JPH03504965A

JPH03504965A - 新規アルキルホスホノ―及びホスホセリン、その製造方法及びこれを含有する薬剤

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Publication number: JPH03504965A
Application number: JP1504109A
Authority: JP
Inventors: ブラッハヴィッツ・ハンス; シェーンフェルト・ラインヒルト; ランゲン・ペーター; パルタウフ・フリードリッヒ; ヘルメッテル・アルビン
Original assignee: アスタ・メデイカ・アクチエンゲゼルシヤフト
Priority date: 1988-04-19
Filing date: 1989-04-13
Publication date: 1991-10-31
Also published as: FI905051A0; NO177712C; DE58904595D1; HUT51632A; EP0413700A1; NO177712B; US5155099A; EP0338407B1; HU204278B; FI91966B; WO1989010370A1; NO904416D0; DK167810B1; FI91966C; NO904416L; EP0338407A1; DK250090D0; ES2056998T3; DK250090A; GR3008598T3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規アルキルホスホノ−及びホスホセリン、その製造方法及びこれを含有する薬剤本発明は、新規アルキルホスホノ−及び−ホスホコリン、その製造方法及びその使用に関する。

Ｒ，ヒート（Ｈｉｒｔ）、　Ｒ，ベーヒトホールド（Ｂｅｒｃｈｔｈｏｌｄ）ファルマセウチ力　アクタ　へルペチカ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ　Ａｃｔａ　Ｉ（ｅｌｖｅｔｉｃａ）、　３３（１９５８）＋　３４９−３５６に、アルキルホスホコリンの製造方法が記載されている。ヘキサデシルホスホコリンの細胞性塞栓効果又は毒性は、Ｈ，Ｒ，シエーフ（Ｓｃｈｅｒｆ）等、リピド（Ｌｉｐｉｄｓ）２２．　（１９８７）、９２７−９２９第９２９頁に、Ｃ，ムショオール（Ｍｕｓｃｈｏｌ）等、リビド（Ｌｉｐｉｄｓ）２２、（１９８７）９３０− ９３４に記載されている。

今や、優れた細胞性塞栓及びウィルス性塞栓作用を有する新規アルキルホスホノ −及び−ホスホセリンを見い出すことができた。

本発明の対象は、式ページの一般式■の化合物である。式中背はＣ−原子数６− ３０の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素残基であり、これは場合によりハロゲン、残基ＯＲ，、ＳＲ，、ＮＲ＋Ｒｚによって置換されていてよい、この際Ｒ１及びＲｔは夫々水素原子又はＣ−原子数１−６のアルキル−又はアシル基を示す又は基ＯＲ’　を示す、この際Ｒ°はＣ−原子数６＝３０の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素を示し、これは場合により残基ＯＲ，、ＳＲ，又はＮＲ，ＲＺによって置換されていてよい、この際Ｒ３及びＲ２は上述の意味を有する。

式■中、ＲはＣ−原子数６−３０、好ましくはＣ−原子数１０−２５の直鎖状又は分枝状、飽和又は不飽和脂肪族炭化水素を示す。この様な例は、デシル−、ドデシル−、テトラデシル−、ヘキサデシル−、オクタデシル−、アラキニルー、１，７−メチル−ｎ−オクタデシル残基又はシス−９−ｎ−オクタデセニル基である。

これらの残基は、ハロゲン、たとえばＣ１，Ｂｒ、　Ｆによって又は残基ＯＲ＋、ＳＲ＋、ＮＲ１Ｒｚによって置換されていてもよい。そのＷ？、　Ｒ＋及びＲ２は相互に無関係に水素又はＣ−原子数１−６のアルキル−又はアシル基、たとえばメチル−、エチル−１ｎ−プロとルー、ｉ−プロピル−１ｎ−７’チル−１ｉ−フチルー、ペンチル〜、ヘキシル基又はたとえばホルミル−、アセチル−、プロピオニル−、ブチリル−１ｉ−ブチリル基を示す。

Ｒは更に基ＯＲ”を示し、その際「はＣ−原子数６ないし３０の直鎖状又は分枝状、飽和又は不飽和脂肪族炭化水素、たとえばデシル−、ドデシル−、テトラデシル−、ヘキサデシル−、オクタデシル−１１，７−メチル−ｎ−オクタデシル −基又はシス−９−ｎ−オクタデセニル基を示す。これらの残基は、場合により基ＯＲ＋　、　ＳＲ＋　、　ＮＲ１Ｒ２によって置換されていてよく、その際Ｒ７及びＲ２は相互に無関係に水素又はＣ−原子数１−６のアルキル−又はアシル基を示す。

