JPH0223560B2 - - Google Patents

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JPH0223560B2
JPH0223560B2 JP55148267A JP14826780A JPH0223560B2 JP H0223560 B2 JPH0223560 B2 JP H0223560B2 JP 55148267 A JP55148267 A JP 55148267A JP 14826780 A JP14826780 A JP 14826780A JP H0223560 B2 JPH0223560 B2 JP H0223560B2
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alkylene
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Rejina Kuura Maria
Menge Ururitsuhi
Moru Mihiaeru
Anasutashiadeisu Kurisutei
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Dea Renchuraa Arutsunaimitsuteru Unto Co GmbH
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BIOTEKUNOROGITSUSHE FUORUSHUNKU MBH G
Dea Renchuraa Arutsunaimitsuteru Unto Co GmbH
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Publication of JPH0223560B2 publication Critical patent/JPH0223560B2/ja
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明はインターフエロンの精製方法に関する
ものである。例えば、小林茂保著「インターフエ
ロン」講談社、（東京）1975年；D.A.J.Tyrrell著
「インターフエロンとその臨床的可能性」W.
Heinemann Medical Books社（ロンドン）
1976年；「蛋白質、核酸および酵素」21（４）、
1976年（出版者：共立出版）；Vilvek等著、Ann.
NY Acad.Sci.（1977年）703〜710頁；Havell等
著、J.gen.Virology、38（1977年）51〜59頁；お
よびKnight著、Proc.nat.Acad.Sci.73（1976年）
520〜523頁に詳細に説明されているように、イン
ターフエロンは一定の蛋白質様の物質に対する集
合概念である。 製造法に関しては、例えば次の米国特許明細書
第3144390号；第3256152号；第3265581号；第
3548053号；第3560611号；第3629235号；第
3660564号；第3679654号；第3699222号；第
3719754号；第3773924号；第3775398号；第
3800035号；第3803302号；第3843629号；第
3852423号；第3929991号；第3931397号；第
3932617号；第3966707号；第39707749号；第
3975344号；第3975520号；第3980776号；第
3981991号；第4007086号；第4017359号；第
4017600号；第4024222号；第4024241号；第
4039656号；第4041152号；第4049794号；第
4061538号；第4100150号；第4124702号；第
4130641号；第4132775号；第4140761号および西
ドイツ特許公開公報第2474781号に記載されてい
る。 インターフエロンの精製においては、随伴蛋白
質の分離が精製を今まで困難なものにしていた。 今回、本発明によつて、例えば(a)ポリオキシア
ルキレングリコールの誘導体または(b)多価アルコ
ールとアルキレンオキシドとの反応生成物のよう
な、ポリエーテルの誘導体である。系に可溶なイ
オン交換体の存在下の水性多相系に、インターフ
エロンを分配させることを特徴とするインターフ
エロンの精製方法を提案する。 この本発明による方法では、インターフエロン
に対しては100またはそれ以上の分配係数を生ず
るが、随伴する蛋白質に対しては１より小さい分
