JPH02223594A - ヒトライノウイルスペプチド - Google Patents
ヒトライノウイルスペプチドInfo
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- JPH02223594A JPH02223594A JP1234551A JP23455189A JPH02223594A JP H02223594 A JPH02223594 A JP H02223594A JP 1234551 A JP1234551 A JP 1234551A JP 23455189 A JP23455189 A JP 23455189A JP H02223594 A JPH02223594 A JP H02223594A
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- peptide
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- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
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- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32711—Rhinovirus
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、合成ヒ１〜ライノウィルス（＋−Ｉ ＲＶ
）ペプチド、その製造法及びそのワクチンとしての用途
に関する。
）ペプチド、その製造法及びそのワクチンとしての用途
に関する。
目標とすべき良好なワクチンとは、活性期間の長い免疫
応答を迅速に開始せしめ、その後の接種または感染性物
質の侵入に対して免疫記憶を成立せしめるワクチンであ
る。またワクチン製剤は、投与が容易であって、安定で
あり、副作用が低く、その投与対象者に対して広範な保
護効果を及ば寸ものでなりればならない。現在存在する
多くのワクチン製剤はこのような要求を満たしている。
応答を迅速に開始せしめ、その後の接種または感染性物
質の侵入に対して免疫記憶を成立せしめるワクチンであ
る。またワクチン製剤は、投与が容易であって、安定で
あり、副作用が低く、その投与対象者に対して広範な保
護効果を及ば寸ものでなりればならない。現在存在する
多くのワクチン製剤はこのような要求を満たしている。
しかしながら、感染性物質を不活性化して得られるワク
チン製剤にはいくつかの問題がある。即ら、その免疫抗
原としての性質が不明確であること、真に無毒性である
かどうか、大量の感染性物質を使用する際の危険性、安
定性、安定性の点から製剤形態が制限されるなどの問題
がある。
チン製剤にはいくつかの問題がある。即ら、その免疫抗
原としての性質が不明確であること、真に無毒性である
かどうか、大量の感染性物質を使用する際の危険性、安
定性、安定性の点から製剤形態が制限されるなどの問題
がある。
より安定でその性格が明確なワクチンを得るための試み
どして、多くの感染性物質に対づる免役応答についての
詳細な研究が行なわれ、免疫保護を付与することに関与
している］−ピ１〜−ブの同定が行なわれている。今日
では、このような知識に基づき、短かいペプチドを製造
覆ることににつてエピトープの擬似体を得、これをワク
チンのベスとして使用することが可能になっている。こ
のようなペプチドワクチンは多くの利点を有している。
どして、多くの感染性物質に対づる免役応答についての
詳細な研究が行なわれ、免疫保護を付与することに関与
している］−ピ１〜−ブの同定が行なわれている。今日
では、このような知識に基づき、短かいペプチドを製造
覆ることににつてエピトープの擬似体を得、これをワク
チンのベスとして使用することが可能になっている。こ
のようなペプチドワクチンは多くの利点を有している。
即ち、これらのペプチドワクチンは、化学的には不明確
な点はなく、安定であり、また製造の際に感染性物質が
混入することもない。更に【ま、適当な免疫応答を促進
するＪ：うにデザインすることができ、また新らしいデ
リバリ−システムを使用できるようにデザインすること
も可能であり目標とする抗原にアタックするようにデザ
インすることも可能である。また、製造の面から見れば
、天吊生産用のプラントの心髄性も低く、得られる生産
物のその後の複雑なプロヒツシングＪ程を必要としない
。
な点はなく、安定であり、また製造の際に感染性物質が
混入することもない。更に【ま、適当な免疫応答を促進
するＪ：うにデザインすることができ、また新らしいデ
リバリ−システムを使用できるようにデザインすること
も可能であり目標とする抗原にアタックするようにデザ
インすることも可能である。また、製造の面から見れば
、天吊生産用のプラントの心髄性も低く、得られる生産
物のその後の複雑なプロヒツシングＪ程を必要としない
。
このにうに多くの利点があるにもかかわらず、ペプチド
ワクチンについて多くの非難もなされている。即ち、ペ
プチドワクチンの場合にはキャリアー蛋白を必要とする
こと、またペプチド抗原の免疫原性は天然の生物そのも
のの免疫原性に決して近づくことが出来ないなどの問題
点がある。合成ペプチドの多くは分子量が小さいためハ
プテンとして機能し従ってその免疫原性を高めるために
は大きな外来キャリアー蛋白に結合させる必要がある。
ワクチンについて多くの非難もなされている。即ち、ペ
プチドワクチンの場合にはキャリアー蛋白を必要とする
こと、またペプチド抗原の免疫原性は天然の生物そのも
のの免疫原性に決して近づくことが出来ないなどの問題
点がある。合成ペプチドの多くは分子量が小さいためハ
プテンとして機能し従ってその免疫原性を高めるために
は大きな外来キャリアー蛋白に結合させる必要がある。
このようにして１りられる：１ンジュグー１−で免疫し
た場合には、イのペプチド／キャリアー蛋白結合方法に
Ｊ：つては天然の蛋白もしくは感染性物質を全く認識で
きない抗ペプチド抗体の産生を誘導するような場合がし
ばしば起こる。ワクチン接種の際に起こる他の問題とし
ては、外来キャリアー蛋白またはバッチの違いによるコ
ンジュゲートに対する過敏症の問題がある。
た場合には、イのペプチド／キャリアー蛋白結合方法に
Ｊ：つては天然の蛋白もしくは感染性物質を全く認識で
きない抗ペプチド抗体の産生を誘導するような場合がし
ばしば起こる。ワクチン接種の際に起こる他の問題とし
ては、外来キャリアー蛋白またはバッチの違いによるコ
ンジュゲートに対する過敏症の問題がある。
本発明者は、ＨＲＶ ２上のヘルパー−Ｆ−セル１ピト
ープ（Ｔｈ−エビ１〜−プ）を見出した。これらのエピ
トープ及び本発明者の発明に係るＥＰ−Ａ−０，２８７
３９５に記載されたＮ Ｉｍ−ＩＩ配列を含むペプチド
は、Ｎｌｍ−１１配列のみを含むペプチドよりも良好な
抗体応答を誘導することかできる。また、Ｔｈ−エピト
ープを含むペプチドは、Ｎ１ｍ−ＩＩ配列のみを含むペ
プチドに対する非応答及び応答性の遺伝子的制限を克服
することができる。これらの知見は一般的な適用性を有
している。
ープ（Ｔｈ−エビ１〜−プ）を見出した。これらのエピ
トープ及び本発明者の発明に係るＥＰ−Ａ−０，２８７
３９５に記載されたＮ Ｉｍ−ＩＩ配列を含むペプチド
は、Ｎｌｍ−１１配列のみを含むペプチドよりも良好な
抗体応答を誘導することかできる。また、Ｔｈ−エピト
ープを含むペプチドは、Ｎ１ｍ−ＩＩ配列のみを含むペ
プチドに対する非応答及び応答性の遺伝子的制限を克服
することができる。これらの知見は一般的な適用性を有
している。
しかして本発明によれば、合成ペプチドであって、
ｆｉ） 抗原に対する抗体産生のためのＴ−セルヘル
プを誘導することのできるヒトライノウィルス（ＨＲＶ
）のエピトープ、もしくは （ｉｉｌ 該エピトープのアミノ酸残基が他のアミノ
酸残基に買換された修正型エピトープであって該修正型
エピトープがＴ−セルヘルプを誘導できるように置換さ
れている修正型エピトープ；またはそれらの薬学的に許
容し得る塩からなる合成ペプチドが提供される。
プを誘導することのできるヒトライノウィルス（ＨＲＶ
