JPH02202893A - 化合物ｔａｎ―１１３９およびその製造法 - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は医薬、農薬、動物薬などの製造分野において有
用な、新規化合物ＴＡＮ−１１３９（以下ｒＴＡＮ−１
，１３９Ｊと略称することもある）、およびその製造法
に関する。

従来の技術 神経伝達物質アセチルコリンは副交感神経、体性神経、
また成る種の中枢神経の興奮により神経終末から放出さ
れ、多様な生理的機能を発揮するか、アセチルコリンエ
ステラーセ（ＡＣｂＥ）によって速かに加水分解され、
不活性化される。この酵素の阻害剤はアセチルコリンの
不活性化を妨げ、アセチルコリン濃度を高めることが出
来、その作用機作を通して、緑内障、重症筋無力症の治
療剤あるいは殺虫剤なととして開発されている［アン・
ンルバー（Ａｎｎ　　５ｉｌｖｅｒ）著、コリンエステ
ラーセの生物学、Ｎｏｒｔｈ　−Ｈｏｌ　１ａｎｄ　　
Ｐｕｂ、　ＣｏｍｐＡｍｓｔｅｒｄａｍ、　　１９７４
　］　ｏまた、最近、老人性アルツハイマー型痴呆症に
おいて脳内アセチルコリン量の減少か原因であるとする
考えから、該酵素阻害剤がこの疾病の治療薬として研究
されている［　Ｒ，Ｅ、　ＢｅｃｋｅｒおよびＥ、　Ｇ
ｉａｃｏｂｉｎｉ、　ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　　］　２巻、ｐ、１６３１９
５．１９８８］。

しかし、これまで見出されたＡＣｂＥ阻害剤は毒性の強
さなどの欠点を有しており、その利用か制限されている
。

本発明者らはかかる現状に鑑み、これまで知られている
化合物とは異なる多様なＡＣｈＥ阻害剤を見出すことは
非常に重要であると考え、微生物代謝産物中に該活性を
示す化合物を広範に検索した。その結果、土壌から分肉
１［された多数の微生物中、成る種の微生物かＡ　Ｃｈ
　Ｅ阻害物質を培地中に蓄積しうろことを知り、この化
合物を単離し、その物理化学的および生物学的性質から
当該化合物か新規化合物であることを確かめ、これをＴ
ＡＮ−１，１３９と称することにした。また、該微生物
かスＩ・レプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
に属することか判明した。本発明者らは、これらの９、
ｏ見に基づいてさらに研究を市ね、本発明を完成するに
いたった。

すなわぢ本発明は（］）ＴΔＮ−１１３９、および（２
）ストレプトミセス属に属し′「ΔＮ−１１３９を生産
し得る能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
ＴＡＩＩ−１１３９を生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とするＴΔＮ１１３９の製造法を提供するも
のである。

本発明の製造法で使用されるＴＡＮ−１１３９を生産す
る微生物としてはストレプトミセス属に属し、ＴＡＮ−
１１３９を産生ずる能力を有する微生物であればいずれ
のものでもよい。その例としてはインド国の土壌中より
分離されたＡｌ２００５株が挙げられ、本菌株の菌学的
性質は下記のとおりである。なお、各種培地上の性質は
とくに指示しない限り、２８℃て１４日間培養し、常法
に従って観察したものであり、色調はカラー・ハーモニ
ー・マニュアル（Ｃｏ１ｏｒ　　ＩｌａｒｍｏｎｙＭａ
ｎｕａ　ｌ）第４　版［コンテイナー・コーポレーショ
ン・オブ０アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　　Ｃｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ　　ｏｆＡｍｅｒｉｃａ）、１９５８年
発行］によった。

１　形態 気菌糸および胞子の形成は、酵母エキス寒天、クルツー
ス・アスパラギン寒天、グリセロール・アスパラキン寒
天、スターチ寒天、チロシン寒天等の培地で中程度に認
められる。気菌糸の分枝は単純分岐て、単軸分岐は認め
られず、その先端にはループ状またはゆるいスパイラル
状に胞子の連鎖か認めれらる。菌束糸、菌核、胞子のう
等の特殊な構造は認められない。電子顕微鏡による観察
では、胞子の表面は平滑であり、胞子の形は卵形ないし
円筒形であり、それらの大きさは０４〜０、６　Ｘ　０
．７〜１１ミクロンで、通常１０個以上連鎖する。また
、これらの胞子は運動性は示さない。

