JPH02129170A - 組織形態のマラリアに対して活性である新規化合物およびその製法 - Google Patents

組織形態のマラリアに対して活性である新規化合物およびその製法

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JPH02129170A
JPH02129170A JP1248986A JP24898689A JPH02129170A JP H02129170 A JPH02129170 A JP H02129170A JP 1248986 A JP1248986 A JP 1248986A JP 24898689 A JP24898689 A JP 24898689A JP H02129170 A JPH02129170 A JP H02129170A
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Philippe Pirson
フィリップ、ピルソン
Jean-Bernard Falmagne
ジャン‐ベルナール、ファールマーヌ
Andre Trouet
アンドレ、トゥローエ
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Ire Celltarg SA
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  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒトマラリア、特に組織形態のヒトマラリア
の治療処置分野に関する。
マラリアがはびこっている風土病地域に住んでいる２５
億の人々は、今日までこの病気を制御するためになされ
た努力の失敗を知っている。４億ノ人々は、予防手段が
適用されていない領域に住んでいる。世界保健機関（Ｗ
ＨＯ）は、５才未満の１００万の子供がアフリカ大陸の
みで毎年病気で死んでいると考えている。
ヒトにおける病気に応答できる４種のマラリア原虫があ
る。それらは、媒介者、ノ＼マダラカ属（ｇｅｎｕｓ　
Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ）の雌の蚊および宿主、ヒトを包含
する同様の生活サイクルを有する。熱帯熱マラリア原虫
（ＰＩａｓｍｏｄｉｕａ＋　ｆ’ａｌｃ［ｐａｒｕＩｌ
）　（悪性五目熱）は、最も致命的である。それは、大
脳マラリアの致命的合併症に応答でき且つ風土病地域で
の幼児死亡率の主要原因の１つである。
三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄ１ｕａ＋　ｖｉｖ
ａｘ）および卵形マラリア原虫（Ｐ、　ｏｖａｌｃ）　
　（良性三日熱）は、毒性がより低いが、肝細胞、ハイ
ブノゾイテ（ｈｙｐｎｏｚｏｌｔｅｓ）において潜伏形
態を生ずる。これらは、単一の感染後に長時間（２〜５
年）存続することがある古典的再発に応答できる形態で
ある。
四日熱マラリア原虫（Ｐ、ｍａｌａｒｉａｅ）は、余り
はびこっていない。それは、腎炎、致命的ネフローゼ症
候群などの慢性腎臓疾患に応答でき且つ血液中に数年間
存続することがある。
より詳細には、本発明は、ヒトマラリア、特にその組織
形態に対して活性である新規薬物、即ち、新規アミノキ
ノリン誘導体、特に新規プリマキン誘導体（その構造は
下記の通りである）の開発に関する： 式１ 本特許出願においては、アミノキノリンは、少なくとも
１個の遊離アミン基を有するキノリン誘導体、特に８−
アミノキノリン、例えば、プリマキン〔６−メドキシー
８−（４−アミノ−１−ブチルアミノ）キノリン〕、お
よびまた側鎖の末端に第一級アミン基を有する他の８−
アミノキノリン、例えば、キノ−シト〔６−メドキシー
８（４−アミノペンチルアミノ）キノリン〕または５Ｎ
３８８３　（６−メドキシー８−（４−アミノブチルア
ミノ）キノリン〕を意味すると理解される。
しかしながら、修正がキノリン環システム（２，４−１
２，４−１５−および４，５−位で）および（４−アミ
ノ−１−アルキルブチルアミノ）側鎖に影響する他のプ
リマキン誘導体も存在し、本発明はかかる誘導体に関す
る。
マラリアの古典的治療においては、本質上８−アミノキ
ノリン（プリマキン、キノ−シト）によって表わされる
組織段シゾント剤は、因果予防（ｃａｕｓａｌ　ｐｒｏ
ｐｈｙｌａｘｉｓ）　、即ち、−次（赤血球外の）組織
形態の熱帯熱マラリア原虫の破壊による血液感染の予防
、および二次組織形態の三日熱マラリア原虫および卵形
マラリア原虫の排除による根治的治療に応答でさる。３
０年よりも前に紹介されたプリマキン、式ｌの６−メド
キシー８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ）キ
ノリンは、ヒトにおける存続性組織形態の三日熱マラリ
ア原虫および卵形マラリア原虫に対して臨床的に有効で
あり且つ依然として特別上等の薬物である。
それにも拘らず、プリマキンの毒性は、制御された臨床
応用に用途を限定している。最も重大な毒性効果は、溶
血、特に例えばグルコース−６ホスフエートデヒドロゲ
ナーゼの赤血球発生欠乏を有する個体の溶血である。メ
トヘモグロビン尿症および胃腸障害並びに中枢神経系に
対する成る効果も、プリマキンおよび他の８−アミノキ
ノリンの若干有意な毒性効果である。
因果予防または根治的治癒治療活性を有する抗マラリア
薬の数は、極めて限定されている。プリマキンは、根治
的治癒治療用の唯一の薬物であるが、毒性の副作用は、
治療用途を厳しく限定する。
８−アミノキノリンファミリーに属する化合物のみが、
根治的治癒を生ずるらしいことに留意すべきである。
従って、本発明の目的は、改良された治療指数を有する
新規の抗マラリア性キノリン誘導体、特に新規の８−ア
ミノキノリン誘導体を提案することにある。
換言すれば、本発明の目的は、前記プリマキンなどの抗
マラリア性キノリンの固有毒性を減少すること、および
特にプリマキンに関して肝組織形態に対する活性を高め
ることにある。
プリマキンに結合されたし一ロイシンは、リンカ−また
はアームとしての重要性のため、従って、担体−アーム
−薬物複合体の文脈で出願ＥＰ第３７．３８８号明細書
で提案されたことがわかるであろう。事実、Ｌ−ロイシ
ルプリマキンは、リソソーム消化に付す時に遊離有効成
分を再生する。
しかしながら、非複合隣接し一ロイシンを有するＰＱの
誘導体の治療指数は、本発明の主題を構成する誘導体の
ものよりも有利さが低いことを証明する。
本発明の主題は、事実上、新規の抗マラリア性アミノキ
ノリン誘導体、特に新規プリマキン誘導体であり、その
必須の特徴は式　ＰＱ−Ｘ（式中、ＰＱは抗マラリア性
