JPH021148B2 - - Google Patents

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JPH021148B2
JPH021148B2 JP55055305A JP5530580A JPH021148B2 JP H021148 B2 JPH021148 B2 JP H021148B2 JP 55055305 A JP55055305 A JP 55055305A JP 5530580 A JP5530580 A JP 5530580A JP H021148 B2 JPH021148 B2 JP H021148B2
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JP
Japan
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formula
group
compound
cephalosporin
reaction
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JP55055305A
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JPS55143994A (en
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Shindoraa Peteru
Fuubaa Geruharuto
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Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
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Publication date
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Publication of JPH021148B2 publication Critical patent/JPH021148B2/ja
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2415/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving penicillins or cephalosporins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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  • General Health & Medical Sciences (AREA)
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  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
β―ラクタム―抗生物質の治療上の有用性はβ
―ラクタム抵抗性の細菌の出現により制限されて
いる。この抵抗性はβ―ラクタマーゼ〔ペニシリ
ン―（セフアロスポリン）―β―ラクタム―アミ
ドヒドロラーゼ、EC3526〕の形成と因果関係が
ある。このものはペニシリンおよびセフアロスポ
リンのβ―ラクタム環のＣ−Ｎ結合を加水分解
し、そのことはこれら化合物の抗生物質としての
性質の損失を招来する。β―ラクタム抗生物質を
用いる細菌感染の治療に際して所望の治療効果を
確実にするためには、治療開始前に、臨床上の単
離物がβ―ラクタマーゼを産生するか否かについ
て確実な認識が存在せねばならない。β―ラクタ
マーゼの検出が陽性である場合、β―ラクタマー
ゼ抵抗性抗生物質の使用あるいは他の臨床的に使
用され得る抗生物質の使用が好ましい。 β―ラクタマーゼ産生性病原細菌を検出するに
は、一連の操作が記載されている〔「J.
Pharmacol.」第15巻第81〜91頁（1963年）参
照〕。しかしながら前記方法はすべて完全に満足
のいくものではない。何故ならばこれらは臨床上
の診断目的に特に適した比色定量試験が問題であ
る限りすべて指示薬（ヨード／澱粉、ヒドロキシ
ルアミン、PH指示薬）の添加を必要とするからで
ある。 かかる追加的な試験手順を必要とするβ―ラク
タマーゼ検出に対して色原体β―ラクタマーゼ基
質は、これら酵素によるβ―ラクタム環の開環が
直接スペクトルの可視的部分における色の変化を
きたすという利点を示す。かかる基質（化合物8
７／３１２）はオカラガン（O′Callaghan）氏他によ
り記載されている〔「Antimicrobial Agents
Chemotherpy」第１巻第283〜288頁（1972）〕。
しかしながらその記載によれば化合物87/312の溶
液の色の深色性変化はβ―ラクタマーゼの存在下
においてのみでなくまた非特異的な方法で血清、
動物組織、蛋白質、乳、システイン、グルタチオ
ン、メルカプトエタノールおよび２，３―ジメル
カプトプロパノール―１の添加後にも起る。この
ことは臨床上の単離物を誤つた判定に至らしめ得
る。 それゆえ、本発明の対象は、光学的に非常に良
好に視認し得る色変化例えば強い紫色から黄色へ
の変化により、β―ラクタマーゼ産生性病原細菌
の検出についておよびまた単離されたβ―ラクタ
マーゼ産生性病原細菌の活性測定および単離され
たβ―ラクタマーゼの活性測定についても非常に
良く適し、上記添加剤に対して安定である、β―
