JPH0222296A

JPH0222296A - 合成ペプチドと、これをヒト免疫不全ウイルスｂｐ１２０　エンベロープ蛋白に対する抗体の検出、ａｉｄｓ及び前ａｉｄｓ状態の診断のために使用する方法、並びにこれをワクチンとして使用する方法

Info

Publication number: JPH0222296A
Application number: JP1033493A
Authority: JP
Inventors: Chang Yi Wang; チャン・イー・ワン
Original assignee: United Biomedical Inc
Current assignee: United Biomedical Inc
Priority date: 1988-02-12
Filing date: 1989-02-13
Publication date: 1990-01-25
Also published as: CA1341285C; ATE154610T1; EP0328403A3; EP0328403B1; EP0328403A2; DE68928130T2; DE68928130D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、合成ペプチドをヒト免疫不全ウィルス（ｌ
１ｍ　ｇｌ）１２０１．：対する抗体、特１．：　１１
１　Ｖを中和する能力を有する抗体を検出するための固
相免疫吸着剤として用いる方法に関する。上記ペプチド
のアミノ酸配列は、１ＩＩＶの外エンベロープ蛋白ｇｐ
１２０の切片に対応する。これらのペプチドは高度の免
疫源性を有することが知られており、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ
，又はＩＩ　Ｉ　Ｖに感染した患者固体の血清中の抗体
と反応する。また、これらのペプチドは旧Ｖに対する中
和抗体の産生を誘導するために用いることができる。よ
り詳細にいえば、本発明はＨＩＶ−ｇｐ１２０外側蛋白
に対応する２８及び３８の定まったアミノ酸配列を有す
るペプチド類、それらの類似体およびそれらの混合物か
らなる群から選択された合成ペプチドを、ＨＩＶ−１２
０に対する抗体の検出のために用いることに向けられて
いる。特に、ＨＩＶ中和能力を何する抗体の検出に有用
である。この検出方法には、酵素免疫検定および他の免
疫検定の手法が含まれる。また、本発明は上記合成ペプ
チド類、これらの類似体またはこれらの結合体若しくは
ポリマーの形の混合物をＡＩＤＳ防止のための合成ワク
チン中の主要成分として用いることにより、ヒトを含む
健康な咽乳動物中において、ＨＩＶ　ｇｐ１２０に対す
る抗体価の高い抗体を生じさせるための方法にも関する
。

〔従来の技術〕

ヒト免疫不全ウィルスが人々の間に広がり始めてから、
ＡＩＤＳの流行は、これを沈静化するための治療または
予防の手段がないため、世界的な規模で確実に増大して
いる。旧■の特異な病原性および多様性のため、治療の
計画、試験および評価と、１１１ｖのためのワクチンに
関して新たな挑戦が行なわれている。当面は、ＩＨＶ感
染の検出と効果的なワクチンの開発のみが、この病気を
抑制および撲滅するための手段であるように思える。

ＨＩ　Ｖ感染に対する理想的なワクチンは、高度の免疫
源性を有し、Ｔ細胞およびＢ細胞の両者のウィルス特異
的免疫を誘導し、且つ関係のないキャリア蛋白をもたな
いものであるに違いない。この目的は、一般的にはウィ
ルス粒子全体またはウィルス粒子のサブユニットを用い
た従来の研究方法によって達成し得るにも拘らず、安全
性や天然抗原の利用可能性のような実際上の要件を考慮
することによって、多くの人々はＡＩＤＳのためのより
高度に技術化されたワクチン作製に向かっている。

ウィルス感染から保護するためのウィルス粒子サブユニ
ットワクチンの可能性に関する研究は、主としてＩＩ　
Ｉ　Ｖのエンベロープ蛋白、前駆体ｇｐｔｅ。

蛋白およびその誘導外部蛋白ｇｐ１２０、並びにトラン
スメンブラン蛋白ｇｐ４１に向けられている。

１１１ｖのトランスメンブラン蛋白ｇｐ４１は、感染し
た全ての固体が、ｇｐ４１に対する抗体を発現する点に
おいて高度の抗原性を有することが見出されている。該
抗体はｇｐ４１切片を含む再結合蛋白によって（１）、
或いはこの蛋白のウェル限定領域をカバーする合成ペプ
チドによって（２）夫々検出されている。

ＨＩＶに感染した固体がｇｐ１２０に対する抗体を作る
ことについては、多くの記録がある。しかし、この分子
の免疫部位およびこれに対応するアミノ酸配列は未だ同
定されていない。

最近の文献には、ワクチンのための好適な候補の発見に
向けられた熱心な研究の状況が報告されている（４）。

これらの研究は、主に１１１■工ンベロープ等蛋白の外
部蛋白ｇｐ１２０の使用に向けられている。天然のｇＰ
１２０はＩＩ　Ｉ　Ｖ産生細胞系から精製されるが、極
めて低い収率しか得られない（３）。更に、天然のｇｐ
１２０はＣＤＩ陽性細胞に対して毒効果を示すが、温和
な中和抗体価しか誘導しない。また、チンパンジー宿主
を用いた研究では、抗体依存性細胞に媒介された細胞毒
性の誘導は不成功に終った。

全エンベロープ蛋白ｇｐ１８０　、外部エンベロープ蛋
白ｇｐ１２０またはｇｐ１２０の一部を含む再結合蛋白
が、昆虫細胞（５）　、哺乳動物細胞（６）、酵母細胞
（７）および大腸菌（８）の中で製造されている。また
、精製ｇｐ１２０は細胞リセブタＣＤ４に結合すること
（９，１０）、および免疫化された動物から中和抗体を
誘導すること（１１）が示されている。ｇｐ１２０の小
切片に相当する合成ペプチドを用いた報告は、免疫活性
を有する種々の領域を明らかにした。これらの領域には
、数人の１＋　１　Ｖ感染患者から得た血清に反応する
二つの温和な抗原領域（１２，１３）と、ヘルパーＴ細
胞抗原部位の典型としての二つの領域（１４）と、ＩＩ
　Ｉ　Ｖリセブタ結合およびＴ細胞感染性を阻害する一
つの領域（１５）と、最低の中和抗体を誘導する一つの
領域（１８，１７）とが含まれる。