アミノキノリン、特にプリマキンを表わし、 Ｘはアミノ酸、または２〜４個のアミノ酸のペプチドを
表わし、アミノ酸または複数の酸は天然アミノ酸および
それらの誘導体から選ばれ、ＰＱに隣接のアミノ酸はα
−またはβ−アスパラギン酸、γ−グルタミン酸または
ピログルタミン酸から選ばれ、 ＰＱ−Ｘ結合はＰＱの遊離アミン基とＸのアミノ酸また
は末端アミノ酸のカルボキシル基との間の共有ペプチド
結合である） によって図式的に表わされることである。
本願においては、「α−（またはβ−）アスパラギン酸
（またはγ−グルタミン酸）」は、隣接アミノ酸がα−
またはβ−（またはそれぞれγ−）カルボキシル基を介
してエステルの形態でＰＱに結合されていることを意味
すると理解される。
プリマキンは、酸化剤として作用し且つ主要毒性源であ
る溶血を含めて赤血球膜を不安定にする。
本発明に係るアミノ酸またはペプチドの付加は、立体障
害の結果としてプリマキンの赤血球への浸透を減少する
。
更に、これらの新規の誘導体の活性は、はるかに大きい
ことが見出された。毒性の有意な低下も、観察された。
本発明の別の主題によれば、一般にそして好ましくはＸ
がＰＱとＸとの共有結合が血清中で安定であり且つリソ
ソームヒドロラーゼに抵抗性であるような方式で選ばれ
るならば、この目的も達成されることが発見された。ア
ミノ酸またはペプチドの利益は、十分に存在している。
この更に他の条件は、特にＸがγ−アスパラギン酸また
はγ−グルタミン酸またはピログルタミン酸である時に
満たされる。
かくて、有利には、本発明によれば、アミノ酸またはペ
プチドの第一アミノ酸は、γ−またはβ−カルボキシル
基を介してＰＱに結合されたγ−グルタミン酸またはβ
−アスパラギン酸であるか、或いはα−カルボキシル基
を介してＰＱに結合されたピログルタミン酸またはアス
パラギン酸である。
本発明によれば、ＰＱに隣接のアミノ酸は、ＤまたはＬ
系列内から選ばれるが、好ましくは、Ｌ系列内から選ば
れる。
好ましい態様においては、本発明の主題は、新規のプリ
マキン誘導体であり、その必須の特徴は式ＰＱ−Ｘ （式中、ＰＱは抗マラリア性アミノキノリン、特にプリ
マキンを表わし、 Ｘはアミノ酸、γ−Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ピログルタ
ミン酸、α−Ｌ−アスパラギン酸またはβ−Ｌ−アスパ
ラギン酸を表わし、 ＰＱ−Ｘ結合はプリマキンの遊離アミノ基とＸのカルボ
キシル基との間の共有ペプチド結合であり、血清中で安
定であり且つリソソームヒドロラーゼに抵抗性である） によって図式的に表わされることである。
従って、問題の誘導体は、Ｎ−（α−Ｌ−ピログルタミ
ル）−ＰＱ、Ｎ−（γ−Ｌ−グルタミル）−ＰＱＳＮ−
（α−Ｌ−アスパルチル）−ＰＱおよびＮ−（β−Ｌ−
アスパルチル）　−ＰＱである。
本発明に係る１以上のアミノ酸（Ｘ）をグラフトできる
アミン化側鎖を含むならば、親生酸物アミノキノリン（
ＰＱ）は、本発明の範囲から逸脱せずに置換することも
できることを明らかに理解すべきである。
親生酸物ＰＱ、並びに得られる生成物ＰＱ−Ｘは、それ
らと酸との付加塩の形態を取ることができる。
また、本発明の主題は、これらの新規の抗マラリア性ア
ミノキノリン誘導体、特にプリマキン誘導体の製法であ
る。
本発明に係る方法の必須の特徴においては、酸形態のア
ミノ酸またはペプチド（アミン基および適当な場合には
α−１β−またはγ−カルボキシル基は場合によって保
護されている）は、縮合剤の存在下でアミノキノリンま
たはその塩（従って、遊離アミン基を有する）の１つと
反応させる。
アミノ基を保護する基は、通常の基であるが、ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルが
、好ましくは使用される。
カルボキシル基を保護する基は、ｔ−ブチル、ベンジル
などの通常の基である。
また、アミノ酸またはペプチドの酸基は、例えば、Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドとのエステルの形態で活性化
できる。
一般に、縮合剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミドな
どのカルボジイミドである。
本法の特定の態様によれば、出発物質は、アミノキノリ
ン塩、例えば、プリマキン誘導体フ、ｎ　−ト、および
アミノ酸またはペプチドであり、そしてアミノ基および
適当な場合には、α−１β−またはγ−カルボキシル基
は、例えば、アミノ基の場合にはｔ−ブチルオキシカル
ボニルまたはベンジルオキシカルボニル基により、カル
ボキシル基の場合にはｔ−ブチルまたはベンジル基によ
り場合によって保護されており、下記工程を実施し：（
ａ）アミノ酸またはペプチドの未保護酸基を活性化する
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたは他の基をアミノ酸
またはペプチドの場合によって保護された誘導体と反応
させ、 （ｂ）例えば、アンモニア溶液を使用して塩から遊離さ
れたプリマキンなどのアミノキノリンを反応させ；従っ
て、それを、例えば、アミノ酸またはペプチドの保護さ
れた誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと
反応させ、 （ｃ）それによって得られた粗生成物をシリカゲル上の
クロマトグラフィーによって精製し、（ｄ）次いで、適
当な場合には、保護基を酸、例えば、トリフルオロ酢酸
の存在下で開裂して塩、例えば、トリフルオロ酢酸塩の
形態の誘導体ＰＱ−Ｘを与え、または水素化分解によっ
て開裂する。
この基は、事実上、形成されたペプチド結合を破壊しな
い条件下で除去できる。
本法の別の特殊な特徴によれば、トリフルオロアセテー
ト対陰イオンは、ヒドロクロリドまたはホスフェートに
交換する。
酸化反応を抑制するという目的で、本法の別の特殊な特
徴は、本発明に係る誘導体の塩酸塩を含有する水溶液を
重亜硫酸ナトリウムで処理する方法を提供する。
ＸがＬ−ピログルタミン酸を表わす誘導体ＰＱ−Ｘは、
次の通り生成できる。Ｌ−グルタミン酸のγ位における
エステルをＮ−カルボキシル無水物に転化し、反応をホ
スゲンの存在下で実施し、Ｎ−力ルボキシ無水物誘導体
をＴＨＦ中での０℃での反応によってＰＱにカップリン
グさせて誘導体（Ｌ−ピログルタミル）−ＰＱを与える
。
有利には、Ｌ−グルタミン酸エステルは、γメチルグル
タメートまたはγ−ベンジルグルタメートである。
また、本発明の主題は、有効成分として本発明に係る新
規誘導体またはそれらの製薬上許容可能な塩を含有する
