JPH02115198A - 動物コラゲナーゼ阻害剤 - Google Patents
動物コラゲナーゼ阻害剤Info
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- JPH02115198A JPH02115198A JP63266112A JP26611288A JPH02115198A JP H02115198 A JPH02115198 A JP H02115198A JP 63266112 A JP63266112 A JP 63266112A JP 26611288 A JP26611288 A JP 26611288A JP H02115198 A JPH02115198 A JP H02115198A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はベンジルオキシカルボニル−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−
Ｌｅｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ及びその塩基との塩、及び
それらを有効成分とする動物コラゲナーゼ阻害剤に関し
、コラゲナーゼが関連する疾病であるリウマチ性関節炎
、歯根膜炎、腫瘍細胞の浸潤などの治療または予防に有
用であると期待される。
Ｌｅｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ及びその塩基との塩、及び
それらを有効成分とする動物コラゲナーゼ阻害剤に関し
、コラゲナーゼが関連する疾病であるリウマチ性関節炎
、歯根膜炎、腫瘍細胞の浸潤などの治療または予防に有
用であると期待される。
高等動物の蛋白質の３０％を占めるコラーゲンは、３本
のα鎖からなる右巻の３重らせん構造を形成している。
のα鎖からなる右巻の３重らせん構造を形成している。
α鎖はおよそ１０００個のアミノ酸残基からなるポリペ
プチド鎖であり、３重鎖ヘリックス構造は生理的条件で
は安定で、普通のプロテアーゼに対しては抵抗性を示し
、α鎖のｃｔｙ−ｘ−ｙの配列を認識して切断する細菌
性コラゲナーゼ、あるいはコラーゲン分子を３：１に切
断する動物コラゲナーゼによってのみ分解される。
プチド鎖であり、３重鎖ヘリックス構造は生理的条件で
は安定で、普通のプロテアーゼに対しては抵抗性を示し
、α鎖のｃｔｙ−ｘ−ｙの配列を認識して切断する細菌
性コラゲナーゼ、あるいはコラーゲン分子を３：１に切
断する動物コラゲナーゼによってのみ分解される。
動物コラゲナーゼは、まず１９６２年にオタマジャクシ
尾ヒレの組織培養液から発見され、その後、両性類のみ
ならず、哺乳類の皮膚、骨をはじめとした各種組織に分
布することが明らかとなった。
尾ヒレの組織培養液から発見され、その後、両性類のみ
ならず、哺乳類の皮膚、骨をはじめとした各種組織に分
布することが明らかとなった。
また、発生分化、成長に伴う組織、器官の組み換え時、
および腫瘍、リウマチ患者関節液に高いコラゲナーゼ活
性が認められ、本酵素は生理的条件下ならびに病態時の
結合組織の代謝と密接な関係があると考えられるに至っ
ている。
および腫瘍、リウマチ患者関節液に高いコラゲナーゼ活
性が認められ、本酵素は生理的条件下ならびに病態時の
結合組織の代謝と密接な関係があると考えられるに至っ
ている。
従って、近年、リウマチ性関節炎、歯根膜病、腫瘍細胞
の浸潤などの治療を目的としたコラゲナーゼ阻害剤が合
成された（特開昭５７−２１２１５７ 、バイオケミス
トリー 筺、 １９６２（１９８７）。
の浸潤などの治療を目的としたコラゲナーゼ阻害剤が合
成された（特開昭５７−２１２１５７ 、バイオケミス
トリー 筺、 １９６２（１９８７）。
また、天然物由来のコラゲナーゼ阻害剤としては大豆蛋
白質由来のポリペプチドが発見されている（特開昭５７
−７４９０）。
白質由来のポリペプチドが発見されている（特開昭５７
−７４９０）。
しかし、現在までに知られているコラゲナーゼ阻害剤は
、その阻害活性がそれ程高くないのが実情である。
、その阻害活性がそれ程高くないのが実情である。
上記状況よりリウマチ性関節炎などの治療及び予防を目
的としたコラゲナーゼ阻害剤が広く求められる現今であ
る。従って、本発明は優れたコラゲナーゼ阻害作用を有
するペプチド及びその塩基との塩、及びかかるペプチド
またはその塩基との塩を有効成分とするコラゲナーゼ阻
害剤を提供することを目的とする。
的としたコラゲナーゼ阻害剤が広く求められる現今であ
る。従って、本発明は優れたコラゲナーゼ阻害作用を有
するペプチド及びその塩基との塩、及びかかるペプチド
またはその塩基との塩を有効成分とするコラゲナーゼ阻
害剤を提供することを目的とする。
動物コラゲナーゼは活性中心に亜鉛を有する金属プロテ
アーゼであり、微生物由来の金属プロテアーゼであるサ
ーモライシンに若干類似した点がある。本発明者らはこ
の点に着目し、まず新規サーモライシン阻害剤を天然物