２　各種分類培地上の性質（２８℃，］／Ｉ日間培養） １）蔗糖硝酸塩寒天培地 生　　　育　中程度 気　菌　糸、貧弱、ベール・イエロー （１ｃａ） 裏面の色、ベール・イエロー（］　Ｃａ）〜ブライト・
イエロー（２ｎａ） 可溶性色素　なし ２）酵母エキス・麦芽エキス寒天培地 中　　　育、良好 気　菌　糸　中程度、パール（３ｂａ）裏面の色　ブラ
イト・マリコールド （３ｐａ）〜アンバー（３ｎｃ） 可溶性色素　なし オート・ミール寒天培地 生　　　育・貧弱 気菌　　糸　貧弱、ライトメロン・イエロ（３ｅａ）〜
ライト・アプリコツ ト（４，ｅａ） 裏面の色　ライト・アイホリ−（２ｃａ）可溶性色素：
なし 澱粉無機塩寒天培地 生　　　育：中程度 気　菌　糸　中程度、パール・ピンク （３ｃａ〜４　ｃａ） 裏面の色、アプリコント（３ｅａ） 可溶性色素　なし クリセロール・アスパラ牛ン寒天培地 生　　　育５中程度 気　閑　糸、中程度、パール・ピンク （３ｃａ） 裏面の色　ブライト・メイズ（３Ｑａ）〜マリコールｌ
’（３ｎａ） 可溶性色素　なし ６）クルコース・アスパラキン寒天培地生　　　育：中
程度 気　菌　糸　中程度、パール・ピンク （３ｃａ） 裏面の色、ブライト・ノイズ（３（！ａ）〜アンバー（
３ＱＣ） 可溶性色素、なし ７）ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地生　　　育　中
程度 気　菌　糸４着生ぜす 裏面の色、ライト・ブラウン（３ｆ！ｇ）可溶性色素、
生成する。ゴールテン・ブラウン（３ｐｉ） ８）チロンン寒天培地 生　　　育　中程度 気　菌　糸　中程度、パール・ピンク （３ｃａ） 裏面の色　１−バーズ（３ｎｅ）〜テープ・フラウン（
３ｐの 可溶性色素　生成するか弱い。アンバー（３ｎｃ） 栄養寒天培地 生　　　育、中程度 気　閑　糸　貧弱、白色 裏面の色ニライト・ノイズ（３ｅａ）〜バンブー（２ｇ
ｃ） 可溶性色素：なし 生理的性質 生育温度・１６℃〜４５℃ 至適温度　３４℃〜３９℃ セラチンの液化：陰性 澱粉の加水分解、陽性 ミルクのペプトン化：陽性 ミルクの凝固　陰性 硝酸塩の還元：陰性 メラニン様色素の生成：陽性 炭素源の利用性 Ｄ−グルコース　　　　　　士 Ｄ−キシロース　　　　　　± Ｌ−アラビノース　　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　　　　」− Ｄ−フラクト−ス　　　　　」− Ｄ−ガラクトース　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　＋ Ｄ−マンニトール　　　　　」− １−イノント−ル　　　　　」− サ　　リ　　ン　　ン　　　　　　　　　　　＋シュー
クロース　　　　　　＋ 無添加 基礎培地ニブリードハムとコツトリーブ寒天培地 ４、全菌体の加水分解中のジアミノピメリン酸および糖
の分析 本菌は、全菌体の加水分解物中に、Ｌ　Ｌジアミノピメ
リン酸を含有し、アラビノースおよびマンニトールを含
まず、タイプＩに属する。

以上の分類的性質を要約すると、ＡＩ−２００５株は■
気菌糸先端かループ状又はゆるいスパイラル状を呈し、
連鎖する胞子を形成する。胞子表面は平滑である。■閑
束糸を形成せず、運動性胞子を生成しない。■発育色調
は淡黄色ないし、褐色を示し、気菌糸はパール・ピンク
（３ｃａ）である。

