JPH02256699A - フランキングペプチド及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なペプチド、特にヒトプロカルシトニンＮ
−末端一フランキングペプチド、その塩、幾つかのＤＮ
Ａ配列９．該ＤＮＡ配列を含有しそして本発明のペプチ
ドをこれらのペプチドの製造のための中間体として生産
することができる微生物、該ペプチド又はＤＮＡ配列の
製造方法、該ペプチド又はその塩を含有する医薬制剤、
並びにこれらのペプチド又はその塩の医薬としての使用
に関する。

〔発明の概要〕

本発明は特に、次の式（Ｉ）： Ｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈ＠−Ａｒｇ−５ｏｒ−Ａｌａ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−５ｓｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−
Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ　−Ｇｌ
ｎ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−
５ｓ　ｒ−Ｘ−ＯＨ〔式中、Ｒは水素又はアセチル基で
あり、そしてＸは式：　−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−八ｓｐ−Ｓ
ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−（，１ａ　）又は式二
〜＾ｒｇ−１１ｅ−１１ｅ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−（ｒ　ｂ
　）のアミノ酸配列である） で表わされるペプチド、特に次の式（■）：Ｈ−Ａｌａ
−Ｐｒｏ−Ｐｈｉ−Ａｒｇ−５ｓ＋ｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ−５＊ｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｓｐ−
１’ｒｏ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｃ１ｕ−
Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ａｓ
ｐ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｉｎ−Ｎｅｔ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−
Ｇ１ｎ′−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｕｙ−５ｓｒ−
Ｘ−ＯＨ（ＩＩ） 〔式中、Ｘは好ましくは式（Ｉ　ａ　）（ＰＣＡＴＦＰ
　：ヒトプロカルシトニン・アミノ−末端フランキング
ペプチド；さらにＰＡＳ−５７（ペプチド・アラニン−
セリン−５７）とも称される）のアミノ酸配列、又は式
（Ｉ　ｂ）　（ＰＣＧＲＰＡＴＦＰ　：ヒトプロカルシ
トニン遺伝子関連ペプチド・アミノ−末端フランキング
ペプチド） で表わされるペプチド、及びこれらのペプチドの塩に関
する。

〔具体的な説明〕

国際的に承認された命名規則に従って、この明細書中の
アミノ酸の略号、例えば前記の略号は、遊離アミノ酸を
示し、そして特にことわらない限りそれらのし一装置を
示す。各場合において、α−アミノ基は略号の左側にあ
り、そしてカルボキシ基は右側にあると考えるべきであ
る。α−アミノ基中の１個の水素原子の不存在はアミノ
酸の略号の左側に置かれたハイホンにより示され、そし
てカルボキシル基中のＯＨ５の不存在は右側に置かれた
ハイホンにより示される。遊離アミノ酸又はその基の側
鎖中の置換基はアミノ酸記号のすぐ後の〔〕中に置かれ
る。

本件特許出願の優先臼の後、本発明のペプチドはそれ自
体ヒトの生物体中に存在することが見出された。従って
本発明は特に、天然に又は知られるであろう抽出物中に
存在するのよりも高濃度で存在する前記ペプチド及びそ
の塩に関する。特に、本発明は単離されもしくは濃縮さ
れた形の、純粋な又は実質的に純粋な形の、天然に存在
するのとは異る環境中の、例えば混合された医薬単体中
の、医薬用途のために適当な形の、特徴付けられた形の
、及び／又は生きたもしくは死んだ生物体、器官、細胞
、組織もしくは体液の外に存在する形の、前記ペプチド
に関する。本発明は特に合成的に又は遺伝子的に生産さ
れた式（Ｉ）のペプチド及びその塩に関する。

上記に関し、「単離された」とは、特に、それと共に本
発明の化合物が天然に存在するであろう他の物質、特に
化合物から分離されていることを意味する。「精製され
た」とは、化学的及び／又は物理的精製法にかけられた
ことを意味する。

「実質的に純粋な」なる表現は、５０％より高い純度を
意味する。

本発明はまた、本発明の化合物の塩、特に医薬として許
容される非毒性塩に関する。前記のペプチドは、例えば
無機酸、特に鉱酸、例えば塩酸、硫酸もしくはリン酸と
共に酸付加塩を形成することができ、又は有機カルボン
酸、スルホン酸もしくはスルホ酸、例えば酢酸、プロピ
オン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロ
キシマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、リンゴ
酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸
、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、２−フェノキシ
安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、エンボ酸（ｅｏ＋
ｂｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、ニコチン酸もしくはイソニコ
チン酸、さらにはアミノ酸、あるいはメタンスルホン酸
、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシェタンスルホン酸
、エタン−１，２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸
、４−メチルベンゼンスルホン酸もしくはナフタレン−
２−スルホン酸と共に、あるいは他の有機化合物、例え
ばアスコルビン酸と共に塩を形成することができる。

前記のペプチドはまた、金属塩又はアンモニウム塩、例
えばアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩、例えばナ
トリウム塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩、あ
るいはアンモニア又は適当な有機アミンとのアンモニウ
ム塩を形成することができ、塩の形成のためには特に脂
肪族、脂環族、脂環−脂肪族又は芳香−脂肪族の一級、
二級又は三級モノ−、ジー又はポリ−アミン類、そして
さらに複素環塩基、例えばアルキルアミン類、例えばト
リエチルアミン、ヒドロキシ−低級アルキルアミン、例
えば２−ヒドロキシエチル−アミン、ビス−（２−ヒド
ロキシエチル）−アミン、２−ヒドロキシエチル−ジエ
チルアミン又はトリー（２−ヒドロキシエチル）−アミ
ン、カルボン酸の塩基性脂肪族エステル、例えば４−ア
ミノ安息香酸２−ジエチルアミノエチルエステル、低級
アルキレンアミン、例えば１−エチルピペリジン、シク
ロアルキルアミン、例えばジシクロヘキシルアミン、又
はベンジルアミン、例えばＮ　、　Ｎ’ジベンジル−エ
チレンジアミン、そしてさらにピリジン型の塩基、例え
ばピリジンコリジン又はキノリンが好ましい。

前記のペプチドはさらに内部塩を形成することができる
。

単離又は精製のためにはさらに、医薬として適当でない
塩を使用することができる。しかしながら、医薬として
許容される非毒性塩のみが療法的に使用され、そしてそ
れ故にこれらが好ましい。

本発明の化合物はそれ自体既知の方法により製造するこ
とができ、例えば、 ａ）反応性有機カルボキシル基を含有する前記化合物の
断片又はその反応性カルボン酸誘導体と遊離アミノ基を
含有する該化合物の相補的断片又はその反応性誘導体と
の反応（これらの断片の遊離官能基は反応に関与する２
個の基を除き保護された形で存在する）により式（Ｉ）
のアミノ酸配列を有する化合物中に存在するアミド結合
を形成せしめ；あるいは、 ｂ）前記式（Ｉ）のアミノ酸配列をコードしておりそし
て発現制御配列により制御されるＤＮＡ配列を含有する
発現ベクターにより形質転換された宿主細胞を増殖せし
め、そして前記式（Ｉ）のアミノ酸配列を有する化合物
を必要であれば該宿主細胞から遊離せしめそして単離し
：そして所望により、 スルホキシド基を有する得られる化合物において該基を
チオ基に転換し、そして所望により得られる塩を遊離化
合物に転換しそして／又は得られる遊離化合物を塩に転
換する； ことを含んで成る方法により製造される。

方法ｍ この方法によれば、最終生成物の合成における反応の最
終段階として、式（Ｉ）のアミノ酸配列の任意の位置に
アミド結合がリンクされる。遊離カルボキシル基を含有
する前記の断片は単一アミノ酸でもよく、又はジー、オ
リゴ−もしくはポリ−ペプチドでもよい、遊離アミノ基
を含有する断片はまた、単一アミノ酸、又はジ〜、オリ
ゴ−もしくはポリ−ペプチドである。

好ましくは、この反応は１つの断片の反応性カルボン酸
誘導体と遊離アミノ基を有する相補的断片との反応によ
り行なわれ、カルボン酸断片のカルボキシル基の誘導体
化をその場で行うことができる。

反応性カルボン酸誘導体は特に反応性の活性化されたエ
ステル又は反応性無水物、そしてさらに反応性環状アミ
ドであり、前記のように反応性カルボン酸誘導体はその
塩で生成せしめることができる。

酸の活性化されたエステルは特に、エステル化基の連結
炭素原子において不飽和のエステル、例えばビニルエス
テルタイプのエステル、例えば真のビニルエステル（例
えば、対応するエステルを酢酸ビニルと共にエステル交
換することにより得られる；活性化ビニルエステル法）
、カルバモイルビニルエステル（例えば、対応する酸を
イソオキサゾリウム試薬により処理することにより得ら
れる；１．２−オキサシリウム法又はラードワード法）
、又は１−低級アルコキシビニルエステル（例えば、対
応する酸を低級アルコキシアセチレンで処理することに
より得られる；エトキシアセチレン法）、あるいはアミ
ジノタイプのエステル、例えばＮ、Ｎ’−ジ置換アミジ
ノエステル（例えば、対応する酸をＮ、Ｎ’−ジ置換カ
ルボジイミド、例えばＮ、Ｎ’〜ジイソプロピルカルボ
ジイミド又はＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミ
ドで処理することにより得られる５カルボジイミド法）
、又はＮ、Ｎ−ジ置換アミジノエステル（例えば、対応
する酸をＮ、Ｎ−ジ置換シアンアミドで処理することに
より得られる；シアンアミド法）である。活性化された
エステルはまた、例えば適当なアリールエステル、特に
電子吸引性置換基により適切に置換されたフェニルエス
テル（例えば、対応する酸を適当に置換されたフェノー
ル、例えば４−二トロフェノール、４−メチルスルホニ
ルフェノール、２，４．５−）リクロロフェノール、２
，３．４．５．６−ペンタクロロフェノール又は４−フ
エニルジアゾフェノールにより、縮合剤、例えばＮ　、
　Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミドの存在下で処
理することにより得られる；活性化アリールエステル法
）、シアノメチルエステル（例えば、対応する酸を塩基
の存在下でクロロアセトニトリルで処理することにより
得られる；シアノメチルエステル法）、適当なチオエス
テル、特に、非置換の又は例えばニトロにより置換され
ているフェニルチオエステル（例えば、対応する酸を非
置換の又は例えばニトロにより置換されているチオフェ
ノールで特に無水物法又はカルボジイミド法により処理
することにより得られる；活性化チオールエステル法）
、あるいはアミノ又はアミドエステル（例えば、対応す
る酸をＮ−ヒドロキシアミノ又はＮ−ヒドロキシアミド
化合物、例えばＮ−ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシピペリジン、Ｎ−ヒドロキシフタリミド又は１
−ヒドロキシ−ＩＨ−ベンゾトリアゾールにより、例え
ば無水物法又はカルボジイミド法に従って処理すること
により得られる；活性化Ｎ−ヒドロキシエステル法）で
ある。

反応性酸無水物は対称無水物であってもよ（、又は好ま
しくはこれらの酸の混合無水物、例えば無機酸の混合無
水物、例えば酸ハロゲン化物、特に酸塩化物（例えば、
対応する酸を適切なハロゲン化剤、例えば塩化チオニル
、五塩化リン又は塩化オキサリルで処理することにより
得られる：酸塩化物法）、アジド（例えば、酸エステル
から対応するヒドラジドを介してそしてそれを亜硝酸で
処理することにより得られる；アジド法）、炭酸半誘導
体との無水物、例えば対応するエステル、例えば炭酸低
級アルキル半エステルとの無水物（例えば、対応する酸
をハロ蟻酸低級アルキルエステル、例えばクロロ蟻酸低
級アルキルエステルにより又はｌ−低級アルコキシカル
ボニルー２−低級アルコキシ−１，２−ジヒドロキノリ
ン、例えば１−低級アルコキシカルボニルー２−エトキ
シ−１，２−ジヒドロキノリンにより処理することによ
り得られる；混合Ｏ−アルキル炭酸無水物法）、又はジ
ハロゲン化、特にジ塩素化されたリン酸との無水物（例
えば、対応する酸をオキシ塩化リンで処理することによ
り得られる；オキシ塩化リン法）、又は有機酸との混合
無水物、例えば有機カルボン酸との混合無水物（例えば
、対応する塩を非置換の又は置換された低級アルカンカ
ルボン酸又はフェニル−低級アルカンカルボン酸ハライ
ド、例えばフェニル酢酸、ピバリン酸又はトリフルオロ
酢酸クロライドで処理することにより得られる；混合カ
ルボン酸無水物法）、又は有機スルホン酸との無水物（
例えば、対応する酸の塩例えばアルカリ金属塩を適切な
有機スルホン酸ハライド、例えば低級アルカンスルホン
酸クロリド又はアリールスルホン酸クロリド、例えばメ
タン−もしくはｐ−）ルエンースルホン酸クロリドで処
理することにより得られる；混合スルホン酸無水物法）
、並びに対称無水物（例えば、対応する酸をカルボジイ
ミド又は１−ジエチルアミノプロピンの存在下で縮合せ
しめることにより得られる；対称無水物法）であること
もできる。

