗体を使用して、生物体液中の変異型
特異的ウィルスタンパクを検出する方法であり、（ａ）
試料中の抗原が固定化された抗ＨＩＶエンベロープ免疫
吸看剤に結合するような条件下に、すべてのＨＩＶエン
Ｊ＼ローアタンパクを結合させうる血清を含有した免疫
吸看固体相を生物体液試料と共に培養し、 （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し、 （ｃ）タンパクＳｕｂ　Ｉ、Ｓｕｂ　ＩのＩｔｌ〜タン
パク部分、タンパクＳｕｂ　２、Ｓｕｂ　２のＨＩＶタ
ンパク部分、タンパクＰＢＩＰＦ、　ＰＢＩ、ＦノＨＩ
Ｖタンバタ部分、ダンバクＰ８１Ｍ９、ＰＢ１ＭＮの旧
Ｖタンパク部分、タンパクＰＢＩ３ｃ、ＰＢ１ＳＣの旧
Ｖタンパク部分、タンパクＰＢＩＷＭＪ２、　ＰＢｌｌ
ＪＭ、＋２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＣＮ８ｒｌ
、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分、ベブチ）”Ｎｏ、
　１３１、ペプチドＮｏ、　１３２、ペプチドＮｏ、　
１３４、ペプチドＮｏ、１３５、ペプチドＮｏ、　１３
６、及びペブチｉ’Ｎｏ、　１３８からなる群から選ば
れるタンパク又はペプチドでの免疫化から誘導されるＨ
ＩＶ変異型特異的抗体を加え、かつ（ｄ）ＨＩＶ変異型
特異的抗体か■１＼Ｉタンパクを含有する免疫吸着剤に
結合したかどうかを測定することを含めてなる方法。

１３、特許請求の範囲第３項の運搬・＼クダーによって
形質転換されたボスト。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、以下のものからなる群から選ばれるタンパク又はペ
   プチドであって、 （ａ）第２Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ１と指
   定される１０ＫｄのＨＩＶ融合タンパク； （ｂ）第２表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ１のＨＩ
   Ｖタンパク部分； （ｃ）第３Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ２と指
   定される１８ＫｄのＨＩＶ融合タンパク； （ｄ）第３表に示すアミノ酸配列をもつＳｕｂ２のＨＩ
   Ｖタンパク部分； （ｅ）第４Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｒ＿
   Ｆと指定される２７ＫｄのＨＩＶ融合タンパク； （ｆ）第４表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ
   のＨＩＶタンパク部分； （ｇ）第５Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｍ＿
   Ｎと指定される２８ＫｄのＨＩＶ融合タンパク； （ｈ）第５表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ
   のＨＩＶタンパク部分； （ｉ）第６Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｓ＿
   Ｃと指定される２６ＫｄのＨＩＶ融合タンパク； （ｊ）第６表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ
   のＨＩＶタンパク部分； （ｋ）第７Ｂ表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｗ＿
   Ｍ＿Ｊ＿２と指定される２６ＫｄのＨＩＶ融合タンパク
   ； （ｌ）第７表に示すアミノ酸配列をもつＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ
   ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分；（ｍ）第８Ａ表に示す
   アミノ酸配列をもつタンパクＣＮＢｒ１； （ｎ）第８表に示すアミノ酸配列をもつＣＮＢｒ１のＨ
   ＩＶタンパク部分； （ｏ）第９表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ．
   １３１。 （ｐ）第１０表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
   ．１３２。 （ｑ）第１１表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
   ．１３４。 （ｒ）第１２表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
   ．１３５。 （ｓ）第１３表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
   ．１３６。 （ｔ）第１４表に示すアミノ酸配列をもつペプチドＮｏ
   ．１３８。 ２、Ｓｕｂ１と指定される１０ＫｄのＨＩＶ融合タンパ
   クである、特許請求の範囲１項のタンパク。 ３、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の
   範囲１項のタンパク。 ４、Ｓｕｂ２と指定される１８ＫｄのＨＩＶ融合タンパ
   クである、特許請求の範囲１項のタンパク。 ５、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の
   範囲１項のタンパク。 ６、ＰＢ１＿Ｒ＿Ｆと指定される２７ＫｄのＨＩＶ融合
   タンパクである、特許請求の範囲１項のタンパク。 ７、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分である、特許
   請求の範囲１項のタンパク。 ８、ＰＢ１＿Ｍ＿Ｎと指定される２８ＫｄのＨＩＶ融合
   タンパクである、特許請求の範囲１項のタンパク。 ９、ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分である、特許
   請求の範囲１項のタンパク。 １０、ＰＢ１＿Ｓ＿Ｃと指定される２６ＫｄのＨＩＶ融
   合タンパクである、特許請求の範囲１項のタンパク。 １１、ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分である、特
   許請求の範囲１項のタンパク。 １２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２と指定される２６Ｋｄの
   ＨＩＶ融合タンパクである、特許請求の範囲１項のタン
   パク。 １３、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分で
   ある、特許請求の範囲１項のタンパク。 １４、タンパクＣＮＢｒ１である、特許請求の範囲第１
   項のタンパク。 １５、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分である、特許請
   求の範囲１項のタンパク。 １６、ペプチドＮｏ．１３１である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 １７、ペプチドＮｏ．１３２である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 １８、ペプチドＮｏ．１３４である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 １９、ペプチドＮｏ．１３５である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 ２０、ペプチドＮｏ．１３６である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 ２１、ペプチドＮｏ．１３８である、特許請求の範囲第