ことを特徴とする医薬組成物である。
本発明の他の特徴および利点は、誘導体Ｎ−（α−Ｌ−
ピログルタミル）−プリマキンの２つの合成法を示す第
１図を参照して提示する下記の例に徴して明らかになる
であろう。
例１：ブリマキンのし一γ−グルタミルまたはＬ−ピロ
グルタミル誘導体の合成 プリマキンのピログルタミン酸誘導体（ＰＱ）は、２つ
の方法、ＡおよびＢに従って、ＰＱをビログルタミン酸
（方法Ａ）またはグルタミン酸の活性化エステル（方法
Ｂ）と縮合することにより得られる。２つの合成法を第
１図に図式的に示す。
この化合物は、塩基（分子！３７０．４３）　、モノ塩
酸塩（分子ｆｆ１４０６．８９）およびモノリン酸塩（
分子ｊ１４６８．４４）の形態で得られる。
１．１．方法Ａに従っての合成： ＰＱのピログルタミン酸誘導体は、ＰＱジホスフェート
およびピログルタミン酸から２段で得られる。
ａ）プリマキン塩基 遊離形態のＰＱは、ｐＨ８が得られるまで、ＰＱ塩を含
有する水溶液を２５％濃度のＮＨ４ＯＨで中和した後、
ＰＱ塩基を ＣＨ２Ｃｌ２で強抽出することによってＰＱジホスフェ
ートから得られる。
ｂ）ピログルタミン酸の活性化 Ｌ−ピログルタミン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミド
は、ジメチルホルムアミドまたはＤＭＦに溶解されたピ
ログルタミン酸（５ｍｌ中１ｇ）と１当量のＮ−ヒドロ
キシスクシンイミド（８９１ｍｇ）と１当量のジシクロ
へキシルカルボジイミド（１，６ｇ）との反応によって
得られる。混合物を４℃で１６時間攪拌する。
ｃ）Ｌ−ピログルタミルプリマキン プリマキン塩基を最小量のＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、４℃
で活性化エステルに加える。反応混合物を４℃で１６時
間攪拌する。ジシクロヘキシル尿素を濾過し、溶媒を蒸
発し去る。
次いで、粗反応生成物をＣＨ２ＣＩ　２に取り上げ、５
％濃度のＮ　ａ　ＨＣＯ３溶液で３回洗浄した後、飽和
ＮａＣ１溶液で３回洗浄する。ジクロロメタン相をＮａ
２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固する。生成物を
ジクロロメタン／メタノール９５：５混合物で溶離する
。純粋な両分を合流し、溶媒を蒸発し去る。かくて、Ｌ
−ピログルタミルプリマキン１．３６ｇが、単離される
（収率４７．５％）。
１．２．方法Ｂに従っての合成： ａ）プリマキン塩基 遊離形態のＰＱは、ＰＱ塩を含有する水溶液（１００ｍ
ｌ中９．１ｇ）を当量の１モルＮａＯＨ（２０ｍｌ）で
中和することによってＰＱジホスフェートから得られる
。最終溶液のｐＨは、９．５〜１０である。次いで、Ｐ
Ｑ塩基をＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｘ１００で抽出する。
有機相を合流し、トルエンまたはテトラヒドロフラン（
ＴＨＦ）での同伴によって乾燥する。
ｂ）Ｎ−カルボキシ無水物（Ｎ　ＣＡ）への誘導化トル
エン／テトラヒドロフラン Ｒ−ＯＣＨ３，０ＣＨ２Ｃ６Ｈ５ アミノ酸のＮ−カルボキシ無水物への誘導化は、アミノ
酸とホスゲンとの反応によって達成される。
より正確には、γ−メチルグルタメート１０ｇを乾ｔＡ
ＴＨＦ２０ｍｌに懸濁する（ベンゾフェノンの存在下で
ナトリウム上を還流）。
別個に、ＴＨＦ中のホスゲンの溶液を低温で凝縮された
ガス状ホスゲンおよびＴＨＦから調製する。
次いで、ホスゲン溶液（４０ｍｌ　；　２．　７５Ｍ）
を毛管を介して窒素の過剰の圧力でＴＨＦ中のアミノ酸
の懸濁液に加える。
次いで、装置にドライアイス冷却器を取り付け、このド
ライアイス冷却器はそれ自体２個の空のトラップに直列
で連結した後、ｔｌｊｉＮａＯＨｍ液に浸漬する管に連
結する（過剰のホスゲンのトラッピング）。反応混合物
を還流温度にさせる。アミノ酸が完全に溶解するまで（
２，５時間に等価）、この温度を維持する。大気水分か
ら保護しつつ、溶媒を真空下で蒸発乾固する。Ｎ−カル
ボキシ無水物が、白色の粉末の形態で得られる。ＮＣＡ
は、所望ならば、熱（乾燥）酢酸エチルに溶解し、等容
量の（乾燥）石油エーテルを加え、冷却することによっ
て結晶化する。
Ｃ）カップリング反応 （乾燥）テトラヒドロフランＴＨＦに溶解されたＮＣＡ
誘導体を乾燥状態において０℃でＴＨＦ中のプリマキン
塩基の溶液にゆっくりと（３時間）拡散する。ＣＯ２が
反応混合物から発生され、ＮＣＡ環の開環を示す。ＣＯ
２を発生ガスの水酸化バリウム溶液への通過時のＢ　ａ
　ＣＯ３の生成によって検定する。
反応後、溶媒を蒸発乾固し、粗反応生成物をＳｉＯ２上
でのクロマトグラフィー （ｃＨ２Ｃ１２／ＭｅＯＨ）によって精製する。
１．３．環生成 １）塩酸塩 ｐＧＬＵ−ＰＱを２当量の塩酸の存在下で水に溶解し、
凍結乾燥する。操作を再度繰り返す。
２）リン酸塩 ｐＧＬＵ−ＰＱをイソプロパツールに溶解し、イソプロ
パツールに溶解されたリン酸１当量に加える（１．５％
重量／容量）。塩は、これらの条件下では沈殿しない。
溶媒を蒸発し去り、塩を水中に取り上げ、凍結乾燥する
。
システム：　ＣＨ２ＣＩ　２　／　Ｍ　ｅ　ＯＨ（容量
で１０：１） プレート：　Ｓ　１−６０ Ｒｆ：０．２６ ＴＬＣによる純度：単一のスポット ＨＰＬＣによる純度 カラム：Ｃ８グラフトシリカ（ウオターズ）溶離剤：ｐ
Ｈ３，８５の０．１Ｍギ酸アンモニウム／アセトニトリ
ル混合物（容量で７０：３０）検出器：３６３ｎｍでの
ＵＶ 流量：２ｍｌ／分 ｔＲ：４．８分 ＨＰＬＣによる純度二表面で通常〉９９％：ｐＨ３，８
５の０．１Ｍギ酸アンモニウム緩漸液中の溶液ｌＩＩｇ
／ｍｌ 融点：Ｎ、Ｄ。
旋光度：Ｎ、Ｄ。
安定性：　ｐｃｆｆｉｔｒ−ｐＱは室温で空気中で不安
定であり、室温で不活性雰囲気（アルゴン）下で安定で
ある。
核磁気共鳴： ”’ＣＮＭＲ：　（ｃＤＣｌ３−７７．００ｐｐｍで参
照として役立つＣＤＣｌ３の中線）。
１７９、　１９８　　（ｃ−５ｐＧＬＵ）　　；１７２
．２３３　　（ｃ−１ｐＧＬＵ）　　；１５９、　１５
２　　（ｃ−６ＰＱ） １４４、　６４０　　（ｃ−８ＰＱ）　　；１４４、　
１０６　　（ｃ−２ＰＱ）　　；１３５、　０２２　　
（ｃ−８ａ　　　ＰＱ）　　；１３４、　６９６　　（
ｃ　−４ＰＱ）　　；１２９、　７０４　　（ｃ−４ａ
　　　ＰＱ）　　；１２１、　７０９　　（ｃ−３ＰＱ
）　　；９６．　６４７（ｃ−７ＰＱ）　　；９１．　
５０７　　（ｃ−５ＰＱ）；　５６．　９８５　　（ｃ
−２ｐＧＬＵ）　　；５４．９７８　（６−ＯＣＨ３Ｐ
Ｑ）；４７、　５８９　　（ｃ−１’　　　ＰＱ）　　
；３９．　２４８（ｃ−４’　　　ＰＱ）　　；３Ｂ、
