JPH02187661A - 網状赤血球の新染色法 - Google Patents
網状赤血球の新染色法Info
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- JPH02187661A JPH02187661A JP695689A JP695689A JPH02187661A JP H02187661 A JPH02187661 A JP H02187661A JP 695689 A JP695689 A JP 695689A JP 695689 A JP695689 A JP 695689A JP H02187661 A JPH02187661 A JP H02187661A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
の１
この発明は網状赤血球算定検査において、網状赤血球を
染色する染色液の処方及び染色方法に関するものである
。
染色する染色液の処方及び染色方法に関するものである
。
ｌ１立ＪＬＪＬ
成熟赤血球のすぐ前の成熟段階にある脱核した赤血球を
網状赤血球（レチクロサイト、Ｒｅｔｉｃｕｌ−ｏｃｙ
ｔｏ）と呼ぶ。これは、ある種の塩基性色素にューメチ
レン青、ブリリアントクレシル青など）を使って超生体
染色をすると、網状赤血球がもっている細胞質中のＲＮ
Ａや糸粒体（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ）が、青く顆粒
状線状に染め出される。この顆粒状線状の物質は成熟す
るにつれ失われ、成熟赤血球になる。健康邦人における
網状赤血球比率は概略２〜２５脇とされており、溶血性
貧血、失血性貧血、治療開始直後の鉄欠乏性貧血などの
赤血球造血亢進時に高値となり、一方再生不良性貧血な
ど、造血障害では低値となる。これらのことから、網状
赤血球の算定は骨髄の造血機能を見る指標として大きな
臨床的意義をもっている。
網状赤血球（レチクロサイト、Ｒｅｔｉｃｕｌ−ｏｃｙ
ｔｏ）と呼ぶ。これは、ある種の塩基性色素にューメチ
レン青、ブリリアントクレシル青など）を使って超生体
染色をすると、網状赤血球がもっている細胞質中のＲＮ
Ａや糸粒体（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ）が、青く顆粒
状線状に染め出される。この顆粒状線状の物質は成熟す
るにつれ失われ、成熟赤血球になる。健康邦人における
網状赤血球比率は概略２〜２５脇とされており、溶血性
貧血、失血性貧血、治療開始直後の鉄欠乏性貧血などの
赤血球造血亢進時に高値となり、一方再生不良性貧血な
ど、造血障害では低値となる。これらのことから、網状
赤血球の算定は骨髄の造血機能を見る指標として大きな
臨床的意義をもっている。
現在、この網状赤血球の染色方法としては種々の方法が
あるが、主にＢｒｅｃｈｅｒ法が汎用されている。この
方法での操作は次のようである。まずニューメチレン青
、シュウ酸カリウムを含む染色液と血液を毛細管内にて
等量混合し、１５分間静置することにより染色をする。
あるが、主にＢｒｅｃｈｅｒ法が汎用されている。この
方法での操作は次のようである。まずニューメチレン青
、シュウ酸カリウムを含む染色液と血液を毛細管内にて
等量混合し、１５分間静置することにより染色をする。
この混合液を一滴スライドグラスに塗抹した後、顆粒状
線状に青く染まった赤血球、つまり網状赤血球を赤血球
１，０００個に対して算定する。
線状に青く染まった赤血球、つまり網状赤血球を赤血球
１，０００個に対して算定する。
しかしながら、このＢｒｅｃｈｅｒ法では次のような欠
点が存在する。まず処方で用いているシュウ酸カリウム
は膜侵襲作用が強く、赤血球形態を変性（萎縮、有口化
など）させ、網状赤血球の算定を困難にさせる。また染
色用器具として毛細管を用いる為、次のような欠点があ
る。
点が存在する。まず処方で用いているシュウ酸カリウム
は膜侵襲作用が強く、赤血球形態を変性（萎縮、有口化
など）させ、網状赤血球の算定を困難にさせる。また染
色用器具として毛細管を用いる為、次のような欠点があ
る。
■検体ごとに処理しなければならない為、大量検体処理
には不向きである。
には不向きである。
■器具構造上、染色に１５分間以上もの時間を要する。
が “ よ゛と る
本発明は、上記のようなりｒｅｃｈｅｒ法の欠点を解決
することによって、赤血球形態を変性させずに赤血球を
染色し、また染色器具として用いている毛細管を他の器
具に変更することにより、大量処理向きにも改良しよう
とするものである。さらに染色液成分を染色器具に固着
させることによって、染色操作を１ステップ削減し、網
状赤血球算定検査をより簡便な方法にしようとするもの
である。
することによって、赤血球形態を変性させずに赤血球を
染色し、また染色器具として用いている毛細管を他の器
具に変更することにより、大量処理向きにも改良しよう
とするものである。さらに染色液成分を染色器具に固着
させることによって、染色操作を１ステップ削減し、網
状赤血球算定検査をより簡便な方法にしようとするもの
である。
るた の
まず、Ｂｒｅｃｈｅｒ法処方で用いられている膜侵襲作
用の強いシュウ酸カリウムに代えて、他の抗凝固剤例え
ばＥ Ｄ Ｔ Ａ −２Ｋ、ＥＤＴＡ−２Ｎａ。