中に求め、ついでサーモライシン阻害剤を基本に新規コ
ラゲナーゼ阻害剤を合成することを試みた。なお、特に
断らない限り以下のアミノ酸はＬ体とする。すなわち、
非０アルブミンのキモトリプシン加水分解物中にサーモ
、ライシン阻害活性を有するペプチドＧｌｎ−Ｔｈｒ−
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｕ−Ｌｅｕを発見し、そのカルボキシル末端付近がそ
の活性に重要であると推定した。そこでこのＧｌｕ−Ｌ
ｅｕ部分に種々のアミノ酸を結合させることを試みた結
果、本発明のヘンシルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙが動物コラゲナーゼを阻害すること
を発見した。すなわち本発明は、新規なコラゲナーゼ阻
害ペプチドであるベンジルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ａｌａｃｔｙ及びその塩基との塩、及びベンジ
ルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
またはその塩基との塩を有効成分として含有する動物コ
ラゲナーゼ阻害剤に関する。
アーゼであり、微生物由来の金属プロテアーゼであるサ
ーモライシンに若干類似した点がある。本発明者らはこ
の点に着目し、まず新規サーモライシン阻害剤を天然物
中に求め、ついでサーモライシン阻害剤を基本に新規コ
ラゲナーゼ阻害剤を合成することを試みた。なお、特に
断らない限り以下のアミノ酸はＬ体とする。すなわち、
非０アルブミンのキモトリプシン加水分解物中にサーモ
、ライシン阻害活性を有するペプチドＧｌｎ−Ｔｈｒ−
Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｕ−Ｌｅｕを発見し、そのカルボキシル末端付近がそ
の活性に重要であると推定した。そこでこのＧｌｕ−Ｌ
ｅｕ部分に種々のアミノ酸を結合させることを試みた結
果、本発明のヘンシルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙが動物コラゲナーゼを阻害すること
を発見した。すなわち本発明は、新規なコラゲナーゼ阻
害ペプチドであるベンジルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−
Ｌｅｕ−Ａｌａｃｔｙ及びその塩基との塩、及びベンジ
ルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
またはその塩基との塩を有効成分として含有する動物コ
ラゲナーゼ阻害剤に関する。
ここで塩基との塩は、製薬上許容される塩基（無機塩基
及び有機塩基）との塩、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、
アルミニウム塩等の無機塩基との塩、及び塩基性アミノ
酸（例えばアルギニン、リジン）等の有機アミンとの塩
を包含する。
及び有機塩基）との塩、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、
アルミニウム塩等の無機塩基との塩、及び塩基性アミノ
酸（例えばアルギニン、リジン）等の有機アミンとの塩
を包含する。
本発明のベンジルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−
Ａｌａ−Ｇｌｙは主として有機化学的な合成方法により
アミノ酸を段階的に導入する方法によって製造される。
Ａｌａ−Ｇｌｙは主として有機化学的な合成方法により
アミノ酸を段階的に導入する方法によって製造される。
また、加水分解酵素の逆反応を利用したペプチド合成法
によって製造することもできる。すなわち有機化学的合
成法では通常個々のアミノ酸を順次縮合させるが、この
縮合は通常保護されたα−アミノ基及び活性末端カルボ
キシル基を有するアミノ酸と遊離α−アミノ基及び保護
された末端カルボキシル基を有するアミノ酸とを適当な
溶媒中反応させることにより行う。合成はいかなる順序
によってもよいが、Ｃ−末端側から順次アミノ酸を連結
させるのが好ましい。α−アミン基の保護基はペプチド
合成で使用される種々のアミノ保護基を含有し、ターシ
ャリ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）等が例示され
る。末端カルボキシル基の保護基はペプチド合成で使用
される種々のカルボキシル保護基を包含し、メチルエス
テル基、エチルエステル基等が例示される。グルタミン
酸ではγ−カルボキシル基も通常保護され、保護基とし
てはベンジルオキシカルボニル基等が用いられる。末端
カルボキシル基の活性化はペプチド合成で常用される方
法で行えばよく、例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカ
ルボジイミド（ＤＣＣ） 、１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢｔ）等の活性化剤を用いて行うことが
できる。ＤＣＣと１ｌＯＢｔは組み合わせて使用する方
が好ましい。溶媒としてはジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）等が用いられる。縮合反応は通常０°Ｃ〜室温で１
〜３０時間行う。保護基の脱離及び生産物の精製はペプ
チド合成における常法で行えばよく例えば実施例に示す
方法によればよい。
によって製造することもできる。すなわち有機化学的合
成法では通常個々のアミノ酸を順次縮合させるが、この
縮合は通常保護されたα−アミノ基及び活性末端カルボ
キシル基を有するアミノ酸と遊離α−アミノ基及び保護
された末端カルボキシル基を有するアミノ酸とを適当な
溶媒中反応させることにより行う。合成はいかなる順序
によってもよいが、Ｃ−末端側から順次アミノ酸を連結
させるのが好ましい。α−アミン基の保護基はペプチド
合成で使用される種々のアミノ保護基を含有し、ターシ
ャリ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）等が例示され
る。末端カルボキシル基の保護基はペプチド合成で使用
される種々のカルボキシル保護基を包含し、メチルエス
テル基、エチルエステル基等が例示される。グルタミン
酸ではγ−カルボキシル基も通常保護され、保護基とし
てはベンジルオキシカルボニル基等が用いられる。末端
カルボキシル基の活性化はペプチド合成で常用される方
法で行えばよく、例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカ
ルボジイミド（ＤＣＣ） 、１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（ＨＯＢｔ）等の活性化剤を用いて行うことが
できる。ＤＣＣと１ｌＯＢｔは組み合わせて使用する方
が好ましい。溶媒としてはジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）等が用いられる。縮合反応は通常０°Ｃ〜室温で１
〜３０時間行う。保護基の脱離及び生産物の精製はペプ
チド合成における常法で行えばよく例えば実施例に示す
方法によればよい。
本ペプチドの塩基との塩は常法により製造することがで
きる。
きる。
本ペプチドは動物コラゲナーゼ阻害作用を有し、ヒトを
はじめとする哺乳動物のリウマチ性関節炎、歯根膜病、
ｌ１ｆｉ瘍細胞の浸潤などの治療または予防に有用であ
ると期待される。
はじめとする哺乳動物のリウマチ性関節炎、歯根膜病、
ｌ１ｆｉ瘍細胞の浸潤などの治療または予防に有用であ
ると期待される。
本ペプチド及びその塩基との塩はそのまま、または通常
少なくとも１つの製薬補助剤と混合した製薬組成物にし
て使用する。本ペプチド及びその塩基との塩は非経口的
（すなわち、静脈注射、直接塗布）または経口的に投与
し、各投与方法に適した形態に製剤することができる。
少なくとも１つの製薬補助剤と混合した製薬組成物にし
て使用する。本ペプチド及びその塩基との塩は非経口的
（すなわち、静脈注射、直接塗布）または経口的に投与
し、各投与方法に適した形態に製剤することができる。
−注射剤としての製剤形態は、通常滅菌水水溶液を含有
する。上記形態の製剤はまた緩衝剤・ｐＨ調節剤（リン
酸水素ナトリウム、クエン酸等）、等張化剤（塩化ナト
リウム、グルコース等）、保存剤（ｐ−ヒドロキシ安息
香酸メチル、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル等）等の
水以外の他の製薬補助剤を含有することができる。該製
剤は細菌保持フィルターを通す濾過、組成物への殺菌剤
の混入、組成物の照射や加熱によって滅菌することがで
きる。該製剤はまた殺苗固体組成物として製造し、用時
滅菌水等に溶解して使用することもできる。
する。上記形態の製剤はまた緩衝剤・ｐＨ調節剤（リン
酸水素ナトリウム、クエン酸等）、等張化剤（塩化ナト
リウム、グルコース等）、保存剤（ｐ−ヒドロキシ安息
香酸メチル、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル等）等の
水以外の他の製薬補助剤を含有することができる。該製
剤は細菌保持フィルターを通す濾過、組成物への殺菌剤
の混入、組成物の照射や加熱によって滅菌することがで
きる。該製剤はまた殺苗固体組成物として製造し、用時
滅菌水等に溶解して使用することもできる。
経口投与剤は胃腸器官による吸収に適した形に製剤する
。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤は通常の
製薬補助剤、例えば結合剤（シロップ、アラビアゴム、
ゼラチン、ソルビット、トラガカント、ポニビニルビロ
リドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）、賦形剤（
ラクトース、スクロース、コーンスターチ、ポテトスタ
