JPH02258774A - 杭生物質ａ８０９１５およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は抗生物ＩＡｓｏ９ｔｓおよびその製造法、更に
詳しくはＡ８０９１５Δ、Ａ８０９１５８、Ａ８０９１
５ＣおよびＡ３０９１．５Ｄを含む数種の各成分から成
る新規抗生物質Ａ８０９１５、ならびにこの抗生物質を
産生ずるストレブトミセスーアクレオラツス（Ｓ　ｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｃｕｌｅｏｌａｔｕｓ）ＮＲＲ
Ｌ１８４２２の新規菌株に関する。

また本発明はＡ８０９１５の塩化水素脱離誘導体に関す
る。

本発明のもう一つの目的は、液中好気的発酵条件下、実
質的濃度の抗生物質が生産されるまでストレプトミセス
・アクレオラツスＮ　ＲＲＬ　１８４２２を培養するこ
とによる抗生物質Ａ８０９１５の製造法を提供すること
にある。有機溶媒を用い、発酵液および菌糸体からＡ８
０９１５を抽出する。

Ａ８０９１５を分離して更にｇＩ製し、常套の方法で各
成分を単離する。

ストレプトミセス・アクレオラツスＮＲＲＬＩ８４２２
は新しく見いだされた菌株であるから、本発明は更にこ
の微生物またはそのＡ８０９１５を産生ずる突然変異体
、変異株または組換え型の生物学的に純粋な培養物を提
供するものである。

Ａ８０９１５はグラム陽性活性を有する有用な抗細菌剤
である。加うるにＡ８０９１５は抗真菌活性を有する。

本発明はまたこれらの用途に関する方法および薬剤組成
物を提供するものである。

またＡ８０９１５抗生物質は、他の抗微生物活性化合物
製造の中間体としても有用である。

現在多くの有益な抗生物質を入手することができるが、
引続いてヒトおよび動物の治療のための改良された抗生
物質を見いだす必要がある。

発明の構成と効果 本発明は新しい種類の抗生物質であるＡ８０９１５抗生
物質に関する。抗生物質Ａ８０９１５は数種の各個成分
から成り、この成分Ａ８０９１５Ａ、Ａ８０９１５Ｂ、
Ａ３０９　］　５Ｇおよび八８０９ｉ５Ｄはそれぞれ下
記式［］］〜［４］で示される構造を有する。

Ａ８０９ｉ５Ａ Ａ３０９　］　５Ｂ Ａ８０９１５Ｄ Ａ８０９１５Ｃ 抗生物質Ａ８０９１５は構造的にカビラジオマイシン類
［Ｋ、シオミ、Ｈ，ナカムラ、Ｈ、イヌマ、Ｈ，ナガナ
ワ、Ｋ、イッシキ、Ｔ、タケウチおよびＨ，ウメザワ、
”５ｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｒ　Ｎｅｗ　Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉａｓ　Ｎａｐｙｒａｄｉｏｉｙｃｉｎｓ　、　Ｊ
、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、第３９巻４９４〜５０１頁
（１９８６年）コ、および５Ｆ２４１５抗生物質［Ｓ、
ゴミ、Ｓ、オオウチ、Ｔ。

ササキ、Ｊ、イトウおよびＭ、セザキ、”Ｓ　ｔｕｄｉ
ｅｓｏｎ　Ｎｅｗ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｓ　Ｆ　
２４１５’、　　Ｊ　、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、第４
０巻、７４０〜７４９頁（１９８７年）コに関係を有す
る。ナピラジオマイシンＢｌは、ストレプトミセス・ア
クレオラツス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｃｕｌ
ｅｏｌａＬｕｓ）Ｎ　ＲＲＬ　１８４２２の培養の間に
抗生物質Ａ８０９１５と共に少量産生する。

本明細書に於いては、Ａ８０９１５抗生物質という語は
、抗生物質Ａ８０９１５およびその個々の成分およびそ
の誘導体から選ばれる抗生物質を表わす。抗生物質Ａ８
０９１５という語は、ストレプトミセス・アクレオラッ
スＮＲＲＬ１８４２２を培養することにより生産される
Ａ８０９１５成分を表わす。

八８０９１５の特性 Ａ８０９１５の各成分は次の特性を存する。

Ａ８０９１５Ａ 分子式：　Ｃｔ−Ｈ５ｔｃ（！ｓｏ　ｓ質量スペクトル
（Ｆ　Ａ　ＢＭＳ　）　：　ＩＩｌ／ｚ５２９．５３１
．５３３（Ｍ＋Ｈ同位体クラスター）紫外線λ、、、（
Ｅ　ｔｏ　Ｈ）： 中性　　２６８　ｎ１ｌｌｌ　　ε１７３３３３３２　
ｎｌ１１．　　ε７３５３ 酸性　　２６６止、ε１７３５８ ３３０　ｔ＋ａ＋、　　ε７３２０ 塩基性　２４６ｎ急、ε１３４９５ ３００　ｎ１ｌｌ　　ε１５０９０ ４０１　ｎｍ、　　ε１３４８６ ’ＨＮＭＲ（２７０ＭＨｚＳＣＤＣＲ−）：１２、３４
　（ｂｓ）、７．３８（ｓ）、４．７８（ｂ＋ｓ）、４
．４７（ｄｄ）、３．７５　（ｄｄ）、２．６８　（ｄ
ｃｌ）、２、５５　（ｄｄ）、２．３６　（ｄｄ）、２
．２７（ｇ）、２．２４（ｉ）、２．０４（ｄ）、１　
、９５　（＋＋＋）、１．７　３　（ｓ）、　　１．６
２（ｄ）、　　１．３９（ｓ）、Ｌ２０（ｓ）、０．６
６（ｓ）、０　、５７　（ｓ）ｐｐｒａ。

１３ＣＮＭＲ（６’　７．９ＭＨｚ、　ＣＤ　ＣＱｓ）
：１９４．６０（Ｓ）、１９４．１５（ｓ）、１６３．
２３（ｓ）、１６１．７８（ｓ）、１４５．４３（ｇ）
、１３１．５９（ｓ）、１２０、１３（ｓ）、１１０．
１３（ｔ）、１０８、１６（ｓ）、１０７．６９（（１
）、８４．１１（ｓ）、８１．１７（Ｓ）、７８．８１
（ｓ）、７０．８８（ｄ）、５９．７９（ｄ）、４．５
．９０　（ｄ）、４２．９０（ｔ）、４１．７２（ｓ）
、３５．５６（ｔ）、３５．０７（ｔ）、３４．５５（
Ｌ）、２８．９６（Ｑ）、２８．４２（ｑ）、２２．４
９（Ｑ）、１５．４５（Ｑ）、８　、２４　（ｑ＞ｐｐ
ｍ。

Ａ８０９１５Ｂ 分子式：Ｃ−ｅＨｔｓｃ（！ｓＮｔ○。

質量スペクトル（ＦＡＢＭＳ）：ａ＋／ｚ５５５．５５
７．５５９（Ｍ＋Ｈ同位体クラスター）紫外線λ、、、
（ＥｔＯＨ−）： 中性　　２５９　ｎｍ、　　ε１２４５８３０１　ｎｉ
、　　ｅ　１０３１７ ３６６止、８４６８４ 酸性　　２５８ｎｍ、　　ε１２８１７３０１　ｎｍ、
　　８９９３　Ｂ ３６１　ｒ＋ｏ＋、　　ｅ　３９２５ 塩基性　２６５ｎ１１１，５１．５３０３３０８　ｎｍ
、　　ε１４．３２７ ３９５ｎｍ、ｅ７１Ｂ３ ＨＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｆ２−）：４、８１　
（ｂｓ）、４．５９（ｂｓ）、４　、４１．　（ｄｄ）
、３．７８（ｄｄ）、２．５５　（ｄｄ）、２．５０　
（ｄｄ）、２．３９（ｄｄ）、２．１３（ｓ＋）、２．
０３（Ｌｌ）、２．０３（ａ＋）、１　、７８　（ｄ）
、！　、　６８　（ｍ）、１．６６（ｄ）、１　、４４
　（ｓ）、１．１９（ｓ）、０．９９（ｓ）、０　、８
６　（ｓ）ｐｐｍ。