ラクタマーゼ基質としての新規な発色性セフアロ
スポリンにある。 本発明による化合物はすべての研究されている
グラム陰性細菌からのβ―ラクタマゼ特に臨床上
重要な細菌例えば大腸菌（E.Coli）RTEM.クレ
ブシエラ・アエロゲネス（Klebsiella
aerogenes）1082E、緑膿菌
（Pseudomonasaeruginosa）18SH、エンテロバ
クター・クロアカエ（Enterobacter Cloacae）
P99およびバクテロイデス・フラギリス
（Bacteroides fragilis）620から得られる酵素に
より分解される。本発明による化合物は同様にグ
ラム陽性細菌例えば黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus）R85からのβ―ラクタ
マーゼにより分解される。この化合物はその上ま
たβ―ラクタマーゼ産生性病原細菌の検出すなわ
ちこの破壊されていない細菌細胞中のβ―ラクタ
マーゼの検出に適している。 本発明による化合物を用いるβ―ラクタマーゼ
活性の検出は直接、すなわち追加的な試験手順を
伴うことなく行われる。何故ならば、本発明化合
物中の発色性置換基がβ―ラクタム環の開環と同
時に定量的に除去されるからで、このことが直接
（個々の置換基にとつて特異的に）色の変化を生
じる。 今や驚くべきことに、本発明による化合物が、
８０／３１２型のβ―ラクタマーゼ基質と反対に、β―
ラクタマーゼの活性にとつてまたは細菌の生存力
にとつて適している水溶液中、しかし特に中性PH
範囲において、−180℃〜60℃の温度範囲で加水分
解的分解に対して特別に安定であることが確認さ
れた。最終製剤溶液の保管は溶液がほとんど無限
に安定である−20℃で行われるが、中性に緩衝さ
れた溶液は長期間にわたつてその使用可能性を害
されることなく冷蔵庫温度で、その上室温でも保
管され得る。 その上、本発明による化合物は血清、蛋白質、
乳、システイン、ダルタチオン、メルカプトエタ
ノールおよび２，３―ジメルカプトプロパノール
―１（ジメルカプロール）の影響に対して完全に
安定であり、それにより80/312型のβ―ラクタマ
ーゼ基質に対するもう一つの予期されない優越性
が得られることが判つた。 従つて本発明の対象は一般式 を有する３―位に発色性基を有するセフアロスポ
リンにある。ここで上式中、 R1は水素、
【式】
【式】
【式】又は
【式】を表わし、 R2は
【式】（式中、R4及びR5は同 じか又は相異なつていてよく、低級アルキル基、
シアノ基もしくはアセトキシ基もしくはカルボキ
シル基で置換された低級アルキル基、又は５―
（８―Ｎ―カルボキシエチルアミノ）―キノリル
基を表わし、Ｘは―Ｎ＝Ｎ―を表わし、そしてｎ
は０，１又は２を表わす。 基―Ｘ―R2はピリジニウム環のα―、β―又
はγ―位にあつてよい。 本発明の意味においては一般式 を有する化合物が特に好ましい。ここで上式中、
R1は前記した意味を有し、R4及びR5は同じか又
は相異なつていてよく、低級アルキル基、又はシ
アノ基もしくはアセトキシ基もしくはカルボキシ
ル基で置換された低級アルキル基を表わす。 アミノフエニルジアゾ基とピリジニウム核との
結合はその位置により種々の本発明による化合物
ａ，ｂおよびｃを生じる。 本発明の対象はさらに式、 （式中、R1は前記した意味を有し、そしてＹ
は酸素あるいは硫黄を表わす）を有する化合物を
式 （式中、R2及びＸは前記した意味を有する）
を有する化合物と反応させることを特徴とする一
般式を有するセフアロスポリンの製法にある。 一般式を有する好ましい化合物が得られるべ
き場合は、式を有する化合物を式ａ （式中、R4及びR5は前記した意味を有する）
を有する化合物と反応せしめる。 本発明において、格別に好適な化合物であり、
PADAC（ピリジン―アゾ―ジメチルアニリノ―
セフアロチン）とも呼ばれている式 を有する７―（チエニル―２―アセトアミド）―
３―〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノ―フエ
ニルアゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフ
エム―４―カルボン酸は式 を有する化合物PADA（トランス―ピリジン―ア
ゾ―ｐ―ジメチルアニリン）と式 を有するセフアロチンとを反応させることにより
取得される。 本発明による方法の実施に必要な出発物質は文
献上既知であるかあるいは文献上既知の方法によ
り製造され得る。 式を有する化合物と式特にａを有する化
合物との反応は合目的々には水性媒質中で行わ
れ、その際溶解度を改良するために例えばメタノ
ール、エタノール、イソプロパノール、アセトニ
トリル、あるいはアセトンのような水と混和し得
る溶媒が添加される。反応成分は任意の割合で反
応させ得るがしかしモル比率が好ましい。反応は
約20〜80℃、好ましくは55〜65℃で行われる。反
応の間反応溶液のPH値は撹拌下に例えば水酸化ナ
トリウムあるいは飽和重炭酸ナトリウム溶液を添
加することにより約５〜８なかんずく6.5〜7.5に
保持される。 反応を改良するために反応媒質に沃化カリウム
あるいはチオシアン酸カリウムが（例えば用いら
れているセフアロスポリン１モル当り約５〜20モ
ルなかんずく10〜15モルの量で）添加され得る。 反応終了後に本発明による反応生成物を単離す
る。これには水と混和しうる溶媒例えばアセトン
を留去したのち未反応の式あるいはａを有す
る化合物例えばPADAを除去するために水相を
酢酸エステルあるいは他の適当な溶媒で抽出す
