JPH0198965A - クロマトグラフィー用吸着担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、アフィニティークロマトグラフィーをはじめ
として各種クロマトグラフィーに利用することのできる
クロマトグラフィー用吸着担体に関する。

従来の技術 クロマトグラフィー技術の１つとして、アフィニティー
クロマトグラフィーは互いに特異的に相互作用を及ぼし
合う物質対の親和性を利用して分離・精製を行なうもの
であり、例えば生体物質をその生物学的特性即ち分子上
のある特定の化学構造を識別して精製する場合に有用で
ある。

アフィニティークロマトグラフィー用吸着担体（アフィ
ニティーゲル）は、例えば不溶性の担体（マトリックス
）に結合基（スペーサー）を結合させて得られる活性支
持体の前記スペーサーにリガンドを結合させたものであ
り、このリガンドと互いに相互作用を及ぼし合う物質の
組合せを選択して吸着操作を行なう。

リガンドの１つとして、デキストラン硫酸は、代表的な
α−１，６−グルカンであるデキストランの部分的硫酸
エステルでヘパリン様の抗血液凝固活性を有し、またＬ
ＤＬ、ＶＬＤＬ等のりボタンバクと親和性を有すること
から、これをリガンドとしたアフィニティークロマトグ
ラフィーは、これらの血液凝固系因子やりボタンバク類
などの分離・精製や分析などに有用な手段を提供するも
のと考えられる。

例えばデキストラン硫酸をリガンドとしりボタンバクを
吸着目的物質とする様なアフィニティークロマトグラフ
ィーによる分離・精製や分析において、前記アフィニテ
ィークロマトグラフィー用吸着担体の主構成分である活
性支持体に望まれる性質としては、非特異的吸着が少な
いこと、高い多孔性を有すること、リガンドの結合が容
易であり固定化可能容量が大きいこと、化学的に安定で
ｐＨ域、塩濃度、温度の広範な条件下で十分安定であり
体積変化がないこと、十分な機械的強度と安定性を有し
流動特性が良いこと、生物学的汚染に耐えること、など
が挙げられる。

従来よりアフィニティークロマトグラフィー用吸着担体
の基材として用いられているセルロース、デキストラン
、ポリアクリルアミド、アガロース等は、必ずしもこれ
ら望まれる性質を具有していない。とりわけ、硬さが不
足した所謂ソフトゲルであるため流動特性が悪く、分離
特性が良くないという重大な欠点を有し、また寿命も短
い。

更に、近年用いられているシリカビーズは、硬さの点で
は満足できるものの、アルカリ性条件下では使用できな
いため、分離条件や溶出・洗浄の条件の選択に大きな制
約が加わるという問題点を有していた。

また、スチレン系重合体やアクリレート系重合体を基材
として用いる吸着担体も最近開発されたが、非特異的吸
着の問題で満足は得られていない。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、前記従来のクロマトグラフィー用吸着
担体の欠点を克服して、アフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着担体に望まれる前述した諸性質を十全に具有
するクロマトグラフィー用吸着担体を提供することにあ
る。

問題点を解決するための手段 本発明によって上記目的を達成し得るクロマトグラフィ
ー用吸着担体が提供される。

−３＝ 即ち、本発明は、（Ａ）グリシジルモノビニルエステル
又はグリシジルモノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレ
ングリコールジビニルエステルを主成分とし、前記（Ａ
）成分が（Ｂ）成分で架橋されたゲル状共重合体（以下
、本発明に係るゲル状共重合体という）の前記（Ａ）成
分に基づくエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合し
た水酸基変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変
性ゲル状共重合体に結合基を介して共有結合により結合
したデキストラン硫酸を含有する多孔性の共重合体から
成ることを特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体に
関する。