）のエピトープ、もしくは （ｉｉｌ 該エピトープのアミノ酸残基が他のアミノ
酸残基に買換された修正型エピトープであって該修正型
エピトープがＴ−セルヘルプを誘導できるように置換さ
れている修正型エピトープ；またはそれらの薬学的に許
容し得る塩からなる合成ペプチドが提供される。
従って、本発明の合成ペプチドは、ｌ−Ｉ ＲＶから誘
導され且つ抗原に対する抗体産生のためのＴセルヘルプ
を誘導することのできるアミノ酸配列を有している。該
配列中のアミノ酸は、■−セルヘルプを誘導する機能に
影響を与えない他のアミノ酸で任意に置換されていても
よい。
導され且つ抗原に対する抗体産生のためのＴセルヘルプ
を誘導することのできるアミノ酸配列を有している。該
配列中のアミノ酸は、■−セルヘルプを誘導する機能に
影響を与えない他のアミノ酸で任意に置換されていても
よい。
本発明の合成ペプチドは、好ましくは、抗原に対する抗
体応答を誘導り゛ることのできるアミノ酸配列（Ｂ−セ
ルエピトープ）も有している。あるいは、本発明のＴｈ
エピトープと１３−セルエピトープとを、例えば同一の
ビークル中で別々に存在せしめてもよい。２つのエピト
ープを別々のペプチドとして含むビークルも本発明の一
部を形成Ｊる。
体応答を誘導り゛ることのできるアミノ酸配列（Ｂ−セ
ルエピトープ）も有している。あるいは、本発明のＴｈ
エピトープと１３−セルエピトープとを、例えば同一の
ビークル中で別々に存在せしめてもよい。２つのエピト
ープを別々のペプチドとして含むビークルも本発明の一
部を形成Ｊる。
Ｂ−セルエピトープとともにＴｈ−エピトープを使用す
ることにより、１３−セルエピトープのみを使用する場
合よりもより良好な抗体応答を誘導することができる。
ることにより、１３−セルエピトープのみを使用する場
合よりもより良好な抗体応答を誘導することができる。
従って、Ｔｈ−エピトープ及びＢ−セルエピトープを含
むペプチド、並びにこれら２つのエピトープを別々のペ
プチドとして含むデリバリ−ビークルはワクチンとして
使用することができる。
むペプチド、並びにこれら２つのエピトープを別々のペ
プチドとして含むデリバリ−ビークルはワクチンとして
使用することができる。
Ｔｈ−セルエピ・１〜−プは、宿主抗原提示細胞（ＡＰ
Ｃ）の表面上のクラス■主要組織適合遺伝子複合体（Ｍ
ＨＣ）分子と１３−セルとを結合せしめ、次いでＢ−セ
ルの分化増殖を誘導するために３分子複合体形態にある
Ｔ −ｔルレセプターと相互作用できなければならない
。多数の丁１）−セルエピ１ヘーブが、広範囲な蛋白及
び感染性物質から同定されている。しかしながら、これ
までＨＲＶコニのＴ ｈ−セルエピ１−−ブは同定され
ていない。
Ｃ）の表面上のクラス■主要組織適合遺伝子複合体（Ｍ
ＨＣ）分子と１３−セルとを結合せしめ、次いでＢ−セ
ルの分化増殖を誘導するために３分子複合体形態にある
Ｔ −ｔルレセプターと相互作用できなければならない
。多数の丁１）−セルエピ１ヘーブが、広範囲な蛋白及
び感染性物質から同定されている。しかしながら、これ
までＨＲＶコニのＴ ｈ−セルエピ１−−ブは同定され
ていない。
ＨＲＶ上のＴｈ−セルエピトープは、コンポーネント蛋
白、蛋白フラグメント及びペプチドのｎＶｉｔｒｏ
Ｔ−−セル促進技術を用いて適当な配列を同定して詳細
に分析り゛ることにより同定することができる［ＧＯＯ
（Ｉｌｌｌａｌｌ ａｎｄ ５ｅｒＣａｒＺ、 Ａｎｎ
、ＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ、、 １ 、４６５．１９８
３ ：Ｂｃｒｚｏｆｓｋｙゝ’ Ｔｉ１ｅ Ｙｅａｒ
ｉｎ Ｉｍｎ＋ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｖｏｌ、２ Ｉ）、
１５１ 。
白、蛋白フラグメント及びペプチドのｎＶｉｔｒｏ
Ｔ−−セル促進技術を用いて適当な配列を同定して詳細
に分析り゛ることにより同定することができる［ＧＯＯ
（Ｉｌｌｌａｌｌ ａｎｄ ５ｅｒＣａｒＺ、 Ａｎｎ
、ＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ、、 １ 、４６５．１９８
３ ：Ｂｃｒｚｏｆｓｋｙゝ’ Ｔｉ１ｅ Ｙｅａｒ
ｉｎ Ｉｍｎ＋ｕｎｏｌｏｇｙ、 Ｖｏｌ、２ Ｉ）、
１５１ 。
にａｒｇｅｒ、Ｂａ５ｅｌ、 １９８６ ：及び１．
１Ｖｉｎ（ｌｓｔｏｎｅ ａｎｄＦａｔｈｍａｎ、 Ａ
ｎｎ、 Ｒｅｖ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ５．４７７．１
９８７］ｏ更には、蛋白のプライマリ−配列からＴセル
促進活性を有する適当なペプチド配列を選択する改良さ
れたアルゴリズムが２つ報告されている。
１Ｖｉｎ（ｌｓｔｏｎｅ ａｎｄＦａｔｈｍａｎ、 Ａ
ｎｎ、 Ｒｅｖ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ５．４７７．１
９８７］ｏ更には、蛋白のプライマリ−配列からＴセル
促進活性を有する適当なペプチド配列を選択する改良さ
れたアルゴリズムが２つ報告されている。
第１のアルゴリズムは、ＤｅＬｉｓｉとＢｅｒｚｏｒｓ
ｋｙによって提案されたものであり（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、八ｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ、 ８２．７０４８．１９
８５）、Ｔ−レル部位は両親媒性描込、即ち、分子の１
部が親水性で他の部分が疎水性であってしばしばα−へ
リツクスの形態を有する構造を取る傾向があるとするも
のである。この仮説の創始者にＪ：つて、蛋白のプライ
マリ−アミノ酸配列から両親媒性へリツクスを同定する
ためのコンピュータープログラムが提案されている［Ｈ
ａｒｇａｌｉｔｅｔ ａｌ、、 Ｊ、 Ｔｍｍｕｎｏ１
１３８．２２１３．１９８７］。
ｋｙによって提案されたものであり（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、八ｃａｄＳｃｉ、ＵＳＡ、 ８２．７０４８．１９
８５）、Ｔ−レル部位は両親媒性描込、即ち、分子の１
部が親水性で他の部分が疎水性であってしばしばα−へ
リツクスの形態を有する構造を取る傾向があるとするも
のである。この仮説の創始者にＪ：つて、蛋白のプライ
マリ−アミノ酸配列から両親媒性へリツクスを同定する
ためのコンピュータープログラムが提案されている［Ｈ
ａｒｇａｌｉｔｅｔ ａｌ、、 Ｊ、 Ｔｍｍｕｎｏ１
１３８．２２１３．１９８７］。
第２のアルゴリズムは、Ｒｏｔｈｂａｒｄによって提案
されたものであり（＾ｎｎ、Ｉｎ５ｔ、Ｐａ５ｔｅｕｒ
、 １３７ Ｅ 。
されたものであり（＾ｎｎ、Ｉｎ５ｔ、Ｐａ５ｔｅｕｒ
、 １３７ Ｅ 。
５１８．１９８．６ ）、それぞれのＴ−セルエピトー
プは、それ自身の内に、荷電残基もしくはグリシンそれ
に続く２つの疎水性残基からなる配列を有し、そして多
（の場合その次の残基は荷電されているかもしくは極性
のものであるとするものである。このアルゴリズムはそ
の後改良され、２つの疎水性中心アミノ酸に接する残基
が更にあり、エピトープの遺伝子的制限に寄与するザブ
パターンが存在すると考えられている（ Ｒｏｔｈｂａ
ｒｄ ａｎｄＴａｙｌｏｒ、 ＥＨＢＯＪ、 ７．９
３．１９８８）。
プは、それ自身の内に、荷電残基もしくはグリシンそれ
に続く２つの疎水性残基からなる配列を有し、そして多
（の場合その次の残基は荷電されているかもしくは極性
のものであるとするものである。このアルゴリズムはそ
の後改良され、２つの疎水性中心アミノ酸に接する残基
が更にあり、エピトープの遺伝子的制限に寄与するザブ
パターンが存在すると考えられている（ Ｒｏｔｈｂａ
ｒｄ ａｎｄＴａｙｌｏｒ、 ＥＨＢＯＪ、 ７．９
３．１９８８）。
好ましいＴｈ−レルエピトープは、ＨＲＶ ２のＶＰ１
キャプシド蛋白の３５−３８アミノ酸残基、１０３−１
０６アミノ酸残基または２５１−２５４アミノ酸残基；
ＨＲＶ２のＶＰ２キャプシド蛋白（７）２７−３０７ミ
／ｅｌｆ残Ｍ ： Ｉｎ ＲＶ ２ （７） Ｖ Ｐ
／１キャプシド蛋白の５９−６２アミノ酸残基：または
これらと等価の他のＨＲＶのアミノ酸残基を含む。