用の強いシュウ酸カリウムに代えて、他の抗凝固剤例え
ばＥ Ｄ Ｔ Ａ −２Ｋ、ＥＤＴＡ−２Ｎａ。
ヘパリン、フッ化ナトリウム、クエン酸ナトリウムなど
のうちいづれかひとつ、又はそのいづれかを複数組み合
わせて、血液に対して抗凝固作用が確認されている一般
的な通を加えた。さらに赤血球膜安定化剤として、ぶど
う糖、ヒドロキシエチルスターチ、Ｄ−マンニトール、
フェニルメチルスルフォニルフルオライド、ジエチルヘ
キシルフタレートなどのうちいづれかひとつ、又はその
いづれかを複数組み合わせて用いて赤血球形態の保持効
果を増強させた。これらのことにより、Ｂｒｅ−ｃｈｓ
ｒ法に比べ本発明は赤血球膜が脆弱化した血液において
も、赤血球形態の変性が最小限に押えられ、網状赤血球
の検鏡による算定が、たいへん容易になった。
のうちいづれかひとつ、又はそのいづれかを複数組み合
わせて、血液に対して抗凝固作用が確認されている一般
的な通を加えた。さらに赤血球膜安定化剤として、ぶど
う糖、ヒドロキシエチルスターチ、Ｄ−マンニトール、
フェニルメチルスルフォニルフルオライド、ジエチルヘ
キシルフタレートなどのうちいづれかひとつ、又はその
いづれかを複数組み合わせて用いて赤血球形態の保持効
果を増強させた。これらのことにより、Ｂｒｅ−ｃｈｓ
ｒ法に比べ本発明は赤血球膜が脆弱化した血液において
も、赤血球形態の変性が最小限に押えられ、網状赤血球
の検鏡による算定が、たいへん容易になった。
一方、Ｂｒｅｃｈｅｒ法での毛細管という器具上の欠点
を解消する為に、器具としてプレートを採用した。この
器具はその構造上、少量及び大量処理にも向いている。
を解消する為に、器具としてプレートを採用した。この
器具はその構造上、少量及び大量処理にも向いている。
またウェル内で血液と染色液を混合するため染色性も大
変良好であり、染色時間も１０分間と短くて良い（［１
ｒ６ｃｈｅｒ法は１５分間）。
変良好であり、染色時間も１０分間と短くて良い（［１
ｒ６ｃｈｅｒ法は１５分間）。
また、Ｂｒｅｃｈｅｒ法は、毛細管に血液と染色液を吸
引させて、その器具内で染色する術式であるが、本発明
ではこの染色液を分注する操作を省くため、予め染色液
をプレートのウェルに乾燥することを考案した。
引させて、その器具内で染色する術式であるが、本発明
ではこの染色液を分注する操作を省くため、予め染色液
をプレートのウェルに乾燥することを考案した。
次に本発明を調整例、実施例によってさらに説明するが
、本発明はその要旨を越えない限り、これによって限定
されるものではない。
、本発明はその要旨を越えない限り、これによって限定
されるものではない。
（ａ過してかっ色瓶に保存）
（２）網状赤血球算定用染色液成分固着プレートの作製
方法 プレートのウェル内に、上記（１）で作製した染色液を
３０μｍ滴下する。その後プレートを３７°Ｃ１１晩静
置することにより、染色液中の水分を蒸発乾燥させ、染
色液成分を固相に固着させる。
方法 プレートのウェル内に、上記（１）で作製した染色液を
３０μｍ滴下する。その後プレートを３７°Ｃ１１晩静
置することにより、染色液中の水分を蒸発乾燥させ、染
色液成分を固相に固着させる。
（１）染色液の作製
下表の処方により、染色ｉｔ？ｔを作製する。
表
調整例１に記載の網状赤血球算定用染色液成分固着プレ
ートのウェルに一般血液をスポイトで２滴（６０〜７０
μｍ）滴下し、プレートミキサーを用いて約５秒間振動
後、１０分間静置。その後再度プレートに約５秒間振動
り塗抹標本を作製し網状赤血球を算定した。
ートのウェルに一般血液をスポイトで２滴（６０〜７０
μｍ）滴下し、プレートミキサーを用いて約５秒間振動
後、１０分間静置。その後再度プレートに約５秒間振動
り塗抹標本を作製し網状赤血球を算定した。
その結果、網状赤血球の染色性は良好であり、また赤血
球形態の変性も認められなかった。その詳細を第１図（
顕微鏡写真、以下図はすべて顕微鏡写真）に示す。
球形態の変性も認められなかった。その詳細を第１図（
顕微鏡写真、以下図はすべて顕微鏡写真）に示す。
実施例１の方法により、採血直後及び２５時間後、血液
を染色した。その結果、不法は採血後２５時間経過した
血液においても、染色性良好であり、なおかつ赤血球形
態の変性もほとんど見られなかった。その詳細を第２〜
３図に示す。しかしながら、同一血液をＢｒｅｃｈｅｒ
法により染色した結果、染色性は実施例１の方法と比べ
て明らかな差は認められなかったが、赤血球形態は第４
〜５図に示したように、Ｂｒｅｃｈｅｒ法の場合、既に
採血直後においてその赤血球形！ムに変性が認められた
。
を染色した。その結果、不法は採血後２５時間経過した
血液においても、染色性良好であり、なおかつ赤血球形
態の変性もほとんど見られなかった。その詳細を第２〜
３図に示す。しかしながら、同一血液をＢｒｅｃｈｅｒ
法により染色した結果、染色性は実施例１の方法と比べ
て明らかな差は認められなかったが、赤血球形態は第４
〜５図に示したように、Ｂｒｅｃｈｅｒ法の場合、既に
採血直後においてその赤血球形！ムに変性が認められた
。
また２５時間後、その変性度は増大した。
赤血球膜が劣化した血液を、実施例１の方法により染色
した。その結果、染色性は良好であったが、はんのわず
か赤血球形態変性が認められた。
した。その結果、染色性は良好であったが、はんのわず
か赤血球形態変性が認められた。