　　５３９　　（ｃ−２’ＰＱ）　　；２９．　１４７
　　（ｃ−４ｐＧＬＵ）　　；２５、　５２３　　（ｃ
−３ｐＧＬＵ）　　；２０、　２４６　　（ｃ−５ＰＱ
）　　。
赤外線： ａｍ−１（％） ３３８６　　　　（４９％）ブロード：１６８４　　　
　（４５％）ブロード；１５２１　　　　　　（４５％
）　； １４５７　　　　　　（５１％）　； １３８７　　　　　　（４９％）　； １２２０　　　　　　（５４％）　　；１１５ｇ　　　
　　　（５３％）　； ８２２　　　　　　（５６％）　； ７９２　　　　　　（５６％）　； ６６８　　　　　　（５２％）。
’Ｅｔｆｆｉ： ＦＡＢ＋：　３７１．２　（Ｍ＋１）　＋＋ １７５．１（ｃＩｏＨ１ｏＮ２０） ＦＡＢ−：　３６９．１　（Ｍ−１）　＋プリマキンの
γ−グルタミン酸誘導体は、下記の合成法に従ってジ塩
酸塩（分子ｆｆ１３８８．４５＋７２．９２−４６１．
３８）およびモノリン酸塩（分子量：４６８．４４）の
形態で得られる。
２．１１合成 ＰＱのグルタミン酸誘導体は、ＰＱジホスフェートおよ
びＬ−グルタミン酸〔アミノ基はｔ−ブチルオキシカル
ボニル基（Ｎ　　−ｔ−ＢＯＣ）により、またはベンジ
ルオキシカルボニル＜　Ｎ　（ＩＣＢＺ）により保護さ
れている〕から２段で得られる。α−カルボキシル基は
、ｔ−ブチル基により、またはベンジル基により保護さ
れている。
ａ）プリマキン塩基 遊離形態のプリマキンは、ｐＨ８が得られるまで、ＰＱ
塩を含有する水溶液を２５％ｔＨ度のＮＨ４ＯＨで中和
した後、ＰＱ塩基を ＣＨ２ＣＩ　２で強抽出することによってＰＱジホスフ
ェートから得られる。
ｂ）保護されたアミノ酸の活性化 保護されたグルタミン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステルは、５．９ｍＭのＮ　　−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−
ＧＬＵ−α−ｔ−ブチル（１，８ｇ）またはＮ　　−Ｃ
ＢＺ−Ｌ−ＧＬＵ−α−〇−ベンジルを酢酸エチルに０
℃で溶解されたＮ−ＯＨスクシンイミド５．９ｍＭ　（
０，６８ｇ）およびジシクロへキシルカルボジイミド５
．９ｍＭ（１，２１ｇ）と反応させることによって得ら
れる。
ｃ）（Ｎ　　−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−グルタミル）−ＰＱ ０℃で保護されたグルタミン酸とＮＨ３との１６時間の
反応後、ＰＱ塩基５．９ｍＭ（１，５３ｇ）を加える。
１７時間後、ジシクロヘキシル尿素を濾別し、溶媒を真
空下で追い出す。
得られた褐色の油をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、水洗する。
有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、蒸発する
。溶離剤としてジクロロメタン／メタノール混合物を使
用して、生成物をシリカゲル上で精製する。純粋な画分
を合流し、蒸発された溶離剤は、多少結晶性の生成物を
生成する。
収率：６５％。
ｄ）脱保護 １）トリフルオロ酢酸での脱保護および塩酸塩の生成 上で得られた化合物をジクロロメタンとトリフルオロ酢
酸との１：１混合物４５ｍ１に溶解する。
混合物を室温で４時間攪拌する。溶媒を真空下で蒸発し
去り、残渣を水中に取り上げ、酢酸エチル／エーテル混
合物（容量で５０　：　５０）で数回洗浄する。
水相を回収し、凍結乾燥する。オレンジ黄色の粉末を水
中に取り上げ、２当量の０．５Ｎ塩酸を加える。次いで
、それによって得られた溶液を凍結乾燥する。サイクル
を２回繰り返す。塩酸塩を単離し、アルゴン下に保つ。
２）水素化分解による脱保護およびリン酸塩の生成 上で得られた（Ｎ　　−ＣＢＺ−α−０−ベンジル−し
−グルタミル）プリマキンを酢酸エチルに溶解する（１
００ｍ１１０．０１モル）。溶解を無水エタノール（１
５０ｍｌ）で完了する。次いで、１ｇの丸底フラスコを
アルゴンでパージする。フラスコを排気した後、水素を
導入する。真空／水素サイクルを２回繰り返す。水素圧
力を２０Ｐｓｉにさせる。
２時間および４時間の反応後、フラスコを排気し、次い
で、水素を充填して２０Ｐｓ　ｉの圧力とする。
６または７時間の反応後、水素を真空下で追い出し、溶
媒を蒸発し去る。γ−グルタミルプリマキンを真空下で
１６時間乾燥する。
収率：１００％。
リン酸塩の生成 （γ−Ｌ−グルタミル）プリマキン（０，０１モル）を
エタノール６０ｍ１および酢酸エチル１０ｍ１に溶解す
る。この混合物をリン酸の溶液〔メルク（Ｍｅｒｃｋ）
　５７３　；分析等級：イソプロパツール中８５％）に
加える。
容量を２５０ｍ１にさせ、沈殿を１時間攪拌する。
沈殿をミリボア（Ｍｉｌｌｌｐｏｒｅ）Ｆ　Ｈ膜上でア
ルゴン下で濾別する。生成物をイソプロパツールで２回
すすぎ、丸底フラスコに移し、真空下で２０時間乾燥す
る。それによって、（γ−Ｌ−グルタミル）プリマキン
ホスフヱート４．４ｇを単離する（９０％）。
ＴＬＣによる純度：単一のスポット ＨＰＬＣによる純度 カラム：Ｃ８グラフトシリカ 溶離剤：ｐＨ３，８５の０．１Ｍギ酸酸アンモニウム／
アセトニトリル台物（容量で７０：３０）検出器：３６
３ｎａ＋でのＵＶ 流量：２ｍｌ／分 ｔＲ：２．２分 ＨＰＬＣによる純度：通常〉９９％； 融点：Ｎ、Ｄ。
旋光度：Ｎ、Ｄ。
安定性：　ｇＧＬＵ−ＰＱは室温で空気中で不安定であ
り、室温で不活性雰囲気（アルゴン）下で安定である。
核磁気共鳴ニ ジステム：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（容量で１８：２） プレート：５ｉ−６０ Ｒｆ：０．１５ １３ＣＮＭＲ：　（ｃＤＣｌ２−７７．００ｐｐｍで参
照として役立つＣＤ０１３の中線）赤外線２ 質量： ２、　２．　２．塩酸（γ−Ｌ−グルタミル）プリマキ
ン ＨＰＬＣによる純度： 通常〉９９％ ４、　２．　２．　１．の条件と同一の条件２、　２．
　３．　　リン酸（γ−Ｌ−グルタミル）プリマキン ＨＰＬＣによる純度： 通常〉９９％ ４、　２．　２．　１．の条件と同一の条件例２：生体
外実験研究 １、血清の存在下での安定性 １．１．プロトコル プリマキン（ＰＱ）およびその誘導体の安定性に対する
血清の影響は、これらの化合物を３７℃で９５％胎児子
ウシ血清（ｆｅｔａｌ　ｃａｌｆ’　５ｅｒｕ＋１）（
Ｆｅ２．フロ−０ラボラトリーズ）またはヒト血清およ
びコントロールとしてのホスフェート緩衝化食塩水（０
，１５Ｍ　　ＰＢＳ、ｐＨ７，２）中で１００μｇ　／
　ｍｌの濃度でインキュベーションする（　１ｎｃｕｂ
ａｔｅ）ことによってＡ−１定する。すべての溶液を多
