JPH02236164A - 低圧液体クロマトグラフィー装置，クロマトグラフィーカラムおよび該カラム製造方法，並びに低圧液体クロマトグラフィー用補充パック - Google Patents
低圧液体クロマトグラフィー装置，クロマトグラフィーカラムおよび該カラム製造方法，並びに低圧液体クロマトグラフィー用補充パックInfo
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- JPH02236164A JPH02236164A JP1149276A JP14927689A JPH02236164A JP H02236164 A JPH02236164 A JP H02236164A JP 1149276 A JP1149276 A JP 1149276A JP 14927689 A JP14927689 A JP 14927689A JP H02236164 A JPH02236164 A JP H02236164A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は低圧液体クロマトグラフィー装置、特に定量的
な結果を示すようにデザインされ、自動化された低圧液
体クロマトグラフィー装置、該低圧液体クロマトグラフ
ィー装置に使用されるカラム、そのカラムの製造方法、
および低圧液体クロマトグラフィー用の補充パックに関
するものｔある。
な結果を示すようにデザインされ、自動化された低圧液
体クロマトグラフィー装置、該低圧液体クロマトグラフ
ィー装置に使用されるカラム、そのカラムの製造方法、
および低圧液体クロマトグラフィー用の補充パックに関
するものｔある。
（従来の技術）
液体クロマトグラフィーは、測定されるべき成分を含む
サンプルが、充填材料を含むクロマトグラフィーカラム
に通流される技法である。充填材料は、カラムを通して
ある濃度の緩衝溶液を送給した場合に、４測定されるべ
き成分が分離されることの出来る方法により、かかる成
分がそれに捕捉され又は結合される構成物が選ばれる。
サンプルが、充填材料を含むクロマトグラフィーカラム
に通流される技法である。充填材料は、カラムを通して
ある濃度の緩衝溶液を送給した場合に、４測定されるべ
き成分が分離されることの出来る方法により、かかる成
分がそれに捕捉され又は結合される構成物が選ばれる。
各種の物質は充填材料に異なった強さで結合するために
、物質を充填材料から分離するには異なった濃度の緩衝
液が必要である。カラムを通って出て来た溶液の中の成
分の存在は、ある波長の光の吸収を測定することにより
検出される。従って、成分を充填材料から分離させた緩
衝液の濃度を検出することにより、成分が何であるかが
判る。確立された技法では、プロセスは高圧、即ち数千
ｋＰａを用い、約３０ｃｍ長さで２ ｃｍの径の鋼製の
クロマトグラフィーカラムの中で行なわれる。カラムお
よび付随の装置の構造は、使用される高圧に耐えるに充
分な強度を持つことを必要とすることは明かである。
、物質を充填材料から分離するには異なった濃度の緩衝
液が必要である。カラムを通って出て来た溶液の中の成
分の存在は、ある波長の光の吸収を測定することにより
検出される。従って、成分を充填材料から分離させた緩
衝液の濃度を検出することにより、成分が何であるかが
判る。確立された技法では、プロセスは高圧、即ち数千
ｋＰａを用い、約３０ｃｍ長さで２ ｃｍの径の鋼製の
クロマトグラフィーカラムの中で行なわれる。カラムお
よび付随の装置の構造は、使用される高圧に耐えるに充
分な強度を持つことを必要とすることは明かである。
従って、装置は嵩が大きく、高重量となり、しかも、高
価とならざるを得ない。
価とならざるを得ない。
液体クロマトグラフィー、特にカチオン充填クロマトグ
ラフィーは、血中の各種のタイプのヘモグロビンの存在
を検出することが出来ることからヘモグロビンの分析に
用いることが出来る。例えば、異常なアミノ酸配列を持
つヘモグロビン、例えば糖尿病の状態から生じる血糖値
が以前に高かったこと示す鎌型赤血球性貧血又は過糖化
ヘモグロビン（即ちグルフースと反応したヘモグロピン
）となるヘモグロビンＳの検出が可能である。過糖化ヘ
モグロビンの濃度は、糖尿病の治療を監視するのに用い
られ、短時間に大幅に変化する傾向を示すもの、例えば
食事の後に急速に上昇する瞬間血糖レベルよりも、患者
の状態のインディケータとしでは優れたものである。過
糖化ヘモグロビンの濃度は血糖レベルよりも長い時間ス
ケールで変化する。何故ならば血液細胞は約１２０日で
入れ替わるので、過糖化ヘモグロビンの濃度は、過去数
ケ月間の血糖レベルの平均値を表すからである。しかし
、液体クロマトグラフィーは上述のように、高圧を使用
する複雑な機器を用いねばならぬ為に、代替テストが用
いられたとしても多《の診療所および小病院は血液サン
プルのテストを外部に依頼せねばならず、このテストに
は数日を必要とし到底満足し得るものではない。
ラフィーは、血中の各種のタイプのヘモグロビンの存在
を検出することが出来ることからヘモグロビンの分析に
用いることが出来る。例えば、異常なアミノ酸配列を持
つヘモグロビン、例えば糖尿病の状態から生じる血糖値
が以前に高かったこと示す鎌型赤血球性貧血又は過糖化
ヘモグロビン（即ちグルフースと反応したヘモグロピン
）となるヘモグロビンＳの検出が可能である。過糖化ヘ
モグロビンの濃度は、糖尿病の治療を監視するのに用い
られ、短時間に大幅に変化する傾向を示すもの、例えば
食事の後に急速に上昇する瞬間血糖レベルよりも、患者
の状態のインディケータとしでは優れたものである。過
糖化ヘモグロビンの濃度は血糖レベルよりも長い時間ス
ケールで変化する。何故ならば血液細胞は約１２０日で
入れ替わるので、過糖化ヘモグロビンの濃度は、過去数
ケ月間の血糖レベルの平均値を表すからである。しかし
、液体クロマトグラフィーは上述のように、高圧を使用
する複雑な機器を用いねばならぬ為に、代替テストが用
いられたとしても多《の診療所および小病院は血液サン
プルのテストを外部に依頼せねばならず、このテストに
は数日を必要とし到底満足し得るものではない。
近年、クロマトグラフィーカラムのための新しい充填材
料が開発されることにより、長さが５〜２０■のオーダ
ーの小型カラムを使用し、かつ低圧、例えば２０〜２１
０ｋＰａでプロセスを実施することが可能となった。サ
ンプルの調整は手作業により行われ、かつカラムへの装
入も手作業により行なわれる。その後、多数の異なった
濃度の緩衝液が次々にカラムに通流され、カラムから流
出する溶液が通常の光学的検出器を用いて監視される。
料が開発されることにより、長さが５〜２０■のオーダ
ーの小型カラムを使用し、かつ低圧、例えば２０〜２１
０ｋＰａでプロセスを実施することが可能となった。サ
ンプルの調整は手作業により行われ、かつカラムへの装
入も手作業により行なわれる。その後、多数の異なった
濃度の緩衝液が次々にカラムに通流され、カラムから流
出する溶液が通常の光学的検出器を用いて監視される。
この場合にも、どの緩衝液濃度が何れの成分をカラムか
ら流出させたかを知ることにより成分が判定することが
できる。血液テストに用いられたこの技法の例は次の通
りである。ＥＤＴＡ凝固防止剤を含むチューブ内の血液
が遠心分離されることにより血漿と白血球が除去される
。赤血球（１部）が等浸等圧塩水（４部）と混合される
ことにより洗浄され、次に２０００ｘｇで５分間遠心分
離される。この洗浄プロセスを反復した後に、細胞（１
部）は０．０１Ｍのシアン化カリウム溶液（１．５部）
と激しく混和することにより溶血される。それらは、次
に５分間放置されることによりすべてのヘモグロビンの
分解を確実なものにされる。リビド物質は四塩化炭素（
１部）と３０秒間振盪されることにより除去される。遠
心分離の後に上澄み液（５０Ｌ）の一部が取出され、テ
ストされる分析システムに適切な充填緩衝液（９５０Ｌ
）に混和される。この溶液の一部（５０Ｌ＝赤血球の１
．ＳＬ）がカラムに装入される。カラム充填材料として
は、ＣＭセルロース、バイオレックス７０、グリコーゲ
ルＢおよびポリアスパラ酸シリカを含む各種のものを用
いることができる。ＣＭセルロースおよびポリアスパラ
酸シリヵのカラムはビスートリス（ビス（２−ヒドロキ
シエチル）イミノートリス（ヒドロキシメチル）メタン