キャプシド蛋白の３５−３８アミノ酸残基、１０３−１
０６アミノ酸残基または２５１−２５４アミノ酸残基；
ＨＲＶ２のＶＰ２キャプシド蛋白（７）２７−３０７ミ
／ｅｌｆ残Ｍ ： Ｉｎ ＲＶ ２ （７） Ｖ Ｐ
／１キャプシド蛋白の５９−６２アミノ酸残基：または
これらと等価の他のＨＲＶのアミノ酸残基を含む。
より好ましくは、ＨＲＶ２ ＶＰＩアミノ酸残基３２
−４１．１００−１０９または１０９２５１：ｆ−ＩＲ
Ｖ２ ＶＰ２７’：／１残！２４−３３；１−ＩＲＶ
２ ＶＰ４アミノ酸残基５６−６５ ：あるいはこれ
らと等価の他ＨＲＶアミノ酸残基である。
−４１．１００−１０９または１０９２５１：ｆ−ＩＲ
Ｖ２ ＶＰ２７’：／１残！２４−３３；１−ＩＲＶ
２ ＶＰ４アミノ酸残基５６−６５ ：あるいはこれ
らと等価の他ＨＲＶアミノ酸残基である。
それぞれの場合、アミノ酸は、Ｂ−セルエピトープのた
めの１−一セルヘルプを誘導する能力に影響を与えない
他のアミノ酸で置換されていてもよい。
めの１−一セルヘルプを誘導する能力に影響を与えない
他のアミノ酸で置換されていてもよい。
ＨＲＶ２から誘導されるＴｈ−エピトープは、１文字コ
ードを用いた以下の配列を右する。
ードを用いた以下の配列を右する。
ＤＡＡＥ （ＶＰＩ残基３５−３８＞
ＥＭＡＱ（Ｖｌ）１残′Ｍ１０３−１０６）ＲＡＬＦ
（ＶＰ１残Ｍ２５１−２５４）Ｄ、ＶＡＮ（ＶＰ２残基
２７−３０ ）ＤＶＬＥ（ＶＰ４残ｍ５９−６２＞ ＰＡＬＤＡＡＥＴＧ ト１（ＶＰｌ 残 鳥！３２
−４１）３２−４１）ＮＬＱＥ （ＶＰ１残基１００−
１ＲＡＬＥＹＴＲＡＨＲ（ＶＰＩ残基２５１−２ＴＳＱ
ＤＶＡＮＡ Ｉ Ｖ （ＶＰ２残基２４−３３）及び ＰＶＫＤＶＬＥＫＧＩ （ＶＰ４残基５６−６５）。
（ＶＰ１残Ｍ２５１−２５４）Ｄ、ＶＡＮ（ＶＰ２残基
２７−３０ ）ＤＶＬＥ（ＶＰ４残ｍ５９−６２＞ ＰＡＬＤＡＡＥＴＧ ト１（ＶＰｌ 残 鳥！３２
−４１）３２−４１）ＮＬＱＥ （ＶＰ１残基１００−
１ＲＡＬＥＹＴＲＡＨＲ（ＶＰＩ残基２５１−２ＴＳＱ
ＤＶＡＮＡ Ｉ Ｖ （ＶＰ２残基２４−３３）及び ＰＶＫＤＶＬＥＫＧＩ （ＶＰ４残基５６−６５）。
Ｂ−セルエピトープは、中和抗体を誘ＩＴることのでき
るエピトープ、例えばウィルス、バクテリア、プロトゾ
アなどの感染性物質のエピトープであってもＪ：い。ま
た、成長ホルモンなどの非感染性物質のエピトープでも
よい。ウィルスエピトープの例としては、Ｂ型肝炎ウィ
ルス、インフルエンザウィルス、口蹄疫ウィルス、ポリ
オウィルス、ヘルペスシンプレックスウィルス、狂犬病
ウィルス、ＨＩＶ〜１もしくは１−Ｉ Ｉ Ｖ −２な
どの）−１１Ｖ、ＨＲＶ等の１ピトープが挙げられる。
るエピトープ、例えばウィルス、バクテリア、プロトゾ
アなどの感染性物質のエピトープであってもＪ：い。ま
た、成長ホルモンなどの非感染性物質のエピトープでも
よい。ウィルスエピトープの例としては、Ｂ型肝炎ウィ
ルス、インフルエンザウィルス、口蹄疫ウィルス、ポリ
オウィルス、ヘルペスシンプレックスウィルス、狂犬病
ウィルス、ＨＩＶ〜１もしくは１−Ｉ Ｉ Ｖ −２な
どの）−１１Ｖ、ＨＲＶ等の１ピトープが挙げられる。
プロトゾアのエピトープとしてはマラリア寄生虫Ｐｌａ
ｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ中のエピトープ
がある。
ｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ中のエピトープ
がある。
好ましいＢ−セルエピトープは、本発明者の発明に係る
ＥＰ−Δ−０２８７３９５に記載されたＨＲＶ ＮＩ
ｍ−ＩＩｍ配列ある。このエピトープは、ＨＲＶ２のＶ
Ｆ６の１５６−１６４アミノ酸残基またはそれと等価の
他のＩ−Ｉ ＲＶのアミノ酸残基によって定義される。
ＥＰ−Δ−０２８７３９５に記載されたＨＲＶ ＮＩ
ｍ−ＩＩｍ配列ある。このエピトープは、ＨＲＶ２のＶ
Ｆ６の１５６−１６４アミノ酸残基またはそれと等価の
他のＩ−Ｉ ＲＶのアミノ酸残基によって定義される。
これらのアミノ酸は、抗原性に影響を与えない他のアミ
ノ酸によって置換されていてもよい。ＨＲＶ ２につい
ては、ＮＩｍ−ｍ配列は、ＶＫＡＥＴＲＬＮＰである。
ノ酸によって置換されていてもよい。ＨＲＶ ２につい
ては、ＮＩｍ−ｍ配列は、ＶＫＡＥＴＲＬＮＰである。
他のＨＲＶの等価なアミノ酸残基は、トＩ ＲＶ ２の
ＶＰ２アミノ酸残基１５６−１６４に対応するＶＰ２ア
ミノ酸残基である。換言すれば、それらは、他のＨＲＶ
ｔＦロタイブのカウンターバートＶＰ２残基である。
ＶＰ２アミノ酸残基１５６−１６４に対応するＶＰ２ア
ミノ酸残基である。換言すれば、それらは、他のＨＲＶ
ｔＦロタイブのカウンターバートＶＰ２残基である。
これらは、ＨＲＶ２のＶＰ２配列と他のｌ−Ｉ ＲＶの
ＶＰ２配列とを並べることによって容易に決定すること
ができる。これは、異なるタイプのＨＲＶの配列間の相
同性から導びかれる当然の事項である。同様の方法によ
って、ＨＲＶ２のＴｈ−エピトープと等価の他の１」Ｒ
Ｖにおけるアミノ酸配列を推定することができる。
ＶＰ２配列とを並べることによって容易に決定すること
ができる。これは、異なるタイプのＨＲＶの配列間の相
同性から導びかれる当然の事項である。同様の方法によ
って、ＨＲＶ２のＴｈ−エピトープと等価の他の１」Ｒ
Ｖにおけるアミノ酸配列を推定することができる。
添付した第１図及び第２図によってこのことが説明され
ている。ここでは、Ｉ−Ｉ ＲＶ ２及び他の１−Ｉ
ＲＶセロタイプのＶＰｌ及びＶＰ２配列が並べて示され
ている。最も好ましいＶＰｌ及びＶＦ２丁り一エビトー
プには下線が引かれている。、ＶＦ６におけるＩ−ＩＲ
Ｖ２ Ｎ１ｍ−ｍ配列は第２図のボックスで囲まれた
部分に示されでいる。例えば、ｔ−Ｉ ＲＶ １４のア
ミノ酸残基１５６−１６１は、）ＩＲＶ２のアミノ酸残
基１５６−１６４に対応している。これらの１−ＩＲＶ
１４残基はＬＳＳＡＮＥである。
ている。ここでは、Ｉ−Ｉ ＲＶ ２及び他の１−Ｉ
ＲＶセロタイプのＶＰｌ及びＶＰ２配列が並べて示され
ている。最も好ましいＶＰｌ及びＶＦ２丁り一エビトー
プには下線が引かれている。、ＶＦ６におけるＩ−ＩＲ
Ｖ２ Ｎ１ｍ−ｍ配列は第２図のボックスで囲まれた
部分に示されでいる。例えば、ｔ−Ｉ ＲＶ １４のア
ミノ酸残基１５６−１６１は、）ＩＲＶ２のアミノ酸残
基１５６−１６４に対応している。これらの１−ＩＲＶ
１４残基はＬＳＳＡＮＥである。
明らかにされたＴｈ−エピトープ及びＮ１ｍ−■配列の
１つもしくはそれ以上のアミノ酸は、これらの機能に影
響を与えない１つもしくはそれ以上の他のアミノ酸で置
換されていてもよい。従って、アミノ酸は元のエピトー
プの物理化学的特性、即ち、電荷密度、親水性／疎水性
、大きさ及び配置４ 置を維持できる他のアミノ酸で置換されていてもよく、
この場合には免疫学的な構造が維持される。
１つもしくはそれ以上のアミノ酸は、これらの機能に影
響を与えない１つもしくはそれ以上の他のアミノ酸で置
換されていてもよい。従って、アミノ酸は元のエピトー
プの物理化学的特性、即ち、電荷密度、親水性／疎水性
、大きさ及び配置４ 置を維持できる他のアミノ酸で置換されていてもよく、
この場合には免疫学的な構造が維持される。
例えば、ＡはＧで置換されていてもよくぞの逆でもよい
。ＶはＡ、ＬまたはＧで置換されていてもよい、、には
Ｒで置換されていてもよい。Ｓは王で置換されていても
よくその逆でもよい。ＥはＤで置換されていてもよくそ
の逆でもよい。ＱはＮ −（’置換されていてもよくそ
の逆でもよい。例えば、エステル（Ｃ１−０４アルキル
エステルなど）、アミドなどの修正型アミノ酸の型であ
ってもよい。
。ＶはＡ、ＬまたはＧで置換されていてもよい、、には
Ｒで置換されていてもよい。Ｓは王で置換されていても
よくその逆でもよい。ＥはＤで置換されていてもよくそ
の逆でもよい。ＱはＮ −（’置換されていてもよくそ
の逆でもよい。例えば、エステル（Ｃ１−０４アルキル
エステルなど）、アミドなどの修正型アミノ酸の型であ
ってもよい。
従ってＣ−末端アミノ酸のカルボキシ基は修正されてい
てもよい。
てもよい。
典型的には、Ｔｈ−セルエピトープと８−セルエピトー
