JPH02128694A - 新規なヘテロ多糖類ｂｍ０７、その製造方法及び各種産業分野での使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、新規なヘテロ多糖類、これを微生物による発
酵によって製造する方法並びにこれを各種の産業分野に
使用することに関する。

［従来の技術とその問題点］ ヘテロ多糖類は、重合した基本単位を形成する少なくと
も２種の単糖類を含有する高分子量の分子である。

各種の産業分野、特に農薬、食品、石油産業、化粧品な
どの分野で多く使用されているヘテロ多糖類の一つは、
キサンタンゴムである。

しかしながら、キサンタンゴムは、その潜在的司能性に
もかかわらず、多くの不適性を示し、その中でも、酸性
及びアルカリ性ｐｉでの並びに強塩性媒体中での温度安
定性の不足があげられる。

その後、他のヘテロ多糖類が上型された。これらのうち
でも、シェル社によって登録商標「シェルフローＳ　（
ＳＨＥＬＬ−ＦＬＯＳ）　Ｊとして開発されたヘテロ多
糖類があげられる。本発明により行われた分析によれば
、このヘテロ多糖類はグルコース、ガラクトース、ピル
ビン酸、こはく酸及び酢酸から導かれる単位を含有する
ことが証明された。

１、かじながら、このヘテロ多糖類自身も、特に８０℃
程度の高められた温度に付すとやはり不適性を示した。

上記のような欠点を防ぐため、本発明者は、塩溶液や塩
基性又は酸性溶液中で温度安定性であるのみならず、さ
らに低濃度での高い流動学的性質、高い懸濁力、水道水
や蒸留水中への迅速な溶解力を示す新規なヘテロ多糖類
を実用化させた。

［発明が解決１、ようとする課題］ したがって、本発明の第一の目的は、このようなヘテロ
多糖類を提供することである。

本発明の第二の目的は、このヘテロ多糖類の製造方法を
提供することである。

本発明の第三の目的は、このヘテロ多糖類を各種の産業
分野に使用することにある。

［課題を解決するための手段］ しかして、本発明は、菌株アグロ／イクテリウム・ツメ
ファシェンス（Ａｇｒｏｈａｅｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）Ｉ−７３６、その組換え体又はその突
然変異株によって少なくとも１種の同化性炭素源を含有
する培地を発酵させることにより得ることができること
を特徴とする新規なヘテロ多糖類ＢＭ０７に関する。

上記の菌株アグロバクテリウム・ツメファシェンスは、
ブタペスト条約に従って［コレクシオン・ナシオナン・
ド・キュルチュール・デ・ミクロオルガニズム（Ｃｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ｄｅＣｕｌｔｕ
ｒｅ　ｄｅｓ　ｋｌｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ）　
−ＣＮ　ＣＭ　Ｊに対して１９８８年３月１日に寄託さ
れており、ここでは寄託番号１　７３６として分けに入
手することができる。この菌株は、［コレクシオン・ナ
シオナン・ド・バクテリエ・フィトバンゲン（Ｃｏｌｌ
ｅｅｔｉｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ａｅ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｅｓ　Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｅ）かられけら
れたものであって、その保管機関の１９７４年版カタロ
グに番号ＣＮＢＰ２９１としてリストされている。

アグロバクテリウム・ツメファシェンスｌ７３６の純粋
培養は、２６〜３２℃、一般的には２８〜３２℃の温度
にインキコベートされた傾斜したゲロース管で行うこと
ができる。

この温度においてかつ特にその組成を以下に示すＭＹ寒
天及びベネント寒天を主体とした培地では、２０時間す
ると傾斜面の全体を覆う細菌ムコイドの層の形成が確認
できた。

アグロバクテリウム・ツメファシェンス１７３６の培養
にとっては下記の保存培地が特に有益なものと考えられ
た。

ＭＹ寒天培地（９／（り 大豆蛋白質　　　　　　　　　　　５ 酵母エキス　　　　　　　　　　　３ 麦芽エキス　　　　　　　　　　　３ グルコース　　　　　　　　　　１０ 寒　　天　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０
ＴＧＹ寒天培地（パスツール研究所による）（９／ｆ２
）ペプトン　　　　　　　　　　　５ 酵母エキス　　　　　　　　　　　ｚ５グルコース　　
　　　　　　　　　　ｌ寒　　天　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　２０ベネツト寒天培地（９／σ） ペプトン　　　　　　　　　　　　１ 肉エキス　　　　　　　　　　　Ｉ ＮＺアミンＡ（シェフイールド・ケ ミカル社製、登録商標）　　　　　２ グルコース　　　　　　　　　　ＩＯ 寒　　天　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０
ＴＳ寒天培地（ビオーメリュ社製）　　（ｇ／ｌ）ビオ
トリブカーゼ　　　　　　　１７ ビオソヤーゼ　　　　　　　　　　３ に、）ＩＰｏ、　　　　　　　　　　　　　　２．５ａ
ＣＱ５ グルコース　　　　　　　　　　　２．５寒　　天　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２０また、菌株アグ
ロバクテリウム・ツメファシェンスｌ−７３６は、ベト
リ皿において、例えばＭＹ寒天培地又はＴＧＹ寒天培地
上で培養することができる。これらの条件下では２４〜
３０時間たってからコロニーが見られ、４８時間後に下
記の特性を示す。

大きさ　　直径２〜３１１Ｍ 滑らかでそれほどふくらんでいない外観非常に明るい黄
褐色 縁がはっきりしていて、傾斜面よりも皿上でムコイドが
少ないコロニー 菌株アグロバクテリウム・ツメファシェンス１７３６は
、下記の糖を利用することができる。

グルコース サッカロース でんぷん加水分解物 より困難であるが生でんぷん及びラクトース。

グルコース及びサッカロースが好ましい糖である。

一般的には、ヘテロ多糖類ＢＭ０７は、グルコース、ガ
ラクトース、ピルビン酸、こはく酸及び酢酸又はこれら
の酸の塩から導かれる単位を一般にそれぞれ５〜８／１
〜２　／　０．５〜２　／　０．５〜２／　０．０５〜
２、好ましくは６〜７．５　／　１〜１．５１０．５〜
１　／　０．５〜１　／　０．０５〜０．２、さらに詳
しくは７／Ｉ１０．５〜ｌ　／　０．５〜１　／　０．
０５〜０．１のモル比で含有することを証明することが
できた。