配係数を生ずるにすぎない。 水性多相系に可溶なイオン交換体である点が重
要である(a)ポリオキシアルキレングリコールの誘
導体または(b)多価アルコールとアルキレンオキシ
ドとの反応生成物は、当業者の使用に供されてい
るものである。このような溶解性イオン交換体を
含有する水性多相系の製造に関して、当業者はポ
リエーテルまたはポリエーテル誘導体を含有する
公知の水性多相系を用いることができる。これに
関しては、例えば西ドイツ特許第2639129号明細
書が参考となる：引用文献を含む、この特許明細
書の公開内容も本明細書に共に含まれる。 本願発明は次の(1)，(2)および(3)の過程からなる
インターフエロンの精製方法である。即ち、 (1) 水性多相系中に該系に可溶な(a)ポリオキシア
ルキレングリコールおよび(b)多価アルコールと
アルキレンオキシドとの反応生成物の誘導体か
ら選択される少なくとも１つのポリエーテル誘
導体であるイオン交換体の存在下で粗インター
フエロン−α又は−βを分配させること（該イ
オン交換体は１個以上の炭素原子が結合されて
いる基である。 −（R1）0〜1―――R2を有し、−R1−R2が、 −NH−（CH2）1〜14―――R2， −Ｏ−（CH2）1〜14―――R2， −NH−CO−（CH2）1〜14―――R2， −NH−（CH2）1〜14―――NH−CO−（CH2）1〜3―――R
2， −NH−CH2−CH2−（Ｏ−CH2−CH2）1〜4―――R2 および−Ｏ−CO−（CH2）1〜13―――R2 からなる群から選択され、かつ、R2が、 −Ｐ（Ｏ）（OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（OH）2， −Ｏ−Ｐ（Ｓ）（OH）2，−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（OH）2 およびこれらの塩からなる群から選択され
る。）、 (2) インターフエロン−α又は−β含有の一相を
含めて各相を分離すること、および (3) 前記インターフエロン−α又は−βを回収す
ることからなるインターフエロン−α又は−β
の精製方法である。 該イオン交換体は１分子中以上の−（R1）0〜1―――
R2を有する。該(a)および(b)の化合物は、例えば
平均分子量が200〜40000、望ましくは500〜30000
および特に1000〜25000である。 本発明による方法では、例えば、グリコール、
１，３−プロパンジオール、１，２−プロパンジ
オールの重縮合生成物またはこれらの混合重縮合
生成物である(a)ポリオキシアルキレングリコール
の誘導体；または例えばグリセリン、または２，
２−オキシメチル−ブタノール−１のような３価
アルコールと、例えばエチレンオキシドまたはプ
ロピレンオキシドのようなアルキレンオキシドと
の反応生成物(b)の誘導体から選択されるポリエー
テル誘導体であるイオン交換体（以下、本イオン
交換体という）を用いることも可能である。 特に本イオン交換体が有する基−（R1）0〜1―――R2
のR1の０〜１が０の場合、本発明において、例
えば、下記一般式で表わされる化合物を用いるこ
とができる。 一般式： R2−（C2〜3アルキレン−Ｏ）o−C2〜3アルキレン
−R2（式中、R2は−Ｐ（Ｏ）（OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｏ）
（OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（OH）2，−Ｓ−Ｐ（Ｏ）
（OH）2およびこれらの塩からなる群から選択さ
れ、R2の１つは、C1〜5アルコキシ基またはOH基
によつて置換されることができ、ｎは該(a)ポリオ
キシアルキレングリコールの平均分子量が1000〜
25000となる値である。）この場合、次の基は下記
のような意味を有している： C2〜3アルキレン＝−CH2−CH2−，−CH2−
CH2−CH2− または−CH（CH3）−CH2−； C1〜5アルコキシ基＝メトキシ、エトキシ等 本イオン交換体のR2は、リチウム、ナトリウ
ムまたはカリウム塩の形態で用いることができ
る。 本発明の方法に用いることのできる本イオン交
換体を得るために、当業者は周知のアルキル化反
応およびアシル化反応を利用することができる。 当業者はインターフエロンの有効性に精通して
いる（例えば、「蛋白質、核酸および酵素」20
（６）（1975年）616〜643頁；出版人：共立出版社
（東京）参照）。随伴蛋白質は、例えば、M.M.