アルキルホスホノ−及び−ホスホノセリンは、生理学的に活性な天然に生じるホスホリピド、たとえばホスファチジルセリンと一定の構造上の関係を有する。しかしそれらは、それらがグリセロール成分を含有しない点でこれと異なる。天然に生じるホスファチジルセリンに比して、本発明によるアルキルホスホノ−及び −ホスホノセリンは、より高い生物安定性を有する。これらは潜在的な細胞性塞栓及びウィルス性塞栓を示す。

ａ）弐ページの一般式■なる化合物（式中Ｒは上述の意味を有し、そしてＡ及びＢはヒドロキシ基又はＲが基ＯＲ’　を示す場合、＾は更にハロゲン、好ましくはＣ１及びＢｒ、そしてＢは更にハロゲン、好ましくはＣＩ及びＢｒ、アルコキシ又はアリールオキシ基を示すことができる。）又は場合によりこの化合物の塩と弐ページの一般式ｍのセリン誘導体（式中Ｘはベンジル、ｔ−ブチル、フタルイミドメチル、イソプロピル、ヘンズヒドリル又は常法で離脱しうる他の保護基、ＹはＮ−ベンゾイルオキシカルボニル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル、Ｎ−フタロイル又は常法で離脱しうる他の保護基を示す、）とを、場合により縮合剤の存在下に反応させて、式ページの一般式■なる化合物となし、保！Ｉ基を離脱し、生成物を場合により塩に変えるあるいはｂ）弐ベージの一般式■の化合物〔式中Ｒは上述の意味を有し、そして２はＣ−原子数１−６のアルキル基を示し、これは場合によりＣＩ、　Ｂｒ又はＦによって置換されていてよい又は残基（式中Ｃ及びＤは相互に無関係にＨｌ又はメチルを示し、そしてＥはメチルを示し、そしてＥはメチルを示し、ｎは２−６を示す。）を示す。〕と〕Ｌ−セリとを、ホスホリパーゼＤの存在下に反応させて、製造することができる。

出発化合物として使用される、式ページの一般式■の化合物を、公知方法で対応するアルキルプロミド　Ｒ−Ｂｒ及びトリメチルホスフィツトから、先ずアルキルホスホン酸ジメチルエステルを合成し、これをトリメチルシリルクロリドとヨウ化ナトリウムの混合物でトリメチルシリルエステルに変え、これを水の作用によって加水分解することで製造することができる。Ｒが残基ＯＲ’　を示す場合、リン酸エステル、リン酸ジハロゲニド又はリン酸エステルハロゲニドを出発化合物として使用する。対応するリン酸ジクロリドが、公知方法でアルキルアルカノールとホスホルオキシクロリドとの反応によって得ることができる。

一般式■の化合物の反応は、一般にこの化合物を塩基の塩、たとえばピリジンに変え、次いでこの塩をセリン−誘導体と反応させて行われる０反応は好ましくは縮合剤の存在下に、たとえば２，４．６−　）リイソプロピルベンゾールスルホクロリドの存在下に無水条件下で及び好ましくは不活性有機溶削の存在下に行われる。溶剤として、たとえばピリジンが挙げられる。

反応成分を、常法で等モル量で使用するが、セリン誘導体を４倍モル過剰まで使用することもできる。

反応は、約５−６０℃の温度で、好ましくは室温で行われる。

反応の終了後、まだ存在する酸クロリドを常法で、たとえば水の添加によって反応溶液中で分解し、生成物を常法で、たとえばジエチルエーテルで抽出して単離する。場合によりこの様にして得られる、弐ページの一般式■の化合物を、保護基の離脱前にたとえばシリカゲルでカラムクロマトグラフィーによって更に精製することができる。しかしこれを更に精製することなく式ページの一般式Ｉの化合物に変えることもできる。

更に保護基を常法で、たとえば接触水素化分解、ヒドラジン分解、ＨＣＩ又はギ酸による処理によって好ましくは不活性溶削中で離脱する。次いで式ページの一般式■の化合物を、公知方法で単離し、場合により更に、たとえばクロマトグラフィーにより精製することができる。

本発明によるアルキルホスホノ−及び−ホスホノセリンを、酵素方法で製造することもできる。この場合式ページの一般式Ｖの化合物とＬ−セリンとを、ホスホリパーゼの存在下に反応させる。更に式ページの一般式Ｖの化合物の溶液又は懸濁液を、過剰のし一セリンで水性緩衝系中で、たとえば酢酸塩−又はトリス緩衝液中で約４−８．５　、好ましくは５−６、特に好ましくは５．６のｐＨ−値で０．０１−０．１Ｍの存在下に及びホスホリパーゼＤの存在下にジエチルエーテル又はジエチルエーテルと他の有機溶剤、たとえばクロロホルムとの混合物の添加下に反応させる。

反応は、約５−６０℃、好ましくは３５−４５℃の温度で行われる０反応の間、反応混合物を激しく攪拌し又は振とうする。反応時間は、約０．５−４８時間である０反応終了後、酵素ホスホリパーゼＤをたとえば０、ＬＭ　ＩＩ！ＤＴＡ− 溶液の添加によって非活性化し、式ページの一般式■の化合物を常法で単離する。