一方、同一検体をＢｒｅｃｈｅｒ ｍで染色したところ
、染色性は同じく良好であったが、赤血球形態の変性（
萎縮、有口化、断片化）がかなり認められた。
、染色性は同じく良好であったが、赤血球形態の変性（
萎縮、有口化、断片化）がかなり認められた。
その詳細を第６〜７図に示した。
ｌ亙立亙１
以上詳細に説明したように、本発明を用いて網状赤血球
の染色を行なうと、赤血球形態の変性がほとんど生じな
いことから、検鏡による網状赤血球算定が、より容易と
なり得る。またこのことにより網状赤血球算定検査のｔ
ａ度が、向上することが期待される。
の染色を行なうと、赤血球形態の変性がほとんど生じな
いことから、検鏡による網状赤血球算定が、より容易と
なり得る。またこのことにより網状赤血球算定検査のｔ
ａ度が、向上することが期待される。
さらに、染色液を予め固着しているプレートを用いるこ
とにより、操作の煩雑さも解消される。
とにより、操作の煩雑さも解消される。
添付の第１〜７図は本発明を説明するための網状赤血球
染色液又は網状赤血球染色液成分により染色した血液の
塗抹標本の顕微鏡写真（１，０００倍）である。 第１図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プ一 レートを用いて染色した一般血液の塗抹標本の顕微鏡写
真である。 第２図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した採血直後血液の塗抹標本の顕微鏡写真で
ある。 第３図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した採血２５時間後血液の塗抹標本の顕微鏡
写真である。 第４図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した採血直後血
液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 第５図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した採血２５時
間後血液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 第６図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した赤血球膜劣化血液の塗抹標本の顕微鏡写
真である。 第７図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した赤血球膜劣
化血液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 特許出願人 工 藤 敬 ｊｔｔ 手続補正書 （方ヱ０ 平成１年５月１３Ｅ１ 平成１年特許願第６９５６号 網状赤血球の新染色法 事件との関係
染色液又は網状赤血球染色液成分により染色した血液の
塗抹標本の顕微鏡写真（１，０００倍）である。 第１図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プ一 レートを用いて染色した一般血液の塗抹標本の顕微鏡写
真である。 第２図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した採血直後血液の塗抹標本の顕微鏡写真で
ある。 第３図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した採血２５時間後血液の塗抹標本の顕微鏡
写真である。 第４図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した採血直後血
液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 第５図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した採血２５時
間後血液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 第６図は、網状赤血球算定用染色液成分固着プレートを
用いて染色した赤血球膜劣化血液の塗抹標本の顕微鏡写
真である。 第７図は、Ｂｒｅｃｈｅｒ法により染色した赤血球膜劣
化血液の塗抹標本の顕微鏡写真である。 特許出願人 工 藤 敬 ｊｔｔ 手続補正書 （方ヱ０ 平成１年５月１３Ｅ１ 平成１年特許願第６９５６号 網状赤血球の新染色法 事件との関係
Claims (5)
- （１）染色色素であるニューメチレン青あるいはブリリ
アントクレシル青、及び水の他に、抗凝固剤としてＥＤ
ＴＡ−２Ｋ、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ヘパリン、フッ化ナト
リウム、クエン酸ナトリウムのうちいづれかひとつ、又
はそのいづれか複数を組み合わせて処方した染色液を用
いることによって、網状赤血球を染色することを特徴と
する網状赤血球の染色法。 - （２）染色色素であるニューメチレン青あるいはブリリ
アントクレシル青、及び水の他に、赤血球形態保持剤と
してぶどう糖、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、