る。反応生成物は水相からPH約２〜４なかんずく
PH３で析出させるかあるいはメチレンクロリドも
しくは適当な有機溶媒を用いて同じPHで抽出する
ことにより取得される。抽出液を真空下に濃縮し
たのち反応生成物をこれらが難溶性である有機溶
媒例えばジエチルエーテルあるいは石油エーテル
を添加することにより析出させる。 本方法のもう一つの態様では一般式を有する
化合物は、式（式中R1は水素を意味する）を
有する化合物を式を有する化合物と前記方法で
反応させ続いて一般式（式中R1は水素を表わ
す）を有する得られる発色性化合物を一般式 R′―CO2H （式中、R′は
【式】
【式】
【式】又 は
【式】を表わす） を有するカルボン酸あるいはこれらカルボン酸の
活性化誘導体とをそれ自体既知の方法により反応
させることにより製造され得る。 一般式を有するカルボン酸の活性化誘導体と
しては特にハロゲン化物、なかんずく塩化物およ
び臭化物、さらに無水物および混合無水物、アジ
ドおよび活性化エステルあかんずくｐ―ニトロフ
エノール、２，４―ジニトロフエノール、メチレ
ンシアンヒドリン、Ｎ―ヒドロキシコハク酸イミ
ドおよびＮ―ヒドロキシフタルイミド特に好まし
くは１―ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび６
―クロル―１―Ｈ―ヒドロキシベンゾトリアゾー
ルとのエステルが適している。混合無水物として
特に低級アルカン酸例えば酢酸および特に好まし
くは例えばトリクロル酢酸、ピバリン酸あるいは
シアン酢酸のような置換酢酸との無水物が適当で
ある。しかしまた特に適当なのは、例えば式を
有するカルボン酸とクロルぎ酸ベンジルエステ
ル、―ｐ―ニトロベンジルエステル、―イソブチ
ルエステル、―エチルエステルあるいは―アリル
エステルとを反応させることにより得られる炭酸
半エステルとの混合無水物である。活性化された
誘導体は単離された物質としてかまたはそのまま
で反応され得る。一般に式（式中R1は水素を
表わす）を有するセフエム誘導体と式を有する
カルボン酸あるいはその活性化誘導体との反応は
不活性溶媒の存在下に行われる。特に適当なの
は、なかんずくメチレンクロリドおよびクロロホ
ルムのような塩素化炭化水素、例えばジエチルエ
ーテル、ジイソプロピルエーテルおよびなかんず
くテトラヒドロフランおよびジオキサンのような
エーテル、なかんずくアセトンおよびブタノンの
ようなケトン、なかんずくジメチルホルムアミド
およびジメチルアセトアミドのようなアミド、あ
るいは水である。また上記溶媒の混合物を使用す
ることも好ましい。式（式中R1は水素を表わ
す）を有するセフエム化合物を式を有するカル
ボン酸のその場で得られる活性化誘導体と反応さ
せる場合にはしばしばそうである。 式（式中R1は水素を表わす）を有するセフ
エム化合物と式を有するカルボン酸またはその
活性化誘導体との反応は約−50〜約＋80℃なかん
ずく−20〜＋50℃特に好ましくは−20℃ないし室
温で行われ得る。 反応時間は反応体、温度および溶媒または溶媒
混合物の如何に応じて通常の方法で約１／４〜約
72時間である。 式を有するカルボン酸の活性化誘導体と式
（式中R1は水素を表わす）を有するセフエム化合
物との反応はなかんずくPH７以上のアルカリ性媒
質中で行われる。そのためにはなかんずく炭酸カ
リウムあるいはナトリウム、重炭酸カリウムある
いはナトリウム、水酸化カリウムあるいは、ナト
リウム、ピリジンあるいは例えばトリエチルアミ
ンのようなトリアルキルアミン、Ｎ―メチルモル
ホリン、エチルジイソプロピルアミンあるいはカ
リウム第三ブチラートのような塩基を反応混合物
に加える。 本発明により得られるセフアロスポリンの精製
はそれ自体既知の方法でアリカゲル、セルロー
ス、セフアデツクスＧ―10、Ｇ―25あるいはLH
―20、アンバーライト（Amberlite）XAD―２
およびXAD―４あるいはダイヤイオン（Diaion）
HP―20のような吸着樹脂でのクロマトグラフイ
ーにより行われ得る。 前述した格別に好適な化合物であるPADACは
強い紫色（λmax566nm）を有し、これはβ―ラ
クタマーゼ、例えば、エンテロバクター・クロア
カエP99（Enterobacter cloacaeP99）のβ―ラク
タマーゼとの反応後に黄色に変化する（λmax
465nm）。同様の反応は他のβ―ラクタマーゼ、
例えば、大腸菌RTEM（Escherichia coli RTEM）、
クレブシエラ・アエロゲネス1082E（Klebsiella
aerogenes1082E）、エンテロバクター・クロアカ
エP99（Enterobacter cloacaeP99）、緑膿菌18SH
（Pseudomonas aeruginose 18SH）、バクテロイ
デス・フラギリス620（Bacteroides fragilis620）
及び黄色葡萄球菌R85（Staph.aureusR85）由来
のβ―ラクタマーゼを用いても起こる。他の本発
明による発色性セフアロスポリンはβ―ラクタマ
ーゼとの反応に際して相当する色変化を生じる。 本発明による化合物は、例えば発色性セフアロ
スポリンの中性に緩衝化された水溶液に直接単離
されたβ―ラクタマーゼを加えるかあるいはβ―
ラクタマーゼ産生性病原細菌の細胞懸濁液を加え
ることによりβ―ラクタマーゼの検出に使用さ
れ、その際セフアロスポリン濃度を適当に選択す
ると個々の化合物に特徴的な色の変化が観察され
る。β―ラクタマーゼ検出はまた、本発明による
化合物を、緩衝溶液の代りに、細菌の生長に必要
な栄養素をすべて包含している。熱寒天中にはじ
めに溶解させる形で行われる。それにより慣用の