孔度０．２０μｍのミリポアフィルタ（ミレックスＧＶ
）上での濾過によって滅菌する。
所定の時間間隔で、試料１ｍｌを排出し、次いで、血清
タンパクをアセトニトリルでの沈殿によって試料から抽
出する。この目的で、同−容量のアセトニトリルを各試
料に加える。渦ミキサー中での強混合後、試料を４℃で
１時間放置し、光から保護し、次いで、１２，０ＯＯＧ
で５分間遠心分離する。上澄みを捕集し、次いで、標準
条件下でＨＰＬＣ（アリコート２０μ１１〜５０μｇ）
により分析する。
１．２．結果 胎児子ウシ血清の存在下におけるプリマキンおよびその
２つの誘導体の安定性の結果を表１に記録する。結果を
抽出後の初濃度（時間Ｏ）の％として表現する。
血清の存在下においては、プリマキンは、不安定である
。それは、徐々に劣化し、２４時間後に７％に達する。
使用する実験条件下では、第二ピーク（Ｙ）が２時間の
インキュベーション後にＨＰＬＣ（ｔＲ：４．２分）で
観察されるが、１０％を決して超えない。
同様の結果は、ヒト血清の存在下での化合物のインキュ
ベーション時に得られる。緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）におい
ては、化合物は、２４時間後に有意なスペクトル変性な
しに安定である。
得られた結果は、アミノ酸とプレマキンとの間の共有結
合が安定であり且つ血清酵素に抵抗性であることを示す
。
２６　　リソソーム酵素の存在下での加水分解２．１．
プロトコル： 最終濃度１５μｇ／ｍｌの化合物をｐＨ４，５のアセテ
ート緩衝液５ＱｍＭ中で３７℃においてンステイン５ｍ
Ｍおよびラット肝臓から精製されたりソソーム酵素画分
（タンパク質０．１５ｍｇ／ｍ＋）の存在下でインキュ
ベーションする。
精製されたりソソーム画分をトロウェットにより記載の
方法（１９７４、Ｍａｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、、　３
１　。
３２３−３３４）に従って調製する。
所定の時間間隔で、対応試料をインキュベーションから
採取する。酵素反応は、１０Ｍ　　ＨＣｌ１０μｇ／試
料ｍ１を加えることによって停止１．する。
２０Ｍｇの容量を排出し、標準条件下でＨＰＬＣにより
直接分析する。
２．２．結果： ＰＱおよびその誘導体に対するｐＨ４，５のりソソーム
ヒドロラーゼの効果を下記の表２に示す。
／ リソソーム酵素の存在下においては、プリマキンの誘導
体は、２４または４８時間インキュベーション後に親プ
リマキンを再生しない。
アミノ酸とＰＱ側鎖との間の共有結合は、リソソーム加
水分解に抵抗性である。しかしながら、２４時間後に６
８％に達するＰＱの相対濃度の漸減は、ＨＰＬＣにおい
て新しいピークの出現なしに観察される。同じ現象は、
ｐＧＬＵ−ＰＱの場合にも観察される（６時間のインキ
ュベーションのみに現れる）。
３、ヒト赤血球のプリマキンおよび誘導体への浸透性 ３．１．プロトコル： ＣＰＤＡ上の新鮮なヒト血液（Ａ＋）をｐＨ７，４のグ
ルコース２０ｍＭを含有するＲ　Ｐ　Ｍ　［培地中で２
回洗浄し、次いで、３７℃で同じ培地に再懸濁して赤血
球の２０％懸濁液（赤血球２×１０９個／　ｍｌ　）を
得る。この懸濁液１ｍｌに３７℃の同じ培地中の０．２
５０ｍＭの濃度のＰＱまたは誘導体の溶液１ｍｌを加え
る。
３７℃での異なるインキュベーション時間後、試料０．
５ｍｌを排出し、次いで、シリコーン油（メルク、密度
１．　０６ｇ／ｍｌ）　０．４ｍｌを含有するエッペン
ドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｒ）管に移ス。
１２．０ＯＯＧで３０秒間遠心分離後、水０．５ｍｌを
加えることによってペレット中の細胞を溶解しながら、
上澄みおよびシリコーン油を除去する。次いで、細胞溶
解産物との組み合わせで存在するキノリン化合物をアセ
トニトリル（０、５ｍｌ　）での細胞タンパクの沈殿に
よって抽出した後、標準条件下でのＨＰＬＣによって分
析する。
キノリン誘導体の細胞内濃度は、細胞溶解産物における
合計濃度から、細胞外培地に存（ｌニする化合物の濃度
を引くことによって得られる。トリチウム化イヌリンを
使用して、ｔｒｉ染細胞外容二を測定する。
３．２．結果： ＰＱは、赤血球によって迅速に取り上げられる（表３）
。５分のインキュベーション後、細胞外培地に存在する
ＰＱの１８％は、赤血球に見出されるべきであり、且つ
この濃度を少なくとも１時間維持する。
ｇＧＬＵ−ＰＱは、赤血球には蓄積されない。
ｐＧＬＵ−ＰＱは、ＰＱよりもゆっくりと蓄積する。最
大水準は、６０分後に達し、濃度はＰＱの濃度と同様で
ある。
表３：ヒト赤血球のプリマキンおよびアミノ酸誘導体へ
の浸透性 化合物ａ　　　　　　　　ｍ度５ （初濃度の％） ５分　　　１０分　　６０分 ブリマキ＞　　１７．７（１，２）　　１８．０（３，
４）　　１８．８（０，２）ｇＧＬＵ−ＰＱ　　　　Ｏ
ｏ　　　　　００ｐＧＬＵ−ＰＱ　　　１３．８　　　
１Ｂ、９　　　１７．８ａ：化合物を赤血球１０９個／
ｍｌの密度のヒト赤血球の存在下で１００μｇ／ｍｌの
最終濃度でインキュベーションする。
ｂ：結果は、赤血球と化合され且つ初濃度の９６として
表現される化合物の濃度を表わす（平均＋／−標準偏差
、ｎ−４試料）。
Ｃ：化合物は使用する分析条件下では検出不能（検出閾
値−５０ｎｇ）。
４、溶血効果およびメトヘモグロビン産生ＰＱの２つの
重要な毒性効果を２つの誘導体に関して検定した：溶血
効果およびヘモグロビンのメトヘモグロビンへの転化。
酸化剤に対する細胞の防御機構に関与するグルタチオン
バランス（還元および酸化形態）も、研究した。
４．１．プロトコル： Ａ十血液をグルコース２０ｍＭを含有するｐＨ７，４の
０．１５Ｍホスフェート緩衝化食塩水（ＧＰＢＳ）中で
２回洗浄し、次いで、同じ緩衝液に５０％の濃度で再懸
濁する。この懸濁液に、異なる濃度でＧＰＢＳに溶解さ
れた等容量の化合物（試験）または等容量のＧＰＢＳ　
（コントロール）を加える。懸濁液の最終へマドクリッ
トは、２５％である。３７℃での６０分のインキュベー
ション後に、ヘモグロビンおよびメトヘモグロビンの濃
度を全懸濁液に関して測定し、遠心分離後に上澄みに存
在するヘモグロビン（細胞外ヘモグロビン）の濃度をシ
アンメトヘモグロビンおよびベンジジン法（Ｖ、　　Ｆ
、フェアーバンクス、１９７６、ｒファンダメンタルズ
・オブｅクリニカル・ケミストリー（Ｐｕｎｄａａ＋ｅ
ｎｔａｌｓ　　ｏｆＣＩｉｎｌｃａｌ　Ｃｈｅｍｌｓｔ
ｒｙ）　、Ｍ、　Ｗ、　　チェツツ編、サウンダーズ」
〕によって測定する。還元型グルタチオン（ＧＳＭ）お
よび酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）の含量をＰ、　　