ーチ、ソルビット、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステ
アリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコー
ル、シリカ等）、崩壊剤（ポテトスターチ、カルボキシ
メチルセルロース等）、湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウ
ム等）を包含することができる。
。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤は通常の
製薬補助剤、例えば結合剤（シロップ、アラビアゴム、
ゼラチン、ソルビット、トラガカント、ポニビニルビロ
リドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）、賦形剤（
ラクトース、スクロース、コーンスターチ、ポテトスタ
ーチ、ソルビット、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステ
アリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコー
ル、シリカ等）、崩壊剤（ポテトスターチ、カルボキシ
メチルセルロース等）、湿潤剤（ラウリル硫酸ナトリウ
ム等）を包含することができる。
錠剤は常法によりコーティングすることができる。
経口液剤は水溶液等にしたり、ドライプロダクトにする
ことができる。そのような経口液剤は常用の添加剤例え
ば保存剤（ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロ
ピル、ソルビン酸等）を包含していてもよい。
ことができる。そのような経口液剤は常用の添加剤例え
ば保存剤（ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロ
ピル、ソルビン酸等）を包含していてもよい。
本コラゲナーゼ阻害剤中の本ペプチドまたはその塩基と
の塩の量は種々かえることができるが、通常５〜１００
χ（ｗ／賀）、特に１０〜６０χ（弱／ｖ４）が適当で
ある。本コラゲナーゼ阻害剤の投与量は有効成分として
１０〜２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙが適当である。
の塩の量は種々かえることができるが、通常５〜１００
χ（ｗ／賀）、特に１０〜６０χ（弱／ｖ４）が適当で
ある。本コラゲナーゼ阻害剤の投与量は有効成分として
１０〜２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙが適当である。
次に本発明を実施例により説明する。
実施例 ベンジルオキシカルボニル−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ
−Ａｌａ−Ｇｌｙの合成とコラゲナーゼ阻害活性Ａ）ベ
ンジルオキシカルボニル− の合成 １） ＩＩ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔの合成Ｉｔ−Ｇ
ｌｙ−ＯＥｔ−Ｈｃｉ （グリシンエチルエステル塩酸
塩）１．４ｇ（１０ミリモル） 、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ １．９ｇ（１０ミリモル）および１−ハイドロキシ
ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）１．３５ｇ（１０ミリ
モル）をジメチルボルムアミド（ＤＭＦ）１０ ｍｌに
溶解し、この？９ ？＆にＯ°Ｃ氷冷氷冷ジトリエチル
アミン１ ｄとジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）２、０６ｇを加え、ついで５ ’Ｃに保持しつつ一
夜攪拌した。
−Ａｌａ−Ｇｌｙの合成とコラゲナーゼ阻害活性Ａ）ベ
ンジルオキシカルボニル− の合成 １） ＩＩ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔの合成Ｉｔ−Ｇ
ｌｙ−ＯＥｔ−Ｈｃｉ （グリシンエチルエステル塩酸
塩）１．４ｇ（１０ミリモル） 、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ １．９ｇ（１０ミリモル）および１−ハイドロキシ
ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）１．３５ｇ（１０ミリ
モル）をジメチルボルムアミド（ＤＭＦ）１０ ｍｌに
溶解し、この？９ ？＆にＯ°Ｃ氷冷氷冷ジトリエチル
アミン１ ｄとジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）２、０６ｇを加え、ついで５ ’Ｃに保持しつつ一
夜攪拌した。
生成したジシクロへキシルウレアを濾別し、濾液を濃縮
