JPH0222048B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はセクレチンの吸着防止注射剤に関す
る。

セクレチンは消化管ホルモンの一種、すなわち
膵液分泌ホルモンであり、各種の膵臓および胆嚢
疾患の治療あるいは診断に使用される有用な物質
である。この物質はホルモンの一種であるから、
一回の投与量が数マイクログラム程度の微量であ
り、この投与量は厳重に守られなければならな
い。つまり、製剤的に配合された微量の当該物質
はそのまま正確に投与されなければならないとい
う特別の事情があるのである。

しかしながら、他方、一般に水溶液中に存在す
る蛋白質類、ペプタイド類がガラス質に瞬時に付
着し、その結果、当初の製剤的配合量からかなり
減少したものとなることはよく知られるところで
ある。例えば、インシユリンを輸液容器中に注入
した場合、相当量のインシユリンが容器のガラス
表面に瞬時に吸着され、しかもこの吸着はインシ
ユリンの濃度が低いときに起こりやすいことが知
られている（薬剤学Vol.39，107−111（1979））。
すなわち、インシユリンのごときペプタイドホル
モンは、元来、投与量が微量に限定されているか
ら、ガラス容器への吸着が起こりやすい状態にあ
り、しかも吸着による損失率は当初の配合量が少
ないだけに大きなものとなり、投与量は大幅に減
少する結果となる。このガラス容器への吸着によ
る減量化は本発明に係るセクレチンにおいても同
様に観察される現象である。（Chem.Pharm.
Bull.27（12）3160−3163（1979））。すなわち、セ
クレチンはインシユリンと同様にその投力量が微
量であるペプタイドホルモンであるから、水溶液
中に存在する場合には容易にガラス容器に吸着さ
れ、しかも吸着による損失率はかなり大きなもの
となる。例えば、仮りに製造時において容器その
他の物に対し厳重な注意を払い吸着が起こらない
ようにして必要量を正確に仕込んだとしても、実
際の投与時に注射筒に移しとつた場合あるいは輸
液との混注のために、輸液容器へ注入した場合に
おいては、それぞれ注射筒のガラス壁あるいは輸
液容器のガラス壁に相当量のものが吸着され、重
大な影響をこうむる結果となる。

かかる観点から、セクレチンの器物への吸着を
防止するための技術手段が緊要に求められている
のである。しかしながら、未だ解決的な先行技術
は存しない。

セクレチン水溶液に関しては特公昭50−29005
および特開昭54−98315に係る特許出願がなされ
ており、安定なるセクレチン水溶液を提供するこ
とを目的とする発明の開示がなされている。しか
しこれらはいづれも前記した本発明の課題を解決
するものではない。

すなわち、特公昭50−29005は安定なセクレチ
ン含有凍結乾燥製剤を提供するに当り、アラニン
を担体とすることを特徴とする製造方法を開示し
たものであるところ、当該アラニンは凍結乾燥の
実施をする上で有効であり、かつセクレチンの化
学的安定性を保持する上で有効となるものであつ
て、本発明の課題であるセクレチンの吸着防止に
対して役立つものではない。

また特開昭54−98315は安定なセクレチン水溶
液を提供するに当り、水溶液のPHを３に調整する
ことを特徴とする製剤および製法を開示したもの
であるところ、当該調整は本発明の課題を解決す
るものではない。

かかる事情にかんがみ、本発明者は水溶液中の
セクレチンの器物への吸着を防止する技術手段に
ついて種々検討をおこない、その結果、塩基性ア
ミノ酸をセクレチン水溶液に添加することによつ
て所期の目的が達成されること見出し、本発明を
完成するに至つた。

以下に本発明を詳細に説明する。

本発明においてセクレチンはいかなる方法で製
造されたものでもよく、一般には哺乳動物、特に
ウシ、ブタなどの小腸粘膜より種々の方法で抽出
し、分離精製したものが用いられる。セクレチン
の投与量は診断または治療の目的に応じて異なる
が、例えば１ml当り2000〜5000クリツクハーパー
ラバー単位のセクレチンを含有する製剤が汎用さ
れる。しかし本発明はセクレチンの含有量によつ
て限定されるものではない。

次に本発明に係る塩基性アミノ酸とは、後記実
験例で示されるところによれば、等電点が７以上
であるものを言う。従つて、具体的にはヒスチヂ
ン（等電点7.47）、リジン（同9.59）、オルニチン
（同9.70）、アルギニン（同11.15）をあげること
ができる。

