JPH02223529A - シスタチンを有効成分とする治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、シスタチンを有効成分とづる治療剤に関し、
更に詳しくはシスタチンを有効成分とする抗アレルギー
剤及び骨疾患治療剤に関する。

［従来の技術］ シスタチンは動物細胞および体液中に存在する蛋白質で
あって、システィンプロテアーゼ・インヒビターの一種
である。今日では各種のシスタチンが単離・構造決定さ
れており、細胞内で作用する・ｂのどじてシスタチンα
、シスタチンβなどが、細胞外に分泌されて作用するも
のどじでシスタチンＣなどが知られている。

即ち、１９８２年にＧｒｕｂｂらによって最初のシスタ
チンとじてシスタチンＣが脳を髄液より単離・構造決定
され［Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、へｃａｄ、ｓｃｉ、Ｕ、ｓ
、へ■、３０２４　（１９８２）］、次いで勝浦らによ
って１９８３年に皮膚からシスタチンαが［Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、、　１
１５　、９０２（１９８３）］、１９８４年に肝からシ
スタチンβが単離・構造決定されている［　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、　、　１２１
　、１４９　（１９８４）１゜ シスタチンはシスティンプロテアーゼの蛋白分解活性を
強く阻害することから、システィン１０テアーゼの異常
増加に起因する各種疾患等の治療薬としての可能性が研
究されている。例えば、ポリオウィルスの宿主細胞内で
の複製過程にウィルス由来のシスティンプロテアーゼが
関与しており、シスタチンはこのシスティンプロテアー
ゼを阻害することから、シスタチンのウィルス感染抑制
剤としての可能性が検討されている［　Ｐｒｏｃ、Ｎａ
口Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ｔｌ、Ｓ、＾、、８３．５３９２
　（１９８６）］。

また、システィンプロプアーゼの異常増加がＩＳｉ！察
される筋萎縮性疾患の治療剤としての可能性も示唆され
ている ［代謝、２４　（２）　、眼でみるページ２７５　（１
９８７）］。

［発明が解決しようどする課題］ 本発明は、シスタチンの新たな医薬用途、即ちシスタチ
ンの抗アレルギー剤及び骨疾患治療剤としての新たな用
途を提供覆ることを目的とする。

［課題を解決するための手段１ 本発明者は、シスタチンの新たな医薬用途を開発するこ
とを目的として鋭意研究した結果、シスタチンは骨粗鬆
症等の病態モデルにおいて骨からのカルシウムの遊離を
有意に抑制し、またマウスでのＩＯＥ抗体産生を強く抑
制した。従ってシスタチンは骨疾患治療剤として、また
抗アレルギー剤として極めて有効であることを見出し、
本発明を完成した。

即ち、本発明は、シスタチンを有効成分とする抗アレル
ギー剤、及びシスタチンを有効成分とする骨疾患治療剤
である。

本発明で用いるシスタチンは、細胞内で作用する細胞内
型、細胞外に分泌されて作用する細胞外型のいずれでも
よい。具体的には、シスタチンα（ラット由来）、シス
タチンΔ（ヒト由来）、シスタチンβ（ラット由来）、
シスタチンＢ（ヒト由来）などの細胞内型シスタチン；
及びシスタチンＣ（ヒト由来）、シスタチンＳ（ヒ１〜
由来）、シスタチンＥＷ（卵白由来）、シスタチンコロ
ステルム（ヒト由来）などの細胞外型シスタチンが挙げ
られる。なかでもシスタチンＡ１シスタチンＢ１シスタ
チンＣなどのヒト由来のシスタチンが好ましい。シスタ
チンＣは細胞内へ取込まれやすい性質を有するＩＣめ本
発明では特に好ましいものの１つである。これらのシス
タチンは動物細胞、あるいは血清、唾液などの体液から
単一Ｅすることができる［　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃ
ａｄ、Ｓｃｉ、ｔｌ、Ｓ、Ａ　、　７９　、３０２４　
（１９８２）　；　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｖｓ、
ＲｅｓＣｏｍｍｕｎ、、１１５．９０２　（１９８３）
　；ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｎ＋
ｍｕｎ、、　１２１　、　１４９　（１９８４）　；　
Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、　ｌ）、　１
２５、Ｊｐｎ、　５ｃＳｏｃ、Ｐｒｃｓｓ　　ａｎｄ　
　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ　　（１９８３）　
　：Ｃｙｓｔｅｉｎｅ　　Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ　ａ
ｎｄＴｈｅｉｒ　　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｌ）、４９７
　、Ｗａｌｔｅｒ　　ｄｅ　　Ｇｒｕｙｔｅｒ　　＆　
　Ｃｏ、、Ｂｅｒｌｉｎ　（１９８６）　　：　　ＦＥ
ＢＳ　　　Ｌｅｔｔ、、１８６．４１（１９８５）］。