乾固した後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を
１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水
溶液、ついで水で充分に洗浄し減圧乾固した。この物質
をトリフルオロ酢酸２５戚とアニソール１ ｍｌの混液
に溶解し、室温に２０分間放置した。次に反応混合液を
減圧濃縮し、残渣をエーテルで３回洗浄した後エーテル
を留去し、Ｈ−＾１ａーＧｌｙーＯＥｔをトリフルオロ
酢酸塩として得た（収量３ミリモル）。
乾固した後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を
１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水
溶液、ついで水で充分に洗浄し減圧乾固した。この物質
をトリフルオロ酢酸２５戚とアニソール１ ｍｌの混液
に溶解し、室温に２０分間放置した。次に反応混合液を
減圧濃縮し、残渣をエーテルで３回洗浄した後エーテル
を留去し、Ｈ−＾１ａーＧｌｙーＯＥｔをトリフルオロ
酢酸塩として得た（収量３ミリモル）。
２） Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔの合成Ｈ
−八ｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ トリフルオロ酢酸塩（３
ミリモル）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｈｚｏ ０．７５ｇ（３
ミリモル）およびＨＯＢｔ ０．４１ｇ（ ３ ミリモ
ル）をＤＭＦ５ｄに溶解し、この溶液にＯ″Ｃ水冷水冷
ジトリエチルアミンえて中和後、ＤＣＣ ０．６２ｇを
加え、ついで５°Ｃに保持しつつ一夜攪拌した。生成し
たジシクロへキシルウレアを濾別し、濾液を濃縮乾固し
た後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を１０％
クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、
ついで水で充分に洗浄し、減圧乾固した。この物質をト
リフルオロ酢酸２５ｄとアニソール０．５ｄの混液に溶
解し、室温に２０分間放置した。次に反応混合液を減圧
濃縮し、残渣をエーテルで２回洗浄した後エーテルを留
去し、Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔをトリフル
オロ酢酸塩として得た（収量０．５ ミリモル）。
−八ｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ トリフルオロ酢酸塩（３
ミリモル）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｈｚｏ ０．７５ｇ（３
ミリモル）およびＨＯＢｔ ０．４１ｇ（ ３ ミリモ
ル）をＤＭＦ５ｄに溶解し、この溶液にＯ″Ｃ水冷水冷
ジトリエチルアミンえて中和後、ＤＣＣ ０．６２ｇを
加え、ついで５°Ｃに保持しつつ一夜攪拌した。生成し
たジシクロへキシルウレアを濾別し、濾液を濃縮乾固し
た後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を１０％
クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、
ついで水で充分に洗浄し、減圧乾固した。この物質をト
リフルオロ酢酸２５ｄとアニソール０．５ｄの混液に溶
解し、室温に２０分間放置した。次に反応混合液を減圧
濃縮し、残渣をエーテルで２回洗浄した後エーテルを留
去し、Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔをトリフル
オロ酢酸塩として得た（収量０．５ ミリモル）。
３）ベンジルオキシカルボニル−
Ｇｌｙの合成
Ｈ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ− ）リフルオロ
酢酸塩（０．５ミリモル）、ベンジルオキシカルボニル
Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ） （ Ｔベンジルエステル）０．１
９ｇ（０．５ミリモル）およびｌＩＯＢｔ Ｏ．０６８
ｇ（０．５ ミリモル）をＤＮＰ２ｍに溶解し、この溶
液に０°Ｃ氷冷氷冷ジトリエチルアミンえて中和後、Ｄ
ＣＣ ０．１０ｇを加え、ついで５°Ｃに保持しつつ一
夜攪拌した。
酢酸塩（０．５ミリモル）、ベンジルオキシカルボニル
Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ） （ Ｔベンジルエステル）０．１
９ｇ（０．５ミリモル）およびｌＩＯＢｔ Ｏ．０６８
ｇ（０．５ ミリモル）をＤＮＰ２ｍに溶解し、この溶
液に０°Ｃ氷冷氷冷ジトリエチルアミンえて中和後、Ｄ