）緩衝液により溶離される。緩衝原液として２種類を使
用することができる。その緩衝原液は、濃縮された塩化
水素酸によりｐｌｌ６． ２に調節された４０ｍＭのビ
スートリスと４ｉ＋Ｍのシアン化カリウムを含む第１の
緩衝原液（ａ）、および緩衝液（ａ）を含み、かつそれ
にｐＨ調節の前に塩化ナトリウムが加えられて２００ｍ
Ｍの濃度にされた第２緩衝原液（ｂ）である。これらの
緩衝液は、中間の塩化ナトリウム濃度の溶離液を得る為
に各種の比率で混和されることが出来る。
ら流出させたかを知ることにより成分が判定することが
できる。血液テストに用いられたこの技法の例は次の通
りである。ＥＤＴＡ凝固防止剤を含むチューブ内の血液
が遠心分離されることにより血漿と白血球が除去される
。赤血球（１部）が等浸等圧塩水（４部）と混合される
ことにより洗浄され、次に２０００ｘｇで５分間遠心分
離される。この洗浄プロセスを反復した後に、細胞（１
部）は０．０１Ｍのシアン化カリウム溶液（１．５部）
と激しく混和することにより溶血される。それらは、次
に５分間放置されることによりすべてのヘモグロビンの
分解を確実なものにされる。リビド物質は四塩化炭素（
１部）と３０秒間振盪されることにより除去される。遠
心分離の後に上澄み液（５０Ｌ）の一部が取出され、テ
ストされる分析システムに適切な充填緩衝液（９５０Ｌ
）に混和される。この溶液の一部（５０Ｌ＝赤血球の１
．ＳＬ）がカラムに装入される。カラム充填材料として
は、ＣＭセルロース、バイオレックス７０、グリコーゲ
ルＢおよびポリアスパラ酸シリカを含む各種のものを用
いることができる。ＣＭセルロースおよびポリアスパラ
酸シリヵのカラムはビスートリス（ビス（２−ヒドロキ
シエチル）イミノートリス（ヒドロキシメチル）メタン
）緩衝液により溶離される。緩衝原液として２種類を使
用することができる。その緩衝原液は、濃縮された塩化
水素酸によりｐｌｌ６． ２に調節された４０ｍＭのビ
スートリスと４ｉ＋Ｍのシアン化カリウムを含む第１の
緩衝原液（ａ）、および緩衝液（ａ）を含み、かつそれ
にｐＨ調節の前に塩化ナトリウムが加えられて２００ｍ
Ｍの濃度にされた第２緩衝原液（ｂ）である。これらの
緩衝液は、中間の塩化ナトリウム濃度の溶離液を得る為
に各種の比率で混和されることが出来る。
バイオレックス７ｏのカラムは公知のリン酸塩緩衝シス
テム（例えばＫｙｎｏｃｈ Ｐ．Ａ．Ｍ．およびＬｅｈ
＋ａａｎ１！、（１９７７） Ｌａｎｃｅｔ ｉｉ．
１６により記載されている）を修正したものにより溶離
される。この場合にも２つの緩衝液が用いられる。緩衝
液（ａ）は４ｌ■Ｍのナルリウム（ｐＨ６．４）、又追
加の塩化ナトリウムが最初の緩衝液（ｂ） （１３６
ｍＭナトリウム， ｐＨ６．０）に加えられて最終的に
２００霞Ｍの濃度にされる。
テム（例えばＫｙｎｏｃｈ Ｐ．Ａ．Ｍ．およびＬｅｈ
＋ａａｎ１！、（１９７７） Ｌａｎｃｅｔ ｉｉ．
１６により記載されている）を修正したものにより溶離
される。この場合にも２つの緩衝液が用いられる。緩衝
液（ａ）は４ｌ■Ｍのナルリウム（ｐＨ６．４）、又追
加の塩化ナトリウムが最初の緩衝液（ｂ） （１３６
ｍＭナトリウム， ｐＨ６．０）に加えられて最終的に
２００霞Ｍの濃度にされる。
グリコーゲンＢのカラムは、例えば、Ｇｏｕｌｄ等（１
９８２） ＣＩｉｎ． Ｃｈｉｎ， Ａｃｔａ １２５
．４１に記載されて（上るように、硝酸アンモニウム緩
衝液（２５０ｍＭ ＋５０ｍＭ ＭｇＳＯａ． ３ｄ
Ｎａｐｓ． ｐＨ６．５）を用（Ａて平衡化される。
９８２） ＣＩｉｎ． Ｃｈｉｎ， Ａｃｔａ １２５
．４１に記載されて（上るように、硝酸アンモニウム緩
衝液（２５０ｍＭ ＋５０ｍＭ ＭｇＳＯａ． ３ｄ
Ｎａｐｓ． ｐＨ６．５）を用（Ａて平衡化される。
すべての緩衝液は使用前に低圧下でミリポアーフィルタ
ー（０．４５ｍ）を通される。このプロセスは溶液の脱
ガス作用にも役立つ。しかし、この技法も時間がかかり
かつ個人診療所での未熟な技術により使用するには複雑
すぎる。何故ならばサンプルの調整には数台の機器と数
種の薬品を必要とし、又クロマトグラフイー装置の操作
も、ある程度の熟練を必要とするからである。
ー（０．４５ｍ）を通される。このプロセスは溶液の脱
ガス作用にも役立つ。しかし、この技法も時間がかかり
かつ個人診療所での未熟な技術により使用するには複雑
すぎる。何故ならばサンプルの調整には数台の機器と数
種の薬品を必要とし、又クロマトグラフイー装置の操作
も、ある程度の熟練を必要とするからである。
（発明が解決しようとする課題）
本発明の一つの目的は、個人診療所において、比較的未
熟な技術者による使用にも適しており、操作が簡単であ
って、結果が容易に認識でき、しかも、寿命の短い部品
が容易に取替えることができる低圧液体クロマトグラフ
イー装置を提供することにある。
熟な技術者による使用にも適しており、操作が簡単であ
って、結果が容易に認識でき、しかも、寿命の短い部品
が容易に取替えることができる低圧液体クロマトグラフ
イー装置を提供することにある。
本発明の他の目的は、その低圧液体クロマトグラフィー
装置に使用されるカラムおよび該カラムの製造方法を提
供することにある。
装置に使用されるカラムおよび該カラムの製造方法を提
供することにある。
本発明のさらに他の目的は、その低圧液体クロマトグラ
フィー装置用の補充パックを提供することにある。
フィー装置用の補充パックを提供することにある。
（課題を解決するための手段）
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、充填材料
を含むクロマトグラフィーカラムと、装置の中にサンプ
ルを引込んで、それをカラムに通すことによりサンプル
の成分が充填材料により保持される誘導手段と、予め定
められた、連続する所定時間の関数として変化する濃度
を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の縛衝溶液をカ
ラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラムから流
出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定する為
の検出器と、を具備し、前記クロマトグラフィーカラム
は、液をカラムに供給し、かつ液をカラムから受取るた
めに夫々入口と出口を持つマウントの間に圧縮されるこ
とにより装置に取外しの可能な状態で便宜的に取付けら
れ、少なくとも該台の１つが、該カラムが台の間に挿入
される第１の位置と該カラムが該台間に保持されかつそ
の各々に対し液体密封シールとなる第２の位置との間を
移動することが可能であり、そのことにより上記目的が
達成される。
を含むクロマトグラフィーカラムと、装置の中にサンプ
ルを引込んで、それをカラムに通すことによりサンプル
の成分が充填材料により保持される誘導手段と、予め定
められた、連続する所定時間の関数として変化する濃度
を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の縛衝溶液をカ
ラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラムから流
出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定する為
の検出器と、を具備し、前記クロマトグラフィーカラム
は、液をカラムに供給し、かつ液をカラムから受取るた
めに夫々入口と出口を持つマウントの間に圧縮されるこ
とにより装置に取外しの可能な状態で便宜的に取付けら
れ、少なくとも該台の１つが、該カラムが台の間に挿入
される第１の位置と該カラムが該台間に保持されかつそ
の各々に対し液体密封シールとなる第２の位置との間を
移動することが可能であり、そのことにより上記目的が
達成される。
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置によるクロマ
トグラフィーの方法は、次のように実施される。まず、
充填材料を含むクロマトグラフィーカラムにサンプルを
通し、かつこれによりサンプルの成分が充填材料により
保有される。連続する所定時間の予め定められた関数と
しての緩衝液の濃度を変化せしめ、かつ上記の時間にわ