Ｊ、　　ヒラシンとＲ，ヒルフ（１９７６）、＾ｎａ１
．　Ｂｌｏｃｈｃａ＋、、　７４゜２１４−２２６の蛍
光分析法によって赤血球懸濁液に関して測定する。
４．２．結果： 表４は、溶血、即ち、ＰＱおよびその誘導体の存在下で
の赤血球の６０分のインキュベーション後の細胞外ヘモ
グロビンの濃度を示す。
ＰＱは、濃度依存性溶血効果を有し、赤血球の４．７％
はＰＱｌｏｍＭの存在下での１時間後に溶解される。溶
血効果は、インキュベーション時間にも依存する（結果
を示さず）。誘導体は、ＰＱの溶血活性に匹敵する溶血
活性を有し、５ｍＭの濃度においてはコントロールの溶
血の２倍を表わす。
メトヘモグロビン産生に関しては、後者は、アミノキノ
リン誘導体の濃度にも依存する。ＰＱの場合には、ヘモ
グロビンの１１．５％は、赤血球が１時間ＰＱ１０ｍＭ
の存在下にある時にはメトヘモグロビンに酸化される（
表４）。
同じ濃度の誘導体の存在下では、ヘモグロビンの酸化は
、ｇＧＬＵ−ＰＱの場合にはＰＱの酸化と同様であり、
ｐＧＬＵ−ＰＱの場合には１．５倍少ない。
／ ＰＱおよびその誘導体での赤血球のインキュベーション
後の還元型グルタチオンおよび酸化型グルタチオンの濃
度を表５に示す。
例３：動物における実験毒性 １回投与量に関する急性毒性を体重２２〜２５ｇの酸ス
イス（Ｓｗｉｓｓ）ＯＦ　１７ウスに関してａＰＩ定す
る。各化合物の一連の希釈物を１０匹のマウスの群に静
脈内に注射する（重量　１０　ｇ当たり０．１ｍ１）。
マウスの５０％の場合の致死Ｑ（ＬＤ５ｏ）を注射され
た投与量の対数の関数としての生存動物の％のロギッツ
（Ｉｏｇｌｔｓ）の線形回帰によって求める（ｍｇＰＱ
ジホスフェート当ｉｔＬ／ｋｇ）　　Ｃロギット・ウェ
イテッド変換（Ｌｏｇｌｔ　ＷｅｉｇｈｔｅｄＴｒａｎ
ｓｌ’ｏｒｍａｔｌｏｎ）　、Ｊ、バークソン、１９５
３、ｊ、＾ｒｓ、　５ｔａｔ、　Ａｓ５ｏｃ、　４８．
　　５６５−５９９）。
表６に記録の結果は、静脈内注射後に５日間初期重量の
５％を超えない目減りを引き起こす最高投与量と定義さ
れる最大許容ｆｆｉ　（ＭＴＤ）がＰＱの場合には２４
ｍｇ／ｋｇ、ｇＧＬＵ−ＰＱの場合には１１７ｎｇ／ｋ
ｇＳｐＧＬＵ−ＰＱの場合には１２６■／ｋｇであるこ
とを示す。
１回の静脈内注射後に動物の５０％を殺す投１５ｆｆｉ
（ＬＤ５ｏ）は、ＰＱの場合には３１■／ｋｇ、それぞ
れ誘導体ｇＧＬＵ−ＰＱおよびｐＧＬＵＰＱの場合には
１６９ｍｇ／ｋｇおよび１５９　ｔｎｇ／　ｋｇである
。
／ ／ ／ 表６：１回静脈内投与後のマウスにおけるプリマキンお
よびその誘導体の比較急性毒性 ｂ　　　　　　　ｃ 生成物ａ　　　ＭＴＤ　　　　ＬＤ５゜（ｍｇ／　ｋｇ
）　　　　（ｍｇ／　ｋｇ）プリマキン　　２４（２，
１）　　　　３１（０，７）ｇＧＬＵ−ＰＱ　　　　１
１７（１３）　　　　１６９（９）ｐＧＬＵ−ＰＱ　　
　　１２Ｂ（１３）　　　　１５９（８）ａ：生成物を
５投与ｆｆｉ／生成物の基準で体重２２〜２５ｇの１０
匹の雌スイスＯＦ１マウスの群に静脈内投与する。
ｂ：静脈内注射後に５日間初期重量の５％を超えない目
減りを引き起こす最高投与量と定義される最大許容量（
ＭＴＤ）。
Ｃ、１回の静脈内投与後にマウスの５０９６の致死量。
例４：動物における実験活性 １、プロトコル プリマキンおよびその誘導体は、プラスモディウム・ベ
ルゲイ（ＰＩａｓｍｏｄＩｕｍ　ｂｃｒｇｈｃＤ　、感
染アノフエレスｅステフェンシ（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓｓ
ｔｅｐｈｅｎｓｉ）蚊から生ずるスポロゾイトでのマウ
スの感染を使用して鰯歯動物におけるマラリアのモデル
で試験する。Ｈ，モスト、Ｒ，バーマンおよびＣ，シェ
ーンフエルドによって開発されたこのモデル（（１９６
７）　、Ａｍ、　Ｊ、、、Ｔｒｏｐ、　Ｗｅｄ、　Ｉｌ
ｙｇ。
１６．５７２−５７５）は、新規の治療化合物の因果予
防（組織膜シゾント）活性を測定することを可能にする
。
使用する方法は、Ｈ，モストおよびＷ、Ａ、モン゛ソオ
リ（１９７５）、＾腫、Ｊ、　Ｔｒｏｐ、　Ｍｅｄ、　
Ｉｌｙｇ。
２４．１７９−１８２に由来するものである。それは、
システムＰ、ベルゲイ会ベルゲイ（ＡＮＫＡ）／アノフ
エレスΦステフエンシ／スイスＯＦ１マウスを包含する
。ｐ、　　ｂ、ベルゲイのＡＮＫＡ菌株をアノフエレス
・ステフエンシ上で臨床的に維持する。スイスＯＦ１菌
株マウスは、不変の致命的感染を生ずるｐ、　　ｂ、ベ
ルゲイに特に感受性である。
１．１．蚊からのスポロゾイトの単離および実験感染 脚、翅および腹部を雌の蚊（製剤当たり８０〜１００の
個体）から除去し、次いで、ガラス製ボッター（Ｐｏｔ
ｔｅｒ）を使用して後者を胎児子ウシ血清１０％を含有
するＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ）中で４℃において均質化
する。次いで、スポロゾイト懸濁液を２回の逐次遠心分
１１ｆｔ（５０Ｇで２分、２００Ｇで５分）によって蚊
破片から精製し、捕集された上澄みを４℃で貯蔵する。
ペトロフーハウザー（Ｐｅｔｒｏｆ’ｆ−）１ａｕｓｓ
ｅｒ）室内で計数した後、寄生生物の数を同じ冷培地で
の２×１０５個のスポロゾイト／　ｍｌの密度への希釈
によって調節する。
−次赤血球形態に対する薬物の可能な残留効果（赤血球
膜シゾント効果）をワルハーストの２％試験に基づ＜Ｋ
、Ｇ、　グレゴリ−およびＷ、ぺ−ターズの方法（Ａｎ
、　Ｔｒｏｐ、　Ｍｅｄ、　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ、。
１９７０．６４．１５−２４）によってＭＪ定する。
化合物の因果予防活性、即ち、感染された動物の５０％
を治癒することを可能にする投与量（ｃＰＤ５ｏ）は、
投与量（ＰＱ■／ｋｇ）の関数としての応答（ＬＴＳ％
と表現）のロギッッの分析によって得られる。
全方法は、常時３５分以下で実施し、スポロゾイトの生
存可能性および感染性を保存することを可能にする。
１０５個のスポロゾイトを含何する懸濁液０．５ｍｌの
容量を治療試験に使用する体重２０〜２５ｇの雌のスイ
スＯＦ１マウスに静脈内注射する。
１．２．化学療法 スポロゾイトを接種してから３時間後に、前記のように
感染された２０〜２５匹のマウスの群をプリマキンジホ
スフエ−）　（ＰＱ）または塩酸塩形態の２つの誘導体
の１回の静脈内注射で処賀する。注射された容量を体重
２５ｇの場合に０．２５ｍ１の基準でマウスの体重に応
じて調節する。化合物をｐＨ７，０のホスフェート緩衝
化食塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）中で希釈し、ｐＨを７．０に調