Ｄ−マンニトール、フェニルメチルスルフォニルフルオ
ライド（ＰＭＳＦ）、ジエチルヘキシルフタレート（Ｄ
ＥＨＰ）のうちいづれかひとつ、又はそのいづれか複数
を組み合わせて処方した染色液を用いることによって、
網状赤血球を染色することを特徴とする網状赤血球の染
色法。 - （３）染色色素であるニューメチレン青あるいはブリリ
アントクレシル青、及び水の他に、特許請求の範囲第１
項記載の抗凝固剤及び特許請求の範囲第２項記載の赤血
球形態保持剤を組み合わせて処方した染色液を用いるこ
とによって、網状赤血球を染色することを特徴とする網
状赤血球の染色法。 - （４）特許請求の範囲第１項記載、特許請求の範囲第２
項記載、特許請求の範囲第３項記載の染色液、あるいは
通常の網状赤血球染色液と血液をマイクロプレートで混
合することによって、網状赤血球を染色することを特徴
とする網状赤血球の染色法。 - （５）特許請求の範囲第１項記載、特許請求の範囲第２
項記載、特許請求の範囲第３項記載の染色液、ニューメ
チレン青水溶液あるいはブリリアントクレシル青の水溶
液のいづれかをマイクロプレートに適量分注し、乾燥す
ることにより、ウェル底に固着させ、この染色液成分固
着プレートに血液を滴下することにより、網状赤血球を
染色することを特徴とする網状赤血球の染色法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP695689A JPH02187661A (ja) | 1989-01-13 | 1989-01-13 | 網状赤血球の新染色法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP695689A JPH02187661A (ja) | 1989-01-13 | 1989-01-13 | 網状赤血球の新染色法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02187661A true JPH02187661A (ja) | 1990-07-23 |
Family
ID=11652677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP695689A Pending JPH02187661A (ja) | 1989-01-13 | 1989-01-13 | 網状赤血球の新染色法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02187661A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0708334A3 (en) * | 1994-10-20 | 1996-09-18 | Toa Medical Electronics | Reagent and method for the analysis of solid components in urine |
| US9314014B2 (en) | 2004-02-18 | 2016-04-19 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions and methods for the storage of red blood cells |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5020822A (ja) * | 1973-05-24 | 1975-03-05 | ||
| JPS63122954A (ja) * | 1986-10-31 | 1988-05-26 | ファノス・テクノロジーズ・インコーポレイテッド | 生育可能細胞の標識 |
| JPS6435366A (en) * | 1987-07-31 | 1989-02-06 | Toa Medical Electronics | Reagent for measuring reticulocyte for flow sightmetry |
| JPH01199158A (ja) * | 1987-10-20 | 1989-08-10 | Seitetsu Kagaku Co Ltd | 赤血球保存液 |
-
1989
- 1989-01-13 JP JP695689A patent/JPH02187661A/ja active Pending
Patent Citations (4)
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| EP1089078A1 (en) * | 1994-10-20 | 2001-04-04 | Sysmex Corporation | Reagent and method for analyzing solid components in urine |
| US9314014B2 (en) | 2004-02-18 | 2016-04-19 | University Of Maryland, Baltimore | Compositions and methods for the storage of red blood cells |
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