たり濃度の変化する緩衝液を低圧でカラムを通し、これ
によりサンプルの上記の成分が或る濃度の緩衝物質によ
り充填材料から開放される。そして、カラムから流出す
る溶液の中の上記の成分の時間の関数としての濃度を測
定する。
トグラフィーの方法は、次のように実施される。まず、
充填材料を含むクロマトグラフィーカラムにサンプルを
通し、かつこれによりサンプルの成分が充填材料により
保有される。連続する所定時間の予め定められた関数と
しての緩衝液の濃度を変化せしめ、かつ上記の時間にわ
たり濃度の変化する緩衝液を低圧でカラムを通し、これ
によりサンプルの上記の成分が或る濃度の緩衝物質によ
り充填材料から開放される。そして、カラムから流出す
る溶液の中の上記の成分の時間の関数としての濃度を測
定する。
本発明の装置は、さらに時間の関数として測定された濃
度をプリントされたグラフ又はビデオディスプレー又は
両者に表示するためのディスプレー手段を有することが
望ましい。便宜的に緩衝液の濃度は濃度の異なった２つ
の溶液の混合比を変えることにより必要に応じて変える
ことが出来る。
度をプリントされたグラフ又はビデオディスプレー又は
両者に表示するためのディスプレー手段を有することが
望ましい。便宜的に緩衝液の濃度は濃度の異なった２つ
の溶液の混合比を変えることにより必要に応じて変える
ことが出来る。
これは、異なった濃度の緩衝液をそれぞれが収容されて
いる別個のコントロールされた速度で駆動される２つの
シリンジの出力側を連結する溶液の２つの貯槽に接続さ
れた匂配バルブを用いることにより行なうことができる
。カラムの長さは、例えばｌＯ−とされ、充填材料とし
ては、ポリアスパラ酸シリカを用いるのが望ましい。プ
ロセスは、５００ｋＰａ以下、特にＴＧ〜２１０ｋＰａ
の間で、できれば約１００ｋＰａで行なわれるのが良い
。
いる別個のコントロールされた速度で駆動される２つの
シリンジの出力側を連結する溶液の２つの貯槽に接続さ
れた匂配バルブを用いることにより行なうことができる
。カラムの長さは、例えばｌＯ−とされ、充填材料とし
ては、ポリアスパラ酸シリカを用いるのが望ましい。プ
ロセスは、５００ｋＰａ以下、特にＴＧ〜２１０ｋＰａ
の間で、できれば約１００ｋＰａで行なわれるのが良い
。
クロマトグラフィーカラムは液をカラムに供給し、かつ
液をカラムから受取るために夫々入口と出口を持つマウ
ントの間に圧縮されることにより装置に取外しの可能な
状態で便宜的に取付けられる。これによりカラムは容易
に取外されかつ取替えることが可能である。
液をカラムから受取るために夫々入口と出口を持つマウ
ントの間に圧縮されることにより装置に取外しの可能な
状態で便宜的に取付けられる。これによりカラムは容易
に取外されかつ取替えることが可能である。
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、サンプル
が装置に装入された時には、その動作は簡単に指令され
、次にサンプルを装置に導き、分析を行い、かつオペレ
ーターの操作をさらに必要とすることなく結果をディス
プレーするように、格納されたプログラムにより動作す
るマイクロプロセッサーによりコントロールされるのが
望ましい。
が装置に装入された時には、その動作は簡単に指令され
、次にサンプルを装置に導き、分析を行い、かつオペレ
ーターの操作をさらに必要とすることなく結果をディス
プレーするように、格納されたプログラムにより動作す
るマイクロプロセッサーによりコントロールされるのが
望ましい。
また、本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、低
圧液体クロマトグラフィーにより液状のサンプルをテス
トする低圧液体クロマトグラフィー装置であって、充填
材料を含むクロマトグラフィーカラムと、装置の中にサ
ンプルを引込んで、それをカラムに通すことによりサン
プルの成分が充填材料により保持される誘導手段と、予
め定められた、連続する所定時間の関数として変化する
濃度を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の緩衝溶液
をカラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラムか
ら流出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定す
る為の検出器と、を具備し、更に、複数個の取り替え用
クロマトグラフィーカラム、複数個のサンプルキャリア
、及び該クロマトグラフィー装置により該液体をテスト
する以前に該液体を処理する溶液の入った複数個の予め
満たされたサンプル容器を有し、該サンプル誘導手段は
該サンプル容器を受け取る手段を有してなり、そのこと
により上記問題が解決される。
圧液体クロマトグラフィーにより液状のサンプルをテス
トする低圧液体クロマトグラフィー装置であって、充填
材料を含むクロマトグラフィーカラムと、装置の中にサ
ンプルを引込んで、それをカラムに通すことによりサン
プルの成分が充填材料により保持される誘導手段と、予
め定められた、連続する所定時間の関数として変化する
濃度を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の緩衝溶液
をカラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラムか
ら流出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定す
る為の検出器と、を具備し、更に、複数個の取り替え用
クロマトグラフィーカラム、複数個のサンプルキャリア
、及び該クロマトグラフィー装置により該液体をテスト
する以前に該液体を処理する溶液の入った複数個の予め
満たされたサンプル容器を有し、該サンプル誘導手段は
該サンプル容器を受け取る手段を有してなり、そのこと
により上記問題が解決される。
該低圧液体クロマトグラフィー装置は、血液成分をテス
トすることも可能である。サンプルは血液サンプルをキ
ャリアー上に置き、例えば血液サンプルを毛細官の中に
吸引し、血液を溶血しかつ稀釈する液のコンテナーの中
にキャリアーを置き、かつ得られた混合体のサンプルを
カラムに通すことにより、血液サンプルは患者の指を突
き刺しかつ出て来る血液の液溜に毛細管を挿し込むこと
により容易に採取することが出来る。毛細管自身は、次
に液の容器の中に落し込まれ、所定時間にわたって撹拌
された後に、装置の中に入れてその中に液を吸引させる
。サンプルを処理するのに用いられる液はクロマトグラ
フィープロセスに用いられる緩衝液の一つであることが
望ましい。
トすることも可能である。サンプルは血液サンプルをキ
ャリアー上に置き、例えば血液サンプルを毛細官の中に
吸引し、血液を溶血しかつ稀釈する液のコンテナーの中
にキャリアーを置き、かつ得られた混合体のサンプルを
カラムに通すことにより、血液サンプルは患者の指を突
き刺しかつ出て来る血液の液溜に毛細管を挿し込むこと
により容易に採取することが出来る。毛細管自身は、次
に液の容器の中に落し込まれ、所定時間にわたって撹拌
された後に、装置の中に入れてその中に液を吸引させる
。サンプルを処理するのに用いられる液はクロマトグラ
フィープロセスに用いられる緩衝液の一つであることが
望ましい。
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置用補充ハック
は、複数個のクロマトグラフィーカラム、複数個の充填
済みのサンプル容器、複数個のサンプルキャリア及び複
数個の緩衝液コンテナを備えており、そのことにより上
記目的が達成される。
は、複数個のクロマトグラフィーカラム、複数個の充填
済みのサンプル容器、複数個のサンプルキャリア及び複
数個の緩衝液コンテナを備えており、そのことにより上
記目的が達成される。
本発明のクロマトグラフィーカラムは、カラム充填材料
が収容される空間を限定するカラム体を有し、該カラム
体は入口開口を限定する手段および出口開口を限定する
手段を有し、しかも該手段は、カラム体の内側の肩を限
定するとともに上記の開口を囲み、かつその各々の上に
は充填材料を支持する為のプラスチックディスクが取付
けられ、該カラム体は第１および第２部分に分けられ、
