JPH02111788A - ペプチド誘導体およびその製法 - Google Patents
ペプチド誘導体およびその製法Info
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- JPH02111788A JPH02111788A JP1207055A JP20705589A JPH02111788A JP H02111788 A JPH02111788 A JP H02111788A JP 1207055 A JP1207055 A JP 1207055A JP 20705589 A JP20705589 A JP 20705589A JP H02111788 A JPH02111788 A JP H02111788A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
-
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
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- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
- C07K5/06043—Leu-amino acid
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- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は式■
Ｒ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒ ｏ −ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２−Ｃ
Ｈ２−ＣＨ２−Ｎ）（−Ｃ（＝ ＮＨ） −ＮＥ（２）
−Ｘ■ （ここで式■中、ＹはＨＮ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ （
ｎ ＝ １〜８）または結合であり、ＸはＣＮ 、 Ｃ
’Ｈ２ＯＨまたはＣＨＯでありモしてＲはアフイニテイ
クロマトグラフイーに適する支持体マトリックスまたは
水素原子である）を有するペデチＰ誘導体、その製法お
よび特にプロテアーゼの単離および精製のためのアフイ
ニテイクロマトグラフイーへのその使用に関する。
Ｈ２−ＣＨ２−Ｎ）（−Ｃ（＝ ＮＨ） −ＮＥ（２）
−Ｘ■ （ここで式■中、ＹはＨＮ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ （
ｎ ＝ １〜８）または結合であり、ＸはＣＮ 、 Ｃ
’Ｈ２ＯＨまたはＣＨＯでありモしてＲはアフイニテイ
クロマトグラフイーに適する支持体マトリックスまたは
水素原子である）を有するペデチＰ誘導体、その製法お
よび特にプロテアーゼの単離および精製のためのアフイ
ニテイクロマトグラフイーへのその使用に関する。
近年、アフイニテイクロマトグラフイー技術によるプロ
テアーゼの単離がかなり改善されてきた。この方法は物
質量の特異的な相互作用を利用するものである。この目
的にはまず物質を不溶性の支持体（マトリックス）にリ
ガンＰとして共有結合させる。このリガ／）′は単１１
１スべき物質と複合物様の相互作用ができるものでなけ
ればならない。りがンＰはそのものと特異的に反応する
物質のみを保持する。その他の物質は洗い去られる。保
持された物質は結合されてないリガンドの溶液または例
えば塩グラ・リガンドを用いて支持体物質から溶離する
ことができる。
テアーゼの単離がかなり改善されてきた。この方法は物
質量の特異的な相互作用を利用するものである。この目
的にはまず物質を不溶性の支持体（マトリックス）にリ
ガンＰとして共有結合させる。このリガ／）′は単１１
１スべき物質と複合物様の相互作用ができるものでなけ
ればならない。りがンＰはそのものと特異的に反応する
物質のみを保持する。その他の物質は洗い去られる。保
持された物質は結合されてないリガンドの溶液または例
えば塩グラ・リガンドを用いて支持体物質から溶離する
ことができる。
タンパク質を単離するには、一種または少数のタン・ぞ
り質としか相互作用しないりがンＰを使用することが当
然最も好都合である。吸着剤の容量はマトリックスに対
し十分に高レベルのりがンＰが負荷されているか否かに
よる。化学的結合はできるだけ均一で安定、すなわち加
水分解され難いものでなければならない。アフイニテイ
クロマトグラフイーは特に例えば血漿、血清、体液、細
胞または細胞培養上清からのプロテアーゼの取得に用い
られうる。この目的に有用なアフイニテイ物質としては
天然に存在するかまたは合成により調製された固定化さ
れたインヒビターが良いことが分かった。しかしながら
これまでに記載されたアフイニテイ物質は用いられイン
ヒビターが相当に欠乏しているゆえＫその使用が制限さ
れる。
り質としか相互作用しないりがンＰを使用することが当
然最も好都合である。吸着剤の容量はマトリックスに対
し十分に高レベルのりがンＰが負荷されているか否かに
よる。化学的結合はできるだけ均一で安定、すなわち加
水分解され難いものでなければならない。アフイニテイ
クロマトグラフイーは特に例えば血漿、血清、体液、細
胞または細胞培養上清からのプロテアーゼの取得に用い
られうる。この目的に有用なアフイニテイ物質としては
天然に存在するかまたは合成により調製された固定化さ
れたインヒビターが良いことが分かった。しかしながら
これまでに記載されたアフイニテイ物質は用いられイン
ヒビターが相当に欠乏しているゆえＫその使用が制限さ
れる。
アルギニンまたはベンズアミジンのような低分子量イン
ヒビターはアフイニテイクロマトグラフイーに使用する
に充分な強いインヒビター活性を有しない。従ってその
容１が低いゆえに大量の樹脂が必要とされる。これと対
照的にアプロチニン、８ＢＴＩ （大豆トリプシンイン
ヒビター）、ＢＰＴＩ（ウシ膵臓トリプシンインヒビタ
ー）、ヒルジンまたはニグリン（Ｅｇｌｉｎ）のような
ポリペプチド性インヒビターはインヒビター作用が強す
ぎ、従ってアフイニテイ樹脂に結合されるプロテアーゼ