プとは共に合成ペプチド中に含まれている。Ｔｈ−ゼル
］−ピトープが合成ペプチドのアミン末端部分にあり、
Ｂ−セルエビトープが合成ペプチドのカルボキシ末端部
分にあってもよく、この逆でもよい。また、合成ペプチ
ドがこの２つのエピトープのみからなるものでもＪ：い
。あるいは、これらのエピト−プが長いペプチドの１部
を形成するものであってもにい１．また、エピトープは
互いに直接連結していて一方のエピトープの浦ぐ後に仙
のエピトープが存在していてもにい。あるいは、２つの
エピトープが介在スペーザーアミノ酸残基によって分離
されていてもよい。
プとは共に合成ペプチド中に含まれている。Ｔｈ−ゼル
］−ピトープが合成ペプチドのアミン末端部分にあり、
Ｂ−セルエビトープが合成ペプチドのカルボキシ末端部
分にあってもよく、この逆でもよい。また、合成ペプチ
ドがこの２つのエピトープのみからなるものでもＪ：い
。あるいは、これらのエピト−プが長いペプチドの１部
を形成するものであってもにい１．また、エピトープは
互いに直接連結していて一方のエピトープの浦ぐ後に仙
のエピトープが存在していてもにい。あるいは、２つの
エピトープが介在スペーザーアミノ酸残基によって分離
されていてもよい。
５０個までのアミノ酸残基からなる長いペプチド、例え
ば４０個または３０個までのアミノ酸残基からなる長い
ペプチドは横築することができる。
ば４０個または３０個までのアミノ酸残基からなる長い
ペプチドは横築することができる。
４個までのアミノ酸は、Ｔｈ−セルエピトープ及び／又
はＢ−セルエピ１ヘーブの両末端あるいはへ方の末端に
付加することができる。一つの態様においては、Ｎ１ｍ
−ＩＩＢ−ｔｘルエビトープ配列のカルボキシ末端のみ
に余分なアミノ酸残基を付加することができる。Ｉｌｍ
−ＩＩ配列のそれぞれの末端またはいずれかの末端に、
３０個までのアミノ酸残基、例えば、１５または６個ま
でのアミノ酸残基を更に付加することができる。、Ｔｈ
−セルエピトープとＢ−セルエピトープとは、１０個、
例えば６個または３個までのアミノ酸残基によって別れ
ていてもよい。
はＢ−セルエピ１ヘーブの両末端あるいはへ方の末端に
付加することができる。一つの態様においては、Ｎ１ｍ
−ＩＩＢ−ｔｘルエビトープ配列のカルボキシ末端のみ
に余分なアミノ酸残基を付加することができる。Ｉｌｍ
−ＩＩ配列のそれぞれの末端またはいずれかの末端に、
３０個までのアミノ酸残基、例えば、１５または６個ま
でのアミノ酸残基を更に付加することができる。、Ｔｈ
−セルエピトープとＢ−セルエピトープとは、１０個、
例えば６個または３個までのアミノ酸残基によって別れ
ていてもよい。
王ｈ−セルエピトープ及び／又はＢ −セルエピトープ
にイ１加されるアミノ酸残基は、これらのエピ１−プが
得られる配列中のエピトープに接している天然のアミノ
酸残基である。例えば、１−Ｉ ＲＶ ２のＮ１ｍ−Ｉ
ｔ配列については、ＶＰ２の１６５の位置のアミノ酸残
基はＤである。従って、好ましくは、ＨＲＶ２から得ら
れるＮ１ｍ−Ｕ配列のカルボキシ末端の最初のアミノ酸
残基としてこのＤが付加される。ＨＲＶ２及びＨＲＶ／
４のＶＰ２配列からこのようにして構築される好ましい
ペプチドは、それぞれ、 Ｖ Ｋ Ａ Ｅ Ｔ ＲＬ Ｎ Ｐ Ｄ Ｌ Ｑ ｌ）
下口及びＬＳＳＡＮＥＶＧＧＰＶＫである。
にイ１加されるアミノ酸残基は、これらのエピ１−プが
得られる配列中のエピトープに接している天然のアミノ
酸残基である。例えば、１−Ｉ ＲＶ ２のＮ１ｍ−Ｉ
ｔ配列については、ＶＰ２の１６５の位置のアミノ酸残
基はＤである。従って、好ましくは、ＨＲＶ２から得ら
れるＮ１ｍ−Ｕ配列のカルボキシ末端の最初のアミノ酸
残基としてこのＤが付加される。ＨＲＶ２及びＨＲＶ／
４のＶＰ２配列からこのようにして構築される好ましい
ペプチドは、それぞれ、 Ｖ Ｋ Ａ Ｅ Ｔ ＲＬ Ｎ Ｐ Ｄ Ｌ Ｑ ｌ）
下口及びＬＳＳＡＮＥＶＧＧＰＶＫである。
更には、長いペプチドは、１つより多くのＴｈレルエビ
トープ及び／又は１つより多くのＢ−セルエピトープを
含んでいてもよい。また、システィン（Ｃ）残基がペプ
チドの両末端またはいずれかの末端に（＝ｌ加されてい
てもよい。特に、Ｃ残基はカルボキシ末端のみに付加さ
れる。
トープ及び／又は１つより多くのＢ−セルエピトープを
含んでいてもよい。また、システィン（Ｃ）残基がペプ
チドの両末端またはいずれかの末端に（＝ｌ加されてい
てもよい。特に、Ｃ残基はカルボキシ末端のみに付加さ
れる。
Ｔｈ−エピ１ヘープとＢ−セルエピトープとが別別のペ
プチドとして提供される場合には、それらも長いペプチ
ドの１部を形成するものであってもよい。このような長
いペプチドとしては、全部で３５個まで、例えば２５ま
たは１５個までのアミノ酸残基からなるペプチドが挙げ
られる。両者のエピトープあるいはいずれかのエピ１〜
−プの両末端またはいずれかの末端にアミノ酸残基をイ
」加することができる。例えば、Ｎ−末端に４個までの
アミノ酸残基及び／又はＣ−末端に４個までのアミノ酸
残基を付加することができる。好ましくは、付加される
アミノ酸は、丁り一１ビトープまたはＢ−セルエピトー
プが得られる配列中におけるこれらエピトープに接して
いる天然のアミノ酸である。
プチドとして提供される場合には、それらも長いペプチ
ドの１部を形成するものであってもよい。このような長
いペプチドとしては、全部で３５個まで、例えば２５ま
たは１５個までのアミノ酸残基からなるペプチドが挙げ
られる。両者のエピトープあるいはいずれかのエピ１〜
−プの両末端またはいずれかの末端にアミノ酸残基をイ
」加することができる。例えば、Ｎ−末端に４個までの
アミノ酸残基及び／又はＣ−末端に４個までのアミノ酸
残基を付加することができる。好ましくは、付加される
アミノ酸は、丁り一１ビトープまたはＢ−セルエピトー
プが得られる配列中におけるこれらエピトープに接して
いる天然のアミノ酸である。
本発明のペプチドは合成ペプチドであり、これらは化学
合成によって得ることができる。ペプチドは、目的とす
るペプチドの配列に適切な単一のアミノ酸及び／又は２
つもしくはそれ以上のアミノ酸からなるペプチドから構
築することができる。
合成によって得ることができる。ペプチドは、目的とす
るペプチドの配列に適切な単一のアミノ酸及び／又は２
つもしくはそれ以上のアミノ酸からなるペプチドから構
築することができる。
固相法または溶液相法を使用することができる。
得られるペプチドは、必要に応じて薬学的に許容し得る
塩に変換してもよい。
塩に変換してもよい。
固相法では、目的とするペプチドのアミノ酸配列は、不
溶性樹脂に結合したＣ−末端アミノ酸から順次構築され
る。目的とするペプチドが生成された後にそれを不溶付
樹脂から遊離せしめる。溶液相法を用いる場合には、目
的とするペプチドはＣ−末端アミノ酸から構築される。
溶性樹脂に結合したＣ−末端アミノ酸から順次構築され
る。目的とするペプチドが生成された後にそれを不溶付
樹脂から遊離せしめる。溶液相法を用いる場合には、目
的とするペプチドはＣ−末端アミノ酸から構築される。
Ｃ−末端アミノ酸のカルボキシ基は適当な保護基によっ
てブロックしておぎ、合成終了後にこの保護基を脱１１
ｆ［する。
てブロックしておぎ、合成終了後にこの保護基を脱１１
ｆ［する。
固相法あるいは溶液相法のいずれを用いる場合でも、反
応系に添加されるそれぞれのアミノ酸は、典型的には、
そのアミノ基は保護されており、カルボキシ基は活性化
されている。側鎖官能基も保護されている。合成の各工
程後にアミン基の保護基が脱離される。側鎖官能基の保
護基は、合成の最後に脱離される。
応系に添加されるそれぞれのアミノ酸は、典型的には、
そのアミノ基は保護されており、カルボキシ基は活性化
されている。側鎖官能基も保護されている。合成の各工
程後にアミン基の保護基が脱離される。側鎖官能基の保
護基は、合成の最後に脱離される。
得られるペプチドは薬学的に許容し智る塩に変換しても
よい。また、有機酸または無機酸との酸付加塩に変換し
てもＪ：い。適当な酸としては、酢酸、コハク酸、塩化
水素酸などが挙げられる。あるいは、得られるペプチド
を、アンモニウム塩またはナトリウム塩、カリウム塩な
どのアルカリ金属塩等のカルボン酸塩に変換してもよい
。
よい。また、有機酸または無機酸との酸付加塩に変換し