”ＣＮＭＲ（６２，９ＭＨｚ、ＣＤＣＣｊ）：１９２、
２７（ｓ）、１９２．１９（ｓ）、１７３．６１（ｓ）
、１６７．　］、　７（ｓ）、１４５．３５（ｓ）、１
３５．１０（ｓ）、１２３．００（Ｓ）、１１１．３３
（ｓ）、１、１０．３８（ｔ）、８３．７９（ｓ）、７
９．４１（ｓ）、７９、４１．　（ｓ）、７７．４６（
Ｓ）、６９９１（ｄ）、５７．９７（ｄ）、４６．７８
（ｄ）、４３．０７（ｔ）、４２．８４（ｓ）、３７．
３９（ｔ）、３５．５８（ｔ）、３４．６９（ｔ）、２
８．８７（Ｑ）、２６．４５（Ｑ）、２２．４０（ｑ）
、１５．３７（ｑ）、９　、０９　（ｑ）ｐｐｍ。

Ａ８０９１５Ｃ 分子式：　Ｃｓ−Ｈａ＊ＣＣｓ０− 質量スペクトル（ＦＡＢＭＳ）：　５４７．５４９．５
５１（Ｍ＋Ｈ同位体クラスター） 紫外線λ、、Ｘ（ＥｔＯＨ）： 中性　　２６７　ｎｍ、　　ε１９４９５３　ｉ　４　
ｎｍ、　　ｅ　９４２８ ３５６　ｎｍ、　　ε７８９１ 酸性　　２６６　ｎｍ、　　ε２２５５２３３１ｎ帽　
８８８５７ 塩基性　２４６ｎｉ、ｇ１５４５４ ３０４　ｎｍ、　　ε２１０５８ ４００ｒ＋ｍ、　　ε１５２．２０ ’ＨＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣＱ、）：１２、２７
（ｂｓ）、１０．３３　（ｂｓ）、７．９６（Ｓ）、６
．５５（ｓ）、４．５８（ｄｄ）、３．４２（ｄｄ）、
２、８４　（ｄｄ）、２．５８　（ｄｄ）、２．４７　
（ｄｄ）、２．２２（ｓ）、１．９６（ＩＩＩ）、１．
８８（ａ＋）、１．７６（＋１１）、１．６５（ｄ）、
１．５７（＆）、１．４１（ｄ）、１　、３６　（ｓ）
、ｔ、３３（ｓ）、０．８６（Ｓ）、０　、４２　（ｓ
）ｐｐａ＋０”ＣＮＭＲ（６２，９ＭＨｚ％ＣＤＣＱｓ
＞：１９２．６７（ｓ）、１９１．０２（ｓ）、１６４
．３８（ｓ）、１６３．３９（ｓ）、１３１．９５（ｓ
）、１２０．４３（ｓ）、１０８、７２（ｄ）、１０７
．１．８（ｓ）、８５．６９（ｓ）、８１．５６（ｓ）
、８０．４２（Ｓ）、７２．３０（ｓ）、　　７１．０
８（ｄ）、　　５７．９８（ｄ）、５２．３０（ｓ）、
４２．１６（ｔ）、４０．６６（ｓ）、４０．６１（ｔ
）、３８．３０（ｔ）、２９．６９（ｔ）、２９．２８
（ｑ）、２８．５５（Ｑ）、２４．４３（ｑ）、２２．
９７（ｑ）、１５．６９（ｑ）、６　、４０　（ｑ）ｐ
ｐｍ０Ａ８０９１５Ｄ 分子式：　ＣｔａＨｓｌＣ（ｌｓＮ−０８質ｌスペクト
ル（ＦＤＭＳ）：ｍ／ｚ５７３．５７５．５７７（Ｍ＋
Ｈ同位体クラスター）紫外線λ、、、（Ｅ　ｔｏ　Ｈ）
＋ 中性　　２８１　ｎｍ、　　ε１６６７８３０５ｎｍ　
　ε１５１７３ ４０３　ｎｍ＋　　ε４８６３ ’ＨＮＭＲ（２７０ＭＨ２，ＣＤＣｌ２３）：１１．３
４（ｂｓ）、４．６１　（ｂｓ）、４．５０（ｄｄ）、
３．６８（ｄｄ）、２．７７　（ｄｄ）、２．６２（ｄ
ｄ）、２．４６（ｄｄ）、２．１５（Ｓ）、２．　Ｏｌ
　（ｍ）、１．９０（ｍ）、１．７８（ｍ）、１．８１
（ｄｄ）、１．５６（ｓ）、１　、４７　（ｄｄ）、１
．３０（ｓ）、１．２１（ｓ）、０．７５（ｓ）、０　
、５１　Ｃｓ）ｐｐｍ。

”ＣＮＭＲ（６２，９ＭＨｚＳＣＤ　Ｃｌ２ｓ）：１９
２．００（ｓ）、１９０．３０　（ｓ）、１７３、２８
（ｓ）、１６　（）、　０１　（ｓ）、１３３．３１（
ｓ）、１２４．２３（ｓ）、１１１．０８（ｓ）、８３
．６２（ｓ）、８２．９０（ｓ）、８０．４４（ｓ）、
７６．５２（ｓ）、７０．５３（ｓ）、７０．４４（ｄ
）、５７．２７（ｄ）、５０．１２（ｄ）、４２、８　
ｅ（ｔ）、４１．３９（ｔ）、４０．９５（ｓ）、３８
．３３（ｔ）、３０．６３（ｔ）、２８．６８（Ｑ）、
２８．５４（ｑ）、２４．６３（ｑ）、２２．４８（Ｑ
）、１８．２２（（＋）、９　、２　ｓ　（ｑ）ｐｐｍ
。

抗生物質Ａ８０９１５は、以下に述べるようにストレプ
トミセス・アクレオラツスＮＲＲＬ　ｌ　８４２２のＡ
８０９１５産生菌株の培養により生産される。この抗生
物質は適当な培地中、液中好気的条件下に生産され、こ
れを培地から回収して精製し、この技術分野で知られて
いる種々の単離方法および精製方法で各個の成分を単離
する。

培養物Ａ３０９１６は、バラオ諸島で得られた土壌試料
から単離された。

Ａ８０９１５産生微生物の培養物は、イリノイ州６１６
０４ベオリア・ノースユニバージティースＩ−リート１
８１５番在米国農務省農業研究部（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ）ミツドウェ
スト−ニアリア醤ノーザす優リージシナす委リサーチ拳
センター（Ｍｉｄｖｅｇｔ　Ａｒｅａ　Ｎｏｒｔｈｅｒ
ｎ　ＲｅｇｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ
）に寄託されており、その寄託されたカルチュアコレク
シヲンの一部を構成し、これから受理番号ＮＲＲＬ１８
４２２として一般に入手することができる。

この微生物についてリリー研究所（Ｌｆｌｌｙ　Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ　Ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）のフレデリ
ックＰ、メルツ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｐ、Ｍｅｒｔｚ
）はその分類学的研究を行なった。この研究および他の
微生物種に関する公的記載との比較に基づき、この微生
物はストレプトミセスｅアクレオラツス（Ｓ　ｔｒｅｐ
ｔｏＢｃｅｓ　ａｃｕｌｅｏｌａｔｕｓ）の菌株として
分類された。