が極端に強い条件下および／または多大の収量損失を伴
ってのみしか溶離できな％ｚ。
ヒビターはアフイニテイクロマトグラフイーに使用する
に充分な強いインヒビター活性を有しない。従ってその
容１が低いゆえに大量の樹脂が必要とされる。これと対
照的にアプロチニン、８ＢＴＩ （大豆トリプシンイン
ヒビター）、ＢＰＴＩ（ウシ膵臓トリプシンインヒビタ
ー）、ヒルジンまたはニグリン（Ｅｇｌｉｎ）のような
ポリペプチド性インヒビターはインヒビター作用が強す
ぎ、従ってアフイニテイ樹脂に結合されるプロテアーゼ
が極端に強い条件下および／または多大の収量損失を伴
ってのみしか溶離できな％ｚ。
本発明はデロテイナーゼの単離に用いることができ、容
量が大きく、すがンド密度が高くそして安定性が高いア
フイニティクロマトグラフイー用の物質を調製すること
を目的とする。
量が大きく、すがンド密度が高くそして安定性が高いア
フイニティクロマトグラフイー用の物質を調製すること
を目的とする。
ＥＰ−Ａ Ｏ，１６７，１５２号にはアフイニテイ物質
として支持体に結合されたベデチＰ誘導体Ｄ−Ｖａｌ−
Ｇｌｙ−ＤＬ−アルギナールが記載されている。しかし
ながらこの物質は最適ではなくそして該出順の実施例に
記載されるように約３０％の高レベルの収量損失を生ず
る。
として支持体に結合されたベデチＰ誘導体Ｄ−Ｖａｌ−
Ｇｌｙ−ＤＬ−アルギナールが記載されている。しかし
ながらこの物質は最適ではなくそして該出順の実施例に
記載されるように約３０％の高レベルの収量損失を生ず
る。
今、驚くべきことにこの欠点がＶａｌ−Ｇｌｙ−アルギ
ナール配列をＬｅｕ−Ｐｒｏ−アルギナール、Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−アルギナール、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＤＬ
−アルギナールまたはＤＬ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＤＬ−ア
ルギナール配列で置換することにより排除できることが
見出された。アミノ酸誘導体であるアルギナールを相当
するニトリル誘導体またはアルコール誘導体によって置
換することも可能である。
ナール配列をＬｅｕ−Ｐｒｏ−アルギナール、Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−アルギナール、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＤＬ
−アルギナールまたはＤＬ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＤＬ−ア
ルギナール配列で置換することにより排除できることが
見出された。アミノ酸誘導体であるアルギナールを相当
するニトリル誘導体またはアルコール誘導体によって置
換することも可能である。
それゆえ本発明は式■の化合物に関する。
Ｒが支持体を意味する場合は、このものは炭水化物に基
づく構造を有するかまたはメタクリルアミド、Ｎ−メチ
レンビスメタクリルアミド、グリシジルメタクリレート
−ポリエチレングリコール誘導体もしくはペンタエリト
リトールジメタクリレートに基づく構造を有するポリマ
ー■ ■ 特にセファロース 、バイオゲル セファデックス
セレツクス 、またはフラクトゲル■［有］
■ が好ましい。
づく構造を有するかまたはメタクリルアミド、Ｎ−メチ
レンビスメタクリルアミド、グリシジルメタクリレート
−ポリエチレングリコール誘導体もしくはペンタエリト
リトールジメタクリレートに基づく構造を有するポリマ
ー■ ■ 特にセファロース 、バイオゲル セファデックス
セレツクス 、またはフラクトゲル■［有］
■ が好ましい。
本発明は′また式Ｉを有する化合物を製造するに当たり
、保護されたアミノ酸またはペプチドセグメントを用い
、それ自体知られた方法に従い相当するベブチｒを合成
し、その際アルギニンのＣ末端はアルコール、アルデヒ
Ｐまたはニトリル官能基に変換しそして場合によりその
ベデチＰを、その保護基を除去したのち、ポリマーに結
合させることからなる方法にも関する。
、保護されたアミノ酸またはペプチドセグメントを用い
、それ自体知られた方法に従い相当するベブチｒを合成
し、その際アルギニンのＣ末端はアルコール、アルデヒ
Ｐまたはニトリル官能基に変換しそして場合によりその
ベデチＰを、その保護基を除去したのち、ポリマーに結
合させることからなる方法にも関する。
Ｃ末端にアルコール基またはアルデヒｒ基を担持する本
発明による化合物を既知方法忙従い調製するには、その
グアニジノ基がペプチド化学に慣用に用いられる保護基
により遮断されていることができ、しかし好ましくはプ
ロトン化により保護されたアルザニンエステル好マシく
はメチルまたはエチルエステルを用いて合成を開始し、
中間体を精製しながらそれぞれの保護されたアミノ酸誘
導体好ましくは保護されたペプチドセグメントをアルギ
ニン誘導体のＮα−基に結合させる操作を反復する。こ
れらペプチドセグメントはＰ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ構造を有しており。
発明による化合物を既知方法忙従い調製するには、その
グアニジノ基がペプチド化学に慣用に用いられる保護基
により遮断されていることができ、しかし好ましくはプ
ロトン化により保護されたアルザニンエステル好マシく
はメチルまたはエチルエステルを用いて合成を開始し、
中間体を精製しながらそれぞれの保護されたアミノ酸誘
導体好ましくは保護されたペプチドセグメントをアルギ
ニン誘導体のＮα−基に結合させる操作を反復する。こ
れらペプチドセグメントはＰ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ構造を有しており。
ここでＰは保護基好ましくはＢｏｃ （ブチルオキシカ
ルボニル）でありセしてＹは前記した意味を有する。ロ
イシンはＤ−Ｌ−またはＤＬ−構造を有するがしかし好
ましくはＤ−型そしてプロリンはＬ−型である。合成は
溶液中でプロリンエステル好オしくはメチルまたはベン