節する。感染されているが処置されていないマウス（５
匹／群）は、緩衝液単独を受容し、スポロゾイトの感染
性を監視するのに役立つ。
実験用マウスを５０口間保つ。寄生虫血症の発現後、５
日目から１５日０までｐＨ７，２のゼーレンゼン緩衝液
中の５％ギエンサで６０分間染色された血液スミアを毎
日調べる。かくて、感染された動物の数は、ａ―１定で
きる。これらの結果は、長期の生存（ＬＴＳ、感染され
且つ処置されたマウスの数量上の非寄生生存マウスの数
）を確立することを可能にする。
２、動物における治療活性 Ｐ、ベルゲイスポロゾイトを使用して感染された動物を
３時間後に化合物の１回の静脈内注射で処置する。この
試験は、化合物の因果予防活性、即ち、感染された動物
の５０％を治癒させることを可能にする投与ｆｆ１（ｃ
ＰＤ５ｏ）を定義させることを可能にする。投与量は、
常時ＰＱジホスホネートＩＩｇ／ｋｇと表現する。
プリマキンおよびその２つのアミノ成語導体の因果予防
活性（＋３時間）の結果を表７に示す。
それらは、２つの誘導体がＰＱよりも活性であることを
明示し、動物の５０％の治癒を引き起こす投与Ｅｉ（ｃ
ＰＤ５ｏ）はＰＱの場合よりもｇＧＬＵ−ＰＱの場合に
は２２倍且つｐＧＬＵ−ＰＱの場合には１．９倍低い。
また、２つの誘導体の最小有効量は、ＰＱのものよりも
低い。合計治癒量は、毒性のためＰＱの場合には１回の
注射では到達できないが（ＰＱのＥＤｌｏｏは５４ｍｇ
／ｋｇと概算）、ｇＧＬＵ−ＰＱおよびｐＧＬＵ−ＰＱ
のものは、それぞれ２４　ｍｇ／ｋｇおよび２２　ｗａ
ｇ／　ｋｇで達する。
３、治療指数 治療指数は、マウスにおけるＬＤ５ｏと表現する毒性対
ＣＰ　Ｄ　５ｏと表現する治療活性の比率と定義される
。
ＰＱの治療指数は１６７である（表８）一方、ｐＧＬＵ
−ＰＱおよびｇＧＬＵ−ＰＱの場合には１５よりも大、
１９よりも大である。
マウスにおけるマラリアのモデルにおける活性に関する
実験データおよび毒性データは、ｇＧＬＵ−ＰＱがＰＱ
の治療指数よりも少なくとも１１倍高い治療指数を有す
ることを示し、誘導体はマラリアのこの実験モデルにお
いてＰＱよりも少なくとも５倍低い毒性であり且つ少な
くとも２倍活性である。
同じことは、ＰＱの治療指数よりも９倍大きい治療指数
を有する誘導体ｐＧＬＵ−ＰＱにあてはまり、誘導体は
ＰＱよりも少なくとも５倍低い毒性であり且つ少なくと
も１．９倍活性である。
表８：ブリマキンおよびアミノ酸誘導体の治療指数 生成物　　ＬＤ５ｏ　　　ＣＰＤ　　　ＴＩｂ（ｌＩｇ
／ｋｇ）（■／ｋｇ） ＰＱ　　　　　　３１（０，７）　　　１８．８（１，
３）　　　１．７ｇＧＬυ−Ｐ０　　１８９（９）　　
　　　８．７（０，７）　　　１９．４ｐａｔ、υ−Ｐ
Ｑ　　　１５９（８）　　　　　１０．０（０，７）　
　　１５．９ａ：生成物を静脈内接種し、濃度をＰＱシ
ボスフエート当量と表現する。
ｂ＝治療指数（ＴＩ）は、Ｌ　Ｄ　５０対ＣＰＤ５ｏの
比率である。
ｆｌｌＪ５：Ｌ−アスパルチルプリマキン誘導体１、合
成 プリマキンのアスパラギン酸誘導体は、プリマキンのグ
ルタミン酸の場合に記載のものと同じ合成法に従ってプ
リマキンとアスパラギン酸の活性化エステルとの縮合に
よって得られる。
α−カルボキシル基の代わりにβ−カルボキシル基を保
護する以゛外は、プリマキンのし一アスパラギン酸誘導
体（ＡＳＰ−ＰＱ）をプリマキンのγ−グルタミン酸誘
導体の場合に使用した方法に従って合成する。プリマキ
ンのβ−Ｌ−アスパラギン酸誘導体（βＡＳＰ−ＰＱ）
は、ｇＧＬＵ−ＰＱの場合に使用した方法に従って得ら
れる。
化合物は、塩基（分子Ｅｔ３７４．４３）およびジ塩酸
塩（分子量４４７．３５）の形態で得られる。
２、動物における実験毒性 １回投与量に関する急性毒性を例３のプロトコルに従っ
て同じ条件下で測定する。
表９に記録の結果は、静脈内注射後に５１」間初期ｆｆ
ｉ量の５％を超えない目減りを引き起こす最高投与量と
定義される最大許容ｆｆｉ　（ＭＴＤ）がＰＱの場合に
は２４ｍｇ／）ｃｇ、　Ａ　Ｓ　Ｐ　−Ｐ　Ｑの場合に
は１０７ｍｇ／ｋｇ、βＡＳＰ−ＰＱの場合には１０９
ｍｇ／ｋｇであることを示す。
１回の静脈内注射後に動物の５０％を殺す投与量（ＬＤ
５ｏ）は、ＰＱの場合には３１ｍ１（／ｋｇ、それぞれ
誘導体ＡＳＰ−ＰＱおよびβＡＳＰ−ＰＱの場合には１
６５置ｇ／ｋｇおよび１６４ｍｇ／ｋｇである。
表９：１回静脈内投与後のマウスにおけるプリマキンお
よびその誘導体の比較急性毒性 生成物ａ　　　ＭＴＤｂ　　　　ＬＤ　ｃ（ｓａｇ／　
ｋｇ）　　　　　（ｇ＋ｇ／　ｋｇ）プリマキン　　２
４（２，１）　　　　　３１（０，７）ＡＳＰ−ＰＱ　
　　　　１０７．２（１４，２）　　　１６５．５（５
，４）βＡＳＰ−ＰＱ　　　　１０９．１（１３，１）
　　　１８４．４（６，２）ａ：生成物を５投与量／生
成物の基準で体重２２〜２５ｇの１０匹の雌スイスＯＦ
１マウスの群に静脈内投与する。
ｂ；静脈内注射後に５日間初期重量の５％を超えない目
減りを引き起こす最高投与量と定義される最大許容量（
ＭＴＤ）。
Ｃ，１回の静脈内投与後にマウスの５０％の致死量。
３、動物における治療活性 Ｐ、ベルゲイスポロゾイトを使用して感染された動物を
３時間後に化合物の１回の静脈内注射で処置する。この
試験は、化合物の因果予防活性、即ち、感染された動物
の５０％を治癒させることを可能にする投与量（ｃＰＤ
５ｏ）を定義させることを可能にする。投与量は、常時
ＰＱジホスフェートａｇ／ｋｇと表現する。
プリマキンおよびそのアミノ酸誘導体の因果Ｐ防活性（
＋３時間）の結果を表１０に示す。それらは、２つの誘
導体がＰＱよりも活性であることを明示し、動物の５０
％の治癒を引き起こす投与量（ｃＰＤ５ｏ）はＰＱの場
合よりもＡＳＰ−ＰＱおよびβＡＳＰ−ＰＱの場合には
１．６倍低い。
また、２つの誘導体の最小有効量は、ＰＱＯものよりも
低い。合計治癒量は、毒性のためＰＱの場合には１回の
注射では到達できないが（ＰＱのＥＤｌｏｏは５４ｏ＋
ｇ／）ｃｇと概算’）　、ＡＳＰ−ＰＱおよびβＡＳＰ
−ＰＱのものは、３１ｍｇ／ｋｇで達する。
４、治療指数 治療指数は、マウスにおけるＬＤ５ｏと表現する毒性対
ＣＰＤ５ｏと表現する治療活性の比率と定義される。
ＰＱの治療指数は１．７である（表１１）一方、ＡＳＰ
−ＰＱとβＡＳＰ−ＰＱとの両方の場合とも１４よりも
大である。
マウスにおけるマラリアのモデルにおける活性に関する
実験データおよび毒性データは、ＡＳＰ−ＰＱがＰＱの
治療指数よりも少なくとも８倍高い治療指数を付するこ
とを示し、誘導体はマラリアのこの実験モデルにおいて
ＰＱよりも少なくとも５倍低い毒性であり且つ１．６倍
活性である。