伍里見左方迭 ストレプトミセスｓｐ、の特性を決定するためインター
ナショナル・ストレプトミセス・プロジェクト（Ｉ　Ｓ
　Ｐ）［シャーリング（Ｅ、　Ｂ、　Ｓ　ｈｉｒｌｉｎ
ｇ）およびゴツトリーブ（Ｄ、ＧｏＬｔｌｉｅｂ）著、
′ストレプトミセスミル、の特性決定方法（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｆｏｒ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　Ｓ　ｔｒｅｐｔｏＢｃｅｓ　Ｓ　ｐｅｃｉｅｓ）”
、（Ｉｎｔ、　Ｊ　、　Ｓ　ｙｓｔ、　Ｂ　ａｃｔｅｒ
ｉｏｌ、、第１６（３）巻、３１３〜３４０頁（１９６
６年））］に従って特性を決定した。

メラノイド色素産生（色素生産性）は、ｌ５ＰＮｏ、１
（トリプトン−酵母エキス液）、ｌ５ＰＮｏ。

６（ペプトン−酵母エキス鉄寒天）およびｌ５ＰＮｏ、
７（チロシン寒天）で測定した。

形態は光学顕微鏡で調べた。胞子表面刻紋を調べるため
走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）を使用した。

裏面および気中胞子塊の色名の帰属を決定するため、そ
れぞれｆｓｃｃ−ＮＢＳセントロイドカラーチャート、
標準試料Ｎｏ、２１０６［ワシントンＤ、Ｃ，米国商務
標準局１９５８年］、およびカラーハーモニーマニュア
ル［イリノイ州シカゴ在米国コンテナー協会（Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆ　Ａｍｅｒｉ
ｃａ）色彩標準部（Ｃｏｌｏｒ　Ｓ　ｔａｎｄａｒｄｓ
　Ｄａｐａｒｔ鵬ａｎｔ）第４版（１９５８年）コを使
用した。

全細胞の加水分解物中のジアミノピメリン酸（ＤＡ、Ｐ
）の異性体および炭水化物は、ベラカーらのクロマトグ
ラフィー［ベラカ−（Ｂ　、　Ｂ　ｅｃｋｅｒ）、レチ
ェバリアー（Ｍ、　Ｐ　、　Ｌ　ｅｃｈｅｖａｌ　１ｅ
ｒ）、ゴルドン（Ｒ，Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎ）およびレチ
ェバリアー（Ｈ，Ａ、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）著、”
Ｒａｐｔｄ　ＤｉＨ’ｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　　ｂｅ
ｔｗｅｅｎ　Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａｎｄ　Ｓ　ｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｂｙ　ＰａｐｅｒＣｈｒｏＩＩＩａｔ
ｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　Ｗｈｏｌｅ　−ｃａｌｌ　Ｈｙ
ｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ　、　Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、、第１２巻、４２１〜４２３頁（１９６４年）コ
、およびレチェバリアーらのクロマトグラフィー［レチ
ェバリアーら（Ｍ、Ｐ、Ｌ　ｅｃｈｅｖａｌｉｅｒおよ
びＨ、Ｌ　ｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）著、“Ｃｈｅｎｉｃ
ａｌ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　Ｃｒ１ｔｅ
ｒｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ　ｏｒ　Ａｅｒｏｂｉｃ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ　５ｒｎｔ、　Ｊ　、　Ｓ　ｙｓｔ、　Ｂ　ａｃｔｅ
ｒｉｏｌ、、第２０巻、４３５〜４４３頁（１９７０年
）〕により確立された。

培養特性 培養菌株Ａ８０９１５は複合培地および限定培地上、お
だやかに°生育する。気中菌糸は限定された数種の培地
上で中程度に生産される。気中胞子は白色ないし淡黄色
である。裏面は黄褐色ないしオレンジ色である。数種の
培地上、特有の赤色色素が観察される。使用した数種の
培地上に明赤褐色色素を放出する。これらの培養特性を
表Ｉに示す。

形態学的特性 分断（ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｔｏｎ）を有しない正常な
基質菌糸が観察された。気中菌糸は幾らか螺旋状のかぎ
形およびループ形に配列した短い鎖状胞子を有する。−
船釣形態はレチナキュラムーアベルツム（Ｒｅｔ　ｉｎ
ａｃｕｌｕｍ　−ａｐｅｒｔｕｍ）である。胞子表面側
杖はイボ状である。胞子の形状は球形で、大きさは平均
０．８〜０．８μ肩である。胞子鎖は胞子１０〜５０個
の長さと考えられる。菌核、胞子嚢または運動性細胞は
観察されない。・ 生理学的特性 培！菌株Ａ８０９１５はＬ−アラビノース、フルクトー
ス、ガラクトース、グルコース、マンニトール、ラフィ
ノース、Ｌ−ラムノース、サリシンおよびキシロースを
利用する。これはイノシトールおよびシュクロースを利
用しない。メラノイド色素の産生は疑わしい。ＩＳＰ培
地１．６および７中、明赤褐色色素を産生ずるが、これ
はメラニンであるとは考えられない。硫化水素を産生じ
ない。Ａ８０９１５はゼラチンを液化し、硝酸塩を還元
し、スキムミルクを加水分解するがペプトン化しない。

澱粉およびリンゴ酸カルシウムを加水分解する。八８０
９１５は２０〜３０℃の非常に狭い範囲の温度で生育し
、５％を越えない濃度の塩化ナトリウムに耐性を示す。

梃胞膿分析 加水分解された全細胞はｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸
を含む。全細胞抽出物中の標徴的（診断的）糖類は、ガ
ラクトース、グルコースおよびリボースである。それ故
Ａ８０９１５は、Ｉ型細胞膜および非特性（ＮＣ）糖パ
ターンを有する。

Ａ８０９１５の同定 培養菌株Ａ　８０９１．５はストレプトミセス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏａｙｃｅ＋ａ）属に属し、５Ｆ２４１５を産生
ずる培養菌株Ｓ、アクレオラッス（Ｓ　、　ａｃｕｌｅ
ｏｌａｔｕｓ）　［ショムラ（Ｔ　、　Ｓ　ｈｏｍｕｒ
ａ）、ゴミ（Ｓ、Ｇｏｍｉ）、イトウ（Ｍ、Ｉｔｏ）、
ヨシダ（Ｊ　、　Ｙ　ｏｓｈｉｄａ）、タナ力（Ｅ。

Ｔ　ａｎａｋａ）、アマノ（Ｓ　、　Ａ　ｍａｎｏ）、
ワタベ（Ｈ，ＷａＬａｂｅ）、オオウチ（Ｓ、０ｈｕｃ
’ｈｉ）、イトウ（Ｊ、Ｉｔｏｈ）およびセザキ（Ｍ、
　Ｓ　ｅｚａｋｉ）著、“Ｓ　ｔｕｄＩｅｓ　ｏｎ　ｎ
ｅｗａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　ＳＦ　２４１５　・１
．　　Ｔａｘｏｎｏｓｉｙ、　　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ
ｏｎ＋　　ｒ　５ｏｌａｔｉｏｎ、　　Ｐｈｙｓｆｃｏ
ｃｈｅａ＋ｆｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅａ　ａｎｄ　
ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　％　　
Ｊ、Ａｎｔｊｂｉｔｉｃｓ、第４０巻、７３２〜７３９
頁（１９８７年）］に類似している。

これら２種の培養菌株の分類学的比較を表Ｈに示す。こ
れらは温度範囲、塩化ナトリウムに対する耐性および硝
酸塩の還元能力のみが異なる。これらの差異は菌株の差
異であって微生物種の差異によるものではないと考えら
れる。それ故培養菌株Ａ８０９１５はストレプトミセス
・アクレオラツス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏＢｃｅｓ　ａｃｕ
ｌｅｏｌａｔｕｓ）の菌株として分類される。この培養
菌株Ｓ、アクレオラツスは、アブルーブト・リスプ・オ
ブ・バクテリアルーネームス（Ａｐｐｒｏｖｅｄ　Ｌｊ
ｓｔｓ　ｏｆ　１３ａｃｔｅｒｉｏｌ　Ｎａ５ｅｓ）［
スカーフ　：／（Ｖ、　Ｂ、　Ｄ、　Ｓ　ｋｅｒｍａｎ
）、マクゴーワン（Ｖ、ＭｃＧｏｖａｎ）、およびスニ
ース（Ｐ、Ｈ，Ａ、５ｎｅａｔｈ）　１９８０年、Ａｐ
ｐｒｏｖｅｄ　Ｌｉ５ｔｓ　ｏｒ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
Ｎａｍｅｓ　、　　Ａｍａｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ
　ｆｏｒ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　Ｗａｓｈｉｎ
ｇｔｏｎ、　Ｄ、Ｃ，コには菌名が記載がなく、また刊
行物にも有効に発表されていない。