適当な環状アミドは特に、芳香族性の五員ジアザ環を有
するアミド、例えばイミダゾール類とのアミド、例えば
イミダゾール（例えば、対応する酸をＮ、Ｎ’−カルボ
ニルジイミダゾールで処理することにより得られる；イ
ミダゾリド法）又はピラゾール、例えば３．５−ジメチ
ルピラゾール（例えば、酸ヒドラジドを介してアセチル
アセトンで処理することにより得られる；ピラゾリド法
）である。

記載したように、カルボン酸誘導体はその場で生成せし
めることができる。例えば、Ｎ、Ｎ−ジ置換アミジノエ
ステルは、遊離アミノ基を有する相補断片と遊離カル−
ホキシル基を有するペプチド断片との混合物を適当なＮ
、Ｎ−ジ置換カルボジイミド、例えばＮ、Ｎ−ジイソプ
ロピルカルボジイミド又はＮ、Ｎ’−ジシクロへキシル
−カルボジイミドの存在下で反応せしめることによりそ
の場で生成せしめることもできる。さらに、酸のアミノ
又はアミドエステルは、アシル化されるべきアミンの存
在下で対応する酸とアミノ出発物質との混合物をＮ、Ｎ
’−ジ置換カルボジイミド、例えばＮ、Ｎ’−ジシクロ
へキシルカルボジイミド又はＮ、Ｎ’−ジイソプロピル
−カルボジイミドの存在下で、及びＮ−ヒドロキシルア
ミン又はＮ−ヒドロキシアミド、例えばＮ−ヒドロキシ
ルアミンイミドの存在下で、場合によっては適当な塩基
、例えば４−ジメチルアミノピリジンの存在下で反応せ
しめることにより生成せしめることができる。

あるいは、方法ａ）はまた、遊離カルボン酸を有する断
片とアミノ基が反応性の形で存在する相補断片とを反応
せしめることによっても行うことができ、アミノ基は例
えば亜リン酸化合物、例えばクロロ亜リン酸ジエチル、
クロロ亜リン酸１゜１−フェニレン、ジクロロ亜リン酸
エチル、クロロ亜リン酸エチレンもしくはピロ亜リン酸
テトラエチルとの反応により、あるいは適当なシリル化
剤、例えば有機ハロシラン、例えばトリメチルクロロシ
ランとの反応により活性化することができる。アミノ基
はまた、ハロカルボニル、例えばクロロカルボニルへの
結合により活性化することができ、あるいはイソシアネ
ート基の形で活性化することができる。

前記の断片中の官能基は、それが反応に関与しない場合
には好ましくは保護された形であり、特にカルボキシル
基、アミノ基及びヒドロキシル基、そしてさらにカルバ
モイル基及びグアニジノ基である。

保護基並びにその導入及び除去の方法は例えばｒＰｒｏ
ｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｔｃ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、’Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ
、ロンドン、ニューヨーク、１９７３　；及びｒ　Ｍｅ
ｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈ
ｅｍｉｅ」、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、第四板、Ｖｏｌ
　１５／１、Ｇｅｏｒｇ−ＴｈｉｍｅＶｅｒｌａｇ、　
Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ　１９７２；並びにＴｈｅｏｄｏｒ
ａ　Ｗ。

Ｇｒｅｅｎｅ、　　　ｒＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　　Ｇｒ
ｏｕｐｓ　　ｉｎ　　Ｏｒｇａｎｉｃ　　５ｙｎ−ｔｈ
ｅｓｔｓ」、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、ニ
ューヨーク、１９８１に記載されている。容易に、すな
わち不所望の二次反応を伴わないで、例えば加溶媒分解
、還元又は光分解により除去することができるのが保護
基の特徴である。

ヒドロキシ保護基は、例えば、アシル基、例えば非置換
の又は置換された、例えばハロ置換された低級アルカノ
イル、例えば２．２−ジクロロアセチル、あるいは炭酸
半エステルのアシル基、特にｔｅｒｔ−プロキシカルボ
ニル、非置換の又は置換されたベンジルオキシカルボニ
ル、例えば４−ニトロベンジルオキシカルボニル、又は
ジフェニルメトキシカルボニル、又は２−ハロー低級ア
ルコキシカルボニル、例えば２．２．２−トリクロロエ
トキシカルボニル、又はホルミルである。他のヒドロキ
シ保護基は、例えば適当なエーテル化基、例えばトリチ
ル基、ｔｅｒ　を−低級アルキル、例えばｔｅｒ　ｔ−
ブチル基、２−オキサ−もしくは２−チア−脂肪族もし
くは一脂環族炭化水素基、特にｌ−低級アルコキシー低
級アルキル又は１−低級アルキルチオー低級アルキル、
例えばメトキシメチル、１−メトキシエチル、１−エト
キシエチル、メチルチオメチル、ニーメチルチオエチル
もしくはｌ−エチルチオエチル、又は５もしくは６個の
環原子を有する２−オキサ−もしくは２−チア−シクロ
アルキル、例えば２−テトラヒドロフリルもしくは２−
テトラヒドロピラニル又は対応するチア類似体、そして
さらに非置換の又は置換された１−フェニル−低級アル
キル、例えば非置換の置換されたベンジル又はジフェニ
ルメチルであり、フェニル基の置換基として例えばハロ
ゲン、例えば低級アルコキシ、例えばメトキシ、及び／
又はニトロが挙げられる。更なるヒドロキシ保護基はま
た、置換基として低級アルキル、特にメチル及び／又は
アリール、例えばフェニルを好ましくは含有する有機シ
リル又はスタンニル基、特にトリー低級アルキルシリル
、特にトリメチルシリル、そしてさらにジメチル−ｔｅ
ｒｔ−ブチルシリル、又は対応して置換されたスタンニ
ル基、例えばｔｒｉ　−ｎ−ブチルスタンニル基である
。

力ａ舜ｎ基は好ましくはエステル化された形で保護され
、このようなエステル基は穏和な条件下で容易に開裂さ
れる。この様に保護されたカルボキシル基はエステル化
基として特に１−位において分岐しているか又は１−位
もしくは２−位において適切に置換されている低級アル
キル基を含有する。エステル化された形の好ましいカル
ボキシ基は特に、ｔｅｒｔ−低級アルコキシカルボニル
、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、１個もしくは
２個のアリール基を有するα−アリール−低級アルコキ
シカルボニル、例えば非置換の又は例えば低級アルキル
基により、例えばｔｅｒ　を−低級アルキル基、例えば
ｔｅｒ　ｔ−ブチル基、低級アルコキシ基、例えばメト
キシ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、例えば塩素、ニトロ
及び／もしくはフェニルにより置換されたフェニル基、
例えば非置換の又は上記のように置換されたベンジルオ
キシカルボニル、例えば４−メトキシ−ベンジルオキシ
カルボニルもしくは４−ニトロベンジルオキシカルボニ
ル基、ビフェニリル置換基がα−位を置換しているビフ
ェニリル−低級アルコキシカルボニル、例えば２−（ｐ
−ビフェニリル）−２−プロポキシカルボニル、あるい
は非置換の又は前記の様に置換されたジフェニルメトキ
シカルボニル、例えばジフェニルメトキシカルボニルも
しくはジー（４−メトキシフェニル）−メトキシカルボ
ニル、１−低級アルコキシー低級アルコキシカルボニル
、例えばメトキシメトキシカルボニル、１−メトキシエ
トキシカルボニルもしくは１−エトキシメトキシカルボ
ニル、アリール基が非置換の又は例えばニトロにより置
換されているフェニル基、例えば４−ニトロフェニル基
である２、２−ジアリール−エトキシカルボニル、例え
ば、２個のアリール基例えばフェニル基が相互に結合し
ていてもよい２゜２−ジー（４−ニトロフェニル）−エ
トキシカルボニル、例、ｔば２−（９−フルオレニル）
、エトキシカルボニル、１−低級アルキルチオー低級ア
ルコキシカルボニル、例えば１−メチル−チオメトキシ
カルボニルもしくは１−エチルチオエトキシカルボニル
、アロイル基が非置換のもしくは例えばハロゲン例えば
臭素により置換されたベンゾイルであるアロイルメトキ
シカルボニル、例えばフェナシルオキシカルボニル、２
−ハロー低級アルコキシカルボニル、例えば２．２．２
−）リクロロエトキシ力ルボニル、２−ブロモエトキシ
カルボニルもしくは２−ヨードエトキシカルボニル、あ
るいは２−（トリ置換シリル）−エトキシカルボニル（
ここで、置換基のそれぞれは他とは独立に、非置換の又
は例えば低級アルキル基により、低級アルコキシ、アリ
ール、ハロゲン及び／もしくはニトロにより置換された
脂肪族、芳香−脂肪族、脂環族又は芳香族炭化水素、例
えば非置換の又は対応して置換された低級アルキル、フ
ェニル−低級アルキル、シクロアルキル又はフェニル基
である）、例えば２−トリー低級アルキルシリルエトキ
シカルボニル、例えば２−トリメチルシリルエトキシカ
ルボニルもしくは２−（メチルージ（ｎ−ブチル）−シ
リル）−エトキシカルボニル、又は２−トリアリール−
シリルエトキシカルボニル、例えば２−トリエチルシリ
ルエトキシカルボニルである。

好ましい保護されたカルボキシル基は例えばｔｅｒｔ　
　（ｆｆｉ級アルコキシカルボニル、例＆ばｔｅｒ　ｔ
　−ブトキシカルボニル、及び置換されていないか又は
前記のように置換されているベンジルオキシカルボニル
、例えば４−メトキシ−もしくは４−ニトロベンジルオ
キシカルボニル、又はジフェニルメトキシカルボニル、
そしてさらに２−（トリメチルシリル）−エトキシカル
ボニルである。

保護されたアミノ酸は、例えば、容易に開裂され得るア
シルアミノ、アリールメチルアミノ、エーテル化メルカ
プトアミノ、２−アシル−低級アルク−１−エニルアミ
ノ、シリルアミノ又はスタンニルアミノ基の形であるこ
とができ、あるいはアジド基の形であることができる。