■メラニン様色素生成が認められる。■菌体よりＬＬ−
ジアミノピメリン酸か検出され、構成糖としてアラビノ
ースやマジュロースは検出されないことにより、本閑は
細胞壁タイプＩで、糖型はＣ型に属する。

以上の性質をもとにアール・イー・ブノファナン・アン
ト・エヌ・イー・ギボシス編、ハーンーズ・マニュアル
・オブ・テタミネーティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　　Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅ　　ＢａｃＬｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版
、１９７４年に従って検索を行った結果、上記Ａｌ−２
００５株はストレプトミセス属に属することか判明した
ので、本菌をストレプトミセスエスピー　（５ｔｒｅｐ
ｔ。

ｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）Ａ　Ｉ　　２００５と命名した。

Ａｌ−２００５株は、昭和６３年１２月２６日財団法人
・発酵研究所（ＩＦ○）に受託番号ＩＦＯ１４８０９と
して、また本菌は平成１年１月３０日、通商産業省、工
業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）にブタペスト
条約に基ついて受託番号　ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２２６２
として、それぞれ寄託されている。

ストレプトマイセス属に属するＴＡＮ−１１３９の生産
菌は、他の放線菌の場合と同様に、たとえば紫外線、エ
ックス線、放射線なとの照射、単胞子分離、種々の変異
処理、その他の手段て変異さぜることが出来、このよう
な変異株あるいは自然に得られる突然変異株であっても
、上記した分類学的性状との比較において実質的に別種
とするに足らず、しかも当該化合物を生産する性質を有
するものは、すべて本発明方法に利用し得る。

当該化合物生産菌の培養に用いられる培地は該閑か利用
し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが
、大量に処理するときには液体培地を用いるのかより適
当である。培地には、当該化合物生産菌か同化し得る炭
素源、窒素源、無機物質、微量栄養源が適宜配合される
。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖、
麦芽糖、デキストリン、澱粉、グリセリン、マンニトー
ル、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、ラード油、チ
キン油なと）、ｎ−パラフィンその他が、窒素源として
は、たとえば肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉
、コーン・ステイープ・リカー　ペプトン、綿実粉、廃
糖蜜、尿素、アンモニウム塩類（Ｌ硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウ
ムなど）その他が用いられる。さらにナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄、
マンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類、
リン酸、ホウ酸なとの塩類や酢酸、プロピオン酸などの
有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（例
、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン、
メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、ジペプチ
ド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ、、Ｂ２
、ニコチン酸、Ｉ３＋ｔ、Ｃなど）、核酸類（例、プリ
ン、ピリミジン、その銹導体など）等を含有させてもよ
い。もちろん、培地のｐＨを調節する目的で無機または
有機の酸またはアルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは
消泡の目的で油脂類、界面活性剤等の適量を添加して差
し支えない。液体培養に際しては、培地のｐＨは中性付
近、特にｐＨ５，５〜７が好ましい。

培養温度は約２４℃〜３０℃１培養時間は約４８時間〜
１２０時間か好ましい。

培養経過に伴って生産されるＴＡＮ−１１３９は、測定
条件下でアセチルコリンエステラーゼを５０％阻害する
に必要なサンプル量として定量し、その逆数をユニット
（ｕｎｉｔ）として表わした。通常、約２〜３日間の培
養でＴＡＮ−１１３９の生産量は最高に達する。

培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−１１３９を採取す
るには、ＴＡＮ−１１３９か中性て脂溶性を示す化合物
であるから、この性質を利用する一般的手段で採取する
ことができる。

培養物中ＴＡＮ−１１３９は主として濾液中に含まれる
ので、培養液をｐＨ３ないし１０、好ましくはｐＨ４な
いし８に調整後、水と混和しない有機溶媒、たとえばジ
クロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトンあ
るいはイソブタノールなどを加え、活性物質を抽出する
方法が用いられる。