方法で調製された試験用シヤーレ上に、相当して
希釈されている検査されるべき臨床試料を直接入
れる。検査されるべき病原細菌に特異的に必要な
温度で試験シヤーレを培養したのち、β―ラクタ
マーゼ産生性細菌の周囲の色の変化を観察する。
あるいはまた、他の方法で得られる臨床単離物を
コロニー上澄みの形で紙製あるいは例えば吸収性
人工物質、デキストランその他の天然重合体のよ
うな他の適当な担体物質製の予め適当ななかんず
く本発明による化合物の水溶液で湿らせた湿潤試
験片上に塗布する。ここでもβ―ラクタマーゼ陽
性試料は短時間内で特徴的な色の変化を示す。 本発明によつて実施例にあげられている化合物
の他に例えば下記の表に示される化合物が製造
される。
【表】
【表】
【表】 本発明による発色性セフアロスポリンの製造お
よび使用を以下の実施例により説明する。 実施例 １ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノフエニル
アゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフエ
ム―４―カルボン酸（PADAC） 撹拌器、温度計およびPH電極を有する1l容三頚
丸底フラスコに入れたアセトン250ml中トランス
―ピリジン―２―アゾ―4′―ジメチルアニリン
（PADA）2.26g（10ミリモル）の溶液を55〜60℃
の水浴中で加温する。この溶液中に水100ml中の
セフアロチンナトリウム塩4.0g（10ミリモル）の
溶液を加える。飽和重炭酸ナトリウム溶液を用い
てPH7.3〜7.5に調製後反応を薄層クロマトグラム
で追跡する〔シリカゲル（Merck社製）F254、
系：酢酸エチル／イソプロパノール／水（20：
15：10）〕。所望の最終生成物はRf0.54を有する紫
色の吸収帯として現われる。 反応終了後アセトンを真空下に留去しそして水
性残留物をPH８に調整する。不溶の物質（未反応
のPADA）を分離し、そして残りのPADAを除
去するために水相を酢酸エチルで数回抽出する。 水相を希塩酸を用いてPH5.7に調整し各１容量
のメチレンクロリドを用いて数回抽出する。合し
たメチレンクロリド相を真空下に100mlまで濃縮
し、そしてジエチルエーテル300mlを添加するこ
とによりPADACを析出させる。紫色の沈殿をフ
リツトで吸引過し、少量のエーテルで洗いそし
て乾燥する。暗紫色粉末としての粗PADACの収
量1.01g。 粗PADAC0.5gを水20ml中に懸濁させる。この
懸濁液を撹拌および冷却下に一定したPH値７に達
するまで0.1n NaOHを滴下する。この溶液を凍
結乾燥すると0.5gの水に容易に溶解するPADAC
のナトリウム塩が得られる。 実施例 ２ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノフエニル
アゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフエ
ム―４―カルボン酸（PADAC） 撹拌器、温度計およびPH電極を有する3l容の四
頚フラスコ中でセフアロチンナトリウム塩40gお
よび沃化カリウム240gを水1l中に溶解させる。こ
れと別にアセトン500ml中にPADA22.6gを溶解
し、同様にフラスコ中に加える。PHを6.5に調整
し、そしてこのフラスコを水浴中60℃に加温する
（恒温槽）。反応の間飽和重炭酸ナトリウム溶液を
用いてPHを6.5に保持する。５時間後アセトンを
反応溶液から除去し、水相から析出する未反応の
PADAを過して分離する。水相を苛性ソーダ
でPH８に調整後各800mlずつの酢酸エチルを用い
て３回抽出する。水性残留物を1n硫酸を用いて
PH３に調整し、その際析出するPADACを過
し、少量の水で洗いそして高真空下に乾燥する。
紫色粉末11.8g。 母液から各1lのメチレンクロリドを用いて２回
抽出することにより純度の劣るPADACがさらに
得られる。生成物はメチレンクロリドを200mlま
で蒸発させたのちジエチルエーチル600mlを用い
て析出させ、吸引過し、エーテルで洗いそして
乾燥する。粗PADACの収量5.2g。 粗PADAC1gを酢酸エチル／イソプロピパノー
ル／水（４：３：２）の混合物20ml中に溶解し、
同じ溶媒中に懸濁した粒子寸法0.063〜0.2mmのシ
リカゲル（「メルク」60）100gのカラム中に加え
る。この系を用いて展開させ、黄―赤色のはじめ
の進行帯を分離したのちPADACを含有する紫色
帯を溶離する。水相となるまで活性画分を蒸発さ
せたのち凍結乾燥する。純粋なPADACの収量
300mg。 λmax566nm（５％アセトニトリル）（ε＝
42200）、β―ラクタマーゼの添加後消失。 IR：3400，1768（β―ラクタム）、1666，1600，
1562，1540，1485，1390，1350，1330，1300，
1269，1225，1150，1105，932，910，837，
785，700cm-1。 NMR（CD3）3SO：9.0（ｄ、1H）、6.5〜8.0（ｍ）、
5.5（ｍ）、5.0（ｓ）、3.7（ｓ）、3.1（ｓ）
ppm。 実施例 ３ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ―メチル―Ｎ―シアノエチル―
アミノ―フエニルアゾ）―ピリジニウム―メチ
ル〕―３―セフエム―４―カルボン酸 水２ml中のセフアロチンNa塩80mgの溶液をア
セトン１ml中ピリジン―２―アゾ―4′―Ｎ―メチ
ル―4′―Ｎ―シアノエチルアニリン（）45mgの
溶液と混合する。この溶液をPH6.5に調整し、そ