ＣＣ ０．１０ｇを加え、ついで５°Ｃに保持しつつ一
夜攪拌した。
生成したジシクロへキシルウレアを濾別し、濾液を濃縮
乾固した後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を
１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水
溶液、ついで水で充分に洗浄し、減圧乾固した。この物
質をメタノール４８ｄ，ジオキサン２４ｄ、ＩＮ Ｎａ
ＯＨ４−の混液に溶解し、室温に５時間放置した後、こ
れに水を加えてエーテルで洗浄し、ついで陽イオン交換
樹脂（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８）でＮａ”イオンを吸着させ、
溶液を酸性にすることにより目的とするベフ″チド、ベ
ンジルオキシカルボニル− 本試料は更にセファデックスＬ１１−２０のゲル濾過を
行うことにより単一のペプチドとして回収した。
乾固した後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を
１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム水
溶液、ついで水で充分に洗浄し、減圧乾固した。この物
質をメタノール４８ｄ，ジオキサン２４ｄ、ＩＮ Ｎａ
ＯＨ４−の混液に溶解し、室温に５時間放置した後、こ
れに水を加えてエーテルで洗浄し、ついで陽イオン交換
樹脂（ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８）でＮａ”イオンを吸着させ、
溶液を酸性にすることにより目的とするベフ″チド、ベ
ンジルオキシカルボニル− 本試料は更にセファデックスＬ１１−２０のゲル濾過を
行うことにより単一のペプチドとして回収した。
本ペプチドはＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）
で溶出時間２．９分の位置に単一のピークを示した。Ｉ
ＩＰＬｃの溶出条件を下記に示す。
で溶出時間２．９分の位置に単一のピークを示した。Ｉ
ＩＰＬｃの溶出条件を下記に示す。
カラム：ウォーターズ社製ラジアルパックカートリッジ
Ｃ１８ 溶出液：燐酸緩衝液（１０ｍＭＫＩ１．ＰＯ．、 ５０
ｍＭＮａ．ＳＯ．。
Ｃ１８ 溶出液：燐酸緩衝液（１０ｍＭＫＩ１．ＰＯ．、 ５０
ｍＭＮａ．ＳＯ．。
ｐＨ２．５）ニアセトニトリル−４＝６流 速：１戚／
ｍｉｎ 検 出： ２１０ｎｍの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
ｍｉｎ 検 出： ２１０ｎｍの紫外部吸収 次に本ペプチドの各種分析値を示す。
アミノ酸分析： Ｇｌｕ（０．９８） 、Ｇｌｙ（０．
９７） 、Ａｌａ（１．００）Ｌｅｕ （０．９７） （ ）は八ｌａを１としたモル比 分析は６Ｎ塩酸１１０”Ｃ２４時間の 加水分解後行った。
９７） 、Ａｌａ（１．００）Ｌｅｕ （０．９７） （ ）は八ｌａを１としたモル比 分析は６Ｎ塩酸１１０”Ｃ２４時間の 加水分解後行った。
比施光度 ： 〔α）＝−６０°（Ｃ＝０．１，Ｈｚ
Ｏ）質量分析 ： ｍ／ｚ ５２３ （Ｍ＋Ｈ）”
日本電子ＨＸ １１０，ＦＡＢ−ＭＳにて測定 Ｂ）コラゲナーゼ阻害活性 以上のようにして得た本ペプチドのコラゲナーゼ阻害活
性をＲ．Ｄ．Ｇｒａｙらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｎ＋。
Ｏ）質量分析 ： ｍ／ｚ ５２３ （Ｍ＋Ｈ）”
日本電子ＨＸ １１０，ＦＡＢ−ＭＳにて測定 Ｂ）コラゲナーゼ阻害活性 以上のようにして得た本ペプチドのコラゲナーゼ阻害活
性をＲ．Ｄ．Ｇｒａｙらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｎ＋。
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． １０１
１２５１ （１９８１））に準じて測定した。
１２５１ （１９８１））に準じて測定した。
すなわち、０．０５Ｍのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０
。
。
０、１５Ｍ ＮａＣＩ及び０．００５Ｍ ＣａＣｌｚを
含む）に、０．５Ｍの基質ペプチド（ＤＮＰ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｎ−Ｇｌｙ− １１ｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−
Ｄ−Ａｒｇ． （株）ペプチド研より購入）を溶解させ
、これを基質液とする。
含む）に、０．５Ｍの基質ペプチド（ＤＮＰ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｎ−Ｇｌｙ− １１ｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−