対応するアシルアミノ酸において、アシル基は、例えば
、１８個までの炭素原子を有する有機カルボン酸の対応
する基、特に非置換の又は例えばハロゲンもしくはアリ
ールにより置換されたアルカンカルボン酸のあるいは非
置換の又は例えばハロゲン例えば塩素、低級アルコキシ
、例えばメトキシ、ニトロ及び／もしくはフェニルによ
り置換された安息香酸のあるいは炭酸半エステルの対応
する基である。この様なアシル基は、例えば低級アルカ
ノイル、例えばホルミル、アセチルもしくはプロピオニ
ル、ハロー低級アルカノイル、例えば２−ハロアセチル
、特に２−クロロ−２−ブロモー２−ヨード−１２，２
，２−）リフルオロ−もしくは２，２．２−）リクロロ
ーアセチル、非置換の又は例えばハロゲン、低級アルコ
キシ、ニトロ及び／もしくはフェニルにより置換された
ベンゾイル、例えばベンゾイル、４−クロロベンゾイル
、４−メトキシベンゾイルもしくは４−ニトロベンゾイ
ル、あるいは低級アルキル基の１−位において分岐して
いるか又は１−位もしくは２−位において適切に置換さ
れている低級アルコキシカルボニル、特にｔｅｒ　を−
低級アルコキシカルボニル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシ
カルボニル、１個又は２個のアリール基を有する、好ま
しくは非置換の又は例えば低級アルキル、特にｔｅｒｔ
−低級アルキル、例えばｔｅｒ　ｔ−ブチル、低級アル
コキシ、例えばメトキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、例え
ば塩素、ニトロ及び／もしくはフェニルにより置換され
たフェニル基を有するα−アリール−低級アルコキシカ
ルボニル、例えば非置換の又は置換されたベンジルオキ
シカルボニル、例えば４−ニトロベンジルオキシカルボ
ニル、ビフェニリルがα−位を置換しているビフェニリ
ル−低級アルコキシカルボニル、例えば２−（Ｐ−ビフ
ェニリル）−２−ブロボキシカルボニル、又は置換され
たジフェニルメトキシカルボニル、例えばベンズヒドロ
キシカルボニルもしくはジー（４−メトキシフェニル）
−メトキシカルボニル、アリールが非置換の又は例えば
ニトロにより置換されたフェニル、例えば４ニトロフエ
ニルである２、２−ジアリールエトキシカルボニル、例
えば２個のアリール基例えばフェニル基が相互に結合し
ていてもよい２．２−ジー（４−ニトロフェニル）−エ
トキシカルボニル、例えば２−（９−フルオレニル）−
エトキシカルボニル、アロイル基が好ましくは非置換の
又はハロゲンにより例えば臭素により置換されているベ
ンゾイルであるアロイルメトキシカルボニル、例えばフ
ェナシルオキシカルボニル、２−ハロー低級アルコキシ
カルボニル、例えば２　、２　、２−トリクロロエトキ
シカルボニル、２−ブロモメトキシカルボニル又は２−
ヨードエトキシカルボニル、あるいは２−（トリー置換
シリル）−エトキシカルボニル（ここで、置換基のそれ
ぞれが相互に独立に、１５個までの炭素原子を有しそし
て置換されていないか又は例えば低級アルキル、低級ア
ルコキシ、アリール、ハロゲンもしくはニトロにより置
換された脂肪族、芳香−脂肪族、脂環族又は芳香族炭化
水素、例えば非置換の又は置換された低級アルキル、フ
ェニル−低級アルキル、シクロアルキル又はフェニルで
ある）、例えば２−トリー低級アルキルシリルエトキシ
カルボニル、例えば２−トリメチルシリルエトキシカル
ボニルもしくは２−（ジ−ｎ−ブチル−メチル−シリル
）−エトキシカルボニル、又は２−トリアリールシリル
エトキシカルボニル、例えば２−トリフェニルシリルエ
トキシカルボニルである。

アミノ保護基として適当な他のアシル基はまた、有機リ
ン酸、ホスホン酸又はホスフィン酸の対応する基、例え
ばジー低級アルキルホスホリル、例えばジメチルホスホ
リル、ジエチルホスホリル、ジ−ｎ−プロピルホスホリ
ルもしくはジイソプロピルホスホリル、ジシクロアルキ
ルホスホリル、例えばジシクロへキシルホスホリル、非
置換の又は置換されたジフェニルホスホリル、例えばジ
フェニルホスホリル、非置換の又は例えばニトロにより
置換されたジー（フェニル−低級アルキル）−ホスホリ
ル、例えばジベンジルホスホリルもしくはジー（４−ニ
トロベンジル）−ホスホリル、非置換の又は置換された
フェノキシフェニルホスホニル、例えばフェノキシフェ
ニルホスホニル、ジー低級アルキルホスフィニル、例え
ばジエチルホスフィニル、あるいは非置換の又は置換さ
れたジフェニルホスフィニル、例えばジフェニルホスフ
ィニルである。

モノ−、ジー又は特にトリーアリールメチルアミノ基で
あることができるアリールメチルアミノ基において、ア
リール基は特に非置換の又は置換されたフェニル基であ
る。この様な基は例えばベンジルアミノ、ジフェニルメ
チルアミノ、そして特にトリチルアミノである。

この様な基により保護されたアミノ基中のエーテル化メ
ルカプト基は特にアリールチオ基又は了り−ルー低級ア
ルキルチオ基であって、アリールが特に置換されていな
いか又は例えば低級アルキル、例えばメチルもしくはｔ
ｅｒｔ−ブチル、低級アルコキシ、例えばメトキシ、ハ
ロゲン、例えば塩素、及び／もしくはニトロにより置換
されているフェニルであるものである。対応するアミノ
保護基は例えば４−ニトロフェニルチオ基である。

アミノ保護基として使用され得る２−アシル−低級アル
ク−１−エン−１−イル基において、アシル基は例えば
低級アルカンカルボン酸の、非置換の又は例えば低級ア
ルキル、例えばメチルもしくはｔｅｒｔ−ブチル、低級
アルコキシ、例えばメトキシ、ハロゲン、例えば塩素及
び／もしくはニトロにより置換された安息香酸の、ある
いは特に炭酸半エステル、例えば炭酸低級アルキル半エ
ステルの対応する基である。対応する保護基は特に１−
低級アルカノイルプロプ−１−エン−２−イル、例えば
１−アセチルプロプ−１−エン−２−イル、又はｌ−低
級アルコキシカルボニルプロプ−１−ニンー２−イル、
例えば１−エトキシカルボニル−プロプ−１−エン−２
−イルである。

アミノ基はプロトン化された形で保護することができ、
対応する陰イオンとして強無機酸、例えばハロゲン化水
素酸のそれ、例えば塩素イオン又は臭素イオン、あるい
は有機スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸の陰
イオンを挙げることができる。

好ましいアミノ保護基は炭酸半エステルのアシル基、特
にｔｅｒ　ｔ−ブトキシカルボニル、あるいは非置換の
又は例えば上記のように置換されたベンジルオキシカル
ボニル、例えば４−ニトロベンジルオキシカルボニル、
又はジフェニルメトキシカルボニル、２−（９−フルオ
レニル）−エトキシカルボニル、又は２−ハロー低級ア
ルコキシカルボニル、例えば２．２．２−トリクロロエ
トキシカルボニル、そしてさらにトリチル又はホルミル
である。

非置換のカルバモイル基は例えばＮ−（９−キサンセニ
ル）誘導体の形又はＮ−（モノ−、ジーもしくはトリー
アリールメチル）誘導体の形で保護され、ここでアリー
ルは特に、非置換のフェニル又は５個までの同一のもし
くは異る置換基、好ましくは低級アルキル、例えばメチ
ル、又は低級アルコキシ、例えばメトキシを含有するフ
ェニルである。この様なアリールメチル保護基として、
４−メトキシベンジル、２，４．６−）リメトキシベン
ジル、ジフェニルメチル、ジー（４−メトキシフェニル
）−メチル、ジー（４−メトキシフェニル）−メチル及
び（４−メチルフェニル）＝（〔ポリマーキャリヤーゴ
ーフェニル）−メチルが挙げられる。好ましいカルバモ
イル保護基はトリチル基である。

グアニジノ基は例えば適切に置換されたスルホニル基に
より、例えばアリールが非置換のフェニルであるか又は
例えば低級アルキル、例えばメチルを含有するフェニル
であるアリールスルホニル、非置換の又は例えば低級ア
ルキル、例えばメチルにより置換されておりそして芳香
族炭素原子により結合しているベンゾヘテロシクリル例
えばクロマニル、例、ｔ　ハ４−メトキシフェニルスル
ホニル又は２．２，５．７．８−ペンタメチル−６−ク
ロマニルスルホニルである。

この明細書において、保護基、特にカルボキシ保護基と
して、保護されるべき官能基特にカルボキシル基に結合
したポリマーキャリヤーをも考えるべきであり、このキ
ャリヤーは特に、いわゆるメリフィールド（Ｍｅｒｒｉ
　ｆ　１ｅｌｄ）ペプチド合成のために適当なものであ
りそして容易に除去できるものである。この様なポリマ
ーキャリヤーは例えば、好末シ＜は、ジベニルベンゼン
との共重合により弱く架橋されたポリスチレン樹脂であ
り、この樹脂はアミノ酸及びペプチド残基の可逆的結合
のために適当な架橋員を有する。特に上記の弱く架橋さ
れたポリスチレン樹脂に関し、これらの架橋員は特に、
置換されていないか又は置換されておりそして該ポリス
チレン樹脂の芳香族基に直接結合しているメチレン基で
ある。メチレン基の置換基は好ましくはエーテル基又は
エステル基により該メチレン基に結合しており、そして
アミノ酸又はペプチド断片の官能基と共に保護された基
を形成することができる適当な官能基、特に対応するカ
ルボキシル基、例えばエステル化されたカルボキシル基
を含む、この様な架橋員は例えば４−メトキシベンジル
アルコールの二価基であり、このものは場合によっては
α−位にフェニルを含み、これは置換されていないか又
は例えば〇−及び／又はｐ−位において例えば低級アル
コキシ例えばメトキシにより置換されており、前記４−
メトキシベンジルアルコール中で４−メトキシ基の炭素
原子はポリスチレン樹脂のフェニル基に直接結合してお
り、そしてベンジルのヒドロキシ基がアミノ酸又はペプ
チド断片のカルボキシ官能基をエステル化する。

アミド結合を形成する反応はそれ自体既知の方法で行う
ことができ、反応条件は特に反応に関与するカルボキシ
基が活性化されているか否か及びいかに活性化されてい
るかに依存し、通常は適当な溶剤もしくは稀釈剤又はそ
の混合物の存在下で、そして所望により縮合対（これは
例えば反応に関与するカルボキシ基が無水物の形で存在
する場合には適当な酸結合剤でもあり得る）の存在下で
、冷却又は加熱しながら、例えば約−３０°Ｃ〜約＋１
５０℃、特に＋１０°Ｃ〜＋７０°Ｃの温度範囲におい
て、好ましくは室温（約＋２０″Ｃ）〜＋５０°Ｃにお
いて、密閉された反応容器中で、そして／又は不活性ガ
ス、例えば窒素の雰囲気中で行われる。

通常の縮合剤は例えばカルボジイミド類、例えばＮ、Ｎ
’−ジエチル−１Ｎ、Ｎ’　−ジイソプロピル−１Ｎ、
Ｎ’−ジシクロへキシル−もしくはＮ−エチル−Ｎ’　
−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド、
適当なカルボニル化合物、例えばカルボニルジイミダゾ
ール、又は１．２−オキサシリウム化合物、例えば２−
エチル−５−フェニル１．２−オキサシリウム−３′−
スルホネート及び２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチル−
イソオキサゾリウムバークロレート、又は適当なアシル
アミノ化合物、例えば２−エトキシ−１−エトキシカル
ボニル−１，２−ジヒドロキノリンである。通常の酸結
合縮合剤は例えばアルカリ金属の炭酸塩又は炭酸水素塩
、例えばナトリウム又はカリウムの炭酸塩又は炭酸水素
塩（通常は硫酸塩と共に）、又は有機塩基、例えば通常
立体障害されたトリー低級アルキルアミン、例えばＮ、
Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミンである。

前記のメリフィールドペプチド合成は式（Ｉ）のアミノ
酸配列を有する化合物の半自動又は全自動合成のために
特に適当であり、この方法においては、反応に関与しな
い官能基が通常保護された形であるアミノ酸及び／又は
ペプチド断片が、形成されたペプチド断片を単離するこ
となくアミド基を介して相互に連結される。官能基の１
つ、通常は最終ペプチド中に存在する末端カルボキシル
基は場合によっては前記の様に架橋員により適当なポリ
マーキャリヤーに結合される。原則としてこの方法は通
常のペプチド合成と同様にして行われ、ポリマーキャリ
ヤー成分を含有するすでに合成されたペプチド断片にお
いて反応に関与する官能基、通常は末端アミノ基、の保
護された基からの遊離が、各場合において、反応に関与
しない官能基の保護基が維持される条件下で行われるよ
うに注意が払われる。

カルボキシ−、アミノ−、ヒドロキシ−、カルボン酸ア
ミド−、カルバモイル−及び／又はグアニジノ−保護基
の除去はそれ自体既知の方法により、例えば加溶媒分解
、特に加水分解（酸性又は塩基性条件下）、アルコリシ
ス、酸分解もしくは塩基による処理により、又は還元、
特に水素化分解又は化学的還元により、場合によっては
段階的に又は同時に行われ、酵素的方法を用いることも
できる。