BradfordによるAnalyt.Biochem.，72（1976年）
248〜254頁によつて、定義されている。それ故、
一般に、インターフエロンまたは随伴蛋白質に対
する分配係数を測定し、適当な本イオン交換体を
熟練したやり方で選択することが、当業者にとつ
て技術的に可能であると云うことができる。 本発明による方法には、本イオン交換体および (i) 多糖類および／または (ii) 少なくとも１個の無機塩または有機塩 を含有する水性多相系、特に水性２相系を用いる
ことができる。 一方では本イオン交換体、他方では、多糖類も
しくは複数の多糖類または無機もしくは有機の塩
あるいは複数の無機もしくは有機の塩を、相形成
体と呼ぶことができる。 多糖類としては、メチルセルロース、エチルヒ
ドロキシエチルセルロース、DEAE−セルロー
ス、アルカリカルボキシメチルセルロース、デキ
ストラン、例えばヒドロキシプロピルデキストラ
ン、DEAE−デキストラン、硫酸デキストランお
よびアルカリカルボキシメチルデキストランのよ
うなデキストラン誘導体、および／またはフイコ
ールを用いることができる。 無機塩に対する例としては、例えばリン酸のよ
うな鉱酸の塩であることが望ましいアンモニウム
塩およびアルカリ塩、特にリン酸カリウムおよ
び／またはリン酸水素カリウムを用いることがで
きる。 有機塩の例としては、カルボン酸の塩であるこ
とが望ましいアンモニウム塩およびアルカリ塩、
特にギ酸ナトリウムおよび酒石酸ナトリウムカリ
ウムを用いることができる。 本発明による方法をPH５〜８、望ましくは6.5
〜7.5および特に6.7〜7.0において実施するなら
ば、随伴蛋白質は特に小さい分配係数を有するこ
とになる。この事実は特にヒトの線維芽細胞から
のインターフエロンと、ビスリン酸ポリエチレン
グリコールモノエステルおよびリン酸カリウムを
含有する水性２相系とに対して云えることであ
る。 インターフエロンは本イオン交換体から、例え
ばクロマトグラフイによつて分離することができ
る。 次に、本発明を実施例と図面によつて更に詳細
に説明する。 実施例 １ バイオフエロン社（Bioferon；西ドイツ）製
のインターフエロン−βを随伴蛋白質と共に、水
性２相系中で分配した。この組成と結果は第２表
と第３表から知ることができる。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】 注釈：
d＝１日間における平行滴定
分配係数が10Ｋ50である場合には、下層に
対する上層の各容量比はインターフエロン濃縮に
適している。インターフエロンは殆んど全量的に
上層に移行するので、容量比が小さいと云うこと
は上層において濃縮した形でインターフエロンが
得られ、しかも本イオン交換体の小量のみを必要
とするにすぎないと云う利点を提供する；この実
態は第４表に実験133と132の比較によつて示す。
【表】 実施例２ （第１図） 12重量％−ビスホスホール酸ポリエチレングリ
コールモノエステル（平均PEG−分子量6000、
適定した置換度1.2）、12重量％−リン酸カリウム
および0.5mNaClを含有する水性２相系を製造し
た。この場合、インターフエロンに随伴する蛋白
質の分配係数がPH−値に依存することが確認され
た。得られた結果を第１図に図示する。インター
フエロン精製に都合の良い結果は約6.8のPH−値
において得られた。 実施例 ３ 実験122（実施例１）における２相系の上層を次
のように処理した。上層を下層から分離し、1/2
量の水で希釈し、次に、ブルーセフアロース−Cl
−6B（Pharmacia）を用いて、クロマトグラフイ
分析を通常のように行なつた。PH３において
0.02mリン酸ナトリウム緩衝液および0.15m塩化
ナトリウムと平衡状態にあるイオン交換体柱を用
いることができる。ポリエチレングリコール誘導
体はインターフエロンと異なつて吸着されなかつ
た（点滴テスト）。インターフエロンは50％エチ
レングリコール（または60％プロピレングリコー
ル）までおよび1mNaClの濃度勾配によつて、最
初に溶離した（全体を0.02mリン酸ナトリウム緩
衝液（PH＝３）において行なう）。 実施例 ４ 実験122の上層の処理を代替的に、次のように
行なつた。再び、上層を分離し、1/2量の水で希