して水浴中60℃に加温する。反応の進行を系
（実施例１参照）を使用して薄層クロマトグラフ
イーにより追跡する。５時間後反応が終了する。
反応物を酢酸エチルを用いて抽出し、水相を1n
硫酸を用いてPH３に調整し、そしてメチレンクロ
リドを用いて抽出する。濃縮した抽出液からジエ
チルエーテルを添加することにより生成物を紫色
の粉末として析出させ且つ乾燥させる。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.54、 λmax543nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ４ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ―アセトキシエチル―４―Ｎ―
シアノエチル―アミノ―フエニルアゾ）―ピリ
ジニウム―メチル〕―３―セフエム―４―カル
ボン酸 水２ml中セフアロチンNa塩80mgの溶液をピリ
ジン―２―アゾ―4′―Ｎ―アセトキシエチル―Ｎ
―シアノエチル―アニリン45mgの溶液と実施例５
に記載されている方法で反応させそして反応生成
物を紫色粉末として単離する。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.54、 λmax520nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ５ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジアセトキシエチル―ア
ミノ―フエニルアゾ）―ピリジニウム―メチ
ル〕―３―セフエム―４―カルボン酸 水４ml中セフアロチンNa塩160mgの溶液をピリ
ジン―２―アゾ―4′―Ｎ，Ｎ―ジアセトキシエチ
ル―アニリン90mgの溶液と実施例５に記載されて
いる方法で反応させそして反応生成物を単離す
る。紫色粉末。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.64、 λmax544nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ６ ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔３―（４―Ｎ，Ｎ―ジエチルアミノ―フエニ
ルアゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフ
エム―４―カルボン酸 水２ml中のセフアロチンNa塩80mgをピリジン
―３―アゾ―4′―Ｎ，Ｎ―ジエチルアニリン45mg
と実施例５に記載されている方法で反応させそし
て反応生成物を単離する。赤色粉末。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.76、 λmax506nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ７ ７―（Ｎ―ベンゾイル―５―アミノ―５―カル
ボキシ―バレロイルアミド）―３―〔２―（４
―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノ―フエニルアゾ）―
ピリジニウム―メチル〕―３―セフエム―４―
カルボン酸 Ｎ―ベンゾイル―セフアロスポリンＣヘキサメ
チレンジアミン塩13.6gを水500ml中に溶解し、ア
セトン250ml中PADA11.3gの溶液と混合しそして
PH6.5に調整する。撹拌下に水浴上５時間60℃に
加温し、その際飽和炭酸ナトリウム溶液を添加す
ることによりPHを6.5に保持する。反応を薄層ク
ロマトグラフイーにより追跡する（系）。反応
終了後に溶液を４℃に冷却すると未反応の
PADAがほとんど完全に析出し、これは分離後
に新たな反応に使用され得る。この溶液を水相と
なるまで濃縮（300ml）し、そして１容量の酢酸
エチルを用いて１回抽出する。1n硫酸を用いて
PH３に調整後水相を各１容量ずつのブタノールを
用いて３回抽出し、ブタノールを真空下に約60ml
まで濃縮しそして反応生成物を２〜３容量のジエ
チルエーテルを添加することにより析出させる。
粗製の標記化合物13gが淡紫色粉末として得ら
れ、これはまたかなりな量のＮ―ベンゾイル―セ
フアロスポリンＣを包含している。 粗生成物1.2gを酢酸エチル／イソプロパノー
ル／水（４：３：２）混合物20ml中に溶解し、同
じ溶媒系中に懸濁した粒子寸法0.063〜0.2mmのシ
リカゲル（「メルク」60）100gのカラムに入れ、
同じ系を用いて展開させる。所望の生成物を包含
している紫色帯を分離して捕捉し、水相となるま
で蒸発させたのち凍結乾燥する。68mgの高度に純
粋な標記化合物が紫色粉末として得られる。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.33、 λmax566nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ８ ７―アミノ―３―〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチ
ルアミノ―フエニルアゾ）―ピリジニウム―メ
チル〕―３―セフエム―４―カルボン酸 水50ml中７―アミノセフアロスポリン酸1.36g
の溶液をアセトン25ml中PADA1.13gの溶液と合
しそしてPH6.5に調整する。60℃の水浴中におけ
る反応は３時間後に終了する。アセトンを留去し
たのち水相を１容量の酢酸エチルで２回抽出し、