パート等は、１１２５でラベルした旧ｖ１２０の脳膜Ｔ
４抗原に対する結合阻害能をもった８量体ペプチド、即
ちペプチドＴが、イン・ビトロにおいてヒトＴ細胞のＩ
Ｉ　Ｉ　Ｖ感染をブロックすることを報告しティる（ｔ
５）ｏシース等は、ＨＩＶ−ｇｐ１２０　（７）１６８
体ペプチドに相当するペプチドＴＩと称される抗原部位
の同定を報告している。この抗原部位は、特異的にＴ細
胞免疫を誘導するものである。しかし、このペプチドと
ＩＩ　Ｉ　Ｖ感染固体から誘導された血清抗体との間の
免疫反応性に関しては報告されていない（１４）。ポー
カ−等は、ＨＩＶ−ｇｐＬ２０　ｔ７）　ｆｙ　ルボキ
シ末端における保存領域に由来する１５量体ペプチド８
１）−２２が、ＨＩＶ感染固体の抗体との間で温和な免
疫反応性を示すことを報告した。しかし、抗ｇｐ１２０
抗体に反応性のこれら５Ｐ−２２ペプチドは、非中和性
であることが明瞭に示されている。ポーカ−等の報告と
６反対に、チャン等は、ポーカ−等の５Ｐ−２２とオー
バラップする配列を有する合成３０量体ペプチドがｇ９
−１２０に対する中和抗体を誘導する弱い免疫活性を示
すことを記載している（１６．１７）。同様に、コサン
ド等は数人の１１１■感染固体から得た血清抗体に対し
て温和な抗原特性を有する、ペプチド３Ｂ−ＢＳＡとし
て特定されたペプチド結合体を記載している（１３）。

コサンドのペプチド３６は２４量体で、ポーカ−の５Ｐ
−２２ペプチド及びチャンの３０量体ペプチドとオーバ
ラップするアミノ酸配列を有している。

これらのペプチド類、そのアミノ酸配列および報告され
た免疫活性を第１表に纏めて示した。

ｇｐ４１及びｐ２４　ＨＩＶ蛋白上の高度抗原性エピト
ープの同定および特徴付けにおいて、以前の我々の試み
は、ウィルスの代りに合成ペプチドを同相免疫吸容剤に
用いた効率的なＩＩ　Ｉ　Ｖ抗体スクリーニングおよび
診断方法の開発を可能とした（２）。ヒト・レトロウィ
ルス蛋白、特にＨＩＶ　ｇｐ１２０蛋白上のエピトープ
に対する中和抗体の反応性マツピングにおける同様の仕
事が、ＡＩＤＳの蔓延を成功裏に防止するために、高中
和抗体価および特異的細胞免疫応答を誘導する合成ワク
チンの設計および開発の途上で、別の挑戦として残され
ている。

二の出願においては、アミノ酸に対する標準−文字記号
が全体を通して使用される。これらは以下に示すように
アミノ酸を表わす。

アラニンアルギニンアスパラギン酸アスパラギンシスティングリジングルタミン酸グルタミンヒスチジンイソロイシンロイシンリジンメチオニンフェニルアラニンプロリンセリントレオニントリブトファンチロシンバリン以下に引用文献を列記する。

１　　）　　Ｃｈａｎｇ　　、　　Ｔ、Ｗ、ら　　　Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　Ｓ　　３Ｓ　　９２）　
Ｗａｎｇ％Ｊ、Ｊ、Ｇ、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃ
ａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ。

８３．９７０９−９７１３　（１９８８）３　）　Ｍａ
ｔｔｈｅｖｓ、　Ｔ、Ｊ、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａ
ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８３．９７０９−９７Ｈ（１
９８Ｂ）４　　）　　Ｈｏｍ５ｙ　　Ｓ　Ｊ、ら　　　
Ｉｓ−ｕｎｏｌｏｇｙ　　Ｔｏｄａｙｓ　　　８、　１
９３−１９６　　（１９７ｇ）５　）　Ｒｕ５ｃｈｅ、　Ｊ、Ｒ，ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｃｊ、ＵｓＡ。

８４、Ｂ９２４−８９２８　（１９８８）６　）　Ｌａ
５ｋｙ　％、Ｌ、Ａ、ら　５ｃｉｅｎｃｅ　、　　２３
３、２０９−２１２　　（１９８Ｂ）８）　ｐｕｔｎｅｙ％　Ｓ、Ｄ、ら　５ｃｉｅｎｃｅ　
、　　２３４．１３９２−１３９５°（１’１８Ｂ）９　）　Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ　、　Ａ、Ｇ、ら　Ｎａｔ
ｕｒｅ　（Ｏンドン）、３１２、　７８３−７８８　　
（１９８４）１０）　ＭｃＤｏｕｇａｌｌＪ、Ｓ、ら　
Ｊ　、　１ｍｍｕｎｏｌ　、、ユ且、３１１１）　Ｒｏ
ｂｅｙ　、　Ｗ、Ｇ、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃ１．ＵＳＡ。

８３．７０２３−７０２７１２）　Ｐａ１ｋｅｒ、Ｔ、」、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
　Ｉ　、＾ｅａｄ、ｓｃ１．Ｕｓ＾、８４．２４７９−
２４８３　（＋９８７）１３）　ｃｏｓａｎｄ、　Ｗ、
　　米国特許４，６２９，７８３号１４）　Ｃｅａｓｅ
　、　Ｋ、Ｂ、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓ
ｃ１．ＵＳＡ。

８４．４２４９−４２５３　（１９８７）１５）　Ｐｅ
ｒｔ、　Ｃ，Ｂ、ら　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、
Ｓｅｉ、ＩＪＳＡ。

８３．９２５４−９２５８　　（１９８Ｂ）１６）　Ｃ
ｈａｎｈ　ＳＴ、Ｃ，ら　ＥＭＢＯｌ　５．３０６５−
３０７１１７）　Ｃｈａｎｈ　ＳＴ、Ｃ，ら　Ｅｕｒ、
Ｊ、１ｓａｕｎｏ１．、脛、１４６５−１４６８　　（
１９Ｈ）１ｇ）　　Ｍｅｒｒｌｒｉｅｌｄ、Ｒ，Ｂ、　　　Ｊ、
Ａ、Ｃ，Ｓ、、　８５、２１４９−１９）　Ｋａｏ　、
　Ｈ，Ｔ、米国特許出願０７／　１２１，４６４号２０
）　　Ｐｒ１ｎｃｅ、　　Ａ、Ｍ、ら　　Ｊ、ｏｒ　　
ｌｎｆ’ｅｃｔｉｏｕｓ　　Ｄｌｓｅａｓｅｓｓ　　　
１５Ｂ、Ｎｏ、２、　２６８−２７２　　（１９８７）
この発明は、ＨＩＶの抗体およびＨＩＶ−ｇｐ１２０ｃ
７）中和抗体に対する特異な免疫反応性を有する合成ペ
プチドであって、約１５ないし４０個のアミノ酸を有し
、その配列がＨＩＶ　ｅｎｖ遺伝子によってｎ＋ｖｇｐ
ｔ２０中にコードされた領域に対応し、（ｉ　）　　ＣＲＩＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡ
ＰＰＩＳＧＱＩＲＣ（ペプチド１２６）、（ｉｉ）　　ＱＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲ
ＩＱＲＣＰＧＲＡＰＶＴＩＧＫ（ペプチド１２７）、（ｌｌｌ）　　それらの類似体、および（ｉｖ）　　そ
れらの混合物からなる群より選択されるものである。

