JPH02204492A - 新規抗生物質ｎｋ１３０１１９、その製法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規抗生物質ＮＭ１３０１１９、その製法及び
その用途に関する。

本発明の化合物は抗真菌、抗腫瘍、血管新生抑制および
殺虫作用を有し、カビに対する又は悪性腫瘍に対する化
学療法剤として、あるいは血管の異常増殖によって発症
する疾患、例えばリュウマチ性関節炎、糖尿病性網膜症
、未熟児網膜症、老人性黄斑部変性、創傷治癒時の過剰
廠痕形成の予防または治療薬として又、殺虫剤、農園芸
用抗真菌剤として期待される。

〔従来の技術〕

従来、抗真菌性の抗生物質としてはアンホテリシンＢ、
ティスタチンＡ１等が、又抗腫瘍剤としては、シスプラ
チン、プレオマイシン、アトＩＪ　７マイシン等々が知
られている。また血管新生抑制作用を有する物質として
、例えばインドメタシン、メトロキシプロゲステロン、
コーチシンとヘパリンの併用、牛軟骨、大動脈壁の粗抽
出液等が知られている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、従来の抗生物質や、抗腫瘍剤は耐性真菌や耐性
細胞の出現のため、常に新しいものが要望されており、
又血管新生抑制剤に至っては、医薬品として実用化され
ているものは無い。

だのため、抗真菌作用、抗腫瘍作用及び血管新生抑制作
用を有する新規物質の創生が期待されている。

〔課題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは、微生物の代謝産物（Ｃついて種
々検索した結果、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｅｅｓ）属に属する一菌株が抗真菌、抗腫瘍、血管新
生抑制、及び殺虫作用を有する式（１）で示される新規
物質ＮＫ１３０１１９を産出することを見い出した。

本発明は上記知見に基づいて完成されたものである。

上記新規抗生物質ＮＫ１３０１１９は、ストレプトミセ
ス属に属するＮＫ１３０１１９生産菌を培養し、ＮＫ１
３０１１９物質を生成蓄積せしめこの培養物よりＮＫ１
３０１１９物質を採取することによの土壌より分離した
ストレプトミセス・ボトロベンシスＮＫ８６−０２７９
　（微工研条寄第１７８５号：以下ｒＮＫ８６−０２７
９株」と略称する）があげられる。

以下ＮＫ８６−０２７９株の菌学的性状を示す。

ＮＫ８６−０２７９株の菌学的性状 １、形態 ＮＫ８６−０２７９株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸よ
りらせん状の気菌糸を形成し、輪生枝はみとめらハない
。成熟した胞子鎖は２０個以上の胞子の連鎖をみとめ、
胞子の大きさは０．６へ−０，８Ｘ１．２〜１．４ミク
ロン位で胞子の表面は平滑である。また胞子の５はみと
められない。

２、各種培地における生育状態 色の記載については側）日本色彩研究所の色の標準を用
いた。

（１）　　シェフロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養
） ５す黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し溶解性色素は
Ｊっずかに黄色味をおびる程度である。

（２）　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃
培養） ５す黄〜うす黄茶の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を
着生し、溶解性色素はみとめられない。

（３）　　スターチ・無機塩寒天培地（Ｉ　ＳＰ−培地
４．２７℃培養） うす黄茶の発育上に明るい茶入〜茶入の気菌糸を着生し
、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。

（４）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７．２７℃培養
） 暗い茶入の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し
、溶解性色素は黒褐色である。

（５）栄養寒天培地（２７℃培養） うす黄茶の発育上に気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶
色味をおびる程度である。

（６）　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．
２７℃培養） ５す黄茶の発育上忙灰白〜茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はみとめられない。

（７）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃
培養） 無色の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。

（８）　　スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄〜う
す黄茶の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はわずうす黄〜う°す黄茶の発育上にうつすら
と白色の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられない
。

（１０）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
培地５．２７℃培養） うす黄の発育上に茶白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、
溶解性色素はみとめられない０ （１１）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） うす黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶解性色素
はわずかに茶色味をおびる程度である。