またこれらのシシスチンは通常の遺伝子工学技術によっ
て製造された組換えシスタチンであってもよい。組換え
シスタチンとしては、例えばシスタチンα及びシスタチ
ンＡを］−ドする遺伝子をぞれぞれ化学的、生化学的に
合成し、これらを適当なプラスミドにそれぞれ挿入して
大腸菌で発現せしめて得られる組換えシスタチンα（特
願昭６２−２１７０６）及び組換えシスタチンＡ（特願
昭６３−１１０４０２）などがある。

本発明者により、シスタチンは骨粗鬆症等の病態モデル
において骨からのカルシウムの遊離を有意に抑制し、ま
たマウスでのＩＯＥ抗体産生を強く抑制することが明ら
かにされた。従って、シスタチンは骨粗鬆症、ベーヂッ
ト病、高カルシウム血症、骨軟化症等の骨疾患の治療に
有効であり、またアレルギー性皮膚疾患、アレルギー性
＾炎、アレルギー性紫斑病などのアレルギー性疾患の治
療に有効である。

シスタチンは、骨疾患あるいはアレルギー性疾患のいず
れの場合にも、静脈内、動脈内、筋肉内、経鼻、皮下、
直腸内などの非経口投与により、あるいは経口投与によ
り投与することができる。

静脈内、動脈内、筋肉内、皮下などの非経口投与用製剤
としては、注射剤、注入剤などが挙げられ、これら製剤
はそれ自体公知の方法によって調製することができる。

注射剤、注入剤などは、シスタチン単独、あるいはマン
ニ１〜−ル、ラクトース、アルブミンなどの担体ととも
凍結乾燥しバイアル等に充填することによって調製づる
ことかできる。またレシチン、リゾレシチン、スフィン
ゴミエリンなどのリン脂質の薄膜からなるリボソーム製
剤であってもよい。また皮下・に留置して用いるインブ
ラント型製剤でもよい。

経鼻投与用製剤としては、シスタチンと、ヒドロキシプ
ロピルセルロースなどのセルＬ１−ス低級アルキルエー
テル類、ポリアクリル酸ナトリウムなどのポリアクリル
酸塩類、結晶性セルロースなどの担体からなる粉末剤な
どが挙げられる。

直腸内投与用製剤としては坐剤が挙げられる。

坐剤としては、通常用いられるカカオ脂なとの坐剤用基
剤に界面活性剤例えば脂肪酸エステル類、ポリオキシエ
チレン誘導体類、ピリドキシン脂肪酸エステル類、ショ
糖脂肪酸エステル類、リン脂質類等の界面活性剤を１種
または２種以上用いて上記基剤に均密に分散せしめ吸収
効率を良くした坐剤などがある。

経口投与用製剤としては上記しＩＣリポソーム製剤など
が挙げられる。

シスタチンをアレルギー性疾患に用いる場合には、口腔
あるいは鼻に噴霧するスプレー剤として投与することも
できる。

上記した製剤はいずれもそれ自体公知の方法によって調
製することができ、またこれら製剤には、通常使用され
る保存剤、着色剤、安定化剤などを必要に応じて添加す
ることもできる。