   １項のペプチド。 ２２、（ａ）タンパクＳｕｂ１； （ｂ）Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分； （ｃ）タンパクＳｕｂ２； （ｄ）Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分； （ｅ）タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ； （ｆ）ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分； （ｇ）タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ； （ｈ）ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分； （ｉ）タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ （ｊ）ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分； （ｋ）タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２； （ｌ）ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分； （ｍ）タンパクＣＮＢｒ１； （ｎ）ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分； （ｏ）ペプチドＮｏ．１３１； （ｐ）ペプチドＮｏ．１３２； （ｑ）ペプチドＮｏ．１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ．１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ．１３６；及び （ｔ）ペプチドＮｏ．１３８； をコードしたＤＮＡからなる群から選ばれるＤＮＡ配列
   物。 ２３、タンパクＳｕｂ１をコードした、特許請求の範囲
   第２２項のＤＮＡ配列物。 ２４、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分をコードした、特
   許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ２５、タンパクＳｕｂ２をコードした、特許請求の範囲
   第２２項のＤＮＡ配列物。 ２６、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分をコードした、特
   許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ２７、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆをコードした、特許請求
   の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ２８、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分をコードし
   た、特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ２９、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎをコードした、特許請求
   の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３０、ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分をコードし
   た、特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３１、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃをコードした、特許請求
   の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３２、ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分をコードし
   た、特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３３、タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２をコードした、
   特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３４、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分を
   コードした、特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３５、タンパクＣＮＢｒ１をコードした、特許請求の範
   囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３６、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分をコードした、
   特許請求の範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３７、ペプチドＮｏ．１３１をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３８、ペプチドＮｏ．１３２をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ３９、ペプチドＮｏ．１３４をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ４０、ペプチドＮｏ．１３５をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ４１、ペプチドＮｏ．１３６をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ４２、ペプチドＮｏ．１３８をコードした、特許請求の
   範囲第２２項のＤＮＡ配列物。 ４３、（ａ）タンパクＳｕｂ１； （ｂ）Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分； （ｃ）タンパクＳｕｂ２； （ｄ）Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分； （ｅ）タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ； （ｆ）ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分； （ｇ）タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ； （ｈ）ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分； （ｉ）タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ （ｊ）ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分； （ｋ）タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２； （ｌ）ＰＢ１Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分； （ｍ）タンパクＣＮＢｒ１； （ｎ）ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分； （ｏ）ペプチドＮｏ．１３１； （ｐ）ペプチドＮｏ．１３２； （ｑ）ペプチドＮｏ．１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ．１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ．１３６；及び （ｔ）ペプチドＮｏ．１３８； からなる群かれ選ばれるタンパク又はペプチドをコード
   したＤＮＡを含めてなるＤＮＡ運搬ベクター。 ４４、タンパクＳｕｂ１をコードしたＤＮＡを含めてな
   る、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ４５、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分をコードしたＤＮ
   Ａを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ４６、タンパクＳｕｂ２をコードしたＤＮＡを含めてな