培養菌株Ａ８０９１５を、ナビラジオマイシン（ｎａｐ
ｙｒａｄｉｏｍｙｃｉｎ）産生菌株チャイニア・ルブラ
（Ｃｈａｉｎｉａ　ｒｕｂｒａ）ＭＧ　８０１−　Ａ　
Ｆ　１　［シオミ（Ｋ、シオミ）、イイヌｖ（Ｈ，Ｉ　
１ｎｕＩＩ＋ａ）、／’７ダ（Ｍ、Ｈａｍａｄａ）、ナ
ガナワ（Ｈ，Ｎａｇａｎａｖａ）、マナベ（Ｍ、Ｍａｎ
ａｂｅ）、マツキ（Ｃ，Ｍａｔｓｕｋｉ）、タケウチ（
Ｔ、Ｔａｋｅｕｃｈｉ）およびウメザワ（Ｈ、Ｕ　ｍｅ
ｚａｗａ）著、“Ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｔｂｉｏＬｉｃｓ
　ｎａｐｙｒａｄｉｏｎｉｙｃｉｎｓ　ｐｒｏｄｕｃｔ
ｉｏｎ、　１ｓｏｌａしｉｏｎ、　　ｐｈｙｓｉｃｏ−
ｃｈｅｍｉｃａｌ　　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　　ａｎｄ
　　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔＹ”ｓ　Ｊ
、ＡｎＬｉｂｉｏｔｉｃｓ、第３９巻、４８７〜４９３
頁（１９８６年）］およびテトロノマインン（ｔｅｔｒ
ｏｎｏｍｙｃｉｎ）産生菌株ストレプトミセスｓｐ、ｎ
ｏｖ、Ｓ　５３１６１／Ａ［ケラー−ジャスレン（Ｃ，
Ｋｅｌｌｅｒ　−Ｊ　ｕｓｌｅｎ）、キング（ＨｌＤ、
　Ｋ　ｉｎｇ）、カーノ（Ｍ、　Ｋ　ｕｈｎ）、ルース
リ（Ｈ，Ｒ，Ｌｏｏｓｈｉ）、パッシエ（Ｗ、　Ｐ　ａ
ｓｃｈｅ）、ペラチャ−（Ｔ、　Ｊ、　Ｐｅｔｃｈｅｒ
）、ウェーバ−（Ｈ，Ｐ、Ｗｅｂｅｒ）およびフォノ・
ウォートバーグ（Ａ、　ｖｏｎ　Ｗａｒｔｂｕｒｇ）著
、”Ｔｅｔｒｏｎｏｍｙｃｉｎ、　　ａ　ｎｏｖｅｌ　
ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ　ｏｆ　ｕｎｕｓｕａｌ　５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ　、　Ｊ　、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、第３
５巻、１４２〜１５０頁（１９８２年）参照コと比較し
た。この比較結果により、Ｃ，ルブラＭＧ８０２−ＡＦ
Ｌは、Ａ８０９１５を生育させたいずれの培地でも菌核
が観察されなかったが、この点を除いて他の点ではＡ８
０９１５産生菌はＣ，ルブラＭＧ８０２−ＡＦ１と大変
類似していることが示された。これら特定の形態学的性
質が存在することはチャイニア属の特性であるから、Ａ
８０９１５産生菌はこの属に分類されない。テトロノマ
イシン生産菌株ストレプトミセスｓｐ、　ｎｏｖ、　Ｓ
　５３１６／　Ａ、は、形態学的または生理学的特性に
おいて、Ｓ、アクレオラツスはど培養菌株Ａ８０９１５
には類似しない。

表■（続き） ラフイ／−ス　　　　　＋　　　　　　　　　＋Ｌ−ラ
ム／−ス　　　　＋　　　　　　　　　＋シュクロース キシロース　　　　　　＋　　　　　　　　　＋菌核の
産生 胞子表面　　　　　　イボ状　　　　　　　イボ状胞子
形状　　　　　　球形　　　　　　　楕円体池の微生物
の場合と同様に、Ａ８０９１５産生菌株ストレプトミセ
ス・アクレオラッスＮＲＲＬ１８４２２の特性は変化し
やすい。この菌の組換え型、突然変異体または変異株は
この技術分野で知られた方法により得ることができる。

たとえば突然変異体は、紫外線、Ｘ線、ガンマ線および
化学薬品（たとえばＮ−メチル−Ｎ′−二ト０−Ｎ−ニ
トロソグアニジン）のような種々の知られた物理的およ
び化学的突然変異誘発因子で処理することにより得るこ
とができる。Ａ８０９１５を生産する特性を保持するス
トレプトミセス・アクレオ＋ 十＋＋ ＋ ラツス菌株のすべての自然的および誘発的変異株、突然
変異体および組換え型は、本発明の一部を構成する。

ストレプトミセス・アクレオラッスＩ’ＪＲＲＬ１８４
２２を生育させるための培地は多くの培地のうちのいず
れかを使用することができる。しがし製造における経済
性、最適収率および生成物単離の容易さのため、ある種
の培地が好ましい。たとえば大規模発酵における好まし
い炭水化物源はグルコースであるが、また廃糖蜜、澱粉
などを使用することができる。

好ましい窒素源はバクト（Ｂ　ａｃｔｏ）ペプトンまた
は酵素−加水分解カゼインであるが、また他の窒素源も
使用され得る。

培地中に有益に混合することができる栄養無機塩類は、
亜鉛、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモ
ニウム、塩素、炭酸、硫酸、硝酸などのイオンを産生じ
得る通例の可溶性塩類を包含する。

培地中、リン酸塩の存在はＡ８０９１５の生合成を抑制
すると、りわれる。それ故はんの低い濃度のリン酸塩を
含む培地が好ましい。

またこの微生物を生育および発育させるために必要な必
須微量元素を培地に含有させるべきである。かかる微量
元素は通常、微生物の生育に必要に見合う充分量で培地
中の他の成分の不純物として存在する。発泡する゛こと
が問題となった場合は、必要ならば、ポリプロピレング
リコールのような消泡剤少量（すなわち０．２３１１２
／Ｌ）を大規模発酵培地に添加することができる。

多量の抗生物質Ａ８０９１５を製造するためには、タン
ク中、液中好気的発酵が好ましい。少量のＡ８０９１５
は振盪フラスコ培養により得ることができる。大規模タ
ンクに胞子型微生物を接種すると常にタイムラグが生じ
るので、生育接種材料を使用するのが好ましい。生育接
種材料は、少容童の培地に微生物の胞子型または菌糸体
断片を接種して微生物の新鮮な活性のある発育培養物を
得ることにより製造される。この生育接種材料を、より
大きいタンクに移す。生育接種材料培地は、より大規模
な発酵のために使用する培地であることができるが、他
の培地も適当である。

ストレプトミセス・アクレオラッスを約２０〜３５℃の
温度で生育させるとき、Ａ８０９１５が製せられる。Ａ
８０９１５生産のため有効な温度は約３０°Ｃであると
思われる。

液中好気的培養工程で通例行なっているように、培地を
常套のタービン推進機で撹拌しながら、容器底部から容
器内に滅菌空気を吹き込む。一般にこの通気速度および
撹拌速度は、飽和の３０％ないしそれ以上の溶解酸素濃
度を維持するのに充分な速度であるべきである。