ピルビン酸、こはく酸及び酢酸は、一般に、ナトリウム
、カリウム、カルシウム又はアンモニウム塩のような塩
の形で現われる。

前記したようなその全体式を決定させたヘテロ多糖類Ｂ
Ｍ０７の分析法は、このヘテロ多糖類ＢＭ０７の加水分
解後の構成要素（糖及び酸）の決定及び内部又は外部標
準化によるクロマトグラフイ一定量を基本としている。

しかして、糖の定量は、次のように行った。

１００１１９のヘテロ多糖類ＢＭ０７を封管中で５１Ｑ
の１Ｍ）リフルオル酢酸によって１０５℃で３〜６時間
加水分解する。

この操作に続いて蒸発乾固を行い、次いで乾燥残留物は
内部標準物質としてソルビット１５１９を含有する５峠
のピリジンに溶解する。次いでピリジン溶液ＩＲＱにつ
いてヘキサメチルジシラザン０．９１１Ｑによりシリル
化する。このシリル化はトリフルオル酢酸０．１　ｘＱ
により接触させる。

次いで、糖の定量は、０．１４μの膜厚を有するメチル
シリコーン相を充填した長さ２５１１、直径０、２５　
ＭＫのガラス毛細管カラムでＦＥＤ検出気相クロマトグ
ラフィーによって行う。使用したキャリアガスは水素で
あって、流量は２１σ／分である。

ピリジン酸の定量は、８０１１８のヘテロ多糖類ＢＭ０
７を４Ｎ塩酸５１１Ｑにより１０５℃で１時間加水分解
し、次いでケトグルタル酸（内部標準物質となる）２１
９を添加し、蒸留水により２５ｘＱに調節することによ
って得られる母溶液から出発して行われる。

この定量は、直径５μのＣＩ８グラフト化シリカを充填
した長さが２５０ｘｍで直径が４．６　ｚｍであるカラ
ムによって高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
によって行われる。使用した溶離剤は、０．０２Ｍりん
酸とアセトニトリルとの５０１５０（容量）混合物であ
る。流量は１．５　ｘＱ／分である。

ピルビン酸の検出は３７５　ｎｍの紫外線によって行わ
れる。

こはく酸の定量は、ピルビン酸の定量に使用した条件と
同じ条件でヘテロ多糖類ＢＭ０７を加水分解した後に行
われる。定量は、外部標準化によって直接行われる。使
用されるこはく酸の標準溶液は、こはく酸８ｚｙを水２
５１ｅ中に含むものである。

この場合、［ビオラド（ＢＩＯＲΔＤ）」　（登録商標
）のｒＡｍｉｎｅｘ　ＨＰＸ８７ＨＪ　　（登録商標）
カラム上でＨＰＬＣ法が新たに使用される。溶離剤は０
．０１Ｎ硫酸であり、流量は０．８　ｌＱ１分である。

こはく酸の検出は屈折計による。

酢酸の定量は３００〜３５０ｍｇのヘテロ多糖類ＢＭ０
７を４Ｎトリフルオル酢酸５ｘ（ｌにより１２０℃で３
時間加水分解した後に行われる。次いで、内部標準物質
としてプロピオン酸３０１９を添加し、ＦＩＤ検出気相
クロマトグラフィーによって定量を行う。定量のために
・は、５％のＦＦＡＰ相と８０〜１００メツシユの［ク
ロモソルブ（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ）　Ｇ　（登録商標
）　　（ＡＹ　ＤＭＣ３）に吸収させた１％りん酸とを
満した長さ２１１で直径３ｚｍのガラスカラムを使用す
る。キャリアガスはヘリウムであって、流量は３０１Ｑ
／分である。

種々の試料から得られるヘテロ多糖類は、一般に下記の
特性を示す。

１、（１）　　その固有粘度は３０〜２５０ｄｌ／ｇ、
特に１４０〜２５０ｄ＆／ｇ、さらに好ましくは１５０
〜２４０ｄｌ／９である。

本明細書でいう固有粘度［Ｆ７］は、換算粘度η　−η
　０ η　ａＣ （ここでｑは溶液の粘度であり、 η。は溶媒の粘度であり、 Ｃはヘテロ多糖類ＢＭＱ７の濃度である）を濃度Ｏに外
挿し、モしてハギンズの式（ここでに′はハギンズの定
数である）を使用して決定される。

比粘度 η　−Ｆ７゜ ７７゜ は次のように測定される。

ヘテロ多糖類をＱ、１ＭＮａｃ１２水溶液に溶解してな
る０、　２　ｇ／　（ｌの母溶液を調製する。

次いで、母溶液を０．１ＭＮａＣｌ水溶液で希釈するこ
とによってヘテロ多糖類ＢＭ０７を０．０３〜０、１　
ｇ／　Ｑの濃度で含有するある範囲の溶液を調製する。

次いで測定は低剪断（Ｌｏｗ　５ｈｅａｒ）粘度計によ
って２３℃で行う。

これにより比粘度が濃度の関数として描かれ、濃度Ｏに
外挿される。

（２）光拡散法により測定されたヘテロ多糖類ＢＭ０７
の分子量は６・１０”〜１０・１０６、好ましくは６．
５・１０６〜９．５・１０６である。

■、ペテロ多糖類ＢＭ０７は蒸留水に溶解した溶液状で
、特に低濃度において非常に良好な流動学的性質を示す
。しかし、これらの性質は、ヘテロ多糖類を厳１７い条
件の作用、特に強酸性及び塩基性ｐＨに、強イオン性媒
質中で及び温度に置いたときでも強く保持される。