Ｄ−Ａｒｇ． （株）ペプチド研より購入）を溶解させ
、これを基質液とする。
ついでＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ社より
購入したタドポール・コラゲナーゼ（２＋ｎｇ／ｒｎ１
）を上記緩衝液で１７１０に希釈し、これを酵素液とし
た。
購入したタドポール・コラゲナーゼ（２＋ｎｇ／ｒｎ１
）を上記緩衝液で１７１０に希釈し、これを酵素液とし
た。
まず１０μ！の本発明ペプチド及び４５μｌの基質液を
小試験管に入れ、３７°Ｃに保温した。ついで４５μ２
の酵素液を添加し、引き続き３７°Ｃに保温した。５、
１５、２５分の時点で１０μ２の反応液を採取し、ただ
ちにＨ Ｐ Ｌ Ｃ装置に注入し、基質が分解して生じ
たＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙを定量した。
小試験管に入れ、３７°Ｃに保温した。ついで４５μ２
の酵素液を添加し、引き続き３７°Ｃに保温した。５、
１５、２５分の時点で１０μ２の反応液を採取し、ただ
ちにＨ Ｐ Ｌ Ｃ装置に注入し、基質が分解して生じ
たＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙを定量した。
ＨＰＬＣの条件を下記に示す。
カラム：ウォーターズ社製ラジアルバックカートリッジ
Ｃ８ 溶出液：燐酸緩衝液（１０ｍＭ ＫＩｌｚＰＯ４，５０
ｍＭ ＮａｚＳＯ４＋ｐＨ２．５） ニアセトニトリル
＝７：３流 速： ２成／１１ｉｎ 検 出： ３７５ｎｍの吸収 このような実験を複数行い、阻害率を次の式より算出し
た。
Ｃ８ 溶出液：燐酸緩衝液（１０ｍＭ ＫＩｌｚＰＯ４，５０
ｍＭ ＮａｚＳＯ４＋ｐＨ２．５） ニアセトニトリル
＝７：３流 速： ２成／１１ｉｎ 検 出： ３７５ｎｍの吸収 このような実験を複数行い、阻害率を次の式より算出し
た。
Ａ：阻害剤を含まない場合のＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−
Ｇｌｙの量 Ｂ：阻害剤添加の場合のＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｙの量そして阻害率５０％のときの本ペプチドの濃度Ｉ
Ｃ，。値を求めたところ４５０μ門であった。
Ｇｌｙの量 Ｂ：阻害剤添加の場合のＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌ
ｙの量そして阻害率５０％のときの本ペプチドの濃度Ｉ
Ｃ，。値を求めたところ４５０μ門であった。
本ペプチド及びその塩基との塩は動物コラゲナーゼ阻害
活性を有し、既知の阻害剤よりも、容易に製造できるこ
とから有用性の高いものである。
活性を有し、既知の阻害剤よりも、容易に製造できるこ
とから有用性の高いものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ及びその塩基との塩。 ２、ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙまたはその塩基との塩を有効成
分として含有する動物コラゲナーゼ阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63266112A JPH02115198A (ja) | 1988-10-24 | 1988-10-24 | 動物コラゲナーゼ阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63266112A JPH02115198A (ja) | 1988-10-24 | 1988-10-24 | 動物コラゲナーゼ阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02115198A true JPH02115198A (ja) | 1990-04-27 |
| JPH0547558B2 JPH0547558B2 (ja) | 1993-07-19 |
Family
ID=17426489
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63266112A Granted JPH02115198A (ja) | 1988-10-24 | 1988-10-24 | 動物コラゲナーゼ阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02115198A (ja) |
-
1988
- 1988-10-24 JP JP63266112A patent/JPH02115198A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0547558B2 (ja) | 1993-07-19 |
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