釈した。次に、0.02mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH＝7.4）と平衡状態にある、ConA−セフアロ
ース−交換体柱においてクロマトグラフイ分析し
た。この交換体柱はエチレングリコール誘導体を
殆んど吸着しないが、インターフエロンはα−メ
チル−Ｄ−マンノシドと1mNaClの存在下で、50
％エチレングリコールまでの濃度勾配によつて最
初に溶離する（全てを0.02mリン酸ナトリウム緩
衝液（PH＝7.4）において行なう）。 フイコール＝蔗糖の重合によつて得られる、平 均分子量約400000の合成多糖類 デキストラン＝実験式（C6H10O5）Xを有する、
グルコースからの多糖類 ConA＝コンカナバリンＡ（Pharmacia Fine
Chemicals AB） シバクロンブルー＝反応性ブルー色指数 261211 クマシーブリリアントブルー＝酸性ブルー 色指数90または42665 実施例 ５ 粗インターフエロン−αを随伴蛋白質と共に下
記第５表に示した組成の水相系中で分配し、同表
に示した結果を得た。
【表】 以下では、本イオン交換体としてあるいはこれ
を得るために用いることのできるリン含有ポリエ
ーテル誘導体とその製造法を更に詳細に説明す
る。このリン含有ポリエーテル誘導体は次の一般
式： （式中、ｐ＝１〜800、 a1ｍ＝１、 Ａ＝酸素原子 Ｘ＝塩素原子またはヒドロキシル基、 Ｙ＝Ｘまたは、炭素原子１〜５を有するアルコ
キシ残基、 Ｚ＝酸素原子または硫黄原子；または a2ｍ＝１ Ａ＝酸素原子 Ｘ＝炭素原子１〜５個を有するアルコキシ残
基、アルキレン基中に炭素原子０〜５個を有す
るフエニルアルコキシ残基、炭素原子１〜５個
を有するアルキルアミノ残基、アルキル基中に
それぞれ炭素原子１〜５個を有するジアルキル
アミノ残基、アルキレン基中に炭素原子０〜５
個を有するフエニルアルキルアミノ残基、アル
キレン基中にそれぞれ炭素原子０〜５個を有す
るビスフエニルアルキルアミノ残基またはｐ−
ニトロフエノキシ残基、これらの基においてフ
エニルアルコキシ残基、フエニルアルキルアミ
ノ残基およびビスフエニルアルキルアミノ残基
のフエニル基は、ヒドロキシル基、炭素原子１
〜５個を有するアルキル残基または炭素原子１
〜５個を有するアルコキシ残基によつて置換す
ることができる、 Ｙ＝Ｘまたは、炭素原子１〜５個を有するアル
コキシ残基 Ｚ＝酸素原子；あるいは a3ｍ＝１、 Ａ＝酸素原子、 Ｘ＝ヒドロキシル残基 Ｙ＝炭素原子１〜５個を有するアルキルチオ残
基、炭素原子２〜５個を有するアミノアルキル
チオ残基、またはアルキレン基に炭素原子１〜
５個を有するカルボキシアルキルチオ残基、お
よび Ｚ＝酸素原子；または ｂｍ＝１ Ａ＝硫黄原子、 Ｘ＝Ｙ＝ヒドロキシル残基および Ｚ＝酸素原子；あるいは ｃｍ＝０ Ｘ＝Ｙ＝ヒドロキシル残基、炭素原子１〜５個
を有するアルコキシ残基、アルキレン基中に炭
素原子０〜５個を有するフエニルアルコキシ残
基、この場合はフエニル基をヒドロキシル残
基、炭素原子１〜５個を有するアルキル残基ま
たは炭素原子１〜５個を有するアルコキシ残基
によつて置換することができる、またはアルキ
ル基中に炭素原子１〜５個を有するトリアルキ
ルシリルオキシ残基、および Ｚ＝酸素原子） で表わされる化合物および、２つの
【式】 基の１つが炭素原子１〜５個を有するアルコキシ
基によつて置換されている誘導体、アルカリ金属
塩、ならびにアンモニアおよびアミンまたはリン
の酸類およびカルボン酸による塩である。 前記化合物のポリエーテル鎖はエチレングリコ
ール単位、プロピレングリコール単位またはイソ
−プロピレングリコール単位またはこれらの単位
の幾つかから構成されている；この場合Ｐは３〜
250、望ましくは30〜160の数を有することができ
る。 アルコキシ残基の例は、メトキシ−、エトキシ
−およびプロポキシ残基である。場合によつては
核置換しているフエニルアルコキシ基の例は、ア
ルキレン基に炭素原子０〜１を有する、場合によ
つては核置換しているアルコキシ残基である。ア
ルキルアミノ残基とジアルキルアミノ残基に対す
る例は、メチルアミノ−、エチルアミノ−または
ジメチルアミノ−、ジエチルアミノ−およびジプ
ロピルアミノ残基である。場合によつては核置換
しているフエニルアルキルアミノ残基とビスフエ
ニルアルキルアミノ残基に対する例は、アルキレ