15mlまで蒸発させ、そしてアセトン110mlを加え
る。析出する生成物を遠心分離し、アセトンで洗
いそして乾燥する。粗製の標記化合物1.2gが紫色
粉末として得られる。 得られた粗生成物の200mgを水５ml中に溶解し、
水中に懸濁した吸着樹脂ダイヤイオンHP―2010
mlのカラム上にこの溶液を入れ、以下の溶離剤す
なわち水、10％アセトニトリルおよび20％アセト
ニトリルの各50mlで展開させる。所望の生成物を
10％および20％アセトニトリルで溶離し、活性画
分を真空下蒸発させると、高度に純粋な標記化合
物51mgが紫色粉末として得られる。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.15、 λmax566nm（５％アセトニトリル）。 実施例 ９ ７―フエニルアセトアミド―３―〔２―（４―
Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノ―フエニルアゾ）―ピ
リジニウム―メチル〕―３―セフエム―４―カ
ルボン酸 実施例８により得られる７―アミノ―３―〔２
―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノ―フエニルア
ゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフエム―
４―カルボン酸159mg（0.5ミリモル）を炭酸ナト
リウム120mgと共に水８mlおよびアセトン10ml中
に溶解させる。これを氷水中で冷却し、そしてア
セトン１ml中のフエナセチルクロリド80mgの溶液
を加える。０℃で１時間撹拌後さらにアセトン
0.2ml中のフエナセチルクロリド16mgを加える。
０℃でさらに１時間後に水20mlを用いて希釈し、
アセトンを真空下に除去しそしてPHを8.0に調整
する。酢酸エチルを用いて２回振盪したのち水相
をPH1.0に調整し、水溶液が無色となるまでｎ―
ブタノールを用いて抽出する。合したブタノール
抽出液に２倍量のクロロホルムを加えそして蒸発
乾固させる。残留物をエタノールで２回抽出す
る。エタノールを蒸発させたのちに、汚染物とし
てフエニル酢酸を有する標記化合物110mgが紫色
粉末として残る。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.53、 λmax566nm（５％アセトニトリル）。 実施例 10 ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノフエニル
アゾ）―ピリジニウム―メチル〕―３―セフエ
ム―４―カルボン酸（PADAC） 実施例８により得られる７―アミノ―３―〔２
―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノ―フエニルア
ゾ）―ピリジニウムメチル〕―３―セフエム―４
―カルボン酸159mgからチエニル―２―アセチル
クロリド80mgを用いて実施例９に記載されている
方法と同様にしてチエニル酢酸で汚染された
PADAC90mgが得られる。薄層クロマトグラフイ
ーおよびλmaxは実施例２におけると同様であ
る。 実施例 11 ７―フエノキシアセトアミド―３―〔２―（４
―Ｎ，Ｎ―ジメチルアミノフエニルアゾ）―ピ
リジニウム―メチル〕―３―セフエム―４―カ
ルボン酸 実施例８により得られる７―アミノ―３―〔２
―（４―Ｎ，Ｎ―ジメチル―アミノ―フエニルア
ゾ）―ピリジニウムメチル〕―３―セフエム―４
―カルボン酸159mgからフエノキシアセチルクロ
リド85mgを用いて実施例９に記載されている方法
と同様にしてフエノキシ酢酸により汚染された紫
色の標記化合物150mgが得られる。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.51、 λmax566nm（５％アセトニトリル）。 実施例 12 ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ―エチル―４―Ｎ―カルボキシ
エチルアミノ―フエニルアゾ）―ピリジニウム
―メチル〕―３―セフエム―４―カルボン酸 セフアロチンNa塩400mgをピリジン―２―アゾ
―4′―Ｎ―エチル―4′―Ｎ―カルボキシエチル―
アニリン225mgと実施例３に記載されている方法
で反応させそして反応生成物を単離する。 紫色粉末。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.49、 λmax566nm（５％アセトニトリル）。 水に容易に溶解するNa塩に変換するには生成
物を水中に懸濁し、この懸濁液を希NaOHを撹
拌下に慎重に添加することによりPH７に調整し、
そしてこの溶液を凍結乾燥する。 実施例 13 ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔２―（４―Ｎ―エチル―４―Ｎ―カルボキシ
―エチル―アミノ―フエニルアゾ）―ピリジニ
ウム―メチル〕―３―セフエム―４―カルボン
酸 セフアロチンNa塩200mgをピリジン―３―アゾ
―4′―Ｎ―エチル―4′―Ｎ―カルボキシエチル―
アニリン112mgと実施例３に記載されている方法
で反応させそして反応生成物を単離する。赤色粉
末。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.53、 λmax499nm（５％アセトニトリル）。 Na塩への変換は実施例12と同様にして行われ
る。 実施例 14 ７―（チエニル―２―アセトアミド）―３―
〔３―（８―Ｎ―カルボキシエチルアミノ―キ