また１戸液を吸着性樹脂たとえばアンバーライトＸΔＤ
−ＩＩ（ローム・アント・ハース社製、米国）、タイア
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製、日本）アンバーライ
ｌ−Ｓ　Ｐ　−２０７（三菱化成社製、日本）または活
性炭（武田薬品製、日本）などを用いたクロマトグラフ
ィー法に付す方法か有利に用いられる。なお、吸着性樹
脂を用いたカラムから目的の活性物質を溶出するには、
水または含水溶媒、たとえば含水メタノール、含水アセ
トン、イソブタノール水などが有利に用いられる。かく
して得られた抽出液あるいは溶出液を減圧上濃縮すると
、ＴＡＮ−１１３９を含有する組物質か得られる。

組物質をさらに精製し、純粋なＴＡＮ−１１３９を得る
には種々のクロマトグラフィー法か有利に用いられる。

担体としてはシリカゲル、セルロース、セファデックス
Ｌ　Ｈ−２０（ファルマンア社製、スウェーデン）など
が用いられ、これらは通常カラムクロマトグラフィー法
で行われる。カラムから活性物質を溶出するには適当な
有機溶媒たとえばヘキサン、トルエン、酢酸エチル、ジ
クロロエタン、アセトン、メタノールなどの単独あるい
は混合溶媒か用いられる。溶出液を濃縮し、冷所て放置
するか、濃縮残渣を適当な結晶化溶媒たとえばジエチル
エーテル、酢酸エチル、メタノールあるいはこれらの混
合液で溶解し、冷所て放置すると、ＴＡＮ−１１３９の
結晶か得られる。

かくして、後記の実施例２で得られたＴＡＮ１１３９の
物理化学的性質はつぎのとおりである。

１）外観：無色結晶 ２）融点：１１０°±５℃ ３）比旋光度：［α］２３−７．３°±３０゜（Ｃ１０
、メタノール中） ４）　マス・スペクトル測定法　ｍ／ｚ　２３４ＣＭ”
ＥＩＭＳ法） ５）元素分析値：（％） 実測値：　　Ｃ，１１１，１０；　Ｈ，４，７４；　Ｐ
、１２．９９計算値、　　Ｃ，４１，０４；　Ｈ，４，
７４；　Ｐ、１３．２３０４］、００ ６）分子式：Ｃ３Ｈ１，Ｐｏ６ ７）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 λ、、、２２６±３ｎｍ（Ｅ１％−５３６±５０）１ｃ
ｍ ８）光外部吸収スペクトル・ＫＢｒ中、（第１図）主な
吸収波数を示す（ｃｍ−１） ２９８０　２９３０、１７６０　１６８０．１４８０．
１４３０１３８０、１２９０．１２７０．１２５０．１
２３０．１２１０”ｃ−核磁気共鳴スベクトルニア５Ｍ
Ｈｚ重りロロフォルム中、（第２図）。

下記のシグナルを示す（δｐｐｍ） １６８．７７および１６８．７５（Ｑ）、　１６１．３
２および１６１．２１（Ｑ）、　１１１．９８および１
１１．９４（Ｑ）、　６７．４８および６７．４０（Ｃ
Ｈ２）、　６４．１０（ＣＨ２）、　５５．８０および
５５７２（ＣＨ３）、　３９．５５（ＣＨ）、　　１８
．０３および１７．９７（ＣＨ３）（たたし、Ｑは四級
炭素、ＣＨ，はメチレン、ＣＨ３はメチル、ＣＨはメチ
ンを示す）１０）　　’Ｈ−核磁気共鳴スベクトル：３
００ＭＨｚ重クロりフォルム中、　（δｐｐｍ）。

下記のシグナルを示す。

２．４６（ｓ）、　２．４７（ｓ）、　３．８１（ｔ）
、　３．９３（ｓ）、　３．９７（ｓ）、　３．７９（
ｔｌ　４．４４（ｍ）、　４．１５（ｄｄ）、　４．２
３（ｄｄ）、　４３３（ｄｄ）、　４．３６（ｄｄ）　
（たたし、Ｓ、シングレット。