すなわち、２−位において有機シリル基により又は１−
位において低級アルコキシ又は低級アルキルチオにより
置換された低級アルコキシカルボニル、又はｔｅｒｔ−
低級アルコキシカルボニル、又は非置換のもしくは置換
されたジフェニルメトキシカルボニルは酸分解により、
例えば適当な酸、例えばハロゲンを含有していてもよい
低級アルカンカルボン酸、例えば蟻酸又はトリフルオロ
酢酸により、親核性化合物例えばフェノール又はアニソ
ールの添加を伴って又は伴わないで、遊離カルボキシに
転換することができる。非置換の又は置換すれたベンジ
ルオキシカルボニルは例えば水素化分解により、すなわ
ち金属水素化触媒、例えばパラジウム触媒の存在下で水
素により処理することにより遊離せしめることができる
。さらに、適切に置換されたベンジルオキシカルボニル
、例えば４−ニトロベンジルオキシカルボニルはまた、
化学還元により、例えばアルカリ金属ジチオナイト、例
えばナトリウムジチオナイトにより、又は還元性金属、
例えば亜鉛、又は還元性金属塩、例えばクロム（ｆｆ）
塩、例えば塩化クロム（Ｈ）により、通常は、該金属と
一緒に発生期の水素を生成することができる水素供与体
、例えば酸、特に適当なカルボン酸、例えば非置換の又
は例えばヒドロキシにより置換された低級アルカンカル
ボン酸、例えば酢酸、蟻酸、グリコール酸、ジフェニル
グリコール酸、乳酸、マンデル酸、４−クロロマンデル
酸又は酒石酸、あるいはアルコール又はチオール、好ま
しくは水の存在下で処理することにより遊離カルボキシ
に転換することができる。

２．２−ジアリールエトキシカルボニル又は２−（９−
フルオレニル）−エトキシカルボニル基は穏和な塩基性
条件下で、例えばピペリジンで処理することによって開
裂せしめることができる。前記のような還元性金属又は
金属塩で処理することにより、２−ハロー低級アルコキ
シカルボニル（場合によっては２−ブロモ−低級アルコ
キシカルボニル基を対応する２−ヨード−低級アルコキ
シカルボニル基に転換した後）又はアロイルメトキシカ
ルボニルを遊離カルボキシ基に転換することができ、ア
ロイルメトキシカルボニルはまた親核性の好ましくは塩
形成性の試験、例えばナトリウムチオフェルレート又は
ヨウ化ナトリウムで処理することによっても開裂せしめ
ることができる。

置換された２−シリルエトキシカルボニルはまた、巨環
ポリエーテル（クラウンエーテル）の存在下で、弗素陰
イオンをもたらす弗化水素酸の塩、例えば弗化アルカリ
金属、例えば弗化ナトリウム又は弗化カリウムにより処
理することにより、あるいは有機四級塩基の弗化物、例
えばテトラ−低級アルキルアンモニウムフルオリド又は
トリー低級アルキルアンモニウムフルオリド、例えばテ
トラエチルアンモニウムフルオリド又はテトラブチルア
ンモニウムフルオリドで処理することにより、非プロト
ン性極性溶剤、例えばジメチルスルホキシド又はＮ、Ｎ
−ジメチルアセタミドの存在下で、遊離カルボキシに転
換することができる。

保護されたアミノ基は、それ自体既知の方法により、そ
して保護基の性質に依存して種々の方法により、しかし
好ましくは加溶媒分解又は還元により遊離せしめること
ができる。２−ハロー低級アルコキシカルボニルアミノ
（場合によっては２−ブロモ−低級アルコキシカルボニ
ルアミノ基を２−ヨード−低級アルコキシカルボニルア
ミノ基に転換した後）、アロイルメトキシカルボニルア
ミノ又は４−ニトロベンジルオキシカルボニルアミノは
、例えば、適当な化学還元剤、例えば亜鉛により、適当
なカルボン酸、例えば水性酢酸の存在下で処理すること
により開裂せしめることができる。アロイルメトキシカ
ルボニルアミノは親核性の好ましくは塩形成性の試薬、
例えばナトリウムチオフェルレートで処理することによ
っても開裂せしめることができ、そして４−ニトロベン
ジルオキシカルボニルアミノはまたアルカリ金属ジチオ
ナイト、例えばナトリウムジチオナイトで処理すること
によっても開裂せしめることができる。

非置換の又は置換されたジフェニルメトキシカルボニル
アミノ、ｔｅｒｔ−低級アルコキシカルボニルアミノ又
は２−トリ置換シリルエトキシカルボニルアミノは適当
な酸により、例えば非置換の又は例えばハロゲン、例え
ば弗素により置換された低級アルカンカルボン酸、例え
ば蟻酸又はトリフルオロ酢酸で処理することにより開裂
せしめることができ、そして２，２−ジアリールエトキ
シカルボニルアミノ、例えば２．２−ジー（４−ニトロ
フェニル）−エトキシカルボニルアミノ、そしてさらに
２−（９−フルオレニル）−エトキシカルボニルアミノ
は、適当な塩基、例えば脂肪族の好ましくは二級アミン
、例えばピペリジンで処理することにより開裂せしめる
ことができる。アミノ基は、非置換の又は置換されたベ
ンジルオキシカルボニルアミノから、例えば水素化分解
により、すなわち適当な水素化触媒、例えばパラジウム
触媒の存在下で水素で処理することにより、非置換の又
は置換されたトリアリールメチルアミン又はホルミルア
ミノから、例えば酸、例えば鉱酸、例えば塩化水素酸、
又は有機酸、例えば蟻酸、酢酸又はトリフルオロ酢酸に
より水の存在下又は非存在下で処理することにより、そ
して有機シリルアミノ基から例えば加水分解又はアルコ
ール分解により、遊離せしめることができる。２−ハロ
アセチルにより、例えば２−クロロアセチルにより保護
されたアミノ基は、例えば塩基の存在下でチオ尿素で処
理することにより、又はチオ尿素のチオレート塩、例え
ばアルカリ金属チオレートで処理することにより、そし
て次に得られた成製物の加溶媒分解、例えばアルコール
分解又は加水分解により遊離せしめることができる。２
−置換シリルエトキシカルボニルにより保護されたアミ
ノ基は、対応して保護されたカルボキシ基の遊離に関連
して前に記載したように、弗素陰イオンをもたらす弗化
水素酸の塩で処理することにより、遊離アミノ基に転換
することができる。

アジド基の形で保護されたアミノは、例えば、還元によ
り、例えば水素化触媒、例えば酸化白金、パラジウム又
はラネーニッケルの存在下での水素による触媒的水素化
によりあるいは酸、例えば酢酸の存在下で亜鉛で処理す
ることにより遊離アミノに転換することができる。触媒
的水素化は好ましくは不活性溶剤、例えばハロゲン化炭
化水素、例えば塩化メチレン中で、あるいは水、又は水
と有機溶剤、例えばアルコールもしくはジオキサンとの
混合物中で、２０℃〜２５°Ｃにおいて、又は冷却もし
くは加熱しながら行うことができる。

適切なアシル基により、有機シリル基により又は非置換
のもしくは置換されたｌ−フェニル−低級アルキルによ
り保護されたヒドロキシ基は、対応して保護されたアミ
ノ基と同様にして遊離せしめることができる。２．２−
ジクロロアセチルにより保護されたヒドロキシ基は例え
ば塩基性加水分解により遊離せしめることができ、そし
てｔｅｒ　を−低級アルキルにより、例えばｔｅｒ　ｔ
−ブチルにより、又は２−オキサ−もしくは２−チア−
脂肪族もしくは一脂環族炭化水素基によりエーテル化さ
れたヒドロキシ基は酢分解により、例えば鉱酸又は強有
核酸、例えばトリフルオロ酢酸で処理することにより、
遊離せしめることができる。

９−キサンセニルにより保護されたカルボン酸アミド基
は、例えば米酢酸中臭化水素で又はアニソールの存在下
で弗化水素で処理することにより遊離せしめることがで
きる。モノ−、ジー又はトリーアリールメチルにより保
護されたカルボン酸アミド基は例えばアニソールの存在
下で弗化水素で処理することにより遊離せしめることが
でき、さらに、ジフェニルメチル保護基は例えば炭素上
パラジウムの存在下での水素化分解により除去すること
ができ、そしてジー（４−メトキシフェニル）−メチル
保護基又は２．４．６−）リメトキシベンジル保護基は
例えばトリフルオロ酢酸での処理により除去することが
できる。

有機スルホニル基により保護されたグアニジノ基、例え
ば４−メチルフェニルスルホニルグアニジノ又は２．２
，５，７．８−ペンタメチル−６−クロマニルスルホニ
ルグアニジノは例えば適当な酸、例えばトリフルオロ酢
酸で処理することにより遊離せしめることができる。

前記のメニフィールドペブチド合成において保護基が同
時にキャリヤー材料として機能する保護された官能基、
特に対応するカルボキシル基はそれ自体既知の方法で、
例えば前記のようにして開裂され得る。適切な架橋員を
介してポリマーキャリヤー材料に結合している対応して
エステル化されたカルボキシル基は該架橋員の性質に依
存して開裂される°０例えば、活性化されたベンジル架
橋員を有するエステル基、例えば４−メトキシベンジル
オキシカルボニル基（メトキシ基の炭素原子は例えばジ
ビニルベンゼンにより弱く架橋されたポリスチレン樹脂
のフェニル基に結合している）を介してポリマーキャリ
ヤー材料に結合しているカルボキシ基は、前記の非置換
の又は置換されたベンジルオキシカルボニル基と同様に
、例えば適当な酸、例えばトリフルオロ酢酸で処理する
ことにより遊離せしめることができる。

所望により、幾つかの保護された官能基が存在する場合
、これらの保護基を選択して、これらの保護基の内１個
より多（のちのが同時に例えば酸分解により、例えばト
リフルオロ酢酸もしくは蟻酸で処理することにより、又
は還元により、例えば亜鉛と酢酸で処理することにより
、又は水素と水素化触媒、例えば炭素上パラジウム触媒
で処理することにより除去され得るようにすることがで
きる。

方法上り 本発明のポリペプチドの製造のために使用される形質転
換された宿主細胞は次の様にして製造することができる
。

・本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを調製し、 ・ｔｉＤＮＡを含有するバイブリドベクターを調製し、
そして ・適当な宿主細胞を該バイブリドベクターにより形質転
換する。

本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡは、既知の方
法でヒト遺伝子バンクから単離された対応する染色体Ｄ
ＮＡ、　ｍＲＮ＾経路で単離されたｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ　−
。

又は対応する合成りＮＡである。後者は一般に知られて
いる方法に従って、例えばＳＪ、Ｎａｒａｎｇ（Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ　３９．３（Ｉ９８３）　）により記
載されている方法、又はヨーロッパ特許出願Ｎａ１４６
７８５に記載されている方法に従って、特に市販のＤＮ
Ａ合成機を用いて調製される。

ＰＣＡＴＦＰをコードする対応するＤＮＡは次の配列：
Ｌ−Ｙｌ　：Ｉ−Ｙｌ−ＹＩ　５−Ｙｌ　４−ＹＩ−Ｙ
ｌ　＆−Ｙｌ−Ｙｌ　１−Ｙｙ−ＹＩ　ｂ−Ｙ　Ｉｈ−
ＹＩ　５−Ｙｔ−Ｙａ−ＹＩ　ｓ−ＹＩ−Ｙｖ−ＹＩ−
Ｙｌ　＆−Ｙ？−Ｙ４−Ｙ？−Ｙｌ　−Ｙｔ−ＹＩ　＋
　−Ｙ　＋　＋−ＹＩ　ｒ−ＹＩ　−Ｙ　Ｉ−ＹＩ　＋
−Ｙ３−Ｙｉ−Ｙ４−Ｙｓ−Ｙｚ−Ｙｉ−ＹＩ　ｓ−Ｙ
、ｔ−ＹＩ　−Ｙｌ　＆−Ｙ？−Ｙｌ　＋−Ｙｔ−Ｙｈ
−Ｙ７−Ｙｂ−Ｙｔ−Ｙｚ−Ｙｔ−Ｙｍ−Ｙｌｌｋ−Ｙ
ｌ＆−Ｙｌ　＋−Ｙ４−Ｙｔｉ−Ｙ＋５−Ｙｚ−Ｙ＋ｉ
−ＹＩ７−Ｚｚを有し、他方ＰＣＧＲＰＡＴＦＰをコー
ドするＤＮＡは次の配列： ＺＩ−Ｙｌｓ−ＹＩ−Ｙｉｉ−ＹＩ４−Ｙｚ−Ｙ＋ｉ〜
Ｙ＋−Ｙｉｉ−Ｙｔ−ＹＩ１−Ｙｉｉ−Ｙ　＋　ｓ−Ｙ
Ｉ−Ｙａ−ＹＩ　ｓ−ＹＩ　−Ｙｗ−ＹＩ　＋　−ＹＩ
　ａ−Ｙｔ−ＹＩ−Ｙ、−ＹＩ−Ｙｚ−Ｙ、　＋−ＹＩ
　ｔ−ＹＩじＹｌ−Ｙｌ−Ｙｌｌ−Ｙ３−Ｙａ−ＹＩ−
Ｙ％−Ｙ３−Ｙｉ−Ｙｌｌ−Ｌｘ−ＹＩ−ＹＩ１−Ｙｔ
−Ｙｔ　＋−Ｙ７−Ｙｉ−Ｙｔ−Ｙ＊−Ｙｙ−Ｙｚ−Ｙ
ｔ−Ｙｓ−ＹＩｈ−Ｙｔ−ＹＩｏ−ＹＩｏ−ＹＩ−Ｙａ
−Ｙｉｉ−Ｚｔを有し、これらの配列において、 ＹＩ　はアラニン（Ａｌａ）をコードし、そしてＧＣＴ
。