他方、本発明のセクレチン含有注射剤のPHの範
囲は３〜７である。ここで本発明のセクレチン含
有注射剤のPHを以下のごとく定義する。すなわ
ち、本発明のセクレチン含有注射剤は具体的には
水溶液または凍結乾燥粉末として提供されるの
で、注射剤が水溶液である場合には当該水溶液の
PHを、また注射剤が凍結乾燥粉末である場合には
これに溶解用溶液を加えて水溶液としたときの当
該水溶液のPHをそれぞれ本発明のセクレチン含有
注射剤のPHであると定義する。一般にセクレチン
水溶液のPHは３〜７に調製されるのが通常であ
り、従つて、本発明においても上に定義したセク
レチン含有注射剤のPHは、同様に３〜７の範囲に
調製されるものとする。

ところで、前記塩基性アミノ酸は３〜７のPH範
囲においては当該遊離アミノ酸とその塩とが共存
した状態のものとなつている。従つて、本発明に
係る塩基性アミノ酸とは、これをさらに正確に述
べれば、遊離塩基性アミノ酸のみならず、それら
の塩をも包括する概念のものを言う。それゆえ、
具体的には本発明のセクレチン含有注射剤におけ
る塩基性アミノ酸は、遊離塩基性アミノ酸とその
塩とが適当なる比率をもつて直接に配合されるも
のであつてもよく、また遊離塩基性アミノ酸に他
の酸性物質を適宜加えて調整されるものであつて
もよく、また当該アミノ酸の塩に他の塩基性物質
を適宜加えて調整されるものであつてもよく、そ
のいづれもが可能であつて、特別に限定されな
い。

次に塩基性アミノ酸の配合量はセクレチン含有
注射剤を水溶液とした場合に、当該水溶液中にお
いて0.1％以上の濃度となることが望ましい。

後記実験例より明らかなごとく、セクレチンの
ガラス壁への吸着は可逆的である。つまりガラス
壁に吸着したセクレチンはガラス壁にそのまま永
久に吸着されたままとなることはなく、またガラ
ス壁上で変性してしまうこともなく、水溶液中に
塩基性アミノ酸が添加されるならば脱着して再び
水溶液中にもどることができるのである。従つて
塩基性アミノ酸による吸着防止の効果はガラス壁
に対するセクレチンとの競合吸着の結果としても
たらされるものであることが判明する。してみる
と塩基性アミノ酸の最少必要量はセクレチン含有
量に対してではなく、容器内面の表面積に応じて
定まる量であるということになる。しかし、前記
インシユリンの例と同様に、セクレチンのガラス
壁への吸着率はセクレチンの濃度が低いときに高
く、従つて所定のセクレチン濃度を維持するため
には多量の塩基性アミノ酸が必要であり、反対に
セクレチン濃度が高いときには吸着率は低くなる
ので、塩基性アミノ酸は少量でよい。

本発明注射剤が表面積の大きな容器中で希釈さ
れた水溶液となるのは500mlの輸液容器中に注入
される場合である。この場合を想定しておこなつ
た後記実験例によれば塩基性アミノ酸の最少必要
量は0.1％であり、これ以上多ければ多い程よい
ことがわかつた。しかし、塩基性アミノ酸の濃度
が必要以上に高くなれば水溶液の張度が大きくな
り実用的でなくなるので、上限濃度は10％程度が
適当である。

次に本発明注射剤の製剤的形態は数種類のもの
が存在する。すなわち、本発明の効果は、前記の
ごとくいわゆる競合吸着によつてもたらされるの
で、セクレチンと塩基性アミノ酸とが必ずしも当
初から同一の注射剤中に共存した状態で与えられ
る必要がなく、それぞれを別々に用意し、用時両
者を混合すればよいような注射剤形態も可能であ
る。従つて、注射剤の具体例を示せば、以下のご
とき製剤的形態がある。