以下、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体について
説明する。

本発明に係るゲル状共重合体は、特開昭６０−１０４２
５６号公報等に記載されている様に、例えば、（Ａ）グ
リシジルモノビニルエステル又はグリシジルモノビニル
エーテルと（Ｂ）アルキレングリコールジビニルエステ
ルとを水不溶性の有機希釈剤の存在下で水性懸濁重合せ
しめて多孔性のゲルを得一　　４　− ることにより調製牙ることができるが、水性懸濁重合は
簡単な水中油型懸濁方式で行なうことができる。共重合
は有機希釈剤の存在下に行なわれ、この有機希釈剤の存
在に起因して、（Ｂ）のアルキレングリコールジビニル
エステル成分が主な架橋成分として作用し、（Ａ）のグ
リシジルモノビニルエステル又はグリシジルモノビニル
エーテル成分中のエポキシ基の大部分は開環することな
くそのまま生成共重合体中に残留せしめると共に、生成
する多孔性ゲルの孔径調整にも役立つ。

前記（Ａ）成分としては、炭素数３〜１２のモノビニル
カルボン酸のグリシジルエステルまたは炭素数３〜１２
のモノビニルアルコールのグリシジルエーテルが用いら
れる。これらのうち炭素数の少ないものが特に好ましく
用いられ、その例の中にはメタクリル酸グリシジルエス
テル、アクリル酸グリシジルエステル、アリルグリシジ
ルエーテル等が含まれる。

一方架橋成分として働＜（Ｂ）成分としては炭素数２又
は３のアル牛レンゲリコール、炭素数３のヒドロキシル
置換アルキレングリコールまたはそのポリアルキレング
リコールとアクリル酸もしくはメタクリル酸とのエステ
ルが好ましく用いられる。例としてエチレングリコール
ジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート
、プロピレングリコールジアクリレート、プロピレング
リコールジメタクリレート、グリセロールジアクリレー
ト、グリセロールジメタクリレートの如きアルキレング
リコールまたはヒドロキシル置換アルキレングリコール
ジビニルエステル及びポリエチレングリコールジメタク
リレート、ポリプロピレングリコールジメタクリレート
の如きポリアルキレングリコールジビニルエステルが挙
げられる。

（Ａ）成分対（Ｂ）成分の割合は、前者１０〜９０モル
％に対し後者９０〜１０モル％とする。好ましくは（Ａ
）成分４０〜８０モル％、（Ｂ）成分６０〜２０モル％
である。

（Ａ）成分の半量以下をコモノマー即ちメチルメタクリ
レート、メチルアクリレート、酢酸ビニルの如き低級の
ビニルエステルで置きかえることができる。

用いられる有機希釈剤は、重合反応に不活性で、水に不
溶乃至難溶性であるが原料モノマーを溶解するものであ
ればよい。使用量はモノマー成分と有機希釈剤との合量
に基づき少くとも３０容量％とし、好ましくは４０〜８
０容量％である。本発明において好適に用いうる有機希
釈剤の例として、シクロヘキサノン、クロロベンゼン、
ベンゼン、トルエン、ｎ−プロピルアセテート、ｎ−ブ
チルアセテート、ｎ−オクタン等である。

水性懸濁重合は、遊離基発生触媒の存在下にそれ自体は
公知の常法に従って行なうことができる。

水相の量は有機相の量に基づきほぼ同容量またはそ熟思
上とし、特に制約はないが約１０倍容量までの量で用い
られる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させるについては、本発明に係るゲル状共重合体の
前記（Ａ）成分に基くエポキシ基の反応性を利用して行
うことができる。

水酸基を有する化合物としては、グリセリン、エリスリ
トール、ペンタエリスリトール、イノシトール、キシリ
トール、アンニトール、ソルビトール等のポリオール類
、グリシドールのようなエポキシ化合物類、グリセルア
ルデヒド、エリスロース、キシロース、アラビノース、
リボース、グルコース、ガラクトース、アンノース、フ
ルクトース等のようなアルデヒド基を有する化合物類、
トリメチロールアミノメタン、グルカミン、グルコサミ
ン、ガラクトサミン、フコサミン等のようなアミノアル
コール類が例示される。