   る、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ４７、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分をコードしたＤＮ
   Ａを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ４８、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿ＦをコードしたＤＮＡを含
   めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ４９、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分をコードし
   たＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベク
   ター。 ５０、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿ＮをコードしたＤＮＡを含
   めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ５１、ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分をコードし
   たＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベク
   ター。 ５２、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿ＣをコードしたＤＮＡを含
   めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ５３、ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分をコードし
   たＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベク
   ター。 ５４、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ＿Ｊ＿２をコードしたＤ
   ＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター
   。 ５５、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分を
   コードしたＤＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３
   項のベクター。 ５６、タンパクＣＮＢｒ１をコードしたＤＮＡを含めて
   なる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ５７、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分をコードしたＤ
   ＮＡを含めてなる、特許請求の範囲第４３項のベクター
   。 ５８、ペプチドＮｏ．１３１をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ５９、ペプチドＮｏ．１３２をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ６０、ペプチドＮｏ．１３４をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ６１、ペプチドＮｏ．１３５をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ６２、ペプチドＮｏ．１３６をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ６３、ペプチドＮｏ．１３８をコードしたＤＮＡを含め
   てなる、特許請求の範囲第４３項のベクター。 ６４、特許請求の範囲第４４項のベクターであるｐＰＢ
   １−Ｓｕｂ１。 ６５、特許請求の範囲第４６項のベクターであるｐＰＢ
   １−Ｓｕｂ２。 ６６、特許請求の範囲第４８項のベクターであるｐＰＢ
   １＿Ｒ＿Ｆ。 ６７、特許請求の範囲第５０項のベクターであるｐＰＢ
   １＿Ｍ＿Ｎ。 ６８、特許請求の範囲第５２項のベクターであるｐＰＢ
   １＿Ｓ＿Ｃ。 ６９、特許請求の範囲第５４項のベクターであるｐＰＢ
   １＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２。 ７０、真核生物又は原核生物に運搬され、そこで複製さ
   れる、特許請求の範囲第４３項のＤＮＡ運搬ベクター。 ７１、特許請求の範囲第４３項の運搬ベクターによって
   形質転換されるホスト。 ７２、（ａ）タンパクＳｕｂ１； （ｂ）Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分； （ｃ）タンパクＳｕｂ２； （ｄ）Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分； （ｅ）タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ； （ｆ）ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分； （ｇ）タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ； （ｈ）ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分； （ｉ）タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ （ｊ）ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分； （ｋ）タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２； （ｌ）ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分； （ｍ）タンパクＣＮＢｒ１； （ｎ）ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分； （ｏ）ペプチドＮｏ．１３１； （ｐ）ペプチドＮｏ．１３２； （ｑ）ペプチドＮｏ．１３４； （ｒ）ペプチドＮｏ．１３５； （ｓ）ペプチドＮｏ．１３６；及び （ｔ）ペプチドＮｏ．１３８； からなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパ
   ク又はペプチドを使用して、流体中の抗ＨＩＶ抗体を検
   出又は定量するための免疫化学的検定法。 ７３、ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ１である、特許
   請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ７４、ＨＩＶタンパクがＳｕｂ１のＨＩＶタンパク部分
   である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定
   法。 ７５、ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ２である、特許
   請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ７６、ＨＩＶタンパクがＳｕｂ２のＨＩＶタンパク部分
   である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定
   法。 ７７、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆである
   、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ７８、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパ
   ク部分である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学