（１２）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）及びグ・ルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地（２４℃培養）双方でうす黄〜う
す黄茶の発育上に、気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶
色味をおびる。

（１３）脱脂牛乳（３２℃培養） うす黄〜うす黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶
解性色素は茶色味をおびる。

３、生理学的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１．０％
、イースト・エキス（大工）０、２％、粉末寒天（栄研
）２．０％、ｐｉ（７，０）を用い５．１０．２４．２
７．３２．３７．４５℃の各温度で試験の結果５と４５
℃を除いて、そのいずれの温度でも発育したが、最適温
度は２４〜３２℃付近と思われる。

（２）　　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、
２０℃培養、グル・コース・ペプトン・ゼラチン培地、
２７℃培養） 双方共１７日日目ろから液化が始まり、その作用は弱い
方である。

（３）　　スターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培
地及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） いずれの培地においても培養後１０日目頃から氷解性が
みとめられ、その作用は中等度である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳３２℃培
養） 培養２１日０でも凝固、ペプトン化はみとめられない。

（５）　　メラニン様色素の生成（トリプトン・イース
ト・プロスｌ５Ｐ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒
天培地、ｌ５Ｐ−培地６：チロシン寒天培地、ｌ５Ｐ−
培地７、いずれも２７℃培養）いずれの培地でもメラニ
ン様色素の生成をみとめる。

（６）炭素源の利用（プリドハム・ゴトリープ寒天培地
、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養、）グルコース、Ｌ−ア
ラビノース、Ｄ−キシロース、シ為クロース、イノシト
ール、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、ラムノー
ス、ラフィノース、ガラクトースを利用する。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、２
７℃培養） 溶解性をみとめる。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養） 陰性である。

以上の性状を要約するとＮＫ８６−０２７９株はストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）属に属し、
細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメリン酸はＬＬ−
型である。又胞子の５をみとめず、気菌糸はらせん状を
有し、輪生枝はみとめられない。

胞子の表面は平滑である。種々の培地でうす黄〜・うす
黄茶の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はわずかに茶色味なおびる。メラニン様色素は
陽性、蛋白分解力は弱い方で、スターチの氷解性は中等
度である。。

これらの性状よりＮＫ８６−０２７９株に近縁の既知菌
種を検索するとインターナショナル・ジャーナル・オブ
・システマテイク・バクテリオロジー（Ｊｎｔｅｒｒ＋
ａｔｉｏｎａｌ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　５ｙｓｔｅｒ
ｎａｔｉｅ　Ｂａｅｔｅ−ｒｉｏｌｏｇｙ　）　１９巻
、４１０頁、１９６９年に記載されているストレプトミ
セス・ぎトロベンシス（５ｔｒｅｐｔｏｒｎｙｅｅｓ　
ｂｏｔｉｒｏｐｅｎｓｉｓ　）があげられる。この菌株
と文献上比較すると、種々の培地上での気菌糸の色、糖
の利用性、メラニン様色素の生成など完全に一致してい
る。以上のことにより本１１ＮＫ８６−０２７９株はス
トレプトミセス・ボトロベンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｅｅｓ　ｈｏｔｔｒｏｐｅｎｓｉｓ）に属することが明
らかになり、ストレプトミセス・ボトロベンシスＮＫ８
６−０２７９　ト命名Ｌ　ｔ、ニー。

この発明で使用するストレプトミセス・ボトロベンシス
ＮＫ８６−０２７９は例えば、紫外線、ＧｏＣｏ１４の
照射処理、ナイトロジエンマスク・−ド、亜ａ酸、Ｎ−
メチルーＮ−ニトロ−・Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）、２−アミノプリン等の変異誘起剤による変異処理
、形質導入、形質転換、細胞融合等の通常用いられる変
異処理手段によってＮＫ１３０１１９の生産能力を高め
ることができる。

本発明のＮＫ１３０１１９を製造するにはスト・レプト
ミセス属に属し、抗生物質ＮＫ１３０１１．９を産生ず
る能力を有する微生物を培地中で培養し、培養物中に抗
生物質ＮＫ１３０１１９を生成蓄積せしめ、次いでこれ
を採取すればＪ：い。