シスタチンの投与量は、患者の年齢、体重、症状あるい
は投与するシスタチンの種類等によって変動し得るが、
骨疾患治療のばあいには通常０．１〜５００ｔｒｙ／Ｋ
ｙ体重／日、好ましくは１０〜１００１１１５Ｆ体重／
日であり、アレルギー性疾患治療の場合には通常０．１
〜５００１ＦＪ／に９体重／［１、好ましくは１０〜２
００１１ｒ’ｊ／に９体重／日である。

［発明の効果］ シスタチンを有効成分とする本発明の骨疾患治療剤は骨
粗髭症、ベーチェット病、高カルシウム血症等の治療に
極めて有効であり、またシスタチンを有効成分とする抗
アレルギー剤はアレルギー皮冑疾患、アレルギー性鼻炎
などの治療に極めて有効である。

［実施例］ 以下、試験例及び実施例を挙げて本発明を具体的に説明
する。

試験例１ 骨カルシ　ム遊離に対する　用 ５週齢の一１ｓｔａｒ系雄性ラットを低カルシウム食（
約０．０２％、オリエンタル酵母社製標準Ａ変型配合試
料）で１週間飼育し実験に供した。

シスタチンα（シスタチンαをコードする遺伝子を化学
的、生化学的に合成し、これをプラスミドに挿入し、大
腸菌を形質転換して大腸菌で発現せしめた組換えシスタ
チンαであり、Ｎ末端メチオニンがアセデル化されてい
ない：特願昭６２２１７０６）はＮａＣｌで等張化した
２　５　ｎ＋Ｈ，ｐＨ。

７．５のＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液に溶解し、投与容置０
．６．ｄ／１００ｇ体重の割合で尾静脈より投与した。

シスタチンα投与３時間後に採血し血清中のカルシウム
吊を和光紬薬工業製のカルシウム測定用キットカルシウ
ムＣ−テストワコーを用いｏｃｐｃ法［Ｈ，Ｊ、Ｇｉｔ
ｌｅｍａｎ：Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、Ｖｏｌ　
１８．５２１　（１９６７）］により測定した。

この結果を表１に示す。

表　　１ 表１に示す様にシスタチンα６０１ＲＩ／Ｋｇ体重投与
により骨からのカルシウムの遊離は有意に抑制された。

試験例２ マウスでのＩＯＥ抗体産生に　する ８週令のＢＤＦ１系雌性マウスを一群７〜１０匹とし試
験に用いた。試験例１で用い１ｃのと同様のシスタチン
αをリン酸緩衝液−生理食塩水にとかし被験薬とし、ま
た、有効成分を全く含まないものをコントロールとしそ
れぞれ別個の群のマウスに腹腔内投与した。

卵白アルブミン１μグを吸着した水酸化アルミニウム４
　ｍｌを腹腔的投与し感作すると同時に被検薬を腹腔的
投与した。感作後１４日目（ｄａｙ１４）にマウス眼窩
静脈より採血を行ない生理食塩水で２倍に希釈後、遠心
分離して得られた血清を一次感作に対する抗血清とした
。

又、感作後２５日目（ｄａｙ２５＞に同量の抗原を同量
にブースターとして腹腔的投与し感作後４１日目（ｄａ
Ｖ４１）に同じ様に採血し得られた血清を二次感作に対
する抗血清とした。

得られた抗血清を用いＩｎｔｅｒｎａｔ　１ｏｎａＡｒ
ｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ＾ｌｌｃｒｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｏｙ、。

Ｖｏｌ　４８．１６　（１９７５）　　（Ｏｖａｒｙ、
Ｚ、Ｃａ１ａｚｚａＳ、Ｓ、　ａｎｄ　ｓ、にｏｊｉｍ
ａ：ＰＣＡ　ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｍｏｕｓ
ｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｍ１ｃｅ　ａｎｄ　ｒ
ａｔｓ　）に記載の受身皮膚アナフィラキシ−（ＰＣＡ
）反応によって抗体産生量を求めた。