ジルエステルをＮ−末端が保護された（ Ｂｏｃ保護基
が好ましい）ロイシン誘導体と反応させてジペプチドを
形成させることにより行われる。溶媒としては好ましく
は・ジメチルホルムアミＰ１ ジメチルスルホヤシＰ、
ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ−メチルモルリンな
らびにそれらの混合物が適当である。ベブチｒ結合はカ
ルボギシル基を活性化することにより形成され、その目
的釦はペプチド化学に慣用に用いられる活性化法、好ま
しくは活性エステル法、そして特に好ましくはＨＯＢｔ
（ヒＰロキシペンゾトリアゾール）および場合により塩
基好ましくはＮ−メチルモルホリンを添加したカルボ・
ジイミＰ法が適当である。ペデチｒは水溶液から水に難
溶性の溶媒好ましくは酢酸エチルを用いて抽出すること
により精製される。
ルボニル）でありセしてＹは前記した意味を有する。ロ
イシンはＤ−Ｌ−またはＤＬ−構造を有するがしかし好
ましくはＤ−型そしてプロリンはＬ−型である。合成は
溶液中でプロリンエステル好オしくはメチルまたはベン
ジルエステルをＮ−末端が保護された（ Ｂｏｃ保護基
が好ましい）ロイシン誘導体と反応させてジペプチドを
形成させることにより行われる。溶媒としては好ましく
は・ジメチルホルムアミＰ１ ジメチルスルホヤシＰ、
ジクロロメタン、クロロホルム、Ｎ−メチルモルリンな
らびにそれらの混合物が適当である。ベブチｒ結合はカ
ルボギシル基を活性化することにより形成され、その目
的釦はペプチド化学に慣用に用いられる活性化法、好ま
しくは活性エステル法、そして特に好ましくはＨＯＢｔ
（ヒＰロキシペンゾトリアゾール）および場合により塩
基好ましくはＮ−メチルモルホリンを添加したカルボ・
ジイミＰ法が適当である。ペデチｒは水溶液から水に難
溶性の溶媒好ましくは酢酸エチルを用いて抽出すること
により精製される。
場合によりＮ−末端保護基を除去しそして同じ操作法に
従いＢｏｃ保護されたＹ−ＯＨ、（ここでＹ−ＯＨは好
ましくはイプシロンアミノカプロン酸である）を−）イ
ブチＰＫ結合させる。プ。リンのエステル基は加水分解
または水素添加分解により除去される。アルイニン誘導
体くセグメント結合させるための反応は好ましくはジペ
ブチＰ調製と同様にして実施される。そこで・クベデチ
ド誘導体をアルコール好ましくはエタノール中に溶解さ
せセしてＣａＣｌ２の存在下に水素化ホウ素ナトリウム
を用いて還元する。この還元の好ましい態様におい【は
２０ｆのＢｏｃ−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ＯＭｅを２００〜５００−のエタノール中に溶解させ
、７〜１５９好ましくは１１ｆのＣａＣＡ２・２Ｈ２０
をその中に溶解させそしてメチルエステルを５〜１０を
好ましくは６．５ｔの水素化ホウ素ナトリウムを用いて
還元する０反応は４〜５０℃で３０分から６時間、好ま
しくは室温で１時間行われる。還元されたベブチＰは水
と混和しない溶媒好ましくはブタノールを用いて抽出す
ることにより水相から取得される。場合によりこの段階
で存在する保護基を好ましくはアシＰリシスにより除去
してもよい。
従いＢｏｃ保護されたＹ−ＯＨ、（ここでＹ−ＯＨは好
ましくはイプシロンアミノカプロン酸である）を−）イ
ブチＰＫ結合させる。プ。リンのエステル基は加水分解
または水素添加分解により除去される。アルイニン誘導
体くセグメント結合させるための反応は好ましくはジペ
ブチＰ調製と同様にして実施される。そこで・クベデチ
ド誘導体をアルコール好ましくはエタノール中に溶解さ
せセしてＣａＣｌ２の存在下に水素化ホウ素ナトリウム
を用いて還元する。この還元の好ましい態様におい【は
２０ｆのＢｏｃ−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ＯＭｅを２００〜５００−のエタノール中に溶解させ
、７〜１５９好ましくは１１ｆのＣａＣＡ２・２Ｈ２０
をその中に溶解させそしてメチルエステルを５〜１０を
好ましくは６．５ｔの水素化ホウ素ナトリウムを用いて
還元する０反応は４〜５０℃で３０分から６時間、好ま
しくは室温で１時間行われる。還元されたベブチＰは水
と混和しない溶媒好ましくはブタノールを用いて抽出す
ることにより水相から取得される。場合によりこの段階
で存在する保護基を好ましくはアシＰリシスにより除去
してもよい。
本発明によるアルコ−ル誘導体はＣｈｅｍ。
Ｐｈａｒｍ、 Ｂｕｌｌ １７（９）、１９０２〜１９
０９（１９６０）に記載されるようにして好ましくは相
当するアルコ−ル誘導体を部分酸化することにより調製
される。
０９（１９６０）に記載されるようにして好ましくは相
当するアルコ−ル誘導体を部分酸化することにより調製
される。
この酸化の好ましい態様においては５ｔのＢｏｃ−Ａｃ
ａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨを８０〜１２０
−のジメチルスルホキシＰ中に溶解させそして６〜１２
？好ましくは８ｆのジシクロへキシルカルボジイミＰお
よび５００■〜１５００ダ好ましくは８５０■の結晶状
無水オルト燐酸と反応させる。反応は室温で６〜２４時
間、好ましくは１４時間行われる。粗製ベデチＰはメタ
ノール中セファデックス−ＬＨ２０でクロマトグラフィ
ーする。
ａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨを８０〜１２０
−のジメチルスルホキシＰ中に溶解させそして６〜１２
？好ましくは８ｆのジシクロへキシルカルボジイミＰお
よび５００■〜１５００ダ好ましくは８５０■の結晶状
無水オルト燐酸と反応させる。反応は室温で６〜２４時
間、好ましくは１４時間行われる。粗製ベデチＰはメタ
ノール中セファデックス−ＬＨ２０でクロマトグラフィ
ーする。
次に好ましくはＮ−末端で用いられているＢＯＣ保護基
を場合によりアシＰリシス、好ましくはトリフルオロ酢
酸５０％、メチレンクロライＰ４５％およびアニソール
５％からなる混合物を用いて除去する。本発明によるペ
ブチＰ配列を有しておりそのＣ−末端基でシアノ基を有