培養方法は原則的には放線菌の培養方法に準するが、通
常は液体培養による深部培養法が有利である。培養に用
いられる培地としては、菌株ＮＫ８６−０２７９が利用
する栄養源を含有する培地であればよい。

栄養源と１〜ては、従来から放線菌の培養に利用されて
いる公知のものが使用でき１例えば、炭素源としてはグ
ルコース、ガラクト−ス、マンニトール、デキストリン
、澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単独また
は組み合せて用いることができる。無機および有機窒素
源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素
、硝酸アンモニウム、硝酸ソー・ダー　ペプトン、肉エ
キス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチー７・リカ
ー、大豆油カス、オートミル、カザミノ酸、バクトソイ
トン、ソリプル・ベジタブル・プロティンなど単独また
は組合せて用いることができる。その他必要に応じて食
塩、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガ
ン、炭酸カルシウム、燐酸基なとの焦機塩を加える。′
ｌｌ′とができるほか本田の生育やＮＫ１３０１１Ｑの
生産を促進する有機物、例えば核酸類、アミノ酸、ビタ
ミン類や無機物を適当に添加するととができる。培養中
発泡が著しい時には１例えば大豆油、亜麻仁油等の植物
油やプロナール１（東邦化学社製）、―／リコンＫＭ−
７０（信越化学工業社製）等の石油系消泡剤を適宜添加
すればよい。培養温度は２５〜３０℃、ｐＨは中性ない
Ｉ７微酸性で培養を行うことが望まＩ−い。液体培養で
は通常３−６８間培養を行うとＮＫ１３０１１９が菌体
中に生成蓄積される。菌体中の生成量かや大に達したと
き培養を停止し菌体を戸別１−１得られた菌体より目的
物を精製、単離する。

菌体より本物質の精製、単ｆｉｌｃは一般に微生物代謝
生産物をその菌体から単離するため１ｆｖ、用いられる
分離、精製の方法が利用される。Ｎ　Ｋ１３　Ｑ　］、
　１９はメタノール　アセトン、酢酸ユチル、″ｒ−タ
ノールをはじめとする有機溶媒には溶けるが、水に溶は
洗くい物質で、その精製には脂溶性物質の精製（（゛用
いられる方法により行なわれる。

すなわち、各種有機溶媒ｉｃよる抽出、シリカゲルクロ
マトグラフィー分取用高速液体クロマトグラフィーなと
適宜組み合わせて用いることができる。

例えば、培養液を濾過し２、菌体を集め、アセトンで２
回抽出し、アセトン溶液を減圧濃縮乾固した。

得られた褐色の粗粉末をクロロホルムに溶解しシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーより精製する。展開溶媒は
、クロロホルム−メタノールを用い段階的に（４０：　
１→２：１）溶出した。

活性画分を集め、濃縮、乾固することにより淡褐色粉末
を得る。この粉末をクロロホルムに溶解し再び、シリカ
ゲルクロマトグラフィーにより精製する。展開溶媒はク
ロロホルム−メタノールを用い段階的に（１００：１→
２０：１）に変え、溶出した。

活性画分を集め、ｎ−ヘキサンを用いて沈澱させ、淡黄
色粉末を得た。

この粉末を８０％含水メタノールに溶解し、逆相カラム
を用いた分取用高速液体クロマトグラフィーにより精製
し無色粉末を得た。

尚、培養及び粗分画中のＮＫ１３０１１９の力価は、Ｈ
ｅＬａ５ｚ細胞を用い増殖抑制を色素法にて測定した。

以上のようにして得られたＮＫ１３０１１９の理化学的
性状を次に示す。

（１）外　　観；無色粉末 （２）分子量；　ＦＤ−ＭＳ　ｍ／ｚ　：　８０５　（
Ｍ＋　１　）”（３）元素分析；炭素６８．３４％、水
素９．６７％酸素２１．９９％ Ｃ４６Ｈａｌｌ　０ｎ １６１〜１６５℃ 〔α躍＝−３９，５（Ｃ，１，００，メタノール）メタ
ノール、アセトン、酢酸エ チル、ジメチルスルホキシドに 可溶、水、ヘキサンに難溶 （８）　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲ
ｆ値 ヘキサン；アセトン（３：　２　ｖ／ｖ％）、およびク
ロロホルム：メタノール（３：１ｖ／ｖ％）の展開溶媒
系でそれぞれ０．４１および０．５９を示す。