この発明の合成ペプチドは、生理的流体（ｐｈｙｓｉｏ
ｌｏｇ）ｃａｌ　Ｎｕｌｄｓ）中の旧■の抗体の検出に
有用であり、特に、生理的流体中の旧Ｖ−ｇｐ１２０の
中和抗体の検出に有用である。

この発明のペプチドはまた、ヒトを含む動物の免疫のた
めのワクチン中において、キー成分（ｋｅｙ　ｃｏｍｐ
ｏｎｅｎｔｓ）として、ＩＩ　Ｉ　Ｖの抗体の産生を誘
導するのに役立つ。

この発明は、ウィルスゲノムのｅｎｖ領域によってコー
ドされたＨＩＶ　ｇｐ１２０の外部エンベロープタンパ
ク質を免疫学的に模倣した新規ペプチドを提供する。

このペプチドは、ｇｐ　１２０のｂ９７０５３からｂｐ
　７１３６の領域内にコードされた、ＣＲ１にＱＩ　ＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧ
ＱＩＩ？Ｃ（ペプチド１２６）またはｂｐ　６６６９からｂｐ　６７８７の領域内にコ
ードされた、ＱＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧ
ＲＡＰＶＴＩＧＫ（ペプチド１２７）に相当するアミノ酸配列を有する。ここでは、識別を容
易にするために、このペプチドをそれぞれペプチド１２
Ｂおよびペプチド１２７と呼称する。

表１１ａおよびｎｂに示すように、ペプチド１２６のア
ミノ酸配列はｇｐ　１２０においてより保存された領域
から採られ、ペプチド１２７のアミノ酸配列はｇｐ　１
２０において高度に可変の領域から採られた。

各々の新規ペプチドは、＋１１　Ｖの抗体との高いレベ
ルの免疫反応性を示し、血清中におけるＨＩＶの抗体の
検出のための高感度でかつ特異性の高いＥＩＡに有用で
ある。ペプチド１２６およびペプチド１２７を使用する
ことにより得られたＥＩＡの結果はまた、抗体中和力価
との高い相関を示し、血清中における旧■中和抗体の検
出のための迅速かつ簡便な方法として有用である。

表　　■　ａペプチド１２Ｇおよびその置換類似体＃ＢＦｆｌＯＲＵＶ２２１（ＸＢ２Ｆ２ＭＪ２ドＹ５Ｆに＾ＬＨＩＶ−２ＩｖＣＲｒ）ＣＱＨＮＭＷＱＥＶＧ）ＣＡＭＹＡＰＰＩ’５
ＧＯＩＲＣ−−−−−Ｆ−−−−−−−−−−−−−−
−−−−−−−−−−−−−ｒ　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　−−−−−−−−−−−−−−に−−
−−−−−−−−−−−−−−＝＝＝＝＝＝＝＝＝−−
−−Ｇ−−−５−−−−−−−−−−−−Ｇ−−−−−
−−−−−Ｑ−−−−−＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋
＋−Ｉ　−−−−−−−−−−−＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋
＋＋＋＋＋＋−−−−−−−−に−＝−−−−−−−−
−に丁−−−−−−−−−Ａ−Ｖ−ドー−−Ｈ−−−−
−−Ｔ−ＨＫ−−ＲＮＶ−Ｌ−−ＲＥ−！ＬＳ−＝−ｉ
＝＝＝＝＝［−＝−−−−−−Ｄ−τ−（ＨＩＶ−２，
！：比較して）二の配列は、ｂｐ７０５３ないしｂｐ’
ｙ　１８３の領域にコード化された原型＋１１Ｖ　（Ｂ
ＩＩＩＯ）から採られたｇｐ１２０エンベロープタンパ
ク質配列に由来する。この配列は、ｇｐ１２０のより保
存された領域を表わす。この領域に由来するアミノ酸配
列を有し、種々の１１＋Ｖ単離体を示す類似体もまた存
在する。

表　　ｎｂペプチド１２７およびその置換類似体ＨＩＯＢＲυ Ｖ２２ＸＢ２Ｆ２ｄにＪ２Ｙ５ＨＦＡＬＨＩＶ−２５工ＶＩＲＩＱＲＧ’ＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＴ−−−−一膚−−□−−Ｒ−−−−−−Ｅ−−＾□”
　　　　　　　　　　　−Ｙ−−−−−−Ｈ−Ｔ−ＲＥ
−−−−−”−−−Ｙ−−Ｖ−Ｒ−Ｌ５−”−−−−Ｒ
−ＲＥＩＫ−−−−−ｆｆ−−−−に−Ｇ−Ａ−”−−
−一τＩ、ＹＡＲＥ−Ａ−−Ｑ−−ｊ−−−−、−−−
ＴＫ”−−−７ＩＹＡＴ−ＱＥτ−Ｔ−−−１−−−Ｇ
−−−−ＲＧ−ＨＦ”−−−Ｑ−ＬＹ−τ−ＩＫＹＹＮ
ＬＳＬＨＫ−−Ｇ−に−Ｖ−Ｑ−ＭＬＭＳ＃％Ｈ−マＦ
Ｈ５ＨＹＱ−Ｈ−−−ＴＭ’ＫＣＲ−−Ｎ−ＬＰＶＴ　
ニー−””ＡＬ−−−−’”Ｑ（ＨＩＶ−２と比較して
）この配列は、ｂｐ８６６９ないしｂｐ６７６７の領域に
コード化すｔＬｌ：１１１ｖ株（Ｂ１１１０）から採ら
れたｇｌ）１２０工ンベロープタンパク質配列に由来す
る。この配列は、ｇｌ）１２０の可変領域を表わす。こ
の種々のＩＩ　Ｉ　Ｖ株からの配列の類似体もまた存在
する。