   的検定法。 ７９、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎである
   、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ８０、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパ
   ク部分である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学
   的検定法。 ８１、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃである
   、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ８２、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパ
   ク部分である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学
   的検定法。 ８３、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿
   ２である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検
   定法。 ８４、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩ
   Ｖタンパク部分である、特許請求の範囲第７２項による
   免疫化学的検定法。 ８５、ＨＩＶタンパクがタンパクＣＮＢｒ１である、特
   許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ８６、ＨＩＶタンパクがＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部
   分である、特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検
   定法。 ８７、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３１である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ８８、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３２である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ８９、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３４である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ９０、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３５である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ９１、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３６である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ９２、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３８である、
   特許請求の範囲第７２項による免疫化学的検定法。 ９３、生物体液中の抗ＨＩＶ抗体を検出する方法であっ
   て、以下の段階、すなわち （ａ）タンパクＳｕｂ１；Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部
   分；タンパクＳｕｂ２；Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分
   ；タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ；ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタ
   ンパク部分；タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ；ＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ
   のＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ；ＰＢ
   １＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１＿Ｗ
   ＿Ｍ＿Ｊ＿２；ＰＢＩ＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパ
   ク部分；タンパクＣＮＢｒ１；ＣＮＢｒ１のＨＩＶタン
   パク部分；ペプチドＮｏ．１３１；ペプチドＮｏ．１３
   ２；ペプチドＮｏ．１３４；ペプチドＮｏ．１３５；ペ
   プチドＮｏ．１３６；及びペプチドＮｏ．１３８からな
   る群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパク又は
   ペプチドを付着させた固体相を含めてなる免疫吸着剤を
   、試料中の抗ＨＩＶ抗体が免疫吸着剤に結合するような
   条件下に、試験しようとする生物体液試料と一緒に培養
   し； （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し；かつ （ｃ）試料中の抗ＨＩＶ抗体を示すものとして抗体が免
   疫吸着剤に結合されたかどうかを決定する；という段階
   を含めてなる方法。 ９４、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
   階が、生物体液の由来する種の抗原に対する標識付き抗
   体と共に免疫吸着剤を培養し、培養期間後、標識付き抗
   体から免疫吸着剤を分離し、免疫吸着剤に結合された標
   識を検出することを含めてなる、特許請求の範囲第９３
   項の方法。 ９５、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
   階が、タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部
   分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分
   、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタ
   ンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ
   のＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、ＰＢ
   １＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｗ
   ＿Ｍ＿Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパ
   ク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタン
   パク部分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１３
   ２、ペプチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペ
   プチドＮｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８からな
   る群から選ばれる少なくとも一つの標識付きＨＩＶタン
   パク又はペプチドと共に免疫吸着剤を培養し、標識付き
   ＨＩＶタンパクから免疫吸着剤を分離し、免疫吸着剤に
   結合された標識を検出することを含めてなる、特許請求
   の範囲第９３項の方法。 ９６、抗体が免疫吸着剤に結合されたかどうかの決定段
   階が、標識付きプロテインＡと共に免疫吸着剤を培養し
   、標識付きプロテインＡから免疫吸着剤を分離し、かつ
   免疫吸着剤に結合された標識を検出することを含めてな