各部分は前記開口のいずれか一つをその端面に備えてお
り、従ってカラムを形成する為に２つの部分が互いに結
合される前に充填材料が第１部分に充填されるようにな
っており、そのことにより上記目的が達成される。
が収容される空間を限定するカラム体を有し、該カラム
体は入口開口を限定する手段および出口開口を限定する
手段を有し、しかも該手段は、カラム体の内側の肩を限
定するとともに上記の開口を囲み、かつその各々の上に
は充填材料を支持する為のプラスチックディスクが取付
けられ、該カラム体は第１および第２部分に分けられ、
各部分は前記開口のいずれか一つをその端面に備えてお
り、従ってカラムを形成する為に２つの部分が互いに結
合される前に充填材料が第１部分に充填されるようにな
っており、そのことにより上記目的が達成される。
カラム体の２つの部分は圧入嵌合により互いに押込まれ
ることにより上記の装置に取付けられる時に互いに確実
に保持されるのが望ましい。コラム体の第１部分は一般
に円筒状であるのが便利であり、かつ片側端に経の小さ
い部分又は端末壁を有していることにより開口およびそ
の上に第２部分の一端が嵌合する他端の外径縮小部分を
限定する。第２部分や他の端も又その中に開口を持ち、
２つの開口はカラムに対する入口と出口を形成する。カ
ラムの各部は不活性プラスチック材料を使用するのが好
ましく、例えばポリカーボネートプラスチックを用いて
射出成型される。
ることにより上記の装置に取付けられる時に互いに確実
に保持されるのが望ましい。コラム体の第１部分は一般
に円筒状であるのが便利であり、かつ片側端に経の小さ
い部分又は端末壁を有していることにより開口およびそ
の上に第２部分の一端が嵌合する他端の外径縮小部分を
限定する。第２部分や他の端も又その中に開口を持ち、
２つの開口はカラムに対する入口と出口を形成する。カ
ラムの各部は不活性プラスチック材料を使用するのが好
ましく、例えばポリカーボネートプラスチックを用いて
射出成型される。
本発明のクロマトグラフィーカラムの製造方法は、第１
透過性プラスチックディスクをカラム体の第１部分の肩
の上に置《工程と、 該第１部分の開口から離れた端部に延出部材をかぶせて
延出させる工程と、カラムを満たす以上の皿の充填材料
を含むスラリーをカラム体第１部分に充填して少なくと
もその延出部材に充填する工程と、カラム体の第１部分
にある開口に真空を働か涜ることによりスラリーの水分
を除去しかっ充填材料をプラスチックディスクにパック
する工程と、延出部材を取外し余分の充填材料をスライ
スして除去する工程と、第２透過性プラスチックディス
クをカラム体の第２部分の肩に載せて、カラム体の第１
および第２部分を互いに押し付け合う工程と、を包含し
てなり、そのことにより上記目的が達成される。
透過性プラスチックディスクをカラム体の第１部分の肩
の上に置《工程と、 該第１部分の開口から離れた端部に延出部材をかぶせて
延出させる工程と、カラムを満たす以上の皿の充填材料
を含むスラリーをカラム体第１部分に充填して少なくと
もその延出部材に充填する工程と、カラム体の第１部分
にある開口に真空を働か涜ることによりスラリーの水分
を除去しかっ充填材料をプラスチックディスクにパック
する工程と、延出部材を取外し余分の充填材料をスライ
スして除去する工程と、第２透過性プラスチックディス
クをカラム体の第２部分の肩に載せて、カラム体の第１
および第２部分を互いに押し付け合う工程と、を包含し
てなり、そのことにより上記目的が達成される。
（実施例）
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置は第１図に模
式的に示されている。該装置の主要部分は、システムの
中を流れる液の流量をコントロールする為に用いられる
２本のシリンジｌおよび３、検出器ｌ３に取付けられた
クロマトグラフィーカラム４、サンプリング誘導チュー
ブ５、予め定められた一定の体積の液体を保持する２つ
の拘束ループ７および９、および２つの貯槽ｌ５および
ｌ７である。該装置は、また、マイクロプロセッサーを
有する。該マイクロプロセッサーは、ステッピングモー
ターによりシリンジｌおよび３をコントロールすると共
に、液体部分を互いに結合する各種のバルブをコントロ
ールし、さらには、検出器ｌ３からの結果を処理すると
共に出力する。
式的に示されている。該装置の主要部分は、システムの
中を流れる液の流量をコントロールする為に用いられる
２本のシリンジｌおよび３、検出器ｌ３に取付けられた
クロマトグラフィーカラム４、サンプリング誘導チュー
ブ５、予め定められた一定の体積の液体を保持する２つ
の拘束ループ７および９、および２つの貯槽ｌ５および
ｌ７である。該装置は、また、マイクロプロセッサーを
有する。該マイクロプロセッサーは、ステッピングモー
ターによりシリンジｌおよび３をコントロールすると共
に、液体部分を互いに結合する各種のバルブをコントロ
ールし、さらには、検出器ｌ３からの結果を処理すると
共に出力する。
緩衝溶液の貯槽ｌ５およびｌ７は、剛性を持つプラスチ
ックボトル、あるいは外側ボックスと内部の凹状に窪み
得る部分とを有する公知のワインボックスに似たフレキ
シブルで無菌状態の容器のいずれかを使用し得る。
ックボトル、あるいは外側ボックスと内部の凹状に窪み
得る部分とを有する公知のワインボックスに似たフレキ
シブルで無菌状態の容器のいずれかを使用し得る。
使用に際して、該装置は次のように作動する。
まず、サンプルは誘導ライン５を経て装置の中に吸引さ
れる（装置のこの部分は第４図および第５図にも示され
ている）。サンプルは２つの拘束ループ７および９を経
てシリンジｌにより吸引される。次にバルブ８が閉じら
れることにより拘束ループ７の中のサンプルをシリンジ
１から隔離する。
れる（装置のこの部分は第４図および第５図にも示され
ている）。サンプルは２つの拘束ループ７および９を経
てシリンジｌにより吸引される。次にバルブ８が閉じら
れることにより拘束ループ７の中のサンプルをシリンジ
１から隔離する。
このとき、拘束ループ９の中のサンプルが廃棄される。
これは、実際にテストされる拘束ループ７のサンプルが
、例えば汚染、気泡等による多数の理由で満足できない
状態の場合にも、サンプルから吸引された最初の液を使
用しないように行なわれる。
、例えば汚染、気泡等による多数の理由で満足できない
状態の場合にも、サンプルから吸引された最初の液を使
用しないように行なわれる。
その後、バルブ８が開かれ、シリンジｌがサンプルをカ
ラム４上にポンピングする。これにより、サンプルの各
種の成分がカラムの充填材料に異なった濃度で結合され
る。
ラム４上にポンピングする。これにより、サンプルの各
種の成分がカラムの充填材料に異なった濃度で結合され
る。
２つの緩衝液貯槽ｌ５およびｌ７には異なった濃度の緩
衝液が収容されており、２つのシリンジｌおよび３が、
それぞれの貯槽ｌ５およびｌ７から供給される緩衝液で
満たされる。その後、マイクロプロセッサーのコントロ
ール下で２つのシリンジ１および３は駆動され、これに
より緩衝溶液を混合点ｌ６からコラム４へと送給する。
衝液が収容されており、２つのシリンジｌおよび３が、
それぞれの貯槽ｌ５およびｌ７から供給される緩衝液で
満たされる。その後、マイクロプロセッサーのコントロ
ール下で２つのシリンジ１および３は駆動され、これに
より緩衝溶液を混合点ｌ６からコラム４へと送給する。
混和された溶液の濃度は、２つのシリンジｌおよび３の
夫々の供給率および緩衝液の濃度によって決まることは
明らかであり、従って、混和された溶液の濃度は、予め
格納されたプログラムに従ってマイクロプロセッサーに
より変えることが可能である。
夫々の供給率および緩衝液の濃度によって決まることは
明らかであり、従って、混和された溶液の濃度は、予め
格納されたプログラムに従ってマイクロプロセッサーに
より変えることが可能である。
図示された実施例においては、溶液混合のための混合室
は不要であり、各溶液は３本のチューブの結合部で互い
に混和される。溶液の混合室は必要に応じて使用するこ
とができる。与圧された貯槽に直接接続された匂配バル
ブ、例えば等しい供給率で駆動されるシリンジが、カラ
ムに供給される溶液の濃度をコントロールするのに用い
るようにしてもよい。
は不要であり、各溶液は３本のチューブの結合部で互い