★　最適の配列のために保留した空白部分この発明が意
図によると、ＨＩＶの抗体に対する特異的な免疫反応性
を有し、特にＨＩＶ　ｇｐ１２０中和抗体の検出に有用
なペプチドは、ＨＩＶ　ｇｐ１２０中にコードされた領
域に対応する約１５ないし４０のアミノ酸からなる配列
を有するペプチドであり、（ｉ　）　　ＣＲＩＫＱＩ！
ＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣ（ペプチ
ド１２６）、（ＩＩ）　　ＱＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲ
ＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫ（ペプチド１２７）、（１ｊ１　）　　それらの類似体、および（１ｖ）　　
それらの混合物からなる群より選択されるペプチドを有する。

１１１ｖの抗体およびＨＩＶ　ｇｌ）１２０に対する特
異的な免疫反応性を保持する限りにおいて、異なるレト
ロウィルス株の異なるエピトープをより効果的に模倣す
るために、アミノ酸の保存置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｌ
ｖｅ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　）もしくは非保存置
換、除去または付加を導入することによりペプチドを変
形することができる。

興味深いペプチドおよび類似体は、ＨＩＶ　ｇｐ１２０
中にコードされた配列内に含まれる約１５のアミノ酸、
通常５０未満、より一般的には約４０未満のアミノ酸を
含み、かつ以下に示す配列の一つに対応する。

ＣＲＩＫＱＩＩＮＭＶＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱ
ＩＲＣ（ペプチド１２６）またはＱＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧ
ＲＡＦＶＴＩＧＫ（ペプチド１２７）より大きいペプチドの全ての感受性が実質的に維持され
る限り、ペプチド断片はできるだけ小さい方が良い。あ
る場合には、重複していない２つ以上のペプチドを結合
させてより長いペプチドにすることが望ましい。このペ
プチドはまた、親と等しい感受性もしくは効率を、別々
にもしくは一緒に供給する個別のペプチドとして使用す
ることができる。

異なったレトロウィルス株の異なったエピトープをより
効果的に模倣するために、ペプチド内に保存もしくは非
保存置換を導入して変形させることができる。

さらに、異なる単離体の間の株の変種に株を合わせるた
めに、保存置換の調節および非保存置換を含む代替法の
中からの選択を行なうことができる。これらのペプチド
は、生理的試料中のｇｐ１２０エンベロープタンパク質
に対する抗体の検出に、個別にもしくは一緒に使用する
ことができる。アッセイプロトコルの性質によって、ペ
プチドは、ラベルするもしくはラベルしない、固体表面
に結合させる、担体もしくは他の化合物に重合させるも
しくは接合させるなどが可能である。

対象化合物が、）ＩＩＶレトロウィルスの少なくともＩ
　ＦＪｉＯ株のｇｐ１２０と免疫学的に競合することが
可能である限りにおいて、この発明で使用するポリペプ
チドは特定された配列と同一である必要はない。

この発明を具現する特定のペプチドはペプチド１２６　
　（２８Ｒ体）であり、以下に示すアミノ酸配列を存し
ている。

ＣＲＩＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱ
ＩＲＣ−Ｘ（ここで、Ｘは０１１またはＮｉ１２である
）この配列は、旧■の外部エンベロープｇｐ１２０の小
断片、またはそれらの類似体に対応する。

この発明を具現する別の特定のペプチドはペプチド１２
７　　（３３ｆｆｉ体）であり、以下に示すアミノ酸配
列を有している。

ＱＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧ
ＲＡＰＶＴＩＧＫ　−Ｘ（ここで、ＸはＯＨまたはＮｌ
＋２である）この配列はまた、ＨＩＶの外部エンベロー
プｇｐＬ２０の小断片、またはそれらの類似体に対応す
る。

このペプチドは、いくつかの方法で調製することができ
る。それらの比較的小さなサイズのために、このペプチ
ドは、ＭｅｒｒｌＮｅｌｄ　（１８）によって開発され
たような固相を利用した方策によって容易に合成するこ
とができる。ＭｅｒｒｉＮｅｌｄの方法は、参考として
ここに組込まれている。公知のプロトコルを有する種々
の市販自動ペプチド合成機が使用される。

この発明の化合物はまた、組換えＤＮＡ技術によっで調
製することができる。それらの調製において、望みのペ
プチドまたは選択されたエピトープを表わす任意の配置
状態にあるペプチドおよびそれらの類似体をコードする
ヌクレオチド配列は、ＤＮＡ合成の通常のルーチン法を
用いて調製することができる。ペプチド１２Ｂおよび１
２７またはそれらの類似体のアミノ酸配列によって指定
された特定のエピトープを含む人工タンバク質をコード
する合成遺伝子を組立てるために、Ｋａｏ　　（１９）
によって記述された簡単な方策によって、合成されたオ
リゴヌクレオチドを結合させる。そのようにして組立て
られた合成遺伝子を、最適な表現のために、大腸菌宿主
細抱に形質導入する。Ｋａｏによって記述された方法は
、参考としてここに組込まれている。

この発明のペプチドは、旧■の抗体との高い特異的免疫
反応性を示す。既知の血清試料について、ペプチド１２
６およびペプチド１２７を固相免疫吸着剤として使用す
るＥＩＡによって得られた結果と、これらの既知血清試
料について鑑定により従来得られた結果との比較は、ペ
プチド１２Ｂおよびペプチド１２７が、それらの免疫反
応性において、ＨＩＶの抗体に対して高度に特異的であ
ることを示している。これは、ペプチド１２Ｂおよびペ
プチド１２７が、Ｉｔ　ｌ　ＶのｇｐＬ２０領域におけ
る反応性の高いエピトープを同定することを示している
。

公知の中和滴定を用いて特徴付けした血清３０ウエルに
ついて行なった、ペプチド１２６およびペプチド１２７
を用いたＥＩＡによる血清学的陽性（ｓｅｒｏｐｏｓｌ
Ｈｖｌｔｙ）の分析は、スペアマン・ランク相関係数（
Ｓｐｅａｒｓａｎ　Ｒａｎｋ　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
　Ｃｏｅｆ’！’１ｃｌｅｎｔ）によって算出されたよ
うな高度の相関を示した。上記スペアマンφランク相関
係数は、ペプチド１２Ｂに対してｒ　＝　０．９４９　
、ｐ　＜　０．００１であり、ペプチド１２７に対して
「〜（ｌＪｌ１８　、ｐ　＜　０．ＯＱｌである。これ
は、ペプチド１２６またはペプチド１２７を使用する迅
速なＥＩＡ法が、時間のかかる血清中和抗体力価を７１
）Ｉｔする方法の代わりに使用することができることを
意味している。