ン基に炭素原子０〜１個を有する、場合によつて
は核置換しているフエニルアルキルアミノ−また
はビスフエニルアルキルアミノ残基である。アル
キルチオ残基に対する例は炭素原子１〜３個を有
するアルキルチオ残基である。アミノアルキルチ
オ残基に対する例は炭素原子２〜３個を有するア
ミノアルキルチオ残基である。カルボキシアルキ
ルチオ残基に対する例はアルキレン基に炭素原子
１〜３個を有するカルボキシアルキルチオ残基で
ある。トリアルキルシリルオキシ残基に対する例
はトリメチルシリルオキシ残基である。 核置換しているフエニルアルコキシ−、フエニ
ルアルキルアミノ−およびビスフエニルアルキル
アミノ残基の核置換基としては、メチル−、エチ
ル−、プロピル−、メトキシ−、エトキシ−およ
び／またはプロポキシ残基が挙げられる。 塩としては、リンの酸類の塩、特にアンモニウ
ム−、リチウム−、ナトリウム−またはカリウム
塩が挙げられる。 全ての化合物を製造するために、ポリエチレン
グリコール、プロピレングリコール、ポリ−イソ
プロピレングリコールまたはこれらの混合ポリマ
ーを出発物質として用いることができる。 製造方法を以下に説明する。 前記一般式において、ｍ＝１；Ａ＝酸素原
子；Ｘ＝塩素原子またはヒドロキシル残基；Ｙ
＝Ｘまたは炭素原子１〜５個を有するアルコキ
シ残基である化合物の製造。 リン酸ハロゲン化物を製造するために、リン
酸トリアルキルエステル（例えば、トリエチル
ホスフエート）またはジクロルメタンのような
溶剤を使用または使用せずに、例えばトリエチ
ルアミンまたはピリジンのような第３塩基ある
いはモレキユラーシーブ（例えば、0.4nm）の
ような酸捕捉体の存在下で、ポリオキシアルキ
レングリコールをホスホールオキシクロリドま
たはピロホスホリルクロリドと反応させること
ができる。得られたリン酸ハロゲン化物を水に
よつてまたは最初に化学量論量の1/2量のC1〜5
アルコールを用いて処理し、次に水によつて加
水分解すると、遊離のリン酸を生ずる。 溶融物中で五酸化リンと85％リン酸（縮合リ
ン酸）の混合物を反応させることによつても、
遊離のリン酸を生ずることができる。反応混合
物は加水分解と無水エタノールからの再結晶に
よつて精製することができる。 前記一般式において、ｍ＝１；Ａ＝酸素原
子；Ｘ＝Ｙ＝塩素原子、ヒドロキシル残基；Ｚ
＝硫黄原子である化合物の製造。 例えば、ポリオキシアルキレングリコールを
チオホスホリルクロリドと、トリエチルホスフ
エートのようなリン酸トリアルキルエステル等
の溶剤中で、反応させることによつて、このよ
うな化合物を製造することができる。 前記一般式において、ｍ＝１；Ａ＝酸素原
子；Ｘ＝Ｙ＝炭素原子１〜５個を有するアルコ
キシ残基、アルキレン基に炭素原子０〜５個を
有する、場合によつては核置換しているフエニ
ルアルコキシ残基、アルキル基に炭素原子１〜
５個を有するアルキルアミノ−またはジアルキ
ルアミノ残基、アルキレン基に炭素原子０〜５
個を有する、場合によつては核置換しているフ
エニルアルキルアミノ−またはビスフエニルア
ルキルアミノ残基；ｐ−ニトロフエノキシ残
基；Ｚ＝酸素原子である化合物の製造。 このエステルは、で得られた遊離のリン酸
を通常のやり方でエステル化することによつて
も、またで得られたリン酸ハロゲン化物をア
ルコールと反応させることによつても得ること
ができる。１によつて得られたリン酸ハロゲン
化物をアミンと反応させる場合には、リン酸ア
ミドを得ることができる。 前記一般式において、ｍ＝１；Ａ＝酸素原
子；Ｘ＝ヒドロキシル残基；Ｙ＝炭素原子１〜
５個を有するアルキルチオ残基、炭素原子２〜
５個を有するアミノアルキルチオ残基、アルキ
レン基に炭素原子１〜５個を有するカルボキシ
アルキルチオ残基、Ｚ＝酸素原子である化合物
の製造。 アルキルチオ残基を有する化合物は、例えば
によつて得られた末端残基（LiO）2P（Ｓ）−
Ｏ−を有する化合物と、トリアルキルホスフエ
ートとを水性媒質中で反応させることによつ
て、得ることができる。前記によつて得られ
た化合物を、炭素原子２〜５個を有するアミノ
アルキルハロゲン化物またはそのハロゲン化水
素化物と反応させることによつて、アミノアル
キルチオ残基を有する化合物を製造することが
でき、例えば、オメガ−ブロムアルキシアミン
またはその臭素化水素化物を用いることができ