しかして、下記のことが確認できた。

（１）　　ヘテロ多糖類ＢＭ０７を２５℃の蒸留水に溶
解してなる０、１重量％溶液は、低剪断粘度計によって
１８・ｓの速度勾配で測定Ｉ７て、３５０　ｍＰａ・ｓ
以上、特に４００〜７００ｍＰａ・ｓの２４時時間開を
示す。

（２）ヘテロ多糖類ＢＭ０７は塩媒質中で、特にＣａＣ
Ｑｖｓ　ＮａｔＳＯａ及びＮａＣｌを主体とした塩溶液
中で良好な流動学的性質を示す。

特に、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を塩溶液（その濃度は下記
の通り）に溶解してなる０、３重量％の溶液は、「キャ
リメト（Ｃａｒｒｉｍｅｄ）　Ｊ　　（登録商標）レオ
メータによりＩＳ″′の速度勾配で測定して、かつ、塩
溶液が下記の組成 Ｎａ（Ｊ！　　　　　　　　　　　　　９１．７１９Ｃ
ａ（Ｊｔ−２Ｈｔ０　　　　　　　　　１０．４１８Ｍ
ｇＣＱｔ・６Ｈ，０１０，１２ｙ ＢａＣ＆！ｔ・２Ｈｔｏ　　　　　　　　　　　Ｏ，１
１３ｇＮａＨＣＯｓ　　　　　　　　　　　　　Ｏ，１
９５ｇ蒸留水　　　　　　　１ａとするに要する量を有
するものとして、２０００〜３５００ｍＰａ・ｓ、特に
２５００〜３０００ｍＰａ・ｓの２時間粘度を示す。

他方、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を２０％ＮａＣｌ水溶液に
溶解してなる０、２重量％溶液は、低剪断粘度計により
１　ｓ−１の速度勾配で測定ｊ〜で、１６００〜２４０
０　ｍＰａ・ｓ，好ましくは１７００〜２１００冑Ｐａ
・ｓの２４時時間開を示す。

（３’）　　ｐＨ１，７及び２５℃におけるヘテロ多糖
類ＢＭ０７の０．２重量％水溶液は、低剪断粘度計によ
り１ｓ−１の速度勾配で測定して、１０００〜２５００
　ｍＰａ・ｓ、特に１４００〜２０００ｓＰａ−ｓの２
４時時間開を示す。

（４）ｐ１目１．８及び２５℃におけるヘテロ多糖類Ｂ
Ｍ０７の０．２重量％水溶液は、低剪断粘度計により１
ｓ″′の速度勾配で測定して、１０００〜２５００　ｍ
Ｐａ・ｓ，特に１４００〜２０００ｍＰａ・ｓの２４時
時間開を示す。

（５）ヘテロ多糖類ＢＭ０７を蒸留水に溶解（７てなる
０、２重量％溶液であって８０℃に２４時間装いたもの
は、低剪断粘度計により１Ｂ−１の速度勾配で測定して
、一般に５００〜２５００ｍＰａ・ｓ゜特に１０００＝
２０００ｓ＋Ｐａ・ｓの粘度を示す。

また、ヘテロ多糖類ＢＭ０７は良好な懸濁（又は浮遊）
力を示すことが認められた。ヘテロ多糖ＩｆｉＢＭ０７
溶液の懸濁力は、下記の試験によって測定することがで
きる。

１００　ＭＱ、のメガル（Ｍ　Ｅ　Ｇ　Ａ　Ｌ　）試験
管に、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を蒸留水に溶解してなる０
６１重量％溶液をその全部（容積１３０　ｘＱ）に満す
。

溶液の密度は約１である。

次いで、直径３ｚｍ、密度１．１３５のポリアミド６．
６の小球を液体の表面に初期速度なしで置く。

小球の落下時間をそれが試験管の底に達するまで、即ぢ
、２３．５　Ｃｘの落下工程の後に測定する。平均時間
を得るため、この試験は複数回繰り返す。

平均落下時間は一般に２０００秒以上、特に３０００〜
１５０００秒である。

比較として、キサンタンゴムの０．１重量％溶液は、同
一の条件で約６０〜３５０秒の落下時間を示す。

ｐＨ７及び２５℃でのヘテロ多糖類の０．２重量％水溶
液は、低剪断粘度計によりｌ　ｓ　−１の速度勾配で測
定１２て、１０００〜２５００＠Ｐａ・ｓ，特に１４０
０〜２０００＠Ｐａ・ｓの２４時時間開を示す。

また、本発明は、前記のようなヘテロ多糖類ＢＭ０７の
製造方法に関する。

このヘテロ多糖類の製造方法は、少なくとも１種の同化
性炭素源を含有する培地を菌株アグロバクテリウム・ツ
メファシェンスｌ−７３６、その組換え体又はその突然
変異株によって発酵させることからなる。

この同化性炭素源の他に、発酵培地は、少な（とも１種
の窒素源、好ましくは有機窒素源及び場合によっては１
種以上の無機塩類を含有できる。

培地には典型的な方法により菌株アグロバクテリウム・
ツメファシェンスｌ−７３６が接種される。

発酵培地の容積が大きいときは、液状の予備培養培地に
よって播種された接種用培地により有利に接種すること
ができる。この予備培養培地は、それ自体アグロバクテ
リウム・ツメファシェンス！−７３６の純粋培養物によ
って予め播種されている。

本発明の方法によれば、接種用培地として、このために
古くから使用されている任意の培地、有利には無機系の
培地を使用することができる。予備培養培地としては、
例えば、ＹＭビオス培地（ＤＩＦＧＯ１参照番号０７１
０１）、好ましくは下記の化合物 大豆ペプトン　　　　　　　　　５９／ｌ麦芽エキス　
　　　　　　　　　　３ｇ／Ｑ酵母エキス　　　　　　
　　　　３ｇ／ｌグルコース又はサッカロース　　１０
ｙ／Ｑから製造される培地があげられる。

この培地の自然ｐＨは７〜７．２であるので、調節され
ない。

発酵培地を構成する有機炭素源としては、グルコース、
サッカロース、でんぷん加水分解物、場合によってはラ
クトース又は天然でんぷんのような糖類並びにこれらの
糖類の混合物があげられる。