に混和される。溶液の混合室は必要に応じて使用するこ
とができる。与圧された貯槽に直接接続された匂配バル
ブ、例えば等しい供給率で駆動されるシリンジが、カラ
ムに供給される溶液の濃度をコントロールするのに用い
るようにしてもよい。
緩衝液の濃度が、特定のサンプル成分をカラムの充填材
料から分離するのに充分な強度に達すると、この成分は
、コラムから流出して、該成分を検出し得る検出器ｌ３
に達する。マイクロプロセッサーは、カラムを通過する
緩衝液の濃度を一連の限定された段階又は連続匂配の形
で徐々に高めるようにプログラムされている。このよう
にして、いかなる濃度の緩衝液がカラムを通過している
か、またこれらのサンプル濃度の何れがカラムの充填材
料から分離され、かつ検出器ｌ３に検出されているかを
随時知ることができる。このとき、検出器ｌ３の出力を
積分することによりサンプル中の該当成分の量が計算さ
れ、従って定量的な結果が得られる。使用される検出器
ｌ３は、従来の低圧液体クロマトグラフィー装置に用い
られたものに類似しており、それを通過する液体の所定
波長での吸光を測定するにすぎない。該検出器の出力は
、マイクロプロセッサーに入力され、該マイクロプロセ
ッサーにより、結果が処理されて出力される。該マイク
ロプロセッサーは、装置全体をコントロールする。結果
はグラフィックの形でプリンター２３によるハードコピ
ー、又はビデオディスプレー２１のいずれによってもデ
ィスプレーされる。得られた結果の例が、第６図に示さ
れている。
料から分離するのに充分な強度に達すると、この成分は
、コラムから流出して、該成分を検出し得る検出器ｌ３
に達する。マイクロプロセッサーは、カラムを通過する
緩衝液の濃度を一連の限定された段階又は連続匂配の形
で徐々に高めるようにプログラムされている。このよう
にして、いかなる濃度の緩衝液がカラムを通過している
か、またこれらのサンプル濃度の何れがカラムの充填材
料から分離され、かつ検出器ｌ３に検出されているかを
随時知ることができる。このとき、検出器ｌ３の出力を
積分することによりサンプル中の該当成分の量が計算さ
れ、従って定量的な結果が得られる。使用される検出器
ｌ３は、従来の低圧液体クロマトグラフィー装置に用い
られたものに類似しており、それを通過する液体の所定
波長での吸光を測定するにすぎない。該検出器の出力は
、マイクロプロセッサーに入力され、該マイクロプロセ
ッサーにより、結果が処理されて出力される。該マイク
ロプロセッサーは、装置全体をコントロールする。結果
はグラフィックの形でプリンター２３によるハードコピ
ー、又はビデオディスプレー２１のいずれによってもデ
ィスプレーされる。得られた結果の例が、第６図に示さ
れている。
コントロール装置は、クロマトグラフイー装置全体がス
イッチオンされた時に、数回、例えば５回のブランク動
作、即ちカラムがサンプルを持たぬ形での動作を行なう
。これにより、気泡と汚染が該クロマトグラフィー装置
から除去される。該クロマトグラフ．イー装置はカラム
が使用可能な状態になるまで、ブランク動作を続けるよ
うになっていることが望ましい。該クロマトグラフイー
装置が停止する時にも同じ手順が用いられる。回路はカ
ラムが使用された回数をカウントするので、カラムの寿
命に限界を設定することができる。本実施例の場合には
、カラムの限界はｌ００サンプルである。
イッチオンされた時に、数回、例えば５回のブランク動
作、即ちカラムがサンプルを持たぬ形での動作を行なう
。これにより、気泡と汚染が該クロマトグラフィー装置
から除去される。該クロマトグラフ．イー装置はカラム
が使用可能な状態になるまで、ブランク動作を続けるよ
うになっていることが望ましい。該クロマトグラフイー
装置が停止する時にも同じ手順が用いられる。回路はカ
ラムが使用された回数をカウントするので、カラムの寿
命に限界を設定することができる。本実施例の場合には
、カラムの限界はｌ００サンプルである。
本発明のクロマトグラフィーカラムは、第３図に詳しく
示されている。該カラムは２つの部分に分けることの出
来るプラスチック体であり、下部３ｌと上部３３とから
成っている。上記の２つの部品は、下部３ｌの実質的に
広い開放端を、外径の縮小された上部３３の下端部分３
４の周りにかぶせることにより相互に圧入嵌合すること
の出来るように成型されている。液体に対する入口３６
は、下部３１の下端壁に設けられており、出口３５は上
部３３の上端壁に設けられている。入口３６および出口
３５はポリウレタン又はＰ． Ｔ． Ｆ． Ｅを用いた
透過性を有する薄膜（プラスチックディスク）３７によ
りカバーされており、上部３３にはカラム充填材料３８
を後述する方法で充填される。カラムの残余部分には、
不活性の透過性部材３９が充填される。
示されている。該カラムは２つの部分に分けることの出
来るプラスチック体であり、下部３ｌと上部３３とから
成っている。上記の２つの部品は、下部３ｌの実質的に
広い開放端を、外径の縮小された上部３３の下端部分３
４の周りにかぶせることにより相互に圧入嵌合すること
の出来るように成型されている。液体に対する入口３６
は、下部３１の下端壁に設けられており、出口３５は上
部３３の上端壁に設けられている。入口３６および出口
３５はポリウレタン又はＰ． Ｔ． Ｆ． Ｅを用いた
透過性を有する薄膜（プラスチックディスク）３７によ
りカバーされており、上部３３にはカラム充填材料３８
を後述する方法で充填される。カラムの残余部分には、
不活性の透過性部材３９が充填される。
このようなカラムの構造はカラム充填材を充填する際に
、特に簡単な方法を用いることを可能にする。この方法
は、比較的迅速であって自動化に好適であり、しかも、
カラム充填材を確実に充填することを可能にする。まず
、ポリウレタンフィルター（プラスチックディスク）３
７が倒立された上部３３の中に入れられて、端面が開放
された円筒又はカラーがその縮小部３４に、その位置か
ら延出するように取付けられる。次に、カラム上部３３
およびカラーには、カラムを充填するのに必要な量以上
の充填材料３８を含むスラリーが充填されて、開口３６
に真空を作用せし′められる。これにより液体が外部に
吸出され、その結果、カラム充填材料３８はカラム部分
３３とカラーとに充填された状態となる。カラーは、次
に捩って取外され、カラム充填材料３８は、カラム上部
３３の端部からあふれる状態に保たれ、次に余分の充填
材料がそぎ落とされる。そして、ポリウレタンフィルタ
ー３７が所定位置に設けられて、不活性の多孔性材料が
充填された下部３１を上部３３に勘合することによりカ
ラムが完成する。余分の充填材料のそぎ落しは、回転カ
ッターを用いて行なうことができる。このとき、中央に
盛上った円丘部分が残るのでカラムの２つの部分が互い
に押付けられることにより充填材料３８に圧縮力が加わ
る。
、特に簡単な方法を用いることを可能にする。この方法
は、比較的迅速であって自動化に好適であり、しかも、
カラム充填材を確実に充填することを可能にする。まず
、ポリウレタンフィルター（プラスチックディスク）３
７が倒立された上部３３の中に入れられて、端面が開放
された円筒又はカラーがその縮小部３４に、その位置か
ら延出するように取付けられる。次に、カラム上部３３
およびカラーには、カラムを充填するのに必要な量以上
の充填材料３８を含むスラリーが充填されて、開口３６
に真空を作用せし′められる。これにより液体が外部に
吸出され、その結果、カラム充填材料３８はカラム部分
３３とカラーとに充填された状態となる。カラーは、次
に捩って取外され、カラム充填材料３８は、カラム上部
３３の端部からあふれる状態に保たれ、次に余分の充填
材料がそぎ落とされる。そして、ポリウレタンフィルタ
ー３７が所定位置に設けられて、不活性の多孔性材料が
充填された下部３１を上部３３に勘合することによりカ
ラムが完成する。余分の充填材料のそぎ落しは、回転カ
ッターを用いて行なうことができる。このとき、中央に
盛上った円丘部分が残るのでカラムの２つの部分が互い
に押付けられることにより充填材料３８に圧縮力が加わ
る。
本発明の実施例において、血中ヘモグロビンのテストに
好適に用いられるカラム充填材料は、シリカビードにボ
ンドされたポリアスパラ酸である。
好適に用いられるカラム充填材料は、シリカビードにボ
ンドされたポリアスパラ酸である。