（９）紫外線吸収スペクトル 図１に示した通り。ＵＶλｌｊ’／’−１’　（Ｋ１庶
）；ｎａＸ ２１９、Ｏｎｍ（Ｓｈ）、２２５ｎｍ（３５７，８）、
２３２．５ｎｍ分子式； ％式％ （１０）赤外線吸収スペクトル 臭化カリウム錠にて測定した赤外吸収スペクトルを第２
図に示す。その吸収極大値（波数ｃｍ　　）を以下に示
す。

３４８０．３４２０．２９６０．２９３０，２８７０゜
２３２５．２１５０．１８４０．１７００．１６５０゜
１６４０．１４５０．１４３０，１３８５．１３７０゜
１３６０．１３４５，１３２０，１３０５，１２９０゜
１２３０．１１９５，１１７５，１１５５，１１３５゜
１１０５．１１００，１０６５，１０５０，１０３５゜
１０１０．９９０，９７５，９３０，９１０，８８０゜
８６５．８４０，８３０，８００，７８５，７７０゜７
５０．７３５，７２５，７１０，６７５゜（１１）水素
核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
を第３図に示す。

（］２）炭素核磁気共鳴スベ／１．−　トル重クロロホ
ルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル（第４図）
の化学シフト（δ−値）は、 ２２０．３５，２１９．９７，１６４．９８，１４８．
５５゜Ｉ３７．７６．１３２．４３，１３０．３１，１
２９．４１゜１２２．８２，１００．１３，８３．０２
，７６．３３゜７３．０１．７２．６４．７２．２６．
６９．０８．６７．２８゜６４．７０．４６．６７、４
６．１７．４５．７１．４４．Ｉ５゜４２．６６、４１
．９５．４０．２５．３８．４６．３６．０６゜３３．
５４．３１．５５．３１．０２．３０．５２．２８．５
８゜２６．５３．２６．３６．２４．８１．２１．６１
．２１゜０２゜１７．９２．１４．５１．１４．３７．
１４．１１．１２．０９゜１１．４６．９．３５．８．
３１．６．１０゜である。

（１３）呈色反応；リンモリブデン酸反応、硫酸、過マ
ンガン酸反応に陽性。パウリ−反応、ライドンスミス反
応に陰性を示す。

本発明化合物は後記の如（、抗真菌、抗腫瘍、血管新生
抑制剤などの医薬品として又、殺虫剤として期待される
。

本発明化合物を医薬品として使用する場合には、単独ま
たは賦形剤と混合して注射剤、経口剤、坐剤等と１．て
投与する。賦形剤は薬剤学的に許容されるものであれば
いずれでもよ（、その種類および組成は投与経路や投与
方法によって決まる。例えば、液状賦形剤としては水、
アルコールもしくは大豆油、ビーナツツ油、ゴマ油、ミ
ネラル油等の動植物油または合成油を用いることができ
る。固体賦形剤とＩ−てはマルトース、シークロースな
どの糖類、各種アミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロ
ースなどのセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウ
ムなどの有機酸塩類などを使用することができる。

注射剤の場合には、賦形剤としては、生理食塩水、各種
緩衝液、グルコース１．イノシトール、マンニトール等
の糖類溶液、エチレングリフール、ポリエチレングリコ
ール等のグリコ・−ル類溶液が望ましい。また、イノシ
トール、マンニトール、クルコース、マンノース、マル
トース、シークロース等の糖類やフェニルアラニン等の
アミノ酸類の賦形剤と共Ｗ凍結乾燥剤となし、投与時に
注射用の適当な溶剤、例えば、滅菌水、ブドウ糖溶液、
電解質溶液、アミノ酸溶液等に溶解して静脈および筋肉
内釦投与することもできる。