発酵の間に、発酵液試料について、抗生物質に感受性を
有することで知られた微生物に対する抗生物質活性を試
験することにより、抗生物質へ８０９１５の生産追跡す
ることができる。Ａ８０９１５の試験に有用な供試微生
物の一つは枯草ｍ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ）Ａ　Ｔ　ＣＣ６６３３である。この生物試験は寒天
ウェルまたは円板試験法により好都合に行なわれる。

液中好気的発酵条件下の生産に続いて、発酵技術で用い
られる方法により発酵培地からＡ８０９１５を回収する
ことができる。Ａ８０９１５産生菌の発酵処理で生産さ
れる抗生物質活性は、菌糸体中および培養液中の双方に
存在する。この活性を、全発酵液の抽出により回収する
ことができる。

しかし最初培地を濾過して菌糸体環から発酵液を分離す
ることによりＡ８０９１５を最大量で回収する。発酵濾
液と菌糸体環をそれぞれ個別に精製してＡ８０９１５の
各成分を得ることができる。

この精製において種々の技術を使用することができる。

発酵濾液の精製のための好ましい方法は、たとえば酢酸
エチルのような適当な溶媒による抽出法を包含する。抽
出溶媒を減圧下に蒸発させてＡ８０９１５の発酵液部分
を得る。またダイアイオン（Ｄ　１ａｉｏｎ）ＨＰ　−
２０（三菱）のような非イオン・マクロレティキ二う−
樹脂上に吸着させ、適当な水性有機溶媒混合物、たとえ
ば水ニアセトニトリル、水；メタノールまたは水：アセ
トンで溶離スることにより、発酵液からＡ８０９１５を
回収することができる。

菌糸体環を精製する好ましい方法は、分離した菌糸体濾
過塊を、たとえばアセトンまたはメタノールのような適
当な溶媒で抽出する方法である。

次いでこの抽出溶媒を減圧下に蒸発させて濃厚水性溶液
を得る。この水性溶液を、たとえば酢酸エチルのような
適当な溶媒で抽出する。抽出溶媒を減圧下に濃縮して菌
糸体部分のＡ８０９１５を得る。

発酵液（ブロス）と菌糸体部分のＡ８０９１５を、同様
の操作により更に精製する。抗生物質Ａ８０９１５の精
製およびその各成分の単離は、高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＩ’ＬＣ）、カラムクロマトグラフィーまたは
分取薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）のような通常の
技術により行なうことができる。便利なカラムクロマト
グラフィー系は、セファデックスＬＨ−２０（ファーマ
シア（Ｐ　ｈａｒｍＢｉａ）上、クロロホルム：メタノ
ールなどのような有機溶媒混合物で溶離する方法、また
はシリヵゲル上、酢酸エチル：トルエン、トルエン：ア
セトニトリル、ヘキサン：アセトンなどのような溶媒で
溶離する方法を包含する。適当なシリカゲルＴＬＣ溶媒
系は、ヘキサン：アセトン、クロロホルム：メタノール
、トルエン：アセトニトリルなどヲ包含する。好ましい
方法は、オクタデシルシラン化シリカゲル上、酸性にし
たアセトニトリル：水の溶離剤による逆相ＨＰＬＣを包
含する。バイオオートグラフィーたとえば枯草菌（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔｉ１ｉｓ）を用いる方法、ま
たは他の方法たとえばバニリン−硫酸スプレー剤または
紫外線（ＵＶ）分析による方法により、抗生物質を検出
することができる。

Ａ８０９１５の塩化水素脱離誘導体は、Ａ８０９１５の
ケトン基に対するアルファ位の塩素置換置と隣接する水
素原子が除去されて二重結合が形成した化合物である。

この塩化水素脱離誘導体は標準的塩化水素脱離反応によ
り製せられる。たとえばＡ８０９１５成分ＡまたはＣを
、ジメチルホルムアミドなどのような有機溶媒中、・塩
化リチウムなどのような塩と反応させるか、もしくはア
ルコールたとえばメタノール、エタノールなどのような
極性溶媒中、水素化ナトリウム、ナトリウムメトキシド
、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウムまたはその他の類似化合物のような塩基と反応させ
る。別法として、成分ＡまたはＣを、トリメチルアミン
、トリエチルアミン、ジエチルアミン、ｌ、８−ジアゾ
ビシクロ［５，４゜０］ウンデカ−７−エン（Ｄ　Ｂ　
Ｕ）または１，５−ジアザビシクロ［４，３，Ｏシナ−
５−エン（Ｄ　Ｂ　Ｎ）および同様のアミン類のような
アミンと反応させることができる。好ましい方法は、メ
タノール中ジイソプロピルエチルアミンを使用する方法
である。この粗生成物を標準的ＨＰＬＣ法で精製するこ
とができる。

Ａ８０９１５Ａのハロゲン化水素脱ｌ！ｌ！誘導体は次
の構造ををする： 成分Ａ３０９１．５ＢおよびＡ８０９１５Ｄは、種々の
広範な条件下、たとえばメタノール、エタノールまたは
水などのような溶媒中、室温で放置する間に自然に窒素
を失ってそれぞれＡ８０９１５ＡおよびＡ８０９１５Ｇ
を与える。窒素の欠落は、たとえば加熱または塩類もし
くは緩和な還元剤（次亜硫酸ナトリウムおよびその他）
の添加により促進される。

Ａ８０９１５抗生物質は動物の生活に対して病原となる
細菌の発育を抑制する。たとえば表■はＡ８０’ｌＪ、
１５抗生物質がある種のグラム陽性微生物を抑制する最
小発育阻止濃度（ＭＩＣ）である。

表■中のＭＩＣの値は通常の寒天希釈試験法により測定
した。

供試微生物の種類は次のとおりである。黄色ブドウ球菌
（Ｓ　ｔａｐｈｙｌ、ｏｃｏｅｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）
、表皮ブドウ球菌（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　
ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓ　ｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、肺炎連鎖球
菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　’　ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅ）、腸球菌（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆ
ａｅｃｉｕｍ）、および獣医微生物として、ブドウ球菌
属の微生物（Ｓ　ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ、
　）、マルトシダ菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　ｍｕｌ
ｔｏｃｉｄａ）、溶血性肺炎菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａ　ｈｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、気管支敗血症菌（Ｂｏｒ
ｄｅｔｅｌｌａ　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、ガ
リセブチカム菌（Ｍｙｃｏｐｌａｓｗａ　ｇａｌｌｉｓ
ｅｐｔｉｃｕｍ）、ミコプラズマ６ヒオブノイモニアエ
（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａａ
）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、ネ
ズミチフス閑（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ）。

（以下余白） またＡ８０９１５抗生物質は嫌気性細菌類に対して活性
である。表■は、標準的寒天希釈試験法により測定され
たＡ８０９１５各成分の種々の嫌気性細菌類に対するＭ
ｒＣ値を示す終末点は２４時間培養後に読まれた。

供試微生物の種類は次のとおりである。クロストリジウ
ム・ディフィシレ（ＣＩｏｓｔｒｊｄｉｕｍ　ｄｉＲｉ
ｃｉｌｅ）、ウェルシュ菌（ＣＩｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　
ｐｅｒｒｒｉｎｇｅｎｇ）、セブチクス菌（Ｃｌｏｓｔ
ｒｉｄｉｕｍ　ｓｅｐＬｉｃｕｍ）、エラバクテリウム
・アエロファシェンス（Ｅ　ｕｂａｃｔｅｒｉｕｏ＋ａ
θｒｏｆａｃｉｅｎｓ）、ペブトコツカス中アサツカロ
リテイカス（Ｐ　ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｇａｃｃｈ
ａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ベブトコツカス１ブレボテイ
（Ｐ　ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｒｅｖｏｔｉ）、ベブ
トストレブトコッ力スφアナエロビウス（Ｐｅｐｔｏｇ
ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｎａｅｒｏｂｉｕｓ）、
ペブトストレプトコッカス・インテルメディウス（Ｐ　
ｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔ。