ＧＣＣ，ＧＣＡ又はＧＣＧであり、 Ｙ２はアルギニン（八ｒｇ）をコードし、そしてＣＧＴ
、　ＣＧＣ，ＣＧＡ、　ＣＧＧ、　ＡＣＡ又はＡＧＧで
あり、Ｙ３はバリン（Ｖａｌ）をコードし、そしてＧＴ
Ｔ。

ＧＴＣ，ＧＴＡ又はＧＴＧであり、 ＹＩはアスパラギン酸（Ａｓｐ）をコードし、そしてＧ
ＡＴ又はＧＡＣであり、 Ｙ、はチロシン（Ｔｙｒ）をコードし、そしてＴＡＴ又
はＴＡＣであり、 Ｙａはグルタミン（Ｇｉｎ）をコードし、そしてＣＡＡ
又はＣＡＧであり、 Ｙｔはグルタミン酸（Ｇ　ｌ　ｕ）をコードし、そして
ＧＡＡ又はＧＡＧであり、 Ｙ＠はグリシン（Ｇｆｙ）をコードし、そしてＧＧＴ。

ＧＧＣ，ＧＧＡ又はＧＧＧであり、 Ｙ、はスレオリン（Ｔｈｒ）をコードし、そしてＡＣＴ
、　ＡＣＣ，ＡＣＡ又はＡＣＧであり、Ｙ、。はイソロ
イシン（Ｉｌｅ）をコードし、そしてＡＴＴ、八ＴＣ又
はＡｒ４であり、 Ｙ、１はロイシン（Ｌｅｕ）をコードし、そしてＴＴＡ
　。

ＴＴＧ、　ＣＴＴ、　ＣＴＣ，ＣＴ八又はＣＴＧであり
、Ｙｌｌはリジン（Ｌｙｓ）をコードし、そしてＡＡＡ
又はＡＡＧであり、 ＹＩ３はメチオニン（Ｍｅ　ｔ）をコードし、そしてＡ
ＴＧであり、 ＹＩ４はフェニルアラニン（Ｐｈｅ）をコードし、そし
てＴＴＴ又はＴＴＣであり、 Ｙｌ、はプロリン（Ｐｒｏ）をコードし、そしてＣＣＴ
。

ＣＣＣ，ＣＣＡ又はＣＣＧであり、 Ｙ１６はセリン（Ｓｅｒ）をコードし、そしてＴＣＴ。

ＴＣＣ，ＴＣＡ、　ＴＣＧ、八ＧＴ又はＡＧＣであり、
Ｙ、７はＴＡＡ、　ＴＡＧ又はＴＧＡ　（終止コドン）
を表わし、そして ＺＩ及びＺ２は５〜１００、特に５〜１５ヌクレオチド
を含有するフランキングＤＮＡ配列であってそれぞれが
制限酵素認識配列を含有している。

本発明は特に、大腸菌（Ｂ、　Ｃｏ１ｔ）又はＳ、セレ
ビシェ−（２，ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）により好まれる
トリプレットを含有し、ＰＣＡＴＦＰ及びＰＣＧＲＰＡ
ＴＦＰをコードするＤＮＡに関する。

ＰＣＡＴＦＰをコードする好ましいＤＮＡは次の配列（
制限酵素開裂部位と共に示す）： ３’　　−−−−−− ｃｏＲＩ Ｎｈ＊Ｉ −−−−−−５’ ａｍＨＩ （ＩＨ） 式（ＩＩ［）のオリゴヌクレオチドは例えばヨーロッパ
特許出願に１６８３４２に記載されている方法に従って
、式（ＩＩＩ）中に下線が付された部分配列を化学的に
合成し、キナゼ処理し、ＤＮＡポリメラーゼ及び４種類
のヌクレオシドトリホスフェートを用いて二本鎖を形成
し、そして挿入された制限酵素開裂部位を介して連結し
てＰＣＡＴＦＰ遺伝子を生じさせる。

本発明はさらに、ＰＣＡＴＦＰ又はＰＣＧＲＰＡＴＦＰ
をコードしておりそして発現制御配列により制御される
ＤＮＡ配列を含有する発現ベクターに関する。

本発明の発現ベクターは例えば、本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡ配列を、発現制御配列を含有するベ
クターＤＮＡに、該発現制御配列が前記ＤＮＡ配列を制
御する様な態様で挿入することにより調製される。

適当なベクターの選択は形質転換のために提供される宿
主細胞に基く、適当な宿主は例えば微生物、例えば酵母
、例えばサツカロミセス・セレビシェ−（錘匹ル■１匹
組ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　、及び細菌株、特に大腸菌
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏ旦）、バシルス・スブ
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）　、バ
シルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
５ｔｅａｒｏ−田ユユ蛙旦ヨ）、シュードモナス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ）　％ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏ　
ｈｌｌｕｓ）　、ストレプトコッカス（鎚胆出＋Ｃ０Ｃ
Ｃ旦）等の株、そしてさらに高等生物の細胞、特に樹立
されたヒト又は動物の細胞系である。

原理的には、本発明のポリペプチドをコードする異種性
ＤＮＡ配列を選択された宿主中で複製しそして発現せし
めることができるすべてのベクターが適当である。

大腸菌の株での遺伝子の発現のために適当なベクターの
例はバクテリオファージ、例えばバクテリオファージλ
の誘導体、又はプラスミド、例えば特にプラスミドｃｏ
ｌＥ１及びその誘導体、例えばｐＢＲ３２２である。適
当なベクターは無傷のレプリコン、及び発現プラスミド
により形質転換された微生物を表現型形質により選択し
そして同定することを可能にするマーカー遺伝子を含有
する。適当なマーカー遺伝子は微生物に例えば重金属、
抗生物質等に対する耐性を付与する。さらに、好ましい
ベクターは、レプリコン及びマーカー遺伝子のほかに制
限エンドヌクレアーゼの認識配列を含有し、本発明のポ
リペプチドをコードするＤＮＡ配列及び場合によっては
発現制御配列をこれらの部位に挿入することができるよ
うにされている。プラスミドｐＢＲ３２２は無傷のレプ
リコン並びにテトラサイクリン及びアンピシリンに対す
る耐性を付与するマーカー遺伝子（ｔｅｔ”及びａ■ｐ
”）を含有する。

ポリペプチドの発現を制御するために幾つかの発現制御
配列を用いることができる。特に、形質転換されるべき
宿主細胞の強く発現される遺伝子の発現制御配列が使用
される。バイブリドベクターとしてｐＢＲ３２２を使用
しそして宿主微生物として大腸菌を使用する場合、適当
な発現制御配列（これは特にプロモーター及びリボゾー
ム結合部位を含む）は、例えば、ラクトースオペロン、
トリプトファンオペロン、アラビノールオペロン等の発
現制御配列、β−ラクタマーゼ遺伝子の発現制御配列、
ファージスＮ−遺伝子又はファージｆｄ−層蛋白質遺伝
子等のそれである。β−ラクタマーゼ遺伝子（β−１ａ
ｃ−遺伝子）のプロモーターがプラスミドｐＢＲ３２２
中にすでに含まれているが、このプラスミドに他の発現
制御配列を挿入しなければならない。

酵母での複製及び発現のために適当なベクターは酵母複
製起点及び酵母のための選択遺伝マーカーを含有する。

酵母複製起点、例えば染色体自律複製セグメント（ａｒ
ｅ）を含有するバイブリドベクターは形質転換の後酵母
細胞内で染色体外に保持され、そして有糸分裂の間に自
律的に複製される。

さらに、酵母２μプラスミドＤＮＡに相同な配列を含有
するバイブリドベクターを使用することができる。この
ようなバイブリドベクターは細胞内にすでに存在する２
μプラスミドの組換えにより組込まれ、又は自律複製す
る。２μ配列は高形質転ｖＡ頻度を有するプラスミドの
ために特に適当でありそして高コピー数を許容する。酵
母のための適当なマーカー遺伝子は特に宿主に抗生物質
耐性を付与する遺伝子であり、又は栄養要求酵母変異株
の場合には宿主の欠陥を補完する遺伝子である。

対応する遺伝子は、例えば、抗生物質シクロへキシミド
に対する耐性を付与し、又は栄養要求酵母変異株に原栄
養性、例えばＵＲＡ３　、　ＬＥＵ３　、肛録又は特に
■■遺伝子を付与する。好ましくは、酵母バイブリドベ
クターはさらに細菌宿主特に大腸菌のための複製起点及
びマーカー遺伝子を含存し、細菌宿主においてバイブリ
ドベクター及びその前駆体の作製及びクローニングが行
えるようにされている。酵母での発現のために適当な発
現制御配列は例えば、ＴＲＰＩ　、　ＡＤＨｌ、又はＰ
Ｈ０５遺伝子のそれ、そしてさらに解糖に関与するプロ
モーター、例えばＰＧＫ及びＧＡＰＤＨプロモーターで
ある。

本発明は特に発現制御配列及び本発明のポリペプチドの
１つをコードするＤＮＡ配列を含存しそして複製及び表
現型選択が可能な発現ベクターに関し、ここで、該ＤＮ
Ａ配列は転写開始シグナル及び停止シグナル及び翻訳開
始シグナル及び終止シグナルと共に、前記発現プラスミ
ドにより形質転換された宿主細胞中で本発明のポリペプ
チドが前記発現制御配列の制御のもとで発現されるよう
に配置されている。

効果的な発現を達成するため、遺伝子は発現制御配列と
正しく〔［相内にＪ　（ｉｎ　ｐｈａｓｅ））配置され
なければならない、この領域中で発現制御配列を、主ｍ
ＲＮＡ始点と該発現制御配列に自然にリンクしている遺
伝子コード配列のＡＴＧとの間で、自らの翻訳開始シグ
ナル（ＡＴＧ）及び翻訳終止シグナル（例えばＴＡＧ）
を好ましくは有する遺伝子とリンクせしめる。このよう
にして効果的な転写及び翻訳が保証される。

例えば、ベクター、特にｐＢＲ３２２を制限エンドヌク
レアーゼで開裂せしめ、そして場合によっては生ずる線
状化プラスミドを修飾した後、対応する制限末端を有す
る発現制御配列を挿入する０発現制御配列はその３′−
末端（翻訳の方向において）に制限エンドヌクレアーゼ
の認識配列を含有し、こうすることによって該発現制御
配列をすでに含有するベクターを該制限酵素で消化する
ことができ、そして本発明のポリペプチドのいずれかを
コードしておりそして対応する末端を有する遺伝子を挿
入することができる。こうして、遺伝子をそれぞれ正し
い方向及び正しくない方向で含有する２種類のプラスミ
ドの混合物が得られる。発現制御配列をすでに含有する
ベクターを第二の制限エンドヌクレアーゼによりベクタ
ーＤＮＡ中で開裂せしめ、そして生ずるベクター断片に
、本発明のポリペプチドの１つをコードしそして正しい
末端を有する遺伝子を挿入するのが有利である。ベクタ
ーに対するすべての操作は好ましくはレプリコン及び少
なくとも１個のマーカー遺伝子の機能が損われないよう
な態様で行うのが好ましい。