従来、１１１ｖ中和抗体力価は、非常に時間がかかリ、
かつ変動が非常に大きい結果を出す逆転写酵！検定によ
って決定されている。例えば、Ｐｒ１ｎｃｅらは半自動
マイクロタイター検定を記述した。この検定は、有意義
なデータを得るために、ＩＩ　Ｉ　Ｖウィルスを有する
血清試料を１４ないし２１日間培養し、次いで、１２回
の分裂における各試料の逆転写酵素の活性を繰り返し測
定する必要がある。この方法は非常に時間がかかり、か
つ変動がある。さらにＰｒｆｎｃｃらは、この方法によ
り得られた中和抗体力価と免疫吸着剤として非活性化し
たウィルスを用いたＥＬＩＳＡによって得られた中和抗
体力価との間に相関は全くないことを示した（２０）。

対照的に、この発明のペプチドを使用することにより高
い相関が見い出された。したがって、この発明のペプチ
ドを用いたＥＩＡは、高力価の中和抗体を含有する血漿
試料の選択および１１１　Ｖ中和抗体力価の定量測定に
使用することができる。

この発明のペプチドはまた、哺乳動物体内に高力価の抗
−ｇｐ１２０抗体の産生を引起こす免疫源として有用で
ある。これは、このペプチドが、ＨＩＶ感染症の予防の
ための免疫源およびワクチンとして有用であることを示
している。

以下に示す実施例は、免疫検定における固相抗原として
、または特異的かつ高力価の抗−！ｌＩＶｇｐ１２０抗
体を誘導するための種々の形態の免疫源としてのいずれ
かで、ペプチド１２６およびペプチド１２７を使用して
いる。この実施例は、この発明を説明するものとして提
供されるものであり、それらの範囲を制限するために用
いられるものではない。

実施例ＩＥＩＡによる旧Ｖ　　ｇｐ１２０に対する抗体の検出ペ
プチド１２６またはペプチド１２７でもって、９６ウエ
ルプレートのウェルを４℃、−昼夜被覆した。

このペプチドは、ＢＩＯ８ＥＡＲＣＨ９５００自動ペプ
チド合成機で標準固体用ペプチド合成により作られ、Ｉ
ＩＦ処理により樹脂から分離することにより作られたも
のである。各ペプチドを１００μＬ　　１０ｍＭ　　Ｎ
ａＨＣＯ３バッファ、ｐＨ９，５内のラグ／ウェルでウ
ェル上に被覆した。ウェルを燐酸塩バッファ生理食塩水
（ＰＢＳ）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の２５０μＬのゼラ
チン３重量％で、３７℃、１時間培養し、非特定蛋白結
合位置をブロックした。次いで０．０５容量％ツイン２
０含有ＰＢＳで３回以上洗浄した。患者又は正常な血液
供給者からの試験血清を２０容量％正常やぎ血清、１重
量％ゼラチン、及び０゜０５容量％ツイン２０を含むＰ
ＢＳにより、容積比ｌ：２０で希釈した。２００μＬの
希釈血清を各ウェルに加え、３７℃で１５分反応させた
。次いで、ウェルを、ＰＢＳ中の０．０５容量％のツイ
ン２０で３回洗浄し、非結合抗体を除去するようにした
。１００μＬホースラデイツシユ　パーオキシダーゼは
、１容量％正常やぎ血清で１：３０００の希釈で、やぎ
抗−人ＩｇＧと結合され、ＰＢＳ巾の０．０５容量％ツ
イン２ｏを第２抗体トレーサーとして各ウェルに３７℃
で１５分加え、陽性ウェル内で形成された抗体−抗原複
合物と混合するようにした。

ＰＢＳ内の０．０５容量％のツイン２０で５回ウェルを
洗浄し、非結合抗体を除去し、くえん酸ナトリウムバッ
ファ、ｐＨ５，０中に０．０４重量％のＯ−フェニレン
ジアミン（ＯＰＤ）と０．０１２容量％のヒドロジエン
　パーオキサイドを含む１００μＬの基質混合物と反応
させた。この基質を用いて、着色生成物の形成によるパ
ーオキシダーゼ　ラベルの検出をおこなった。反応の停
止を５ｏμＬのＩＭ　　Ｈ２ＳＯ４を加えることにより
おこない、着色生成物は４９２０−のＥＩＡリーダーを
用いて測定された。３回以上、吸収量を読み、１００正
常血液共給者血清の平均読み値は、陽性とされた。結果
を表ＩＩ＋に示す。

表Ｉｌ＋固体免疫吸着剤であるペプチド１２Ｂ及びペプチド１２
７を用いたＥＩＡにより　ＨＩＶに対する抗体の検出被
験者　ｇｐ４１／ｐ２４　ＨＩＶ　　ＧＰ１２０ベブ　
ＧＰ１２０ベブ−ＥＩＡスクリー　チド１２６／非　チ
ド１２７／非ニング分析＊ｌ　試験で非陽　試験で非陽
非試験で非陽　性　　　　　性性２゛ＡＲＣ８／８　　　　　　４／８　　　　　６／８
３　、　ＨＩ　Ｖ　　１７／１７　　　　　１６／１７
　　　　１２／１７血清保何円体４、悪性０／３７　　　　　　　　　　　　　　　　０／３７　
　　　　　　　　　　　０／コアリンパ白血病保有面体（ＡＴＬ）６・自己　０／１９　　　　　　　０／１９　　　　　
０／１９免疫疾患注：　Ａ　Ｉ　ＤＳＳＡＲＣ，悪性リンバー白血病患者
からの血清は、詳細な患者の診断及び履歴とともに、ニ
ューヨーク大学医学学校のＤｒ、ダニエルＸ、ノウレス
、ロングアイランド　ジューイッシュホスピタルのＤｒ
、フレデリック　Ｐ、シーガルからの快諾にもとづく。