ｃｏｃｃｕｓ　１ｎｔｅｒｓｅｄｆｕｓ）、プロピオニ
バクテリウム−アクネス（Ｐ　ｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔ
ｅｒｉｕａ＋　ａＣｎｅｓ）、フラジリス菌（Ｂ　ａｃ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ）、バクテロイデ
ス・テタイオタオミクロン（Ｂ　ａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ
　ｔｈｅｔａｉｏｔａ。

ｍ１ｃｒｏｎ）、メラノゲニカスｍ（Ｂａｃｔｅｒｏｉ
ｄａｓ　ｍｅＩａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）、バクテロ
イデスープルガテイス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｖｕ
ｌｇａｔｉｓ）、バクテロイデス−コロデンス（Ｂ　ａ
ｃｔｅｒｏｆｄｅｓ　ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ）、フンバク
テリウムψシンビオスム（Ｆ　ｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｉ　ｓｙｍｂｉｏｓｕｉ）、フンバタテリウム・ネクロ
フォルム（Ｆ　ｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｎｅｃｒｏ
ｐｈｏｒｕｍ）。

（以下余白） またＡ３０９　Ｌ　５抗生物質は、抗真菌活性および抗
原虫活性をも示す。Ａ３０９　Ｌ　５の各成分がこの種
の微生物を抑制する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を表■
に示す。供試微生物の種類を次に示す。膣トリコモナス
（Ｔ　ｒｉｃｈｏｍｉｎａｓ　ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、
トリコモナスやフェラス（Ｔ　ｒｉｃｈｏｍｉｎａｓ　
ｆｏｅｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）。

表■ Ａ８０９１５各成分の抗原虫および抗真菌活性Ｔ、ｖａ
ｇｉｎａｌｉｓ　　　　　１２．５　　　　６．２５　
　　　＞　１００　　　　２５Ｔ、　ｆｏｅｔｕｓ　　
　　５０　　１２．５　　　＞　１００　　２５Ｃａｌ
ｂｉｃａｎｓ　　　　＞４０　　５．０　　　　＞８０
　　１０マウスに腹腔内注射して投与し、ＬＤ、。で表
わしたへ８０９１５抗生物質の急性毒性を表■に示す。

表■ Ａ８０９１５各成分の急性毒性 ｔ’Ｍ’Ｊ　　　　　Ｌｐ５ｏ（ｉ９／に９）Ａ　　　
　　　２１２ Ｂ　　　　　　　　７５ Ｃ＞３００ Ｄ　　　　　　　　＋、１．８ またＡ８０９１５抗生物質の医薬的および獣医用製剤は
本発明の一部である。この見地において、経口的または
非経口的に投与した細菌感染を治療的もしくは予防的に
処置するため、Ａ８０９１５抗生物質の薬剤を製造する
ことができる。たとえばこの化合物を通常の薬学的担体
および賦形剤と混合し、錠剤、カプセル剤、エリキシル
剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウエーファスなどの形で使
用することができる。

Ａ８０９１５抗生物質を含む入渠組成物は、これに活性
化合物を約０．１〜９０重量％、より一般的には約１０
〜３０％を含有させる。

この医薬組成物は、トウモロコシ澱粉またはゼラテン、
ラクトース、シュクロース、微結晶セルロース、カオリ
ン、マンニトール、リン酸二カルシウム、塩化ナトリウ
ムおよびアルギン酸の・ような通常の担体および賦形剤
を含有させることができる。

本発明の製剤に通常使用する崩壊剤は、クロスカルメロ
ース（ｃｒｏｓｃａｒｍｅｌ　１ｏｓｅ）ナトリウム、
微結晶セルロース、トウモロコシ澱粉、ナトリウム澱粉
グリコレートおよびアルギン酸を包含する。

含有させることができる錠剤結合剤は、アラビアゴム、
メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロ
ース、ポリビニルピロリドン（Ｐ。

ｖｉｄｏｎｅ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
、シュクロース、澱粉およびエチルセルロースである。

使用することができる滑沢剤は、ステアリン酸マグネシ
ウムもしくは他の金属のステアリン酸塩類、ステアリン
酸、シリコーン流体、タルク、。ワックス類、油類およ
びコロイドシリカを包含する。

またハツカ、冬緑油、チェリー香料などのような香味剤
を使用することができる。

投与剤形を外観上より美的な形にするため、または製剤
の同一性の確認を助けるため、着色剤を添加するのが好
ましいこともある。

静脈内（ＩＶ）使用のため、水溶性型の抗生物質を、通
常使用する静脈内投与用流体のいずれか一つに溶解し、
注射により投与することができる。

このような流体、たとえば生理食塩水、リンゲル溶液ま
たは５％デキストロース溶液のような流体を使用するこ
とができる。

筋肉的投与用製剤のため、適当な溶解性滅菌化合物を、
注射液用水、生理食塩水または５％グルコース溶液のよ
うな薬学的希釈剤に溶解し、これを投与する。適当な不
溶性型化合物は、水性基質、または薬理学的に許容され
る油性基質たとえばオレイン酸エチルのような長鎖脂肪
酸エステル中に懸濁液として製造し、これを投与するこ
とができる。

経口的用途として、蒸留水または脱イオン水のような希
釈剤中に配合して製造した適当な滅菌薬剤型抗生物質が
、特に有用である。

また本発明の抗生物質の単位投与剤形は、抗生物質の適
当な希釈剤溶液をアンプル中に入れた滅菌、溶融密封型
溶液であることができる。単位投与剤中の抗生物質の濃
度は、抗生物質の特定型と溶解性、および医師が要求す
る投与剤型に依存し、たとえば約１〜５０％の範囲で変
化させることができる。

更に本発明の目的は、動物の感染性疾患、特にグラム陽
性微生物に起因する感染性疾患を治療する方法を提供す
るものである。この動物は微生物に感受性を有するかま
たは感染したかのいずれであってもよい。この方法は、
この目的のために有効なＡ８０９１５抗生物質の量を動
物に投与することから成る。一般にＡ８０９１５抗生物
質の有効量は約０．５〜１００　ｘ９／　ｋｇの投与量
である。

好ましい投与量は活性化合物的１〜６ａｍ９／に９であ
る。成人１人１日当り典型的投与量は約５０〜１．０９
である。

治療法実施の際、抗生物質を１日１回または複数回の回
数で投与することができる。治療方法は、長時間に渡っ
てたとえば数日間ないし１〜６週間投与を必要とするこ
ともある。１回当り投与量または投与全量は、感染の性
質および重症度、患者の年令および一般的健康状態、な
らびに抗生物質、微生物もしくは感染源に含まれる微生
物に対する患者の耐性のような因子に依存する。

この治療方法を実施する好都合な方法は、ＩＶ注射（ｉ
ｎｆｕｓｉｏｎ）により抗生物質を投与する方法である
。この方法において、適当な溶解性滅菌薬剤型の抗生物
質を５％デキストロース溶液のような生理的流体中に組
合わせ、得られた溶液をゆっくりＩＶ注射する。また別
法としてＩＶ注射のピギーバック方式の方法を用いるこ
とができる。

また獣医的用途のため、Ａ８０９１５抗生物質を経口的
または非経口的に動物に投与することができる。Ａ８０
９１５抗生物質を投与する最も実際的方法は飼料供給物
中に配合調製する方法である。通常の乾燥飼料、液体飼
料およびベレット飼料を包含する種々の飼料を使用する
ことができる。

好ましい投与法は、抗生物質を動物飼料に混合する方法
であるが、他の方法たとえば錠剤、水薬、丸薬またはカ
プセル剤として投与することができる。各個の単位剤形
に、処置すべき動物に固有の１日当り投与量に直接的に
関連するＡ８０９１５抗生物質投与量を含有させるべき
である。