完成したカラムは、特に、公知のカラムに比較して手荒
い扱いにも、ある程度は耐えることができるので、使用
済みのカラムは、比較的熟練度の低い技術者により取替
えることができ、しかも、取替用のカラムは診療所まで
郵送することが出来る。さらに、カラムの製造コストは
比較的安くなる。
い扱いにも、ある程度は耐えることができるので、使用
済みのカラムは、比較的熟練度の低い技術者により取替
えることができ、しかも、取替用のカラムは診療所まで
郵送することが出来る。さらに、カラムの製造コストは
比較的安くなる。
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置におけるカラ
ム保持部は第４図および第５図に示されている。このカ
ラム保持部は、カラムに液が供給される液の通路４４を
有する下部マウント４３と、液の通路４７を有する上部
マウント４５を有する。上部マウント４５は、カラムの
上部コーナーに当接する外側シ一ト４６と、カラムの端
面に当接して該端面を液密にシールし、また、カラムか
らの出口を取巻く内部シ一ト４６Ａを有する。カラムの
出口がらの液は、内部シ一ト４６Ａの配設領域を通り、
かつ出口４７を経てカラム保持部の主要部分に達する。
ム保持部は第４図および第５図に示されている。このカ
ラム保持部は、カラムに液が供給される液の通路４４を
有する下部マウント４３と、液の通路４７を有する上部
マウント４５を有する。上部マウント４５は、カラムの
上部コーナーに当接する外側シ一ト４６と、カラムの端
面に当接して該端面を液密にシールし、また、カラムか
らの出口を取巻く内部シ一ト４６Ａを有する。カラムの
出口がらの液は、内部シ一ト４６Ａの配設領域を通り、
かつ出口４７を経てカラム保持部の主要部分に達する。
上部マウント４５は、図示された下側位置と、カラム４
がカラム保持部から正面の開口４ｏを通って持ち上げら
れるように、シート４６および４６Ａにてカラム４上に
挙げられた上側位置とに移動可能である。
がカラム保持部から正面の開口４ｏを通って持ち上げら
れるように、シート４６および４６Ａにてカラム４上に
挙げられた上側位置とに移動可能である。
上部マウント４５はハンドル４９により作動するカム機
構４８により動かされる（第５図参照）。カム機構４８
の動作面５０は、上部マウント４５が上側、下側いずれ
の位置においても停止し得るような形状にされている。
構４８により動かされる（第５図参照）。カム機構４８
の動作面５０は、上部マウント４５が上側、下側いずれ
の位置においても停止し得るような形状にされている。
図示されたカラム４は、互いに圧入される２つの部分を
有することは前述の通りであり、従って上部マウント４
５が下降された時にカラム４に作用する圧力がカラムを
互いに押し付け合う状態にする。第５図は、カラム保持
部の上部マウント４５の背面およびカム機構４８のハン
ドル４９を特に明確に示している。
有することは前述の通りであり、従って上部マウント４
５が下降された時にカラム４に作用する圧力がカラムを
互いに押し付け合う状態にする。第５図は、カラム保持
部の上部マウント４５の背面およびカム機構４８のハン
ドル４９を特に明確に示している。
クロマトグラフィー装置のサンプル誘導部分は第２図に
拡大表示されている。サンプルはサンプル容器２５から
取り出される。該誘導部分は可動下部ブラットフォーム
２７を有し、これは実線の上昇位置と点線の下降位置に
移動可能であり、スプリング２４により上昇位置に押し
上げられている。該誘導部分は、上部シート２８を有し
、該上部シート２８を通ってサンプル誘導チニーブ５が
下方へ延出している。ブラットフォーム２７が下降位置
に保持された状態では、サンプル容器２５は、その上部
がシ一ト２８の近傍にて誘導チューブ５を覆って位置さ
れる。可動ブラットフォーム２７は、サンプル容器２５
の下部を支持して該サンプル容器２５の開放端をシート
２８に押し付けるべく、その上昇位置に移動される。本
実施例では、サンプルを収集するサンプル容器２５は、
後述のサンプル収集法も考慮すると、毛細管２６であっ
てもよい（最初にサンプルを収集するために好適に用い
られる）。第２図はサンプル容器２５を垂直に保持する
べく配置されたブラットフォーム２７を示しているが、
他の実施例として、サンプル容器２５として用いられる
毛細管がサンプル誘導チューブ５の働きを阻害せぬよう
に、ブラットフォーム２７が該毛細管を傾けて保持する
ようにしてもよく、この場合は、毛細管は片側が下降し
た状態になり、サンプルをチューブ５に取入れやすくな
る。
拡大表示されている。サンプルはサンプル容器２５から
取り出される。該誘導部分は可動下部ブラットフォーム
２７を有し、これは実線の上昇位置と点線の下降位置に
移動可能であり、スプリング２４により上昇位置に押し
上げられている。該誘導部分は、上部シート２８を有し
、該上部シート２８を通ってサンプル誘導チニーブ５が
下方へ延出している。ブラットフォーム２７が下降位置
に保持された状態では、サンプル容器２５は、その上部
がシ一ト２８の近傍にて誘導チューブ５を覆って位置さ
れる。可動ブラットフォーム２７は、サンプル容器２５
の下部を支持して該サンプル容器２５の開放端をシート
２８に押し付けるべく、その上昇位置に移動される。本
実施例では、サンプルを収集するサンプル容器２５は、
後述のサンプル収集法も考慮すると、毛細管２６であっ
てもよい（最初にサンプルを収集するために好適に用い
られる）。第２図はサンプル容器２５を垂直に保持する
べく配置されたブラットフォーム２７を示しているが、
他の実施例として、サンプル容器２５として用いられる
毛細管がサンプル誘導チューブ５の働きを阻害せぬよう
に、ブラットフォーム２７が該毛細管を傾けて保持する
ようにしてもよく、この場合は、毛細管は片側が下降し
た状態になり、サンプルをチューブ５に取入れやすくな
る。
本発明は、特に血液サンプルの分析を本来の目的として
経験の浅いオペレーターによる使用に適合する如くデザ
インされている。前述の公知技術の主たる問題の一つは
、血液サンプルを取り出してそれを分析に適したものに
調製するために熟練を要することである。しかし、本発
明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、特にサンプル
を容易に取り出すことができ、かつ単一溶液プロセスで
処理される血液サンプルを用いるようにデザインされて
いる。
経験の浅いオペレーターによる使用に適合する如くデザ
インされている。前述の公知技術の主たる問題の一つは
、血液サンプルを取り出してそれを分析に適したものに
調製するために熟練を要することである。しかし、本発
明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、特にサンプル
を容易に取り出すことができ、かつ単一溶液プロセスで
処理される血液サンプルを用いるようにデザインされて
いる。
本発明の装置によれば、血液サンプルはシリンジによっ
て採取されず、代わりに患者の指を刺しかつ毛細管を出
て《る血液中にいれるのみで良い。
て採取されず、代わりに患者の指を刺しかつ毛細管を出
て《る血液中にいれるのみで良い。
この実施例における毛細管は、例えば２０マイクロリッ
トルの容量を持つＪ毛細管は、次に血液を希釈かつ溶血
するための溶液を含む標準サンプル容器の中に入れられ
る。この実施例においては、サンブル容器は１ミリリッ
トルの処理溶液が予め収容されている。量は種々に選ぶ
ことが出来る。得られた混合体の濾過又は遠心分離は不
要であり、サンプルは、好ましい時間、例えば５分以下
の短時間でない時間にわたって、例えば手により振盪さ
せることにより撹拌するのみで良《、次に、上述したよ
うに、装置のサンプル誘導部分に入れられる。
トルの容量を持つＪ毛細管は、次に血液を希釈かつ溶血
するための溶液を含む標準サンプル容器の中に入れられ
る。この実施例においては、サンブル容器は１ミリリッ
トルの処理溶液が予め収容されている。量は種々に選ぶ
ことが出来る。得られた混合体の濾過又は遠心分離は不
要であり、サンプルは、好ましい時間、例えば５分以下
の短時間でない時間にわたって、例えば手により振盪さ
せることにより撹拌するのみで良《、次に、上述したよ
うに、装置のサンプル誘導部分に入れられる。
血液サンプル中のヘモグロビン、特に過糖化ヘモグロビ