てもＪ：い。適当な酸としては、酢酸、コハク酸、塩化
水素酸などが挙げられる。あるいは、得られるペプチド
を、アンモニウム塩またはナトリウム塩、カリウム塩な
どのアルカリ金属塩等のカルボン酸塩に変換してもよい
。
本発明のペプチドは組換えＤＮＡ技術によって製造する
こともできる。従って、本発明のペプチドをコードする
ＤＮＡ配列を先ず構築する。次いで、該ＤＮＡ配列を含
み且つ適当な宿主に導入した時にペプチドを発現するこ
とのできる発現ベクターを製造する。ＤＮＡ配列はベク
ター中の翻訳開始シグナルと終止シグナルとの間に挿入
される。
こともできる。従って、本発明のペプチドをコードする
ＤＮＡ配列を先ず構築する。次いで、該ＤＮＡ配列を含
み且つ適当な宿主に導入した時にペプチドを発現するこ
とのできる発現ベクターを製造する。ＤＮＡ配列はベク
ター中の翻訳開始シグナルと終止シグナルとの間に挿入
される。
適当な転写コントロールエレメント、特に、ＤＮＡ配列
のプロモーター及び転写終止部位が設けらる。ＤＮＡ配
列は、ベクターに親和性を有する宿主中にてペプチドの
発現が司能なように正しいフレーム中に挿入される。
のプロモーター及び転写終止部位が設けらる。ＤＮＡ配
列は、ベクターに親和性を有する宿主中にてペプチドの
発現が司能なように正しいフレーム中に挿入される。
適切な宿主−ベクター系であればいずれの系を用いても
よい。ベクターはプラスミドでよい。この場合にはバク
テリア宿主または酵母宿主が用いられる。あるいは、ベ
クターはウィルスベクターでもよい。ウィルスベクター
を用いて哺乳動物セルラインをトランスフェクトしペプ
チドの発現を誘導することができる。
よい。ベクターはプラスミドでよい。この場合にはバク
テリア宿主または酵母宿主が用いられる。あるいは、ベ
クターはウィルスベクターでもよい。ウィルスベクター
を用いて哺乳動物セルラインをトランスフェクトしペプ
チドの発現を誘導することができる。
本発明のペプチドは中和抗体を誘導Ｊることができる。
従って、本発明のペプチドをヒトのワクチンとして用い
ることができる。有効量のペプチドを患者に投与するこ
とによってワクチン接種を達成することができる。従っ
て、外来抗原に対する抗体を誘導できる有効量の゛「ｈ
−エピトープとＢ−セルエビ１〜−プとをヒトに投与す
ることによって、抗原に対するワクチン化を行なうこと
ができる。好ましくは、両者のエピトープを含むペプチ
ドが用いられる。
ることができる。有効量のペプチドを患者に投与するこ
とによってワクチン接種を達成することができる。従っ
て、外来抗原に対する抗体を誘導できる有効量の゛「ｈ
−エピトープとＢ−セルエビ１〜−プとをヒトに投与す
ることによって、抗原に対するワクチン化を行なうこと
ができる。好ましくは、両者のエピトープを含むペプチ
ドが用いられる。
経口投与、あるいは皮下、静脈内または筋肉内などの非
経口投与を採用することができる。典型的には、ペプチ
ドは、１回の投与当り１−１，０００μり、好ましくは
ＩＣ）−１００μ９の量で経口投与または非経口投与に
より投与される。
経口投与を採用することができる。典型的には、ペプチ
ドは、１回の投与当り１−１，０００μり、好ましくは
ＩＣ）−１００μ９の量で経口投与または非経口投与に
より投与される。
ワクチン接種用どして、本発明のペプチドは典型的には
薬学的に許容し得る担体または希釈剤とともに製剤化さ
れる。慣用的な剤形、担体、アジュバント及び希釈剤が
使用される。勿論、これらは投与ルー１〜によって決定
される。好適な担体及び稀釈剤としては、７０インドの
不完全アジュバント（ＩＦＡ）、水酸化アルミニウム、
サポニン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ムラミルジペプチ
ド、ミネラルオイル、ミグリオールなどの中性オイル、
ビーナツツオイルなどのベジタブルオイル、゛イスコム
（Ｉｓｃｏｍｓ）“、リポソーム、プルロニック（Ｐｌ
ｕｒｏｎｉｃ ： トレードマーク）ポリオール、リビ
（Ｒｉｂｉ ）アジュバント系（ＧＢ−Ａ−２１８９１
４１）などが挙げられる。Ｔｈ−１ピトープとＢ−セル
エビトープとを同一・のデリバリ−ビークル中で別々の
ペプチドとして製剤化する場合には、リポソーム、バイ
スコム″、オイルドロップレットなどの合成微粒子デリ
バリ−システムを用いることができる。
薬学的に許容し得る担体または希釈剤とともに製剤化さ
れる。慣用的な剤形、担体、アジュバント及び希釈剤が
使用される。勿論、これらは投与ルー１〜によって決定
される。好適な担体及び稀釈剤としては、７０インドの
不完全アジュバント（ＩＦＡ）、水酸化アルミニウム、
サポニン、ＤＥＡＥ−デキストラン、ムラミルジペプチ
ド、ミネラルオイル、ミグリオールなどの中性オイル、
ビーナツツオイルなどのベジタブルオイル、゛イスコム
（Ｉｓｃｏｍｓ）“、リポソーム、プルロニック（Ｐｌ
ｕｒｏｎｉｃ ： トレードマーク）ポリオール、リビ
（Ｒｉｂｉ ）アジュバント系（ＧＢ−Ａ−２１８９１
４１）などが挙げられる。Ｔｈ−１ピトープとＢ−セル
エビトープとを同一・のデリバリ−ビークル中で別々の
ペプチドとして製剤化する場合には、リポソーム、バイ
スコム″、オイルドロップレットなどの合成微粒子デリ
バリ−システムを用いることができる。
以下に本発明を実施例を用いて説明する。
例１：ペブチドの製造
以下に示すペプチドを固相法により合成した。
より詳細には、Ｈｏｕｇｈｔｅｎによって報告されたＨ
ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法 （Ｈｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、
ＪＡＣ５，Ｆ３ ５ 、２１４’１１１２１５４．１
９６３）の改良法（ｎｏｕｏｈｔｅｎ。
ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ法 （Ｈｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、
ＪＡＣ５，Ｆ３ ５ 、２１４’１１１２１５４．１
９６３）の改良法（ｎｏｕｏｈｔｅｎ。
Ｐｒ０Ｃ，Ｎａ口、八ｃａｄ、Ｓｃｉ、 ＬＩＳＡ、
８ ２ 、 ５ １ ３ １ − ５１３５
．１９８５）を用いて合成を実施した。それぞれのペプ
チドは、そのＣ−末端に非天然シスデイン残基がイ」加
されている。比較として、ペプチド６９を同様の方法に
より合成した。ペプチド６９には１− ｈ−セルエピト
ープが付加されていない。
８ ２ 、 ５ １ ３ １ − ５１３５
．１９８５）を用いて合成を実施した。それぞれのペプ
チドは、そのＣ−末端に非天然シスデイン残基がイ」加
されている。比較として、ペプチド６９を同様の方法に
より合成した。ペプチド６９には１− ｈ−セルエピト
ープが付加されていない。
ペプチド
νに八［■旧、ＮＰＤＩ−、ＱＰＴＥ旧−ＱＥＨＡＱＩ
ＲＩ？Ｃ（ヘ−Ｉナト６９ ＋ １ｌＲＶ２ ＶＰＩ
１００−１０９ ＋ Ｃ）ＶＫＡＥＴＲＬＮＰＤＬＯ１
１１’ＥＲＡＬＥＹＴＲＡｌｌｌｉＣ（ペプチド６９
＋ ｔｌＲＶ２ ＶＰＩ ２５１−２６０４Ｃ）ＶＫＡ
［１１ｉＬＮＰＤＬＱＰＴＥＴＳＱＤＶＡＮＡＩＶＣ（
ペプチド６９４．１１ＲＶ２ ＶＦ６２４−３３ ＋Ｃ
）Ｖ Ｋ 八Ｅ Ｔ １１１ Ｎ Ｐ Ｄ Ｌ Ｑ Ｐ
丁＋： Ｐ Ａ Ｌ Ｄ Ａ Ａ Ｅ Ｔ Ｇ ＩＩ
Ｃ（へ７チト６９１１１１ｉＶ２ ＶＰＩ ３２−４
１４ Ｃ）Ｎ。
ＲＩ？Ｃ（ヘ−Ｉナト６９ ＋ １ｌＲＶ２ ＶＰＩ
１００−１０９ ＋ Ｃ）ＶＫＡＥＴＲＬＮＰＤＬＯ１
１１’ＥＲＡＬＥＹＴＲＡｌｌｌｉＣ（ペプチド６９
＋ ｔｌＲＶ２ ＶＰＩ ２５１−２６０４Ｃ）ＶＫＡ
［１１ｉＬＮＰＤＬＱＰＴＥＴＳＱＤＶＡＮＡＩＶＣ（
ペプチド６９４．１１ＲＶ２ ＶＦ６２４−３３ ＋Ｃ
）Ｖ Ｋ 八Ｅ Ｔ １１１ Ｎ Ｐ Ｄ Ｌ Ｑ Ｐ
丁＋： Ｐ Ａ Ｌ Ｄ Ａ Ａ Ｅ Ｔ Ｇ ＩＩ
Ｃ（へ７チト６９１１１１ｉＶ２ ＶＰＩ ３２−４
１４ Ｃ）Ｎ。
ＶＫＡＥＴＲＬＮＰＤＬＱＰＴＥＰＶＫＤＶＬＥＫＧＩ
Ｃ＜へ７チト６９４ ＩＩＩ（Ｖ２ Ｖｌ）４５６−６
５ ＋ Ｃ）ＶＫＡＥＴＲＬＮＰＤＬＱＰＴＥＣ （比較： ＨＲＶ２ ＶＦ６１５６−１７０ ＋ Ｃ