成人細胞白血病のＨＴＬＶ−１血清陽性個体の血清は、
日本赤十字から提供された。

自己免疫疾患の患者からの血清は、その診断及び履歴と
ともにノースショア大学病院のＤｒ、ニコラス　チオラ
ジーにより提供された。正常血液供給者からの人血漿は
、ハイランド血漿センター　Ｉｌｌで得られた。

＊血清陽性の試料のＨＩＶ−ＥＩＡ　ｇｐ４１／ｐ２４
　スクリーン分析の多くはＡ　　４９２ｎｍが２．００
を越える。

ＥＩＡのＡ４９２は、各種臨床データー点用ペプチド　
１２６及びペプチド１２７を使用するが、これは第１ａ
及びｌｂ図に示される。

グラフから分るように、ペプチド１２Ｂ及びペプチド＋
２７を用いたＥＩＡは、高程度の特異性が示され、ここ
では、全ての１１１　Ｖ血清陰性個体は、両分析でもっ
て陰性の結果を示す。これに対してＩＩ　Ｉ　Ｖ血清陽
性グループでは、各種程度の反応性を示した。

Ｅ１八基のペプチド１２Ｂでは、Ｅｌｌのペプチド＋２
７　（７０％）に比べて、より高い吸収量と、より広い
１１１ｖ血清陽性母集団（８２，５％）が観察された。

実施例２ペプチド１２Ｂ及びペプチド１２７を用いたＨＩＶ−ｇ
り１２０血清陽性は、本発明で記載された二つのペプチ
ドに対して特異的である。血清力価（ｔｉｔｒａｔｉｏ
ｎ）実験は、ペプチド１２６、ペプチド１２７、アミノ
酸配列７５＜　ＲＰＧＧＧＤＭＲＤＮＷＲ８ＥＬＹＫＹ
ＫＶＶＫ　Ｉ　ＥＰＬＧＶＡＰを持つた他のペプチド（
ペプチド０６５）及びアミノ酸配列が＾５ＴＴＴＮＹＴ
　（ペプチドＴ）の８７−　（８ｍｅｒ）ペプチドを用
いておこなわれた。「ペプチド０６５」及び「ペプチド
　Ｔ」は、ＨＩＶ血清陽性個体からの血清に免疫活性を
示さないことが観察された。

表１ｖ参照表１ｖ１１１Ｇ−ＧＰ１２０ペプチド１２８．１２７に関する
特定免疫活性帛釈　　　　　　　　　　　　　＾…１１．−Ｅｒ＾ｍ
ｏＮｏ。

Ｎ−９−１３Ｎｒ’ｙＨ１２＆　　　　ＡＩＰＩ＋ｓ　
　１２７　　　ヘ、ｔ、４ｆ　　０６５　　　　、Ｕ）
Ｊｋｇ　Ｔ１１２０　　　　　　　　　Ｌ６＆　　＋／
−０，０２２，５２＋／−０，ＯＬ　　　　０．０６　
４−／−０，ＯＬ　　　　０．０２　　Ｊ−０，００１
！＋１０　　　　　　　　２．ｂｌ、＋１−０．ＯＬ　
　　　２．０＆　　◆／−０，０１０，ＯＬ　　◆／−
０，ＯＬ　　　　０．０３　　中／−０，００１：８ｏ
　　　　　　　　ｚ、ｔｉｔ　　◆／−０，０２１，ム
ｌ　　４／−０，ＯＬ　　　０．０６　　＋Ｉ−０，０
２０，０２會／−０，ＱＯｂ１６０　　’　　　Ｌ、６
３◆ｌ−０，０２０，９３＋／−０，０１ｏ、ｏｓ＋ｚ
−ｏ、ｏｚ　　ｏ、ｏｏｉ−ｚ−ｏ、ｏｎｂ１２０　　
　　１．ｏ＆　＋／　−０，ＯＬ　　Ｏ，５５Ｊ　−０
，０００，０３◆ｌ−０，０００，０２Ｊ　−０，０Ｏ
Ｌ＋６１＋ＯＱ、６２　　◆／−０，０００，３２番／
−０，０００，Ｏ＆　　◆／−０，ＯＬ　　　　０．０
１　　＊Ｉ−０，００Ｌ：Ｔ２１１００．３６Ｊ−０，
０００，Ｌ９÷ノーｏ、ｏｏｏ、ｏｔ、参／−０．００
０．０３争／−０．００各種力価は、１１１ｖ血清陽性
試料で示されたペプチド１２６及びペプチド１２７の免
疫活性が第２ａ及び２ｂ図に示されたエピトープ（ｅｐ
ｉｔｏｐｅ　）に特定していることを示している。ペプ
チド１２フのみであり、ペプチド１２ＢやペプチドＴは
違うが、これはペプチド１２７に対する抗体免疫活性を
示す。

同様に、ペプチド１２６では、ペプチドＴにはなく、ペ
プチド１２７ではより少ない程度であるが、これはペプ
チド１２［１に対する免゛疫活性を示す。

実施例３総量が３０の血清を、セルカルチャー中で１１１ｖ感染
を中性化する能力を予め注意深く滴定した。

これは、以下の（１）〜（目ｌ）を用いたＥＩＡで１＝
４５で試験した。

（１）　ＧＰ４１／１）２４１１１Ｖ−ＥＩＡキット、
＋１１ｖ（７）抗体に対して高い特異性を持つものとし
て知られている３つのペプチドの混合物、即ちｐ２４領
域からの１１マーペプチド、ｇｐ４１領域からの１９マ
ーペプチド及び２１マーペプチド（ＵＢｌ、Ｌａｋｅ　
５ｕｃｃｃｓｓ、Ｎ、Ｙ、　）（＋ｉ）ペプチド１２Ｂ
、及び（Ｉｌｌ）固体用免疫吸着抗原としてのペプチド１２７
この研究の結果を表Ｖに示す。さらにデーター分析によ
り、各血清の抗体力価の中性化と、ペプチド１２Ｂ又は
ペプチド１２７でのその免疫活性との間に高い相関性が
あるということが示される。第３図参照。計算されたス
ピアマン　ランク　相関係数によれば、ペプチド１２６
ではｒ　−０，９４９ｓ　ｐ＜　０．００１そしてペプ
チド１２７ではｒ　−０，８８８、ｐ＜　０．００１で
ある。