ｔニトリプレット、ｍ　マルチイブレット、　ｄｄタプ
ルタブレットを示す） １１）薄層クロマトグラフィー（Ｔ　Ｌ　Ｃ）担体ニジ
リカゲル６０　Ｆ　、５．（メルク社製、西独） 展開溶媒：酢酸エチル・ｎ−へキサン （３：１） Ｒｆ＝０．２５ １２）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）担体６
ＯＤＳカラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　Ａ　３１２、山村化
学研究所製１口本） 移動相：２７％アセトニトリル１００２Ｍリン酸バッフ
ァー（ｐＨ６，３） 流速　２ｄ／ｍｉｎ 検出：２５４ｎｍ Ｒｔ＝３．２（分） １３）呈色反応・ 陽性：濃硫酸、過マンカン酸カリウム リンモリブテン酸反応 １４）　　溶解性 易溶、クロロフォルム、酢酸エチル、アセトン 可溶、水 １５）物質の区別　中性物質 次にＴＡＮ−１１３９の生物活性について述べる。

ＴＡＮ−１１３９の酵素阻害活性は、牛脳から抽出した
アセチルコリンエステラーゼとともに、市販（ングマ社
、Ｕ、Ｓ、Ａ、）の馬血清偽コリンエステラーゼ、ブタ
肝臓エステラーゼ、および牛膵臓トリプシンについても
測定した。

牛脳からのアセチルコリンエステラーゼ粗酵素の調製 牛脳は京都中央畜産副生物卸協同組合より購入した。全
編（約４００ｇ湿重量）を表面の血管・被膜を取り除き
、０．３２Ｍ蔗糖を含む緩衝液Ａ［２０’ｍＭ　　Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｆｆ　（ｐＨ，７，６）＋３ｍＭＭｇＣσ、
］で洗浄し、同緩衝液中（脳１ｇに対し緩衝液、Ｍ）で
、ハサミで細切し、ボリトロンポモゲナイサ−（Ｋｉｎ
ｅｍａｔｉｃａ　　Ｇｍｂ　Ｉｌ、　５ＷＩＴ、　）を
用いてホモゲナイズ（２０秒、１０回、氷水中で冷却）
した。ガーゼろ過液、蔗糖濃度を０．２５Ｍになるよう
に調整し、７．ＯＯＯＸｇで１０分間遠心、０２５Ｍ蔗
糖を含む緩衝液Ａて洗浄した。沈渣に２％トリトンＸ−
１００を含む緩衝液へを加え、テフロンホモケナイザー
を用いて懸濁、酵素を可溶化し、その遠心」１清（１０
，ＯＯＯＸｇ、２０分）をアセチルコリンエステラーゼ
粗酵素液として用いた。この標品（０、０４〜０　、０
８　ｕｎｉｔ／ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ１５〜２０　ｍｇ
　ｐｒｏｔｅｉｎ／　ｄ）の偽コリンエステラーゼ活性
はアセチルコリンエステラーゼ活性の１／１００以下で
あった。

酵素活性測定法、ジー・エル・エルマン（Ｇ、　ＬＥｌ
　１ｍａｎ）等のＤ　Ｔ　Ｎ　Ｂ　（Ｄｉｔｈｉｏｂｉ
ｓｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏａｔｅ）法を改変して用いた［
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　＋　　７　
＋８８　　　　（１９６１）コ。

反応液ｌｄ中に、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
，７，０）、３．３ｍＭ　　ＤＴＮＢ、サンプルを含み
、アセチルコリンエステラーゼには基質として０．５ｍ
Ｍアセチルチオコリンを、偽コリンエステラーゼには基
質として０．５ｍＭブチルチオコリンを加え、３０’Ｃ
て３０分反応後、０．２Ｎ■］Ｃ（！１顧を加え反応を
停止し、５〜１０分後、０．５Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ，７，０）ｌｄを加えて発色し、４１２ｎｍの吸
光度を測定した。

エステラーゼは０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ，
７，０）］〆中て１ｍＭ酢酸４＝ニトロフコ−ニルの、
トリプ／ンは５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ，８
，０）中て］ｍＭベンゾイル−■７−アルギニンエチル
エステルの加水分解を測定することにより測定した。

アセチルコリンエステラーゼ　　　　　０．００５偽コ
リンエステラーゼ　　　　　　　　０．０６３エステラ
ーセ　　　　　　　１．２ ′酵素活性を測定条件下で５０％阻害するために必要な
濃度 ＴＡＮ−１１３９による酵素阻害活性は表１に示したよ
うに、アセチルコリンエステラーゼに対して最も強い阻
害活性を示した。偽コリンエステラーゼやエステラーゼ
に対しても阻害活性を示したか、トリプシンはほとんと
阻害されなかった。