る。アルキレン鎖に炭素原子１〜５個を有する
ハロゲン化カルボン酸、例えば酢酸ブロムとの
反応によつても、カルボキシアルキルチオ残基
を有する化合物を製造することができる。３例
の場合全てに、硫黄原子の（LiO）2P（Ｓ）−Ｏ
−残基がアルキル化される。 前記一般式において、ｍ＝１；Ａ＝硫黄原
子；Ｘ＝Ｙ＝ヒドロキシル残基；Ｚ＝酸素原子
である化合物の製造。 このような化合物を製造するために、例えば
ポリオキシアルキレングリコールを、臭化チオ
ニルのようなハロゲン化チオニルとアミン存在
下の溶液中で、例えばトリエチルアミン存在下
のトルエン中で、反応させることができる。得
られた、末端にハロゲン原子を有するジハロゲ
ン化物をAokeerfeldt反応で、（O-）2P（Ｏ）−Ｓ
−残基を有する化合物に転換することができ、
例えば水／DMF−混合物中で（LiO）3PSと反
応させることができる。得られた化合物から公
知の方法で遊離の酸を得ることができる。 前記一般式において、ｍ＝０；Ｘ＝Ｙ＝ヒド
ロキシル残基、炭素原子１〜５個を有するアル
コキシ残基、アルキレン基に炭素原子０〜５個
を有する、場合によつては核置換しているフエ
ニルアルコキシ残基、アルキル基に炭素原子１
〜５個を有するトリアルキルシリルオキシ残
基；Ｚ＝酸素原子である化合物の製造。 このような化合物を製造するために、によ
つて得られた、末端にハロゲン原子を有する化
合物にMichaelis−Arbusov反応を行ない、ト
リアルキル亜リン酸と反応させて、リン酸エス
テルを得ることができる。このようなエステル
はMichaelis−Becker−反応によつても得られ
るが、この方法の場合には、末端にハロゲン原
子を有する化合物をジアルキルリン酸アルカ
リ、例えばジアルキルリン酸ナトリウムと、例
えばベンゼン、トルエンまたはアルコールのよ
うな溶剤中で反応させる。得られたエステルを
例えば濃塩酸のような酸によつて直接ケン化し
て、遊離のリン酸を生成することができる。し
かしながら、リン酸エステルを最初に、例えば
塩化または臭化トリメチルシリルのようなハロ
ゲン化トリアルキルシリルと反応させ、次に水
によつてケン化することも可能である。このケ
ン化方法は酸によるケン化方法に比べて緩和で
ある。Michaelis−Arbusov−反応において、
トリアルキル亜リン酸の代りに、核置換してい
る場合もあるトリフエニル亜リン酸を用いるこ
ともできる。 前記一般式において、２つのYXP（Ｚ）−Ｏ
−基の１つが、炭素原子１〜５個を有するアル
コキシ基によつて置換されている化合物の製
造。 末端OH基の１つがC1〜5−アルキル基によつ
てエーテル化されているようなポリオキシアル
キレングリコールを出発物質に用いることによ
つて、このような化合物を製造することができ
る。 前記一般式の化合物のカルボン酸塩およびリ
ンの酸類の塩の製造。 このような塩がすでに前記したものでないか
ぎり、通常の中和反応によつて製造することが
できる。
【図面の簡単な説明】
第１図は、粗インターフエロンの精製におい
て、随伴蛋白質の分配係数がPH−値に依存するこ
とを示すものである（実施例２参照）。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ (1) 水性多相系中に該系に可溶な(a)ポリオキ
    シアルキレングリコールおよび(b)多価アルコー
    ルとアルキレンオキシドとの反応生成物の誘導
    体から選択される少なくとも１つのポリエーテ
    ル誘導体であるイオン交換体の存在下で粗イン
    ターフエロン−α又は−βを分配させること
    （該イオン交換体は１個以上の炭素原子が結合
    されている基である。 −（R1）0〜1―――R2を有し、−R1−R2が、 −NH−（CH2）1〜14―――R2， −Ｏ−（CH2）1〜14―――R2， −NH−CO−（CH2）1〜14―――R2， −NH−（CH2）1〜14―――NH−CO−（CH2）1〜3―――R
    2， −NH−CH2−CH2−（Ｏ−CH2−CH2）1〜4―――R2 および−Ｏ−CO−（CH2）1〜13―――R2 からなる群から選択され、かつ、R2が、 −Ｐ（Ｏ）（OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（OH）2， −Ｏ−Ｐ（Ｓ）（OH）2，−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（OH）2 およびこれらの塩からなる群から選択され