新規アルキルホスホノ−又は−ホスホセリンは、著しい細胞性塞栓及びウィルス性塞栓作用を有する。

細胞性塞栓作用の測定に、エーリッヒー腹水腫瘍細特表千３−５０４９６５　（４）胞に於ける抗増殖活性作用を調べる。その際本発明による化合物は優れた細胞性塞栓作用を示すことが分る。したがってこれを単独で又は他の有効物質との混合物として、通常のガレヌス調製物の形で細胞性塞栓側又はウィルス性塞栓剤として使用することができる。

式ページの一般式Ｉの化合物を、人に使用することに特定し、常法でたとえば経口又は腸管外投与することができる。これを経口投与するのが好ましい。

この際−日没薬量は約０．０５ないし２０ｅｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０５ −５ｍｇ／ｋｇ体重である。しかし治療する医師は、全身状態、患者の年令、弐ページの適当な一般式Ｉの化合物、疾病の種類及び製剤の種類に従ってこの範囲を超えてより低い又はより高い投薬量を処方することができる。

式ページの式Ｉの化合物を単独で又は他の薬学的に活性な物質と一緒に投与することができる。この場合式ページの一般式Ｉの化合物の含有率は、０．１と９９％の間である。一般に薬学的に活性な化合物は、適当な不活性補助−及び／又は担体−物質又は希釈剤、たとえば薬学的に危険のない溶剤、ゼラチン、アラビアゴム、乳糖、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレングリコール、ワセリン等々との混合物として存在する。薬学的調製物は、固形で、たとえば錠剤、糖衣丸、半割、カプセル等々として、半固形で、たとえば軟膏として又は液状形で、たとえば懸濁液又はエマルジョンとして存在することができる。場合によりこれを殺菌し、補助物質、たとえば保存−１殺菌−及び乳化剤、浸透圧を変化するための塩等々を含有する。

特に薬学的調製物は、本発明による化合物を他の治療上価値ある物質と組合せて含有することができる。

これと共に本発明による化合物は、たとえば上記補助−及び／又は担体物質又は希釈剤と一緒になって混合製剤となすことができる。

例１ｎ−ヘキサデシルホスホ−Ｌ−セリン０、８ｇＬ−セリン（７，６ｓ＋ｗｏｌ）を、０．０９Ｍ　ＣａＣ１ｔである１、６６ａｄ　　Ｏ，１Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５，６）中で４５℃で溶解する。

この溶液に、３２ｍｇ（０，０７５ｍｍｏｌ）　ｎ−ヘキサデシルホスホコリン１，６−ジエチルエーテル／クロロホルム（９：１．　Ｖ／Ｖ、　　エタノール不合）及びホワイトカーボンから製造され、０．９０／−の活性度（１単位（Ｕ）は２７℃で１分につき１μｓｏｌ基質を変換する）を反応混合物中に示すホスホリパーゼ−Ｄ−酵素製剤２００ｍｇを加える。混合物を３時間４５℃で攪拌する。室温に冷却後、３．３１ｄ　Ｏ，ＬＭ　ＥＤＴＡ−溶液を加え、窒素の導入によって有機溶剤を除去する。残存する水性相を、４．３倍容量のクロロホルム／メタノール（５：８．Ｖ／Ｖ）と共に３０分間攪拌し、不溶物（Ｌ−セリン）を吸引濾取する。濾液に、１容量水及び３，７容量クロロホルムを加え、混合物を１０分間振とうし、有機相を分離し、減圧で蒸発し、得られた残留物をカルボキシメチルセルロース（ＣＭ５２ワットマン、Ｎａ”　−型）でカラムクロマトグラフィーによって分離する。溶離は、順次にクロロホルム７５−１夫々３００ −のクロロホルム／メタノール、９：１．８：２．１：３で、次いで１７５０１クロロホルム／メタノール１：ｌ（夫々Ｖ／Ｖ）で行われる。

分画量は、５０−である。分画１８−４０から、１６Ｂ純粋なｎ−ヘキサデシルホスホノ−し−セリン（Ｎａ−塩）が得られる。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、ＣｌｌＣｌ　３／ＣＨｓＯＨ／アセトン／酢酸／ＬＯ１５０：１０：２０：１０：５　　、　Ｖハ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）　二Ｒｆ、０．１例２ｎ−ヘキサデシルホスホ−し−セリン１．２−ピリジン中に０．２１９ｇ（０，６７９ｇｍｏｌ）　ｎ−ヘキサデシルホスフアート　（ｎ［、ａ＝Ｂ＝ｏｏ、　Ｒ，Ｃ，６ｉ１ゴコ）を有する溶液を、減圧で蒸発し、得られたピリジニウム塩を五酸化リンを介して減圧で乾燥する。その後１１−無水ピリジン中に溶解する。