するベブチＰも好ましくは同様に一般構造Ｐ−Ｙ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−ＯＨＣ式中Ｐは保護基好ましくはＦｍｏｃ
（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）でありそ
してＹは結合またはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ （ここ
でｎ ＝ １〜８、好ましくは６である）である〕を有
する前記ペデチＰセグメントを用いて製造される。
を場合によりアシＰリシス、好ましくはトリフルオロ酢
酸５０％、メチレンクロライＰ４５％およびアニソール
５％からなる混合物を用いて除去する。本発明によるペ
ブチＰ配列を有しておりそのＣ−末端基でシアノ基を有
するベブチＰも好ましくは同様に一般構造Ｐ−Ｙ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−ＯＨＣ式中Ｐは保護基好ましくはＦｍｏｃ
（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）でありそ
してＹは結合またはＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ （ここ
でｎ ＝ １〜８、好ましくは６である）である〕を有
する前記ペデチＰセグメントを用いて製造される。
Ｃ−末端構成分としてはＡｒｇ−ＣＨが用いられ、その
製法はＩｎｔ、 Ｊ、 Ｐｅｐち、 Ｐｒｏｔ、 Ｒｅ
ｓ、 ３１．６３〜７０（１９８８）に記載されている
。
製法はＩｎｔ、 Ｊ、 Ｐｅｐち、 Ｐｒｏｔ、 Ｒｅ
ｓ、 ３１．６３〜７０（１９８８）に記載されている
。
Ｎ−末端保護基好ましくはＦｍ０Ｃを塩基好ましくはＤ
ＭＦ中の２０％ピペリジンを用いて除去しセしてペブチ
ＰニトリルをセファデックスＬＨ２０でのクロマトグラ
フィーにより精製する。
ＭＦ中の２０％ピペリジンを用いて除去しセしてペブチ
ＰニトリルをセファデックスＬＨ２０でのクロマトグラ
フィーにより精製する。
本発明によるペブチＰはｔ−ｐＡ（組織デラスミノーゲ
ンアクチベーター）Ｋ対し強い阻害作用を有する点で優
れ曵いる。その上篤くべきことにこれらペブチＰはその
ものをポリマーに結合させそれをｔ−ＰＡ金含有る溶液
と接触させた場合にｔ−ＰＡのアフイニテイク四マドグ
ラフィーに適する。Ｙにおいてｎが好ましくは６である
前記ベブチＰを固定化したものは、Ｙが結合であるかか
るペブチＰを固定化したものより明らかにｔ−ＰＡに対
する結合アフィニティーが高いことは特に驚くべきこと
であった。
ンアクチベーター）Ｋ対し強い阻害作用を有する点で優
れ曵いる。その上篤くべきことにこれらペブチＰはその
ものをポリマーに結合させそれをｔ−ＰＡ金含有る溶液
と接触させた場合にｔ−ＰＡのアフイニテイク四マドグ
ラフィーに適する。Ｙにおいてｎが好ましくは６である
前記ベブチＰを固定化したものは、Ｙが結合であるかか
るペブチＰを固定化したものより明らかにｔ−ＰＡに対
する結合アフィニティーが高いことは特に驚くべきこと
であった。
本発明はまたプロテアーゼ好ましくはセリンプロテアー
ゼおよびシスティ／プロテアーゼ、特に好ましくは組織
デラスミノーゲンアクチペーター プロクロキナーゼ、
ウロキナーゼ、それらの天然に存在するかまたは合成的
にもしくは遺伝子操作により調製された誘導体を血漿、
血清、体液、細胞または細胞培養上清から精製すること
への前記ペブチＰの使用にも関する。
ゼおよびシスティ／プロテアーゼ、特に好ましくは組織
デラスミノーゲンアクチペーター プロクロキナーゼ、
ウロキナーゼ、それらの天然に存在するかまたは合成的
にもしくは遺伝子操作により調製された誘導体を血漿、
血清、体液、細胞または細胞培養上清から精製すること
への前記ペブチＰの使用にも関する。
プロテアーゼをｆ＃裂するには、伝導度０〜１００ ｍ
ｓｉ （ミリ・シーメンス）およびＰＪ″１３〜１１、
好ましくは伝導度０〜３０ ｍｓｉおよびｐＨ５〜８を
有する出発物質をアフイニテイ物質と接触させることか
らなる方法が好ましい。この物質を緩衝溶液（−４３〜
１１．伝導度０〜１００ ｎｎ５ｉ、好ましくはｐＨ４
〜８および伝導度０〜３０ ｍｓｉ ）で洗いそして次
にプロテアーゼを緩衝中性塩溶液で溶離する。この方法
で式■を有する化合物のベグチＰ配列と相互作用するプ
ロテアーゼ例えばｔ−ＰＡ 、プロウロキナーゼおよび
ウロキナーゼを溶液から吸着させそして次に場合により
溶離することかできる。前記方法で調製されたアフイニ
テイ物質を使用する場合は、ＥＰ−に−０，１６７，１
５２号に従イＶａｌ−（）ｌｙ −７／Ｌ／ギナールオ
よび不溶性支持体物質から調製された物質に比較して結
合容量が高くかつｔ−ＰＡに関しては７５％に代えて９
０％をこえる高い回収率を示した。
ｓｉ （ミリ・シーメンス）およびＰＪ″１３〜１１、
好ましくは伝導度０〜３０ ｍｓｉおよびｐＨ５〜８を
有する出発物質をアフイニテイ物質と接触させることか
らなる方法が好ましい。この物質を緩衝溶液（−４３〜
１１．伝導度０〜１００ ｎｎ５ｉ、好ましくはｐＨ４
〜８および伝導度０〜３０ ｍｓｉ ）で洗いそして次
にプロテアーゼを緩衝中性塩溶液で溶離する。この方法
で式■を有する化合物のベグチＰ配列と相互作用するプ
ロテアーゼ例えばｔ−ＰＡ 、プロウロキナーゼおよび
ウロキナーゼを溶液から吸着させそして次に場合により
溶離することかできる。前記方法で調製されたアフイニ
テイ物質を使用する場合は、ＥＰ−に−０，１６７，１
５２号に従イＶａｌ−（）ｌｙ −７／Ｌ／ギナールオ
よび不溶性支持体物質から調製された物質に比較して結
合容量が高くかつｔ−ＰＡに関しては７５％に代えて９
０％をこえる高い回収率を示した。
キラールアミノ酸はＤ−もしくはＬ−型で存在しうる。
何も記載がない場合はＬ−型を意味するものとする。
実施例 １
Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−アルギノールの製造４．３２のＢ
ｏＣ−Ｐｒｏ、２．７２のＨＯＢｔおよび４２ｆのＤＣ
Ｃ（・クシクロへキシルカルボジイミＰ）をＤＭＦ ５
０ ａ／中に溶解しそして１時間後に５．２２１のアル