これらの水酸基を有する化合物を本発明に係るゲル状共
重合体に結合させるに際しては、必要に応じて適宜触媒
や反応試薬などを用いて適当な溶媒下で行うことができ
る。触媒としては、例えば塩酸、硫酸などの酸類；水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸
カリウムなどのアルカリ類が主として用いられる。特に
、アルデヒド基を有する化合物については、本発明に係
るゲル状共重合体のエポキシ基をアンモニアやプロパン
ジアミンのようなジアミン類を用いて開環させ、次いで
水素化シアノホウ素ナトリウムのような還元剤の存在下
で結合させることができる。

又エポキシ基を有する化合物については結合後水により
開環して水酸基とすることができる。結合の溶媒として
は、水やジメチルホルムアミド、ジオキサン等が通常用
いられるが、必要に応じて緩衝液として用いたり無機塩
類を添加することもできる。

本発明に係るゲル状共重合体と水酸基を有する化合物は
、例えば重量比１７０．０３〜１、好ましくは０．０５
〜０．５、反応温度０℃〜１５０℃、好ましくは室温〜
８０℃、反応時間１〜７２時間、好ましくは２〜１２時
間の条件下で結合させることができる。

本発明に係るゲル状共重合体に水酸基を有する化合物を
結合させたもの（以下、本発明に係る水酸基変性ゲル状
共重合体という）について、更に結合基を導入するにつ
いては、結合基がデキストラン硫酸と共有結合可能な官
能基を有していることが必要であるが、結合基の構造に
ついて前記官能基を有すること以外に特に制限はない。

前記デキストラン硫酸と共有結合可能な官能基としては
、例えばエポキシ基、アミノ基、ヒドラジノ基、カルボ
キシル基等が例示される。この場合、結合基の導入は公
知の方法を用いて容易に行なうことができ、又、必ずし
も一段階の反応工程で導入する必要はなく、２段階以上
の反応工程に分けて導入することもできる。以下に、結
合基の導入の具体例について説明する。

（１）官能基としてエポキシ基を有する結合基の導入 ・　　例えば、本発明に係る水酸基変性ゲル状共重合体
の有する水酸基にグリシジル基を有する化合物を結合さ
せて、グリシジル基に基づくエポキシ基を有する結合基
を導入する（以下、本発明に係るエポキシ変性ゲル状共
重合体という。）。水酸基に結合される、グリシジル基
を有する化合物としては、エピクロロヒドリン、エピブ
ロモヒドリンなどのエピハロヒドリン類、エチレングリ
コールジグリシジルエーテル、１，４−ブタンジオール
ジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリ
シジルエーテルなどのジグリシジルエーテル類、１．３
−ブタジエンジエポキサイド、ｌ、７−オクタジエンジ
エポキサイドなどのアルキルジエンジエポキサイド類な
どが挙げられる。

グリシジル基を有する化合物を作用させるには、例えば
水酸基変性ゲル状共重合体に水酸化ナトリウムまたは炭
酸カリウム等の無機塩基の水溶液中でエピクロロヒドリ
ンを反応させるか、または水素化ホウ素ナトリウムを含
む水酸化ナトリウムまたは炭酸カリウム等の無機塩基の
水溶液中で、エチレングリコールまたは１．４−ブタン
ジオールジグリシジルエーテル、またはポリエチレング
リコールジグリシジルエーテルと反応させるなどして行
われる。用いられるポリエチレングリコールジグリシジ
ルエーテルの繰返し単位−Ｃ２Ｈ４０−の繰返し数が１
〜１０のものを用いるのが好ましい。