五酸化リンを介して減圧で乾燥された、保護されたセリフ　（ＩＶ、　Ｘ＝ＣＨ（Ｃ６８Ｓ）！、　Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＨｓ）ｉ）０、８０６ｇ　（２，１７ｍｍｏｌ）を、９−無水ピリジン中に溶解する。２つの溶液を、混合し、混合物に１．３２ｇ　（４，３５＋＋ｎｏｌ）　　ト’Ｊイソブーピルペンゾールスルホクロリドを加える。反応混合物を、無水条件下に室温で２４時間攪拌する。水２〜３滴の添加後、更に３０分攪拌する。その後混合物を、減圧で蒸発し、残留物を五酸化リンを介して乾燥する。得られた残留物を、２０１１Ｉｌジエチルエーテルで抽出し、３回夫々４ｉでジエチルエーテルで後洗滌する。エーテル溶液を一緒にし、減圧で蒸発する。残留物を、クロロホルム中に溶解し、カラムクロマトグラフィーによってシリカゲル６０　３６ｇ（粒子の大きさ０．０４−０．０６３ＭＭ、　２３０−４００メツシユ、メルク）で精製する。カラムクロマトグラフィーに使用されたクロロホルムを、２５％水性アンモニアで飽和する。３００　ｍクロロホルム、２５０　ｄクロロホルム／メタノール、９８：２．　Ｖ／Ｖ、　２００＋ｄクロロホルム／メタノール、９５：５．　Ｖ／Ｖ、　５００− クロロホルム／メタノール、９０：１０．　Ｖ／Ｖ、　４００　ｄクロロホルム／メタノール、８０：２０．　ｖ／ｖで溶離する。分画量は２２＋ｄである。分画４１−４７は、１５２ｍｇ　ｎ−ヘキサデシルホスホノ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−し−セリンベンズヒドリルエステル（Ｒ＝ｃ＋Ｊｓｉ、　Ｘ＝ＣＦｌ（Ｃ６Ｈｓ）ｚ、Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＥ１３）　２）　、（アンモニウム塩）、収率３２％が得られる。

ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／２５％水性ＮＨｓ、　６５：５．　Ｖ／Ｖ）：ｎｒ＝ｏ、　７゜特表平３−５０４９６５　（５）６１ｍｇ（０，０９ｏ＋ｍｏｌ）記載の化合物■を、減圧で五酸化リンを介して乾燥し、次いで１２−無水クロロホルム中に溶解する。この溶液によって１０分間乾燥窒素を、次いで無水条件下に０℃で２０分間ＨＣｌ−ガスを導入する。その後反応容器を固く密閉し、反応混合物を１時間Ｏ℃で更に攪拌する。

次いで）ＩｃＩ−ガスの除去後、１時間室温で窒素を反応混合物に通す。その後反応混合物を、減圧で蒸発する。残留物に、１０ｗｌ１クロロホルム／メタノール、２：１．Ｖ／Ｖ　１−水及び０．０２ｄ２５％水性アンモニアを加え、相分離後生じる有機相を分離する。水性相を３回クロロホルム／メタノール、２：１．Ｖ／Ｖで抽出し、有機溶液を一緒にし、減圧で蒸発する。残存する水の除去後、数回１＋ｄベンゼン／エタノール、２：３゜Ｖ／νで後蒸留する。得られた生成物を、五酸化リンを介して減圧で乾燥し、その後アセトンで洗滌する。

収量：　３０．８ｍｇ　（８３％）。

得られたｎ−ヘキサデシルホスホ−し−セリン（ジアンモニウム塩）を、薄層クロマトグラフィーにより単一である。

ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水、１０：２：４：２：１．　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：Ｒｆ＝０．１　。

可視化は、モリブダート試薬で又はニヒドリンスプレーで行われる。痕跡程度のＮＨ，ＣＩの除去後、物質（３０，８ｓ＋ｇ）を２ｇシリカゲル６０（粒子の大きさ０．０４−０．０６３ｍｍ　、　　２３０−４００メツシユ、メルク）でクロマトグラフィー分離する。カラムを、クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、８０：２０：０．５゜Ｖ／Ｖ／Ｖで平衡化する。同一混合物中で物質も溶解し、カラム上に加える。２０Ｍ！クロロホルム／メタノール２５％水性アンモニア、８０：２０：０，５．Ｖ／Ｖ／Ｖ、２０ｄりｏ　。