ノリン―５―アゾ）―ピリジニウム―メチル〕
―３―セフエム―４―カルボン酸 セフアロチンNa塩240mgをピリジン―３―アゾ
―5′―（8′―カルボキシエチルアミノ）―キノリ
ン180mgと実施例３に記載されている方法で反応
させ、そして反応生成物を単離する。 赤紫色粉末。 薄層クロマトグラフイー（系）Rf＝0.40、 λmax516nm（５％アセトニトリル）。 水溶性Na塩への変換は実施例12と同様にして
行われる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 〔ここで上式中、R1は水素、
    【式】 【式】 【式】又は 【式】を表わし、 R2は【式】（式中、R4及びR5は 同じか又は相異なつていてよく、低級アルキル
    基、又は、シアノ基もしくはアセトキシ基もしく
    はカルボキシル基で置換された低級アルキル基を
    表わす）又は５―（８―Ｎ―カルボキシエチルア
    ミノ）―キノリル基を表わし、 Ｘは―Ｎ＝Ｎ―を表わし、そして ｎは０，１又は２を表わす。〕 を有するセフアロスポリン。 ２ 一般式 〔ここで上式中、R1は水素、
    【式】 【式】 【式】又は 【式】を表わし、 【式】（式中、R4及びR5は 同じか又は相異なつていてよく、低級アルキル
    基、又は、シアノ基もしくはアセトキシ基もしく
    はカルボキシル基で置換された低級アルキル基を
    表わす）又は５―（８―Ｎ―カルボキシエチルア
    ミノ）―キノリル基を表わし、 Ｘは―Ｎ＝Ｎ―を表わし、そして ｎは０，１又は２を表わす。〕 を有するセフアロスポリンの製造法において、 式 （式中、R1は前記した意味を有し、そしてＹ
    は酸素あるいは硫黄を表わす）を有する化合物を 式 （式中、R2及びＸは前記した意味を有する）
    を有する化合物と反応させることを特徴とする、
    上記一般式を有するセフアロスポリンの製造
    法。 ３ 一般式 〔ここで上式中、R1は【式】 【式】 【式】又は 【式】を表わし、 【式】（式中、R4及びR5は 同じか又は相異なつていてよく、低級アルキル
    基、又は、シアノ基もしくはアセトキシ基もしく
    はカルボキシル基で置換された低級アルキル基を
    表わす）、又は５―（８―Ｎ―カルボキシエチル
    アミノ）―キノリル基を表わし、 Ｘは―Ｎ＝Ｎ―を表わし、そして ｎは０，１又は２を表わす。〕 を有するセフアロスポリンの製造法において、 式 （式中、Ｙは酸素あるいは硫黄を表わす）を有
    する化合物を式 （式中、R2及びＸは前記した意味を有する）
    を有する化合物と反応させ、得られる一般式′ （式中、R2及びＸは前記した意味を有する）
    を有する化合物を更に一般式 R′―CO2H （式中、R′は【式】 【式】【式】又 は【式】を表わす） を有するカルボン酸あるいはこのカルボン酸の活
    性化誘導体と反応させることを特徴とする、上記
    一般式を有するセフアロスポリンの製造法。 ４ 一般式 〔ここで上式中、R1は水素、
    【式】 【式】 【式】又は 【式】を表わし、 R2【式】（式中、R4及びR5 は同じか又は相異なつていてよく、低級アルキル
    基、又は、シアノ基もしくはアセトキシ基もしく
    はカルボキシル基で置換された低級アルキル基を
    表わす）又は５―（８―Ｎ―カルボキシエチルア
    ミノ）―キノリル基を表わし、 Ｘは―Ｎ＝Ｎ―を表わし、そして ｎは０，１又は２を表わす〕 を有する発色性セフアロスポリンを溶液中にかあ
    るいは担体物質上に含有せしめたβ―ラクタマー
    ゼ検出用製剤。 ５ 担体物質が寒天である特許請求の範囲第４項
    記載の製剤。 ６ 担体物質が紙あるいは他の適当な物質からな
    る試験片である特許請求の範囲第４項記載の製
    剤。
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3006889A1 (de) * 1980-02-23 1981-09-10 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Chromogene cephalosporine und verfahren zu ihrer herstellung
DE3019451A1 (de) * 1980-05-21 1981-11-26 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagens zur bestimmung von (beta) -lactamasen
US4555396A (en) * 1982-12-22 1985-11-26 Eastman Kodak Company Use of pyrylium and thiapyrylium compounds as biological stains
US4840784A (en) * 1982-12-22 1989-06-20 Eastman Kodak Company Use of pyrylium and thiapyrylium compounds as biological stains
US4568637A (en) * 1983-08-10 1986-02-04 Whittaker M.A. Bioproducts, Inc. Method of determining antibiotics in biological liquids