（１１）官能基としてアミノ基、ヒドラジノ基、カルボ
キシル基等を有する結合基の導入 例えば、アミノ基、ヒドラジノ基、カルボキシル基等を
有する結合基の導入方法としては、不発明に係るエポキ
シ変性ゲル状共重合体のグリシジル基に基づくエポキシ
基に、一般式（Ｉ）Ｈ２ＮＲ′ 〔式中、Ｒ′は水素原子、アミノ酸、ω−アミノアルキ
ル基又はω−カルボキシアルキル基を表わす。〕 で表わされるアミノ化合物を作用させ、又は該アミノ化
合物として前記Ｒ′がω−カルボキシアルキル基以外の
アミノ化合物を作用させた場合に更にアルキレンカルボ
ン酸無水物を作用させて、前記エポキシ基に、一般式（
ＩＩ） ＮＨＲ 〔式中、Ｒは水素原子、アミノ基、ω−アミノアルキル
基、ω−カルボキシアルキル基、ω−カルボキシアルカ
ノイル基、ω−カルボキシアルカノイルアミノ基又はω
−カルボキシアルカノイルアミノアルキル基を表わす。

〕 で表わされる結合基を導入する方法がある。

この場合、反応は、下記反応式に従って、行なうことが
できる。

なお、下記反応式中、（基剤＋ＣＨ−ＣＨ２は、＼　１ 本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体を表わつのエ
ポキシ基を表わすものとする。式中、ｍは１又は２、ｎ
、ｐ＋Ｑ及びｒはそれぞれ１以上（より好ましくは１〜
１２）の整数である。

（以下余白） −１＝ 本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキシ基
に、前記反応式中式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式
（Ｐ）の化合物を作用させるのは、溶媒の存在下で行な
うことができるが、これらの化合物が反応条件下で液体
の場合は特に溶媒を用いないでもよい。溶媒としては、
水が通常用いられるが、その他ｎ−ヘキサン、ベンゼン
、キシレンなどの炭化水素類、テトラヒドロフラン、ジ
オキサンなどのエーテル類、クロロホルム、クロロベン
ゼンなどの塩素化炭化水素類、エタノールやメチルセロ
ソルブなどのアルコール類、アセトンやメチルイソブチ
ルケトンなどのケトン類などの他、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキサイドなども用いられ、又これら
は単一でも混合溶媒系でも良い。又、特に触媒は用いな
いでもよいが、水酸化ナトリウムや炭酸カリウムなどの
アルカリ又はアルカリ土類金属の水酸化物又は炭酸塩な
どを用いることもできる。

一般式（Ｄｏ）の化合物としては、エチレンジアミン、
■、３　−ジアミノプロパン、■、４−ジアミノブタン
、■、５−ジアミノペンタン、１．６　−ジアミノヘキ
サン、１．７−ジアミノへブタン、１．８　−ジアミノ
オクタン、■、９−ジアミノノナン、１．１０−ジアミ
ノデカン、１．１２−ジアミノドデカンなどのジアミノ
アルカン類が挙げられる。

一般式（Ｐ）の化合物としては、グリシン、β−アラニ
ン、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、８−アミ
ノカプリル酸などのアミノカルボン酸類を例示すること
ができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、−般に次の
様な条件を選択して反応を行なうのが好ましい。

本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体の重量（ａ）
と式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物
の重量（ｂ）の比： ａ　：　ｂ＝１　：　０．３〜１０ より好ましくは、 ａ　：　ｂ＝１　：　ＯＪ　〜３ 反応温度二〇〜１５０℃、より好ましくは室温〜１００
℃、 反応時間：１〜６０時間、より好ましくは１〜３０時間
、 反応圧カニ常圧〜ｌＯａｔｍ　、より好ましくは常圧。

反応後の後処理についても特別な要件はなく、炉別、洗
浄等、通常行なわれている方法にて適宜実施される。

以上で得られた本発明に係るクロマトグラフィー用担体
は、式（Ｄ）又は一般式（Ｄｏ）の化合物を用いた場合
につき、次いで必要があれば、既に一般式で示した如く
活性支持基の末端のアミノ基を一般式（Ｅ）の酸無水物
を作用させることによりカルボキシル基を有する活性支
持基に変換することができる。反応の溶媒としては水が
通常用いられるが、その他テトラヒドロフラン、ジオキ
サンなどのエーテル類、酢酸などのカルボン酸類、ピリ
ジンなども用いられる。又、特に触媒は用いないでもよ
いが、塩酸、硫酸などの酸や、水酸化ナトリウムや炭酸
カリウムなどのアルカリの添加により、反応液のｐＨを
調整することもできる。