グルコース及びサッカロースが好ましい糖類である。発
酵培地中の有機炭素源の濃度は１〜１００９／１２、好
ましくは１５〜６０９／１２であってよい。

有機窒素源としては、カゼイン及びカゼイン酸塩、魚の
加水分解物、小麦粉、とうもろこし粉又は大豆粉、酵母
（パン酵母、ビール酵母、乳酸酵母など）のエキス、可
溶性乾留物、ジャガイモ蛋白質、コーンスチーブリ力−
（Ｃ３Ｌ）、そしてＣ３Ｌを希釈し、次いで固形粒子を
遠心分離、洗浄又はデカンテーションによって除去する
ことによって得られるＣ３Ｌ可溶分があげられる。Ｃ８
Ｌ、そして特にＣ３Ｌ可溶分が本発明において特に有益
なものと判断された。

発酵培地中の有機窒素源の濃度は、３〜８０ｇ／ｌ、好
ましくは５〜５０ｇ／ｌであってよい。

場合により発酵培地に導入することができる無機塩類と
しては、硫酸マグボシウム、マンガン、亜鉛及び鉄のよ
うな硫酸塩、炭酸カルシウムのような炭酸塩、可溶性カ
ルシウム塩、りん酸カリウム及びナトリウムのようなり
ん酸塩などがあげられる。

発酵培地中のこれら無機塩類の各濃度は０．０１〜５　
ｇ／　Ｑ、好ましくは０．０５〜２ｇ／ｌであってよい
。

また、発酵培地は、微量のコバルト及び（又は）モリブ
デン塩のような少量元素並びにビタミン類及びヌクレオ
チドを含有できる。

発酵は、浸漬された好気性条件下に１〜４バールの圧力
下に２５〜３５℃、好ましくは２８〜３２℃の温度で実
施することができる。

発酵培地のｐＨは５〜９、好ましくは６〜８であってよ
い。ｐＨは、場合により、か性ソーダ又はカリのような
塩基により、成るいは硫酸、りん酸、塩酸又は硝酸のよ
うな酸により調節することができる。発酵培地は、例え
ば発酵タンク又は容器に入れて、有利に撹拌操作に付す
ことができる。

この撹拌は、往復振盪機、旋回掻盪機、撹拌動体又は気
泡カラムによって行うことができる。発酵時間は通常３
０時間以上であるが、一般的には４０〜９０時間である
。

発酵収率は、使用した炭素源について４０重量％以上、
特に５５〜７５重量％、さらに好ましくは６０〜７５重
量％のヘテロ多糖類ＢＭ０７収率である。

ヘテロ多糖類ＢＭ０７は、発酵培地から分離することが
できる。

これを行うためには、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を含有する
発酵液は、８０〜１２０℃の温度に１０〜６０分間、好
ましくは１５〜４５分間有利に加熱することができる。

上記の温度処理に付された発酵液は、６〜８のｐＨを示
す。

しかし、この［）Ｈは必要ならば場合に応じて塩基又は
酸により調節することができる。

これらの塩基及び酸は、発酵培地のｐＨを調節するのに
使用される上述の塩基及び酸のうちから選ばれる。

次いで、発酵終了液からのヘテロ多糖類ＢＭ０７の回収
は、水と混和性でありかつそのヘテロ多糖類が完全に又
は実質的に不溶性である有機液体によってそれを沈殿さ
せることによって実施することができる。

本発明の好適な有機液体と１７ては、アセトンや、エタ
ノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール
、【−ブタノールのようなアルコールがあげられる。

本発明においてはイソプロパノールが特に好ましい。

使用される有機液体の容積は、一般に処理すべき発酵液
の容積の２〜３倍である。

また、有機液体によるヘテロ多糖類ＢＭ０７の沈殿は、
ナトリウム、カリウム又はカルシウムの硫酸塩、塩化物
又はりん酸塩のような塩の存在下で実施することができ
る。

ヘテロ多糖類ＢＭ０７は、−度沈殿したならば、濾過、
遠心分離又は乾燥によって有機液体と分離することがで
きる。

得られた繊維状物は、例えばアセトン成るいはエタノー
ル、プロパノール、イソプロパノール又はｔ−ブタノー
ルのようなアルコールによって脱水することができる。

この乾燥操作を行うのに必要なアルコールの重重は、一
般に処理すべき繊維状物の重量の１〜１０倍である。

脱水されｔ：繊維状物は新たな濾過、遠心分離又は乾燥
操作に付すことができる。

次いで、繊維状物はヘテロ多糖類ＢＭ０７の粉末を得る
ため乾燥］７、粉砕Ｉ７、篩分けすることができる。こ
の粉末は通常クリーム色ないしベージュ色である。

さらに純粋な粉末を得るためには、発酵液か、又は上記
の方法により得られた粉末から再構成Ｉまた水溶液を１
種以上の酵素により処理することができる。

このために好適な酵素としては、プロテアーゼ、ミュタ
ナーゼ、リボプロテアーゼ、セルラーゼ、キチナーゼが
あげられる。

酵素による精製は、各種の濾過や透析法のような物理的
精製方法又は各種のクロマトグラフィー技術と組合せて
もよく或いはこれらで代替してもよい。

精製処理に付された又は付されなかった発酵液及びヘテ
ロ多糖類ＢＭ０７の再構成水溶液は濃縮することができ
る。濃縮は、ある場合には、そして特に輸送コストを削
減し得る場合には有益である。さらに、濃厚溶液は、ヘ
テロ多糖類ＢＭ０７粉末よりも素早く使用することがで
きる。濃縮は、蒸発、遠心分離のような技術によって、
又は透析ｌｉ５過によって実施することができる。