経８口剤の場合陀は、前記液状賦形剤もしくは固体賦形
剤ととも釦錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ド
ライシロップ剤等の形態にするのがよい。また、ベレッ
ト剤として経皮、粘膜剤などの局所投与剤としてもよい
。

製剤中における本化合物の含量は、通常０．００１〜１
重量％であり、好ましくは０．０１〜０．１重量％であ
る。例えば、注射剤の場合如は、通常０．０１へ・−０
７０５重量％がよい。経口剤の場合には０．００５〜１
重量％、好ましくは０．０５−０．５重量％とじ、残部
を賦形剤とする。

投与量は、患者の年令、体重、症状、治療［］的等釦よ
り決定されるが、一般的には、非経口投与テ０．１〜５
　ｊｉｇ／ｋｇ／日、経口投与でＱ、　５〜３０　ｔｔ
ｇ／ｋｇ／日である。また、マウスに対するＮＫ　１３
０１１９の牛致死量（ＬＤｓ、）　　は、１．０５■／
ｋｇ（ｉｐ）であった。

本発明化合物を殺虫剤又は農園芸用抗真菌剤として使用
する場合、使用目的に応じてそのまま単体で使用できる
が効果を助長あるいは安定にするために農薬補助剤を配
合して製剤とし、これを直接使用するか必要に応じ希釈
するなどして適用するのが一般的である。本発明化合物
の製剤化にあたっては何ら特別の条件を必要とせず、農
薬製造分野において一般的ＩＣ行われている方法たより
、粉剤、粒剤、微粒剤、水和剤、フロアブル剤、乳剤、
マイクロカプセル剤、油剤、エアゾール、加熱燻蒸剤（
蚊取線香、電気蚊取など）、フォラキングなどの灼霧剤
、非加熱燻蒸剤、毒餌などの任意の製剤形態にして使用
できる。

ここに言う農薬補助剤としては担体（希釈剤）およびそ
の他の補助剤、たとえば展着剤、乳化剤、湿展剤、分散
剤、固着剤、崩壊剤などを挙げることができる。

又、その使用量は剤形、施用する方法、時期その他の条
件によって変るが、農園芸用剤、森林防害虫用剤及び牧
野害虫用剤は通常１０アール当り有効成分量で１０〜３
００ｇ、好ましくは１５〜２００ｇが使用され、衛生防
害虫用剤は通常１　ｍ”当り有効成分量で２〜２００■
、好ましくは５〜１００■が使用される。たとえば粉剤
は１０アールあたり有効成分で１５〜１２０ｇ、粒剤は
有効成分で３０〜２４０ｇ、また乳剤、水和剤は有効成
分で４０〜２５０ｇの範囲である。しかしながら特別の
場合には、これらの範囲を越えることが、または下まわ
ることが可能であり、また時には必要でさえある。

又、殺虫剤中の有効成分含量は製剤形態、施す 用する方法その他の条件により異な％場合によっては有
効成分化合物のみでもよいが通常は０、２〜・９５％（
重量）好ま１．＜は０．５〜８０％（重量）の範囲であ
る。

（作　用） 次に本化合物の作用を説明する。

試験例１゜ 本化合物の抗カビスペクトルを検討した１、ＮＫ１３０
１１９のツアペック寒天培地による抗カビスペクトルを
第１表対水す。

ＮＫ１３０１１９は表ＩＫ示すようにペニシリウム・ク
リソゲナム、アルテナリア・キクチアナ、フザリウム・
ロゼラム・エフ・エスピーなどの真菌類に対し、強い発
言阻止作用を示した。

肴ポテト・シ目糖寒天培地忙よる 試験例２６ 本化合物のｌ（ｅ　Ｌａ　Ｓｓｓ養細胞に対する増殖抑
制作用を検討した。Ｈｅ　Ｌａ　８ｇ細胞を１．５Ｘ１
０”個／穴の割合で９６穴テストプレートに接種し１日
後本化合物を種々な濃度で培養液に添加した。添加３日
後細胞数を色素法により測定し、本化合物の種々の濃度
におけるＨｅ　Ｌａ　８ｇ細胞の増殖抑制率を求めた。