ギニンメチルエステルジ塩酸塩および２．２−〇Ｎ−メ
チルモルホリンを添加した。反応混合物を室温で一夜攪
拌し、ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を戸去しそして
溶媒を真空下洗蒸発させた。残留物を酢酸エチル中に溶
解させ、この溶液を水で数回抽出しモして水相を凍結乾
燥した。粗製物をｎ−ブタノール中に溶解し、水で３回
抽出した。硫酸ナトリウムで有機相を乾燥したのち溶媒
を蒸発させた。７，１ｔのＢｏａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｏ
Ｍｅを１．２Ｎ ＨＣ／、／氷酢酸１５０ｄと室温で１
時間処理しそして除去試薬を真空下に留去した。油状の
残留物を乾燥したのち４ｔのＢｏａ−Ｄ−Ｌｅｕを２．
４ｔのＥ（ＯＢｔおよび５．６４ｆのジシクロへキシル
カルボジイミドを用い５０ｄのＤＭＦ中１時間活性化し
てジペグチｐ＜加えた。
ｏＣ−Ｐｒｏ、２．７２のＨＯＢｔおよび４２ｆのＤＣ
Ｃ（・クシクロへキシルカルボジイミＰ）をＤＭＦ ５
０ ａ／中に溶解しそして１時間後に５．２２１のアル
ギニンメチルエステルジ塩酸塩および２．２−〇Ｎ−メ
チルモルホリンを添加した。反応混合物を室温で一夜攪
拌し、ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を戸去しそして
溶媒を真空下洗蒸発させた。残留物を酢酸エチル中に溶
解させ、この溶液を水で数回抽出しモして水相を凍結乾
燥した。粗製物をｎ−ブタノール中に溶解し、水で３回
抽出した。硫酸ナトリウムで有機相を乾燥したのち溶媒
を蒸発させた。７，１ｔのＢｏａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｏ
Ｍｅを１．２Ｎ ＨＣ／、／氷酢酸１５０ｄと室温で１
時間処理しそして除去試薬を真空下に留去した。油状の
残留物を乾燥したのち４ｔのＢｏａ−Ｄ−Ｌｅｕを２．
４ｔのＥ（ＯＢｔおよび５．６４ｆのジシクロへキシル
カルボジイミドを用い５０ｄのＤＭＦ中１時間活性化し
てジペグチｐ＜加えた。
１９ｔ＆のＮ−メチルモルホリンを添加したのち反応混
合物を室温で一夜攪拌し、不溶物をｐ別しそして溶媒を
蒸発除去した。油状の残留物を酢酸エチルと水の間に分
配し、酢酸エチル相を少量の水でさらに２回抽出しモし
て水相を凍結乾燥した。粗製物をメタノール中セファデ
ックスＬＨ−２０でクロマトグラフィーした（収量５．
８ｆ）。このメチルエステル誘導体ｔ９５ｆおよび２．
１６ｆのＣａＣｌ２・２Ｈ２０をエタノール１００ｄ中
に室温で溶解させそして０．８２の水素化ホウ素ナトリ
ウムを各２００〜ずつの４回に分けて加えた。
合物を室温で一夜攪拌し、不溶物をｐ別しそして溶媒を
蒸発除去した。油状の残留物を酢酸エチルと水の間に分
配し、酢酸エチル相を少量の水でさらに２回抽出しモし
て水相を凍結乾燥した。粗製物をメタノール中セファデ
ックスＬＨ−２０でクロマトグラフィーした（収量５．
８ｆ）。このメチルエステル誘導体ｔ９５ｆおよび２．
１６ｆのＣａＣｌ２・２Ｈ２０をエタノール１００ｄ中
に室温で溶解させそして０．８２の水素化ホウ素ナトリ
ウムを各２００〜ずつの４回に分けて加えた。
１時間後溶媒を蒸発させ残留物を少量の水にとりそして
生成物をブタノールで抽出した。このブタノール溶液を
硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を蒸発させそして残留物を
メタノール中セファデックスＬＨ−２０でクロマトグラ
フィーした（収量１．１２ｆ） １ｔのＢｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨ２Ｏ
Ｈをトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン／アニソール（
４５：５０：５）５０−中に溶解させそして１５分間室
温で攪拌した。次に溶媒を真空下に蒸発させ、残留物を
水にとり、ジエチルエーテルで２回抽出しそして水相を
凍結乾燥した（収量８３５■）。
生成物をブタノールで抽出した。このブタノール溶液を
硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒を蒸発させそして残留物を
メタノール中セファデックスＬＨ−２０でクロマトグラ
フィーした（収量１．１２ｆ） １ｔのＢｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨ２Ｏ
Ｈをトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン／アニソール（
４５：５０：５）５０−中に溶解させそして１５分間室
温で攪拌した。次に溶媒を真空下に蒸発させ、残留物を
水にとり、ジエチルエーテルで２回抽出しそして水相を
凍結乾燥した（収量８３５■）。
アミノ酸分析： Ｌｅｕ １．００ ； Ｐｒｏ １．
０４； Ａｒｇ Ｏ，０４実施例 ２ ε−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨＯの製
造９、５ ｔのＢｏｃ−ξ−Ａｃａ、５．４Ｓ’のＨＯ
Ｂｔおよび８．４２のＤＣＣを１００ ａｊのＤＭＦ中
で１時間攪拌した。
０４； Ａｒｇ Ｏ，０４実施例 ２ ε−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨＯの製
造９、５ ｔのＢｏｃ−ξ−Ａｃａ、５．４Ｓ’のＨＯ
Ｂｔおよび８．４２のＤＣＣを１００ ａｊのＤＭＦ中
で１時間攪拌した。
次に１９ｆのＤ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＭｅ ｘ
２ＨＣ１（調製は実施例１参照： Ｂｏａ−Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＭｅのＢｏａ基は１．２ＮＨＣ
４／氷酢酸を用いて除去）および４．４ｒｕｇのＮ−メ
チルモルホリンを加えこの混合物を一夜攪拌した。不溶
物を戸去し、溶媒を留去しそして残留物を水にとった。