ンをテストすることを意図された本発明の実施例に於い
ては、処理溶液は溶離プロセスに用いられる緩衝溶液の
一つ、この場合には下記の緩衝溶液Ａとされる。また容
器は、装置に置かれる前に５分以下の短時間でない時間
にわたり撹拌することが必要である。
ンをテストすることを意図された本発明の実施例に於い
ては、処理溶液は溶離プロセスに用いられる緩衝溶液の
一つ、この場合には下記の緩衝溶液Ａとされる。また容
器は、装置に置かれる前に５分以下の短時間でない時間
にわたり撹拌することが必要である。
本発明の低圧液体クロマトグラフィー装置は、オペレー
ターの指令により自動的に行うことの出来る多数のテス
トがプログラミングされている。
ターの指令により自動的に行うことの出来る多数のテス
トがプログラミングされている。
従って、多数のテストのそれぞれを一つ又は２つのボタ
ン走査するだけで選択的に実行することが出来る。テス
トのタイプが入力されスタートスイッチが操作されると
、装置は自動的にサンプルの誘導、テトスおよびテスト
結果の各プロセスを行い、その結果の出力を必要な形で
ディスプレーする。
ン走査するだけで選択的に実行することが出来る。テス
トのタイプが入力されスタートスイッチが操作されると
、装置は自動的にサンプルの誘導、テトスおよびテスト
結果の各プロセスを行い、その結果の出力を必要な形で
ディスプレーする。
第６図は過糖化ヘモグロビンに対する血液分析の典型的
な出力を示す。これは上記の装置を用い、かつ下記の２
つの緩衝溶液を用いて行われた。
な出力を示す。これは上記の装置を用い、かつ下記の２
つの緩衝溶液を用いて行われた。
緩衝液Ａ
ビスートリス ４０ｍＭ： − ４１．８４ｇ／ ５
ＬＫＣＮ ４ ｍＭ：−１．３０ｇ ／ ５
ＬＮａＮ３（ａｚｉｄｅ＞ ３ Ｍｍ： − １
．ＯＯｇ ／ ５ Ｌ緩衝液Ｂ ＮａＣｌ ２０ＧＭｍｓ − ５８．４４ｇ
／ ５ Ｌピスートリス ４０ｗ＋Ｍ： − ４１．８
４ｇ ／ ５ ＬＫＣＮ ４ ｍＭ： −
１．３０ｇ ／ ５ ＬＮａＮ３（ａｚｉｄｅ）
３ Ｍｍ：−１．ＯＯｇ ／ ５ Ｌ第１の大きいピー
ク２は、 検出器を通過する過 ｉ化ヘモグロビンであり、第２のビーク３は検出器を通
過する非一過糖化ヘモグロビンを表わす。
ＬＫＣＮ ４ ｍＭ：−１．３０ｇ ／ ５
ＬＮａＮ３（ａｚｉｄｅ＞ ３ Ｍｍ： − １
．ＯＯｇ ／ ５ Ｌ緩衝液Ｂ ＮａＣｌ ２０ＧＭｍｓ − ５８．４４ｇ
／ ５ Ｌピスートリス ４０ｗ＋Ｍ： − ４１．８
４ｇ ／ ５ ＬＫＣＮ ４ ｍＭ： −
１．３０ｇ ／ ５ ＬＮａＮ３（ａｚｉｄｅ）
３ Ｍｍ：−１．ＯＯｇ ／ ５ Ｌ第１の大きいピー
ク２は、 検出器を通過する過 ｉ化ヘモグロビンであり、第２のビーク３は検出器を通
過する非一過糖化ヘモグロビンを表わす。
該グラフに併記された表から明らかなように、プロセス
回路は自動的に、グラフにおけるピークの下の面積を（
そのオーバーラップを考慮して）積算、即ち曲線を積分
する。これによりサンプル中の過糖化ヘモグロビンの総
量が検出される。また、この実施例におけるプロセス回
路は、この中で他のヘモグロビンの異常を表わすサンプ
ル中（７） 他ノピークを探知するようにプログラミン
グされている。
回路は自動的に、グラフにおけるピークの下の面積を（
そのオーバーラップを考慮して）積算、即ち曲線を積分
する。これによりサンプル中の過糖化ヘモグロビンの総
量が検出される。また、この実施例におけるプロセス回
路は、この中で他のヘモグロビンの異常を表わすサンプ
ル中（７） 他ノピークを探知するようにプログラミン
グされている。
検出器ｌ３は、例えば変調の可能なレーザー装置に用い
ることにより、あるいは数種類の固定周波数光源を用い
ることにより、さらにまた、多数の交換可能なフィルタ
ーを持つ無収差光源を用いることにより、数種類の波長
で測定し得る。従って、種々の波長でのテストが可能で
ある。このように、異なった緩衝溶液および必要に応じ
て異なったカラム充填材料（容易に取り替えることの出
来るカラムにより容易に使用される）を用いることによ
り、本発明の装置は各種のテストを行うことができ、そ
のすべてのテストはオペレーターに比較的容易に選択さ
れる。
ることにより、あるいは数種類の固定周波数光源を用い
ることにより、さらにまた、多数の交換可能なフィルタ
ーを持つ無収差光源を用いることにより、数種類の波長
で測定し得る。従って、種々の波長でのテストが可能で
ある。このように、異なった緩衝溶液および必要に応じ
て異なったカラム充填材料（容易に取り替えることの出
来るカラムにより容易に使用される）を用いることによ
り、本発明の装置は各種のテストを行うことができ、そ
のすべてのテストはオペレーターに比較的容易に選択さ
れる。
シリンジ、カラム、液体通路検出器およびディスプレー
並びに電子プロセス回路のすべては卓上サイズの単一ユ
ニットにまとめられる。従って該装置は、個人診療所で
の使用に極めて適している。
並びに電子プロセス回路のすべては卓上サイズの単一ユ
ニットにまとめられる。従って該装置は、個人診療所で
の使用に極めて適している。
診療所には適切な緩衝溶液、予め充填されたサンプル容
器、およびサンプル採取のための適切な長さを有する毛
細管、および多数の取替カラムが準備されている。緩衝
溶液、カラム、容器および毛細管は、必要に応じて又は
定期的に補給され、部品のすべては手荒い取り扱いに耐
えることの出来る堅牢さを持ち、しかも、軽量かつ小型
であるために郵送等が可能である。このことは、個々の
診療所がテスト、例えば血液テストを、即時に、診療所
の中で行うことができ、かつサンプルの採取から数分後
に血液テスト結果を得ることの出来ることを意味する。
器、およびサンプル採取のための適切な長さを有する毛
細管、および多数の取替カラムが準備されている。緩衝
溶液、カラム、容器および毛細管は、必要に応じて又は
定期的に補給され、部品のすべては手荒い取り扱いに耐
えることの出来る堅牢さを持ち、しかも、軽量かつ小型
であるために郵送等が可能である。このことは、個々の
診療所がテスト、例えば血液テストを、即時に、診療所
の中で行うことができ、かつサンプルの採取から数分後
に血液テスト結果を得ることの出来ることを意味する。
診療所に供給される機器および取替材料には、標準サン
プル（マークされた容器内に収容されている）を含み、
かつこれは品質管理の目的でクロマトグラフィー装置の
中を通過させることができる。その組成が品質検査者に
のみ判明しているサンプルが診療所に送られかつテスト
結果が検査者に報告されるという盲検品質管理システム
を実施することも可能である。
プル（マークされた容器内に収容されている）を含み、
かつこれは品質管理の目的でクロマトグラフィー装置の
中を通過させることができる。その組成が品質検査者に
のみ判明しているサンプルが診療所に送られかつテスト
結果が検査者に報告されるという盲検品質管理システム
を実施することも可能である。
（発明の高価）
以上のよう蓚こ、本発明の低圧液体クロマトグラフィー
装置は、使用が容易であり、比較的小型であるため、世
界中の診療所、病院および外科医により個人ベースで使
用することの出来る。また、テスト中に使用される部品
のすべては、本発明の補給パックにより、カラム、緩衝
溶液、予め充填されたサンプル容器および毛細管を１包
みにしてユーザーに発送することにより容易に補給する
ことが出来る。本発明の低圧液体クロマトグラフィー装
置は、また、広範囲のヘモグロビンの異ｉに対するテス
トをプログラミングしかつ実行することにも適している
。
装置は、使用が容易であり、比較的小型であるため、世
界中の診療所、病院および外科医により個人ベースで使
用することの出来る。また、テスト中に使用される部品
のすべては、本発明の補給パックにより、カラム、緩衝
溶液、予め充填されたサンプル容器および毛細管を１包
みにしてユーザーに発送することにより容易に補給する
ことが出来る。本発明の低圧液体クロマトグラフィー装
置は、また、広範囲のヘモグロビンの異ｉに対するテス
トをプログラミングしかつ実行することにも適している
。
毛細管の容積は、例えば、２０マイクロリットルであり
、容器にはサンプルを処理するのに必要な溶液が予め充
填されている。
、容器にはサンプルを処理するのに必要な溶液が予め充
填されている。