同じことは、ＰＱの治療指数よりも８倍人きい治療指数
を有する誘導体βＡＳＰ−ＰＱにあてはまり、誘導体は
ＰＱよりも少なくとも５倍低い毒性であり且つ少なくと
も１．６倍活性である。
表１１：ブリマキンおよびアミノ酸誘導体の治療指数 生成物　　　ＬＤ　　　　　ＣＰＤ　　　　ＴＩｂ（弯
／ｋｇ）　　　（ｍｇ／ｋｇ） プリマキン　３１（０，７）　　　１８．８（１，３）
　　　１．７ＡＳＰ−ＰＱ　　　　１６５（５，４）　
　　ｌＬ、６（０，９）　　１４．３βＡＳＰ−ＰＱ　
　　１６４（８，２）　　　１１．２（０，７）　　１
４．７ａ：生成物を静脈内接種し、濃度をＰＱジホスフ
ェート当量と表現する。
ｂ＝治療指数（ＴＩ）は、処理されたＬＤ５ｏ値に＝１
処理されたＣＰＤ５ｏ値の比率である。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の誘導体Ｎ−（α−Ｌ−ピログルタミル
）−プリマキンの２つの合成法を示す図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、遊離アミン基を含有し且つ抗マラリア性を有する新
    規キノリン誘導体、特に新規プリマキン誘導体またはそ
    れらと酸との付加塩であって、誘導体は式 ＰＱ−Ｘ （式中、ＰＱは遊離アミン基を含有し且つ抗マラリア性
    を有するキノリン、特にプリマキン、および他の８−ア
    ミノキノリンを表わし、 Ｘはアミノ酸、または２〜４個のアミノ酸のペプチドを
    表わし、単数のアミノ酸または複数のアミノ酸は天然ア
    ミノ酸およびそれらの誘導体から選ばれ、 ＰＱ−Ｘ結合はＰＱの遊離アミン基とＸのアミノ酸また
    は末端アミノ酸のカルボキシル基との間の共有ペプチド
    結合であり、結合は血清中で安定であり且つリソソーム
    ヒドロラーゼに抵抗性である）によって図式的に表わさ
    れることを特徴とする新規誘導体。 ２、遊離アミン基を含有し且つ抗マラリア性を有する新
    規キノリン誘導体、特に新規プリマキン誘導体またはそ
    れらと酸との付加塩であって、誘導体は式 ＰＱ−Ｘ （式中、ＰＱは遊離アミン基を含有し且つ抗マラリア性
    を有するキノリン、特にプリマキン、および他の８−ア
    ミノキノリンを表わし、 Ｘはアミノ酸、または２〜４個のアミノ酸のペプチドか
    ら選ばれ、アミノ酸またはペプチドの第一アミノ酸はβ
    −またはγ−カルボキシル基を介してＰＱに結合された
    γ−グルタミン酸およびβ−アスパラギン酸、またはα
    −カルボキシル基を介してＰＱに結合されたピログルタ
    ミン酸およびアスパラギン酸から選ばれる） によって図式的に表わされることを特徴とする新規誘導
    体。 ３、Ｘが、γ−Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ピログルタミン
    酸またはα−またはβ−Ｌ−アスパラギン酸を表わす、
    請求項１または２に記載の新規誘導体。 ４、反応は、Ｘの遊離カルボキシル基（アミン基および
    α−、β−またはγ−カルボキシル基は、適当な場合に
    は、場合によって保護されている）を縮合剤の存在下で
    ＰＱまたはその塩の１つの遊離アミン基と縮合してＰＱ
    −Ｘペプチド結合を形成することによって実施すること
    を特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載の
    新規誘導体の製法。 ５、アミン基を保護する基が通常の基、好ましくはｔ−
    ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニ
    ルであり、カルボキシル基を保護する基が適当な場合に
    は通常の基、好ましくはｔ−ブチルまたはベンジルであ
    る、請求項４に記載の方法。 ６、アミノ酸またはペプチドの遊離酸基をＮ−ヒドロキ
    シスクシンイミドとのエステルの形態で活性化する、請
    求項４または５に記載の方法。 ７、出発物質がアミノキノリン塩（ＰＱ）、好ましくは
    プリマキンジホスフェート、およびアミノ酸またはペプ
    チド（Ｘ）であり、そしてアミノ基およびα−、β−ま
    たはγ−カルボキシル基は適当な場合には、例えば、ア
    ミン基の場合にはｔ−ブチルオキシカルボニルまたはベ
    ンジルオキシカルボニル基により、カルボキシル基の場
    合にはｔ−ブチルまたはベンジル基により場合によって
    保護されており、下記工程を実施し： （ａ）Ｘの未保護酸基を活性化するＮ−ヒドロキシスク
    シンイミドまたは他の基をＸの場合によって保護された
    誘導体と反応させ、 （ｂ）例えば、アンモニア溶液を使用して塩から遊離さ
    れたＰＱを反応させ；それを、例えば、Ｘの場合によっ
    て保護された誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエ
    ステルと反応させ、 （ｃ）それによって得られた粗生成物をシリカゲル上の
    クロマトグラフィーによって精製し、（ｄ）次いで、適
    当な場合には、保護基を酸、特にトリフルオロ酢酸の存
    在下で開裂して塩、特にトリフルオロ酢酸塩の形態の誘
    導体ＰＱ−Ｘを与え、または化合物を水素化分解によっ
    て脱保護することができる 請求項４ないし６のいずれか１項に記載の方法。 ８、トリフルオロアセテート対陰イオンをヒドロクロリ
    ドまたはホスフェートに交換する、請求項７に記載の方
    法。 ９、塩酸塩を重亜硫酸ナトリウムで処理する、請求項４
    ないし８のいずれか１項に記載の方法。 １０、請求項３に記載の誘導体ＰＱ−Ｘ（式中、ＸはＬ
    −ピログルタミン酸を表わす）を製造するにあたり、Ｌ
    −グルタミン酸のγ位におけるエステルをＮ−カルボキ
    シル無水物に転化し、反応をホスゲンの存在下で実施し
    、Ｎ−カルボキシ無水物誘導体をＴＨＦ中での０℃での
    反応によってＰＱにカップリングさせて誘導体（Ｌ−ピ
    ログルタミル）−ＰＱを与えることを特徴とする誘導体
    ＰＱ−Ｘの製法。 １１、Ｌ−グルタミン酸エステルが、γ−メチルグルタ
    メートまたはγ−ベンジルグルタメートである、請求項
    １０に記載の方法。 １２、有効成分として請求項１ないし３のいずれか１項
    に記載の新規誘導体またはそれらの製薬上許容可能な塩
    を含有することを特徴とする医薬組成物。
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