ホルム／メタノール／２５％水性アンモニア、７５　：２５　：０．５．　Ｖ／Ｖ／Ｖ、　２０−クロロホルム／メタノール／２５％水性アンモニア、７０：３０：０，５．　Ｖ／Ｖ／Ｖ、　２０ｄりｏ　ｏホルム／メタノール／２５％水性アンモニア、６５：３５：０．５．Ｖ／Ｖ／Ｖ、　２６０Ｍ１りｔ：ｌ　ｏ　；ｈルム／　メタ／　−ル／２５％水性アンモニア、６０：４０：０，５．　Ｖ／Ｖハで溶解する。化合物が、分画７−１３（分画量２！Ｊｄ）から濃縮によって得られる。

ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水、１０：２：４：２：１．　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例３ｎ−ヘキサデシルホスホノ−し−セリンｎ−ヘキサデシルホスホン酸ｎ−ヘキサデシルプロミド（４，８９ｇ、　’１６＋＋ｎｏｌ）及び新たに蒸留されたトリメチルホスフィツト（２，４８ｇ、　２０ｍｍｏｌ）から成る混合物を、２時間１１６℃で攪拌する。

次いで過剰のトリメチルホスフィツトを、減圧蒸留し、残留物を２４時間五酸化リンを介して減圧で保存する。対応するｎ−ヘキサデシルホスホン酸ジメチルエステルを、残留物から夫々１０＋ｄメタノールで２回抽出して単離する。２つのメタノール抽出物を一緒にし、減圧で蒸発する。ｎ−ヘキサデシルホスホン酸メチルエステルと共にまだｎ−ヘキサデシルプロミドを含有する得られた、油状無色残留物を、４．７　ｄ無水アセトニトリル中でトリメチルシリルクロリド（１，０２ｇ、　９，４ｇｍｏｌ）及びヨウ化ナトリウム（１，４ｇ、　９．４ｍｍｏｌ）と反応させる。反応は、攪拌下に室温で行われ、１５分間続ける。

反応で生じる塩化ナトリウムを、濾去する。濾液を、減圧で蒸発し、生じる残留物に４ｄ水を加え、この際加水分解によってｎ−ヘキサデシルホスホン酸が生じる。同時に形成されたＭｅｓＳｉＯＳｉＭｅｚを除（ために、数回エタノール／水（１：　１　、　Ｖ／Ｖ）で減圧で後蒸留する。残留物を７−乾燥アセトンで処理した後、３４６１Ｉｇｎ−ヘキサデシルホスホン酸■が得られる。ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／水、６５：２５：４．Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１５　。

元素分析はＣ＋ＪｂｓＰＯｓ（３０６，４２）に関して計算する：Ｃ６２，７１，Ｈ１１，５１；　　測定値Ｃ６２，８１，Ｈ１１，８９（％）。

ｎ−ヘキサデシルホスホノ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−し−セリンベンズヒドリルエステル１−ピリジン中に９２蒙ｇ（０，３ｍ＠ｏｌ）　ｎ−ヘキサデシルホスホン酸を含有する溶液を、減圧で蒸発し、次いで得られたピリジウム塩を五酸化リンを介して減圧で乾燥する。その後５−無水ビリジノ中に溶解する。

２つの溶液を混合し、混合物に５８１ｍｇ（１，９２ｍｍｏｌ）　　）リイソプロビルベンゾールスルホクロリドを加える。

反応混合物を、無水条件下に室温で２４時間攪拌する。

その後混合物を減圧で蒸発し、数回トルエンで後蒸留し、残留物を五酸化リンを介して減圧で乾燥する。

次いでこれを１５−ジエチルエーテルで抽出し、３回４−ジエチルエーテルで後洗滌する。エーテル溶液を一緒にし、減圧で乾燥する。得られた残留物から、アセトニトリルから再結晶して、１１８ｍｇ　ｎ−ヘキサデシルホスホノセリン− 誘導体■が得られる０次の精製は、カラムクロマトグラフィーによって８ｇシリカゲル６０（粒子の大きさ０，０４　０，０６３ｏｕｌ、２３０−４００メツシユ、メルク）で行われる。

クロマトグラフィーに使用されるクロロホルム及び溶離用の溶剤混合物は、０，５％水性２５％アンモニアヲ含有する。５０−クロロホルム、５０Ｍ１クロロホルム／メタノール、９８：２．　Ｖ／Ｖ、　２００ｄクロロホルム／メタノール、９５：５．　Ｖ／Ｖ、　２００−クロロホルム／メタノール、９０：１０．　Ｖハで溶離する。分画量は１５ｍである。

分画１５−２０は、１２ｍｇ純粋なヘキサデシルホスホノ−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−し−セリンベンズヒドリルエステルを含有する。

特表千３−５０４９６５　（５）ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール、８０：２０．　Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．２゜元素分析は、Ｃ５ｔＨｂＩＮｚＰＯｑ（ＮＨａ−塩、　６７６．８７）に関して計算する：Ｃ６５，６５Ｈ９，０８，Ｎ　４，１４　：測定値Ｃ６５Ｚ４４Ｐ　Ｈ９，１５Ｎ　３．７３（％）。