血清の抗体力価の中性化を測定するのに用いられるこの
方法では、実施するのに１４〜２１日かカリ、多くの実
験的なエラー生じる。固体相免疫吸若抗原としてのペプ
チド１２Ｂ又はペプチド１２７を用いる急速Ｅ１八法と
、公知の中性化抗体力価との間に、高度合の関連性があ
ることから、これらのペプチド１２６又はペプチド１２
７を用いる急速ＥＩＡ法は、従来の煩わしいバイオ分析
に代えて、血清中性化抗体力価を決定することができる
ことを示している。

表Ｖ中性化分析及びＵＢＩ−＋１１Ｖ−ＥＩＡキ・ット（ｐ
２４／ｇｐ４１）及び免疫吸着抗原としてのペプチド１
２Ｂ　（ｇｐ　１２０）及び１２７　（ｇｐ１２０）を
用（箋たＥＩＡＩこよって試験された血清の結果実施例４血清転換をおこなった二人の患者からえた総量が１３の
後遺症的な出血分を、その反応性のために試験した。コ
ノ試験は、ｇｐ／４１／ｐ２４１１１Ｖ−ＥＩＡ試験キ
ット（Ｕ旧ルａｋｃ　５ｕｃｃｅｓｓ、Ｎ、Ｙ、　）及
びＥＩＡ法での免疫吸着剤としてのペプチド１２６及び
ペプチド１２７を用いた。この結果によれば、ｇｐ１２
０ペプチド１２Ｂに対する抗体を発展させる潜伏期間は
、ｇｐ４１／ｐ２４エピトープに対する抗体よりも長＜
、ｇｐ１２０ペプチド１２７に対する抗体を発展させる
潜伏期間はより長く、感染の過程中でかなり後になって
から生じることが示されている。第４ａ及び４５図２照
。

実施例５ペプチド１２６及びペプチド１２７とボビン血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）との結合（ｅｏｎｊｕｇａｔｌｏｎ）５
Ｉ１ｇの１３ｓＡを５μＬのＰＢＳ中で柔らかな音波（
Ｓｏｎｌｃａｔ　ｔｏｎ）で溶解した。この表面の浮遊
物に対して、４ＨのＩＩＦ分離されたペプチド１２６又
はペプチド１２７を加え、ついで４０μＬのグルタルデ
ハイド（２５％）を添加し、最終グルタルデハイド濃度
を０．２％とした。ペプチド−ＢＳＡ及びグルタルデハ
イド混合物を４℃で昼夜培養し、次いでＰＢＳの多重変
換（＊ｕｌＮｐｌｅ　ｃｈａｎｇｅｓ、その容積の２０
０倍）で広範囲の透析（ｄｉａｌｙｓｉｓ）を行なった
。透析されたペプチド−ＢＳＡ結合物を次いで完全又は
不完全フロイント補助薬と一緒に使用した。そして中性
ｔプログラム中で各動物への投与を行なった。

実施例６ペプチド１２Ｂ及び１２７のりシンポリマーの合成ペプ
チド１２６及びペプチド１２７のアクタメリック形態の
合成を４−メチルベンゼルヒドラジン（ＭＢＨＡ）領域
上で始めた。この領域上では、連続的なりｏｃ−Ｌｙｓ
　（ＢＯＺ）を結合して、８つ活性アミノ酸端部を持つ
多数の抗原ペプチドシステムを賦与した。８つ活性アミ
ノ酸端部を持つこのヘキサメリック　リジン樹脂上にあ
るペプチド１２Ｂ又はペプチド１２７の合成は、標準固
体用ペプチド合成方法を用いたリニアペプチドの合成に
類似している。

ペプチド１２６又はペプチド１２７の８つの単位を持つ
ポリーＬ−リジン（表Ｖｉａ及び表Ｖｌｂ参照）をつい
でＩＩＦ分離手順で固体相樹脂から解放し、酢酸で抽出
し、フリーズドライ（Ｉ）’０ｐｈｏ！　Ｉｚｅｄ）す
る。

その分子、すなわち得られたペプチド１２Ｂ及びペプチ
ド゛１２７のオクタマー（ｏｃｔａｍｅｒｓ）の単独バ
ンド５ＤＳ−ＰＡＧＩＥにより決定されるごとき分子量
は、それぞれ計算された分子Ｗ　２Ｂ、８００及び３１
．２００と関連している。ＩＩＰ分離オクタメリックペ
プチド１２６及びペプチド　１２７双方の分析では、０
４逆相ＨＰＬＣ中で広いピークが得られる。

表Ｖｌａペプチド１２Ｂオクトマーの図表ｖ＋ｂペプチド１２７オクトマーの図実施例７ギニア　豚　免疫　プロトコルダンカン　バートリー　の閉じられたコロニのランダム
飼育された雌のギニア豚で、４００〜４５０グラムのも
のを、全ての実験に使用した。各免疫化を上述の適用量
で投与した。この投与は、皮下及び皮肉の注射を１．０
ｍＬの容量で、２つのギニア豚の各メンバーに複数の位
置でおこなった。

４つのグループ、すなわちペプチド１２Ｂ−ＢＳＡ結合
物、ペプチド１２７−ＢＳＡ結合物、ペプチド１２Ｇオ
クタマー及びペプチド１２７オクトマーの全ては、免疫
化のために計画された。最初の免疫化に対して、１００
μｇのペプチド結合物又は０．５ｍＬ中のオクトマーを
等量の完全フロイント補助薬で混合し、１．０ｍＬ各動
物内に皮下皮内で複数箇所に注射した。２又は３週間の
後、それぞれが同じ免疫原の同一投与量を再度ブースタ
ーショットとして各動物内の皮下及び皮肉の双方に注射
した。ただし、この場合、不完全フロイント補助薬を使
用した。

心臓への穴開きにより動物の出血をおこなって、それら
の血清抵抗−ｇｐ１２０力価を周期的に監視した。そし
て次いでブースターショットを再度２乃至６週間ごとに
与えた。第６ａ、６ｂ、６ｃ、及び６ｄ図に示すように
、ペプチド１２Ｂ−ＢＳＡ、ペプチド１２Ｂオクトマ、
ペプチド１２７−ＢＳＡ及びペプチド　１２７オクトマ
ーは、ただ一つのブースターショットのあとの相当中性
化ペプチドに対して、全て高い力価の（＞　ｌ：１００
０〜１：ｌＯ，０００）抗体を誘導した。高い力価の抗
体は生来の！ＩＩＶ−ｇｐ１２０蛋白に対して逆反応的
であるが、これはまたウェスタンプロット分析で示され
るように作製される。第７図参照。