スコポラミン誘発健忘に対する作用 明暗箱を用いた受動的回避学習課題において、抗コリン
剤であるスコポラミンはマウスに回避反応の著しい障害
（健忘）を誘発する。このスコポラミン誘発健忘に対す
るＴＡＮ−１１３９の作用を調へた。

テスト 回避時間 生理食塩水　　　　　　１８　　　　　１００受動的回
避学習課題を用いて、マウスの学習行動に及はす影響を
検討した。明暗２室からなる装置の明室に入れたマウス
は暗い方を好む習性に従って、速やかに暗室へ移動する
。マウスか暗室へ移動したところで床から電気ショック
（０，４ｍＡ。

３秒間）を与えた（獲得試行）。翌日、再びマウスを暗
室へ入れると（保持テスト）、前日の電気ンロックを受
けたことを覚えていて、なかなか暗室に入ろうとしない
。ところが獲得試行の１５分前にスコポラミン（ｌ　ｍ
ｇ／　ｋｇ）を皮下投与されたマウスは、電気ショック
を受けたことを覚えることが出来ずに、保持テストにお
いて再ひ速やかに暗室へ移動する。つまり、保持テスト
において、マウスが明室にとどまった時間（回避時間）
か学習の指標となる。ＴＡＮ−］、１．３９（０，３ｍ
ｇ／ｋｇ）は、獲得試行の３０分前に、つまりスコポラ
ミン投与の１５分前、および保持テストの３０分前の２
同腹腔内投与することにより、スコポラミン処置マウス
の回避時間を２倍近く延長した。これはＴＡＮ１１３９
かマウスのスコポラミン誘発健忘に対して改善作用を有
する可能性を示唆するものであり、中枢コリン神経系の
機能低下を主機とするアルツハイマー型痴呆症への応用
も期待される。

ＴＡＮ−１１３９の苛性・　ＴＡＮ１１３９は経口投与
では］　００　ｍｇ／　ｋｇで全く毒性を示さなかった
。腹腔内投与ではＬＤ５ｏは２．２ｍｇ／ｋｇであった
。

ＴＡＮ−１１３９の殺虫活性　　ＴΔＮ１１３９は］Ｏ
Ｏｐ、ｐ、ｍの濃度で、ハスモンヨトウに対し殺虫性を
示した。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
が、これによって本発明が限定されるものではない。な
お、培地におけるパーセント（％）は、特に断りのない
限り、重量／容量パーセントを表示する。

実施例１ ０．４％グルコース、０４％酵母エキス、１％麦芽エキ
ス、２％寒天を含むＩ　Ｓ　Ｐ−２（デイフコ社、Ｕ、
Ｓ、Ａ、）斜面培地に培養したストレプトミセス　エス
ピー・Ａｌ−２００５株（Ｉ　ＦＯ１４，８０９，ＦＥ
ＲＭ　　ＢＰ−２２６２）を２００ｄ容三角フラスコ内
の２％グルコース、３％可溶性澱粉、１％生大豆粉、１
％コーン・ステイープ・リカー（Ｃ３Ｌ）、０５％ペプ
トン、０．３％ＮａＣρ、０．５％ＣａＣＯ３を含む４
０ｄの種培地（ｐＨ，７，０）に接種し、２８℃１４８
時間回転振盪機上で培養し、前培養を得た。得られた前
培養液の１０ｇを２０００ｄ容坂ロフラスコ内の５００
戚の種培地に移植し、２８℃１４８時間往復振盪機上で
培養し、種培養液を得た。この種培養液５００〆を種培
地（」二記種培地と同一組成）３０Ｑを含む５０ρ容ス
テンレス・スチール・タンクに移植し、通気・３０Ｑ／
分、撹拌・２８０回転／分、内圧・ｌ　ｋｇ／　Ｃｍ２
の条件で培養した。得られた培養液の１０ρを２０００
Ｑ容ステンレス・スチール・タンク内の０５％グルコー
ス、５％デキストリン、３．５％脱脂犬豆粉、０７％Ｃ
ａＣＯ３を含む１２００ｇの主培地（ｐｉ−Ｌ　　７．
０）に移植し、２６℃１通気・１２００ρ／分、撹拌・
９０回転／分、内圧・１ｋｇ／ｃｍ２の条件で、９６時
間培養した（１万ユニッｌ−／ｄ）。