ベクター構成物は、発現制御配列に作用可能に（ｏｐｅ
ｒａｂｌｙ）連結されており且つ本発明のポリペプチド
をコードする遺伝子に対して正しいリーディングフレー
ムを有するシグナル配列を含有することができる。シグ
ナル配列は例えば、宿主微生物として大腸菌を使用する
場合には例えば抛ｐＡ、１ｐｐ、及びβ−１ａｃシグナ
ル配列であり、そして宿主微生物としてＳ、セレビシェ
−を使用する場合にはインベルターゼ、α−ファクター
及び贋シグナル配列である。

本発明の発現ペプチドによる宿主細胞の形質転換は既知
の方法に従って行われる。形質転換された宿主細胞の単
離は、有利には、発現プラスミド中に含まれるマーカー
遺伝子がそれに対して耐性を付与する殺生物剤が添加さ
れた選択栄養培地から行われる。従って、発現プラスミ
ドがａ＋ｉｐ”遺伝子を含有する場合には栄養培地にア
ンピシリンを添加する。発現プラスミドを含有しない細
胞はこの培地中で破壊される。

本発明はまた、このようにして得られる形質転換された
宿主細胞に関する。

方法ｂ）による本発明の形質転換された宿主細胞の培養
はそれ自体既知の方法により行われる。

例えば、本発明の形質転換された宿主微生物を培養する
ために、種々の炭素源を使用することができる。好まし
い炭素源の例には資化性の炭水化物、例えばグルコース
、マルトース、マンニトールもしくはラクトース、又は
酢酸塩があり、これらは単独で又は適当に混合して使用
することができる。

適当な窒素源は例えばアミノ酸、例えばカザミノ酸、ペ
プチド及び蛋白質、並びにその分解生成物、例えばトリ
プトン、ペプトン又は肉エキス、さらには酵母エキス、
マルトエキス、そしてさらにアンモニウム塩、例えば塩
化アンモニウム、硫酸アンモニウム又は硝酸アンモニウ
ムであり、これらは単独で又は適当に組み合わせて使用
することができる。使用することができる無機塩は、例
えばナトリウム、カリウム、マグネシウム及びカルシウ
ムの硫酸塩、塩化物、リン酸塩及び炭酸塩である。

さらに、培地は例えば増殖促進物質、例えば微量元素、
例えば鉄、亜鉛、マンガン等、及び好ましくは選択圧を
惹起しそして発現プラスミドを喪失した細胞の増殖を防
止する物質を含有する。従って、例えば、発現プラスミ
ドがａｍｐ”遺伝子を含有する場合には培地にアンピシ
リンを加える。

抗生物質活性を有する物質のこの様な添加はまた、抗生
物質感受性微生物を破壊する効果を有する。

培養はそれ自体既知の方法に従って行われる。

培養条件、例えば温度、培地のｐＨ及び発酵時間は、ペ
プチドの最大力価が得られるように選択される。

すなわち、大腸菌又は酵母株は、好気的条件下、液深培
養で、振とう又は撹拌しながら、約２０°Ｃ〜４０°Ｃ
の温度において、好ましくは約３０゛Ｃにて、そして４
〜８のｐＨ１好ましくはｐＨ７において、およそ４〜２
０時間、好ましくは８〜１２時間墳養される。

細胞密度が適当な値に達した時、培養を停止しそして本
発明のポリペプチドを微生物の細胞から遊離せしめる。

この目的のため、細胞を、例えば洗剤、例えばＳＯ３も
しくはトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）で処理することにより
破壊し、又はリゾチームもしくは類似の酵素により溶解
する。これに代えて、又はこれに加えて、機械的力、例
えば剪断力（例えば、Ｘ−プレス、フレンチプレス、グ
イノーミルによる）又はガラスピーズもしくは酸化アル
ミニウムとの振とう、又は例えば液体窒素中での凍結と
例えば３０”０〜４０°Ｃでの解凍の反復、及び超音波
を用いて細胞を破壊することができる。蛋白質、核酸及
び他の細胞成分を含有する得られた混合物を、遠心した
後、それ自体既知の方法により蛋白質成分に関して濃縮
する。すなわち、例えば、非蛋白質成分はほとんどの場
合ポリエチレンイミン処理により除去され、そして本発
明のポリペプチドを包含する蛋白質を例えば硫酸アンモ
ニウム又は他の塩により溶液を飽和することにより沈澱
せしめる。細菌性蛋白質はまた、酢酸による酸性化（例
えば０．１％、ｐＨ４〜５）により沈澱せしめることが
できる。他の精製段階には、例えばクロマトグラフ法、
例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル浸透クロマ
トグラフィー、分配クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ１逆
相ＨＰＬＣ等が含まれる０例えば、混合物の成分の分離
は、透析により、電価に従ってゲル電気法−動又はキャ
リヤーフリー電気泳動により、分子サイズに従って適当
なセファデックスカラムにより、アフィニティークロマ
トグラフィーのために適当なキャリヤーに連結された例
えば抗体、特にモノクローナル抗体又はスロンビンを用
いるアフィニティークロマトグラフィーにより、あるい
は他の既知法により行われる。

例えば、本発明の発現されたポリペプチドの単離は次の
段階を含んで成る。

遠心分離による培養液からの細胞の分離；例えば細胞溶
解酵素及び／又は凍結／解凍の交互処理による細胞の破
壊による粗抽出物の調製；遠心分離による不溶性成分の
除去； ポリエチレンイミンの添加によるＤＮＡの沈澱；硫酸ア
ンモニウムによる蛋白質の沈澱；イオン交換クロマトグ
ラフィー及び／又は逆相ＰＬＣｉ 透析又は適当なイオン交換体、例えばセファデックスＧ
２５もしくはセファデックスＧＩＯ上でのクロマトグラ
フィーによる、得られた溶液からの塩の除去。

適当な抗体、例えばハイブリドーマ細胞から得られるモ
ノクローナル抗体による試験を用いて本発明のポリペプ
チドを検出することができる。

方法２）に従えば通常、特に酵母での発現の場合、Ｒが
水素である式（Ｉ）のペプチドが得られる。しかしなが
らある種の宿主細胞、例えば大腸菌においてはＮ−末端
アシル化が起こり、その結果Ｒがアセチル基である式（
Ｉ）のペプチドが得られる。

スルホキシド基を含有するメチオニン残基を有する本発
明に従って得られる式（Ｉ）のペプチドにおいて、この
基は還元によりそれ自体既知の方法でチオ基に転換され
る。この適当な還元剤、好ましくはヨウ素塩、例えばヨ
ウ化アンモニウムは通常、稀釈剤の存在下で使用され、
そして得られたヨウ素は例えばアスコルビン酸での処理
により除去することができる。

弐（Ｉ）の化合物の塩は、それ自体既知の方法により製
造することができる。例えば、塩基性基より多くの酸性
基を有する式（Ｉ）の化合物の塩は例えば金属化合物、
例えば適当な有機カルボン酸のアルカリ金属塩、例えば
エチルカプロン酸のナトリウム塩、あるいは無機アルカ
リ金属塩又はアルカリ土類金属塩、例えば炭酸水素ナト
リウム、又はアンモニアもしくは適当な有機アミンで処
理することにより形成することができ、理論量又はわず
かに過剰量の塩形成剤を使用するのが好ましい。式（Ｉ
）の化合物の酸付加塩は、常法に従って、例えば酸又は
適当な陰イオン交換剤で処理することにより得られる。

遊離酸性基及び遊離塩基性基を有する式（Ｉ）の化合物
の内部塩は、塩、例えば酸付加塩を、例えば弱塩基によ
り等電点に中和することにより、又は液体イオン交換体
による処理によって形成せしめることができる。

塩は常法に従って遊離化合物に転換することができ、金
属塩及びアンモニウム塩は適当な酸で処理することによ
り、そして酸付加塩は例えば適当な塩基性剤で処理する
ことにより遊離化合物に転換することができる。

式（Ｉ）のペプチドは価値ある薬理学的性質を有し、そ
してそれに従って使用することができる。

例えば、ニワトリの胚又は新生ラットの頭蓋上細胞が式
（Ｉ）のペプチドにより試験管内で処理された場合、細
胞増殖の刺激が、ＤＮＡへのトリチウム−ラベル化チミ
ジンの導入の増加により確認され得る。この刺激は約１
〜約１０００ｎｓｏｌ／　ｌの濃度で達成することがで
き、そして約１００ｒｖｏｌ／　１の濃度において最も
顕著であり、培地中で血清の存在下又は非存在下でその
効果を確認することができる。式（Ｉ）のペプチドの刺
激作用は遺骨細胞に対して特異的であり、例えばラット
の皮膚繊維芽細胞は反応しない。カルシトニン又はカル
シトニン遺伝子関連ペプチドとは異り、式（Ｉ）のペプ
チドは骨吸収を阻止せず、このことはマウスの頭蓋短糸
において試験管内で証明することができる。

これらの薬理学的性質のため、式（Ｉ）のペプチドは例
えば骨変性（ｏｓｔｅｏｐｅｎｉａ）を伴う疾患、例え
ば骨粗鬆症、骨関節炎、骨関節症、又はスデック（Ｓｕ
ｄｅｃｋ）病の治療のために使用することができ、約０
．１〜約１０■／日の投与量が体重的７０ｋｇの温血動
物に投与される。

従って本発明は、温血動物における骨変性を伴う疾患の
治療に関し、この方法はこの様な疾患を有する温血動物
に式（Ｉ）のペプチド又はその医薬として許容される塩
の有効量を投与することを含んで成る。

さらに、式（Ｉ）のペプチドは髄甲状腺（ｍｅｄｕｌｌ
ａｒｙ　ｔｈｙｒｏｉｄ）癌を検出するための診断用抗
体の製造のために使用することができる。

本発明はまた、活性成分として有効量の、特に前記の疾
患を治療するのに有効な量の本発明の化合物のいずれか
又はその塩を、好ましくは、５０重量％以上を占めるキ
ャリヤーと共に含んで成る医薬製造に関する。これらは
特に、温血動物、例えばヒトへの鼻内投与、又は非経口
投与、例えば皮下、訪中もしくは静脈内投与のために適
当なものであり、その活性成分の投与量は種、体重、年
令、及び個体の状態、治療すべき疾患及び投与の態様に
依存する。

非経口投与のための新規な医薬調製物は、すぐ使用でき
る形態において、約０．０１〜約１０重量％、好ましく
は約０．０５〜約１重量％の活性成分を含有する。本発
明の医薬調製物は例えば単位投与形、例えばアンプル形
である。

好ましくは、活性成分の溶液、そしてさらに懸濁液、特
に等調水溶液又は懸濁液が使用され、そしてこれらは、
例えば活性成分をそれ自体として又はキャリヤー例えば
マンニトールと共に含有する凍結乾燥製剤である場合、
使用前に調製することができる。鼻内投与のためには、
油中懸濁液が特に適当である。医薬調製物は無菌化する
ことができ、そして助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤
剤、及び／又は乳化剤、溶解剤、浸透圧調整塩及び／又
は緩衝剤、そしてさらに増粘剤、例えばナトリウムカル
ボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
、デキストラン、ポリビニルピロリドン又はゼラチンを
含有することができる。

これらはそれ自体既知の方法により、例えば常用の溶解
又は凍結乾燥法により製造することができる。

油中懸濁液は油成分として注射のために常用されている
植物油、合成油又は半合酸油を含有することができる。

酸成分として炭素原子数約８〜約２２個の長鎖脂肪酸、
例えばラウリル酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペン
タデシル酸、バルミチン酸、マーガリン酸、ステアリン
酸、アラキシン酸もしくはベヘン酸、又は対応する不飽
和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルシン酸、
ブラシジン酸もしくはリノール酸を含有する特に液体の
脂肪酸エステルを挙げることができる。アルコール成分
は通常、７個以下の炭素原子を含有し、そして−価もし
くは多価アルコール、例えばメタノール、エタノール、
プロパツール、ブタノールもしくはペンタノール又はそ
れらの異性体であり、しかし特にグリコール又はグリセ
ロールである。

従ってこれらは例えばオレイン酸エチル、ミリスチン酸
イソプロピル、バルミチン酸イソプロピル、トリオレイ
ン酸ポリオキシエチレングリセロール（例えば、Ｇａｔ
ｔｅｆｏｓｓ６、パリ、により製造されるｒ　Ｌａｂｒ
ａｆｉｌ　Ｍ　２７３５Ｊ　）　、Ｃｍ　−Ｃ＋ｚの鎖
長を有する飽和脂肪酸のトリグリセライド（例えば、Ｃ
ｈｅｍｉｓｃｈｅ　Ｗｅｒｋｅ、　Ｍｉｔｔｅｎ／Ｒｕ
ｈｒ、　　ドイツ、により製造されるｒ　Ｍｉｇｌｙｏ
ｌ　８１２Ｊ　）　、そしてさらに植物油、例えば綿実
油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、大
豆油又はビーナツツ油が挙げられる。