ヘテロ多糖類は、他の水溶性重合体が既に使用されてい
る多くの産業分野に有利に適用することができる。

これらの用途においては、ヘテロ多糖類ＢＭ０７は、主
として増粘剤、懸濁剤として、又は分散体の安定剤とし
て使用され、そ１７てこれは塩、非イオン性又は陰イオ
ン性界面活性剤、その他の添加剤の存在下に又は不存在
下に広いｐＨ範囲で使用される。これらの用途では、ヘ
テロ多糖類ＢＭ０７を含有する組成物の重量に対１７て
一般に０．００１〜２重量％、好ましくは０．１〜１重
量％のヘテロ多糖類ＢＭ０７が使用される。

しかして、ヘテロ多糖類ＢＭ０７は下記の分野に使用さ
れる。

石油工業、例えば促進された石油の回収の際の掘削用流
体、地下沈殿物の破壊用に使用される組成物及び油井処
理用の組成物： セラミック組成物： 食品工業、特に懸濁剤又は増粘剤として；塗料、糊料、
インキ； 化粧品、特にシャンプー　クリーム、ローシコン及び練
り歯磨； 農薬用の組成物、特に「流動製品」に懸濁剤として； 製紙工業、特に紙のコーチング； 潤滑組成物； 金属表面処理のための工業用クリーニング剤；超微粉砕
炭素の分散体のような各種水性分散体の安定剤として； 繊維工業、特にモチーフの賦形用のペースト組成物：爆
薬工業； コンクリート及びプラスターの製造（特にそれらの着色
の目的で）： 家庭用又は工業用クリーニング、特に増粘剤として及び
研磨材粒子の安定剤として。

特に、ヘテロ多糖類ＢＭ０７は、有機又は無機酸を水溶
液状で含有する酸性水性組成物における増粘剤として使
用することができる。有機酸としては、ぎ酸、酢酸、ク
ロル酢酸、乳酸、アスコルビン酸、タンニン酸のような
モノカルボン酸；フマル酸、マロン酸、こは（酸、グル
タル酸、イタコン酸、酒石酸のようなジカルボン酸：く
えん酸のようなトリカルボン酸があげられる。無機酸と
しては、塩酸、りん酸、硝酸又は硫酸があげられる。こ
れらの酸のいずれも独立で又はそれらの混合物として使
用することができる。酸とヘテロ多糖類の相対的割合は
、これら化合物のそれぞれの固有の性質、所望する粘度
及び特定された用途のような因子に応じて広い範囲で変
えることができる。一般に、１〜４０％の酸、０．００
１〜２％のヘテロ多糖類ＢＭ０７及び５５〜９８．９９
％の水が使用される。しかし、０．１〜１％のヘテロ多
糖類ＢＭＯＴ量が好ましい。

これらの組成物は、種々の化合物を水中で混合すること
によって任意の望ましい方法で製造することができる。

まず、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を水に溶解し、次いで酸を
添加するのが好ましい。

これらの組成物は、場合により、酸性処方物に使用され
る各種の他の成分、例えば界面活性剤、着色剤、洗剤、
香料、殺菌剤、研磨材を含有することができる。

これらの組成物は、特に表面の洗浄、磁器表面のスケー
ル除去、金属表面のクリーニングに使用することができ
る。

本発明の他の特徴及び利点は、下記の実施例並びに添附
の図面の記載から明らかとなろう。第１図及び第２図は
、それぞれ０．１及び０．２重量％のヘテロ多糖類ＢＭ
０７及びキサンタンゴム（ロドポール２３）の蒸留水溶
液の、速度勾配の関数として粘度の発生を示すものであ
る。

実施例 例」−二無機系発生培地でのヘテロ多糖類ＢＭ０７の製
造方法 下記物質（ｇ／Ｑ） Ｃ３Ｌ（コーンスチープリカー）１１ に、ＨＰｏ、　　　　　　　　　　　　　　　４Ｍｇ５
Ｏａ・７Ｈ，ＯＯ，５ サツカロース　　　　　　　　　　２５飲料水　　　　
　　ｌＱにするに要する型を含有する培地を菌株アグロ
バクテリウム・ツメファシェンスｌ−７３６によって発
酵させる。

この培地は、上記菌株により２８℃の温度でＦ記の条件
で発酵させる。

有効容積が１００＋（２である５００ｊＩｃノエルレン
マイヤーフラスコで発酵させる。

培地を５ｃｉ幅で旋回する振の機により２２０ｒｐｍで
撹拌させる。

有効容積が６ｅである１０１２のタンクで発酵させる。

培地を孔あき方形プロペラによって得られろ２７０　ｒ
ｐｓ＋の撹拌操作に付す。

培地を５００Ｑ／ｈｒの空気流量で曝気する。

有効容積が１５Ｑである２０１２のタンク「バイオラフ
ィッテ（ＢＩＯＬＡＦＰＩＴＥ）　Ｊ　　（登録商標）
で発酵させる。

培地を「ラシュトン（ＲＵＳＨＴＯＮ）　Ｊ　　（登録
商碑）型の可動体により得られる４００ｒｐｍの撹拌１
１ρＩ”；に付す。

培地を８２５ｉ２／ｈｒの空気流量で曝気する。

得られた結果を下記の表１に示す。

表　　　　Ｉ この表Ｉにおいて、発酵の終了はサッカロースの完全な
又はほとんど完全な消費に相当し、また収率は得られた
ヘテロ多糖類ＢＭ０７の重量と使用したサッカロースの
重量との間の％で表わした比率に相当する。

粘度は、Ｎｏ、４の円筒状の針を有する［ブルックフィ
ールド（Ｒｒｏｏｋｆｉｅｌｄ）　Ｌ　Ｖ　Ｔ　Ｊ　　
（登録商標）粘度計によって３Ｏｒｐｍで測定した発酵
終了時の液の粘度である。

伊１〜２コ発酵液からヘテロ多糖類ＢＭ０７の回収ヘテ
ロ多糖類の回収は、例１に従って、２０１２のタンクに
収納したイｆ機系産生培地の発酵にＪ：り得られた２ｋ
ｌｉ＋の発酵液より出発して実施１〜だ。