ずなわち、採取血清を各種濃度に稀釈して別のラット（
ウィスター系、雄性、体重２００−２５０ｇ）の皮肉に
注射した。４時間後に卵白アルブミン４　ｍｌを０．５
％エバンスブルー生理食塩液１ｄに溶解し、これを静脈
内投与し、色素浸出血清境界濃度を求めｉｃｏこの結果
を表２に示づ。

この結果Ｊ：リシスタヂンαはＩＣＩＥの産生を抑制す
ることが明かである。

試験例３ マウスでのシスタチンへのＩＥ　　　　にる作用 ８週令のＢＤＦ１系価性マウスを一群８匹とし試験に用
いた。シスタチンＡを生理食塩水に溶解して被検薬とし
、又有効成分を全く含まない生理食塩水をコントロール
とした。

卵白アルブミン１μグを吸着した水酸化ノフルミニウム
４　ｔａｙを腹腔的投与し感作すると同時に被検薬を静
脈内投与した。感作後１４日目（ｄａｙ１４）にマウス
眼窩静脈より採血を行い、生理食塩水で２倍に希釈後遠
心分離して抗血清を得た。得られた抗血清は試験例２で
用いＩＣのと同様のＰＣＡ反応によりＩＣＩＥ抗体産生
量を求めた。この結果を表３に示した。結果から明かな
様にシスタチンＡはＩＱＥ抗体の産生を有意に抑制した
。

試験例４ 毒性試験 マウス１四当り試験例１で用いたのと同様のシスタチン
αを１ｇ腹腔内投与あるいは静脈内投与しても、マウス
に何んらの変化−ｂａ察されなかった。

実施例１ 注射剤 凍結乾燥シスタチンα６００ｇに注射用生理食塩水６ｄ
を加えて溶解し、無菌濾過（０，２２ｎｍ口径、日本ミ
リポア工業社製）処理後、その２戒をアンプルに充填し
アンプル空間を窒素ガスで置換後密封し注射剤を得た。

実施例２ 去莢又二Ａｌｌ 卵黄レシチン１１０μｍｏｌ　、コレステロール５０μ
ｍｏｌを１０−のクロロホルム溶液に溶解し、１ｏｏｉ
のフラスコに入れよく混合した後、４０℃の温浴中で減
圧下に溶媒を溜去しフラスコ内壁に薄膜を形成させた。

デシケータ−中でさらに３時間真空乾燥した。シスタチ
ンΔ３０μｍｏｌを１０ｄの生理食塩水に溶解し前述の
フラスコに入れボルデキシングミキサーで振盪しさらに
超音波をか番ノだ後、［１径０．２２ｎｌｌｌのフィル
ター（ミリボア７社製）に通した。この溶液１０蛇をア
ンプルに充填しアンプル空間を窒素ガスで置換後密封し
注射用リポソーム製剤を得た。

実施例３ 坐　　剤 カカオ−脂１７ｇにグリコール酸ナトリウム１、Ｏｑを
加え乳鉢中でよく混線しｌζ。シスタチンα２「を乳鉢
中に採取しこれに」二記基剤を徐々に加えて混合して均
密な単剤組成物とし、これを所定のコンテナーに２９充
填し生薬製剤を得た。

実施例４ 経鼻投与用粉末剤 凍結乾燥シスタチンＡ１００ｍｇどヒドロキシルゾロピ
ルセルロースとを乳鉢中に採取しよく混合りることによ
って均一な粉末状組成物を１９だ。この組成物を所定の
カプセルに充填することにより経鼻投与用シスタチン製
剤を得た。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）シスタチンを有効成分とする抗アレルギー剤。
2. （２）シスタチンを有効成分とする骨疾患治療剤。