注射用製剤の製造は無菌条件下で常法に従って行われ、
アンプル又はバイアルへのその導入、及び容器の密封も
常法に従って行われる。

本発明はさらに、医薬活性成分としての、又は特に骨炭
性が関与する疾患の治療のための医薬製剤の製造のため
の式（Ｉ）の化合物の使用に関し、好ましくは約０．１
〜約１０■の日用量が投与される。

この明細書において「低級」と称する有機基又は化合物
は７個以下の、そして好ましくは４個以下の炭素原子を
含有する。

次に、例により本発明を説明する。温度は°Ｃで示す。

肛 上玉　下記の方法に従って得られるＦｍｏｃ−ペプチド
／樹脂出発材料を全自動ペプチド合成装置において下記
の反応及び洗浄操作にかけ、各場合に約３０Ｗ１１の洗
浄液を使用しそして反応容器を規則的に振とうし、反応
段階は特にことわらない限り室温において行う。

・イソプロパツールによるＦｍｏｃ−ペプチド／樹脂出
発材料の０．８分間の１回の洗浄：・減圧下で脱気され
たジメチルアセトアミド（ジメチルアミンを含有しない
）による０、４分間ずつ３回の洗浄： ・ジメチルアセトアミド中ピペリジンの２０％溶液によ
る１、８分間ずつ８回の処理（Ｆｍｏｃ保護基の除去）
； ・減圧化で脱気されたジメチルアセタミド（ジメチルア
ミンを含有しない）による０、４分間ずつ２回の洗浄； ・イソプロパツールによる０、　８分間の１回の洗浄； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、４分間ずつ３回の洗浄
： ・蒸留したｌ−メチル−２−ピペリドンによる０、４分
間ずつの３回の洗浄； ・次のようにして調製された第一カッブリング剤の添加
；　２．７　ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌ−アラニンを１−
メチル−２−ピペリドン中１−ヒドロキシ−ＩＨ−ベン
ゾトリアゾールの０．４　Ｍ混合物６．７５ｄに溶解し
、そして１−メチル−２−ピペリドン中ジイソプロピル
カルボジイミドの０．５　Ｍ溶液６．４８ａ！添加する
。反応混合物を約４０分間室温にて維持し、そして次に
この形で使用する。カップリング反応自体は４０分間で
あり、反応混合物は５０゛Ｃに保持する； ・蒸留した１−メチル−２−ピペリドンによる０、４分
間ずつの３回の洗浄； ・この間に調製しておいた、第一カツブリング剤同じ組
成を有しそして同じ方法で調製された第二カップリング
剤の添加；このカップリング反応は５０°Ｃにて３０分
間を要する（第二カップリング反応によりほぼ完全な反
応が達成される；・減圧下で脱気されたジメチルアセト
アミド（ジメチルアミンを含有しない）による０、　４
分間の１回の洗浄； ・無水酢酸、ピリジン及びジメチルアセトアミドの１　
：　１　：　８　（ｖ／ｖ／ｖ）混合物約３０戚による
４、５分間の１回の洗浄（なお遊離しているアミノ基の
アセチル化のため；アセチル化された化合物はその後の
処理工程で除去される）；・減圧下で脱気されたジメチ
ルアセトアミド（ジメチルアミンを含有しない）による
０、　４分間ずつの３回の洗浄； ・イソプロパツールによる０、８分間の１回の洗浄； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、　４分間ずつ３回の洗
浄； ・ジメチルアセトアミド中ピペリジンの２０％溶液によ
る１、８分間ずつの８回の処理（Ｆｍｏｃ保護基の除去
）； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、　４分間ずつ２回の洗
浄； ・イソプロパツールによる０、　８分間の１回の洗浄； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、４分間ずつ３回の洗浄
；及び ・蒸留された１−メチル−２−ピペリドンによる０、　
４分間ずつ３回の洗浄。

これらの工程を行った後、得られるペプチド／樹脂化合
物をイソプロパツールで５回洗浄し、そして減圧（高真
空）下で乾燥する。

上人　　ポリマーキャリヤー及び所望により酸感受性保
護基の幾らかを除去するため、前記の方法により得られ
るペプチド／樹脂化合物１．１ｇ（約０、１　ｍｍｏｌ
　）を、トリフルオロ酢酸（９５％）とエタンジチオー
ルとの９８：　２　（Ｖ／Ｖ）混合物中で室温にて５分
間振とうし、次に濾過し、そして濾過残渣を前記と同じ
量のトリフルオロ酢酸／エタンジチオール混合物により
５分間処理し、そして濾過する。次に、濾過残渣を１，
２−ジクロロエタ７６ｍ１ｆつにより２回洗浄し、そし
て６ｄずつのトリフルオロエタノールにより２回洗浄す
る。

緒にした濾液及び洗浄液を室温にて減圧下で濃縮して約
５　ｍｌの体積とし１、そしてジイソプロピルエーテル
と石油エーテル（低沸点）との１：１（ｖ／Ｖ）混合物
２５ｍの添加により粗ペプチドを沈澱せしめる。この沈
澱を濾過により単離し、そして減圧（高真空）下で乾燥
せしめる。

保護基は次の様にして完全に除去することができる。ト
リフルオロ酢酸（９５％）とエタンジチオールとの９８
：　２　（ｖ／ｖ）混合物５ｄ中に粗ペプチドを溶解し
、溶液を室温にて６０分間保持し、そしてペプチドを、
ジイソプロピルエーテルと石油エーテル（低沸点）との
１　：　１　（ｖ／ｖ）混合物２５戚の添加により沈澱
せしめ、そしてこの処理を再度繰り返す。反応時間は５
０分とする。沈澱を２０−の１０％水性酢酸に溶解しそ
して凍結乾燥し、粗ペプチドを白色粉末として得る。

ユ　存在することがあるメチオニンスルホキシドの還元
のため、０．１ｇの得られた粗ペプチドをＩＩＦｄｌ、
のトリフルオロ酢酸（９０％）に溶解し、０、１　ｄの
水中０．０１５　ｇのヨウ化アンモニウムの溶液を加え
、そして１０分間の後、ジイソプロピルエーテルと石油
エーテル（低沸点）との１：１（ｖ／Ｖ）混合物６ｄの
添加によりペプチドを沈澱せしめる。こうして得られた
赤味を帯びた油状物を２ｄの１０％酢酸水溶液に溶解し
、そして合計０．０１ｇのアスコルビン酸を少しずつ、
溶液が完全に無色になるまで添加する。この溶液をゲル
濾過にかけ、この濾過のために１０００〜６０００の分
離範囲を有するポリアクリルアミド製のカラム（ビオ−
ラドにより製造されるバイオゲル−Ｐ６カラム）を使用
する。溶出は１０％酢酸水溶液により行い、そして約４
０ｄで溶出した後筒−両分として目的の粗ペプチドを得
る。凍結乾燥により生成物を白色粉末の形で得る。

２６５■のバイオゲル−濾過生成物を３ｄ粗カラムを有
する向流分配装置中でｔｅｒｔ−アミルアルコール／酢
酸／水（４：２：５＝ｖ：ｖ：ｖ）の系において、容器
３−５から出発して１９００段階にわたり分配する。容
器３３−３９及び容器８１−９０から２つの境界画分を
採取する。容器４０−８０からの高度に精製された主画
分の真空濃縮及び凍結乾燥の後に得られた物質をさらに
処理する。

上玉　精製のため、こうして得られた粗ペプチド０．０
６５　ｇを６．５ｄの２０％酢酸水溶液に溶解し、そし
て２つに分けて（２，２ｍｌ及び４．３ｄ）次の条件で
高圧液体クロマトグラフィーにかける：カラムは２０Ｘ
　２５０ｎｍの寸法を有し、脂肪族鎖を有するシリカゲ
ル（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ＋　Ｄｉｉｒｅｎ、
西独、により製造されたヌクレオシルアＣ１Ｂ）から成
り、そして０．１％トリフルオロ酢酸水溶液を溶離剤（
Ａ）として使用しそしてアセトニトリル中０．１％トリ
フルオロ酢酸溶液を溶離剤（Ｂ）として使用する。

直線グラジェントは５０分間で１５％Ｂ→４５％Ｂ、１
０分間で４５％Ｂ→６０％Ｂ１１０分間で６０％Ｂ→１
００％Ｂとして通過速度は１８ｍ１Ｚ分であり、ＵＶ光
２１５ｎｍにて検出を行う。約４５分間の保持時間を有
する主画分を集め、減圧（高真空）濃縮し、そして次に
凍結乾燥する。こうして次の式： ％式％ で表わされるペプチドＰＣＡＴＦｒ’を白色粉末の形で
得る。

こうして得られた均一な生成物の高圧液体クロマトグラ
フィー−カラム：脂肪遊鎖によりチャージされたシリカ
ゲル（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ＋　Ｄｕｒｅｎ、
西独、により製造されたヌクレオシル５Ｃ１８；寸法：
４．６Ｘ２５０閤；溶離剤Ａ、０．１％トリフルオロ酢
酸水溶液、及び溶離液Ｂ、ア・七トニトリル中０．１％
トリフルオロ酢酸水溶液；直線グラジェント、６０分間
で０％Ｂ→９０％Ｂ；流過速度１戚／分；ＵＶ光での検
出：　２１５ｎｍ）は、３７．８分間の保持時間を与え
る。プラズマ・デソルブション質量分析（２５７Ｃｆ）
は対応する分子量を与える。

ＦＡＲ−ＭＳ　：　ＭＨ・６２２０　（計算分子１６２
２０）　、等電点：４．２（計算値４．０４）。

出発物質は次の様にして得ることができる。ペプチド分
子の構成はメリフィールド合成法に従って、Ｎｏｖａｂ
ｉｏｃｈｅｍ＋　ＬＭｕｆｅｌｆｉｎｇｅｎ、スイス、
により製造されるいわゆるＰｍｏｃ　−Ｓｅｒ　（Ｂｕ
　ｔ）　−ｐ−ベンジルオキシベンジルエステル−ポリ
スチレン樹脂（Ｉ％架橋）から始まって行われ、この方
法においては、°アミノ基が９−フルオレニル−メトキ
シカルビノール（Ｆｍｏｃ）により保護されそしてヒド
ロキシル基がｔｅｒ−ブチル（Ｂｕ　ｔ）により保護さ
れたし一セリンのカルボキシル基が４−メトキシベンゼ
ルアルコールによりエステル化され、このアルコールに
おいては該メトキシ基がポリスチレン樹脂の芳香族環に
結合しており、この樹脂はジビニルベンゼンで１％架橋
されており、そして同時にキャリヤーとしても機能する
。このため、アミノ保護基、この例においてはＦｍｏｃ
基、の除去とＦＩＩ＋ｏｃ−アミノ酸誘導体のカップリ
ングとを、各段階で得られるペプチド／樹脂中間体を単
離することなく交互に行うのに適する全自動ペプチド合
成装置を用いる。最初の段階において、Ｆｍｏｃ−Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ）　−０Ｈ（Ｐｍｃ　：　２　、２　、５　
、７　、８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニル
）をＳｅｒ　（Ｂｕ　ｔ）　／樹脂出発物質とカップリ
ングし、そして次に他のＦｍｏｃアミノ酸を次の順序で
、各段階の後に得られるペプチド／樹脂中間体に段階的
にカップリングする： Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）
−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ（反応に
関与しない第二カルボキシル基はｔｅｒｔ−ブチルエス
テルの形で存在する）　、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ。

Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（Ｂｕｔ）−０Ｈ＋　Ｆ＋＋＋ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ，Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−八ｒｇ
（Ｐｍｃ）−０Ｈ，ＦｍｏｃＧｌｕ（ＯＢｕｔ）−０Ｈ
，Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕ
ｔ）−０Ｈ。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ
）−０１１，Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−０１１＋Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯＢｕｔ）−０Ｈ，Ｆ＋ｗｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ
）−０Ｈ，ＦｍｏｃＡｌａ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−０Ｈ＋　Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｏｆｌ、　Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｕｔ）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ，Ｆ＋ｗｏｃ−
Ｖａｌ−ＯＨ，Ｆｎ＋ｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ−０１１＋Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ−Ｏｌｌ　Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−０８゜Ｆ
ｍｏｃ−八Ｉａ−０）１．　　Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｕｔ）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）ＯＨ，Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（Ｂｕｔ）−０Ｈ。

Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）
−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ＋Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ，Ｆｍｏｃ　−八５ｐ（ＯＢｕｔ）−０）１．　　
Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ＋Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏｌｌ　
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−０Ｈ＋　Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（Ｂｕｔ）Ｏｌｌ、　　Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ
）−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏｌｌ　　Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏｌｌ　　Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ，Ｐｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）
−０Ｈ，Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨａｎｄ　Ｆｍｏｃ−Ｐ
ｒｏ−ＯＨ０個々の段階は下記のスキームに従って行い
、各場合に約３０ｍ１の洗浄液を用い、個々の操作は特
にことわらない限り室温にて行い、そして反応混合物は
規則的に振とうする。

上記のＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕｔ）　／樹脂出発材料２
ｇから出し、そして各段階のために下記の工程を行う：
・イソプロパツールによる０、　８分間の１回の洗浄； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、　４分間ずつ３回の洗
浄； ・ジメチルアセトアミド中２０％ピペリジン溶液による
１、８分間ずつの８回の処理（Ｆｍｏｃ保護基の除去）
； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、　４分間ずつの２回の
洗浄； ・イソプロパツールによる０、８分間の１回の洗浄； ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、４分間ずつ３回の洗浄
； ・蒸留された１−メチル−２−ピペリドンによる０、４
分間ずつ３回の洗浄； ・次の方法により調製された第一カッブリング剤の添加
７２．７　ｍｍｏｌの対応するＦｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸
を１−メチル−２−ピペリドン中０．４　Ｍ　１−ヒド
ロキシ−ＩＨ−ベンゾトリアゾールの混合物６、７４　
ｍｌ中に溶解し、そして１−メチル−２−ピペリド７９
０．５Ｍジイソプロピルカルボジイミド溶液６．４８１
ｎｌを加える。反応混合物を室温にて撹拌しながら約４
０分間保持し、そして次にこの形で使用する。カップリ
ング反応自体は４０分間であり、この間に反応混合物を
５０°Ｃに保持する；・蒸留された１−メチル−２−ピ
ペリドンによる０、　４分間ずつ３回の洗浄： ・この間に調製しておいた、そして第一カッブリング剤
と同一組成を存しそして同じ方法により調製された第二
カップリング剤の添加；カップリング反応は３０°Ｃに
て３０分間行う（第二カップリング反応によりほとんど
完全な反応が達成され得る）；・減圧下で脱気されたジ
メチルアセトアミド（ジメチルアミンを含有しない）に
よる０、　４分間の１回の洗浄； ・無水酢酸、ピリジン及びジメチルアセトアミドの１　
：　１　：　８　（Ｖ／Ｖ／Ｖ）混合物的３０ｄによる
４、５分間の１回の処理（生長中のペプチド鎖中になお
遊離しているアミノ基のアセチル化のため）；・減圧下
で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチルアミンを
含有しない）による０、　４分間ずつ３回の洗浄； ・イソプロパツールによる０、　８分間の１回の洗浄；
及び ・減圧下で脱気されたジメチルアセトアミド（ジメチル
アミンを含有しない）による０、４分間ずつ３回の洗浄
。

この方法により、前記の例において出発材料として使用
されそして次の式： ％式％ 〔式中、「樹脂」はカルボキシル基−エステル化ポリス
チレン（ジビニルベンゼンにより１％架橋されている）
−メチル−４−フェニルメトキシ基を表わす］ で表わされるＦｍｏｃ−ペプチド／樹脂中間体を得る。

■Ｌ　庄上皿徂１ ０、１　ｍｇのＰＣＡＴＦｒ’ペプチド（例１）を２０
ｍｇのマンニトールと共に１　ｍｌの水溶液に溶解する
。この溶液を無菌濾過し、そして無菌条件下で２ｄアン
プルに導入し、深冷凍結しそして凍結乾燥する。使用前
に凍結乾燥物を１　ｍｌの蒸留水又は１　ｍｌの生理的
食塩水に溶解し、そしてこの溶液を例えば筋肉内又は静
脈内に投与する。

貫１ 例１に記載したのと同様にして、但しＦｍｏｃ保護基を
除去した後に得られた末端アラニンの遊離アミン基を例
１に記載したようにして無水酢酸によりアセチル化する
ことにより、次の式：％式％ で表わされるペプチドを得る。

拠土 例１に記載したのと類似する方法により、但し下記のよ
うにして調製した合成樹脂から出発し、目的とする最終
生成物の構造に対応する保護されたアミノ酸を連結し、
しかしＦ＋ｗｏｃ−Ｇｉｎ−０１１の代りにＦｍｏｃ−
Ｇｌｎ（）リチル）−０１１を用い、そしてすべての残
留保護基をトリフルオロ酢酸／水／１，２−エタンジチ
オール（９５：５：５）により室温にて４０分間最終的
に除去することにより、次の式：％式％ で表わされるペプチドを得る。

出発物質は次の様にして得られる。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ（Ｔｒｔ）−０１１ 激しく撹拌しながら、３．４ｇの９−フルオレニルメチ
ルーサクシンイミジルカーボネート（Ｉ０ｍ＋ｍｏｌ）
を、２０戚のテトラヒドロフラン及び１０ｍ１のＩＮ水
酸化ナトリウム水溶液中Ｈ−Ｇｉｎ（Ｔｒｔ）−０Ｈ（
Ｉ０ｍｍｏｌ）の半水和物４ｇの溶液に添加し、そして
同時に１．４ｄのトリエチルアミンを加えてｐＨ値を約
８．５にする。２０分間の後、゛全体を水浴中で冷却し
、酢酸エチルで重層し、そして１Ｍ硫酸水素カリウム水
溶液２５戚により、２〜２．５のｐＨ値が得られるまで
酸性化する。有機相を中性になるまで水で洗浄し、硫酸
ナトリウムで乾燥しそして減圧下で３０ｇまで濃縮する
。３５戚のジイソプロピルエーテルを少しずつ添加する
ことにより生成物を結晶化せしめる。低温にて長時間放
置した後、結晶物質を濾過により単離し、そして酢酸エ
チルとジイソプロピルエーテルとの１〜４混合物中で１
回、及びジイソプロピルエーテルにより３回洗浄する。

６０°Ｃにて高真空のもとての長時間の乾燥の後でさえ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ　（Ｔｒｔ）−０ｔｌはなお０．５
ｍｏｌのジイソプロピルエーテルを含有する。融点１２
５°Ｃより（ジイソプロピルエーテルの放出を伴って徐
々に融解する）。

Ｆｍｏｃ−Ｇｉｎ　　Ｔｒｔ　　−０Ｈ３００−の酢酸
中７．４ｇのＦｍｏｃ−Ｇｉｎ−ＯＨ（２０ｎｖ＋ｏｌ
）及び１０．４ｇのトリフェニルメタノール（４０ｓｍ
ｏｌ）の混合物を１００°Ｃにて１０分間撹拌する。０
．１　ｄの濃硫酸を添加した後、全体を１００“Ｃにて
さらに１５分間撹拌し、透明な黄色溶液を生成せしめる
。これを６０゛Ｃにて減圧下での蒸発により濃縮し、そ
して残渣を減圧下で１０分間乾燥せしめる。固体残渣を
６０°Ｃにて６０ｄの酢酸に溶解し、６０°Ｃにて２０
分間放置し、次に２Ｉ！ＩＩｌの無水酢酸（２０ｍｎ＋
ｏｌ　）を添加し、６０°Ｃにて１時間の後、全体を減
濃縮により濃縮する。油状残渣を６０°Ｃにて１０分間
乾燥し、次に１００成の酢酸中に溶解し、そして５００
ａｄ！の氷冷水中に滴加する。沈澱を濾過により単離し
、水でよく洗浄し、そして酢酸エチル中に溶解し、水相
を分離し、そして有機相を飽和は塩化ナトリウム溶液に
より洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥した後、有機溶液
を蒸発濃縮乾固し、残渣を５０ｄの１．２−ジクロロエ
タンに溶解し、そして１００　ｇのシリカゲルに適用し
、１，２−ジクロロエタン及び２％の次に４％のメタノ
ールを含有する１、２−ジクロロエタンにより溶出を行
う。Ｆｎ＋ｏｃ−Ｇｉｎ（Ｔｒｔ）−０１１を含有する
画分を減圧蒸発により濃縮し、そして生成物を酢酸エチ
ルとジイソプロピルエーテルとの混合物から再結晶化す
る。融点１２５°Ｃから。

金衷間１ ３．３５ｄ　（２３，４ｍｍｏｌ　）の２．４−ジクロ
ロベンゾイル・クロリド（フル力）を４回に分けて５時
間にわたり、６０ｍ１のジメチルアセトアミド中１０ｇ
のいわゆる４−ベンジルオキシベンジルアルコールポリ
スチレン（０，７８ｍｍｏｌ　ａｌｔ７’　ｇ　；ジビ
ニルベンゼンにより１％架橋；ポリスチレンのフェニル
基が４−位において４−ヒドロキシメチルフェノキシメ
チルにより置換されている；　Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ
）、１５．６ｎｕｓｏｌのＦｎ＋ｏｃ−Ｇｉｎ（Ｔｒｔ
）−０８及び３．１　ｄ　（３８，５ｍｍｏ　１　）の
ピリジンの懸濁液に添加する。樹脂は０．４８ｍｍｏｌ
／　ｇのチャージを有する（光度計によるＦｍｏｃ測定
）、残留ＯＨ基を、ペプチド合成の前に無水酢酸／ピリ
ジン／ジメチルアセトアミド（Ｉ：１：８）により２時
間アセチル化する。

±呈 例４に記載したのと同様にして、しかしＦｍｏｃ保護基
の除去の後に得られる末端アラニンの遊離アミノ基を例
１に記載したようにして無水酢酸でアセチル化して、次
の式： ％式％ で表わされるペプチドを得る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式（ I ）： 【遺伝子配列があります】（ I ） 〔式中、Ｒは水素又はアセチル基であり、Ｘは式：【遺
   伝子配列があります】（ I ａ）又は式：【遺伝子配列
   があります】（ I ｂ）のアミノ酸配列である〕 で表わされるペプチド、及び該化合物の塩。 ２、Ｒが水素であり、そしてＸが式：−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
   −Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−（ I ａ
   ）のアミノ酸配列である請求項１に記載の式（ I ）の
   ペプチド及び該化合物の塩。 ３、次の式（ I ）： 【遺伝子配列があります】（ I ） 〔式中、Ｒは水素又はアセチル基であり、そしてＸは式
   ：【遺伝子配列があります】（ I ａ）又は式：【遺伝
   子配列があります】（ I ｂ）のアミノ酸配列である〕 で表わされる化合物又はその医薬として許容される塩の
   有効量を医薬キャリヤー物質と共に含んで成る骨変性を
   伴う疾患の治療のための医薬製剤。 ４、次の式（ I ）： 【遺伝子配列があります】（ I ） 〔式中、Ｒは水素又はアセチル基であり、そしてＸは式
   ：【遺伝子配列があります】（ I ａ）又は式：【遺伝
   子配列があります】（ I ｂ）のアミノ酸配列である〕 で表わされるペプチドの製造方法であって、ａ）反応性
   有機カルボキシル基を含有する前記化合物の断片又はそ
   の反応性カルボン酸誘導体と遊離アミノ基を含有する該
   化合物の相補的断片又はその反応性誘導体との反応（こ
   れらの断片の遊離官能基は反応に関与する２個の基を除
   き保護された形で存在する）により式（ I ）のアミノ
   酸配列を有する化合物中に存在するアミド結合を形成せ
   しめ；あるいは、 ｂ）前記式（ I ）のアミノ酸配列をコードしておりそ
   して発現制御配列により制御されるＤＮＡ配列を含有す
   る発現ベクターにより形質転換された宿主細胞を増殖せ
   しめ、そして前記式（ I ）のアミノ酸配列を有する化
   合物を必要であれば該宿主細胞から遊離せしめそして単
   離し；そして所望により、 スルホキシド基を有する得られる化合物において該基を
   チオ基に転換し、そして所望により得られる塩を遊離化
   合物に転換しそして／又は得られる遊離化合物を塩に転
   換する； ことを含んで成る方法。