薬物を動物飼料中に配合して調製する方法はよく知られ
ている。好ましい方法は、濃厚薬剤プレミックスを製し
、次いでこれを用いて薬剤入り飼料を作る方法である。

典型的プレミックスは、これにその１ボンド当り薬物的
１〜２００ｙを含有させることができる。プレミックス
は液体または固体製剤のいずれであってもよい。

最終的動物飼料調製は、投与すべき薬物の量に依存する
。Ａ８０９１５抗生物質を含む飼料を調製するため、飼
料を製造し、混合し、ベレット形に成形する通常の方法
を採用することができる。

獣医薬理学的技術で認められた方法により、八８０９１
５抗生物質を非経口的投与用薬剤に製造することができ
る。Ａ８０９１５抗生物質を含む有効な注射用組成物は
懸濁液型または溶液型のいずれであってもよい。溶液型
において、へ８０９１５抗生物質を生理学的に許容され
る担体に溶解する。この担体は適当な溶媒、必要に応じ
てベンジルアルフールのような保存剤、および緩衝剤か
ら成る。有用な溶媒は、・たとえばアルコール類、グリ
゛−・−ル類、または植物油もしくは高度に精製された
鉱油のような不活性油を包含する。

注射しうる懸濁液組成物は、化合物のための非溶媒を補
助剤と共に担体として使用することにより製せられる。

非溶媒は、たとえば水、またはポリエチレングリコール
のようなグリコール類であることができる。

生理学的に許容される適当な補助剤は、化合物を懸濁液
組成物中にＭ濁して保持させるために必要である。この
補助剤はカルボ牛ジメチルセルロース、ポリビニルピロ
リドン、ゼラチンおよびアルギン酸塩類のような増量剤
の中から選ぶことができる。また多くの界面活性剤は化
合物をＭｉするのに有用である。液体非溶媒中、レシチ
ン、アルキルフェノールポリエチレンオキシド付加物、
ナフタレンスルホン酸塩類、アルキルベンゼンスルホン
酸塩類、およびポリオキシエチレンソルビタンエステル
類は有用な懸濁剤である。

液体非溶媒の親水性、密度および表面張力に影響を及ぼ
す多（の物質は、それぞれの場合において注射剤として
使用できる懸濁液を製造する助けとなることができる。

たとえばシリコーン消泡剤、ゲルコール類、ンルビトー
ルおよび砂糖類は有用な懸濁剤であることができる。

本発明の操作をより完全に説明するため、以下に実施例
を述べる。

実施例１ ストレプトミセス・アクレオラッスを用いる抗生物質Ａ
８０９１５の製造 人、ストレブトミセスーアクレオラツスの振盪フラスコ
発酵 凍結乾燥ベレット、または液体窒素中に保持した懸濁物
のいずれかの培養菌株ストレプトミセス・アクレオラツ
スＮＲＲＬ１８４２２を用い、次の組成を有する発育培
地に接種する。

グルコース 可溶性澱粉 酵素加水分解カゼイン宜 酵母エキス宜寓 ＣａＣ０゜ 脱イオン水 １０．０ ２０．０ ５．０ ５．０ １．０ 全量１ｅになる量 ＊二Ｎ−ＺアミンＡ　　（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ　　Ｐｒ
ｏｄｕｃＬｓ。

Ｎ　ｏｒｗｉｃｈ、　　Ｎ　Ｙ　） ＊　＊　：　Ｄｉｒｃｏ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（滅菌前水酸化ナトリウムでｐＨ７，５に調節） 接種培地に２．５％寒天を加えることにより斜面培地ま
たは平板培地を作る。接種した斜面培地を３０℃で約１
０〜１４０間培養する。成熟した斜面培地を滅菌器具で
掻きこすって胞子を分離し、菌糸体マットを取りはずし
てこれを解きほぐす。

分離した胞子の約１／４量と培養生育物を用いて第一段
階の接種培地５０ｘＱに接種する。

接種した第一段階の培地（５０ｄ）を２５０ｊＩＱエル
レンメイヤーフラスコ中、回転数２５０　ｒｐ＋ｎテ２
．５インチ（８，４ｃｍ）の円軌道回転する振盪機上、
３０”Ｃで４８〜７２時間培養する。

この第一段階の熟成培地（１，０Ｏｘｆｆ）を用いて次
の組成を有する生産培地５０ｚｌに接種する。

成分　　　　　　　　　　量（ｙ／Ｎ）グルコース　　
　　　　　　　１０．０廃糖蜜　　　　　　　　　　２
０．０ バクト（Ｂａｃｔｏ）ペプトン本　　　５．０ＣａＣＯ
ｓ　　　　　　　　　　　　　２．０脱イオン化または
ザベク　　　２．０ＣｘＱ／１２）（Ｃｚａｐｅｋ）ノ
ミネラルストック寡窯脱イオン水または水道水　　全量
１ｅとなる量＊　：　Ｄｉｆｃｏ　　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ＊＊：ザペクのミネラルストック溶液 ＫＣ（１００９ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ，０１，０Ｏｆ ＦｅＳＯ，・７Ｈ，０１００９ 脱イオン水　　　　　１０００ｊＩＩ２接種した生産培
地を、２５０ｘＱ広ロエルレンメイヤーフラスコ中、回
転数２５０　ｒｐａ＋で２インチの円軌道回転する回転
振盪機態上、３０’Ｃで５〜６日間培養する。

Ｂ、ストレプトミセス・アクレオラツスのタンク発酵 大容量の接種材料を製造するため、前記Ａ項記載のよう
に培養した第一段階の培地１０ｚｄを用い、これを発育
培地の組成と同様の組成を有する第二段階の発育培地４
００Ｊ１（Ｈに接種する。この第二段階の培地を２Ｑの
広ロエルレンメイヤーフラスコ中、２５０　ｒｐＩｌｌ
で２インチの円軌道回転する回転振盪機上、３０°Ｃで
約７２時間培養する。

このように培養して製せられた第二段階の培地４００１
１Ｑを用い、これを前記Ａ項のように製せられた（ただ
しＰ−２０００（０，１ｘＱ／（１）およびサグ（Ｓ　
ａｇ）４７１　（０，２９／Ｑ）消泡剤を加える）滅菌
生産培地１００Ｑに接種する。接種した生産培地を１６
５Ｑ撹拌発酵タンク中、３０℃で４〜５日間発酵させる
。撹拌容器（１５０〜２００　ｒｐｍ）中、溶解酸素濃
度を空気飽和の３０％以上に保持するよう空気流（０，
５〜１．Ｏｖ／ｖ／ａ＋）を調節する。

Ｋ樋撚又 菌糸体からＡ８０９１５の単離 Ａ、Ａ８０９１５の単離 ５％ハイフロースーパセル（ＨｙＨｏ　Ｓ　ｕｐｅｒｅ
ｅｌ）濾過助剤を用い、１０Ｑおよび１００１２発酵液
を合して得られた発酵液１１０ｅを濾過する。菌糸体濾
過固体をアセトン３０１２で抽出する。アセトン抽出物
を減圧下に濃縮してアセトンを除く。この濃縮物６ρを
酢酸エチル３ａで２回抽出する。酢酸エチル抽出物を合
して減圧下に濃縮乾固し、抗生物質Ａ８０９１５（７５
，４９）を得る。

Ｂ、Ａ８０９１５各成分の分離 前記Ａ項から得られたＡ８０９１５（４０ｇ）をメタノ
ール３５ｘＱに溶解する。オクタデシルシラン化したシ
リカゲル２０　μ（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｌ　Ｐ　−１）を
含むステンレススチールカラム（２インチ直径Ｘ　８０
　ａｍ）上に、上記溶液を注入する。次のようなアセト
ニトリル；水：ギ酸傾斜展開液を用いてカラムを展開す
る。