反応式中一般式（Ｅ）又は一般式（Ｅ゛）のアルキレン
カルボン酸無水物としては、コノ１り酸無水物、ゲルタ
ール酸無水物、アジピン酸無水物、ピメリン酸無水物、
スペリン酸無水物、アゼライン酸無水物、セパチン酸無
水物などを例示することができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、例えば前記
の式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物
のときと同様な条件を選択して反応を行なうことができ
る。

また、官能基としてカルボキシル基を有する結合基を導
入する別の方法として、水酸基を有するアミノカルボン
酸を本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合体のエポキ
シ基に作用させて結合させる方法がある。

水酸基を有するアミノカルボン酸としては、セリン、ホ
モセリン、スレオニン、４−ヒドロキシプロリン、４−
アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、Ｎ−）リス（ヒドロキシ
メチル）、メチルグリシン等のアミノ酸誘導体や、グル
コサミン酸等のアミノ糖誘導体などを例示することがで
きる。

結合の状態は、本発明に係るエポキシ変性ゲル状共重合
体のエポキシ基が水酸基を有するアミノカルボン酸のア
ミノ基と結合した結果、該エポキシ基は開環し、水酸基
と水酸基を有するカルボキシル残基が生成することにな
る。

水酸基を有するアミノカルボン酸を作用させる溶媒、触
媒及び反応条件については特に制限はなく、例えば前記
式（Ｄ）、一般式（Ｄｏ）又は一般式（Ｐ）の化合物を
作用させる場合と同じ様な条件にすることができる。

この様な水酸基を有するアミノカルボン酸を用いて結合
基を導入すると、前記基材以外、即ち結合基の部分に基
づく疎水性に由来する非特異的吸着をも排除することが
できる。

結合基にデキストラン硫酸を共有結合させるに際しては
、結合基が有する官能基に応じて必要であれば、適宜触
媒や反応試薬などを用いて適当な溶媒下で行なうことが
出来る。例えば触媒としては、塩酸や炭酸ナトリウム又
は炭酸水素ナトリウムなどの酸、アルカリが主として官
能基がエポキシ基又はカルボキシル基の場合に用いられ
、又、例えば反応試薬としてはＮ−ヒドロキシコハク酸
イミドとシクロへキシルカルボジイミドが官能基がカル
ボキシル基の場合に、又、１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミドのような縮合剤が
官能基がカルボキシル基、アミノ基又はヒドラジノ基の
場合に、又水素化シアノホウ素ナトリウムのような還元
剤が官能基がアミノ基又はヒドラジノ基の場合に用いら
れる等々を例示することが出来る。又溶媒としては通常
水が用いられるが必要に応じてリン酸や酢酸緩衝液とし
て用いることも出来、又塩化ナトリウムや硫酸ナトリウ
ムなどの無機塩類を添加して用いることも可能である。

デキストラン硫酸との反応条件については必ずしも制限
は無いが一般に次のような範囲で行なうことが適当であ
る。

結合基を結合させた水酸基変性ゲル状共重合体デキスト
ラン硫酸の重量比：　１　：　０．０３〜０．３、好ま
しくは１　：　０．０５〜０．２； 反応温度二〇℃〜１００℃、好ましくは４℃〜８０℃；
反応時間＝１〜７２時間、好ましくは２〜１２時間。

反応後の後処理にらいても特別な要件は無く、炉別、洗
浄等通常行なわれている方法にて適宜実施される。

発明の効果 本発明により提供されるクロマトグラフィー用吸着担体
は、前述のアフィニティークロマトグラフィー用吸着担
体として望まれる性質を総て具備する基剤を用い、これ
に適当な結合基を介してデキストラン硫酸を共有結合さ
せたものであるため、本発明の吸着担体を用いることに
より、従来のソフトゲルを用いた吸着担体と同じような
アフィニティークロマトグラフィー用充填剤として使用
できるばかりでなく、特に耐圧カラムに充填し、加圧下
でも充分使用することができるということは、作業時間
を大幅に短縮させるため、従って分離・精製の能率を大
きく向上させ得るという最大の利点が得られるものであ
り、この利点が例えば高速液体クロマトグラフィーへの
応用や工業用の分離・精製設備への応用を計るには不可
欠であることは言を俟たない。