特定の免疫化機構で生成された免疫の応答の運動力学に
よれば、有効かつ立証レベルの高血清抗体力価が免疫の
過程、特にオクタメリック形態のペプチドで引き出され
ることを示している。第６ａ図参照。

この結果によれば、ＨＩＶ　ｇｐ１２０蛋白上にあるペ
プチド１２Ｂ及びペプチド１２７はいずれも高免疫原エ
ピトープを示していることを指摘している。先にペプチ
ド結合物又はそのポリマーの形で免疫化されたギニア豚
から得られた血清によれば、免疫ペプチドに対する高力
価の抗体を誘導し、ウェスタン　プロット　分析で述べ
られたような生来のｇｌ）１２０に対して高い逆反応で
あることが見出される。第７図参照。

全く顕許なことは、大きなビールスの外部エンベロープ
蛋白の微細な部分を示す合成ペプチドでは、大部分、抗
原／免疫原位置を真似るように操作することができ、こ
のことは中性化又は保護抗体は、明確なペプチドのと免
疫化することにより引き出すことができる。そして固体
相免疫吸召剤としてこれらの合成ペプチドを用いた所定
量のＥＩＳは、大部分が旧■感染個体に中にあるｇｐ１
２０に対する生来の抗体を検出するのに使用することが
でき、このことからその中性化能力は、これらのＥＩＡ
結果から得られた信号により予想することができる。中
性化抗体力価と高い関連性があることに基づけば、結合
又はポリマーの形のこれらペプチド、これら類似物及び
混合物は、合成ワクチンのための候補として有効である
。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図および第１ｂ図はそれぞれペプチド１２６およ
びペプチド１２７を固相免疫吸管剤として使用したＥＩ
Ａ検定の結果を示す図、第２ａ図および第２ｂ図はそれ
ぞれペプチド１２Ｂおよびペプチド１２７の免疫反応性
の特異性を示す図、第３図はペプチド１２６およびペプ
チド１２７を用いたＥＩＡにより得られた結果と中和抗
体力価との関係を示す図、第４ａ図および第４ｂ図はそ
れぞれペプチド１２Ｂおよびペプチド１２７の免疫反応
性を示す図、第５ａ図ないし第５ｄ図はそれぞれペプチ
ド１２Ｇ−ＢＳＡ　。ペプチド１２６八量体、ペプチド１２７−ＢＳＡおよび
ペプチド１２７Ａｍ体を使用して免疫したモルモットの
血清抗体を示す図、第６ａ図ないし第６ｄ図はそれぞれ
ペプチド１２Ｂ−ＢＳＡ　、ペプチド１２６八量体、ペ
プチド１２７−ＢＳＡおよびペプチド１２７Ａｍ体を用
いた免疫によって生成した高力価の血清抗体を示す図、
および第７図はウェスタンプロットの結果を示す図であ
る。〆フすＩ−″ＩＬ１７１：対ｆ５０．０．４９２ｎｍＦＩＧｕ日Ｅ　２７・ご％＄　１−′／２６１：う峠５′ノ“ごン０．０
．４９２ｎｍ亀、征ン（＾４９□。□）Ｑ臀碑市ぶ嶋（ｌ１（ｔ）訊象回東（１）ＦＩＧＵＲＥ５１０７［加埼戸漕ＦＩＧＵＲＥ　　６ｔｂ＋ウエヌタンフｂ−／トの町 ■ ｖ ■ 二２６−、Ｂ・、八１２’ＬＢＳ八］、２６　ｒｙｔ４１２７　、；ぐｂ十−

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ＨＩＶに対する抗体およびＨＩＶ−ｇｐ１２０に
対する中和抗体に対して特異的な免疫活性を有するペプ
チド組成物であって、下記ｉ）〜ｖ）からなる群から選択された、ＨＩＶエン
ベロープ遺伝子によってＨＩＶｇｐ１２０中にコードさ
れる領域に対応した約１５〜４０のアミノ酸配列を具備
するペプチド組成物。ｉ）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２６）ｉｉ）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２７）ｉｉｉ）上記の類似物ｉｖ）上記の結合体ｖ）上記のポリマーｖｉ）上記の混合物
（２）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２８）
を具備する請求項１に記載のペプチド組成物。
（３）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２７）を具備する請求項１に記載のペプチド組
成物。
（４）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２６）
と少なくとも５，０００の分子量を有する蛋白との結合
体を具備する請求項１に記載のペプチド組成物。
（５）前記蛋白が牛血清アルブミンである請求項４に記
載のペプチド組成物。
（６）下記のポリペプチドを具備する請求項１に記載の
ペプチド組成物。【アミノ酸配列があります】を具備する請求項１に記載のペプチド組成物。
（７）【アミノ酸配列があります】（ペプチド１２７）と少なくとも５，０００の分子量を有す
る蛋白との結合体を具備する請求項１に記載のペプチド
組成物。
（８）前記蛋白が牛血清アルブミンである請求項７に記
載のペプチド組成物。
（９）下記のポリペプチドを具備する請求項１に記載の
ペプチド組成物。【アミノ酸配列があります】
（１０）免疫検定において、請求項１に記載のペプチド
を免疫吸着剤として用いることによって、ＨＩＶに対す
る抗体の存在およびＨＩＶ−ｇｐ１２０に対する中和抗
体の存在を検出するための方法。
（１１）免疫検定において、請求項２に記載のペプチド
を免疫吸着剤として用いることによって、ＨＩＶに対す
る抗体の存在およびＨＩＶ−ｇｐ１２０に対する中和抗
体の存在を検出するための方法。
（１２）免疫検定において、請求項３に記載のペプチド
を免疫吸着剤として用いることによって、ＨＩＶに対す
る抗体の存在およびＨＩＶ−ｇｐ１２０に対する中和抗
体の存在を検出するための方法。
（１３）請求項４に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１４）請求項５に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１５）請求項６に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１６）請求項７に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１７）請求項８に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１８）請求項９に記載のペプチドを含有する組成物を
ワクチンとして用いることによって、ＨＩＶ感染を防止
するために哺乳動物を免疫化する方法。
（１９）請求項１に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２０）請求項４に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２１）請求項５に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２２）請求項６に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２３）請求項７に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２４）請求項８に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。
（２５）請求項９に記載のペプチドを哺乳動物に導入す
ることによって、ＨＩＶに対する抗体の前記哺乳動物中
での産生を誘導する方法。