本発明のクロマトグラフィーカラムは、充填材料を容易
に充填され、本発明の低圧液体クロマトグラフィーに好
適に用いられる。
に充填され、本発明の低圧液体クロマトグラフィーに好
適に用いられる。
また、本発明のクロマトグラフィーの製造方法は、充填
材料が容易にかつ確実に充填することができる。
材料が容易にかつ確実に充填することができる。
４． の． な言日
第１図は本発明による低圧液体クロマトグラフィー装置
を示す系統図、 第２図はその装置のサンプル装入部分、第３図はその装
置のクロマトグラフィーカラム、第４図は本発明による
装置のカラムマウントの側面図、 第５図はそのカラムマウントの背面図、第６図は本発明
の低圧液体クロマトグラフィー装置を用いて得られた結
果を表とともに示すグラフである。
を示す系統図、 第２図はその装置のサンプル装入部分、第３図はその装
置のクロマトグラフィーカラム、第４図は本発明による
装置のカラムマウントの側面図、 第５図はそのカラムマウントの背面図、第６図は本発明
の低圧液体クロマトグラフィー装置を用いて得られた結
果を表とともに示すグラフである。
１．３・・・シリンジ、４・・・クロマトグラフィーカ
ラム、５・・・サンプル誘導チューブ、７．９・・・拘
束ループ、ｌ３・・・検出器、１５．１７・・・貯槽、
２５・・・サンプル容器、２７・・・可動下部ブラット
フォーム、２８・・・シート、３ｌ・・・下部、３３・
・・上部、３５・・・出口、３６・・・入口、３７・・
・ふイルター（プラスチックディスク）、３８・・・充
填材料、４０・・・開口、４３・・・下部マウント、４
５・・・上部マウント、４６・・・内部シート、４６Ａ
・・・外側シート、４７・・・出口、４Ｂ・・・カム機
構。
ラム、５・・・サンプル誘導チューブ、７．９・・・拘
束ループ、ｌ３・・・検出器、１５．１７・・・貯槽、
２５・・・サンプル容器、２７・・・可動下部ブラット
フォーム、２８・・・シート、３ｌ・・・下部、３３・
・・上部、３５・・・出口、３６・・・入口、３７・・
・ふイルター（プラスチックディスク）、３８・・・充
填材料、４０・・・開口、４３・・・下部マウント、４
５・・・上部マウント、４６・・・内部シート、４６Ａ
・・・外側シート、４７・・・出口、４Ｂ・・・カム機
構。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、充填材料を含むクロマトグラフィーカラムと、 装置の中にサンプルを引込んで、それをカラムに通すこ
とによりサンプルの成分が充填材料により保持される誘
導手段と、 予め定められた、連続する所定時間の関数として変化す
る濃度を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の緩衝溶
液をカラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラム
から流出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定
する為の検出器と、を具備し、 前記クロマトグラフィーカラムは、液をカラムに供給し
、かつ液をカラムから受取るために夫々入口と出口を持
つマウントの間に圧縮されることにより装置に取外しの
可能な状態で便宜的に取付けられ、少なくとも該台の１
つが、該カラムが台の間に挿入される第１の位置と該カ
ラムが該台間に保持されかつその各々に対し液体密封シ
ールとなる第２の位置との間を移動することが可能であ
る、 低圧液体クロマトグラフィー装置。 ２、前記緩衝液が５００ｋＰａより低い圧力で前記カラ
ムを通過する請求項１に記載の装置。 ３、前記サンプルの入っている容器を受け取るホルダを
更に備え、前記サンプル誘導手段は該容器が該ホルダの
所定位置にあるときサンプルを該容器から吸い込むよう
に調節される請求項１又は２に記載の装置。 ４、カラム充填材料が収容される空間を限定するカラム
体を有し、 該カラム体は入口開口を限定する手段および出口開口を
限定する手段を有し、 しかも該手段は、カラム体の内側の肩を限定するととも
に上記の開口を囲み、かつその各々の上には充填材料を
支持する為のプラスチックディスクが取付けられ、 該カラム体は第１および第２部分に分けられ、各部分は
前記開口のいずれか一つをその端面に備えており、 従ってカラムを形成する為に２つの部分が互いに結合さ
れる前に充填材料が第１部分に充填されるクロマトグラ
フィーカラム。 ５、第１透過性プラスチックディスクをカラム体の第１
部分の肩の上に置く工程と、 該第１部分の開口から離れた端部に延出部材をかぶせて
延出させる工程と、 カラムを満たす以上の量の充填材料を含むスラリーをカ
ラム体第１部分に充填して少なくともその延出部材に充
填する工程と、 カラム体の第１部分にある開口に真空を働かせることに
よりスラリーの水分を除去しかつ充填材料をプラスチッ
クディスクにパックする工程と、延出部材を取外し余分
の充填材料をスライスして除去する工程と、 第２透過性プラスチックディスクをカラム体の第２部分
の肩に載せて、カラム体の第１および第２部分を互いに
押し付け合う工程と、 を包含する請求項４に記載のカラムの製造方法。 ６、低圧液体クロマトグラフィーにより液状のサンプル
をテストする低圧液体クロマトグラフィー装置であって
、 充填材料を含むクロマトグラフィーカラムと、装置の中
にサンプルを引込んで、それをカラムに通すことにより
サンプルの成分が充填材料により保持される誘導手段と
、 予め定められた、連続する所定時間の関数として変化す
る濃度を持つ緩衝溶液を作り、かつ各種の濃度の緩衝溶
液をカラムに通す為の手段と、時間の関数としてカラム
から流出する緩衝溶液において上記の成分の濃度を測定
する為の検出器と、を具備し、 更に、複数個の取り替え用クロマトグラフィーカラム、
複数個のサンプルキャリア、及び該クロマトグラフィー
装置により該液体をテストする以前に該液体を処理する
溶液の入った複数個の予め満たされたサンプル容器を有
し、該サンプル誘導手段は該サンプル容器を受け取る手
段を有している、低圧液体クロマトグラフィー装置。 ７、複数個の緩衝液コンテナを有する請求項６に記載の
装置。 ８、前記サンプルキャリアが毛細管である請求項６また
は７に記載の装置。 ９、その動作をチェックするためのテストサンプルを更
に有する請求項６、７、又は８に記載の装置。 １０、複数個のクロマトグラフィーカラム、複数個の予
め満たされたサンプル容器、複数個のサンプルキャリア
及び複数個の緩衝液コンテナを備えている請求項６に記
載の低圧液体クロマトグラフィー装置用の補充パック。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8813761.7 | 1988-06-10 | ||
| GB8813761A GB2220369B (en) | 1988-06-10 | 1988-06-10 | Method for testing body fluids by low pressure liquid chromatography |
| US08/729,033 US5730867A (en) | 1988-06-10 | 1996-10-09 | Method and apparatus for low pressure liquid chromatography |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02236164A true JPH02236164A (ja) | 1990-09-19 |
Family
ID=26293999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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Country Status (5)
| Country | Link |
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| JP (1) | JPH02236164A (ja) |
| DK (1) | DK282189A (ja) |
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