２ＨＣ１（調製は実施例１参照： Ｂｏａ−Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＭｅのＢｏａ基は１．２ＮＨＣ
４／氷酢酸を用いて除去）および４．４ｒｕｇのＮ−メ
チルモルホリンを加えこの混合物を一夜攪拌した。不溶
物を戸去し、溶媒を留去しそして残留物を水にとった。
水相を酢酸エチルを用いて２回振盪抽出しそして凍結乾
燥した。
燥した。
粗製物を上相（５００−の水、４００ｄのｎ−ブタノー
ルおよび１００−の氷酢酸を充分に混合しそして分液ロ
ートで分離。形成された相を上相／下相として使用）中
に溶解させそして下相な用いて数回抽出した。上相゛を
濃縮しそしてジエチルエーテルを用いて結晶化させた。
ルおよび１００−の氷酢酸を充分に混合しそして分液ロ
ートで分離。形成された相を上相／下相として使用）中
に溶解させそして下相な用いて数回抽出した。上相゛を
濃縮しそしてジエチルエーテルを用いて結晶化させた。
この生成物１７、５ ｆをエタノール４００ｄ中に溶解
させ、１０．３ｆのＣａＣｌ２・２Ｈ２０および少しず
つ５．９ｆの水素化ホウ素ナトリウムを加えた。この混
合物を室温で１時間攪拌しそして溶媒を真空下に留去し
た。
させ、１０．３ｆのＣａＣｌ２・２Ｈ２０および少しず
つ５．９ｆの水素化ホウ素ナトリウムを加えた。この混
合物を室温で１時間攪拌しそして溶媒を真空下に留去し
た。
残留物を水にとりセしてｎ−ブタノールで数回抽出した
。有機相を硫酸す） リウムで乾燥しそして回転蒸発器
で濃縮した。９．２ ｔのＢｏｃ−トＡｃａ−Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨ２ＯＨを２００−の・ジメチ
ルスルホキシＰ中に溶解させそしＣ１′５．９５ｆのＤ
ＣＣおよびｔ５ｆの無水燐酸と反応させた。室温で４時
間反応させたのち溶媒を真空下に蒸発させ、残留物をメ
タノール中にとりそしてセファデックスＬＨ−２０でク
ロマトグラフィーした。
。有機相を硫酸す） リウムで乾燥しそして回転蒸発器
で濃縮した。９．２ ｔのＢｏｃ−トＡｃａ−Ｄ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＨ２ＯＨを２００−の・ジメチ
ルスルホキシＰ中に溶解させそしＣ１′５．９５ｆのＤ
ＣＣおよびｔ５ｆの無水燐酸と反応させた。室温で４時
間反応させたのち溶媒を真空下に蒸発させ、残留物をメ
タノール中にとりそしてセファデックスＬＨ−２０でク
ロマトグラフィーした。
Ｂｏｃ保護されたアルデヒＰペプチド８．１ｔを４０−
の・ジクロロメタン、４ｄのアニソールおよび４０ｍ／
のトリフルオロ酢酸中に溶解させそして１５分間室温で
攪拌した。そこで反応混合物をジエチルエーテル中に滴
下することＫより結晶化させ、結晶を集めそして高真空
下に乾燥させた（収量８． Ｏｆ ）。
の・ジクロロメタン、４ｄのアニソールおよび４０ｍ／
のトリフルオロ酢酸中に溶解させそして１５分間室温で
攪拌した。そこで反応混合物をジエチルエーテル中に滴
下することＫより結晶化させ、結晶を集めそして高真空
下に乾燥させた（収量８． Ｏｆ ）。
実施例 ３
ｔ −Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＮの製
造８．６ｆのプロリン第三ブチルエステル、１５．２５
２のＺ（ｚはベンジルオキシカルボニルを意味する）−
］）−ｏイシン、８ｔのＨＯＢ ｔおよび１０．５ｆの
ＤＣＣを１００ｄのＤＭＦ中に溶解させ、室温で一夜攪
拌した。不溶物を戸去しそして溶媒を真空下に留去した
。油状の残留物を酢酸エチル中に溶解させそして飽和炭
酸水素ナトリウム溶液、５％硫酸水素カリウム溶液およ
び飽和塩化ナトリウム溶液を用いてそれぞれ３回ずつ洗
浄した。
造８．６ｆのプロリン第三ブチルエステル、１５．２５
２のＺ（ｚはベンジルオキシカルボニルを意味する）−
］）−ｏイシン、８ｔのＨＯＢ ｔおよび１０．５ｆの
ＤＣＣを１００ｄのＤＭＦ中に溶解させ、室温で一夜攪
拌した。不溶物を戸去しそして溶媒を真空下に留去した
。油状の残留物を酢酸エチル中に溶解させそして飽和炭
酸水素ナトリウム溶液、５％硫酸水素カリウム溶液およ
び飽和塩化ナトリウム溶液を用いてそれぞれ３回ずつ洗
浄した。
有機相を硫酸す） ＩＪウムで乾燥し、溶媒を除去しモ
して２保護基をメタノール中Ｐｄ／ｃおよび水素を用い
て除去した。ＨＣ１／メタノールを加えることにより遊
離のアミノ基を塩酸塩に変換した。溶媒を除去したのち
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−第三ブチルエステルをメタノール／ジ
エチルエーテルから結晶化した。この生成物１２．２Ｆ
を８．１ｆのＨＯＢｔ、、１４．１ｆのＦｍｏｃ−Ａｃ
ａ 、 ９．１ ｆのＤＣＣおよび４．４ｄのＮ−メチ
ルモルホリンとＤＭＦ １５０ ｒｎｌｎｌ中室−夜攪
拌した。ジシクロヘキシル尿素を戸去したのち水の添加
により生成物を沈殿させた。結晶を集め、そして高真空
下にＰ４Ｏ１０で乾燥した。
して２保護基をメタノール中Ｐｄ／ｃおよび水素を用い
て除去した。ＨＣ１／メタノールを加えることにより遊
離のアミノ基を塩酸塩に変換した。溶媒を除去したのち
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−第三ブチルエステルをメタノール／ジ
エチルエーテルから結晶化した。この生成物１２．２Ｆ
を８．１ｆのＨＯＢｔ、、１４．１ｆのＦｍｏｃ−Ａｃ
ａ 、 ９．１ ｆのＤＣＣおよび４．４ｄのＮ−メチ
ルモルホリンとＤＭＦ １５０ ｒｎｌｎｌ中室−夜攪
拌した。ジシクロヘキシル尿素を戸去したのち水の添加
により生成物を沈殿させた。結晶を集め、そして高真空
下にＰ４Ｏ１０で乾燥した。
１９、４ ｆの第三ブチルエステルを１２ Ｎ ＨＣ４
／氷酢酸１５０ｄ中室温で１時間攪拌しそして除去試薬
を真空下に蒸発させた。残留物をメタノール／ジエチル
エーテルから再結晶した。この生成物を６．７ｔのＨＯ
Ｂ ｔおよび＆８ｆのＤＣＣとＤＭＦ１５０ａｔ中室温
で１時間攪拌した。次にジシクロヘキシル尿素を除去し
たのち１２．２５ ｆ ｔ７） Ａｒｇ−ＣＮ ｘ２Ｔ
ＦＡ（トリフルオロ酢酸） （Ｉｎｔ、 ＩＴ、 Ｐｅ
ｐｔｉｄｅＰｒｏも、 Ｒｅｓ、 ３１．６３（１９８