ｎ−ヘキサデシルホスホノ−し−セリン６９１１ｇ（０，Ｉｇｕ＋ｏｌ）記載の化合物を、減圧で五酸化リンを介して乾燥し、次いで１．３ｄ無水クロロホルム中に溶解する。この溶液によって、１０分間乾燥窒素、次いで無水条件下Ｏ℃で２０分間塩化水素ガスを導入する。その後反応容器を固く密閉し、１時間０℃で更に攪拌する。次いで塩化水素ガスの除去後、１時間室温で窒素を反応混合物に通す。その後反応混合物を減圧で莫発し、残留物に１０−クロロホルム／メタノール、２：１．　Ｖ／Ｖ、　１−水及び０．０２ｍ２５％水性ア　′ンモニアの混合物を加え、振とう及び相分離後生じる有機相を分離する。水性相を、３回夫々５−クロロホルム／メタノール／水、２：１：０．１８．　Ｖ／Ｖ／Ｖ、　　で抽出し、有機溶液を一緒にし、減圧で蒸発する。残存する水の除去後、数回１ −ベンゼン／エタノール、２７３、　Ｖハで後蒸留する。得られた生成物、ヘキサデシルホスホノ−し−セリンＩを五酸化リンを介して減圧で乾燥し、その後アセトンで洗滌する。

収量＝４３−ｇ（９５％）。

痕跡程度の塩化アンモニウムの除去のために、物質を２．２ｇシリカゲル６０（粒子の大きさ０．０４−０．０６３ｍｍ、　　２３０　４００メツシユ、メルク）でクロマトグラフィー分離する。カラムを、クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、８０：２０．　ｏ＋ｓ＋　Ｖ／Ｖ／Ｖで平衡化する。２０− クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、８０：２０：０，５．　Ｖ／Ｖ／Ｖ、　２０ｄクロｏ　ホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、７５：２５：０．５．Ｖ／Ｖ／Ｖ　、２０−クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、７０：３０：０，５、Ｖ／Ｖ／Ｖ、２０−クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、６５：３５：０．５　、ｖ／ｖ／ｖ、２００−クロロホルム／メタノール／水性２５％アンモニア、６０：４０：０，５　、Ｖ／Ｖ／Ｖで溶離する。化合物が、分画７−１９から蒸発して得られる。

（分画量２０ｉｄ）。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水、１０：２：４：２：１．　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖｌ）Ｖ：Ｒｆ＝０．１゜可視化は、モリブダート試薬で、次いでニンヒドリン試薬で行われる。元素分析は、Ｃ＋　ｑＨａｓＮ＊ＰＯｂ　（ＮＨ４−塩、モノヒトラード、４２８．５５）に関して計算する：Ｃ５３，２４，Ｈ１０，５Ｂ、　Ｎ　６．５４；測定値Ｃ５３，８０゜Ｈ１０，５５，Ｎ　５，７３（％）。

ＦＡＢ−質量スベクトル分析：アニオンスペクトル：　ｍ／Ｚ　４１４．　（Ｍ−２Ｈ＋Ｎａ）　−；ｍ／Ｚ　３９２．（Ｍ−Ｈ）−；　ｍ／Ｚ　３０５　（Ｍ−ＣＨｚＣ）ｌ（ＮＨｚ）（ＯＯＨ）　−ｉカチオンスペクトル：　ｍ／Ｚ　４１６．　（Ｍ　＋Ｎａ）　”； −／Ｚ４３８、（Ｍ　＋２Ｎａ）”　ｅ例４ｎ−ヘキサデシルホスホノ−し−セリン０．８ｇ　Ｌセリン／７．６ｎ＋ｍｏｌ）を、０，０９Ｍ　ＣａＣ１ｇである１、５２ｄＯ，１Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５，６）中に４５℃で溶解する。この溶液に、３１ｍｇ（０，０７５ｏ＋ｓ＋ｏｌ）　ｎ−ヘキサデシルホスホノコリン、１．６ｍジエチルエーテル／クロロホルム（９：１．　Ｖ／Ｖ、　　エタノール不合）及びホワイトコールから製造され、０．９０／−の活性度（１単位（Ｕ）は２７℃で分あたり１ｇＭｏｌ基質を変換する）を反応混合物中に有する２００ｎ＋ｇホスホリパーゼー〇−酵素調製物を加える。混合物を、２．２時間４５℃で攪拌する。