結果を表２に示した。本化合物のＩＣ５ｏ値は０、９８
７　ｍｃｇ　／ｍｌであり、Ｈｅ　Ｌａ　Ｓｓ細細胞対
対強い増殖抑制作用を認めた。

表２ 胞およびヒト大腸ガン細胞の増殖抑制率を求めた。

結果を表３に示した。本化合物のＩＣｓ。値は、マウス
大腸ガン細胞に対して、０．０２５　ｍｃｇ／　ｍｌ以
下、ヒト大腸ガン細胞に対して２．　ｇＯｍｃｇ／ｍｌ
であり、両細胞に対し強い増殖抑制作用を認めた。

試験例３゜ 本化合物のマウス大腸ガン細胞（Ｃｏ１ｏｎ　２６　）
およびヒト大腸ガン細胞（ＳＷＩ　１１６　）に対する
増殖抑制作用を検討した。マウス大腸ガン細胞を１．５
　Ｘ　１０３個／穴の割合で、またヒト大腸ガン細胞を
３．０ＸＩＯ個／穴で９６穴テストプレートに接種し３
７°Ｃ５％ＣＯ□インキュベーター内で２４時間培養し
た後、本物質を種々な濃度で添加した。添加後、それぞ
れ６５時間後、９６時間後の細胞数を色素法により測定
し、本化合物の種々の濃度におけるマウス大腸ガン細試
験例４゜ 本化合物のマウス肺ガン細胞（Ｎｕ　Ｌ　）およびヒト
肺ガン細胞（ＰＣ−３）に対する増殖抑制作用を検討し
、た。

マウス肺ガン細胞を８．０Ｘ１０”個／穴、ヒト肺ガン
細胞２．５Ｘ１０’個／穴の割合で９６穴テストプレー
トに接種し、３７℃５％Ｃｏ２インキ。

ベーター内で２４時間培養し、た後１本化合物を種々な
濃度で培養液に添加した。添加３日後、細胞数を色素法
にて測定し、本化合物の種々の濃度におけるマウス肺ガ
ン細胞（ＬＸ、）、ヒト肺ガン細胞（Ｉ’Ｃ−３）の増
殖抑制率を求めた。

結果を表４に示した。本化合物のＩＣ５ｏ値は、マウス
肺ガン細胞（ＬＬ）に対し、ｏ、ｏ　ｏ　８ｓｍｃｇ／
ｍｌ、ヒト肺ガン細胞（ＰＣ−３）に対し、２．００ｎ
ａｇ／ｍｌであり、両細胞に対し、強い増殖抑制作用を
認めた。

表４ 試験例５゜ 本化合物のマウス、メラノーマ細胞（Ｂ１６）およびヒ
トメラノ〜マ細胞（Ｇ３６１）に対する増殖抑制作用を
検討した。マウスメラノーマ細胞ヲ１．５Ｘ１０　個／
穴、ヒトメラノーマ細胞を１．０Ｘ１０３個／穴の割合
で９６穴テストプレートに接種し、３７℃、５％ＣＯ２
インキュベーターで培養１−だ後、本化合物を種々な濃
度で培養液に添加した。添加７２時間後、細胞数を色素
法により測定し、本化合物の種々の濃度におけるマウス
メラノーマ細胞、ヒトメラノーマ細胞の増殖抑制率を求
めた。