US4692443A (en) * 1983-10-17 1987-09-08 Eli Lilly And Company 3-bicyclicpyridinium-methyl cephalosporins
US4760018A (en) * 1985-06-17 1988-07-26 Penicillin Assays, Inc. Rapid method for the detection of beta-lactamase in body fluids
US4764462A (en) * 1985-08-23 1988-08-16 Georgetown University Detectably labeled cephalosporin assay for beta-lactamase
US5096668A (en) * 1990-04-26 1992-03-17 Difco Laboratories Diagnostic test slide
US5338843A (en) * 1992-01-30 1994-08-16 Becton, Dickinson And Company Fluorogenic and chromogenic β-lactamase substrates
US5411893A (en) * 1993-03-15 1995-05-02 Difco Laboratories Dry slide for diagnostic tests
US5741657A (en) * 1995-03-20 1998-04-21 The Regents Of The University Of California Fluorogenic substrates for β-lactamase and methods of use
US5955604A (en) * 1996-10-15 1999-09-21 The Regents Of The University Of California Substrates for β-lactamase and uses thereof
US6031094A (en) * 1998-07-23 2000-02-29 The Regents Of The University Of California Beta-lactam substrates and uses thereof
DE10029808C1 (de) 2000-06-16 2001-11-29 Daimler Chrysler Ag Abgasturbolader für eine Brennkraftmaschine
US20020177229A1 (en) * 2001-01-19 2002-11-28 Ivo Piest Swap/counter selection: a rapid cloning method
WO2010016911A2 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 The Texas A & M University System Use of bacterial beta-lactamase for in vitro diagnostics and in vivo imaging, diagnostics and therapeutics
FR2956866B1 (fr) * 2010-03-01 2014-01-10 Bio Rad Pasteur Procede de detection en milieu liquide de bacteries resistantes aux cephalosporines de troisieme generation

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4024134A (en) * 1971-01-29 1977-05-17 Glaxo Laboratories Limited Syn isomers of cephalosporins having α-hydroximino- or α-acyloxyiminoacylamido groups at position-7
BE789817A (fr) * 1971-10-07 1973-04-06 Glaxo Lab Ltd Perfectionnements aux composes de cephalosporine
US4198504A (en) * 1978-11-02 1980-04-15 Bristol-Myers Company [3-(Pyridinium)-7-(naphthyiridinyl carbonylamino)acetamido]cephalosporanic acid derivatives

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Publication number Publication date
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JPS55143994A (en) 1980-11-10
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DE2916433A1 (de) 1980-11-13
GB2049681B (en) 1983-04-27
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IT8021564A0 (it) 1980-04-22

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