溶媒１ ７０：２９．９：０．１　　分画１〜１５０溶媒２ ８０：１９，９：０．１　　分画１５１〜２４３溶媒３ １、０．０．：　Ｏ：　Ｏ分画２４４〜３５０各分画（
２０１Ｒ）を流速１７１１Ｑ／分テ集メル。■５ＣＯ−
ＵＡ−５・ディテクター−マルチプレクサ−（ｄｅｔｅ
ｃｔｏｒ−ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｒ）を用い、２５４ｎ
ｎ＋／２８０ｎｍ、２．０ＡＵＰＳにおける［ＪＶ吸収
により、単離状態を監視する。Ａ８０９１５Ａを含む分
画（Ｎｏｓ、２８１〜３１５）を合して濃縮乾固し、抗
生物質Ａ８０９１５Ａ（１，９９９）を得る。

Ａ８０９１５Ｃを含む分画（Ｎｏｓ、　　１７９〜２０
５）を合して濃縮乾固し、抗生物質Ａ８０９１５Ｃ（１
，６９９）を得る。

実施例３ 発酵液からＡ８０９１５の単離 Ａ、Ａ８０９１５の単離 濾過した発酵液１００１２を酢酸エチル４０ｉ２で抽出
する。この酢酸エチル抽出物を水約４Ｃで洗う。

水洗液を捨て、酢酸エチル抽出物を濃縮乾固して抗生物
質Ａ８０９１５（７２，８５９）を得る。

Ｂ、Ａ８０９１５各成分の分離 前記Ａ項から得られたＡ８０９１５（２０ｇ）をメタノ
ール３５１（２に溶解する。オクタデシルシラン化した
シリカゲル２０μを含むステンレススチールカラム（２
インチ直径Ｘ　６０　ｃｍ）上に、上記溶液を注ぐ。下
記アセトニトリル：水：ギ酸傾斜展開液を用いてカラム
を展開する。

溶媒１ ６５：３４，９＋０．１　　　分画１〜９５溶媒２ １０：２９．９：０．１　　　分画９６〜１５０溶媒３ ７５：２４．９：０．１　　　分画１５１〜２４４溶媒
４ １００：Ｏ：Ｏ分画２５４〜３５０ 各分画（１８ｘＱ）を９１１Ｑ／分の流速で集める。■
５ＣＯ−ＵＡ−５・ディテクター−マルチブレキサ−を
用い、２５４ｎｍ／２８０ｒｕ＋＋、２．０ＡＵＰＳに
おけるＵＶ吸収により、単離状態を監視する。

Ａ８０９１５Ａを含む分画（Ｎｏｇ、　２９８〜３１０
）を合して濃縮乾固し、抗生物質Ａ８０９１５Ａ（０６
３９）を得る。Ａ８０９１５Ｂを含む分画（Ｎｏｓ２８
０〜２９１）を合して濃縮乾固し、抗生物質へ８０９１
５Ｂ（１，１１９）を得る。Ａ８０９１５Ｃを含む分画
（Ｎｏｓ、　２０８〜２２５）を合して濃縮乾固し、抗
生物質Ａ８０９１５Ｃ（０，９２９）を得る。Ａ８０９
１５Ｄを含む分画（Ｎｏｓ、　　ｉ２５〜Ｉ４３）を合
して濃縮乾固し、抗生物質Ａ８０９１５Ｄ（１，３２Ｐ
）を得る。

実施例４ Ａ８０９１５Ａ塩化水素脱離誘導体の製造乾燥窒素雰囲
気下、Ａ８０９１５Ａ（５０２ｘ９．０．９５ミリモル
）とジイソプロピルエチルアミン（８３０μＱ、　５当
量）のメタノール５０ｊ１１２溶液を６０’Ｃに加熱す
る。９２時間後、反応混合物を酢酸エチル１５０ｉ１２
で希釈し、ＩＮ塩酸（Ｊ、ＯＯＪ！１２×３回）および
食塩水で（１００Ｊ！ρｘ１回）抽出し、乾燥（Ｎａ、
５Ｑ４）Ｌ、蒸発乾固する。粗生成物を、分取逆相ＨＰ
ＬＣ［Ｃ１８、メタノール／水／ギ酸（８５：１４．９
・０．１）１．８Ｃ，次いでメタノール／水／ギ酸（９
０：９．９　：０．１　）２．２Ｑコで精製し、淡黄色
固体として塩化水素脱離誘導体８６Ｍ９を得る。

紫外線（ＥｔＯＨ）：λｍｍＸ２’７４ｎｒａ（８１４
６００）。

’Ｎ　−ＮＭＲ（ＣＤＣ（、）　二　δ６．８５（ｄ、
　　Ｈ−４）および４４８ｐｐｍ＜ｄ、　Ｈ−３）、こ
れ以外はＡ　８０９１５Ａのデータと同様。

質量スペクトル（ＦＤＭＳ）＋ｍ／ｚ４９３．４９５（
Ｍ＋同位体クラスター）。

実施例５ Ａ８０９１５ＢからＡ８０９１５Ａの製造次亜硫酸ナト
リウム溶液（水中５％Ｎ　ａ＝　Ｓ　Ａ０４）１．０ｚ
（２を、Ａ８０９１５Ｂ（６，５ｊ＋ｙ）をメタノール
（２，１７ｆｆｉＱ）溶液に加える。この混合物を室温
で３０分間撹拌した後、脱イオン水２０ｘ（ｌを加え、
混合物を減圧下に濃縮してメタノールを除く。

この水性懸濁液約１ＯＲＩ２を酢酸エチルで（２０ｘｄ
×２回）抽出する。抽出物を合して濾過し、減圧下に濃
縮し、少量の残留Ａ３０９］、５Ｂ（これは実施例３Ｂ
記載のようにクロマトグラフィーにより除くことができ
る）を含むＡ８０９１５Ａを得る。

実施例６ Ａ８０９１５ＤからＡ８０９１５Ｃの製造実施例４と同
様の条件下に（ただし反応混合物を室温で１時間撹拌す
る）、Ａ８０９１５Ｄ（６５Ｍ＋９）をほとんど純粋な
Ａ８０９１５Ｃに変換する。残留Ａ３０９１６Ｄは、実
施例３Ｂ記載のようなりロマトグラフィーにより除くこ
とができる。

特許出願人　イーライ・リリー・アンド・カンパニー代
理人弁理士青山　葆（外１名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼［１］ Ａ８０９１５Ａ ▲数式、化学式、表等があります▼［２］ Ａ８０９１５Ｂ ▲数式、化学式、表等があります▼［３］ Ａ８０９１５Ｃ ▲数式、化学式、表等があります▼［４］ Ａ８０９１５Ｄ で示される成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤから成る抗生物質Ａ
   ８０９１５またはＡ８０９１５の塩化水素脱離誘導体。 ２、式： ▲数式、化学式、表等があります▼［５］ で示されるＡ８０９１５の塩化水素脱離誘導体である請
   求項１記載の化合物。 ３、同化しうる炭素源、窒素源および無機塩類を含有す
   る培地中、液中好気的発酵条件下、ストレプトミセス・
   アクレオラツスＮＲＲＬ１８４２２またはそのＡ８０９
   １５産生変異株、突然変異体もしくは組換え体を、抗生
   物質Ａ８０９１５が生産されるまで培養することを特徴
   とする抗生物質Ａ８０９１５の製造法。 ４、抗生物質Ａ８０９１５を培地から分離する追加的段
   階を包含する請求項３記載の製造法。 ５、抗生物質Ａ８０９１５から成分Ａ８０９１５Ａまた
   はＡ８０９１５ＢまたはＡ８０９１５ＣまたはＡ８０９
   １５Ｄを分離する追加的段階を包含する請求項４記載の
   製造法。 ６、請求項１記載の抗生物質Ａ８０９１５を生産する微
   生物ストレプトミセス・アクレオラツスＮＲＲＬ１８４
   ２２またはその突然変異体、変異株もしくは組換え体の
   生物学的純粋培養物。 ７、請求項１記載の抗菌有効量と適当な担体から成るグ
   ラム陽性菌感染症の処置に有用な薬剤。