結果を表５に示した。本化合物のＩＣ５ｏ値は、＝ｒ　
ウ、１．７ｉ　ラ／　−−ｒ細胞に対して０．６　ｒ＠
　ｒｎｃｇ／ｍｌ。

ヒトメラノーマ細胞に対し７て１．６３　ｍｃｇ／ｊｎ
ｌと両細胞に対し増殖抑制作用を示［また。

表５ 試験例６゜ 本化合物の内皮細胞に対する増殖抑制作用を検討した３
、牛副腎の毛細血管内皮細胞を１×１０４個／′大の割
合で６穴テストプレートに接種Ｉ２．１日後本物質を種
々な濃度で培養液に添加した。添加３日後細胞数をコー
ルタ・−カウンターにより測定し、本化合物の種々の濃
度における血管内皮細胞の増殖抑制率を才めた。結果を
表６に示した。本化合物のＩＣ５ｏ値は０．０００３ｍ
Ｃｇ／／ｌ１ｌｌであり、内皮細胞に対１−２強い増殖
抑制作用を認めた。

表６ 試験例７゜ 本化合物の血管新生に対する抑制作用をＭ、Ａ。

Ｇｉｍｂｒｏｎｅらの家兎角膜内評価法（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　Ｎａｔｉ−ｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ５２．４１３．１９７４　）を用いて検討した。即ち
、家兎の角膜中央部をメスを用いて約２ＩＯＩ切開し、
角膜内圧ポケットを作製した。ここに、あらかじめＲ，
Ｌａｎｇｅｒらの方法（Ｎａｔｕｒｅ２６３，７９７．
１９７９）Ｋより作製しておいたエーリッヒ癌粗抽出物
１００　ｍｃｇを含む徐放性ベレットを設置した。更に
、本化合物０，３〜８１　ｍｃｇを含有する徐放性ペレ
ットを上記ベレットに接して設置し、設置後４．６．８
および１００日目血管新生の程度を観察した。その結果
、エーリッヒ癌粗抽出物による血管の新生は本化合物の
ｌ　ｍｃｇ以上のベレット設置群で４日目まで、２．７
　ｍｃｇ以上のベレット設置群では８日目まで非投与群
に比べ有意に遅延した。

試験例８゜ 本発明化合物の殺虫作用を次の方法により試験した。

（１）ナミハダニ成虫（ケルセン耐性種）を供試虫とし
て通常の方法（細辻豊二編：農薬生物検定法、３２７頁
）により死滅率を検定した。

すなわち、本化合物のアセトン溶液（０，１％）をシ璽
糖水溶液（１％）Ｑ、５ｍ／に所定の濃度になるように
加えた。容器（２０ｎｔ！ビーカー）にナミハダニ成虫
１０頭を成虫しパラフィルムでフタをした。このバラフ
ィルム上に上記薬液をのせてさらにパラフィルムを覆い
恒温室（２０１１°Ｃ）に所定時間放置後、供試虫の生
、死を調査した。

（２）　　チカイエ力幼虫（感受性種）を供試虫として
通常の方法（ソフトサイエンス社：農薬実験法１　殺虫
剤編、１０９頁）により死滅率を検定した。

すなわち、容器（１５ｄシヤーレ）に井水１０ｍを入れ
チカイエカ３令幼虫を５頭放虫した。これに本化合物の
アセトン溶液（０，１％）を所定の濃度になるように加
え恒温室（２６士１℃）Ｋ所定時間放置後、供試虫の生
、死な調査した。

結果を表８に示す。この表から明らかなように本発明化
合物は殺ダニ、殺蚊作用を有する。

〔効　果〕

以上の結果から、本化合物は抗真菌作用、制癌作用、血
管新生に対する抑制作用、殺虫作用を有し、新規な抗真
菌剤、制癌剤、血管新生抑制剤、殺虫剤として期待され
る。

以下本発明の化合物の製法を実施例により示す。

実施例１゜ ｓ　ｏ　ｏ　１ｎｔ容三角フラスコに溶性デンプン２％
、グルコース０．５％、ヘフトン０．５％、酵母エキス
Ｏ１Ｓ％、燐酸第２カリウム０．０５％、硫酸マグネシ
ウム０．０５％、大豆粉０．５％の培地（ｐＨ７、２）
　１００Ｍを分注し、１２０℃、２０分間オートクレー
ブにより滅菌した。これにＮＫ８６−０２７９株（微工
研条寄１７８５号）の−白金耳を接種し、ロータリーシ
ェーカーにて１９０回転／分、２７℃の条件下で２日間
振盪培養した。これとは別に５１容三角フラスコに前記
培地１２を分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
により滅菌した。