実施例２ 培養液（１１７０のから濾過により菌体を除去し、謂液
をｐＨ３に調節した後、酢酸エチル（５００ので抽出し
た。得られた有機層を水（７５ので洗浄後濃縮して粗油
状物（３２０ｇ）を得た。

これをメタノール（１０（Ｍ）に溶解し、活性炭カラム
（１，０Ｑ）に吸着させ、水（３ρ）、５０％メタノー
ル水（４の及びメタノール（３ので順次溶出し、ＩＩ２
つつに分画した。各両分を高速液体クロマトグラフィー
にて分析し、目的物のピークを成分として含む画分を集
めて、減圧下０．５夕にまで濃縮した。濃縮液をタイア
イオンＨＰ−２０（５０〜１００メソシユ、　　２．Ｃ
Ｈりのカラムを通過させ、水（６σ）、２０％メタノー
ル水（８の、５０％メタノール水（６，ＥＭ２）及び７
０％メタノール水（６ρ）で順次溶出し、２ρづつに分
画した。各両分を前記と同様に分析し、目的物を主ピー
クとして含む両分を集めて濃縮し、油状物（４９，８ｇ
）を得た。

これをクロロホルムに溶解し、シリカゲル（メルク社Ａ
ｒｔ、７７３４，０．５０のカラムに吸着させ、ｎ−ヘ
キサン−酢酸エチル混合溶媒、８：２（２の、６：４（
３ρ）及び４６（３ので順次溶出し、０．５Ｑづつに分
画した。各両分を前述のように分析し、目的物の単一ピ
ークを示す両分を集めて減圧下濃縮した。酢酸エチル−
７エチルエーテルより結晶化し、ＴＡＮ−１１３９の無
色結晶（１９１ｇ）を得た。

発明の効果 化合物ＴＡＮ−１１３９は、アセチルコリンエステラー
ゼの阻害作用を有し、中枢コリン神経系の機能低下を１
徴とするアルツノ１イマー型痴呆症などの治療用医薬と
して利用可能である。

【図面の簡単な説明】

実施例２で得られたＴＡＮ−１１，３９について、第１
図はその光外部吸収スペクＩ〜ルを、第２図はその１３
Ｃ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［ I ］下記の物理化学的性質を有する化合物ＴＡＮ−
   １１３９ （１）融点：１１０±５℃ （２）分子式：Ｃ＿８Ｈ＿１＿１ＰＯ＿６ （３）紫外部吸収スペクトル：メタノール中λ＿ｍ＿ａ
   ＿ｘ２２６±３ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ＝５３６
   ±５０）（４）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ中 主な吸収波数を示す（ｃｍ＾−＾１） ３４７０、２９８０、２９３０、１７６０、１６８０、
   １４８０、１４３０、１４００、１３８０、１２９０、
   １２７０、１２５０、１２３０、１２１０、１１２０、
   １０８０、１０５０、１０００、９５０、８５０、８４
   ０、７７０、７１０、６８０、６３０、６００、５６０
   、５００、（５）＾１＾３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
   ７５ＭＨｚ重クロロホルム中 下記のシグナルを示す（δ＿ｐ＿ｐ＿ｍ） １６８．７７および１６８．７５（Ｑ）、１６１．３２
   および１６１．２１（Ｑ）、１１１．９８および１１１
   ．９４（Ｑ）、６７．４８および６７．４０（ＣＨ＿２
   ）、６４．１０（ＣＨ＿２）、５５．８０および５５．
   ７２（ＣＨ＿３）、３９．５５（ＣＨ）、１８．０３お
   よび１７．９７（ＣＨ＿３） ［II］ストレプトミセス属に属し化合物ＴＡＮ−１１３
   ９生産し得る能力を有する微生物を培地に培養し、培養
   物中にＴＡＮ−１１３９を生成、蓄積せしめ、これを採
   取することを特徴とする化合物ＴＡＮ−１１３９の製造
   法。