特に前記の如く多くの利点を有するゲル状共重合体に対
し、やはり前記の如く結合基を介して共有結合によりデ
キストラン硫酸を結合させた吸着担体は、例えば、一般
に用いられている臭化シアンを介したアフィニティーク
ロマトグラフィー用吸着担体などに比して、使用時のリ
ガンドの脱落が無く、又結合基の長さを任意に調整する
ことが可能であるため、リガンドの目的物質に対する吸
着能が優れており、更に非特異的吸着も非常に少ないこ
と等も併せて本発明により提供されるクロマトグラフィ
ー用吸着担体の効果は大きい。

実施例 以下に、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体の製造
法について代表的な例を示し、更に具体的に説明する。

但し、これらは説明のための単なる例示であって、本発
明はこれらに何ら制限されないのは言うまでもない。

参考例　１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
１２ｇをアンモニア水（２５％）７２ｇ中に加え、６０
℃に加温しつつ、１２時間撹拌した。

次いで、ゲルを枦取し水で洗浄したところ、乾燥ゲル１
ｇ当り１，４ミリモルのアミノ基を担持させていること
が中和滴定により確められた。このゲルを０．２モルの
リン酸水素二カリウム塩水溶液３６ｇ中に加え、グルコ
ース７．９２ｇ及び水素化シアノホウ素ナトリウム７．
２ｇを加えて８０℃で１０時間撹拌した。ゲルを枦取し
水で洗浄し乾燥した後、無水酢酸ｔａｇ中に加え酢酸ナ
トリウム１８ｇを加えて室温で２時間撹拌した。次いで
、ゲルを枦取し水で洗浄した。こうして得られたゲル（
水酸基変性ゲル状共重合体）を内径４．６ｍｍ５長さ７
５ｍｎ＋のステンレス製カラムに充填し、高速液体クロ
マトグラフ装置を用いて、ブタノール及びエチレングリ
コールの保持時間比を求めたところ、次のような結果が
得られた。

＊ブタノール／エチレングリコールの 保持時間 参考例　２ 参考例１におけるブタノール及びエチレングリコールの
代りにα−キモトリプシノーゲンＡ及びオバルブミンを
用いて分析を行ったところ、次のような結果が得られた
。

溶離条件 溶離液■：０，１モルリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，０） −つト　− 溶離液■：溶離液■に１．８モル硫酸アンモニウム添加
、 溶離液■から溶離液■に６０分でリニアグラジェント 溶離速度：　１．Ｏｍｌ／分、 検出器：紫外分光光度計（２ｇＯｎＩ１１）参考例　３ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
、ｙ４ｇをジメチルホルムアミド１２ｍ１中に加え、更
にグリセロール１５ｍ１及び粉末水酸化カリウム１，５
ｇを加えて６０℃で３時間撹拌した。次いで、ゲルを消
散し水で洗浄した後、参考例１と同様のカラムに充填し
た。参考例２の（カラムＡ）の代りにこれを用い、他は
参考例２と同様の分析を行ったところ、α−キモトリプ
シノーゲンＡ及びオバルブミンは保持されなかった。

実施例　１ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ゲル状共重合体
を参考例１と同様にアンモニア水及びグルコースを用い
て水酸基変性し、更にエピクロロヒドリンでエポキシ基
を導入したゲル（エポキシ基：乾燥ゲル１ｇ当り０．３
５ミリモル）２ｇの０．１モル炭酸ナトリウム水溶液６
ｍｌにおける懸濁液にデキストラン硫酸ナトリウム塩（
分子量５０００）　１００■を加え６０℃で１０時間振
盪した。ゲルを消散し１モル塩化ナトリウム水溶液及び
水で洗浄した。こうして得られた吸着担体は、乾燥ゲル
１ｇ当りデキストラン硫酸ナトリウム塩を３抛ｇ担持さ
せていることが、未反応のデキストラン硫酸ナトリウム
塩を高速液体クロマトグラフィーで分析することにより
確められた。