８））および３．８−〇Ｎ−メチルモルホリンを加えた
。−夜攪拌後溶媒を蒸発させそして粗製物をメタノール
中少しずつセファデックスＬＨ２０でクロマトグラフィ
ーした。１５．２ｆのＦｍｏｃ−ｆ−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｓ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＮを２０％ピペリジン／ ＤＭ
Ｆ （ｖ／ｖ ）と室温で３０分間攪拌しそして除去試
薬を真空下に蒸発させた。粗製物をメタノール中に溶解
させ、ＨＣｔ ／メタノールを用いて酸性化し、ジエチ
ル渾−テル中に滴下することにより結晶化させた（ ９
．５ ？ ）。
／氷酢酸１５０ｄ中室温で１時間攪拌しそして除去試薬
を真空下に蒸発させた。残留物をメタノール／ジエチル
エーテルから再結晶した。この生成物を６．７ｔのＨＯ
Ｂ ｔおよび＆８ｆのＤＣＣとＤＭＦ１５０ａｔ中室温
で１時間攪拌した。次にジシクロヘキシル尿素を除去し
たのち１２．２５ ｆ ｔ７） Ａｒｇ−ＣＮ ｘ２Ｔ
ＦＡ（トリフルオロ酢酸） （Ｉｎｔ、 ＩＴ、 Ｐｅ
ｐｔｉｄｅＰｒｏも、 Ｒｅｓ、 ３１．６３（１９８
８））および３．８−〇Ｎ−メチルモルホリンを加えた
。−夜攪拌後溶媒を蒸発させそして粗製物をメタノール
中少しずつセファデックスＬＨ２０でクロマトグラフィ
ーした。１５．２ｆのＦｍｏｃ−ｆ−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｓ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＣＮを２０％ピペリジン／ ＤＭ
Ｆ （ｖ／ｖ ）と室温で３０分間攪拌しそして除去試
薬を真空下に蒸発させた。粗製物をメタノール中に溶解
させ、ＨＣｔ ／メタノールを用いて酸性化し、ジエチ
ル渾−テル中に滴下することにより結晶化させた（ ９
．５ ？ ）。
アミノ酸分析： Ａｃａ Ｏ，９３： Ｌｅｕ Ｏ，９
５： Ｐｒｏ １．０５：Ａｒｇｌ、０４ 実施例 ４ ブロムシアンにより活性化されたセファロースへのペプ
チドの固定化 ブロムシアンにより活性化されたセファロース（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ） １０ ？を０．００１Ｎ ＨＣＡ １
００ ｙｎｌ中に懸濁させ、濾過フリット上で０．００
１Ｎ ＨＣｌ５００屑ｌで洗い次に０．２５Ｍ炭酸水素
ナトリウム溶液５００−を用いて少しずつ洗った。実施
例２または３で得られたペプチド１ｓｔをＱ、２５Ｍ炭
酸水素す） ＩＪウム溶液５０ｄ中に溶解させそして樹
脂に加えた。この反応混合物を４℃で一夜振盪し、吸引
炉遇しそして［１１Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液５００−
で洗った。この樹脂を０．１Ｍエタノールアミン（−８
） １００−と室温で２時間インキュベートしそして次
Ｋ Ｏ，Ｉ Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ４） ６００
ｍ１および０．１ Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ８
，４）６００ｄで交互に３回ずつ洗った。終りに樹脂を
充分に水洗した。
５： Ｐｒｏ １．０５：Ａｒｇｌ、０４ 実施例 ４ ブロムシアンにより活性化されたセファロースへのペプ
チドの固定化 ブロムシアンにより活性化されたセファロース（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ） １０ ？を０．００１Ｎ ＨＣＡ １
００ ｙｎｌ中に懸濁させ、濾過フリット上で０．００
１Ｎ ＨＣｌ５００屑ｌで洗い次に０．２５Ｍ炭酸水素
ナトリウム溶液５００−を用いて少しずつ洗った。実施
例２または３で得られたペプチド１ｓｔをＱ、２５Ｍ炭
酸水素す） ＩＪウム溶液５０ｄ中に溶解させそして樹
脂に加えた。この反応混合物を４℃で一夜振盪し、吸引
炉遇しそして［１１Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液５００−
で洗った。この樹脂を０．１Ｍエタノールアミン（−８
） １００−と室温で２時間インキュベートしそして次
Ｋ Ｏ，Ｉ Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ４） ６００
ｍ１および０．１ Ｍ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ８
，４）６００ｄで交互に３回ずつ洗った。終りに樹脂を
充分に水洗した。
実施例 ５
１、 出発溶液（ＳＭ）
ａ） も−ＰＡ−産生性のＢｏｗｅｓメラノーマ細胞培
養物の上清（Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １５
２．６８１〜６８６，１９８３） ｂ）ｇＰ−Ａ−０２２７４６２に記載の脱グリコジル化
ｔ−ｐへ分子を産生ずるＣＨＯ細胞培養物上清（突然変
異体■） Ｃ）英国特許第２，１１９，８０４号記載のｔ、−ＰＡ
野性型の上清 ｄ）５０ｍＭ）リス、１００ ｍＭ ＮａＣ４（ｐＨ７
，０）で透析後のヒト尿 ２ アフイニテイ樹脂＝（Ｒ） １ セファロース−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−アル
４ナール（実施例２／４） ２ セファロース−ＡＣａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−７／
ｌ／ ４ ＝ノニトリル（実施例３／４） ３ ＥＰ−Ａ−Ｑ、１６７．１５２号に記載のセファ
ロ−スーＬ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＤＬ−アルギナール五操
作 各出発溶液（ａ−ｄ）１０ｓｃＪずつにアフィニテイ樹
脂（１−３）の２ｆずつを加え、３０分間室温でインキ
ュベートした。次にこの樹脂を分離しそしてＥＬＩＳＡ
により上清中の抗原濃度を測定した。