これに前記培養液２０ｍ／を移殖し、ロータリーシェー
カーにて１９０回転／分、２７℃の条件下で２日間振盪
培養した。

次に、１４０！タンクにグリセリン４％、ポリペプトン
０．５％、粉末酵母エキス０．３％、肉エキス０．５％
、塩化ナトリウム０．３％、硫酸マグネシウム０．０５
％の培ｉ（ｐＨ７，ＯＯ）　１２０Ａを分注Ｌ、１２０
℃、３０分滅菌１−だ。このタンクに前記培養液２．４
！３を移殖し、２７℃で５日間通気撹拌培養した。

（通気１２０Ｊ／ｍｉｎ、　２７０回転／分）得られた
培養物２４０ｐを濾過助剤３％を用い濾過した。このよ
うにして得られた菌体画分に５０Ａのアセトンを加え、
撹拌して抽出を行った。濾過尾よりアセトン抽串液を集
めた後、残渣に３０−ｅのアセトンを加え再び抽出を行
った。

以上のようにして得られたアセトン抽出物を減圧下、乾
固し、２２０ｇの褐色油状物質を得る。

これをクロロホルム尾溶解した後、あらかじめクロロホ
ルム：メタノール（４０：１）で平衡化したシリカゲル
カラム（３，５，、ｉ？）にかけ、クロロホルム：メタ
ノール濃度を２０：１．１０：１．２：１と段階的にか
え溶出を行った。

活性画分を集め減圧下濃縮乾固し、淡褐色の粉末２８．
８ｇを得る。

これを再びクロロホルムに溶解し、あらかじめクロロホ
ルム−メタノール（１００：１）で平向化したシリカゲ
ルカラム（２，５，ｔ３）にかけ、クロロホルム−メタ
ノール１００：１．５０：１．２０：１と段階的にかえ
ながら再びクロマトグラフ場−を行った。

活性画分を集め、減圧下濃縮乾固し１、淡黄色粉末１１
．１ｇを得る。これをクロロホルムに溶解した後、ノル
マルヘキサンを用いて沈澱させ、４．９５ｇの無色粉末
を得た。これを分取高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム、０ＤＳ５３０１−２０．０Ｘ３００ａ：溶離液８０
％（ｖ／ｖ　’）含水メタノール；流量、１０．０ｍ／
／ｍｉｎ　：検出ＵＶ検出器）に付した。

保持時間３２゜５分前後のピーク相当部を集め、減圧濃
縮し、ＮＫ１３０１１９の無色粉末０．８ｇを得た。

【図面の簡単な説明】 第１図はＮＫ１３０１１９物質の紫外部吸収スペクトル
を示す。実線に）は、２Ｑ　ｍｃｇ／ｙｄのメタノール
溶液、破線（−−−−−−）は２Ｑ　ｍｅｇ／Ｍの０．
ＩＮ塩酸−９０％メタノール溶液、鎖線（−・−・−）
は２０　ｍｃｇ／ｍｉの０．ＩＮ苛性ソーダー９０％メ
タノール溶液。 第２図は臭化カリウム錠として測定したＮＫ１３０１１
９の赤外吸収スペクトルである。 第３図は、ＮＫ１３０１１９０重クロロホルム中で測定
した水素核磁気共鳴スペクトルである。 第４図は、ＮＫ１３０１１９の重クロロホルム中で測定
した、炭素核磁気共鳴スペクトルである。 第１図

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される新規抗生物質ＮＫ１３０１１９
2. （２）ストレプトミセス属に属し、抗生物質ＮＫ１３０
   １１９を産生する能力を有する微生物を培地中で培養し
   、培養物中に抗生物質ＮＫ １３０１１９を生成蓄積せしめ、次いでこれを採取する
   ことを特徴とする抗生物質ＮＫ １３０１１９の製造方法
3. （３）抗生物質ＮＫ１３０１１９を有効成分とする抗真
   菌剤、抗腫瘍剤、血管新生抑制剤又は殺虫剤。