    る。）、 (2) インターフエロン−α又は−β含有の一相を
    含めて各相を分離すること、および (3) 前記インターフエロン−α又は−β含有相か
    ら精製されたインターフエロン−α又は−βを
    回収することからなるインターフエロン−α又
    は−βの精製方法。 ２ １種以上のイオン交換体が１以上の−（R1
    ）0〜1―――R2を有する特許請求の範囲第１項に記載の
    方法。 ３ 該ポリオキシアルキレングリコールがエチレ
    ングリコール、１，３−プロパンジオール、１，
    ２−プロパンジオールおよびこれらの混合物の重
    縮合生成物であり、多価アルコールとアルキレン
    オキシドとの反応生成物が３価アルコールとアル
    キレンオキシドとの反応生成物であることを特徴
    とする、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ４ ３価アルコールがグリセリンまたは２，２−
    ヒドロキシメチルブタン−１−オールであり、ア
    ルキレンオキシドがエチレンオキシドまたはプロ
    ピレンオキシドであることを特徴とする特許請求
    の範囲第３項に記載の方法。 ５ 該重縮合生成物および３価アルコールとアル
    キレンオキシドとの反応生成物の平均分子量が
    200〜40000である特許請求の範囲第３項に記載の
    方法。 ６ 該平均分子量が500〜30000である特許請求の
    範囲第５項に記載の方法。 ７ 該平均分子量が1000〜25000である特許請求
    の範囲第６項に記載の方法。 ８ 該イオン交換体が下記一般式で表わされる特
    許請求の範囲第１項に記載の方法。 一般式： R2−（C2〜3アルキレン−Ｏ）o−C2〜3アルキレン
    −R2（式中、R2は−Ｐ（Ｏ）（OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｏ）
    （OH）2，−Ｏ−Ｐ（Ｓ）（OH）2，−Ｓ−Ｐ（Ｏ）
    （OH）2およびこれらの塩からなる群から選択さ
    れ、R2の１つは、C1〜5アルコキシ基またはOH基
    によつて置換されることができ、ｎは該(a)ポリオ
    キシアルキレングリコールの平均分子量が1000〜
    25000となる値である。） ９ R2がリチウム塩、ナトリウム塩またはカリ
    ウム塩の形態である特許請求の範囲第１項〜第８
    項何れか１項に記載の方法。 １０ 該水性多相系が２相系であり、更に、(i)多
    糖類および／または(ii)少なくとも１種類の無機ま
    たは有機塩である相形成体を含有する特許請求の
    範囲第１項または第２項に記載の方法。 １１ 該多糖類がメチルセルロース、エチルヒド
    ロキシセルロース、DEAE−セルロース、アルカ
    リ金属カルボキシメチルセルロース、デキストラ
    ン、改質デキストラン、ヒドロキシプロピルデキ
    ストラン、DEAE−デキストラン、硫酸デキスト
    ラン、アルカリ金属カルボキシメチルデキストラ
    ン、またはフイコールである特許請求の範囲第１
    ０項に記載の方法。 １２ 該無機または有機塩が鉱酸またはカルボン
    酸のアンモニウム塩またはアルカリ金属塩である
    特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 １３ 該無機または有機塩がリン酸、ギ酸または
    酒石酸のアンモニウム塩またはアルカリ金属塩で
    ある特許請求の範囲第１０項に記載の方法。 １４ 該水性多相系がPH５〜８に維持される特許
    請求の範囲第１項に記載の方法。 １５ 該水性多相系がPH6.5〜7.5に維持される特
    許請求の範囲第１項に記載の方法。 １６ 該水性多相系がPH6.7〜7.0に維持される特
    許請求の範囲第１項に記載の方法。
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