養物の上清（Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １５
２．６８１〜６８６，１９８３） ｂ）ｇＰ−Ａ−０２２７４６２に記載の脱グリコジル化
ｔ−ｐへ分子を産生ずるＣＨＯ細胞培養物上清（突然変
異体■） Ｃ）英国特許第２，１１９，８０４号記載のｔ、−ＰＡ
野性型の上清 ｄ）５０ｍＭ）リス、１００ ｍＭ ＮａＣ４（ｐＨ７
，０）で透析後のヒト尿 ２ アフイニテイ樹脂＝（Ｒ） １ セファロース−Ａｃａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−アル
４ナール（実施例２／４） ２ セファロース−ＡＣａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−７／
ｌ／ ４ ＝ノニトリル（実施例３／４） ３ ＥＰ−Ａ−Ｑ、１６７．１５２号に記載のセファ
ロ−スーＬ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＤＬ−アルギナール五操
作 各出発溶液（ａ−ｄ）１０ｓｃＪずつにアフィニテイ樹
脂（１−３）の２ｆずつを加え、３０分間室温でインキ
ュベートした。次にこの樹脂を分離しそしてＥＬＩＳＡ
により上清中の抗原濃度を測定した。
１ ５％ ６％ ４％
９％２ １２％ １１％ １５％
２０％実施例 ６ 溶液ｂ（実施例１）１０１を樹脂１（実施例１ ） ３
００ ｆと室温で攪拌下ＶＣ３０分間インキュベートし
た。この混合物をカラムに充填しそして［１１ＭＮａＣ
ｔおよび５０ｍＭグリシンを含有する溶液（ｐＨ７）５
７で洗った。次Ｋ ｔ−ＦＡを０．５Ｍアルギニン、１
０ｍＭ酢酸を含有する溶液（ｐ）Ｉ４．０）を用いて溶
離した。収率：９８％。
９％２ １２％ １１％ １５％
２０％実施例 ６ 溶液ｂ（実施例１）１０１を樹脂１（実施例１ ） ３
００ ｆと室温で攪拌下ＶＣ３０分間インキュベートし
た。この混合物をカラムに充填しそして［１１ＭＮａＣ
ｔおよび５０ｍＭグリシンを含有する溶液（ｐＨ７）５
７で洗った。次Ｋ ｔ−ＦＡを０．５Ｍアルギニン、１
０ｍＭ酢酸を含有する溶液（ｐ）Ｉ４．０）を用いて溶
離した。収率：９８％。
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外 名
シャフト 外 名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式 I Ｒ−Ｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ＿２−ＣＨ
＿２−ＣＨ＿２−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ＿２）−Ｘ
を有するペプチド誘導体、ここで式中 ＹはＨＮ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−ＣＯ（ｎは１〜８である
）または結合であり、 ＸはＣＮ、ＣＨ＿２ＯＨまたはＣＨＯでありそしてＲは
アフイニテイクロマトグラフイーに適 する支持体マトリックスまたは水素原子である。 ２）光学活性中心が全部または一部Ｌ配置をしているこ
とからなる請求項１記載のペプチド誘導体。 ３）支持体マトリックスがポリマーであることからなる
請求項１記載のペプチド誘導体。 ４）支持体が炭水化物に基づく構造を有するかまたはメ
タクリルアミド、Ｎ−メチレンビスメタクリルアミド、
グリシジルメタクリレート−ポリエチレングリコール誘
導体もしくはペンタエリトリトールジメタクリレートに
基づく構造を有するポリマーであることからなる請求項
１記載のペプチド誘導体。 ５）支持体がセフアロース、バイオゲル、セフアデツク
ス、セレツクス、またはフラクトゲルであることからな
る請求項１記載のペプチド誘導体。 ６）式 I を有する化合物を製造するに当たり、保護さ
れたアミノ酸またはペプチドセグメントを用い、それ自
体知られた方法により、相当するペプチドを合成し、そ
の際アルギニンのＣ末端はアルコール、アルデヒドまた
はニトリル官能基に変換し、そして場合によりそのペプ
チドを、その保護基を除去したのち、ポリマーに結合さ
せることからなる方法。 ７）Ｒがアフイニテイクロマトグラフイーに適する支持
体マトリックスである請求項１記載のペプチドのプロテ
アーゼの精製への使用。 ８）プロテアーゼがセリンプロテアーゼまたはシステイ
ンプロテアーゼであることからなる請求項６記載の使用
。 ９）プロテアーゼが組織プラスミノーゲンアクチベータ
ー、プロウロキナーゼもしくはウロキナーゼ、またはそ
れらの天然に存在するかまたは合成もしくは遺伝子操作
により調製された誘導体、または血漿、血清、体液、細
胞または細胞培養上清から得られた誘導体であることか
らなる請求項６記載の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3827415.9 | 1988-08-12 | ||
| DE3827415A DE3827415A1 (de) | 1988-08-12 | 1988-08-12 | Peptidderivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02111788A true JPH02111788A (ja) | 1990-04-24 |
Family
ID=6360734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1207055A Pending JPH02111788A (ja) | 1988-08-12 | 1989-08-11 | ペプチド誘導体およびその製法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5202416A (ja) |
| EP (1) | EP0355572B1 (ja) |
| JP (1) | JPH02111788A (ja) |
| AT (1) | ATE87006T1 (ja) |
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