実施例　２ 実施例１において、エピクロロヒドリンの代りに１．４
−ブタンジオールジグリシジルエーテルを用い、０．１
モル炭酸ナトリウム水溶液の代りに０．２モル炭酸水素
ナトリウムを用いて同様の操作を行なうことにより、乾
燥ゲル１ｇ当りデキストラン硫酸ナトリウム塩を１２ｍ
ｇ担持させている吸着担体が得られた。

実施例　３ 実施例１におけるエポキシ基を導入したゲルを更にアン
モニアと作用させて得た（アミノ基：乾燥ゲル１ｇ当り
０．２５ミリモル）ゲル２ｇをデキストラン硫酸ナトリ
ウム塩１００ｍｇの０．２モルリン酸水素二カリウム水
溶液６ｍｌにおける溶液に加え、次いで水素化シアノホ
ウ素ナトリウム約３０■を加えて６０℃で加熱して振盪
下で１５時間反応させた。

次いで、ゲルを消散し、１モル塩化ナトリウム水溶液及
び水で洗浄した後、０．２モル酢酸ナトリウム水溶液１
．　ｍｌ中に加え更に無水酢酸０．５ｍｌを加えて室温
で３０分振盪した後ゲルを消散し、水及び０、ＩＮ水酸
化ナトリウム水溶液で洗浄し再び水洗した。こうして得
られたゲルは乾燥ゲル１ｇ当りデキストラン硫酸ナトリ
ウム塩を１５ｍｇ担持させていることが確かめられた。

実施例　４ 実施例２におけるエポキシ基を導入したゲルを−つ只　
− 一　　２７　− 更に１，３−ジアミノプロパンと作用させて得た（アミ
ノ基：乾燥ゲル１ｇ当り０．３ミリモル）ゲルを実施例
３におけるアンモニアを作用させて得たゲルの代りに用
いて、他は実施例３と同様の操作を行うことにより、乾
燥ゲル１ｇ当りデキストラン硫酸ナトリウム塩を２２Ｉ
ｌ１ｇ担持させている吸着担体が得られた。

試験例　１ 実施例４で得られた吸着担体を内径４．６　ｍ１１％長
さ７５＋ｎｍのステンレス製カラムに充填し、高速液体
クロマトグラフ装置を用いてＶＬＤＬ　（超低密度リポ
タンパク質）　、ＬＤＬ　（低密度リポタンパクうな結
果が得られた。

分析条件 溶離液■：　０．０５モルリン酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７，４） 溶離液■：溶離液■に１モル塩化ナトリウム添加 溶離速度：　０．５　ｍｌ／分、 ムにあまり吸着されないことを示している。

試験例　２ 試験例１ｉ、：おｌするＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬ分
析条件 溶離液■：　０．０２モルトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７，
４）溶離液■：溶離液■に１モル塩化ナトリウム添加６
０分リニアグラジェント実施 溶離速度：　０．５　ｍｌ／分、 たα１−アンチトロンビンを示している。

フィー用吸着担体を用いた高速液体クロマトグラフ用カ
ラムによる分離吸着又は溶出のパターンを示すクロマト
グラム図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （Ａ）グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモ
   ノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレングリコールジビ
   ニルエステルを主成分とし、前記（Ａ）成分が（Ｂ）成
   分で架橋されたゲル状共重合体の前記（Ａ）成分に基づ
   くエポキシ基に水酸基を有する化合物が結合した水酸基
   変性ゲル状共重合体であって、更に該水酸基変性ゲル状
   共重合体に結合基を介して共有結合により結合したデキ
   ストラン硫酸を含有する多孔性の共重合体から成ること
   を特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体。