）１群４匹−８匹のギニアビッグの６群に対して、ペプ
チド６９あるいはペプチド３７０．３７１及び５２５−
５２７の１つを２００μ９の投与徂で筋注により接種し
た。これらペプチドはＩＦＡとともに投与した。ギニア
ビッグを４２日目にブーストしたく第３図の矢印）。
Ｃ＜へ７チト６９４ ＩＩＩ（Ｖ２ Ｖｌ）４５６−６
５ ＋ Ｃ）ＶＫＡＥＴＲＬＮＰＤＬＱＰＴＥＣ （比較： ＨＲＶ２ ＶＦ６１５６−１７０ ＋ Ｃ
）１群４匹−８匹のギニアビッグの６群に対して、ペプ
チド６９あるいはペプチド３７０．３７１及び５２５−
５２７の１つを２００μ９の投与徂で筋注により接種し
た。これらペプチドはＩＦＡとともに投与した。ギニア
ビッグを４２日目にブーストしたく第３図の矢印）。
０１２８．４２及び４９日目に採取した血清中の抗ペプ
チド６９活性を間接Ｅ Ｌ Ｉ ＳΔ払により測定し、
その結果を第３図に示した。第３図では、ペプチド６９
は黒丸、ペプチド３７０は黒い四角、ペプチド３７１は
黒い三角、ペプチド５２５は白丸、ペプチド５２６は白
い四角、ペプチド５２７は白い三角で示されている。
チド６９活性を間接Ｅ Ｌ Ｉ ＳΔ払により測定し、
その結果を第３図に示した。第３図では、ペプチド６９
は黒丸、ペプチド３７０は黒い四角、ペプチド３７１は
黒い三角、ペプチド５２５は白丸、ペプチド５２６は白
い四角、ペプチド５２７は白い三角で示されている。
ペプチド６９及びペプチド５２７（ペプチド配列６９
＋ Ｔ ｔル部位ＶＰ４ ５６−６５十〇）では第１あ
るいは第２次応答が誘導されないことが示されている。
＋ Ｔ ｔル部位ＶＰ４ ５６−６５十〇）では第１あ
るいは第２次応答が誘導されないことが示されている。
これに対して、ペプチド６９配列と４つの異なるＴセル
部位を含むペプチド３７０．３７１．５２’５及び５２
６は全て接種後において良好な第１次及び第２次応答を
誘導した。従って、ペプチド内にこれらのＴセル部位が
含有されることによって、ペプチド６９単独の場合のギ
ニアビッグの非応答性が克服できる。
部位を含むペプチド３７０．３７１．５２’５及び５２
６は全て接種後において良好な第１次及び第２次応答を
誘導した。従って、ペプチド内にこれらのＴセル部位が
含有されることによって、ペプチド６９単独の場合のギ
ニアビッグの非応答性が克服できる。
（ｂ）マ・シスの免疫原性
１群８匹−１６匹のＭＦ１マウスの７群、及び１群８匹
のＢＡＬＢ／ｃマウスの７群に対して、ペプチド６９単
独あるいはペーブチド３７０．３７１及び５２５−５２
７の１つを２００μｑの投与艶でＩＦＡとともに接種し
た。接種後２８日目に血清を採取し血清中の抗ペプチド
６９活性を間接ＥＬＩＳＡ法により測定し、その結果を
第４図に示した。ＭＦ１マウスは、ペプチド６９単独接
種に対しては応答を示さなかった。しかしながら、ペプ
チド６９配列とＴｈ−エピトープとを含むぺプチドのそ
れぞれは抗ペプチド６９応答を示したく第４ａ図）。こ
れらペプチドのうちペプチド３７１と５２５に特にＢＡ
ＬＢ／ｃマウスに対して高い免疫原性を示した（第４ｂ
図）。
のＢＡＬＢ／ｃマウスの７群に対して、ペプチド６９単
独あるいはペーブチド３７０．３７１及び５２５−５２
７の１つを２００μｑの投与艶でＩＦＡとともに接種し
た。接種後２８日目に血清を採取し血清中の抗ペプチド
６９活性を間接ＥＬＩＳＡ法により測定し、その結果を
第４図に示した。ＭＦ１マウスは、ペプチド６９単独接
種に対しては応答を示さなかった。しかしながら、ペプ
チド６９配列とＴｈ−エピトープとを含むぺプチドのそ
れぞれは抗ペプチド６９応答を示したく第４ａ図）。こ
れらペプチドのうちペプチド３７１と５２５に特にＢＡ
ＬＢ／ｃマウスに対して高い免疫原性を示した（第４ｂ
図）。
１群８匹の異なるハブロタイブマウスの７群に対して、
００目にペプチド３７０及び３７１の２００μｑでＩＦ
Ａとともに免疫した。８４日目に採取した血清ザンプル
について、間接ＥＬＩＳＡ法により抗ペプチド６９活性
及び抗ウィルス活性をテストした。間接ＥＬＩＳＡによ
る抗ペプチド６９活性のテスト結果を第５ａ図に示した
。応答動物数の割合（％）をカッコ内に示した。
００目にペプチド３７０及び３７１の２００μｑでＩＦ
Ａとともに免疫した。８４日目に採取した血清ザンプル
について、間接ＥＬＩＳＡ法により抗ペプチド６９活性
及び抗ウィルス活性をテストした。間接ＥＬＩＳＡによ
る抗ペプチド６９活性のテスト結果を第５ａ図に示した
。応答動物数の割合（％）をカッコ内に示した。
第５ａ図から、異なるマウス株でのペプチド３７０と３
７１との免疫原性には相違があることが判る。Ｃ５７Ｂ
Ｒ１０（Ｈ−２ｂ）マウスは、ペプチド３７０に対して
弱い応答を示す株である。
７１との免疫原性には相違があることが判る。Ｃ５７Ｂ
Ｒ１０（Ｈ−２ｂ）マウスは、ペプチド３７０に対して
弱い応答を示す株である。
全体としては、ペプチド３７１と比べて、ペプチド３７
０で免疫した場合に応答したマウスの数はより少なかっ
た。しかしながら、ペプチド３７０に対して弱い第１次
応答を示したマウスは、ブースト後は結局は抗ペブヂド
６９抗体の産生を誘導した。ペプチド３７１は、デスト
した全てのマウス株に対して高い免疫原性を示した。
０で免疫した場合に応答したマウスの数はより少なかっ
た。しかしながら、ペプチド３７０に対して弱い第１次
応答を示したマウスは、ブースト後は結局は抗ペブヂド
６９抗体の産生を誘導した。ペプチド３７１は、デスト
した全てのマウス株に対して高い免疫原性を示した。
この広範囲交差反応性は、ペプチドワクチン中のＴ−セ
ル部位の望ましい特性を示すものである。
ル部位の望ましい特性を示すものである。
更には、ペプチド３７１に対する抗体のほとんどは、ペ
プチド６９領域に対するものである。
プチド６９領域に対するものである。
ＨＲＶ２に対する血清の反応性は、族ペプチド６９と同
様の応答性を示した（第５ｂ図）。
様の応答性を示した（第５ｂ図）。
例３：１３セル 位に対するＴｈ−セル部位の位置
Ｂ−セル部位に対するＴ ｈ −セル部位の重要性を調
べるため、ＶＰ１残基２５１−２６０とペプチド６９を
異なる位置に有Ｊる３つのペプチドを合成した。例１と
同様にしてペプチドを合成した。
べるため、ＶＰ１残基２５１−２６０とペプチド６９を
異なる位置に有Ｊる３つのペプチドを合成した。例１と
同様にしてペプチドを合成した。
これらペプチドの配列は次の通りである。
ｒｅ［： ５５９ ＶにＡＥＴＲＬＮＰＤＬＱＰ
ＴＥＧＧＧＧＧＲ＾Ｌ Ｅ ’／ Ｔ ＩＩ八へＲＣ（
ペア ｆ トロ９＋５ｘ（ｏｌｙ）＋ＨＲＶ２ ＶＰＩ
２５ｔ−２６０＋Ｃｙｓ）ｒｅｆ： ５６０
ＲＡＬＥＶＴＲＡＩＩＲＶＫＡ［ＴＲＬＮＰＤＬＱＰＴ
ＥＣ（ＨＲＶ２ ＶＰｌ ２５１−２６０＋ベプヂド６
９＋Ｃｙｓ）ｒｃｆ ： ５６１ ＶＫＡＥＴＲ
ＬＮＰＤＬＱＰＴ［ＲＡＬＥＹＴＲ八ＨＲＣ（へア チ
ト６９＋ＩＩＲＶ２ ＶＰｌ ２５１−２６０＋ＣＶＳ
）（３７１ヲ右さない新しいペプチドの合成） それぞれのペプチド２００μｑを７０インドの不完全ア
ジュバントとともに１群４匹のギニアビッグに筋注によ
り接種した。４２日後に、全てのギニアビッグを同様の
処方でブーストした。ｏ１２８．４２．５６及び７００
日目血清を採取し、間接ＥＬＩＳΔによりペプチド６９
に対する抗体について分析した。結果は以下の通りであ
る。
ＴＥＧＧＧＧＧＲ＾Ｌ Ｅ ’／ Ｔ ＩＩ八へＲＣ（
ペア ｆ トロ９＋５ｘ（ｏｌｙ）＋ＨＲＶ２ ＶＰＩ
２５ｔ−２６０＋Ｃｙｓ）ｒｅｆ： ５６０
ＲＡＬＥＶＴＲＡＩＩＲＶＫＡ［ＴＲＬＮＰＤＬＱＰＴ
ＥＣ（ＨＲＶ２ ＶＰｌ ２５１−２６０＋ベプヂド６
９＋Ｃｙｓ）ｒｃｆ ： ５６１ ＶＫＡＥＴＲ
ＬＮＰＤＬＱＰＴ［ＲＡＬＥＹＴＲ八ＨＲＣ（へア チ
ト６９＋ＩＩＲＶ２ ＶＰｌ ２５１−２６０＋ＣＶＳ
）（３７１ヲ右さない新しいペプチドの合成） それぞれのペプチド２００μｑを７０インドの不完全ア
ジュバントとともに１群４匹のギニアビッグに筋注によ
り接種した。４２日後に、全てのギニアビッグを同様の
処方でブーストした。ｏ１２８．４２．５６及び７００
日目血清を採取し、間接ＥＬＩＳΔによりペプチド６９
に対する抗体について分析した。結果は以下の通りであ
る。
ペプチドＮＯ第１次接種後の日数
仄−２Ｕ ±ユ 且 Ｌ追