液を９０’Ｃで３０分間熱処理する。

このように処理した液に２３００　Ｒ（ｌのイソプロピ
ルアルフール（ＩＰＡ）を添加する。沈殿は１５０ｇの
硫酸すｌ・リウムの存在下に行う。

沈殿により生じた繊維状物を次いで１２００ｊ１＋！の
ＩＰＡの存在下に２回脱水する。

次いで繊維状物を乾燥し、細断１２．８５℃の乾燥機で
乾燥する。

得られた乾燥物質を粉砕し、篩分ける。

このようにして、クリーム色のヘテロ多糖類粉末が得ら
れた。

Ｌ３：ｐＨ７の蒸留水中のヘテロ多糖類ＢＭ０７の流動
学的性質 種々の濃度のヘテロ多糖類ＢＭ０７をｐＨ７の蒸留水に
溶解してなる溶液の粘度及び流出限界値を試験した。

これらの試験は、例２で１ｉＩられたようなヘテロ多糖
類８Ｍ０７粉末より出発して実施した。

ヘテロ多糖類３Ｍ０７粉末を蒸留水に添加（７、次いで
［ライ不り（ＲＡＹＮＥＲＩ）　ｊ　（登録商標）型撹
拌機により１０００〜１２０Ｏｒｐｍの速度で１５分１
１１１撹拌することにより該ヘテロ多糖類の０．２及び
０．３重量％溶液を調製した。蒸留水中への溶解はこの
１５分後に完全であった。

ト記の０．２％溶液を蒸留水中で希釈するだけでヘテロ
多糖類の０．１重量％溶液を調製した。

試験は、溶液調製の２４時間後に２５℃の温度で実施す
る。

比較試験は、「ロドボール（ＲＨＯＤＯＰＯ＋、）２３
」（登録商標）（ローヌプーラン社製のキザンタンゴム
）を使用して」−記と同一の条件で実施した。

試験１〜４の流出限界値及び粘度値の測定は、低剪断粘
度計により行い、また試験５及び６については［レオマ
ート（ＲＨＥＯＭＡＴ）　３０　Ｊにより行った。

得られた結果を下記の表ＩＩに示す。

この表■は、蒸留水溶液としたヘテロ多糖類ＢＭ０７が
同一の条件に置いたキサンタンゴムよりも偽塑性である
ことを明示している。

ヘテロ多糖類の０．１ｉ量％溶液は、０．２％牛サンタ
ンゴム溶液と同様の特性を示す。

第１図及び第２図は、それぞれ０．１及び０．２重量％
のヘテロ多糖類ＢＭ０７及びキサンタンゴム（ロドボー
ル２３）を蒸留水に溶解した溶液の、速度勾配の関数と
しての粘度の変化を示す。粘度の測定は前記と同じ条件
で実施した。

ｆ！！Ｌ４：２２°ＨＴでｐＨ７の水道水中のヘテロ多
糖類ＢＭ０７の流動学的性質 試験は、ヘテロ多糖類ＢＭＱ７をｐＨ７の水道水に溶解
した０、　１及び０．２重量％溶液について行ったが、
これは例３と同じ条件で行った。

しかし、ヘテロ多糖類ＢＭＱ７の溶解は水道水における
よりも蒸留水の方が容易であることがわかった。

この試験の結果及び同じ条件で「ロドポール２３」を使
用して実施した比較試験の結果を以下の表■に示す。

粘度及び流出限界値は試験７及び９では低剪断粘度計に
より、試験８については「レオマート３０」により測定
した。

ｆ”ｌ　Ｅ）：ヘテロ多糖類ＢＭ　０７の流動学的性質
に対ようｐＨ１湿度及び剪断の影響 ・テロ多糖類ＢＭ０７の流動学的性質に対するト）１１
の影響は、例３に記載のようなヘテロ多糖類１１　Ｍ　
Ｑ　７の０．２　ｆｆｉ　ｆｆ１％溶液について試験し
た。た・・１、！−４、この場合にｐｉは１．７（十分
な債のぎ酸を添ｔｊＩＩ　ｌ−た後）又は１１．８（十
分な量のか性ソーダを６９加した後）とした。

、：Ｓ、験は、溶液調製の２４時間、７日及び１ケ月ｉ
）；ｉｉ、−２２℃の温度で実施した。

１・上席の影響は、例３に記載のようなヘテロ多糖、＜
１′＼ＩＩＩ（Ｍ　０７の０．２重量％溶液について試
験した。

ｄ（１１定は、８０℃の温度に１時間及び２４時間置い
、・′−１〜記溶液について実施した。

、ξた、例４に記載のようなヘテロ多糖類ＢＭ１）′ｌ
の０．２重量％溶液に対する剪断効果を評価Ｊ　、４：
、ため、溶液の調製直後にこの溶液をｒｔｌＬＴＲＡ口
ＩＲＲＡＸ　ＪＡＮＫＥ−ＫＵＮＫＥＩ、ＴＰｌｇ−２
０ｊにより約２０００Ｏｒｐｍの最大速度で５分間剪断
に付す。この測定はこのｉ￥イ′（の２４時間後に行う
。

比較試験は、同一の条件で処理した［−ロドボール２３
ｊ　　（ローヌブーラン社製）の０．２　重量％溶液に
ついて行った。

測定は、低剪断粘度計により行った。

試験の結果をＦ記の表■に示す。

この表から、特に酸性又は塩基性ｐＨの影響下に置いた
ヘテロ多糖類ＢＭ０７の流動学的性質の耐久性は非常に
良好であり、蒸留水中の耐久性に全く匹敵１７、特に１
ケ月の期間についてそうであることがわかる。

例６　ヘテロ多糖類ＢＭ０７の流動学的性質に対ｒる強
イオン性媒質の影響 ２０％のＮａＣｌを含有するヘテロ多糖類ＢＭ０７の０
．２重量％溶液について試験１８〜２３を実施した。

これらの溶液は、例２で得られたようなヘテロ多糖類Ｂ
Ｍ０７の蒸留水をベースとした母溶液より出発して調製
する。この母溶液を所望のヘテロ多糖類ＢＭ０７及びＮ
ａＣｌ２濃度が得られるまでＮａＣｌ溶液によって希釈
する。