セクレチンと塩基性アミノ酸とが同一の水溶
液中に直接共存するように配合された注射剤。

セクレチンと塩基性アミノ酸とがそれぞれ別
の水溶液となつており両者が用時に混合される
べく組合わされてなる注射剤。

セクレチンと塩基性アミノ酸とが同一の凍結
乾燥粉末中に直接接共存するように配合された
注射剤であり、用時これに別に用意された溶解
用溶液が加えられる注射剤。

セクレチンと塩基性アミノ酸とがそれぞれ別
の凍結乾燥粉末として存在しており、用時それ
ぞれを水溶液にして混合されるべく組合わされ
てなる注射剤。

セクレチンは凍結乾燥粉末として与えられ、
また塩基性アミノ酸はその水溶液として与えら
れ、両者が用時に混合されるべく組合わされて
なる注射剤。

ここにあげられた各種の水溶液および凍結乾燥
粉末の製造はそれぞれにおける常法に従つて容易
に実施することができる。また水溶液中に適当な
る安定化剤、緩衝剤等を加えることおよび凍結乾
燥粉末中に緩衝剤あるいは凍結乾燥のための適当
な賦形剤等を加えることは本発明において自由に
なし得る。

本発明の効果を以下の実験例をもつて説明す
る。

実験例 １ クエン酸リン酸緩衝剤（Ｍ／100クエン酸―
Ｍ／50リン酸２ナトリウム）によつてPHを3.0に
緩衝化した水溶液50mlにセクレチンおよび等電点
の異なる各種のアミノ酸をそれぞれの濃度が100
クリツクハーパーラバー単位／mlおよび２％とな
るように加えた。これにメツシユサイズ80／120、
表面積118M²／ｇのガラスビーズ125mg（表面積
約15M²相当）を入れ、25℃で２時間振とうした。
ガラスビーズを入れて振とうする前後におけるセ
クレチンの量を高速液体クロマトグラフイーによ
つて測定し、残存率を求めた。なお、高速液体ク
ロマトグラフイーにおいて測定波長は210nm、移
動相はCH₃CN―H₂O―70％HClO₄（40：60：0.5）
とした。以後の実験例における高速液体クロマト
グラフイーも同様の条件でおこなつた。

上記記載においてPHを3.0に緩衝化した代わり
にPHを4.0および6.0に緩衝化した点を除いてそれ
ぞれ上記記載と同様の方法により実験をおこな
い、PHが4.0および6.0である場合における残存率
を求めた。なおPHが4.0の場合については、アミ
ノ酸濃度を２％とした以外に１％としたときにつ
いても同様に実験をおこない残存率を求めた。

結 果 添加したアミノ酸の等電点とセクレチンの残存
率との関係をPHが3.0，4.0，6.0である場合につい
てそれぞれ図１，図２，図３に示す。

なお、PHが3.0，4.0，6.0である場合において、
アミノ酸を添加しないときの残存率を別に求めた
ところ、それぞれ13％，22％，25％、であつた。

これらの図より等電点が７以上であるアミノ酸
に本発明の吸着防止効果のあることが判明する。

一般にセクレチン水溶液のPHは３〜７、望まし
くは４〜６に調整されるのが通常であるから、等
電点が７以上である塩基性アミノ酸は当該PH範囲
において本発明の効果を示すことができる。

実験例 ２ (A) クエン酸リン酸緩衝剤（Ｍ／100クエン酸−
Ｍ／50リン酸２ナトリウム）によつてPHを4.0
に緩衝化した水溶液50mlにセクレチンをその濃
度が100クリツクハーパーラバー単位／mlとな
るように加えた。これにメツシユサイズ80／
120、表面積118M²／ｇのガラスビーズ125mg
（表面積約15M²相当）を入れ、25℃で３時間振
とうし経時的にセクレチンの量を高速液体クロ
マトグラフイーによつて測定し、残存率を求め
た。次にこの液にアルギニンをその濃度が0.5
％となるように加え、再び水溶液中のセクレチ
ンの量を経時的に測定した。

(B) クエン酸リン酸緩衝剤（Ｍ／100クエン酸−
Ｍ／50リン酸２ナトリウム）によつてPHを4.0
に緩衝化した水溶液50mlにセクレチンおよびア
ルギニンをそれぞれの濃度が100クリツクハー
パーラバー単位／mlおよび0.5％となるように
加えた。これにメツシユサイズ80／120、表面
積118M²／ｇのガラスビーズ125mg（表面積約
15M²相当）を入れ、25℃で振とうし経時的に
セクレチンの量を高速液体クロマトグラフイー
によつて測定し、残存率を求めた。

結 果 結果を図４に示す。図４よりセクレチンのガラ
ス壁への吸着は可逆的であることが判明する。す
なわち、一旦吸着したセクレチンはアルギニンの
添加により容易に脱着し、最初からアルギニンを
添加した場合の残存率と同じになることが判明す
る。