５５９ ＜１” １．６
１．５ ４．１ ３．９５６０
＜１ １．５ １．８ ２．９
２．９５６１ ＜１ １
．３ １．３ ３．１ ２．８ｔｏｏ、ｏ
ＥＬｒＳＡ終点力価 これらの結果から、８−セルエピトープどＴｈセルエピ
トープとの組合わせ仝Ｃは免疫原性を示し、他方、ペプ
チド６９単独の場合には同様の条件下で免疫原性を示さ
ないことが判る。更には、Ｂ−セルエピ１〜−プとＴ
ｈ−セルエピトープとの間の５つのグリシン残基の存在
により、免疫原性が実際に改善される。
１．５ ４．１ ３．９５６０
＜１ １．５ １．８ ２．９
２．９５６１ ＜１ １
．３ １．３ ３．１ ２．８ｔｏｏ、ｏ
ＥＬｒＳＡ終点力価 これらの結果から、８−セルエピトープどＴｈセルエピ
トープとの組合わせ仝Ｃは免疫原性を示し、他方、ペプ
チド６９単独の場合には同様の条件下で免疫原性を示さ
ないことが判る。更には、Ｂ−セルエピ１〜−プとＴ
ｈ−セルエピトープとの間の５つのグリシン残基の存在
により、免疫原性が実際に改善される。
近交系ＢＡＬＢ／Ｃマウスを、ペプチド６９配列（Ｂ３
）と５つのＴｈ−セルエピトープ（ＴＩ−Ｔｈ）の１つ
もしくは天然ＨＲＶ２ ＶＰ２配列の１０個の余分な
アミノ酸残基からなる６個のラインウィルスペプチドで
免疫した。ペプチドＮαは以下の通りである。
）と５つのＴｈ−セルエピトープ（ＴＩ−Ｔｈ）の１つ
もしくは天然ＨＲＶ２ ＶＰ２配列の１０個の余分な
アミノ酸残基からなる６個のラインウィルスペプチドで
免疫した。ペプチドＮαは以下の通りである。
ペプチドＮｏ 配 列
５２６（例１ ） Ｂ３＋Ｔ１＋ ｃｙｓ３１０（
例１ ） ８３＋Ｔ２＋ｃｙｓ３７１（例１ ）
８３＋Ｔ３＋ｃｙｓ５２５ （例 １ ）
Ｂ３＋ １’４＋ ｃｙｓ５２７（例１ ） Ｂ
３＋Ｔ５＋ＣｙＳ５２８ Ｂ３＋１０個の余
分なＶＰ２残基＋ｃｙｓ免疫後７日目にマｊクスを殺し
、そ径部リンパ節及びパラ大動脈リンパ節を除去した。
例１ ） ８３＋Ｔ２＋ｃｙｓ３７１（例１ ）
８３＋Ｔ３＋ｃｙｓ５２５ （例 １ ）
Ｂ３＋ １’４＋ ｃｙｓ５２７（例１ ） Ｂ
３＋Ｔ５＋ＣｙＳ５２８ Ｂ３＋１０個の余
分なＶＰ２残基＋ｃｙｓ免疫後７日目にマｊクスを殺し
、そ径部リンパ節及びパラ大動脈リンパ節を除去した。
単一のセルサスペンションを調製し、免疫化に用いたペ
プチドのそれぞれとともに３７℃で３−４日間イン↓ユ
ベートした。次いで培養液に放射標識化チミジンを添加
し、１８時間のチミジンの取り込みを調べた。細胞によ
って取り込まれたデミジンレベル。
プチドのそれぞれとともに３７℃で３−４日間イン↓ユ
ベートした。次いで培養液に放射標識化チミジンを添加
し、１８時間のチミジンの取り込みを調べた。細胞によ
って取り込まれたデミジンレベル。
を１分間当りのカウンＩ−数（ＣＰＭ）として測定し、
それぞれのペプチドに応答した”「−セル増殖活性の指
標とした。
それぞれのペプチドに応答した”「−セル増殖活性の指
標とした。
第６図に示した結果から、ペプチドＢ３＋Ｔ３（３７１
）及びＢ３＋１−４（５２５）が最も強いＴ −ｔル促
進活性を示したことが判る。これら２つのペプチドは、
ＢＡＬＢ／Ｃ？ウスのＩｎ ＶＩＶＯにおいて最も高い
免疫原性を示したく第４図）。
）及びＢ３＋１−４（５２５）が最も強いＴ −ｔル促
進活性を示したことが判る。これら２つのペプチドは、
ＢＡＬＢ／Ｃ？ウスのＩｎ ＶＩＶＯにおいて最も高い
免疫原性を示したく第４図）。
ペプチドＢ３＋Ｔ２ （３７０）も、コントロール細胞
よりも高い増殖活性を示し、またＢＡＬＢ／Ｃマウスに
おいて低いが有意な第１次抗体応答を誘導した。従って
、ｉｎ ＶｉＶＯにおいて免疫原性を示したそれぞれの
ペプチドは、ｉｎ ＶｉｔｒＯでの］−セル増殖を促進
させる配列を含んでいる。
よりも高い増殖活性を示し、またＢＡＬＢ／Ｃマウスに
おいて低いが有意な第１次抗体応答を誘導した。従って
、ｉｎ ＶｉＶＯにおいて免疫原性を示したそれぞれの
ペプチドは、ｉｎ ＶｉｔｒＯでの］−セル増殖を促進
させる配列を含んでいる。
ペプチド３７０．３７１．５２５．５２６及び５２７の
アミノ酸組成を求めた。アミノ酸分析は、Ｓｉｍｐｓｏ
ｎ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 ２５
１．１９３６１９４０、．１９７６に記載された方法に
従って行なった。得られた結果は以下の通りである。
アミノ酸組成を求めた。アミノ酸分析は、Ｓｉｍｐｓｏ
ｎ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、 ２５
１．１９３６１９４０、．１９７６に記載された方法に
従って行なった。得られた結果は以下の通りである。
０４Ｎ ２．８７（３Ｔ１．６５（２
Ｆ→Ｑ ６．３２（６
／ｌ １．９０（２Ｖ
Ｏ，８３（Ｉ Ｈ１，１２（１ ■ １．１４（Ｉ Ｌ ２．７９（３）Ｋ
Ｏ，７３（１）Ｒ３，４０（３） Ｐ ２．２７（２）■ １．０５（１） ０．９５（１） ペプチド５２５のアミノ酸分析 ４．０７（４） ２．９０（３） １．３０（１） ３．９７（４） ３．２５（３） ２．９３（３） ０．８７（１） １．８６（２） ０．７８（１） ０．７６（１） ２．２９（２） １．２４（１） ０．９５（１） ０．８６（１） ０．９６（１） ペプチド３７１のアミノ酸分析 １．９１ ２ ２．７８３ ３．９８ ４ ３．０３ ３ ０．７４１ ２．８６ ３） １．１８１ １．２６（１ ０，６９（１ ４，４７（４ ２，０８（２ ０，９７（１） １．０３（１） ペプチド５２６のアミノ酸分析 ２．６６（３ ２，８６（３ ４，０５（４ １，１１（１ ４，１９（４ ０、，８６（１ ２，９９（３ １，１４（１） ０．８５（１） ０．９１（１） ３、４１ （３） ｉ、ｏｏ（ｉ） １．０６（１） ０．９５（１） ペプチド５２７のアミノ酸 析 ２．４９（２ １，８２（２ ４，０３（４ １，２１（１ ０，９２（１ ３，０１（３ ０，９５（１ ３，１２（３ ３，１０（３） ０．９６（１） ３．３７（３） １．００（１ １，２１（１ ０，７５（１ １，０８（１ ０，９６（１
Ｏ，８３（Ｉ Ｈ１，１２（１ ■ １．１４（Ｉ Ｌ ２．７９（３）Ｋ
Ｏ，７３（１）Ｒ３，４０（３） Ｐ ２．２７（２）■ １．０５（１） ０．９５（１） ペプチド５２５のアミノ酸分析 ４．０７（４） ２．９０（３） １．３０（１） ３．９７（４） ３．２５（３） ２．９３（３） ０．８７（１） １．８６（２） ０．７８（１） ０．７６（１） ２．２９（２） １．２４（１） ０．９５（１） ０．８６（１） ０．９６（１） ペプチド３７１のアミノ酸分析 １．９１ ２ ２．７８３ ３．９８ ４ ３．０３ ３ ０．７４１ ２．８６ ３） １．１８１ １．２６（１ ０，６９（１ ４，４７（４ ２，０８（２ ０，９７（１） １．０３（１） ペプチド５２６のアミノ酸分析 ２．６６（３ ２，８６（３ ４，０５（４ １，１１（１ ４，１９（４ ０、，８６（１ ２，９９（３ １，１４（１） ０．８５（１） ０．９１（１） ３、４１ （３） ｉ、ｏｏ（ｉ） １．０６（１） ０．９５（１） ペプチド５２７のアミノ酸 析 ２．４９（２ １，８２（２ ４，０３（４ １，２１（１ ０，９２（１ ３，０１（３ ０，９５（１ ３，１２（３ ３，１０（３） ０．９６（１） ３．３７（３） １．００（１ １，２１（１ ０，７５（１ １，０８（１ ０，９６（１
第１図は、ＨＲＶ２及び他のＨＲＶについてのｖＰ１配
列を示す。 第２図は、ＨＲＶ ２及び仙のＨＲＶについてのＶＰ２
配列を示１′。 第３図は、Ｔｈ−エピトープを有するあるいは有しない
ペプチド６９に対するギニアビッグの免疫応答を示す。 第４図は、Ｔｈ−エピトープを有するあるいは有しない
ペプチド６９に対するマウスの免疫応答を示す。 第５図は、ペプチド３７０ど３７１に対する異なるハブ
ロタイブのマウスの免疫応答を示す。 第６図は、ラインウイルスペプチドに対ＪるＢＡＬＢ／
ｃマウス（＋−１−２ｄ）のＴ−セル増殖活性を示す。
列を示す。 第２図は、ＨＲＶ ２及び仙のＨＲＶについてのＶＰ２
配列を示１′。 第３図は、Ｔｈ−エピトープを有するあるいは有しない
ペプチド６９に対するギニアビッグの免疫応答を示す。 第４図は、Ｔｈ−エピトープを有するあるいは有しない