試験は、２２℃に保持して、溶液調製の２４時間、７日
及び１ケ月後に行った。

比較試験は、同一の方法で得られた「ロドポール２３」
の０．２％溶液について同一の条件下で実施した。粘度
及び流出限界値の測定は低剪断粘度計で行った。

試験結果を下記の表■に示す。

また、ヘテロ多糖類ＢＭ０７を１０重量％のＣａＣＱｔ
、ＮａｔＳＯ４又はＮａＣ（！を含有する蒸留水に添加
することによってやはり例３に示した条件で調製したこ
のヘテロ多糖類の０，３重量％溶液について試験２４〜
２６及び２７〜２９を実施１７た。測定は、試験２４〜
２６の場合には２２℃に、また試験２７〜２９の場合に
は４０℃に保持して、溶液調製の４時間、７日及び１ケ
月後に行った。粘度の測定は「ブルックフィールドＬＶ
ＴＪレオメータ−によって６０ｒｐＩ１１で実施した。

試験２４〜２６及び２７〜２９の結果を以下の表■及び
■にそれぞれ示す。

清−」− 表　　■ ４０℃における流肪学的性質 例−−Ｉ 試験３０及び３１は、ヘテロ多糖類ＢＭ０７溶液の良好
な温度耐久性を［シェル・フロー５（ＳＨＥＬＬ−ＦＬ
ＯＳ）　Ｊ　　（登録商標）の溶液と比較して示す。

「シェル・フローＳ」はシェル社により開発されたヘテ
ロ多糖類であって、グルコース、ガラクトース並びにピ
ルビン酸、酢酸及びこはく酸の塩から導かれる単位を含
有する。

ヘテロ多糖類ＢＭ０７の０．３重量％蒸留水溶液は例３
に記載の条件下で調製する。

同様にして、［シェル・フローＳ　Ｊ　（Ｄ　０．３　
小ｍ％溶液を調製する。。

これらの溶液を８０℃の温度に３０分間置く。

２時間放置した後、処理溶液の粘度及び流出限界仏参−
１〜キャリメト（Ｃａｒｒｉｍｅｄ）　ＣＳ　５０　Ｊ
　レオメータ−によって測定する。

結果を下記の表■に示す。

を導入することににつて脱スケール剤組成物を作る。

この組成物のｐＨは１．４である。

この組成物の安定性を、［−＋ノオマー１〜３０Ｊによ
り広範囲の速度勾配（０，ｌ　ｓ−’〜１００　ｓ−’
）で及び［ブルックフィールドＬＶＴＪ粘度計により２
　Ｏｒｐｍでその粘度を測定することにより温度及び貯
蔵時間の関数として評価する。

測定は２０″Ｃで行った。

得られた結果を下記の表■に示す。

例８・脱スケール剤組成物へのヘテロ多糖類ＢＭ０７の
使用 フラスコに ヘテロ多糖類ＢＭ０７０゜２５％ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８７．７
０％ぎ酸　　　　　　　　　　　　　１０％エトキンル
化ノニル フェノール　　　　　　　　２％ ６料及び青色剤　　　　　　　０．０５％不１板面ノと
簡−ＩＪｉ質Ｊ忌−明 第１図は、ヘテロ多糖類ＢＭＱ７及びキサンタンゴムの
各０．１重量％蒸留水溶液の粘度の変化を速度勾配の関
数として表わしたグラフである。