   る、特許請求の範囲第９３項の方法。 ９７、ヒト血清又は血漿試料中の抗ＨＩＶ抗体を検出す
   る方法であって、以下の段階、すなわち（ａ）タンパク
   Ｓｕｂ１；Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分；タンパクＳ
   ｕｂ２；Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ
   １＿Ｒ＿Ｆ；ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分；タ
   ンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ；ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパ
   ク部分；タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ＋ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨ
   ＩＶタンパク部分；タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２；
   ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分；タンパ
   クＣＮＢｒ１；ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分；ペプ
   チドＮｏ．１３１；ペプチドＮｏ．１３２；ペプチドＮ
   ｏ．１３４；ペプチドＮｏ．１３５；ペプチドＮｏ．１
   ３６；及びペプチドＮｏ．１３８からなる群から選ばれ
   る少なくとも一つのＨＩＶタンパク又はペプチドで被覆
   したピースからなる免疫吸着剤を用意し、 （ｂ）試料中の抗ＨＩＶ抗体を免疫吸着剤に結合させる
   ような条件下に、血清又は血漿試料と一緒に免疫吸着剤
   を培養し； （ｃ）免疫吸着剤を試料から分離し； （ｄ）免疫吸着剤に結合されたヒト抗ＨＩＶ抗体にヒト
   抗（ヒトＩｇＧ）抗体が結合するような条件下に、免疫
   吸着剤を標識付き抗（ヒトＩｇＧ）抗体と共に培養し、 （ｅ）未結合抗（ヒトＩｇＧ）抗体から免疫吸着剤を分
   離し、かつ （ｆ）試料中に抗ＨＩＶ抗体が存在する指針として抗体
   が免疫吸着剤に結合された標識を評価する、という段階
   を含めてなる方法。 ９８、免疫吸着剤が更に動物タンパクのポストコートを
   含めてなる、特許請求の範囲第９７項の方法。 ９９、標識付き抗（ヒトＩｇＧ）抗体が動物抗体であり
   、血清又は血漿試料が同じ動物種の動物の正常な血清で
   希釈される、特許請求の範囲第９７項の方法。 １００、抗（ヒトＩｇＧ）抗体がヤギ抗体であり、血清
   又は血漿試料が正常なヤギ血清で希釈される、特許請求
   の範囲第９９項の方法。 １０１、抗（ヒトＩｇＧ）抗体が放射性同位元素、酵素
   、又は蛍光化合物で標識される、特許請求の範囲第９７
   項の方法。 １０２、タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク
   部分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部
   分、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶ
   タンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿
   ＮのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、Ｐ
   Ｂ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿
   Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタン
   パク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮ−Ｂｒ１のＨＩＶ
   タンパク部分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．
   １３２、ペプチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５
   、ペプチドＮｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８か
   らなる群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパク
   又はペプチドを固定させた固体相を含めてなる、抗ＨＩ
   Ｖ抗体用の固体相免疫化学的検定法に使用される免疫吸
   着剤。 １０３、固体相がカラス又はプラスチックビーズ、微量
   滴定板のウェル、又は試験管である、特許請求の範囲第
   １０２の免疫吸着剤。 １０４、更に動物タンパクのポストコートを含めてなる
   、特許請求の範囲第１０２項の免疫吸着剤。 １０５、一つ以上のＨＩＶ分離体からの一つ以上のＨＩ
   Ｖタンパク又はペプチドを含めてなるワクチン組成物。 １０６、薬理学的に受け入れられる賦形剤中のタンパク
   Ｓｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分、タンパクＳ
   ｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ
   １＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分、タ
   ンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパ
   ク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、ＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨ
   ＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２、
   ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分、タンパ
   クＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部分、ペプ
   チドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１３２、ペプチドＮ
   ｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペプチドＮｏ．１
   ３６、及びペプチドＮｏ．１３８からなる群から選ばれ
   るタンパク又はペプチドの抗原性状をもつ一つ以上のＨ
   ＩＶタンパク又はペプチドを含めてなる、特許請求の範
   囲第１０５項によるワクチン組成物。 １０７、ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ１の抗原性状
   をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン組成
   物。 １０８、ＨＩＶタンパクがＳｕｂ１のＨＩＶタンパク部
   分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項による
   ワクチン組成物。 １０９、ＨＩＶタンパクがタンパクＳｕｂ２の抗原性状
   をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン組成
   物。 １１０、ＨＩＶタンパクがＳｕｂ２のＨＩＶタンパク部
   分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項による
   ワクチン組成物。 １１１、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆの抗
   原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチ
   ン組成物。 １１２、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタン
   パク部分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項
   によるワクチン組成物。 １１３、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎの抗
   原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチ
   ン組成物。 １１４、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタン
   パク部分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項
   によるワクチン組成物。 １１５、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃの抗
   原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチ
   ン組成物。 １１６、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタン
   パク部分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項
   によるワクチン組成物。 １１７、ＨＩＶタンパクがタンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ
   ＿２の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によ
   るワクチン組成物。 １１８、ＨＩＶタンパクがＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨ
   ＩＶタンパク部分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第
   １０６項によるワクチン組成物。 １１９、ＨＩＶタンパクがタンパクＣＮＢｒ１の抗原性
   状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン組
   成物。 １２０、ＨＩＶタンパクがＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク
   部分の抗原性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によ
   るワクチン組成物。 １２１、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３１の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２２、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３２の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２３、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３４の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２４、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３５の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２５、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３６の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２６、ＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３８の抗原
   性状をもつ、特許請求の範囲第１０６項によるワクチン
   組成物。 １２７、ハイブリッドタンパク又はペプチドを含めてな
   るワクチン組成物であって、ハイブリッドタンパク又は
   ペプチドが異なるＨＩＶ分離体からのＨＩＶタンパク又
   はペプチドのアミノ酸配列物を含めてなる場合の、ハイ
   ブリッドタンパク又はペプチドを含めてなるワクチン組
   成物。 １２８、ＨＩＶ単離体がＨＩＶ＿III＿Ｂ及びＨＩＶ＿
   Ｒ＿Ｆである、特許請求の範囲第１２７項によるワクチ
   ン組成物。 １２９、生物体液中の抗ＨＩＶ抗体を検出するためのキ
   ットであって、 （ａ）タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部
   分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分
   、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタ
   ンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ
   のＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、ＰＢ
   １＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｗ
   ＿Ｍ＿Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパ
   ク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタン
   パク部分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１３
   ２、ペプチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペ
   プチドＮｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８からな
   る群から選ばれる少なくとも一つのＨＩＶタンパク又は
   ペプチドを固定させた固体相を含めてなる免疫吸着剤で
   あって、試料中の抗ＨＩＶ抗体を免疫吸着剤に結合させ
   るような条件下に、試験しようとする生物体液試料と一
   緒に培養する免疫吸着剤、（ｂ）標識付きＨＩＶ抗体、
   及び （ｃ）免疫吸着剤と結合した標識を検出する手段を含め
   てなるキット。 １３０、抗ＨＩＶ抗体が検出可能な標識として、抗（ヒ
   トＩｇＧ）抗体で標識されている、特許請求の範囲第１
   ２９項のキット。 １３１、リンパ球増殖応答の刺激を必要とするヒトを、
   タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部分、タ
   ンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分、タン
   パクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク
   部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿ＮのＨＩ
   Ｖタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、ＰＢ１＿Ｓ
   ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿
   Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分
   、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタンパク部
   分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１３２、ペ
   プチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペプチド
   Ｎｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８からなる群か
   ら選ばれる少なくとも一つの組換えＨＩＶエンベロープ