ペプチド６９に対するマウスの免疫応答を示す。 第５図は、ペプチド３７０ど３７１に対する異なるハブ
ロタイブのマウスの免疫応答を示す。 第６図は、ラインウイルスペプチドに対ＪるＢＡＬＢ／
ｃマウス（＋−１−２ｄ）のＴ−セル増殖活性を示す。
Claims (10)
- （１）（ｉ）抗原に対する抗体産生のためのＴ−セルヘ
ルプを誘導することのできるヒトライノウイルス（ＨＲ
Ｖ）のエピトープ、もしくは （ｉｉ）該エピトープのアミノ酸残基が他のアミノ酸残
基に置換された修正型エピトープであつて該修正エピト
ープがＴ−セルヘルプを誘導できるように置換されてい
る修正型エピトープ；またはそれらの薬学的に許容し得
る塩を含む合成ペプチド。 - （２）ＨＲＶ２のＶＰ１カプシド蛋白のアミノ酸残基３
５−３８、１０３−１０６または２５１−２５４；ＨＲ
Ｖ２のＶＰ２カプシド蛋白のアミノ酸残基２７−３０；
ＨＲＶ２のＶＰ４カプシド蛋白のアミノ酸残基５９−６
２；または他のＨＲＶのこれらと等価のアミノ酸残基を
該エピトプが含む請求項第１項記載の合成ペプチドまた
はその塩。 - （３）ＨＲＶ２ＶＰ１アミノ酸残基３２−４１、１００
−１０９または２５１−２６０；ＨＲＶ２ＶＰ２アミノ
酸残基２４−３３；ＨＲＶ２ＶＰ２アミノ酸残基５６−
６５；または他のＨＲＶのこれらと等価のアミノ酸残基
を該エピトープが含む請求項第１項記載の合成ペプチド
またはその塩。 - （４）更に抗体を誘導できるアミノ酸配列を含む請求項
第１−第３項のいずれか１項記載の合成ペプチドまたは
その塩。 - （５）該アミノ酸配列が、ウィルス、バクテリアまたは
プロトゾアのエピトープ、あるいは成長ホルモンのエピ
トープである請求項第４項記載の合成ペプチドまたはそ
の塩。 - （６）該エピトープが、Ｂ型肝炎ウィルス、インフルエ
ンザウイルス、口蹄疫ウィルス、ポリオウイルス、ヘル
ペスシンプレックスウィルス、狂犬病ウィルス、ＨＩＶ
−１、ＨＲＶまたは Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍのエピトー
プである請求項第５項記載の合成ペプチドまたはその塩
。 - （７）合成ペプチドが、４０個までのアミノ酸残基から
なる請求項第１−第６項のいずれか１項記載の合成ペプ
チドまたはその塩。 - （８）合成ペプチドを化学的合成法または組換えＤＮＡ
技術により製造し、次いで必要により得られる合成ペプ
チドを薬学的に許容し得る塩に変換することを含む、請
求項第１−第７項のいずれか１項記載の合成ペプチドま
たはその塩の製造法。 - （９）請求項第１−第７項のいずれか１項記載の合成ペ
プチドまたはその塩及び薬学的に許容し得る担体または
希釈剤を含むワクチン。 - （１０）請求項第１−第３項のいずれか１項記載の第１
の合成ペプチドまたはその塩と、抗体を誘導できるアミ
ノ酸配列を含む第２の合成ペプチドまたはその薬学的に
許容し得る塩を含む請求項第９項記載のワクチン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8821077.8 | 1988-09-08 | ||
| GB888821077A GB8821077D0 (en) | 1988-09-08 | 1988-09-08 | Peptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02223594A true JPH02223594A (ja) | 1990-09-05 |
Family
ID=10643257
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1234551A Pending JPH02223594A (ja) | 1988-09-08 | 1989-09-08 | ヒトライノウイルスペプチド |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPH02223594A (ja) |
| AU (1) | AU4122689A (ja) |
| DK (1) | DK442189A (ja) |
| GB (1) | GB8821077D0 (ja) |
| ZA (1) | ZA896820B (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8709274D0 (en) * | 1987-04-16 | 1987-05-20 | Wellcome Found | Peptides |
| SE470074B (sv) * | 1990-08-16 | 1993-11-01 | Replico Medical Ab | Förfarande för diagnos av picorna- och/eller flavivirusinfektion, peptider, diagnostiska antigener och vaccinkomposition med dessa peptider |
| AT503690A1 (de) | 2006-06-09 | 2007-12-15 | Biomay Ag | Hypoallergene moleküle |
| ES2324192B1 (es) * | 2008-01-30 | 2010-06-17 | PUIG BEAUTY & FASHION GROUP, S.L. | Derivados peptidicos utiles en el tratamiento, cuidado o limpieza de la piel, mucosa, cuero cabelludo o uñas. |
| EP2316481A1 (en) | 2009-10-30 | 2011-05-04 | Biomay Ag | Pharmaceutical composition for the treatment and prevention of a rhinovirus infection |
| BE1022174B1 (fr) * | 2013-03-15 | 2016-02-24 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccin |
| CN106167518B (zh) * | 2015-05-21 | 2021-01-15 | 厦门大学 | 截短的轮状病毒vp4蛋白及其用途 |
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1988
- 1988-09-08 GB GB888821077A patent/GB8821077D0/en active Pending
-
1989
- 1989-09-06 EP EP89309025A patent/EP0358485A3/en not_active Withdrawn
- 1989-09-06 ZA ZA896820A patent/ZA896820B/xx unknown
- 1989-09-07 DK DK442189A patent/DK442189A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-09-08 AU AU41226/89A patent/AU4122689A/en not_active Abandoned
- 1989-09-08 JP JP1234551A patent/JPH02223594A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8821077D0 (en) | 1988-10-05 |
| EP0358485A3 (en) | 1990-06-13 |
| ZA896820B (en) | 1990-06-27 |
| DK442189D0 (da) | 1989-09-07 |
| DK442189A (da) | 1990-03-09 |
| EP0358485A2 (en) | 1990-03-14 |
| AU4122689A (en) | 1990-03-15 |
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