第２図は、ヘテロ多糖類Ｂ　Ｍ　０７及びキサンタンゴ
ムの各０．２重量％蒸留水溶液の粘度の変化を表わした
グラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）菌株アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇ
   ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ） I
   −７３６、その組換え体又はその突然変異株によって少
   なくとも１種の同化性炭素源を含有する培地を発酵させ
   ることにより得ることができることを特徴とするヘテロ
   多糖類ＢＭ０７。 ２）固有粘度が３０〜２５０ｄｌ／ｇ、特に１４０〜２
   ５０ｄｌ／ｇ、好ましくは１５０〜２４０ｄｌ／ｇであ
   ることを特徴とする請求項１記載のヘテロ多糖類ＢＭ０
   ７。 ３）ヘテロ多糖類ＢＭ０７を２５℃の蒸留水に溶解して
   なる０．１重量％溶液が、低剪断粘度計により１ｓ＾−
   ＾１の速度勾配で測定して、３５０ｍＰａ・ｓ以上、好
   ましくは４００〜７００ｍＰａ・ｓの２４時間粘度を示
   すことを特徴とする請求項１又は２記載のヘテロ多糖類
   ＢＭ０７。 ４）ヘテロ多糖類を２０重量％のＮａＣｌ水溶液に溶解
   してなる０．２重量％溶液が、低剪断粘度計により１ｓ
   ＾−＾１の速度勾配で測定して、１６００〜２４００ｍ
   Ｐａ・ｓ、好ましくは１７００〜２１００ｍＰｓ・ｓの
   ２４時間粘度を示すことを特徴とする請求項１〜３のい
   ずれかに記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 ５）ｐＨ７及び２５℃でのヘテロ多糖類の０．２重量％
   水溶液が、低剪断粘度計により１ｓ＾−＾１の速度勾配
   で測定して、１０００〜２５００ｍＰａ・ｓ、特に１４
   ００〜２０００ｍＰａ・ｓの２４時間粘度を示すことを
   特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のヘテロ多糖
   類ＢＭ０７。 ６）ｐＨが１．７でかつ温度が２５℃であるヘテロ多糖
   類の０．２重量％水溶液が、低剪断粘度計により１ｓ＾
   −＾１の速度勾配で測定して、１０００〜２５００ｍＰ
   ａ・ｓ、特に１４００〜２０００ｍＰａ・ｓの２４時間
   粘度を示すことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに
   記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 ７）ｐＨが１１．８でかつ温度が２５℃であるヘテロ多
   糖類の０．２重量％水溶液が、低剪断粘度計により１ｓ
   ＾−＾１の速度勾配で測定して、１０００〜２５００ｍ
   Ｐａ・ｓ、特に１４００〜２０００ｍＰａ・ｓの２４時
   間粘度を示すことを特徴とする請求項１〜６のいずれか
   に記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 ８）ヘテロ多糖類を蒸留水に溶解してなる０．２重量％
   溶液であって８０℃の温度に２４時間付したものが、低
   剪断粘度計により１ｓ＾−＾１の速度勾配で測定して、
   ５００〜２５００ｍＰａ・ｓ、特に１０００〜２０００
   ｍＰｓ・ｓの粘度を示すことを特徴とする請求項１〜７
   のいずれかに記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 ９）６・１０＾６〜１０・１０＾６、好ましくは６．５
   ・１０＾６〜９．５・１０＾６の分子量を有することを
   特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のヘテロ多糖
   類ＢＭ０７。 １０）グルコース、ガラクトース、ピルビン酸、こはく
   酸及び酢酸又はこれらの酸の塩から導かれる単位を含む
   ことを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載のヘテ
   ロ多糖類ＢＭ０７。 １１）グルコース、ガラクトース、ピルビン酸、こはく
   酸及び酢酸又はこれらの酸の塩から導かれる単位をそれ
   ぞれ５〜８／１〜２／０．５〜２／０．５〜２／０．０
   ５〜２のモル比で含むことを特徴とする請求項１０記載
   のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 １２）モル比がそれぞれ６〜７．５／１〜１．５／０．
   ５〜１／０．５〜１／０．０５〜０．２であることを特
   徴とする請求項１１記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 １３）モル比がそれぞれ７／１／０．５〜１／０．５〜
   １／０．０５〜０．１であることを特徴とする請求項１
   ２記載のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 １４）ピルビン酸、こはく酸及び酢酸が塩の形であるこ
   とを特徴とする請求項１〜１３のいずれかに記載のヘテ
   ロ多糖類ＢＭ０７。 １５）酸がナトリウム、カリウム、カルシウム又はアン
   モニウム塩の形であることを特徴とする請求項１４記載
   のヘテロ多糖類ＢＭ０７。 １６）菌株アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａ
   ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）
   I −７３６、その組換え体又はその突然変異株によって
   少なくとも１種の同化性炭素源を含有する培地を発酵さ
   せることを特徴とする請求項１〜１５のいずれかに記載
   のヘテロ多糖類ＢＭ０７の製造方法。 １７）同化性炭素源がグルコース、サッカロース又はで
   んぷん加水分解物であることを特徴とする請求項１６記
   載の方法。 １８）発酵培地中に存在する同化性炭素源の濃度が１〜
   １００ｇ／ｌ、好ましくは１５〜６０ｇ／ｌであること
   を特徴とする請求項１６又は１７記載の方法。 １９）発酵培地が少なくとも１種の有機窒素源を含有す
   ることを特徴とする請求項１６〜１８のいずれかに記載
   の方法。 ２０）有機窒素源がカゼイン、カゼイン酸塩、小麦粉、
   とうもろこし粉末、大豆粉、酵母抽出物、可溶性乾燥蒸
   留物、ジャガイモ蛋白質、コーンスチープリカー及びコ
   ーンスチープリカー可溶物であることを特徴とする請求
   項１９記載の方法。 ２１）有機窒素源がコーンスチープリカー又はコーンス
   チープリカー可溶物であることを特徴とする請求項２０
   記載の方法。 ２２）発酵培地中の有機窒素源の濃度が３〜８０ｇ／ｌ
   であることを特徴とする請求項１９〜２１のいずれかに
   記載の方法。 ２３）発酵培地が少なくとも１種の無機塩類を含有する
   ことを特徴とする請求項１６〜２２のいずれかに記載の
   方法。 ２４）無機塩類が硫酸塩又は炭酸塩であることを特徴と
   する請求項２３記載の方法。 ２５）無機塩類の濃度が０．０１〜５ｇ／ｌであること
   を特徴とする請求項２２〜２４のいずれかに記載の方法
   。 ２６）浸漬した好気性条件下に１〜４バールの圧力下に
   ２５〜３５℃の温度で実施することを特徴とする請求項
   １６〜２５のいずれかに記載の方法。 ２７）発酵培地のｐＨが５〜９、好ましくは６〜８であ
   ることを特徴とする請求項１６〜２６のいずれかに記載
   の方法。 ２８）発酵収率が使用した炭素源に対して４０〜７５重
   量％のヘテロ多糖類ＢＭ０７収率であることを特徴とす
   る請求項１６〜２７のいずれかに記載の方法。 ２９）ヘテロ多糖類ＢＭ０７が下記の工程、・発酵液を
   ８０〜１２０℃に１０〜６０分間加熱し、 ・ヘテロ多糖類ＢＭ０７を水と混和性の有機液体によっ
   て沈殿させ、 ・ヘテロ多糖類ＢＭ０７を濾過、遠心分離又は乾燥によ
   り有機液体から分離する によって発酵液から分離することを特徴とする請求項１
   ６〜２８のいずれかに記載の方法。 ３０）有機液体がエタノール、プロパノール、イソプロ
   パノール、ブタノール又はｔ−ブタノールであることを
   特徴とする請求項２９記載の方法。 ３１）ヘテロ多糖類ＢＭ０７を発酵液から分離したなら
   ば、これを脱水し、乾燥し、粉砕し、篩分けすることを
   特徴とする請求項２９又は３０記載の方法。 ３２）請求項１〜３１のいずれかに記載のヘテロ多糖類
   ＢＭ０７よりなる増粘剤。 ３３）請求項１〜３１のいずれかに記載のヘテロ多糖類
   ＢＭ０７よりなる懸濁剤。 ３４）請求項１〜３１のいずれかに記載のヘテロ多糖類
   ＢＭ０７よりなる、水性分散体の安定剤。 ３５）請求項１〜３１のいずれかに記載のヘテロ多糖類
   ＢＭ０７よりなる、酸性水性組成物の増粘剤。