   タンパク断片又はペプチドで処置することを含めてなる
   、ヒトにおいてリンパ球増殖応答を刺激する方法。 １３２、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＳｕｂ１である、特許請求の範囲第１３１項による
   方法。 １３３、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＳｕ
   ｂ１のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範囲第１
   ３１項による方法。 １３４、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＳｕｂ２である、特許請求の範囲第１３１項による
   方法。 １３５、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＳｕ
   ｂ２のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範囲第１
   ３１項による方法。 １３６、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆである、特許請求の範囲第１３１項
   による方法。 １３７、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＰＢ
   １＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範
   囲第１３１項による方法。 １３８、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎである、特許請求の範囲第１３１項
   による方法。 １３９、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＰＢ
   １＿Ｍ＿ＮのＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範
   囲第１３１項による方法。 １４０、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃである、特許請求の範囲第１３１項
   による方法。 １４１、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＰＢ
   １＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範
   囲第１３１項による方法。 １４２、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２である、特許請求の範囲第
   １３１項による方法。 １４３、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＰＢ
   １＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパク部分である、特許
   請求の範囲第１３１項による方法。 １４４、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がタン
   パクＣＮＢｒ１である、特許請求の範囲第１３１項によ
   る方法。 １４５、組換えＨＩＶエンベロープタンパク断片がＣＮ
   Ｂｒ１のＨＩＶタンパク部分である、特許請求の範囲第
   １３１項による方法。 １４６、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３１
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １４７、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３２
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １４８、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３４
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １４９、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３５
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １５０、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３６
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １５１、組換えＨＩＶペプチドがペプチドＮｏ．１３８
   である、特許請求の範囲第１３１項による方法。 １５２、タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク
   部分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部
   分、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶ
   タンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿
   ＮのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、Ｐ
   Ｂ１＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿
   Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタン
   パク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタ
   ンパク部分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１
   ３２、ペプチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、
   ペプチドＮｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８から
   なる群から選ばれるタンパク又はペプチドに対してつく
   られる抗体を使用して、生物体液中の変異型特異的ウィ
   ルスタンパクを検出する方法であり、（ａ）試料中の抗
   原が固定化された抗ＨＩＶエンベロープ免疫吸着剤に結
   合するような条件下に、すべてのＨＩＶエンベロープタ
   ンパクを結合させうる血清を含有した免疫吸着固体相を
   生物体液試料と共に培養し、 （ｂ）免疫吸着剤を試料から分離し、 （ｃ）タンパクＳｕｂ１、Ｓｕｂ１のＨＩＶタンパク部
   分、タンパクＳｕｂ２、Ｓｕｂ２のＨＩＶタンパク部分
   、タンパクＰＢ１＿Ｒ＿Ｆ、ＰＢ１＿Ｒ＿ＦのＨＩＶタ
   ンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ、ＰＢ１＿Ｍ＿Ｎ
   のＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｓ＿Ｃ、Ｐ８
   １＿Ｓ＿ＣのＨＩＶタンパク部分、タンパクＰＢ１＿Ｗ
   ＿Ｍ＿Ｊ＿２、ＰＢ１＿Ｗ＿Ｍ＿Ｊ＿２のＨＩＶタンパ
   ク部分、タンパクＣＮＢｒ１、ＣＮＢｒ１のＨＩＶタン
   パク部分、ペプチドＮｏ．１３１、ペプチドＮｏ．１３
   ２、ペプチドＮｏ．１３４、ペプチドＮｏ．１３５、ペ
   プチドＮｏ．１３６、及びペプチドＮｏ．１３８からな
   る群から選ばれるタンパク又はペプチドでの免疫化から
   誘導されるＨＩＶ変異型特異的抗体を加え、かつ（ｄ）
   ＨＩＶ変異型特異的抗体がＨＩＶタンパクを含有する免
   疫吸着剤に結合したかどうかを測定することを含めてな
   る方法。 １５３、ＨＩＶ変異型特異的抗体の検出が、 （１）吸着されたＨＩＶエンベロープタンパクを、ＨＩ
   Ｖ変異型特異的抗血清中に存在する抗原に特異的な標識
   付き抗体と共に培養し、 （２）培養後、免疫吸着剤と標識付き抗体を分離し、そ
   して （３）免疫吸着剤と結合した標識を検出する、という段
   階を含めてなる、特許請求の範囲第１５２項による方法
   。