実験例 ３ ５％キシリツト輸液500ml（輸液ビン入り）に
セクレチンおよびアルギニンをそれぞれ各種の濃
度において加え、２時間放置した。放置前後にお
けるセクレチンの量を高速液体クロマトグラフイ
ーによつて測定し、放置後における残存率を求め
た。

結 果 結果を図５に示す。図５よりアルギニンの最少
必要濃度は0.1％であることが判明する。すなわ
ち、セクレチン濃度が10キロクリツクハーバーラ
バー単位／500ml以下の低濃度である場合には、
90％以上のセクレチン残存率を得るために必要な
アルギニンの濃度は１％以上のものでなくてはな
らない。また逆にセクレチン濃度が10キロクリツ
クハーパーラバー単位／500ml以上の高濃度であ
る場合には、同様に90％以上の残存率を得るため
に必要なアルギニンの濃度は0.1％以上である。
セクレチン水溶液は各種の濃度において使用され
るので、いづれの濃度に対しても本発明の効果が
示されるために必要なアルギニンの最少濃度は
0.1％であることが判明する。

以下に記載する実施例をもつて本発明をさらに
詳細に説明する。

実施例 １ PH4.5の0.03Mクエン酸リン酸緩衝液50ml中に
Ｌ―アラニン２ｇ、Ｌ―アルギニン塩酸塩２ｇ、
セクレチン5000クリツクハーパーラバー単位を含
む水溶液を無菌的に調製し、0.5mlづつアンプル
に分注し、凍結乾燥し、熔閉する。別に注射用蒸
留水１mlを含むアンプルを用意し、溶解用溶液ア
ンプルとする。

実施例 ２ PH4.5の0.03Mクエン酸リン酸緩衝液50ml中に
Ｌ―アラニン２ｇ、Ｌ―システイン0.2ｇ、セク
レチン5000クリツクハーパーラバー単位を含む水
溶液を無菌的に調製し、0.5mlづつアンプルに分
注し、凍結乾燥し、熔閉する。別に２％−Ｌ−ア
ルギニン塩酸塩水溶液を無菌的に調製し、２mlづ
つ分注して熔閉し、溶解用溶液アンプルとする。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例１結果の項に記載の図１に相応す
る図面である。図２は実験例１結果の項に記載の
図２に相応する図面であり、アミノ酸濃度が２％
（●印線）および１％（○印線）であるときのも
のをそれぞれ示す。図３は実験例１結果の項に記
載の図３に相応する図面である。なお、図１乃至
図３において、図中のAspはアスパラギン酸、
Gluはグルタミン酸、CysHはシステイン、Glyは
グリシン、Alaはアラニン、Proはプロリン、
Hisはヒスチヂン、Lysはリジン、Argはアルギ
ニンをそれぞれ略記したものである。図４は実験
例２結果の項に記載の図４に相応する図面であ
る。図中○印線は(A)の実験においてアルギニンを
添加する前のものを、●印線は(A)の実験において
アルギニンを添加した後のものをそれぞれ示し、
〓印線は(B)の実験におけるものを示す。図５は実
験例３結果の項に記載の図５に相応する図面であ
り、添加アルギニン濃度が２％（●印線）、１％
（○印線）、0.5％（○†ぐ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ セクレチンと等電点が７以上である塩基性ア
   ミノ酸とが直接共存するかまたは組合わせてなる
   セクレチン含有注射剤。 ２ 塩基性アミノ酸がアルギニン、リジン、オル
   ニチン、ヒスチヂンおよびこれらの塩である特許
   請求の範囲第１項記載のセクレチン含有注射剤。 ３ 塩基性アミノ酸の配合量が、セクレチン含有
   注射剤を水溶液とした場合に、当該水溶液中にお
   いて0.1〜10％である特許請求の範囲第１項また
   は第２項記載のセクレチン含有注射剤。 ４ セクレチン含有注射剤が水溶液である特許請
   求の範囲第１項乃至第３項記載のセクレチン含有
   注射剤。 ５ セクレチン含有注射剤が凍結乾燥粉末である
   特許請求の範囲第１項乃至第３項記載のセクレチ
   ン含有注射剤。 ６ セクレチン含有注射剤が凍結乾燥粉末と水溶
   液との組合わせである特許請求の範囲第１項乃至
   第３項記載のセクレチン含有注射剤。