室温に冷却後、３．３１＋ｄ　Ｏ，ＩＭ　ＥＤＴＡ−溶液を加え、窒素の導入によって有機溶剤を除去する。残存する水性相を、４．３倍容量のクロロホルム／メタノール（５：８．　Ｖ／Ｖ）テ３０分攪拌し、不溶性物（Ｌ−セリン）を吸引濾取する。濾液に、■容量水及び３．７容量クロロホルムを加え、混合物を１０分振とうし、有機相を分離し、減圧で蒸発し、得られた残留物をカルボキシメチルセルロース（ＣＭ５２ワットマン、Ｎａ”　−型）でカラムクロマトグラフィー分離する。溶離は、順次に７５ｄクロロホルム、夫々３００　ｙｄジクロロホルムメタノール、９：１．８：２．　’７：３　、次いで１７５０ｉｄクロロホルム／メタノール、１：１（夫々Ｖ／Ｖ）で行われる。分画量は、５０−である。分画２０−３９から、５１１ｇ純粋なｎ−ヘキサデシルホスホノ−し−セリン（１、Ｒ＝Ｃ＋１Ｈｆｆ２）が得られる。

ＤＣ（シリカゲル６０．メルク−既製プレート、ＣＨＣｌ３／ＣＨ，ＯＨ／アセトン／酢酸／Ｈ，０，５０：１０：２０：１０：５゜Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｎ：　Ｒｆ＝０．１゜同様な方法で、次の化合物を製造した。

例２と同様に、次の化合物を製造した。

例５ｎ−デシルホスホ＝Ｌ〜セリンｎ−デシルホスホン酸ト及び保護されたセリン（弐■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｚ、Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＨ３）３）から。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１　；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例６ｎ−ドデシルホスホ−し−セリンｎ−ドデシルホスフアート及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣｈＨｓ）ｇ、　Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＨ３）りから。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１　；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例７ｎ−テトラデシルホスホ−し−セリン特表千３−５０４９６５　（７）ｎ−テトラデシルホスファート及び保護されたセリン（弐■、Ｘ＝ＣＨ（（ＣＪｓ）　ｚ、Ｙ＝ＧＯ−ＱＣ（ＣＨｓ）　ｚ）から。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１　；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例８１７−メチル−ｎ−オクタデシルホスホ−し−セリン１７−メチル−ｎ−オクタデシルホスホ−し−セリン及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｉ。

Ｙ＝ＣＯ−ＯＣ（ＣＨｓ）　りから。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：”２：４：２：１；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例９シス−９−ｎ−オクタデセニルホスホ−し−セリンシス−９−ｎ−オクタデセニルホスホ−Ｌ〜セリン及び保護サレタセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣｂＨｓ）ｚ。

Ｙ＝ＣＯ−ＯＣ（ＣＨ３）　３）から、　ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ（：　Ｒｆ＝０．１゜例１０アラキルホスホ−Ｌ−セリンアラキルホスフアート及び保護されたセリン（式％式％（カゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ、０．１゜例１１２−クロル−ｎ−ヘキサデシルホスホ−し−セリン２−クロル十ヘキサデシルホスファート及び保護すＦＬｔ、：−セ’ＪＶｃ式■、Ｘ＝ＣＨ（Ｃａｎｓ）ｚ、　Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＨ３）：ｌ）から。ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；　Ｖハ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例１２２−メトキシ−ｎ−テトラデシルホスホ−し−セリン２−メトキシ十テトラデシルホスファート及び保護されたセリン（弐■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｚ。

Ｙ＝ＣＯ−ＯＣ（ＣＨｚ）　ｓ）　　から。ＤＣ（シリカゲル６０、メルクー既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１　。

例１３２−メチルメルカプト十テトラデシルホスホ−Ｌ−セリン２−メチルメルカプト−ｎ−テトラデシルホスファート及ヒ保護すレタセリン（弐■、ｘ＝ｃｔｔ（ｃ６１（、）　、。

Ｙ＝ＧＯ−ＱＣ（ＣＨ３）　ｉ）から。ＤＣ（シリカゲル６０、メルクー既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１．０：２：４：２：１：　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例１４２−ジメチルアミノ−ｎ−テトラデシルホスホ−し−セリ２−ジメチルアミノ− ｎ−テトラデシルホスファート及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｘ。

Ｙ＝ＣＯ−ＯＣ（ＣＨｚ）　３）から。ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢＃／水１０：２：４：２：１：　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例３と同様に、次の化合物を製造する：例１５ｎ−デシルホスホノ−し−セリンｎ−デシルホスホン酸及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨＣＣｂＨｓ）ｚ、　Ｙ＝ＧＯ−ＯＣＣＣＢｘ）ｓ）から、ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例１６ｎ−ドデシルホスホノ−し−セリンｎ＝ドデシルホスホン酸及び保護されたセリン（式％式％（カゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例１７ｎ−テトラデシルホスホノ−し−セリンｎ−テトラデシルホスホン酸及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）　ｚ、　Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＨ３）　ｓ）から、ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４：２：１；　Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例１８ｎ−オクタデシルホスホノ−し−セリンｎ−オクタデシルホスホン酸及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｚ、　Ｙ＝ＣＯ−ＱＣ（ＣＢり：Ｉ）から。

ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢酸／水１０：２：４＝２：１；　　Ｖ／Ｖ）Ｖ／Ｖ／Ｖ）：　　Ｒｆ＝０．１゜例１９アラキルホスホノ−し−セリンアラキルホスホン酸及び保護されたセリン（式■、Ｘ＝ＣＨ（ＣＪｓ）ｉ、　Ｙ＝ＧＯ，−ＱＣ（ＣＨｓ）３）から。ＤＣ（シリカゲル６０、メルク−既製プレート、クロロホルム／メタノール／アセトン／酢Ｍ／水１０：２：４：２：１：Ｖ／Ｖハ／Ｖ／Ｖ）：　Ｒｆ＝０．１゜例Ａエールリッヒーアスシテスー腫瘍細胞の濃度依存性増殖阻害濃度（Ｍ）　　　　ｌＸｌ０−’　３Ｘ１０−’　ｌＸｌ０−’　３Ｘ１０−’ 阻害率（％）ｎ−ヘキＵシルネス　　　　９５．５　　　　７５．４　　　　６０．１　　　　３７．９参−Ｌ−セリフ特表千３−５０４９６５　（８）ｎ−Ａ＄サダシルネス　　　　８９　　　　　　４５　　　　　　１３　　　　　　　９参ノーＬ−セリン国際調査報告一一一−ａａｗｈａ−１−ＰＣＴ／ＥＰ　８９１００３９３国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．一般式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ（式中ＲはＣ−原子数６−３０の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素残基であり、これは場合によりハロゲン、残基ＯＲ１，ＳＲ１，ＮＲ１Ｒ２によって置換されていてよい、この際Ｒ１及びＲ２は夫々水素原子又はＣ−原子数１−６のアルキル−又はアシル基を示す又は基ＯＲ′を示す、この際Ｒ′はＣ− 原子数６−３０の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素を示し、これは場合により残基ＯＲ１、ＳＲ１又はＮＲ１Ｒ２によって置換されていてよい、この際Ｒ１及びＲ２は上述の意味を有する。）なる化合物。
２．一般式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ（式中ＲはＣ−原子数１０−２５の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素残基であり、これは場合によりハロゲン、残基ＯＲ１，ＳＲ１，ＮＲ１Ｒ２によって置換されていてよい、この際Ｒ１及びＲ２は夫々水素原子又はＣ−原子数１−６のアルキル−又はアシル基を示す又は基ＯＲ′を示す、この際Ｒ′はＣ −原子数１０−２５の直鎖状又は分枝状飽和又は不飽和脂肪族炭化水素を示し、これは場合により残基ＯＲ，ＳＲ１又はＮＲ１Ｒ２によって置換されていてよい但しＲ１及びＲ２は上述の意味を有する。）なる請求の範囲１による化合物。
３．ｎ−ヘキサデシルホスホ−Ｌ−セリン。
４．ｎ−ヘキサデシルホスホノ−Ｌ−セリン。
５．ａ）一般式ＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ（式中Ｒは上述の意味を有し、そしてＡ及びＢはヒドロキシ基又はＲが基ＯＲ′を示す場合、Ａは更にハロゲン、好ましくはＣ１及びＢｒ、そして更にＢはハロゲン、好ましくはＣ１及びＢｒ、アルコキシ又はアリールオキシ基を示すことができる。）なる化合物又は場合によりこの化合物の塩と一般式ＩＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ（式中Ｘはベンジル、ｔ−ブチル、フタルイミドメチル、イソプロピル、ベンズヒドリル又は常法で離脱しうる他の保護基、ＹはＮ−ベンゾイルオキシカルボニル、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルＮ− フタロイル又は常法で離脱しうる他の保護基を示す。）なるセリン誘導体とを、場合により縮合剤の存在下に反応させて、一般式ＩＶ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶなる化合物となし、保護基を離脱し、生成物を場合により塩に変えるあるいはｂ）一般式Ｖ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｖ〔式中Ｒは上述の意味を有し、ＺはＣ−原子数１〜６のアルキル基を示し、これは場合によりＣ１、Ｂｒ又はＦによって置換されていてよい又は残基▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｃ及びＤは相互に無関係にＨ、又はメチルを示し、そしてＥはメチルを示し、ｎは２−６を示す。）なる残基を示す。〕なる化合物とＬ−セリンとを、木スホリフアーゼの存在下に反応させることを特徴とする、一般式Ｉ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉなる化合物の製造方法。
６．請求の範囲１による化合物を、通常のガレヌス補助−担体及び／又は希釈剤と組合せて含有する薬剤。
７．請求の範囲１による化合物を、他の治療有効物質並びに通常のガレヌス補助 −担体及び／又は希釈剤と組合せて含有する薬剤。式▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ▲数式、化学式、表等があります▼Ｖ発明の詳細な説明